一種制備鮑魚硫酸多糖的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及從海洋動物的加工副產物中制備多糖的技術領域，更具體，涉及從鮑魚的性腺或臟器中制備硫酸多糖的技術領域。
【背景技術】
[0002]鮑魚是中國傳統的名貴食材，位居四大海味之首。鮑魚的臟器，包括性腺，是鮑魚加工的副產物，目前多作為低值飼料處理甚至被丟棄，造成了生物資源的浪費和環境的污染。朱蓓薇等人的研宄發現，鮑魚臟器中的硫酸多糖具有抗氧化、抗凝血、免疫調節等作用，非常具有開發價值。
[0003]通過檢索，發現如下三篇與本專利申請相關的公開專利文獻:1.朱蓓薇等公開了鮑魚多糖的提取方法(CN200510047409.X)，是將鮑魚去殼取肉(包括內臟)，用組織搗碎機破壁，加水混合均勻于20?80°C浸提2?6h，離心分離，不溶物再次加水重復提取I?2次，上清液合并。濃縮提取液至含糖1.5?3.0%，加3?4倍體積的95%乙醇，O?4°C下醇沉12?16h，離心后真空法或噴霧法干燥得產品。提取還可以用加堿提取、超聲波提取、酶提取。酶提取可以用單一酶、雙酶、復合酶、自溶酶和復合法提取。酶為胃蛋白酶、胰蛋白酶等。2.陳錦權等公開了一種鮑魚多糖的制備工藝(CN 201110123164.X),它包括以下步驟:①將洗凈的鮑魚肉或臟器打漿得到鮑魚預處理液，常溫下采用高壓脈沖電場處理；②采用殼聚糖對PEF處理后的鮑魚料液進行絮凝除去粗蛋白，以提高多糖純度采用電滲析技術對預處理液進行處理，有效脫去重金屬；④采用乙醇沉淀制備鮑魚多糖。3.集美大學翁武銀公開了一種鮑魚多糖、脂質和蛋白肽的聯產制備方法(CN 201310142151.6)，技術工藝包括以鮑魚內臟為原料，通過復合酶解、膜分離、醇沉、離心分離、冷凍結晶、脫色、干燥等手段提取制備鮑魚多糖、脂質和蛋白肽。
[0004]通過比對，上述公開專利的技術方案和目標產品與本專利申請有本質的不同，本專利申請具有新穎性。
【發明內容】
[0005]本發明的目的在于提供一種從鮑魚內臟或性腺中制備鮑魚硫酸多糖的方法，該方法工藝成本低，適用于工業化生產，產品純度高、品質好，可用于醫藥、保健品行業等。
[0006]為了達到上述目的，本發明制備鮑魚硫酸多糖的方法，包括以下步驟:
[0007]S1、以鮑魚內臟或性腺為原料，粉碎后，堿法或酶法使多糖與蛋白解離，提取出粗多糖，提取液靜置冷卻后離心，取上清液；
[0008]S2、所述上清液經離子交換樹脂吸附，水沖洗至流出液澄清后，分別用兩種濃度氯化鈉溶液依次洗脫，收集流出液；所述離子交換樹脂為大孔徑強堿性陰離子交換樹脂，所述兩種濃度氯化鈉溶液是指體積為離子交換樹脂3?5倍的1.4mol/L氯化鈉溶液和體積為離子交換樹脂2?4倍的3mol/L氯化鈉溶液；
[0009]S3、所述流出液加入1.2?3倍體積的95%乙醇，靜置8h以上，收集沉淀部分；
[0010]S4、得到沉淀部分加入水或O?4%氯化鈉水溶解后，采用堿法解離蛋白后，靜置冷卻后離心，取上清液，酶法解離蛋白；
[0011]S5、調酸除蛋白，氧化脫色，醇沉，沉淀溶解后膜法除鹽，收集膜內部分，經冷凍干燥后獲得鮑魚硫酸多糖。
[0012]步驟SI中，所述堿法提取為加入2?4 %氯化鈉水溶液，氫氧化鈉溶液調pH8?9,50 ~ 60°C加熱攪拌L 5?3h。
[0013]步驟SI中，所述酶法提取為加入pH8.0Tris-醋酸緩沖液，加入原料干重2%胰蛋白酶35?45°C振搖3?5h，加入原料干重2%木瓜蛋白酶45?60°C振搖3?5h，90?100 °C加熱攪拌5?10分鐘。
[0014]步驟S4所述堿法解離蛋白，具體為用氫氧化鈉溶液調pH 8?9，50?60 °C恒溫攪拌I?3h。
[0015]步驟S4所述酶法解離蛋白，具體為加入沉淀干重0.1?0.5%胰蛋白酶，35?45°C攪拌4?6h。
[0016]步驟S5中:所述調酸除蛋白，具體為加入0.2?2%亞硫酸氫鈉作保護劑，鹽酸調pH 1.5?2.0，低溫離心，收集上清液；所述氧化脫色，具體為加入體積比I %過氧化氫，調PH8.5，室溫放置I日后，鹽酸調pH 6.5?7.0 ;所述醇沉，具體為加入1.2?3倍95%乙醇，靜置8h以上。
[0017]在步驟S3，醇沉之前，為節約醇沉時乙醇的用量，流出液可采用超濾方法濃縮，并可起到除鹽效果，然后醇沉。
[0018]整合上述步驟，本發明一種最優的方式，鮑魚硫酸多糖的制備方法，包括以下步驟:
[0019]Step 1、以鮑魚內臟或性腺為原料，粉碎后，堿法提取或酶法提取，提取液靜置冷卻后離心，取上清液；
[0020]Step 2、Step I得到的上清液反復流經大孔徑強堿性陰離子交換樹脂，使硫酸多糖吸附于所述離子交換樹脂，用水沖洗所述離子交換樹脂，至流出液澄清無色，然后用3?5倍樹脂體積的1.4mol/L氯化鈉溶液循環流經所述離子交換樹脂，收集流出液；2?4倍樹脂體積的3mol/L氯化鈉溶液循環流經所述離子交換樹脂，收集流出液；合并兩種流出液；
[0021]Step 3,Step 2得到的流出液若體積過大，可用超濾方法除鹽和濃縮；加入L 2?3倍體積的95%乙醇，靜置8h以上，收集沉淀部分；
[0022]Step 4、Step 3得到沉淀部分用O?4%氯化鈉溶解，用氫氧化鈉溶液調pH 8?9，50?60°C恒溫攪拌I?3h，靜置冷卻后離心，取上清液，加入沉淀干重0.1?0.5%胰蛋白酶，35?45°C攪拌4?6h ;
[0023]Step 5,Step 4后的溶液，冷卻后加入0.2?2%亞硫酸氫鈉作保護劑，鹽酸調pH
1.5?2.0，迅速低溫離心，上清液加入I % (v/v)過氧化氫，調pH8.5，室溫放置I日后，鹽酸調pH 6.5?7.0，加入1.2?3倍95%乙醇，靜置8h以上，沉淀部分用水溶解后，膜法除鹽，收集膜內部分，經冷凍干燥后獲得鮑魚硫酸多糖。
[0024]其中，Step I所述堿法提取為加入2?4%氯化鈉水溶液，氫氧化鈉溶液調pH8?9，50?60°0加熱攪拌1.5?3h ;所述酶法提取為加入pH8.0Tris-醋酸緩沖液，加入原料干重2%胰蛋白酶35?45°C振搖3?5h，加入原料干重2%木瓜蛋白酶45?60°C振搖3?5h，90?100°C加熱攪拌5?1mino
[0025]本發明具有以下優點和效果:
[0026]以本發明所提供的方法獲得的硫酸多糖純度高，蛋白含量低于10%，制備條件溫和，對硫酸多糖功能基團破壞小，硫酸基含量大于5%。
[0027]本發明使用強堿性陰離子離子交換樹脂，能夠特異性的富集硫酸多糖，避免了蛋白、中性多糖等雜質的引入，保證了產品的品質。而且與其它工藝方法相比，使用樹脂富集的方法能夠減少醇沉時的乙醇用量，降低成本和能耗。
[0028]本發明使用的離子交換樹脂、膜分離等市場上均有供工業化生產的材料和設備，易于建立工藝生產線。
[0029]本發明使用的原料為鮑魚性腺和內臟，它們是鮑魚加工的副產物，而且是鮑魚主要含硫酸多糖的部位，以它們為原料生產硫酸多糖，得率高，而且成本低，實現了對海洋生物資源的綜合利用。
【附圖說明】
[0030]圖1是實施例1所得的鮑魚硫酸多糖的核磁共振氫譜和碳譜；
[0031]圖2是實施例1所得的鮑魚硫酸多糖的碳譜；<