一株提高雞營養物質消化率的益生植物乳桿菌及其應用
【技術領域】
[0001 ] 本發明涉及一株可以提高雞營養物質消化率的益生菌(LactobaciIIusplantarum)HM-20，喂給該菌株可以促進肉雞腸道中營養物質的代謝，降解那些不容易被動物體吸收的大分子營養物質為小分子或容易被消化吸收的營養物質，促進營養成分的轉化，使飼料轉化率得到提高。從而達到促進畜禽生長發育和生產性能的提高等效果。
【背景技術】
[0002]胃腸道微生態系統是人和動物體內最復雜和最大的微生態系統，出生時胃腸道是相對無菌的，隨著腸道微生物的發育，腸道共生菌參與宿主營養物質代謝，產生一些維生素和多種高活性的酶類。Ranta等報道，腸道微生物可以通過調節酶的活性和酶量來影響消化道中營養物質的消化、吸收與代謝，此外這些腸道共生菌還可產生一些抑菌物質如細菌素、有機酸等，降低腸道PH值，對外來致病菌的定植和生長產生有效的抑制作用，促進畜禽生長發育和生廣性能的提尚
[0003]益生菌是“當攝入一定量時能對宿主健康有作用的微生物活體”。攝入外源益生菌可以通過競爭排斥、微生物拮抗和免疫刺激來改善動物和人腸道微生物生態平衡，修復已失調的腸道菌群結構，從而減少腸道疾病的發生。益生菌是一類通過調控動物腸道微生物區系平衡而有效地促進宿主動物健康生長的微生物活菌制劑，作為益生素的微生物是來自動物自身腸道或來自其他生態環境的有益微生物對動物和人無毒副作用，因此被認為是一類具有廣闊開發和應用前景的抗生素替代品。益生菌的添加對肉仔雞腸道菌群及免疫系統都有一定的影響。
[0004]營養物質在體內代謝過程中不是孤立的起作用，而是互相間存在各種錯綜復雜的關系，如相互制約、拮抗、協調、替代、轉化、合成等不同的關系。蛋白質營養是動物營養研宄的核心問題。傳統的蛋白質營養理論認為，動物采食的蛋白質在消化道內蛋白酶和肽酶的作用下降解為游離的氨基酸，然后通過腸壁被機體吸收，蛋白質在動物機體內完全以氨基酸的形式被吸收；乳酸菌在宿主體內代謝產生多種消化酶，例如，乳酸菌酶能將蛋白質等一些相對分子量較大或結構復雜的營養成分部分降解為氨基酸或小分子肽。此外，腸道菌群通過糖酵解途徑(EMP)、磷酸戊糖途徑(HMP)、糖類厭氧分解途徑(ED)進行糖類的代謝，消化道菌群可以分解存在于消化道的所有氮化物，而且它們還可以合成大量的可被宿主再利用的含氮產物。菌群的變化可以從排泄物中細菌產生的氨基酸和一些能源相關的代謝產物的變化情況得知，由此證明代謝變化與腸道菌群的成熟和演變是同步進行的。腸道菌群可以通過各種途徑參與能量及脂類代謝，導致肝臟脂肪酸和甘油三酯存儲。甘油三酯在脂肪細胞的存儲、肝臟脂肪的從頭合成及線粒體脂肪酸氧化中發生變化，從而影響機體的能量存儲，腸道菌群對礦物質的吸收可能是由于腸道菌群與礦物質元素結合形成易被吸收(鐵)或不能被吸收(鎂、鈣)的復合物。
【發明內容】
[0005]本研宄通過喂給肉雞Lactobacillus pi ant arum HM-20 (CGMCC 6744)，測定飼料和糞樣中的能量、水分、粗纖維、粗脂肪、粗蛋白、總磷及鈣的含量測定，并計算能量、干物質、粗纖維、粗脂肪、粗蛋白、總磷及鈣的代謝率。通過動物實驗證實了該菌株可以促進肉雞腸道中營養物質的代謝，營養成分的轉化，使飼料轉化率得到提高。從而達到促進畜禽生長發育和生產性能的提高等效果。
[0006]本發明的目的是通過如下技術方案實現的:
[0007]一株提高雞營養物質消化率的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum) HM-20，分離自自然發酵飼料中，具有優異的抗胃腸道消化液耐受能力，所述植物乳桿菌已于2012年10月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌株保藏中心保藏，保藏號為CGMCC 6744ο
[0008]植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)HM-20用于促進肉雞腸道中營養物質的代謝、降解不容易被動物體吸收的大分子營養物質為小分子或容易被消化吸收的營養物質、促進營養成分的轉化，使飼料轉化率得到提高，從而達到促進畜禽生長發育和生產性能提尚的應用。
[0009]植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)HM-20的應用，其特征在于:所述植物乳桿菌通過飲水或飼料添加應用于肉雞養殖，生產使用方便。
[0010]本發明的效果是:投喂肉雞(Lactobacillus plantarum}_HM-20通過測定糞樣中的能量、水分、粗纖維、粗脂肪、粗蛋白、總磷及媽的含量來探宄Lactobacillus plantarumHM-20對于肉雞腸道中營養物質代謝是否具有調節作用，從而是否可以促進畜禽生長發育和生產性能的提高等效果。
【附圖說明】
[0011]附圖是益生菌L.plantarum HM-20對肉仔雞營養物質代謝的影響圖。
【具體實施方式】
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[0012]下面結合實施例對本發明作進一步說明；以下實施例僅為說明性的，本發明并不受這些實施例的限制。
[0013]一株提高雞營養物質消化率的植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)HM-20，分離自自然發酵飼料中，具有優異的抗胃腸道消化液耐受能力，所述植物乳桿菌已于2012年10月29日在中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物菌株保藏中心保藏，保藏號為CGMCC 6744，保藏地址北京市朝陽區大屯路中國科學院微生物研宄所。
[0014]植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)HM-20用于促進肉雞腸道中營養物質的代謝、降解不容易被動物體吸收的大分子營養物質為小分子或容易被消化吸收的營養物質、促進營養成分的轉化，使飼料轉化率得到提高，從而達到促進畜禽生長發育和生產性能提尚的應用。
[0015]植物乳桿菌(Lactobacillus plantarum)HM-20的應用，其特征在于:所述植物乳桿菌通過飲水或飼料添加應用于肉雞養殖，生產使用方便。
[0016]—、粗蛋白質(CP)測定
[0017]1、測定步驟
[0018]⑴試樣消煮
[0019]用稱量紙在電子分析天平上稱取0.4克(準確到0.1毫克)左右樣本于10ml洗凈烘干的凱氏燒瓶中，加無水硫酸鈉(鉀)2.5克硫酸銅0.2克，及濃硫酸15ml，浸泡過液或加玻璃珠2粒，以防消化時液體濺出。在凱氏瓶上加一個小漏斗，將凱氏瓶瓶放在有消化架的電爐上小火加熱，以免瓶內產生大量泡沫溢出瓶口，等泡沫停止產生后，再加強火力，必要時經常轉動燒瓶，使全部樣品浸入硫酸內。如有黑泡濺在瓶壁，應待燒瓶冷卻后加少量熱蒸餾水沖洗之，再繼續加熱消化。直至瓶內溶液澄清，消化才告完畢。(約需2-3小時)，應在毒氣柜中進行)。待燒瓶冷卻后加蒸餾水約20ml搖勻，然后將燒瓶中溶液無損地轉移到10ml洗凈的溶量瓶中，用蒸餾水沖洗凱氏燒瓶5-6次(約1ml/次)，洗液亦注入容量瓶內，冷卻后，再用蒸餾水稀釋至容量瓶刻度，混勻后供測定氮用。
[0020](2)氨的蒸餾
[0021]煮沸蒸氣發生瓶中蒸餾水，并使蒸氣洗滌蒸餾器。用量筒量取20毫升2%的硼酸溶液加入150毫升或250毫升三角瓶內，再加入甲紅一一溴甲酚綠混合指示劑5滴，置于蒸餾裝置的冷凝管下，使管口浸入硼酸(H3B04)溶液內。用10毫升移液管量取1ml樣本消化液，從蒸餾裝置上的小玻杯中注入反應室，再用少量蒸餾水沖洗小玻杯(注意如注入蒸餾水過多則反應室溫度較低，將使反應室內的液體溢出，使蒸餾結果偏低)，將小玻杯上的棒狀玻璃塞塞緊，使之不漏氣。用量筒量取5ml-10ml飽和氫氧化鈉溶液注入小玻杯中，小心地輕輕提起棒狀玻塞，使氫氧化鈉流入反應室內，(注意不能將棒狀玻塞完全提起，以免氨氣跑掉)，立刻將玻塞蓋緊，加蒸餾水于小玻杯中，以防漏氣。此時蒸氣吹入反應室，氨氣通過冷凝管而流入三角瓶中的硼酸溶液中，蒸餾5分鐘，移開三角瓶蒸餾裝置下的冷凝管空蒸I分鐘，用少量蒸餾水沖冷凝管外壁，再將三角瓶移開蒸餾裝置，準備滴定。蒸餾完畢后，用燒杯接自來水沖洗小玻杯及蒸餾器3-4次，每次隨手夾緊送蒸氣的橡皮管以斷氣源，使反應室中的殘液自動吸入反應室外層，并將反應室外層的殘液排出。同樣用蒸餾水再沖洗3-4次。洗凈后再蒸餾，每一次消化液至重復蒸餾兩次，使同一消化液滴定HCl的毫升數相差小于0.1毫升。
[0022]⑶滴定
[0023]先將微量滴定管準備妥當，裝入0.0lNHCl標準液，然后將吸收氨氣的三角瓶，用0.0lNHCl溶液滴定，至瓶中溶液由藍色變成淡酒紅色為止。
[0024]二、粗脂肪(EE)的測定
[0025]1、測定步驟
[0026]索氏脂肪抽出器由三個部分組成，下部為盛醚瓶，中間為浸提管，上部為冷凝。管冷凝管上端加棉花塞，以防乙醚逸失。抽脂前將盛醚瓶和浸提管洗凈烘干。(如要采用直接測定，則要放入干燥器中冷卻后，在電子天平上稱恒重)。
[0027]將稱量瓶編號洗凈烘干，將濾紙包折好，準確稱取風干樣本2克左右(準至0.0001克)于濾紙包中，折好，編號(與稱量瓶同號)，濾紙包長度不能高于虹吸管高度的2/3為宜，將稱量瓶及樣本濾紙包放入105°C烘箱中烘6小時除去水分，將稱量瓶及濾紙包放入干燥中冷卻30分鐘，在電子分析天平上稱重，再放入105°C烘箱中烘I小時，取出放入干燥器中冷卻30分鐘，再稱重，直至恒重。恒重后，將濾紙包放入索氏抽脂器中，倒入乙醚，浸泡2小時左右、抽脂4小時(乙醚冷卻速度5-6滴/秒)至16小時(2-3滴/秒)，加熱水浴鍋，使水溫保持60°C左右，乙醚在盛醚瓶中蒸發，乙醚蒸氣至冷凝管處冷凝為液體，仍流回浸提管中，再經虹吸管回流到盛醚瓶中，如此反復循環。直至將脂肪浸提干凈(用一張1X 1cm2的濾紙，將濾紙包放在濾紙上，待乙醚揮發完后，濾紙上無痕跡就以為脂肪浸提干凈。提取完畢后，移去上部的冷凝管，取出樣本包，放入稱量瓶中，將稱量瓶及樣本包移入105°C烘箱中，瓶蓋、半開以免醚氣燃燒起火。初烘時烘箱門半開，烘3小時，取出放入干燥器中冷卻30分鐘稱重、記錄，直至恒重(小于0.002克)，稱量瓶及樣本包抽脂后失去的重即為脂肪重。
[0028]三、粗纖維(CF)的測定
[0029]1、測定步驟
[0030](I)將提取脂肪后的樣品(一般稱