一種FAPI前體化合物的制備工藝及應用的制作方法

本發明涉及化合物制備領域，具體涉及一種fapi前體化合物的制備工藝及應用。

背景技術：

1、成纖維細胞激活蛋白（fibroblast?activation?protein，fap）為ⅱ型跨膜絲氨酸蛋白酶，屬于脯氨酰寡肽酶家族，高表達于許多上皮性腫瘤相關成纖維細胞中，如肝癌、結直腸癌、胰腺癌和卵巢癌等，還在以間質組織活化為特征的病變，如感染性、炎癥性、纖維化疾病及愈合傷口中呈高表達，而在正常組織、良性腫瘤間質中無表達或表達較低。

2、成纖維細胞活化蛋白抑制劑（fibroblast?activating?protein?inhibitor，fapi）為小分子酶活性抑制劑，對腫瘤相關呈現細胞（cancer-associated?fibroblasts，cafs）膜表面的fap具有高度親和力及特異性，其放射性核素標記物（如68ga標記）在核醫學領域可作為fap示蹤劑用于pet顯像，靈敏度高，有利于fap表達陽性疾病的無創性早期診斷、分期、鑒別診斷和愈后評估。

3、公開號為cn113603678a的專利申請公開了一種靶向成纖維細胞激活蛋白的fap示蹤劑，并公開了該示蹤劑前體化合物nota-fapi02的制備方法（參見其說明書第3頁）:

4、

5、該工藝以化合物1為起始化合物，將化合物1和化合物nota-nhs以及n,n-二異丙基乙胺依次投入至n,n-二甲基甲酰胺中，室溫攪拌反應，用hplc監測至反應結束，將粗產物經反向柱純化，冷凍干燥后得到純化后的化合物nota-fapi02，該工藝所采用的原料化合物1及nota-nhs的商業化購買和應用受到很大限制，不利于后續藥品的商業化擴大生產和成本控制。

技術實現思路

1、針對上述問題，本發明提供一種全新的fapi前體化合物的制備工藝，該工藝以可商業化應用的市售產品為基礎起始原料，經多個多步驟連投路線合成目標化合物，實現了藥品的商業化擴大生產及成本控制；本發明還提供該fapi前體化合物制備工藝在制備fap示蹤劑中的應用。

2、具體的，本發明提供了如式（i）所示的fapi前體化合物的制備工藝:

3、

4、所述的制備工藝包含如下合成路線:

5、

6、其中，所述步驟9包括如下步驟:將化合物a與適量tfa混合反應后，滴加至適量mtbe中，析出固體，打漿，抽濾，得濾餅，經制備液相純化，得純化后的式(i)化合物。

7、進一步的，步驟9中所述化合物a和mtbe的質量體積比約為1:100-180；優選的，步驟9中所述化合物a和mtbe的質量體積比約為1:100、1:110、1:120、1:130、1:140、1:150、1:160、1:170、或者1:180；更優選的，步驟9中所述化合物a和mtbe的質量體積比為1:140。

8、進一步的，步驟9中所述化合物a與tfa的混合反應溫度為30-40℃；優選的，步驟9中化合物a與tfa的混合反應溫度為31-39℃；更優選的，步驟9中化合物a與tfa的混合反應溫度為32-38℃；更優選的，步驟9中化合物a與tfa的混合反應溫度為33-37℃。

9、進一步的，步驟9中所述化合物a和tfa的質量體積比約為1:15-25；優選的，步驟9中所述化合物a和tfa的質量體積比約為1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:21、1:22、1:23、1:24、或者1:25；更優選的，步驟9中所述化合物a和tfa的質量體積比為1:20。

10、進一步的，步驟9還包括如下步驟:將抽濾后收集到的濾餅用適量mtbe淋洗，進一步還包括:淋洗后用適量mtbe將濾餅轉移至單口瓶中，減壓旋蒸（優選的，所述減壓旋蒸溫度為35-45℃），進而得到式(i)化合物粗品；可以理解的是，該步驟中所述“適量”為非限制性量，重點在于進一步控制產品中的tfa含量。

11、在一些具體的實施例中，所述步驟9包括如下步驟:取化合物a與適量tfa混合，控溫反應后，將混合液滴加至適量mtbe中，析出固體，打漿，滴加畢，抽濾得濾餅，將濾餅用適量mtbe淋洗，淋洗后再用適量?mtbe將濾餅轉移至容器中，減壓旋蒸，得式(i)化合物粗品，將所述的式(i)化合物粗品經制備液相純化，得純化后的式(i)化合物，該步驟中配比、溫度、反應/混合時間等相關條件因素如上所述。

12、更進一步的，所述的制備工藝還包含如下合成路線:

13、

14、其中，所述步驟7和步驟8為多步連投反應，即化合物c經由步驟7制備中間體b、再經由步驟8制備化合物a的過程為連續投料過程。

15、進一步的，所述步驟7包括如下步驟:取對甲苯磺酸一水合物與化合物c置于適量乙腈中，控溫反應后，將反應液減壓旋蒸，除去溶劑，得中間體b。

16、進一步的，步驟7中所述化合物c和對甲苯磺酸一水合物的當量比約為1:2-4；優選的，步驟7中所述化合物c和對甲苯磺酸一水合物的當量比約為1:2、1:2.5、1:3、1:3.5、或者1.4；更優選的，步驟7中所述化合物c和對甲苯磺酸一水合物的當量比為1:3。

17、進一步的，所述步驟8包括如下步驟:取nota-bis(tbuester)?與hatu在適量dmf溶液中混合，獲得活性酯溶液；取中間體b與dipea在適量dmf溶液中混合后加入上述活性酯溶液，控溫反應；向反應體系加入適量純化水后，加入適量dcm萃取，收集有機相，減壓旋蒸，經硅膠柱層析純化，得純化后的化合物a。

18、進一步的，步驟7中所述化合物c和乙腈的質量體積比約為1:8-15；優選的，步驟7中所述化合物c和乙腈的質量體積比約為1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、或者1:15；更優選的，步驟7中所述化合物c和乙腈的質量體積比為1:10。

19、進一步的，步驟7中所述控溫反應溫度約為50-80℃；優選的，步驟7中所述控溫反應溫度為60-70℃。

20、進一步的，步驟7中所述減壓旋蒸溫度約為30-50℃；優選的，步驟7中所述減壓旋蒸溫度為35-45℃。

21、進一步的，步驟8中所述nota-bis(tbuester)和hatu的當量比約為1:0.5-2；優選的，步驟8中所述nota-bis(tbuester)和hatu的當量比約為1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、或者1:2；更優選的，步驟8中所述nota-bis(tbuester)和hatu的當量比為1:1.2。

22、進一步的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述nota-bis(tbuester)的當量比約為1:?0.5-2；優選的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述?nota-bis(tbuester)的當量比約為1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、或者1:2；更優選的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述nota-bis(tbuester)的當量比為1:1。

23、進一步的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述dipea的當量比約為1:4-6；優選的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述dipea的當量比約為1:4.1、1:4.2、1:4.3、1:4.4、1:4.5、1:4.6、1:4.7、1:4.8、1:4.9、1:5、1:5.1、1:5.2、1:5.3、1:5.4、1:5.5、1:5.6、1:5.7、1:5.8、1:5.9、或者1:6；更優選的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述dipea的當量比為1:5.2。

24、進一步的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述純化水的質量體積比約為1:10-30；優選的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述純化水的質量體積比約為1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:21、1:22、1:23、1:24、1:25、1:26、1:27、1:28、1:29、或者1:30；更優選的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述純化水的質量體積比為1:20。

25、進一步的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述dcm的質量體積比約為1:?10-30；優選的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述dcm的質量體積比約為1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、1:20、1:21、1:22、1:23、1:24、1:25、1:26、1:27、1:28、1:29、或者1:30；更優選的，步驟7中所述化合物c和步驟8中所述dcm的質量體積比為1:20。

26、進一步的，步驟8中所述控溫反應的溫度約為10-40℃；優選的，步驟8中所述控溫反應的溫度為20-30℃。

27、進一步的，步驟8中所述硅膠柱層析純化的洗脫體系為dcm:meoh=50:1~10:1。

28、進一步的，步驟8還包括如下步驟:將有機相依次用適量純化水和適量飽和氯化鈉溶液洗滌，純化水洗滌時調整體系ph=7-8，洗滌后的有機相經無水硫酸鈉干燥后進行減壓旋蒸，得到化合物a粗品。

29、在一些具體的實施例中，所述步驟8包括如下步驟:取nota-bis(tbuester)與hatu在適量dmf溶液中混合，獲得活性酯溶液；取中間體b與dipea在適量dmf溶液中混合后加入活性酯溶液，20-30℃控溫反應；向反應體系加入適量純化水后，加入適量dcm萃取，收集有機相，將有機相依次用適量純化水和適量飽和氯化鈉溶液洗滌，純化水洗滌時調整體系ph=7-8，洗滌后的有機相經無水硫酸鈉干燥后進行減壓旋蒸，得到化合物a粗品；繼續將化合物a粗品經硅膠柱層析純化，得純化后的化合物a，該步驟中配比、溫度、反應/混合時間等相關條件因素如上所述。

30、更進一步的，所述的制備工藝還包含如下合成路線:

31、

32、其中，所述步驟4、步驟5、步驟6為多步連投反應，即化合物f經由步驟4制備中間體e、再經由步驟5制備中間體d、再經由步驟6制備化合物c的過程為連續投料過程。

33、所述步驟4包括如下步驟:將化合物f用tfa溶解后，控溫反應；冰浴下，將反應液滴加入到mtbe中，析出固體，離心，固體用適量mtbe分散并轉移至合適容器中，減壓濃縮（得中間體e）后直接投下一步反應。

34、所述步驟5包括如下步驟:將步驟4獲得的中間體e用適量dmf溶解后，調整ph至中性，加入dipea，控制體系ph為8-9，再加入二碳酸二叔丁酯，控溫反應，將反應液減壓濃縮（得中間體d）后直接投下一步反應。

35、所述步驟6包括如下步驟:將步驟5獲得的中間體d、(s)-吡咯烷-2-甲腈對甲苯磺酸鹽、dipea溶解于適量dmf中，加入hatu，控溫反應；向反應液中加入適量dcm，分別用純化水、碳酸氫鈉水溶液洗滌，取有機相減壓濃縮干，再用適量四氫呋喃和dmf混合溶液溶解，最后滴加到mtbe中析出固體，過濾并真空干燥，得化合物c。

36、進一步的，步驟4中所述化合物f和tfa的質量體積比約為1:3-7；優選的，步驟4中所述化合物f和tfa的質量體積比約為1:3、1:4、1:5、1:6、或者1:7；更優選的，步驟4中所述化合物f和tfa的質量體積比為1:5。

37、進一步的，步驟4中所述化合物f和mtbe的質量體積比約為1:40-60；優選的，步驟4中所述化合物f和mtbe的質量體積比約為1:40、1:41、1:42、1:43、1:44、1:45、1:46、1:47、1:48、1:49、1:50、1:51、1:52、1:53、1:54、1:55、1:56、1:57、1:58、1:59、或者1:60；更優選的，步驟4中所述化合物f和mtbe的質量體積比為1:50。

38、進一步的，步驟4中所述控溫反應溫度約為20-50℃；優選的，步驟4中所述控溫反應溫度為30-40℃。

39、進一步的，步驟4中所述化合物f和步驟5中所述dipea的當量比約為1:4-8；優選的，步驟4中所述化合物f和步驟5中所述dipea的當量比約為1:4、1:5、1:6、1:7、或者1:8；更優選的，步驟4中所述化合物f和步驟5中所述dipea的當量比為1:6。

40、進一步的，步驟4中所述化合物f和步驟5中所述二碳酸二叔丁酯的當量比約為1:1-1.1；優選的，步驟4中所述化合物f和步驟5中所述二碳酸二叔丁酯的當量比約為1:1、1:1.01、1:1.02、1:1.03、1:1.04、1:1.05、1:1.06、1:1.07、1:1.08、1:1.09、或者1:1.1；更優選的，步驟4中所述化合物f和步驟5中所述二碳酸二叔丁酯的當量比為1:1.04。

41、進一步的，步驟5中所述“調整ph至中性”可以用dipea進行ph調整。

42、進一步的，步驟5中所述控溫反應溫度約為20-40℃；優選的，步驟5中所述控溫反應溫度約為25-35℃（如25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、或者35℃）；更優選的，步驟5中所述控溫反應溫度為30℃。

43、進一步的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述(s)-吡咯烷-2-甲腈對甲苯磺酸鹽的當量比約為1:0.5-2；優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述(s)-吡咯烷-2-甲腈對甲苯磺酸鹽的當量比約為1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、或者1:2；更優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述(s)-吡咯烷-2-甲腈對甲苯磺酸鹽的當量比為1:1。

44、進一步的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述dipea的當量比約為1:1-3；優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述dipea的當量比約為1:1、1:2或者1:3；更優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述dipea的當量比為1:2。

45、進一步的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述hatu的當量比約為1:0.5-2；優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述hatu的當量比約為1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、或者1:2；更優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述hatu的當量比為1:1。

46、進一步的，步驟6中所述控溫反應的溫度為20-40℃；優選的，步驟6中所述控溫反應的溫度約為25-35℃（如25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃、32℃、33℃、34℃、或者35℃）；更優選的，步驟6中所述控溫反應的溫度為30℃。

47、進一步的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述dcm的質量體積比約為1:5-15；優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述dcm的質量體積比約為1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、或者1:15；更優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述dcm的質量體積比為1:10。

48、進一步的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述mtbe的質量體積比約為1:30-50；優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述mtbe的質量體積比約為1:30、1:31、1:32、1:33、1:34、1:35、1:36、1:37、1:38、1:39、1:40、1:41、1:42、1:43、1:44、1:45、1:46、1:47、1:48、1:49、或者1:50；更優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述mtbe的質量體積比為1:40。

49、進一步的，步驟6中所述dcm、純化水體積比約為1:0.5-1.5；優選的，步驟6中所述dcm、純化水體積比約為1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、或者1:1.5；更優選的，步驟6中所述dcm、純化水體積比為1:1。

50、進一步的，步驟6中所述碳酸氫鈉水溶液的濃度約為0.5%-2%；步驟6中所述碳酸氫鈉水溶液的濃度約為0.5%、0.6%、0.7%、0.8%、0.9%、1%、1.1%、1.2%、1.3%、1.4%、1.5%、1.6%、1.7%、1.8%、1.9%、或者2%；步驟6中所述碳酸氫鈉水溶液的濃度為1%。

51、進一步的，步驟6中所述dcm、碳酸氫鈉水溶液體積比約為1:0.5-1.5；優選的，步驟6中所述dcm、碳酸氫鈉水溶液體積比約為1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、或者1:1.5；更優選的，步驟6中所述dcm、碳酸氫鈉水溶液體積比為1:1。

52、進一步的，步驟6中所述四氫呋喃和dmf混合溶液的體積比約為v四氫呋喃:vdmf=4-7:1；優選的，步驟6中所述四氫呋喃和dmf混合溶液的體積比約為v四氫呋喃:vdmf=4:1、5:1、6:1、或者7:1；更優選的，步驟6中所述四氫呋喃和dmf混合溶液的體積比為v四氫呋喃:vdmf=?5:1。

53、進一步的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述四氫呋喃和dmf混合溶液的質量體積比約為3-7ml/g；優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述四氫呋喃和dmf混合溶液的質量體積比約為3ml/g、4?ml/g、5?ml/g、6?ml/g、或者7?ml/g；更優選的，步驟4中所述化合物f和步驟6中所述四氫呋喃和dmf混合溶液的質量體積比為5?ml/g。

54、更進一步的，所述的制備工藝還包含如下合成路線:

55、

56、其中，所述步驟2、步驟3為多步連投反應，即化合物h經由步驟2制備中間體g、再經由步驟3制備化合物f的過程為連續投料過程。

57、所述步驟2包括如下步驟:將化合物h（即n-[(6-羥基-4-喹啉)羰基]甘氨酸叔丁酯）、碘化鉀、無水碳酸鉀、1-溴-3-氯-丙烷在適量dmf溶液中控溫反應；降溫至室溫后過濾，收集濾液，減壓濃縮除去部分dmf后，加入dcm溶解，再用純化水洗滌；將有機層減壓濃縮干，得中間體g。

58、所述步驟3包括如下步驟:將步驟2獲得的中間體g、無水碳酸鉀、碘化鉀、1-boc-哌嗪在dmf溶液中控溫反應；降溫至室溫后過濾，收集濾液，加入dcm后用純化水洗滌，有機相減壓濃縮干，再用適量mtbe打漿，過濾；濾餅用無水乙醇重結晶，得化合物f。

59、進一步的，步驟2中所述化合物h和碘化鉀的當量比約為1:0.1-0.5；優選的，步驟2中所述化合物h和碘化鉀的當量比約為1:0.1、1:0.2、1:0.3、1:0.4、或者1:0.5；更優選的，步驟2中所述化合物h和碘化鉀的當量比為1:0.2。

60、進一步的，步驟2中所述化合物h和無水碳酸鉀的當量比約為1:4-8；優選的，步驟2中所述化合物h和無水碳酸鉀的當量比約為1:4、1:5、1:6、1:7、或者1:8；更優選的，步驟2中所述化合物h和無水碳酸鉀的當量比為1:6。

61、進一步的，步驟2中所述化合物h和1-溴-3-氯-丙烷的當量比約為1:2-6；優選的，步驟2中所述化合物h和1-溴-3-氯-丙烷的當量比約為1:2、1:3、1:4、1:5、或者1:6；更優選的，步驟2中所述化合物h和1-溴-3-氯-丙烷的當量比為1:4。

62、進一步的，步驟2中所述控溫反應溫度約為50-70℃；優選的，步驟2中所述控溫反應溫度約為50℃、51℃、52℃、53℃、54℃、55℃、56℃、57℃、58℃、59℃、60℃、61℃、62℃、63℃、64℃、65℃、66℃、67℃、68℃、69℃、或者70℃；更優選的，步驟2中所述控溫反應溫度為60℃。

63、進一步的，步驟2中所述“減壓濃縮除去部分dmf”通常情況下是指可通過減壓濃縮的方式去除部分dmf，使得溶液整體體積變小，便于后續處理；優選的，步驟2中所述“減壓濃縮除去部分dmf”通常情況下是指可通過減壓濃縮的方式去除約1/2體積、約1/3體積、約2/3體積、約1/4體積、約3/4體積、約1/5體積、約2/5體積、約3/5體積、約4/5體積或者其它比例體積的dmf；更優選的，步驟2中所述“減壓濃縮除去部分dmf”通常情況下是指可通過減壓濃縮的方式去除1/2體積的dmf。

64、進一步的，步驟2中所述化合物h和dcm的質量體積比約為1:5-15；優選的，步驟2中所述化合物h和dcm的質量體積比約為1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15；更優選的，步驟2中所述化合物h和dcm的質量體積比為1:10。

65、進一步的，步驟2中所述dcm和純化水的體積比約為vdcm:v純化水=1:0.5-1.5；優選的，步驟2中所述dcm和純化水的體積比約為vdcm:v純化水=1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、或者1:1.5；更優選的，步驟2中所述dcm和純化水的體積比為vdcm:v純化水=1:1。

66、進一步的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述無水碳酸鉀的當量比約為1:0.5-1；優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述無水碳酸鉀的當量比約為1:0.50、1:0.55、1:0.60、1:0.65、1:0.70、1:0.75、1:0.80、1:0.85、1:0.90、1:0.95、或者1:1；更優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述無水碳酸鉀的當量比為1:0.75。

67、進一步的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述碘化鉀的當量比約為1:1-2；優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述碘化鉀的當量比約為1:1、1:1.1、1:1.2、1:?1.3、1:1.4、1:?1.5、1:?1.6、1:?1.7、1:?1.8、1:?1.9、或者1:2；更優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述碘化鉀的當量比為1:1.1。

68、進一步的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述1-boc-哌嗪的當量比約為1:0.8-1.5；優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述1-boc-哌嗪的當量比約為1:0.8、1:0.85、1:0.9、1:0.95、1:1、1:1.05、1:1.1、1:1.15、1:1.2、1:1.25、1:1.3、1:1.35、1:1.4、1:1.45、或者1:1.5；更優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述1-boc-哌嗪的當量比為1:1.05。

69、進一步的，步驟3中所述控溫反應溫度約為80-100℃；優選的，步驟3中所述控溫反應溫度約為80℃、81℃、82℃、83℃、84℃、85℃、86℃、87℃、88℃、89℃、90℃、91℃、92℃、93℃、94℃、95℃、96℃、97℃、98℃、99℃、或者100℃；更優選的，步驟3中所述控溫反應溫度為90℃。

70、進一步的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述dcm的質量體積約為1:1-10；優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述dcm的質量體積約為1:1、1:2、1:3、1:4、1:5、1:6、1:7、1:8、1:9、或者1:10；更優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述dcm的質量體積為1:5。

71、進一步的，步驟3中所述dcm和純化水的體積比約為vdcm:v純化水=1:0.5-1.5；優選的，步驟3中所述dcm和純化水的體積比約為vdcm:v純化水=1:0.5、1:0.6、1:0.7、1:0.8、1:0.9、1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、或者1:1.5；更優選的，步驟3中所述dcm和純化水的體積比為vdcm:v純化水=1:1。

72、進一步的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述mtbe的質量體積比約為5-15ml/g；優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述mtbe的質量體積比約為5ml/g、6?ml/g、7?ml/g、8?ml/g、9?ml/g、10?ml/g、11?ml/g、12?ml/g、13?ml/g、14?ml/g、或者15?ml/g；更優選的，步驟2中所述化合物h和步驟3中所述mtbe的質量體積比為10?ml/g。

73、更進一步的，所述的制備工藝還包含如下合成路線:

74、

75、其中，所述步驟1包括如下步驟:將6-羥基-4-羧酸喹啉、甘氨酸叔丁酯、dipea、hatu在適量dmf溶液中控溫反應后，向反應液中加入純化水，析出固體，過濾并收集固體，真空干燥得化合物h。

76、進一步的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和甘氨酸叔丁酯的當量比約為1:1-2；優選的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和甘氨酸叔丁酯的當量比約為1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、1:1.5、1:1.6、1:1.7、1:1.8、1:1.9、或者1:2；更優選的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和甘氨酸叔丁酯的當量比為1:1.5。

77、進一步的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和dipea的當量比約為1:2-3；優選的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和dipea的當量比約為1:2、1:2.1、1:2.2、1:2.3、1:2.4、1:2.5、1:2.6、1:2.7、1:2.8、1:2.9、或者1:3；更優選的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和dipea的當量比為1:2.4。

78、進一步的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和hatu的當量比約為1:1-1.5；優選的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和hatu的當量比約為1:1、1:1.1、1:1.2、1:1.3、1:1.4、或者1:1.5；更優選的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和hatu的當量比為1:1.2。

79、進一步的，步驟1中所述控溫反應溫度為20-30℃；優選的，步驟1中所述控溫反應溫度為20℃、21℃、22℃、23℃、24℃、25℃、26℃、27℃、28℃、29℃、或者30℃；更優選的，步驟1中所述控溫反應溫度為25℃。

80、進一步的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和純化水的質量體積比約為1:10-20；優選的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和純化水的質量體積比約為1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:16、1:17、1:18、1:19、或者1:20；更優選的，步驟1中所述6-羥基-4-羧酸喹啉和純化水的質量體積比為1:15。

81、在另一些具體的實施例中，所述式（i）所示的fapi前體化合物的合成路線包含前述任一項所述的步驟7、步驟8和步驟9，如下:

82、

83、上述合成路線中步驟7、步驟8和步驟9涉及的反應步驟（包括但不限于方法、物料、配比、條件等）與前述任一項描述一致。

84、在另一些具體的實施例中，所述式（i）所示的fapi前體化合物的合成路線包含前述任一項所述的步驟4、步驟5、步驟6、步驟7、步驟8和步驟9，如下:

85、

86、上述合成路線中步驟4、步驟5、步驟6、步驟7、步驟8和步驟9涉及的反應步驟（包括但不限于方法、物料、配比、條件等）與前述任一項描述一致。

87、在另一些具體的實施例中，所述式（i）所示的fapi前體化合物的合成路線包含前述任一項所述的步驟2、步驟3、步驟4、步驟5、步驟6、步驟7、步驟8和步驟9，如下:

88、

89、上述合成路線中步驟2、步驟3、步驟4、步驟5、步驟6、步驟7、步驟8和步驟9涉及的反應步驟（包括但不限于方法、物料、配比、條件等）與前述任一項描述一致。

90、在另一些具體的實施例中，所述式（i）所示的fapi前體化合物的合成路線包含前述任一項所述的步驟1、步驟2、步驟3、步驟4、步驟5、步驟6、步驟7、步驟8和步驟9，如下:

91、

92、上述合成路線中步驟1、步驟2、步驟3、步驟4、步驟5、步驟6、步驟7、步驟8和步驟9涉及的反應步驟（包括但不限于方法、物料、配比、條件等）與前述任一項描述一致。

93、本發明還提供了上述任一項所述的制備工藝、制備路線和步驟在制備如式（i）所示的fapi前體化合物中的應用:

94、?。

95、本發明還提供了上述任一項所述的制備工藝、制備路線和步驟在制備一種靶向成纖維細胞激活蛋白的fap示蹤劑前體化合物中的應用，其中所述的fap示蹤劑前體化合物結構如式（i）所示:

96、?。

97、本發明還提供了上述任一項所述的制備工藝、制備路線和步驟在制備一種靶向成纖維細胞激活蛋白的fap示蹤劑中的應用，其中所述的fap示蹤劑是由如式（i）所示前體化合物經由放射性核素標記獲得:

98、?。

99、本發明提供的fapi前體化合物的制備工藝采用批量市售的化合物為起始原料，可實現藥品的商業化擴大生產以及藥品成本控制，更好滿足臨床用藥需求。此外，本發明所提供的制備工藝采用最基礎的起始化合物進行全流程合成，可有效控制產品的雜質類型，保障產品制備過程雜質可知可控，提高了產品的最終質量，進一步保障了藥物的臨床安全性和穩定性，適用于臨床大規模供應。另外，本發明提供的制備工藝采用多個多步驟連投路線，在保證終產物高純度的前提下，減少了中間產物的繁瑣處理過程，不僅降低了制備過程中對于設備、場地的需求，更減少了中間溶劑的使用和回收，在控制生產成本的同時，降低了環境污染風險。