燈盞乙素苷元晶型及其制備方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于醫藥化工領域，具體涉及多種燈盞乙素苷元晶型及其制備方法。本發 明還涉及燈盞乙素苷元晶型在制備預防和/或治療心腦血管疾病、風濕性關節炎或中風后 遺癥等的藥物中的用途。
【背景技術】
[0002] 燈盞乙素（也稱野黃芩苷，英文名為Scutellarin)具有改善腦血循環，增加腦 血流量，降低血粘度和抗血小板凝聚等作用。燈盞乙素臨床應用廣泛，主要用于心腦血 管疾病，如閉塞性腦血管所致后遺癱瘓、冠心病、心絞痛等。燈盞乙素在治療心腦血管疾 病、風濕性關節炎和中風后遺癥等方面有顯著的療效（唐于平，李念光，段金廒.燈盞乙 素苷元衍生物及其制備方法和其應用[P].江蘇：CN101891728A，2010-11-24.)。此外，燈 盞花素在臨床上還可用于治療腎病綜合征、糖尿病性腎病、慢性腎小球腎炎等腎臟疾病，抗 結核藥物性肝損傷、急性黃疸性肝炎、慢性肝炎、頑固性肝硬化腹水等肝臟疾病以及慢性 阻塞性肺疾病急性加重期合并低氧血癥，糖尿病周圍神經病變、糖尿病足等糖尿病慢性并 發癥，視網膜震蕩傷、缺血性視神經病變、眼中心性漿液性視網膜病變等眼科疾病，以及突 發性耳聾和胎兒生長受限等（孫華，宋怡.燈盞花素的臨床拓展應用[J].亞太傳統醫 藥，2013, 05:63-64.)。
[0003]由于早前純化工藝不完善，多采用燈盞花素作為原料藥進行臨床疾病的治療。燈 盞花素給藥存在的問題是，燈盞花素本身為燈盞乙素、燈盞乙素同分異構體-異野黃芩苷 及其其他的混合物，成分復雜，在質量控制中存在一些問題。而燈盞乙素是燈盞花素中的主 成分，是技術推進的結果，但燈盞乙素口服吸收差，口服利用率不高。
[0004] 燈盞乙素苷元是燈盞乙素的水解產物（劉建明，熊玉卿.燈盞乙素及其苷元藥代 動力學特征的研宄進展[J].中國中藥雜志，2009, 24:3165-3168.)，又名野黃芩素，英文名 為 Scutellarein，CAS NO. 529-53-3,分子式為 C15H1Q06，分子量為 286. 2。
[0005] 隨著純化分離技術和檢測技術的發展，結合目前對燈盞乙素及苷元的研宄發現， 燈盞乙素苷元較乙素在胃腸道具有更高的滲透性，口服吸收約為燈盞乙素的3倍。車 慶明等研宄大鼠灌胃給予等量燈盞乙素苷元及燈盞乙素，表明燈盞乙素苷元口服易于 吸收，與燈盞乙素相比，體內代謝穩定，其相對生物利用度為301.8% (車慶明，陳 穎，潘麗怡，何紅.燈盞花乙素苷元不同給藥劑量的大鼠藥動學比較[J].中國新藥 雜志，2006, 18:1557-1561.)。車慶明等還發現，燈盞乙素苷元口服給藥后在體內主要 轉化為燈盞花注射劑的有效成分燈盞乙素，其血藥分布與燈盞花注射劑的情況較為接 近（車慶明，潘麗怡，陳穎，何紅.燈盞花乙素苷元的藥動學研宄[J].中國藥學雜 志，2007, 18:1418-1421.)。換言之，燈盞乙素苷元有幾乎等同于燈盞乙素的藥理活性。呂 等利用腦組織進行燈盞乙素脂質體的動力學研宄，結合現有研宄結果表明燈盞乙素能通 過血腦屏障在腦組織分布（Int J Pharm.20C^Dec8;306(l-2):99-106. Distribution of liposomal breviscapine in brain following intravenous injection in rats. Lv Wl，Guo J，Li J，Huang L，PingQ.)。苷元口服給藥，當劑量為200mg/kg時，大鼠血衆中可 以測到燈盞乙素苷元和燈盞乙素，而劑量為20mg/kg時，只能測到燈盞乙素，檢測不到原形 藥（車慶明，陳穎，潘麗怡，何紅.燈盞花乙素苷元的膽汁排泄研宄[J].中國中藥雜 志，2006, 20:1710-1712.)。居文政等測定了燈盞乙素血藥濃度以及臨床藥代動力學，受試 者口服給藥360mg燈盞乙素，在1、3、5、8小時取血測定燈盞乙素濃度，僅在5小時時測定 20ng/ml，而在血漿和尿液中測得大量的苷元，提示燈盞乙素可能在結腸被水解為苷元而吸 收（居文政，儲繼紅，譚仁祥，熊寧寧.UPLC-MS/MS聯用法分析燈盞花乙素在胃腸道的代 謝物[J].中國臨床藥理學與治療學，2006, 03: 292-295.)。
[0006]由于燈盞乙素口服吸收差，口服利用率不高，而燈盞乙素苷元能夠在體內轉化為 燈盞乙素，且其口服吸收優于燈盞乙素，如果能夠得到燈盞乙素苷元具有一定穩定性的晶 型，將更有利于藥物開發及工業化生產。
【發明內容】
[0007] 本發明通過緩慢揮發結晶、懸浮攪拌、緩慢降溫、反溶劑添加、反向反溶劑添加、 液-固氣相滲透、液-液氣相滲透、離子液體誘導結晶、聚合物誘導結晶、濕度誘導、濕法研 磨、加熱誘導等方法制備得到燈盞乙素苷元的多晶型及苷元的銨鹽水合物晶型，由此完成 了本發明。
[0008] 本發明第一方面涉及燈盞乙素苷元晶型A，其特征在于所述晶型A在使用Cu-K a 輻射，以2 0角度表示的X射線粉末衍射圖譜中，至少具有約為以下位置處的主要特征吸收 峰：14.5±0.2°、16.9±0.2°、22.0±0.2°、26.7±0.2° 和 27.4±0.2°。
[0009] 在本發明的一個實施方案中，所述晶型A在使用Cu-Ka輻射，以2 0角度表示 的X射線粉末衍射圖譜中，還具有選自約為以下位置處的特征吸收峰中的一個或多個： 11.2±0.2°、13.8±0.2°、20.4±0.2°、24.8±0.2°、28.7±0.2° 和 30.4±0.2° 等。
[0010] 在本發明的一個具體實施方案中，所述晶型A在使用Cu-Ka輻射，以2 0角 度表示的X射線粉末衍射圖譜中，具有約為以下位置處的特征吸收峰：7.2±0. 2°、 11.2±0.2 °、13.8±0.2 °、14.5±0.2 °、16.9±0.2 °、20.4±0.2 °、21.3±0.2 °、 22. 0±0. 2 °、23. 0±0. 2 °、24. 4±0. 2 °、24. 8±0. 2 °、26. 7±0. 2 °、27. 4±0. 2 °、 28.7±0.2 °、30.4±0.2 °、31.1±0.2 °、32.3±0.2 °、33.1±0.2 °、33.8±0.2 °、 34. 8±0. 2° 和 37. 3±0. 2°。
[0011] 在本發明的具體實施方案中，其典型的X射線粉末衍射圖譜如圖1所示。
[0012] 根據本發明任一項的晶型A，其利用差示掃描量熱法測定的熔點（onset溫度）范 圍為 366. 1±3. 0°C。
[0013] 在本發明的具體實施方案中，其利用差示掃描量熱法測定的熔點約為366.rc。
[0014] 在本發明的具體實施方案中，其典型的DSC圖如圖2所示。
[0015] 根據本發明任一項的晶型A，其純度彡90%，優選彡95%。
[0016] 本發明還涉及本發明任一項的晶型A的制備方法，其包括以下步驟：
[0017] (1)取燈盞乙素加入回流溫度為120°C至220°C(例如180°C)的與水混溶的有機 溶劑（例如丙二醇或乙二醇），加熱回流，使燈盞花乙素全部溶解；
[0018] ⑵向溶液中緩慢滴加酸（例如稀鹽酸或者稀硫酸）溶液；繼續回流6-16小時；
[0019] (3)溶液冷卻，析出沉淀，過濾，濾餅分別以步驟⑴所述的回流溶劑（例如丙二醇 或乙二醇）、水洗滌，以及任選的干燥、粉碎的步驟，即得燈盞乙素苷元晶型A ;
[0020] (4)任選地，通過懸浮攪拌、緩慢降溫、反溶劑添加、反向反溶劑添加、液-固氣相 滲透、離子液體誘導結晶、濕度誘導和濕法研磨中的一種或幾種也可從燈盞乙素固體（包 括晶型A、無定型或其它晶型）獲得晶型A。
[0021] 在本發明的實施方案中，上述步驟（4)中的方法選自以下八種方法中的一種或幾 種：
[0022] (1)取燈盞乙素苷元固體（例如晶型A)，加入水或者乙醇或者或乙酸或乙腈或者 丙酮或者甲基異丁基酮或者四氫呋喃或者醋酸異丙酯或者甲基叔丁基醚或者1，4-二氧 六環或者正己烷或者甲苯或者乙二醇/水混合溶劑或者丙二醇/水混合溶劑或者PEG400/ 庚烷混合溶劑或者N-甲基吡咯烷酮/水混合溶劑或者二甲亞砜/水混合溶劑或者二甲基 甲酰胺/水混合溶劑得到懸浮液，在室溫（RT)或者40-60°C (例如50°C )條件下攪拌4-8 天（例如6天），離心分離固體得到晶型A ;
[0023] (2)取燈盞乙素苷元固體（例如晶型A)，加入二甲亞砜/乙醇混合溶劑或者二甲 亞砜/四氫呋喃混合溶劑或者N-甲基吡咯烷酮/甲基叔丁基醚混合溶劑或者N-甲基吡咯 烷酮/乙酸乙酯混合溶劑或者二甲基甲酰胺/丙酮混合溶劑或者或者二甲基甲酰胺/乙 腈混合溶劑，在40-60°C (例如50°C )平衡一段時間（例如30min)后降溫2-5天（例如3 天）降至3-KTC (例如5°C)，在該溫度下懸浮攪拌1-4天（例如2天）后離心分離固體得 到晶型A ;
[0024] (3)取燈盞乙素苷元固體（例如晶型A)，加入正溶劑，使固體完全溶解，然后將該 澄清溶液緩慢加入反溶劑，析出的沉淀或者在室溫條件下揮發后得到的固體即為燈盞乙素 苷元晶型A ;正溶劑和反溶劑的組合可以是N-甲基吡咯烷酮/水或者二甲亞砜/甲醇或者 二甲亞砜/丙酮或者二甲基甲酰胺/水；
[0025] (4)取燈盞乙素苷元固體（例如晶型A)，加入正溶劑，使固體完全溶解，然后將該 澄清溶液緩慢加入到反溶劑中，析出的沉淀或者在室溫條件下揮發后得到的固體即為燈盞 乙素苷元晶型A ;正溶劑和反溶劑的組合可以是N-甲基吡咯烷酮/水或者二甲亞砜/甲醇 或者二甲亞砜/丙酮或者二甲基甲酰胺/水；
[0026] (5)取燈盞乙素苷元固體（例如晶型A)至瓶中，將小瓶敞口置于裝有二氯甲烷或 者乙醇或者甲醇或者甲苯或者乙腈或者四氫呋喃或者二甲基甲酰胺或者丙酮的密閉玻璃 瓶中，室溫條件下避光放置一段時間（例如13天）后取出固體，得到晶型A ;
[0027] (6)取燈盞乙素苷元固體（例如晶型A)至瓶中，加入二甲亞砜/四氫呋喃混合溶 劑或者二甲基甲酰胺/乙腈混合溶劑或者二甲亞砜/乙醇混合溶劑，得到澄清溶液，加入離 子液體至澄清溶液中。所得溶液在室溫條件下緩慢揮發，獲得晶型A ;所述離子液體例如是 指1- 丁基-3-甲基咪唑陽離子鹽溶液；
[0028] (7)取燈盞乙素苷元固體（例如晶型A)至瓶中，放置于恒定濕度（例如 30% -99%，例如32. 8%或者57. 6%或者75. 3%或者97. 3% )的容器內，室溫儲存一段時 間（例如11天），得到晶型A ;
[0029] (8)取燈盞乙素苷元固體（例如晶型A)至研缽中，添加異丙醇或者乙酸或者乙腈 或者丙酮或者醋酸異丙酯，研磨（例如15min)，得到晶型A。
[0030] 本發明還涉及燈盞乙素苷元晶型D，其特征在于所述晶型D在使用Cu-Ka輻 射，以2 0角度表示的X射線粉末衍射圖譜中，至少具有約為以下位置處的特征吸收峰： 14. 1±0. 2°、15. 8±0. 2°、24. 1±0. 2°、26. 1±0. 2°、28. 0±0. 2°。
[0031] 在本發明的一個實施方案中，所述晶型D在使用Cu-Ka輻射，以2 0角度表示 的