Yap蛋白抑制多肽及其應用
【技術領域】
[0001] 本發明涉及腫瘤治療領域，具體地，涉及新的YAP蛋白抑制多肽，用于治療消化道 腫瘤。
【背景技術】
[0002] 肝癌是全球高發病率的癌癥種類之一，特別是在中國，由于病毒性肝炎高發，慢性 病毒性肝炎的主要預后將發展成為肝硬化，以致肝癌。目前的醫療水平還沒有掌握任何技 術和方法可以治愈肝癌，最主要的治療方法是采取外科手術局部切除腫瘤，極少數可以進 行肝臟切除并接受肝臟移植。由于沒有辦法徹底清除潛在的病灶，接受手術后肝癌的復發 率極高，據統計，3年內的復發率約40%，七年內超過90%。
[0003] 近年來，雖然已經開發了各種不同的腫瘤治療藥物和手段，但對于肝癌等惡性腫 瘤，療效并不理想。
[0004] 因此本領域迫切需要尋找一種有效的治療消化道腫瘤，尤其是肝癌的方法。
【發明內容】
[0005] 本發明提供了一種創新的消化道腫瘤治療藥物，所述藥物為多肽，可極其有效地 抑制YAP蛋白，進而抑制腫瘤。
[0006] 本發明提供了一種YAP蛋白抑制多肽及其用于治療消化道腫瘤尤其是肝癌的用 途。
[0007] 本發明第一方面，提供了一種分離的多肽，所示的多肽具有式A所示的結構：
[0008] X0-Y1-Y2-Y3-Y4-Y5-Y6-Xa-Xe 式A [0009]式中，
[0010] X。或Xa為無，或1、2、3或4個氨基酸殘基；
[0011] Y1SAPJP,或無；
[0012] Y2SX^X2-X2a，其中X1選自M、F、C或Hcy;X2為任意氨基酸殘基（較佳地乂2為C、 Hey、L、M、F);以及X2aSL、Nle、C、Hey、K或R;
[0013] Y3為X3a-X3-X4,其中X3a為堿性氨基酸R或K;X3為任意氨基酸（較佳地X3為K、R、 此丫、(3、〇111或〇313);以及乂4為任意氨基酸（較佳地為1、犯6、扮^、〇，且￥ 3中至少一個氨 基酸為Hcy或C;
[0014] Y4SP;
[0015] \為父5，且乂5為任意氨基酸（較佳地乂5為4、0、或已） ；
[0016] \為S-X6a-x6，其中^為F、C、或Hcy;和X6為任意氨基酸殘基（較佳地X6為C、 Hcy、F、K*R)
[0017] \為X7-P-X7a，其中X7為任意氨基酸殘基（較佳地心為C、Hey、K、R或P);X C、Hcy或P;
[0018] XeS無或細胞穿透元件；
[0019] 且所述的多肽具有Yes相關蛋白（Yes-associatedprotein,YAP)活性抑制作用；
[0020] 在另一優選例中，YjP/或Y3中至少一個氨基酸為Hcy或C;和Y6或Y7中至少一 個氨基酸為Hcy或C。
[0021] 在另一優選例中，Y2中至少一個氨基酸為Hcy或C。
[0022] 在另一優選例中，Y3中的X%或X3為Hcy或C。
[0023] 在另一優選例中，Y5 (或X5)為Hcy或C，或任意氨基酸殘基。
[0024] 在另一優選例中，Y6中的X63或X6為Hcy或C。
[0025] 在另一優選例中，Y7中的X7或X73為Hcy或C。
[0026] 在另一優選例中，所述的Xe為細胞穿透元件。
[0027] 在另一優選例中，所述的XpX2、X2a、X3、X3a、X5、X6、X6a、\和X7a之間任選地形成至 少一對二硫鍵。
[0028] 在另一優選例中，所述的XpX2、X2a、X3、X3a、X5、X6、X6a、\和X73之間任選地形成1 或2對二硫鍵。
[0029] 在另一優選例中，所述的二硫鍵在選自X2、X2a、X3、X3a的一個氨基酸與選自X5、 X6、X6a、\和X7a的一個氨基酸之間形成。
[0030] 在另一優選例中，所述的二硫鍵位于XJPX6a之間、XJPX6之間、X2JPX7之間、 XjPX7 之間、XJPX7a之間。
[0031] 在另一優選例中，所述的二硫鍵位于XgX6之間、X5%X7之間、X2%X7之間、或 x5%x6之間。
[0032] 本發明第二方面，提供了一種分離的多肽，所述的多肽具有式V所示的結構：
[0033]X0-Z-Xa-Xe (V)
[0034]式中，
[0035]Xc^Xa為無，或1、2、3或4個氨基酸殘基；
[0036]XeS無或細胞穿透元件；
[0037]Z為具有引入的鏈內二硫鍵的YAP抑制多肽，
[0038] 并且所述Z中去除所述鏈內二硫鍵所對應的氨基酸之后具有式Va所示的基本序 列：
[0039]Z1-Z2-Z3-Z4-Z5-Z6-Z7-Z8-Z9-Z10-Z11-Z12-Z13-Z14-Z15-Z16
[0040]式Va
[0041]式中，
[0042]Zl為V、A 或無；
[0043]Z2 為P、A 或無；
[0044]Z3為M、F、L或氯苯丙氨酸；
[0045]Z4 為R、K、A或無；
[0046]Z5 為L、Nle、A或無；
[0047]Z6 為R、或K;
[0048] Z7SK、R、0rn、Dab、*A;
[0049]Z8 為L、或Nle;
[0050]Z9 為P;
[0051]ZlO為任意天然或非天然氨基酸，優選D、A、V、L、I或E;
[0052]Zll為S、或T;
[0053]Z12為F、L、或氯苯丙氨酸；
[0054]Z13為F、L、氯苯丙氨酸、或無；
[0055]Z14 為K、R、A或無；
[0056]Z15 為P、A或無；
[0057]Z16 為P、A或無；
[0058] 其中，所述的二硫鍵的第一氨基酸Bl位于所述基本序列中Zl至Z8所構成的第一 區段中任意兩個氨基酸之間或位于所述第一區段的第一個氨基酸之前，而二硫鍵的第二 氨基酸B2位于所述基本序列中Z9至Z16所構成的第二區段中任意兩個氨基酸之間或位于 所述第二區段的最后一個氨基酸之后。
[0059] 在另一優選例中，Z4和Z5不同時為無。
[0060] 在另一優選例中，第一氨基酸Bl位于Z2和Z3之間、Z3和Z4之間、Z3和Z5之間 (此時Z4為無）、Z4和Z5之間、Z7和Z8之間；和/或
[0061] 第二氨基酸B2位于Zll和Z12之間、Z12和Z13之間、Z13和Z14之間、Z14之后 (此時Z15和Z16為無）、Z15之后（此時Z16為無）、Z16之后。
[0062] 在另一優選例中，所述式Va中Z3至Z13所示序列與SEQIDNO. : 1中第3 - 13 位所示的序列相差不超過1、2、3、4、5個氨基酸，較佳地，不超過3、4個氨基酸。
[0063] 注：SEQIDNO. : 1中第3-13位或對應于的Z3至Z13所構成的序列為核心序列。
[0064] 在另一優選例中，第一氨基酸Bl和第二氨基酸B2之間間隔3-14個（較佳地4-12 個，更佳地4-10個，最佳地7、8、或9個）氨基酸。
[0065] 在另一優選例，所述的第一氨基酸Bl和第二氨基酸B2各自獨立地選自Hcy或C。
[0066] 在另一優選例中，一個或多個選自Z1、Z2、Z14_Z16的氨基酸為無。
[0067] 在另一優選例中，所述的任意氨基酸包括天然或非天然氨基酸。
[0068] 在另一優選例中，所述二硫鍵之間的間隔距離為4、5、6、7、8、9、或10個氨基酸（不 含形成二硫鍵的氨基酸）。較佳地，間隔距離為5、6、7、8、或9個氨基酸。
[0069] 在另一優選例中，所述二硫鍵的數量為1對。
[0070] 在另一優選例中，所述式A或式V多肽含有至少一個非天然氨基酸。
[0071] 在另一優選例中，所述式A或式V多肽與SEQIDNo. :1的相同性（或同源 性）彡 50%，彡 60%，彡 70%，彡 80%，彡 90%。
[0072] 在另一優選例中，所述式A或式V多肽保留了SEQIDNo. :1的生物活性的至少 彡 50%，彡 60%，彡 70%，彡 80%，彡 90%、彡 100%，例如 80-500%，較佳地 100-400%。
[0073] 在另一優選例中，所述的生物活