雙特異性抗體組合物及其使用方法與流程

本公開總體上涉及癌癥免疫治療的，并且更具體地涉及用于癌癥治療的鈣粘蛋白-17(cdh17)特異性抗體和細(xì)胞毒性細(xì)胞。

背景技術(shù)：

1、除非本文另外指出，否則本部分中描述的材料不是本技術(shù)中的權(quán)利要求的現(xiàn)有技術(shù)，并且不通過包括在本部分中而被認(rèn)為是現(xiàn)有技術(shù)。

2、盡管最近在藥物發(fā)現(xiàn)和臨床成像方面取得了進(jìn)展，癌癥仍然是人類最致命的疾病之一。我們對腫瘤如何產(chǎn)生，如何在應(yīng)激下生存，如何向遠(yuǎn)處的器官和部位移植或轉(zhuǎn)移，以及如何對藥物產(chǎn)生抗藥性的理解仍然是有限的。美國癌癥協(xié)會(american?cancersociety)估計，2014年美國新增癌癥病例為160萬例，大多數(shù)主要癌癥類型都沒有經(jīng)過批準(zhǔn)的治療方法。

3、胃腸(gi)癌(結(jié)腸直腸癌、胃癌、胰腺癌、食管癌、膽管癌和肝癌)是世界范圍內(nèi)發(fā)病率和死亡率的主要原因。單獨的結(jié)直腸癌(crc)約占所有癌癥診斷的10％，是世界范圍內(nèi)癌癥死亡的第二個主要原因。肝癌和胃癌是世界范圍內(nèi)最致命的惡性腫瘤之一，超過一半的確診病例導(dǎo)致全球每年超過142萬人死亡，被認(rèn)為是由于病毒/細(xì)菌流行(乙型肝炎病毒[hbv]和幽門螺桿菌感染)、化學(xué)中毒、環(huán)境污染和食品污染。沒有有效的治療方法。因此，需要用于對于這些進(jìn)展期癌癥的潛在藥物開發(fā)的新的生物標(biāo)志物和治療靶標(biāo)。已證實的能夠消除或抑制這些癌癥生長的分子靶向劑將具有重要的臨床價值和顯著的市場影響。如果早期確診疾病，通過手術(shù)可有效切除腫瘤。不幸的是，通常情況下，在臨床出現(xiàn)的大多數(shù)gi癌癥是無癥狀的并且在晚期才檢測到。在沒有有效治療的情況下，這些患者在診斷后不久便死亡或在挽救療法后復(fù)發(fā)。

4、cdh17是一種顯著的癌癥生物標(biāo)志物，其特征在于其在肝癌和胃癌中均過表達(dá)，但在健康成年人的正常組織中卻不表達(dá)。抗cdh17單克隆抗體對肝、胃腫瘤細(xì)胞有生長抑制作用。cdh17在轉(zhuǎn)移癌中高表達(dá)，阻斷cdh17的表達(dá)和功能可顯著降低肝細(xì)胞癌(hcc)的肺轉(zhuǎn)移。這些觀察結(jié)果表明，人源化抗cdh17抗體可開發(fā)為抗體治療劑用于治療癌癥患者，該癌癥患者在腫瘤組織和/或血清樣本中具有cdh17生物標(biāo)志物的指征。

5、與以單克隆抗體與癌細(xì)胞結(jié)合為特征的抗體治療劑相反，多特異性抗體治療劑可與t細(xì)胞結(jié)合并介導(dǎo)對癌細(xì)胞的細(xì)胞毒性。雙特異性抗體對于治療血液惡性腫瘤是有效的，但是靶向?qū)嶓w腫瘤的治療效果有限。可能的障礙可能是活化的細(xì)胞毒性免疫細(xì)胞缺乏合適的生物標(biāo)志物并且實體瘤細(xì)胞不易接近。

技術(shù)實現(xiàn)思路

1、本公開提供靶向cdh17的多特異性抗體和細(xì)胞毒性細(xì)胞的組合物，以及用本文公開的組合物和抗體(或其片段)治療癌癥的方法。

2、在一個方面，本公開涉及靶向胃腸特異性生物標(biāo)志物和cd3兩者的多特異性抗體的組合物。在一些實施方案中，抗體是cdh17xcd3雙特異性抗體。這些抗體可活化t細(xì)胞并安全靶向cdh17陽性細(xì)胞。在一個實施方案中，cdh17xcd3雙特異性抗體可在臨床上用于治療患有cdh17陽性癌癥的患者。

3、在一個實施方案中，本公開提供對cdh17具有特異性的抗體，包括與選自seq?idno：15-33的氨基酸序列具有至少70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的重鏈或輕鏈氨基酸序列。

4、在一些實施方案中，抗體是單克隆抗體。在一個實施方案中，單克隆抗體可以是小鼠抗體、人源化抗體或人抗體。在一些實施方案中，單克隆抗體可以是從噬菌體文庫篩選中分離的人抗體。

5、在一些實施方案中，抗體可以包括輕鏈可變結(jié)構(gòu)域(vl)、重鏈可變結(jié)構(gòu)域(vh)或其組合。在一個實施方案中，vl可包括與選自seq?id?no：2、4、6、8、10和12的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的氨基酸序列。在一些實施方案中，vh可包括與選自seq?id?no：1、3、5、7、9和11的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的氨基酸序列。

6、在一些實施方案中，抗體可以包括綴合的細(xì)胞毒性部分。在一些實施方案中，綴合的細(xì)胞毒性部分可包括伊立替康(irinotecan)、奧利斯他汀(auri?stat?ins)、pbd、美登素(maytansine)、鵝膏蕈堿(amant?ins)、剪接體抑制劑或其組合。在一些實施方案中，綴合的細(xì)胞毒性部分可以包括化療劑。

7、在一些實施方案中，抗體是雙特異性抗體。

8、在一些實施方案中，抗體可包括對來自細(xì)胞毒性t細(xì)胞或nk細(xì)胞的細(xì)胞受體的特異性。在一些實施方案中，抗體是對cdh17和cd3都具有特異性的雙特異性抗體。在一些實施方案中，細(xì)胞受體可包括kir2d52、kir2d53、kir2d54、kir2d55、kir3d51、cd16a、cd27、cd94、cd96、cd100、cd160、cd244、nkp30、nkp44、nkp46、nkp80、nkg2d、dnam1、crtam、psgl1、ceacam1、ntb-a、slamf7、ox40、cd137、icos、cd28、tim1和tim3，或其衍生物或其組合。

9、在一些實施方案中，抗體可包括對cdh17具有特異性的第一單鏈可變片段(scfv)和對cd3或trop2具有特異性的第二單鏈可變片段(scfv)。在一個實施方案中，第一scfv可包括第一vh(可變重鏈)和第一vl(可變輕鏈)。在一個實施方案中，第二scfv可以包括第二vh和第二vl。在一些實施方案中，第一vh可包括與選自seq?id?no：1、3、5、7的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的氨基酸序列。在一些實施方案中，第一vl可包括與選自seq?id?no：2、4、6、8的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的氨基酸序列。

10、在一些實施方案中，第二vh可包括與氨基酸seq?id?no：9、11、13具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的氨基酸序列的相應(yīng)部分。

11、在一些實施方案中，第二vl可以包括與氨基酸seq?id?no：10、12、14具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的氨基酸序列的相應(yīng)部分。

12、在一些實施方案中，抗體可以具有對免疫檢查點抑制劑的特異性。在一些實施方案中，檢查點抑制劑可以包括pd-1、pd-l1、ctl-a4、tim3、lag3、btla、cd96、tigit、cd226或vista，或其組合。

13、在一些實施方案中，抗體可對血管生成因子具有特異性。在一些實施方案中，血管生成因子可以包括vegf。

14、在一些實施方案中，抗體可以配置為拮抗cdh17結(jié)構(gòu)域6中的rgd位點與整合素的結(jié)合。在一些實施方案中，整合素可以包括α2β1。

15、在一些實施方案中，抗體可以配置為結(jié)合cdh17胞外域結(jié)構(gòu)域5、結(jié)構(gòu)域6或結(jié)構(gòu)域7以拮抗cdh17脫落。

16、在一些實施方案中，抗體是單克隆抗體。

17、一些實施方案涉及抗體的igg重鏈。在一個實施方案中，抗體可以具有igg，該igg具有與seq?id?no：15、16、17、20、21、22、24、25.26、28、29、30、31、32、33具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的鏈。

18、一些實施方案涉及抗體的輕鏈。在一個實施方案中，抗體可以具有輕鏈，該輕鏈具有與seq?id?no：18、19、23、27具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其他數(shù)字)的同源性的氨基酸序列。

19、一些實施方案涉及抗體的可變結(jié)構(gòu)域。在一個實施方案中，可變結(jié)構(gòu)域可以具有與seq?id?no：1-14具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)同源性的氨基酸。

20、一些實施方案涉及對cdh17具有特異性的scfv或fab。在一些實施方案中，抗體包括與選自seq?id?no：34、35、36、37、38、39、40的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其它數(shù)字)的同源性的氨基酸序列。

21、在一些實施方案中，scfv或fab可包括對來自細(xì)胞毒性t細(xì)胞或nk細(xì)胞的細(xì)胞受體的特異性。在一些實施方案中，scfv或fab可以包括對免疫檢查點抑制劑的特異性。在一些實施方案中，scfv或fab可包括對血管生成因子的特異性。

22、一些實施方案涉及對cdh17具有特異性的t或nk細(xì)胞。在一個實施方案中，t或nk細(xì)胞可以包括嵌合抗原受體。在一個實施方案中，嵌合抗原受體可以包括與選自seq?id?no：41、42、43、44、45的氨基酸序列具有至少70％、80％、85％、90％、95％、98％、99％或100％(或其間的任何其他數(shù)字)的同源性的氨基酸序列。

23、一些實施方案涉及編碼本文所述的抗體、igg重鏈、輕鏈、可變鏈或scfv或fab的分離的核酸。

24、一些實施方案涉及包括本文公開的分離的核酸的表達(dá)載體(vector)。在一些實施方案中，載體(vector)可在細(xì)胞中表達(dá)。

25、一些實施方案涉及包括如本文所述的核酸的宿主細(xì)胞。一些實施方案涉及包括如本文所述的表達(dá)載體(vector)的宿主細(xì)胞。在一些實施方案中，宿主細(xì)胞是原核細(xì)胞或真核細(xì)胞。

26、在一個方面，本技術(shù)提供用于治療癌癥的藥物組合物。在一個實施方案中，藥物組合物包括抗體和細(xì)胞毒類藥物。

27、在一些實施方案中，細(xì)胞毒類藥物可包括順鉑、吉西他濱、伊立替康或抗腫瘤抗體。

28、在一些實施方案中，藥物組合物可包括如本文所述的抗體和藥學(xué)上可接受的載體(carrier)。

29、在另一方面，本技術(shù)提供用于治療患有癌癥的受試對象的方法。在一個實施方案中，方法包括向受試對象施用有效量的抗體或t細(xì)胞或nk細(xì)胞。在一些實施方案中，有效量可以是將治療癌癥、減輕癥狀、改變生物標(biāo)記以幫助治療癌癥的量，或其組合。受試對象可以是人或動物。

30、在一些實施方案中，癌癥可以是肝癌、胃癌、結(jié)腸癌、胰腺癌、肺癌或其組合。

31、本公開的目的和優(yōu)點可以從以下結(jié)合附圖對其實施方案的詳細(xì)描述中變得清楚。