新真菌菌株蟬花CH2347、蟬花菌發(fā)酵物及其制備方法、化妝品、蟬花菌菌絲體提取物及純化多糖

本公開屬于生物發(fā)酵，具體涉及新真菌菌株蟬花ch2347、蟬花菌發(fā)酵物及其制備方法、化妝品、蟬花菌菌絲體提取物及純化多糖。

背景技術：

1、蟬花(cordyceps?cicadae)是一種蟲草真菌，屬于麥角菌科(clavicepitaceae)蟲草屬(cordyceps)，寄生于蟬若蟲可形成蟬花，含有核苷、多糖、蛋白、透明質(zhì)酸、蟲草酸等多種活性成分，具備抗腫瘤、抗炎鎮(zhèn)痛、改善腎功能、降血糖、降血壓等多種藥理作用。

2、但是，關于蟬花提取物應用于化妝品方面的報道較少。發(fā)明人采集篩選出一種新真菌菌株蟬花ch2347，經(jīng)過大量研究發(fā)現(xiàn)將蟬花與土豆乳糖培養(yǎng)基發(fā)酵所得發(fā)酵物具有優(yōu)良的皮膚抗炎修復作用，可作為功效成分用于化妝品。

技術實現(xiàn)思路

1、在下文中給出了關于本公開的簡要概述，以便提供關于本公開的某些方面的基本理解。應當理解，這個概述并不是關于本公開的窮舉性概述。它并不意圖確定本公開的關鍵或重要部分，也不意圖限定本公開的范圍。其目的僅僅是以簡化的形式給出某些概念，以此作為稍后論述的更詳細描述的前序。

2、為解決上述技術問題，本公開提供的技術方案是：

3、第一方面，本發(fā)明提供一種新真菌菌株，為蟬花(cordyceps?cicadae)ch2347，保藏編號為cgmcc?no.40399。本發(fā)明的新真菌菌株蟬花ch2347由本技術人從重慶市武隆區(qū)雙河鄉(xiāng)(東經(jīng)107°14'～108°05'，北緯29°02'～29°40')采集野生蟬花。挑取子座芽，加入到45ml無菌生理鹽水中，振蕩30min。梯度稀釋，從各稀釋液中吸取0.1ml到篩選平板并涂布，置于25℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)3～5d。挑選單個典型的菌落培養(yǎng)獲得。

4、第二方面，本公開提供一種蟬花菌發(fā)酵物的制備方法，包括：

5、步驟一，將蟬花ch2347經(jīng)活化、純化、擴大培養(yǎng)處理所得種子液；

6、步驟二，將所述種子液接種至發(fā)酵底物進行發(fā)酵培養(yǎng)處理；所述發(fā)酵底物為新鮮土豆與水經(jīng)勻漿機勻漿溶解而成，其中土豆添加量為1-5wt％(比如1.2wt％、1.5wt％、2.0wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％等)；

7、步驟三，對步驟二所得發(fā)酵產(chǎn)物進行滅菌處理、分離處理、得到蟬花菌發(fā)酵物，包括上清液和菌絲體。

8、進一步地，上述蟬花菌發(fā)酵物的制備方法中，所述發(fā)酵底物中還包括添加劑，所述添加劑選自蔗糖、乳糖、葡萄糖中的至少一種，添加量為0.1～5％(比如0.5wt％、1.0wt％、1.5wt％、2.0wt％、2.5wt％、3wt％、3.5wt％、4wt％、4.5wt％等)；優(yōu)選地，所述發(fā)酵底物中土豆添加量為2wt％，乳糖添加量為2wt％；優(yōu)選地，所述發(fā)酵底物中土豆添加量為2wt％，蔗糖添加量為2wt％。

9、所述發(fā)酵底物在接種前需經(jīng)常規(guī)滅菌處理，比如在121℃下高溫滅菌15min～20min(比如16min、17min、18r/min、19r/min等)。

10、進一步地，上述蟬花菌發(fā)酵物的制備方法中，所述種子液中菌絲體積百分比為80％以上(比如82％、85％、88％、90％等)；所述種子液的接種比例，即所述種子液與發(fā)酵底物為(體積質(zhì)量比ml/g)1％-15％(比如1.5％、2％、3％、4％、4.5％、5％、5.5％、6％、6.5％、7％、7.5％、8％、9％、10％、12％等)；優(yōu)選為3-10％。

11、進一步地，上述蟬花菌發(fā)酵物的制備方法中，所述發(fā)酵培養(yǎng)處理的溫度為25-32℃(比如26℃、27℃、28℃、29℃、30℃、31℃等)，時間為3-7天(d)(比如3.5d、4d、4.5d、5d、5.5d、6d、6.5d等)；優(yōu)選地，所述發(fā)酵培養(yǎng)處理的溫度為28℃，時間為6天。

12、更進一步地，所述發(fā)酵培養(yǎng)處理在搖床中進行，搖床中轉(zhuǎn)速為150r/min-280r/min(比如160r/min、180r/min、200r/min、220r/min、240r/min、260r/min等)；優(yōu)選為250r/min。

13、進一步地，上述蟬花菌發(fā)酵物的制備方法中，步驟二中在進行第一次發(fā)酵培養(yǎng)處理之后，再經(jīng)勻漿、滅菌處理后，第二次接種所述種子液，進行第二次發(fā)酵培養(yǎng)處理；優(yōu)選地，第一次發(fā)酵培養(yǎng)處理中的所述發(fā)酵底物中土豆添加量為2wt％，蔗糖添加量為2wt％，第一次、第二次發(fā)酵培養(yǎng)處理中接種量為6-7％，溫度為28℃，時間為3天，搖床中轉(zhuǎn)速為180r/min。

14、第二方面，本公開提供一種由上述制備方法制得的蟬花菌發(fā)酵物。上述蟬花菌發(fā)酵物包括蟬花菌發(fā)酵液及其干粉，蟬花菌菌絲體及其干粉；干粉可以采用冷凍干燥法或噴霧干燥法制得。

15、第三方面，本公開還提供一種含有上述蟬花菌發(fā)酵物的化妝品，所述化妝品為所述蟬花菌發(fā)酵液中添加1％的防腐劑配制而成。優(yōu)選地，所述防腐劑為質(zhì)量比1：1的馨鮮酮和己二醇。

16、第四方面，本公開提供一種蟬花菌菌絲體提取物，是從蟬花ch2347接種至發(fā)酵底物進行發(fā)酵培養(yǎng)所得的菌絲體中提取所得；所述發(fā)酵底物為新鮮土豆與水經(jīng)勻漿機勻漿溶解而成，其中土豆添加量為2wt％，乳糖添加量為2wt％；所述提取方法選自如下任一種：(1)將所述菌絲體(濕物質(zhì))先熱水浸提處理，然后進行醇沉處理，離心取沉淀凍干，得到粗多糖；(2)將所述菌絲體(濕物質(zhì))用胰蛋白酶或胃蛋白酶進行酶解處理，離心，凍干，得到多肽類提取物；(3)將所述菌絲體的凍干粉，在90℃溫度下無水乙醇回流2h進行提取，離心，凍干，得到醇提物。

17、上述蟬花菌菌絲體提取物中，作為一種優(yōu)選實施方式，所述提取方法為第(1)種，其中，所述熱水浸提處理溫度為90℃、時間為4h，所述醇沉處理使用無水乙醇，料液比為1:10。

18、第五方面，本公開提供一種純化蟬花菌多糖，通過對上述粗多糖依次經(jīng)sevage法除蛋白處理，ab-8大孔吸附樹脂除雜處理，deae-52纖維素柱層析純化處理而制得。

19、優(yōu)選地，所述sevage法除蛋白處理中，重復sevage法除蛋白處理1-5次，然后再采用酒精沉淀法收集沉淀物，復溶于超純水中，以10kda?mw截斷量透析48h，然后冷凍干燥。

20、所述優(yōu)選地，所述deae-52纖維素柱層析純化處理中，分別以濃度0.3mol/l或0.5mol/l?nacl溶液進行洗脫處理，就對應的兩個洗脫峰對應的兩個組分分別進行旋蒸，透析，凍干，分別得到純化多糖pmps-a1，pmps-a2。

21、相比于現(xiàn)有技術，本公開的有益效果包括但不限于：

22、1、本發(fā)明新篩選得到的真菌菌株蟬花ch2347，其發(fā)酵液具有優(yōu)良膚感和舒緩性能，其菌絲體多糖具有良好的抗炎、修復功效，可用于化妝品。

23、2、本公開提供的制備方法，通過將蟬花菌接種于2％土豆+2％乳糖的培養(yǎng)基進行發(fā)酵培養(yǎng)，得到了菌絲體并進一步以該菌絲體為研究對象，獲得六種發(fā)酵活性物，通過在炎癥指標分泌和屏障相關蛋白指標的比較中，篩選獲得一種具有較好功能的多糖活性物(即粗多糖pmps-a)；對該活性物進一步分級分離和結(jié)構(gòu)分析，獲得了兩種組分(即純化多糖pmps-a1，pmps-a2)，兩種組分對細胞沒有刺激性，較安全，而且具有較好的修復細胞劃痕的作用，具有較好的改善uvb導致的線粒體膜電位損傷，其中pmps-a1具有更好的修復作用；

24、3、本公開提供的蟬花菌絲體提取物作為化妝品功效成分具有功效性強、成本低、操作簡單、綠色安全等特征，具有較強的實用性和推廣價值。

25、本公開的蟬花(cordyceps?cicadae)ch2347，保藏日期為2023年04月10日，保藏編號為cgmcc?no.40399，分類命名為：蟬花(cordyceps?cicadae)ch2347，又稱蟬花ch2347，保藏單位名稱為中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心(簡稱cgmcc)，地址為：北京市朝陽區(qū)北辰西路1號院3號，郵編為100101。