一種評估物質對治療乳腺癌的輔助效果的方法
【技術領域】
[0001]本發明提供了一種評估物質對治療乳腺癌的輔助效果的方法，屬于生物醫學技術領域。
【背景技術】
[0002]乳腺癌是一種在婦女中高發的惡性腫瘤，根據生物標記物的表達可以簡單的分為ERalpha、HER2、PR及三受體均不表達四大類。對于表達ER受體的乳腺癌患者，我們現在可以用激素措抗劑tamoxifen治療，表達HER2的患者可以使用單克隆抗體藥物trastuzumad治療，除此外其他患者可以使用化療的方法進行治療。另外一方面，已有的研宄表明除小部分乳腺癌是遺傳因素誘發外，飲食在乳腺癌發生中占主要作用，其中高脂肪食物、高膽固醇、酒精飲食和肥胖顯著增加乳腺癌的發生幾率。因此，通過飲食及補充劑來干預乳腺癌的發生成為世界范圍內快速增長和擁有巨大市場前景的產業。
[0003]來源于動物或植物的食用油包含大量的各種脂肪酸，包括不同碳鏈長度和不同飽和度的脂肪酸，如飽和脂肪酸和不飽和脂肪酸。他們為人類或/和動物提供了大量的能量和/或營養來源。其中源于魚類、特別是原產自寒冷海水的野生種群的那些的油中發現大量n-3多不飽和脂肪酸(n-3PUFA)。養殖魚類與野生魚類相比典型地包含相當低水平的n-3PUFA。現在研宄發現深海魚油的主要成分n-3PUFA，它屬于中長鏈脂肪酸中的不飽和脂肪酸，具有廣泛的生理活性和功能。n-3PUFA主要通過非特異性受體GPR120 (GPCRs家族)等激活下游ERK1/2、P38MAPK等信號通路來調節代謝疾病發生。研宄表明omega-3多不飽和脂肪酸一般對人類健康有益，目前發現它具有較好的抗心血管疾病和抗脂肪肝作用，并已開發出降高血脂藥物。在動物實驗中omega-3多不飽和脂肪酸能明顯改善卵巢切除動物的骨質流失、提高其胰島素敏感性；已觀察到長期食用深海魚油能顯著降低人類乳腺癌發生率。因此，包含MAPK信號通路的抑制或激活劑與他莫昔芬(tamoxifen)或/和然諾昔芬(raloxifene)信號的增強或抑制劑的物質((dietary supplements)代表對治療和/或預防癌癥和/或增殖性疾病(其中異常細胞增殖為特征性的病理異常)具有吸引力的商品。
[0004]對于消費者來說，可廣泛得到來自不同產地，不同食材或加工方式的各種食品或營養補充劑(nutrit1nal supplement)，但這些物質對于乳腺癌發生和乳腺癌細胞生長或/和凋亡作用的MAPK信號通路和/或他莫昔芬(tamoxifen)或/和然諾昔芬(raloxifene)信號的潛在生理效應或藥物作用需要得到確證。利用藥物處理乳腺癌細胞和/或動物和/或人，同時通過添加不同食品、營養制品和醫藥產品來檢測其對乳腺癌細胞生長(增殖)和/或凋亡(衰老)和/或迀移(運動)作用，從而確證不同食品、營養制品和醫藥產品對藥物治療乳腺癌的生理效應或藥用作用。
[0005]對人類疾病具有治療/預防作用的物質在世界范圍內出現快速發展，已經有數十億美金的產業。然而，該產業中主要未解決的問題是缺少對提取的自然資源產品使用范圍/人群的嚴格定義或/和規范。
[0006]若要營養物質有益于人體健康，人們除了需要知道服用適量補充劑外，更需要知道這些物質在人體不同的健康或/和病理生理狀態下和/或服用一些藥物時的安全性和/或作用效果，是否有助于自己的健康或/和對自己健康不利。本發明旨在提供一種評估物質對治療乳腺癌的輔助效果的方法。
【發明內容】
[0007]本發明提供一種評估物質對治療乳腺癌的輔助效果的方法，或者是一種檢測和/或評估不同食品、營養制品和/或醫藥產品對服用藥物治療乳腺癌的病人是否有益或有害的方法。
[0008]所述方法是將物質以不同濃度單獨和聯合乳腺癌治療藥物添加到正在培養的人乳腺癌細胞中，在不同時間點檢測細胞生長情況、Erkl/2信號通路變化情況、Akt信號通路變化情況中的至少一種，來評估物質對乳腺癌細胞的凋亡和/或增殖的影響，以確定所述物質是否能輔助治療乳腺癌。
[0009]當檢測結果為乳腺癌細胞凋亡和/或細胞生長被抑制，則所述物質有益于乳腺癌治療；當檢測結果為乳腺癌細胞凋亡被抑制和/或生長不被抑制時，則所述物質對乳腺癌治療無益或有害。
[0010]當檢測結果為人乳腺癌細胞中Erkl/2和/或Akt活性顯著增加，則所述物質有益于乳腺癌治療；若結果為人乳腺癌細胞中Erkl/2和/或Akt活性顯著降低，則所述物質對乳腺癌治療無益或有害。
[0011]所述有益于乳腺癌治療，是指聯合服用該物質時，能降低藥物使用劑量或增強藥物作用效果。
[0012]所述物質可以是飲食補充劑。所述物質主要包括魚油，例如n-3多不飽和自由脂肪酸。
[0013]所述n-3多不飽和自由脂肪酸包括ALA、EPA和DHA。
[0014]所述乳腺癌治療藥物包括他莫昔芬/tamoxifen Citrate或然諾昔芬/raloxifenehydrochloride0
[0015]所涉及的人乳腺癌細胞包括人乳腺癌MCF-7細胞，也包括T47D、SUM185、BT474、BT-483、600MPE、ZR-75、MDA-MB-468/453/231等其他乳腺癌細胞。人乳腺癌細胞以含10%FBS和I %青鏈霉素的DMEM高糖培養基，于37°C、5 % CO2、飽和濕度培養箱中培養，每2天換液一次，每3?4天傳代I次。
[0016]所述細胞生長可以通過CCK8方法檢測，細胞凋亡可以通過TUNEL、細胞核熒光染色方法確定。細胞數目變化可以通過顯微鏡血球計數板方法進行直接計數，細胞形態可染色顯微觀察。
[0017]所述Erkl/2信號通路、Akt信號通路變化情況是指Erkl/2和Akt蛋白活性變化情況。所述Erkl/2和Akt蛋白質活性是指Erkl/2和Akt蛋白質磷酸激酶活性，通過免疫雜交或Western方法來檢測。
[0018]在本發明的一種實施方式中，將n-3多不飽和自由脂肪酸中ALA、EPA和DHA加入正在培養的人乳腺癌細胞中，在不同時間點(如5分鐘、15分鐘、30分鐘、I小時、2小時、6小時、24、48、72小時等)檢測細胞數目、形態、細胞DNA片段和細胞核破裂和濃縮等來評估食品和/或營養補充劑對乳腺癌細胞的凋亡和/或增殖作用，從而評估所述補充劑是否有益乳腺癌的治療。
[0019]在本發明的一種實施方式中，將不同濃度(如5μΜ，50μΜ，100μΜ，200 μΜ)的魚油(主要包括n-3多不飽和自由脂肪酸中ALA、EPA和DHA)聯合一定濃度(如50 μM)的抗雌激素藥物如他莫昔芬，共同加入正在培養的人乳腺癌細胞中，在一定的時間點(如5分鐘、15分鐘、30分鐘、I小時、2小時、6小時、24、48、72小時等)通過檢測細胞數目、形態、DNA片段和核破裂和濃縮等來評估食品和/或營養補充劑對乳腺癌細胞的凋亡和/或增殖作用，從而評估所述補充劑是否能輔助該乳腺癌治療藥物發揮作用。
[0020]在本發明的一種實施方式中，將不同濃度(如5μΜ，50μΜ，100μΜ，200 μΜ)的魚油主要包括n-3多不飽和自由脂肪酸中ALA、EPA和DHA分別加入正在培養的人乳腺癌細胞中，在一定的時間點(如5分鐘、15分鐘、30分鐘、I小時、2小時、6小時、24、48、72小時等)通過免疫雜交技術檢測ERK1/2基因活性變化等來評估食品和/或營養補充劑對乳腺癌細胞的凋亡和/或增值作用，以評估所述補充劑對Erkl/2信號通路的作用效果。
[0021]在本發明的一種實施方式中，將不同濃度(如5μΜ，50μΜ，100μΜ，200 μΜ)的魚油主要包括n-3多不飽和自由脂肪酸中ALA、EPA和DHA分別加入正在培養的人乳腺癌細胞中，在一定的時間點(如5分鐘、15分鐘、30分鐘、I小時、2小時、6小時、24、48、72小時等)通過免疫雜交技術檢測Akt等基因活性變化等來評估食品和/或營養補充劑對乳腺癌細胞的凋亡和/或增殖作用，以評估所述補充劑對AKT信號通路的作用效果。
[0022]在本發明的一種實施方式中，將不同濃度(如5μΜ，50μΜ，100μΜ，200 μΜ)的魚油主要包括n-3多不飽和脂肪酸中ALA、EPA和DHA聯合一定濃度(如50μΜ)的抗雌激素藥物如他莫昔芬共同加入正在培養的人乳腺癌細胞中，在一定的時間點(如5分鐘、15分鐘、30分鐘、I小時、2小時、6小時、24、48、72小時等)通過免疫雜交技術檢測ERK1/2基因活性變化等來評估食品和/或營養補充劑對藥物誘發的乳腺癌細胞的凋亡和/或增殖作用，以評估所述補充劑聯合藥物對Erkl/2信號通路的作用效果。
[0023]在本發明的一種實施方式中，將不同濃度(如5μΜ，50μΜ，100μΜ，200 μΜ)的魚油主要包括n-3多不飽和脂肪酸中ALA、EPA和DHA聯合一定濃度(如50 μ Μ)的抗雌激素藥物如他莫昔芬共同加入正在培養的人乳腺癌細胞中，在一定的時間點(如5分鐘、15分鐘、30分鐘、I小時、2小時、6小時、24、48、72小時等)通過免疫雜交技術檢測Akt等基因活性變化等來評估食品和/或營養補充劑對藥物誘發的乳腺癌細胞的凋亡和/或增殖作用，以評估所述補充劑聯合藥物對AKT信號通路的作用效果。
[0024]本發明方法可以用來評估物質對于輔助治療乳腺癌的效果，對治療或預防具有指導作用。