纖維酶輔助的芒果葉中芒果苷和槲皮素的提取方法
【專利說明】纖維酶輔助的芒果葉中芒果苷和槲皮素的提取方法 【技術領域】
[0001] 發明涉及天然產物提取與應用研宄領域，具體涉及一種纖維酶輔助的芒果葉中芒 果苷和槲皮素的提取方法。 【【背景技術】】
[0002] 芒果樹是漆樹科植物之一，普遍栽培于熱帶和亞熱帶地區，是世界上的第二大熱 帶水果；我國的臺灣、廣西、廣東、福建南部、云南南部和海南均有芒果栽培，資源十分豐富。 芒果葉含有豐富的芒果苷、異芒果苷、槲皮素、原兒茶酸、沒食子酸等多種藥物活性成分，其 具有鎮咳、平喘、祛痰、免疫、抗炎、保肝利膽、抗脂質過氧化、抗病毒、抗腫瘤、抗菌等作用。
[0003] 纖維素酶能降解植物細胞壁，提高細胞壁的通透性、促進細胞內含物的溶出與提 取，所以纖維素酶在植物活性物質提取方面得到廣泛應用。目前，芒果葉中黃酮類化合物提 取主要采用熱水提取法、超聲波乙醇浸提法、堿提酸沉法、超聲波提取法、微波提取法、回流 提取法，但利用纖維素酶輔助有機溶劑超聲提取芒果葉中黃酮類化合物的相關研宄還尚未 見報道。 【
【發明內容】
】
[0004] 本發明所要解決的技術問題在于提供一種纖維酶輔助的芒果葉中芒果苷和槲皮 素的提取方法。
[0005] 本發明是通過以下技術方案解決上述技術問題的：一種纖維酶輔助的芒果葉中芒 果苷和槲皮素的提取方法，其包括如下操作步驟：
[0006] (1)將鮮芒果葉采摘后清洗，置于烘箱中烘干水分，之后進行粉碎，過50目篩，得 干燥的芒果葉粉末，備用；
[0007] (2)稱取干燥的芒果葉粉末，并加入pH為5. 1的75 %乙醇溶液，且每克芒果葉粉 末需加入20mL的75%乙醇溶液，之后再加入6mg纖維素酶，接著于55°C下浸泡酶解70min ;
[0008] (3)浸泡后的提取體系在100W下超聲提取40min，真空抽濾，得芒果葉黃酮類物質 粗提液；
[0009] (4)將所得芒果葉黃酮類物質粗提液過硅膠層析柱分離純化，用不同梯度的洗 脫劑進行梯度洗脫，各梯度洗脫劑分別依次為：體積比為1:4:0. 5:0. 5的石油醚-乙酸 乙酯-甲醇-乙酸、體積比為1:5:0.5:0.5的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-乙酸、體積比為 1:6:0. 5:0. 5的石油醚-乙酸乙酯-甲醇-乙酸、體積比為1:7:0. 5:0. 5的石油醚-乙酸乙 酯-甲醇-乙酸，且每個梯度使用3倍于柱體積的洗脫液進行洗脫，洗脫速率控制在ImL/ min ;分段收集，在第2個梯度洗脫階段得到芒果苷，第3個梯度洗脫階段得到槲皮素。
[0010] 進一步地，所述步驟（2)中的75%乙醇溶液是加入鹽酸調節至pH為5. 1
[0011] 本發明的有益效果在于：提供了利用纖維素酶輔助有機溶劑超聲提取芒果葉中的 芒果苷和懈皮素的方法，填補了現有技術中該技術的空白，而且本發明提取方法易于操作、 成本低，還具有穩定性好、提取率高的特點，能夠適應于工業化生產。 【【附圖說明】】
[0012] 下面參照附圖結合實施例對本發明作進一步的描述。
[0013] 圖1蘆丁標準曲線
[0014] 圖2純化的芒果苷紫外譜圖。
[0015] 圖3純化的槲皮素紫外譜圖。
[0016] 圖4芒果苷標準品紫外譜圖。
[0017] 圖5槲皮素標準品紫外譜圖。
[0018] 圖6酶處理時間對芒果葉黃酮類物質提取率的影響。
[0019] 圖7pH值對芒果葉黃酮類物質提取率的影響。
[0020] 圖8纖維素酶用量對芒果葉黃酮類物質提取率的影響。
[0021] 圖9乙醇濃度對芒果葉黃酮類物質提取率的影響。 【【具體實施方式】】
[0022] 為了對本發明進行詳細的闡述說明，申請人給出了如下幾個實施例。需要說明的 是，本發明各實施例中所采用到的材料與試劑為：芒果葉（采自福建泉州師范學院校園）； 蘆丁（AR南京澤朗醫藥有限公司）；槲皮素（AR南京澤朗醫藥有限公司）；芒果苷（AR南京 澤朗醫藥有限公司）；纖維素酶（BR上海華藍化學科技有限公司）；100-200目柱層析硅膠 粉（國藥集團化學試劑有限公司）；氫氧化鈉、亞硝酸鋁、硝酸鋁、無水乙酸鈉、甲醇、乙酸乙 酯、石油醚、乙酸、95 %乙醇、無水乙醇等均為國產分析純試劑。
[0023] 另外，本發明中涉及到的黃酮類化合物測定所采用的方法如下：
[0024] a、標準曲線制作：用60%乙醇配制0. lmg/L的蘆丁標準溶液，而后分別取0. 0、 0· 5、1· 0、2· 0、3· 0、4· 0、5· OmL標準液于IOmL容量瓶中，加5%亞硝酸鈉0· 3mL，放置6min后 加入10%硝酸鋁0. 3mL，放置6min，再加4%氫氧化鈉2mL，用60%乙醇定容至刻度，搖勻， 放置IOmin后于510nm處測定吸光度，以試劑空白對照。依據測得的結果，制作標準曲線， 見圖1 (橫坐標代表蘆丁標準品的質量濃度，縱坐標代表分光光度法所測得的蘆丁標準品 的吸光度A)，回歸得到蘆丁標準品的吸光度A與蘆丁標準品質量濃度C(mg/mL)關系方程為 A=IL 503C+0. 0040 (R2= 0. 9992) 〇
[0025] b、芒果葉提取液黃酮類化合物含量測定及提取率計算：
[0026] 取0. 3mL芒果葉粗提取液代替蘆丁標準液于IOmL容量瓶中，按照上述步驟a的操 作測定樣品的吸光度值，根據標準曲線方程算出芒果葉提取液黃酮類物質濃度。按下式計 算出黃酮類物質提取率。
[0027] X(%) = CxV2xl° x ]〇〇〇/" L J M x Vi x 1000
[0028] 式中，X為黃酮提取率，C為根據吸光度值從標準曲線方程算出的提取液中黃酮類 物質濃度（mg/mL) ;M為芒果葉樣品質量（g) W1為提取液測定用試樣體積（mL) ;V2為提取 液總體積（mL) ; 10為測定體系體積（mL) ; 1000為g換算為mg。
[0029] 實施例1本發明提取方法的具體操作
[0030] I. 1芒果葉的預處理
[0031] 將鮮芒果葉采摘后洗凈，置于60°C烘箱中烘干，之后進行粉碎，并過50目篩，得干 燥的芒果葉粉末。置于干燥器中備用。
[0032] 1. 2、纖維素酶輔助有機溶劑超聲提取芒果葉黃酮類物質
[0033] 稱取步驟I. 1所得干燥的芒果葉粉末3g，加入60mL pH為5. 1的75%乙醇溶液， 之后再加入6. Omg纖維素酶，接著于55°C條件下浸泡酶解即水浴反應70min，然后在100W 功率下超聲40min，真空抽濾得芒果葉黃酮類物質粗提取液，通過前述黃酮類化合物測定方 法測粗提取液中黃酮含量并算出提取率。
[0034] 1. 3、硅膠柱層析純化芒果葉提取物得芒果苷和槲皮素
[0035] 將步驟1. 2所得芒果葉黃酮類物質粗提液過硅膠層析柱分離純化，具體地：取適 量在IKTC烘箱中活化Ih后的硅膠粉末到燒杯中，與石油醚-乙酸乙酯-甲醇-乙酸（體 積比為1:4:0. 5:0. 5)混合液充分混合，混合時不斷攪拌，排出硅膠中的氣泡；然后采用濕 法裝柱，把硅膠裝到2. 6 X 30cm普通玻璃層析柱中，裝好平衡后上樣，接著向柱子中加入不 同梯度的洗脫劑梯度洗脫，各梯度洗脫劑分別依次為：體積比為1:4:0. 5:0. 5的石油醚-乙 酸乙酯-甲醇-乙酸、體積比為1:5:0. 5:0. 5的石油醚-乙