一種從大葉千斤拔中提取染料木苷的方法
【技術領域】
[0001]本發明涉及天然產物的提取，具體涉及一種從大葉千斤拔中提取染料木苷的方法。
【背景技術】
[0002]染料木苷(Genistin)是一種異黃酮類化合物，在體內代謝具有雌激素樣作用，被稱為植物雌激素類藥物。染料木苷在人體腸道菌群作用下水解成染料木素，通過競爭性地結合雌激素受體而發揮作用，在醫藥行業主要用于治療婦科類疾病。
[0003]在現有技術中，專利文獻CN1876671公開了一種從豆柏中提取的大豆異黃酮提取物及提取方法，所述提取物中含有染料木苷、大豆苷和大豆黃苷，該方法提供的產物為異黃酮苷的混合物，且沒有涉及針對染料木苷的分離方法。目前，亟需開發一種適于規模化生產的提取高純度染料木苷的方法。
【發明內容】
[0004]本發明公開了一種從大葉千斤拔中提取染料木苷的方法；該方法的原料豐富易得，工藝簡單可行，污染少，周期短，所得產品純度高，易于規模化制備。
[0005]本發明提供了一種從大葉千斤拔中提取染料木苷的方法，所述方法包括以下步驟:
[0006](I)將原料大葉千斤拔切碎，用濃度50?70%的乙醇水溶液回流提取1.5?5h，得提取液；
[0007](2)將步驟(I)所得提取液濃縮后上色譜柱，所述色譜柱中的固定相為大孔吸附樹脂；以體積比15?25:85?75的乙醇-水溶液為流動相進行洗脫，收集洗脫液；
[0008](3)將步驟(2)所得洗脫液濃縮至稠狀浸膏，加入含有2?3%冰醋酸的乙醇，充分溶解，靜置，過濾除去不溶物，將濾液重結晶，用乙醇洗滌晶體，真空干燥，即得染料木苷。
[0009]本發明所述步驟(I)中:
[0010]所述乙醇水溶液的濃度為乙醇與水的體積比，該濃度優選為60% ；
[0011]所述步驟(I)中將原料大葉千斤拔切碎優選為將大葉千斤拔切成2_3cm的片段；
[0012]所述提取可以提取一次，加入乙醇水溶液的體積為原料大葉千斤拔重量的7.5?8.5倍，優選為8倍，提取時間優選為1.5?5h，進一步優選為4h ;也可以以相同濃度的乙醇水溶液提取多次后將提取液合并，優選為提取兩次，其中，第一次在原料中加入占原料大葉千斤拔重量7.5?8.5倍體積的乙醇水溶液，優選為8倍體積，回流提取1.5?2.5小時，優選為2小時，過濾，得第一次提取液和濾渣；在濾渣中加入占原料大葉千斤拔重量5.5?6.5倍體積的乙醇水溶液，優選為6倍體積，回流提取1.5?2.5小時，優選為2小時，過濾，得第二次提取液；將兩次提取所得提取液合并；該步驟所述大葉千斤拔重量的單位為kg，乙醇水溶液體積的單位為L。
[0013]本發明所述步驟(2)中:
[0014]步驟(I)所得提取液應被濃縮至與色譜柱規格相匹配的、適于上樣的體積，且應確保所有溶質均處于充分溶解狀態；樣品濃縮后，采用常規方法上色譜柱，應使樣品充分吸附到大孔吸附樹脂上，且不浪費；
[0015]所述固定相使用的大孔吸附樹脂型號優選為D101，所述固定相中粒度0.3-1.25_的樹脂顆粒不少于95%;大孔吸附樹脂被填充于色譜柱中，在使用之前，應采用常規方法進行活化處理；
[0016]所述流動相中，乙醇-水的體積比通過大量實驗進行篩選得到，在15?25:85?75的范圍內可以將目標化合物染料木苷集中洗脫下來；所述乙醇-水的體積比優選為20:80 ；
[0017]所述流動相洗脫將目標化合物充分洗脫下來且不浪費流動相即可，洗脫體積優選為1.5?2倍于色譜柱體積；洗脫速度為以大孔吸附樹脂為固定相進行洗脫的常規速度；
[0018]為了提高洗脫液中染料木苷的純度，在樣品充分吸附到大孔吸附樹脂后、流動相洗脫前，可先用不含乙醇的水進行預洗脫，預洗脫所得產物不作為洗脫液收集；所述預洗脫的體積優選為1.5?2倍色譜柱體積。
[0019]本發明所述步驟(3)中:
[0020]所述溶解稠狀浸膏的溶劑用量以將浸膏充分溶解且不浪費溶劑為宜，優選為3?5倍稠狀浸膏體積，進一步優選為4倍體積；所述溶劑乙醇中冰醋酸的濃度優選為2.5%，所述濃度為冰醋酸與乙醇的體積比；
[0021]所述將濾液重結晶具體為:將濾液在55?65°C下減壓濃縮至原體積的1/2?1/3，優選為在60°C下減壓濃縮至原體積的1/2，自然冷卻后，置于2?4°C下充分析出晶體，優選為4°C下充分析出晶體，過濾除去母液，即得晶體；
[0022]所述真空干燥的條件優選為:55?65°C下真空干燥3?5小時，進一步優選為60°C下真空干燥4小時。
[0023]作為優選方案，本發明所述方法包括以下步驟:
[0024](I)將大葉千斤拔切成長度2-3cm的片段，用濃度50?70%的乙醇水溶液回流提取兩次；第一次在原料中加入占原料大葉千斤拔重量7.5?8.5倍體積的乙醇水溶液，回流提取1.5?2.5小時，過濾，得第一次提取液和濾渣；在濾渣中加入占原料大葉千斤拔重量5.5?6.5倍體積的乙醇水溶液，回流提取1.5?2.5小時，過濾，得第二次提取液；將兩次提取所得提取液合并，即得提取液；
[0025](2)將步驟(I)所得提取液濃縮后上色譜柱，所述色譜柱中的固定相為DlOl大孔吸附樹脂，固定相中粒度為0.3?1.25mm的樹脂顆粒不少于95% ;用1.5?2倍色譜柱體積的水進行預洗脫，棄預洗脫液；再以體積比15?25:85?75的乙醇-水溶液為流動相進行洗脫，洗脫體積為1.5?2倍色譜柱體積，收集洗脫液；
[0026](3)將步驟(2)所得洗脫液濃縮至稠狀浸膏，加入3?5倍于浸膏體積的含有2?3%冰醋酸的乙醇，充分溶解，靜置，過濾除去不溶物；將濾液在55?65°C下減壓濃縮至原體積的1/2?1/3，自然冷卻后，置于2?4°C下充分析出晶體，過濾除去母液；用乙醇洗滌晶體，在55?65°C下真空干燥3?5小時，即得染料木苷。
[0027]作為最優選方案，本發明所述方法包括以下步驟:
[0028](I)將大葉千斤拔切成長度2_3cm的片段，用濃度60%的乙醇水溶液回流提取兩次；第一次在原料中加入占原料大葉千斤拔重量8倍體積的乙醇水溶液，回流提取2小時，過濾，得第一次提取液和濾渣；在濾渣中加入占原料大葉千斤拔重量6倍體積的乙醇水溶液，回流提取2小時，過濾，得第二次提取液；將兩次提取所得提取液合并，即得提取液；
[0029](2)將步驟(I)所得提取液濃縮后上色譜柱，所述色譜柱中的固定相為DlOl大孔吸附樹脂，固定相中粒度為0.3?1.25mm的樹脂顆粒不少于95% ;用2倍色譜柱體積的水進行預洗脫，棄預洗脫液；再以體積比20:80的乙醇-水溶液為流動相進行洗脫，洗脫體積為1.5倍色譜柱體積，收集洗脫液；
[0030](3)將步驟(2)所得洗脫液濃縮至稠狀浸膏，加入4倍于浸膏體積的含有2.5%冰醋酸的乙醇，充分溶解，靜置，過濾除去不溶物；將濾液在60°C下減壓濃縮至原體積的1/2，自然冷卻后，置于4°C下充分析出晶體，過濾除去母液；用乙醇洗滌晶體，在60°C下真空干燥4小時，即得染料木苷。
[0031]本發明提供的方法可以取得顯著的技術效果。本發明提供的方法可以得到高純度染料木苷；無需進行多次分離純化，只需要進行一次大孔吸附樹脂柱色譜即可得到高純度染料木苷，方法操作簡單，重現性好；僅用到水、乙醇及少量冰醋酸，節省試劑，成本低廉，安全環保；非常適宜大規模、工業化生產。
【附圖說明】
[0032]圖1，為實施例1所得產物的1H-NMR譜圖。
[0033]圖2，為實施例1所得產物的13C-NMR譜圖。
【具體實施方式】
[0034]以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。
[0035]本發明各實施例中，固定相為DlOl型大孔吸附樹脂，規格為粒度0.3-1.25mm的大孔吸附樹脂顆粒不少于95%，購自天津市光復精細化工研宄所；色譜柱規格為:150cmX 50cm。
[0036]實施例1
[0037]按以下步驟制備染料木苷:
[0038](I)將20kg大葉千斤拔切成長度2cm的片段，用濃度60%的乙醇水溶液回流提取兩次；第一次在原料中加入乙醇水溶液160L，回流提取2小時，過濾，得第一次提取液和濾渣；在濾渣中加入乙醇水溶液120L，回流提取2小時，過濾，得第二次提取液；將兩次提取所得提取液合并，即得提取液；
[0039](2)將步驟(I)所得提取液濃縮至5L后上色譜柱，所述色譜柱中的固定相為DlOl大孔吸附樹脂，固定相中粒度為0.3?1.25mm的樹脂顆粒不少于95% ;用2倍色譜柱體積的水進行預洗脫，棄預洗脫液；再以體積比20:80的乙醇-水溶液為流動相進行洗脫，洗脫體積為1.5倍色譜柱體積，收集洗脫液；
[0040](3)將步驟(2)所得洗脫液濃縮至稠狀浸膏，加入4倍于浸膏體積的含有2.5%冰醋酸的乙醇，充分溶解，靜置，過濾除去不溶物；將濾液在60°C下減壓濃縮至原體積的1/2，自然冷卻后，置于4°C下充分析出晶體，過濾除去母液；用乙醇洗滌晶體，在60°C下真空干燥4小時，即得固體粉末120g ;經高效液相色譜法檢測，所得染料木苷純度為99.8%。
[0041]所得產物的1H-NMR譜圖見圖1/3C-NMR譜圖見