一種從黃芩中同時提取黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及中藥中多種有效成分的提取方法，具體涉及一種從黃芩中同時提取黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的方法，屬于中藥提取技術領域。
【背景技術】
[0002]黃苳(拉丁學名baicalensis Georgi )，別名山茶根、土金茶根，是唇形科黃芩屬多年生草本植物，有清熱燥濕、瀉火解毒、止血、安胎等功效。黃芩中含有黃芩苷(baicalin)、黃苳素(baicalein)、漢黃苳素(wogonin)、漢黃苳苷(wogonoside)、黃苳新素(neobaicalein)、等黃酮類化合物。
[0003]目前對黃芩有效成分的提取工藝研宄較多，但多是僅針對黃芩中的一種成分進行提取，如酸沉堿溶法提取黃芩苷、酶解法提取黃芩素等，在提取一種成分的同時，其他的成分則損失掉了。同時，因為每種有效成分的提取方法都有差異，因此無法將幾種提取不同黃芩有效成分的方法進行簡單的組合來達到同時從黃芩中提取多種有效成分的目的。
[0004]此外，藥典中收錄的黃芩提取物的純化方法中，采用水提酸沉的方法來純化，目的是提高黃芩苷的含量，純化后最終所得提取物中黃芩苷含量不低于85%，但純化過程中黃芩素、漢黃芩素、漢黃芩苷等成分均損失，從而造成資源的浪費。
【發明內容】
[0005]本發明針對現有技術中沒有同時提取黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的方法的不足，提供了一種從黃芩中同時提取黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的方法，該方法能夠實現這三種有效成分的同時高效提取和分離純化，減少了資源的浪費，提高了黃芩的利用率。
[0006]本發明具體技術方案如下:
一種從黃芩中同時提取黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的方法，包括以下步驟:
(1)將黃芩加入水中回流提取，所得提取液濃縮，得濃縮液；
(2)將濃縮液上大孔吸附樹脂柱，先以水洗脫至無色，然后依次用體積分數60-70%的乙醇、75-80%的乙醇進行洗脫，收集60-70%的乙醇洗脫液，得黃芩苷粗提液(主要為黃芩苷)，收集75-80%的乙醇洗脫液，得黃萃素和漢黃萃素的粗提液；
(3)將黃芩苷粗提液減壓濃縮，所得濃縮液調pH為2~2.5，在70~80°C保溫0.5~1 h，然后常溫靜置10~24 h，靜置后過濾，所得沉淀洗滌、干燥，得黃芩苷純品；
(4)將黃芩素和漢黃芩素的粗提液蒸干，所得黃芩素和漢黃芩素的混合物用甲醇溶解，上凝膠柱，以甲醇洗脫，按照液相色譜結果分別收集黃芩素流份和漢黃芩素流份，將流份中的甲醇除去，得黃芩素純品、漢黃芩素純品。
[0007]上述步驟(I)中，將黃芩用水提取2-3次，每次提取時黃芩與水的質量比為
1:8-20 ο
[0008]上述步驟(I)中，每次提取黃芩的時間為1.5_2h。
[0009]上述步驟(I)中，提取液減壓濃縮至每I mL含0.2-0.5 g生藥。
[0010]上述步驟(2)中，所述大孔吸附樹脂為DlOl型大孔吸附樹脂、AB-8型大孔吸附樹脂或HPD-100型大孔吸附樹脂。
[0011]上述步驟(2)中，濃縮液與大孔吸附樹脂的用量關系為:每mL大孔吸附樹脂的上樣相當于0.1-0.3 g黃芩生藥的濃縮液。
[0012]上述步驟(2)中，體積分數60-70%的乙醇洗脫液用量為8~10 BV (BV為樹脂柱床體積)，體積分數75-80%的乙醇洗脫液用量為4~6 BVo
[0013]上述步驟(3)中，黃芩苷粗提液減壓濃縮至每I mL含0.5-2 g生藥。
[0014]步驟(4)中，所述凝膠柱為sephadex LH-20凝膠柱。
[0015]上述步驟(4)中，黃芩素和漢黃芩素的混合物與凝膠的用量關系為:每mL凝膠上樣20~50 mg混合物，上樣體積為凝膠柱體積的3~5%。
[0016]上述方法所得黃芩苷純度多95%，黃芩素、漢黃芩素純度均多97%。
[0017]本發明的優點是:1、本發明實現了黃芩中黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的同時高效提取，通過簡單的步驟將三者有效分離，提取率分別達到85%、88%和90%，減少了有效成分的損失，提高了黃芩資源利用率。2、本方法所獲得的黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素的純度都較高，其中黃芩苷純度多95%，黃芩素、漢黃芩素純度均高于97%。3、本方法大孔吸附樹脂分離及凝膠柱純化步驟所用的乙醇和甲醇均可回收再利用，節約了有機溶劑；且黃芩苷粗提液采用酸沉法純化，與藥典黃芩提取物制法相比，只經過一次酸沉，廢液量少，比較環保。
【附圖說明】
[0018]圖1為市售黃芩苷、漢黃芩苷、黃芩素、漢黃芩素對照品的色譜圖(I黃芩苷，2漢黃芩苷，3黃芩素，4漢黃芩素)。
[0019]圖2為大孔吸附樹脂黃芩苷類洗脫液的色譜圖。
[0020]圖3為大孔吸附樹脂黃芩素、漢黃芩素混合洗脫液的色譜圖。
[0021]圖4為純化得到的黃芩苷色譜圖。
[0022]圖5為純化得到的黃芩素色譜圖。
[0023]圖6為純化得到的漢黃芩素色譜圖。
【具體實施方式】
[0024]下面通過具體實施例對本發明進行說明。如無特別說明，下述實施例所用醇的濃度均為體積濃度。
[0025]下述實施例中，采用液相色譜面積歸一化法測定產品的純度，液相色譜條件如下:
固定相:十八烷基硅烷鍵和硅膠；
流動相:甲醇-0.2%磷酸水溶液，梯度洗脫:0?10 min，45%甲醇，10?55 min，45%?70%甲醇；
流速:1.0 mL/min ；
柱溫:30°C ;
檢測波長:274 nm ；
進樣量:10 ULo
[0026]實施例1
步驟一、同時提取:取黃芩飲片，加12質量倍水加熱回流提取2 h，提取液過濾，濾渣加10倍量水再提取2次，每次1.5 h，合并濾液，獲得黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的混合粗提液。
[0027]步驟二、分離:將上步粗提液減壓濃縮至每I mL含0.2 g生藥，以4 BV/h的流速上樣DlOl大孔吸附樹脂柱，上樣量為1BV，先以水洗脫至流出液無色，依次以1BV 60%乙醇，6BV 80%的乙醇分別洗脫，收集60%的乙醇洗脫液，主要成分為黃芩苷(見圖2)，收集80%的乙醇洗脫液，主要成分為黃芩素和漢黃芩素(見圖3)。將黃芩苷類洗脫液濃縮成每mL含0.5 g生藥，用2 mol/L鹽酸調節pH值至2，80 °C保溫0.5 h，靜置12 h，減壓濾過，沉淀水洗至PH值至5.0，再用少量乙醇洗滌，揮盡乙醇，減壓干燥，即得黃芩苷，液相色譜面積歸一化法測得其純度為95% (見圖4)，以黃芩中所含黃芩苷計提取率為87%。將黃芩素、漢黃芩素的混合洗脫液蒸干，所得黃芩素、漢黃芩素的混合物以少量無水甲醇溶解，上sephadexLH-20凝膠柱，每mL凝膠上樣20~50 mg混合物，上樣體積為凝膠柱體積的3~5%，以無水甲醇洗脫，待凝膠柱上黃色條帶下移至柱底端開始分段接流分，每份10 mL，視液相色譜結果合并流分，揮干溶劑，即得黃芩素、漢黃芩素純品，液相色譜面積歸一化法測得他們的純度分別為99%和97% (見圖5-6)，以黃芩中所含黃芩素計黃芩素提取率為88%，以黃芩中所含漢黃芩素計漢黃芩素的提取率為92%。
[0028]實施例2
步驟一、同時提取:取黃芩飲片，加15質量倍量加熱回流提取1.8 h，提取液過濾，濾渣加15倍量水再提取I次，合并濾液，獲得黃芩苷、黃芩素和漢黃芩素的混合粗提液。
[0029]步驟二、分離:將上步粗提液減壓濃縮至每I mL含0.5 g生藥，以4 BV/h的流速上樣AB