細胞濃縮液的制造方法
【技術領域】
[0001] 本發明涉及一種制造細胞濃縮液的技術，該技術使用填充了中空纖維型分離膜的 細胞懸浮液處理器。
【背景技術】
[0002] 在細胞醫療的領域中，使用將從活體采集的細胞直接、或在活體外培養后，接種于 患者的方法。將這些用于治療的細胞懸浮于適合治療的溶液中，或調整為適當的濃度而移 植。但是，在從活體中采集細胞的情況下，有時對于治療而言細胞濃度不足，另外，在將從活 體中采集的細胞在體外進一步培養的情況下，大多含有來源于組織的雜質及培養基等。因 此，為了將從活體中采集或培養的細胞用于治療，需要去除雜質及培養基，使其成為在適合 治療的溶液等中懸浮的狀態（清洗），濃縮成適合治療的細胞濃度。
[0003] 為了實現上述目的，已知使用離心分離的濃縮、清洗操作。例如，公開有一種為了 從人組織中分離再生細胞并濃縮而使用離心分離的方法（專利文獻1)。但是，如上使用離 心分離的方法有由于裝置大型化、對細胞施加負荷、以及成本增大而使可利用的設施受限 的擔憂。還可以舉出，在為了清洗細胞而去除通過離心分離使細胞沉淀后的細胞懸浮液的 上清時，細胞有可能暴露在大氣中，造成污染等問題。
[0004] 與之相對，提出一種使用小型且簡便的裝置，即中空纖維型分離膜，的細胞懸浮液 的分離、過濾方法（專利文獻2)。在使用中空纖維型分離膜濃縮細胞醫療用途的細胞懸浮 液時，為了減輕對細胞的損傷，需要在短時間內進行濃縮處理，而且，由于雜質、培養基成分 的分子量較大，因此認為增大中空纖維型分離膜的孔徑較好。但是，若增大中空纖維型分離 膜的孔徑，則會發生細胞導致的堵塞等，或者由于細胞在中空纖維型分離膜上的附著性增 加而導致在制備濃縮液的過程中細胞數降低的擔憂。
[0005] 現有技術文獻
[0006] 專利文獻
[0007] 專利文獻1 :日本特表2007-524396號公報
[0008] 專利文獻2 :日本專利第2928913號公報
【發明內容】
[0009] 發明所要解決的課題
[0010] 本發明的課題為解決在使用中空纖維型分離膜進行細胞濃縮液的制造中的上述 問題點。具體而言，提供一種細胞濃縮液的制造方法，該方法在濃縮細胞懸浮液時，即使中 空纖維型分離膜的孔徑較大，也能在保持優異的細胞回收率的同時在短時間內濃縮細胞。 而且，提供一種可以高效地去除懸浮液中存在的蛋白質等雜質的細胞濃縮液的制造方法。 [0011] 用于解決課題的方案
[0012] 本發明人為了解決上述課題進行了潛心研宄，結果發現，即使中空纖維型分離膜 的孔徑較大，也能夠在將過濾流量及線速度保持在某一特定的范圍時，保持優異的細胞回 收率，同時在短時間內制造細胞濃縮液，完成了本發明。
[0013] S卩，本發明涉及一種細胞濃縮液的制造方法，該方法使用內壓過濾方式的細胞懸 浮液處理器，所述細胞懸浮液處理器具備：細胞懸浮液入口、濾液出口、細胞懸浮液出口、及 配置于該細胞懸浮液入口和細胞懸浮液出口之間的中空纖維型分離膜，其中，該中空纖維 型分離膜的總截面積為〇. 5cm2?I. 5cm2，該中空纖維型分離膜的內側膜面積為0. 2m2以下， 在該中空纖維型分離膜的內側流通的線速度為500cm/分鐘?1200cm/分鐘，從濾液出口排 出的初期過濾流量除以流入細胞懸浮液入口的流量所得的值為0. 4?0. 7。
[0014] 優選該中空纖維型分離膜的內徑為300 μπι?1000 μπι。
[0015] 優選該中空纖維型分離膜的平均孔徑為0,1 ym以上。
[0016] 優選該中空纖維型分離膜由聚砜類、聚烯烴類或纖維素類的材料制成。
[0017] 優選該中空纖維型分離膜由聚醚砜制成。
[0018] 優選細胞懸浮液為免疫細胞的細胞懸浮液。
[0019] 另外，本發明涉及一種細胞濃縮液的制造方法，該方法包括：將通過所述制造方法 得到的細胞濃縮液通過反復稀釋和濃縮而進行清洗的工序，所述稀釋利用不含細胞的液體 進tx ;以及，進一步濃縮的工序。
[0020] 另外，本發明涉及一種細胞的冷凍保存方法，該方法包括：將通過所述制造方法得 到的細胞濃縮液使用液氮進行冷凍保存的工序。
[0021] 發明效果
[0022] 根據本發明，在濃縮細胞懸浮液時，即使中空纖維型分離膜的孔徑較大，也可保持 較高的細胞回收率，同時在短時間內制造細胞濃縮液。而且，本發明可以高效地去除懸浮液 中存在的蛋白質等雜質，可在無菌的封閉體系中進行處理，用本發明的方法制造的細胞濃 縮液可提供用于細胞治療。
【附圖說明】
[0023] 圖1示出用于實施例的細胞懸浮液處理器。
[0024] 符號說明
[0025] 1.筒狀容器
[0026] 2.機身部
[0027] 3.端部
[0028] 4.濾液出口
[0029] 5.中空纖維型分離膜的束
[0030] 6·開口端（虛線部）
[0031] 7.樹脂層部（斜線部）
[0032] 8a.細胞懸浮液入口
[0033] 8b.細胞懸浮液出口
[0034] 9.蓋部
【具體實施方式】
[0035] 下面，對本發明進行說明。
[0036] 本發明的細胞懸浮液處理器如圖1所示，但并不限定于此。筒狀容器1由筆直的 機身部2和其兩側的端部3、蓋部9構成，在端部3處具備濾液出口 4。可以在一端具備該 濾液出口，也可以兩端具備該濾液出口。在該例子中，在蓋部9設有細胞懸浮液入口 8a、細 胞懸浮液出口 8b。在該筒狀容器1的內部具有所裝填的中空纖維型分離膜束5、在蓋部9 的內部設有的樹脂層部7、以及在端部3的內部所設有的與其相同的結構，其中，所述樹脂 層部7在將中空纖維型分離膜束5固定于容器內部的同時形成了中空纖維型分離膜的開口 端6。該樹脂層部7及開口端6形成了被蓋部9 (或者端部3)蓋住的結構，細胞懸浮液出入 口 8a、8b和濾液出口 4由構成中空纖維型分離膜的壁材隔開，成為不連續的結構。
[0037] 需要說明的是，為了便于說明，在圖1所示的例子中，將各部分以稱為筒狀容器的 機身部2、端部3、蓋部9的方式進行區別。在設計上，無論是蓋部9與筒狀容器的端部3為 一體，還是在筒狀容器的機身部2和端部3由各自的配件形成的情況下，只要細胞懸浮液入 口與細胞懸浮液出口不被構成中空纖維型分離膜的壁材隔開而是連續的，而且，細胞懸浮 液出入口與濾液出口具備由構成中空纖維型分離膜的壁材隔開的結構，就可以采用各種結 構。
[0038] 在本發明的細胞懸浮液處理器中，優選將數十至數千根左右的中空纖維型分離膜 捆扎而成的束填充于筒狀的容器內。另外，在本發明中，中空纖維型分離膜的配置可以為直 線狀，也可以彎曲狀，還可以是螺旋狀，只要在細胞懸浮液入口和細胞懸浮液出口之間保持 中空纖維型分離膜的兩端，對形狀就沒有特別限定。
[0039] 作為細胞懸浮液處理器的筒狀容器的原料，可使用丙烯腈丁二烯苯乙烯三元共聚 物等丙烯腈聚合物；聚四氟乙烯、聚三氟氯乙烯、四氟乙烯和六氟丙烯的共聚物、聚氯乙烯 等鹵化聚合物；聚酰胺、聚酰亞胺、聚砜、聚碳酸酯、聚乙烯、聚丙烯、聚氯乙烯丙烯酸共聚 物、丙烯腈、丁二烯苯乙烯、聚苯乙烯、聚甲基戊烯等。特別優選具有耐滅菌性的原料，具體 而言，為聚丙烯、聚氯乙烯、聚乙烯、聚酰亞胺、聚碳酸酯、聚砜、聚甲基戊烯、聚苯乙烯等。
[0040] 作為固定中空纖維型分離膜的樹脂層部的原料，可以優選使用聚氨酯樹脂、環氧 樹脂、以及有機娃樹脂等通常的粘接材料。<