小反芻獸疫病毒n蛋白的線性抗原表位最小基序肽的制作方法
【技術領域】
[0001] 本發明屬于免疫學和生物醫藥技術領域，更具體地，本發明涉及一種小反芻獸疫 病毒N蛋白的線性抗原表位最小基序肽。
【背景技術】
[0002] 小反當獸疫（pestedespetitsruminants，PPR)是由小反當獸疫病毒（peste despetitsruminantsvirus,PPRV)引起的一種感染小反當獸類的急性接觸傳染性疾病 (Munir,M.,RoleofWildSmallRuminantsintheEpidemiologyofPesteDesPetits Ruminants.TransboundEmergDis，2013)。作為一種嚴重的跨國A類動物傳染病，中國也 將其規定為一類動物疫病，為最高關注級別。PPR在易感羊群中發病率高達100%，嚴重爆發 時致死率為100%。小反芻獸疫1942年首次發現于科特迪瓦，后擴散至非洲及亞洲大部；中 國西藏地區分別于2007年、2008年兩度爆發小反芻獸疫疫情，給當地農牧民造成巨大的經 濟損失。雖然國內外學者已研制了小反芻獸疫病毒的檢測和減毒疫苗用于該疫病的防控， 但因其價格昂貴，在小反芻獸疫頻繁爆發的發展中國家，包括在中國西部地區尚不能普及 應用。建立新型PPRV檢測試劑盒或將這些試劑盒國產化是大規模小反芻獸疫疫情調查亟 待解決的問題之一。
[0003]PPRV屬于副粘病毒科（paramyxoviridae)、麻疫病毒屬（morbiIlivirus)負 鏈RNA病毒，基因組全長約16, 000核苷酸；它只有一個血清型，其基因組編碼核衣殼蛋 白（N)、磷蛋白（P)、聚合酶或大蛋白（L)、基質蛋白（M)、融合蛋白（F)和血凝素⑶六 個結構蛋白和P蛋白和C蛋白兩個非結構蛋白質（Munir，M.等，GenomeOrganization ofPestedesPetitsRuminantsVirus,inMolecularBiologyandPathogenesisof PestedesPetitsRuminantsVirus. 2013,SpringerBerlinHeidelberg,p. 1-22) 〇 其 中N蛋白是PPRV中含量最豐富和免疫原性最強的蛋白質。抗原表位作圖定位（印itope mapping)和表位基序鑒定（epitopemotifidentifying) -直是動物病毒領域關注的 重點。在PPRV結構蛋白N的表位研究也有相關報道，如Kang-SeukChoi等就PPRV病毒 豐度最高且免疫原性最強的核衣殼N蛋白上鑒定出4個抗原位點（A-l，A-2,C-l，C-2) (Choi,K.S. ,etal. ,AntigenicandimmunogenicinvestigationofB-cellepitopes inthenucleocapsidproteinofpestedespetitsruminantsvirus.ClinDiagn LabImmunol,2005. 12(1):p. 114-21);Dechamma等用化學合成膚方法在PPRV的N蛋 白的C端鑒定了一個可區別PPRV和RRV感染的特異的B細胞表位肽段（氨基酸殘基 454-472)(Dechamma,H.J.,etal. ,IdentificationofT-helperandlinearBepitope inthehypervariableregionofnucleocapsidproteinofPPRVanditsusein thedevelopmentofspecificantibodiestodetectviralantigen.Veterinary Microbiology, 2006. 118 (3-4) :p. 201-211)。但是，小反當獸疫病毒N蛋白的表位作圖和表 位基序鑒定的研究至今未見報道。
【發明內容】
[0004] 本發明的目的在于提供一種小反芻獸疫病毒N蛋白的線性抗原表位最小基序肽。
[0005] 在本發明的第一方面，提供小反芻獸疫病毒（西藏株）N蛋白的線性抗原表位圖 譜，該抗原表位圖譜包括：
[0006] 小反芻獸疫病毒N蛋白第62-68位即SEQIDNO: 1所示的線性抗原表位肽； [0007]小反芻獸疫病毒N蛋白第96-100位即SEQIDNO:2所示的線性抗原表位肽； [0008] 小反芻獸疫病毒N蛋白第119-126位即SEQIDNO:3所示的線性抗原表位肽； [0009]小反芻獸疫病毒N蛋白第128-133位即SEQIDN0:4所示的線性抗原表位肽； [0010]小反芻獸疫病毒N蛋白第147-153位即SEQIDNO:5所示的線性抗原表位肽；
[0011] 小反芻獸疫病毒N蛋白第152-158位即SEQIDN0:6所示的線性抗原表位肽；
[0012] 小反芻獸疫病毒N蛋白第297-305位即SEQIDNO:7所示的線性抗原表位肽；
[0013] 小反芻獸疫病毒N蛋白第304-312位即SEQIDN0:8所示的線性抗原表位肽；
[0014] 小反芻獸疫病毒N蛋白第377-385位即SEQIDN0:9所示的線性抗原表位肽；
[0015] 小反芻獸疫病毒N蛋白第384-392位即SEQIDNO: 10所示的線性抗原表位肽；
[0016] 小反芻獸疫病毒N蛋白第413-420位即SEQIDNO: 11所示的線性抗原表位肽；
[0017] 小反芻獸疫病毒N蛋白第417-424位即SEQIDNO: 12所示的線性抗原表位肽；
[0018] 小反芻獸疫病毒N蛋白第438-442位即SEQIDNO: 13所示的線性抗原表位肽；
[0019] 小反芻獸疫病毒N蛋白第452-456位即SEQIDNO: 14所示的線性抗原表位肽；
[0020] 小反芻獸疫病毒N蛋白第462-464位即SEQIDNO: 15所示的線性抗原表位肽；
[0021] 小反芻獸疫病毒N蛋白第474-479位即SEQIDNO: 16所示的線性抗原表位肽；
[0022] 小反芻獸疫病毒N蛋白第486-493位即SEQIDNO: 17所示的線性抗原表位肽；
[0023] 小反芻獸疫病毒N蛋白第492-496位即SEQIDNO: 18所示的線性抗原表位肽；
[0024] 小反芻獸疫病毒N蛋白第504-509位即SEQIDNO: 19所示的線性抗原表位肽；
[0025] 小反芻獸疫病毒N蛋白第523-525位即SEQIDNO:20所示的線性抗原表位肽。
[0026] 在本發明的另一方面，提供小反芻獸疫病毒N蛋白的保守性線性抗原表位圖譜， 該抗原表位圖譜包括：
[0027] 小反芻獸疫病毒N蛋白第62-68位即SEQIDNO: 1所示的線性抗原表位肽；
[0028] 小反芻獸疫病毒N蛋白第96-100位即SEQIDNO:2所示的線性抗原表位肽；
[0029] 小反芻獸疫病毒N蛋白第119-126位即SEQIDNO:3所示的線性抗原表位肽；
[0030] 小反芻獸疫病毒N蛋白第128-133位即SEQIDN0:4所示的線性抗原表位肽；
[0031] 小反芻獸疫病毒N蛋白第147-153位即SEQIDNO:5所示的線性抗原表位肽；
[0032] 小反芻獸疫病毒N蛋白第152-158位即SEQIDN0:6所示的線性抗原表位肽；
[0033] 小反芻獸疫病毒N蛋白第304-312位即SEQIDN0:8所示的線性抗原表位肽；
[0034] 小反芻獸疫病毒N蛋白第377-385位即SEQIDN0:9所示的線性抗原表位肽；
[0035] 小反芻獸疫病毒N蛋白第384-392位即SEQIDNO: 10所示的線性抗原表位肽；
[0036] 小反芻獸疫病毒N蛋白第413-420位即SEQIDNO: 11所示的線性抗原表位肽；
[0037] 小反芻獸疫病毒N蛋白第492-496位即SEQIDNO: 18所示的線性抗原表位肽。
[0038] 在一個優選例中，所述的線性抗原表位或保守性線性抗原表位肽是分離的。
[0039] 在本發明的另一方面，提供一種用于檢測小反芻獸疫病毒N蛋白的線性抗原表位 的試劑盒，所述試劑盒中包括：SEQIDN0:1?SEQIDN0:6、SEQIDN0:8?SEQIDN0:11、SEQIDNO: 18序列所示的線性抗原表位肽；或
[0040] 5￡〇10勵：1?5￡〇10勵：6、5￡〇10勵：8?5￡〇10勵：11、5￡〇10勵：18序列 所示的線性抗原表位肽的編碼基因。
[0041] 在一個優選例中，所述的試劑盒中還包括：SEQIDN0:7、SEQIDNO: 12?SEQID NO: 17、SEQIDNO: 19?SEQIDNO: 20序列所示的線性抗原表位肽；或