一種不動桿菌及由其發酵制得的微生物絮凝劑的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于微生物絮凝劑領域。具體而言，本發明涉及一種能夠發酵生產微生物 絮凝劑的新型不動桿菌，以及由其發酵制得的微生物絮凝劑。
【背景技術】
[0002] 噴漆室是專供噴涂液態涂料的涂裝室，是工業涂裝車間的關鍵設備之一。隨著現 代涂裝工藝的發展，噴涂用量日益增加，由此在噴涂過程中也出現噴漆不能涂覆到工件上 而成為"過噴"漆霧的問題。
[0003] "過噴"漆霧含有大量不利于人體健康的揮發性有機溶劑，嚴重污染周圍環境和空 氣。涂料粘在地上難以清理，還會進入循環水中造成環境污染，并且涂料資源被浪費，對設 備、管道也造成腐蝕堵塞等危害。
[0004] 對于噴漆室內循環水處理的方式主要包括機械刮除法、吸附絮凝分離法等。絮凝 劑是一類可以使液體中的膠體和懸浮顆粒絮凝成較大的絮凝體沉淀或者上浮的物質。絮凝 劑主要分為三大類：無機絮凝劑、有機絮凝劑和微生物絮凝劑。無機絮凝劑主要包括鋁鹽和 鐵鹽。但鋁鹽產生的污泥廣泛應用于農業，導致土壤中鋁含量升高，植物出現鋁害，從而影 響植物正常生長，甚至死亡；同時伴隨這些農作物進入食物鏈影響到人體的健康。鐵鹽對金 屬有腐蝕作用，也可造成處理水中帶有顏色，且高濃度的鐵對人體健康和生態環境均有不 利影響。并且有機絮凝劑中得到最廣泛應用的是聚丙烯酰胺，其單體更是具有強烈的神經 毒性與致癌性。
[0005] 微生物絮凝劑是一類由微生物產生的有絮凝活性的高分子代謝產物，成分有糖蛋 白、多糖、蛋白質、纖維素和DNA等。它是利用微生物技術，通過細菌、真菌等微生物發酵、提 取、精制而得到的，具有生物分解性和安全性的新型、高效、無毒、無二次污染的水處理劑。 微生物絮凝劑是目前國內外研宄的熱點。
【發明內容】
[0006] 針對上述問題，本發明的目的是提供一種新型不動桿菌，該不動桿菌具有生長速 度快、穩定性強的特點，并且可以發酵制得能夠高效絮凝漆霧廢水的新的微生物絮凝劑，因 此本發明的不動桿菌具有良好的應用前景。
[0007] 本發明的上述目的是通過以下技術方案實現的：
[0008] -方面，本發明提供一種不動桿菌（Acinetobacter sp. )FL_2,所述不動桿菌種的 保藏編號為CGMCC No. 9380。
[0009] 本發明所提供的菌株為洛菲不動桿菌FL-2,是從江蘇韓一模塑有限公司的廢水中 分離得到的，已于2014年6月25日保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中 心（簡稱CGMCC，地址：北京市朝陽區北辰西路1號院3號，中國科學院微生物研宄所），保 藏號為CGMCC No. 9380。其具有以下生物學特性：在牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基上，37°C下培 養24h，菌落產生，呈現為圓形，乳白色，邊緣規整，光滑，有粘性。
[0010] 該囷株的16S rDNA基因序列測定結果如下序列所不：
[0011] SEQ ID NO: 1
[0012] GGCTTACACATGCAGTCGAGCGGGGAAAAGTAGCTTGCTACTTTACCTAGCGGCGGACGGGTGAGTAAT GCTTAGGAATCTGCCTATTAGTGGGGGACAACATCTCGAAAGGGATGCTAATACCGCATACGTCCTACGGGAGAAAG CAGGGGACCTTCGGGCCTTGCGCTAATAGATGAGCCTAAGTCGGATTAGCTAGTTGGTGGGGTAAAGGCCTACCAAG GCGACGATCTGTAGCGGGTCTGAGAGGATGATCCGCCACACTGGGACTGAGACACGGCCCAGACTCCTACGGGAGGC AGCAGTGGGGAATATTGGACAATGGGGGGAACCCTGATCCAGCCATGCCGCGTGTGTGAAGAAGGCCTTTTGGTTGT AAAGCACTTTAAGCGAGGAGGAGGCTACCGAGATTAATACTCTTGGATAGTGGACGTTACTCGCAGAATAAGCACCG GCTAACTCTGTGCCAGCAGCCGCGGTAATACAGAGGGTGCAAGCGTTAATCGGATTTACTGGGCGTAAAGCGCGCGT AGGTGGCCAATTAAGTCAAATGTGAAATCCCCGAGCTTAACTTGGGAATTGCATTCGATACTGGTTGGCTAGAGTAT GGGAGAGGATGGTAGAATTCCAGGTGTAGCGGTGAAATGCGTAGAGATCTGGAGGAATACCGATGGCGAAGGCAGCC ATCTGGCCTAATACTGACACTGAGGTGCGAAAGCATGGGGAGCAAACAGGATTAGATACCCTGGTAGTCCATGCCGT AAACGATGTCTACTAGCCGTTGGGGCCTTTGAGGCTTTAGTGGCGCAGCTAACGCGATAAGTAGACCGCCTGGGGAG TACGGTCGCAAGACTAAAACTCAAATGAATTGACGGGGGCCCGCACAAGCGGTGGAGCATGTGGTTTAATTCGATGC AACGCGAAGAACCTTACCTGGTCTTGACATAGTAAGAACTTTCCAGAGATGGATTGGTGCCTTCGGGAACTTACATA CAGGTGCTGCATGGCTGTCGTCAGCTCGTGTCGTGAGATGTTGGGTTAAGTCCCGCAACGAGCGCAACCCTTTTCCT TATTTGCCAGCGGGTTAAGCCGGGAACTTTAAGGATACTGCCAGTGACAAACTGGAGGAAGGCGGGGACGACGTCAA GTCATCATGGCCCTTACGACCAGGGCTACACACGTGCTACAATGGTCGGTACAAAGGGTTGCTACCACGCGAGTGGA TGCTAATCTCAAAAAGCCGATCGTAGTCCGGATTGGAGTCTGCAACTCGACTCCATGAAGTCGGAATCGCTAGTAAT CGCGGATCAGAATGCCGCGGTGAATACGTTCCCGGGCCTTGTACACACCGCCCGTCACACCATGGGAGTTTGTTGCA CCAGAAGTAGGTAGTCTAACCTTAGGGAGGACGCTACCACGTGCAGTTGC
[0013] 可以下述方式培養或保存本發明的不動桿菌：
[0014] (1)普通培養保存采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基斜面，培養基配方為牛肉膏3g， 蛋白胨 l〇g，NaCl 5g，瓊脂 15-20g，蒸餾水 1000mL。
[0015] (2)實驗室液體培養采用牛肉膏蛋白胨液體培養基，培養基配方為牛肉膏3g，蛋 白胨 10g，NaCl 5g，蒸餾水 1000mL。
[0016] (3)大量發酵培養米用大量發酵培養基，培養基配方為葡萄糖20g，KH2P0 42g， K2HP045g，（NH4)2SO4O. 2g，NaCl 0· lg，MgSO4 . 7H20 0· 5g，尿素 0· 2g，酵母膏 0· 5g，蒸餾水 IOOOmL0
[0017] 實驗證明，本發明提供的不動桿菌能夠發酵產生高效絮凝漆霧廢水的微生物絮凝 劑，因此，另一方面，本發明提供所述的不動桿菌在制備用于絮凝漆霧廢水的微生物絮凝劑 中的用途。所述漆霧廢水主要包含大量漆霧顆粒，取決于使用的漆料和溶劑、助溶劑等，包 含例如聚丙烯酸樹脂、聚氨酯、醇酸樹脂、芳香族溶劑等。另外，實驗證明，除絮凝作用之外， 本發明提供的微生物絮凝劑還可以具有降解廢水中難降解化合物的作用，可以有效降低廢 水C0D。因此，盡管本發明采用術語"絮凝劑"，但應理解所述術語還有"降解劑"的含義。
[0018] 又一方面，本發明提供一種用于絮凝和/或降解漆霧廢水的微生物絮凝劑，所述 微生物絮凝劑由本發明所述的不動桿菌發酵制得。
[0019] 優選地，所述微生物絮凝劑是本發明所述不動桿菌的發酵液，或者是所述發酵液 的離心上清液，或者是從所述離心上清液中提取的物質。例如，將從上清液中提取出來的物 質在水中溶解成一定濃度的溶液，即可直接作為絮凝劑使用。
[0020] 優選地，所述微生物絮凝劑由包括以下步驟的方法進行制備：
[0021] 在大量發酵培養基中，在25-35°C下，以120-200r/min的轉速，培養本發明的不動 桿菌60-80h，得到發酵液。
[0022] 進一步優選地，所述微生物絮凝劑由包括以下步驟的方法進行制備：
[0023] (1)采用牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基，制備所述不動桿菌的斜面；
[0024] (2)從步驟（1)制備的斜面挑取菌落接種到牛肉膏蛋白胨液體培養基，37°C下恒 溫培養24h得到種子液，其中所述種子液中的菌濃度為I. 5 X IO6個/mL ;
[0025] (3)將步驟（2)制備的種子液按照3%的量接種至大量發酵培養基，在30°C、160r/ min的條件下培養72h ;
[0026] 任選地，所述方法還包括：
[0027] (4)將步驟（3)制備的發酵液在4°C下以8000r/min離心20min得到上清液；
[0028] (5)任選地，向步驟（4)制備的上清液中加入兩倍體積的4°C下預冷的無水乙醇， 4°C下靜置過夜，然后在與步驟（4)相同的條件下離心，傾去上清液，將沉淀于透析袋中透 析48h，然后冷凍干燥。
[0029] 所述步驟⑴中牛肉膏蛋白胨瓊脂培養基的配方為牛肉膏3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，瓊脂15-20g，蒸餾水IOOOmL ;所述步驟（2)中牛肉膏蛋白胨液體培養基的配方為牛肉膏 3g，蛋白胨10g，NaCl 5g，蒸餾水IOOOmL ;所述步驟（3)中大量發酵培養基的配方為葡萄糖 20g，KH2P042g，K 2