一株短發酵劑乳桿菌及其應用的制作方法

本發明涉及生物，具體涉及一株短發酵劑乳桿菌及其應用。

背景技術：

1、腦-腸軸是由中樞神經系統(central?nervous?system,?cns)，神經內分泌(neuroendocrine）和神經免疫(neuroimmune）系統，自主神經系統?(autonomic?nervoussystem,?ans)的交感神經和副交感神經，腸道神經系統?（entericnervous?system,?ens)，以及腸道微生物群（gut?microbiota）組成的復雜反射網絡。通過雙向調節的聯系網絡，腦部的信號可以影響腸道動力、感知、及分泌，而腸道菌群同樣可以影響腦功能。己有研究發現抑郁癥患者的腸道微生物組成發生改變以及腸道微生物群與生活質量和抑郁癥之間存在相互關系，無菌小鼠相對于spf小鼠出現了抑郁樣表型，越來越多的研究己證實腸道微生物與抑郁癥及應激相關障得?(stress-?related?disorders?)具有密切的聯系，腸道菌為抑郁癥的治療提供了新靶點。

2、目前，最常見的抗抑郁藥物主要為作用于單胺類神經遞質，通過提高突觸間隙具有改善情緒、提高動力改善抑郁癥狀。包括單胺氧化酶抑制劑?(maois)，去甲腎上腺素和多巴胺再攝取抑制劑?(ndri)，選擇性5-羥色胺再攝取抑制劑（ssris），血清素和去甲腎上腺素再攝取抑制劑?(snri)，血清素拮抗劑和再攝取抑制劑?(sari)以及三環類抗抑郁藥(tcas)?和四環類抗抑郁藥等，除了有頭痛頭暈、腸胃不適、性功能障礙、成癮性等明顯的副作用外，病人的臨床緩解情況有很大差異，約30%?患者得不到緩解，甚至是對同一患者不同時期也無法維持穩定的藥效。

3、目前已經有少數專利和文獻對益生菌改善抑郁做出了報道，專利cn110157647b的短乳桿菌（短發酵劑乳桿菌曾用名）具有優良的gaba產生能力，從而緩解小鼠的焦慮，改善睡眠，在礦場試驗、高架十字，戊巴比妥鈉延長睡眠等實驗中表現突出，但對緩解抑郁的情況并不清楚。專利tw1750788b公開了一種短乳桿菌gkjoy以及組合物，同樣產生能gaba，通過提高腦組織中的多巴胺及/或血清素含量，促進神經功能，并未披露在小鼠和人體的生理功能性數據。

技術實現思路

1、本發明涉及一株短發酵劑乳桿菌( levilactobacillus?brevis)ibiome003，該株菌在中國典型培養物保藏中心保藏，地址為湖北省武漢市武昌區八一路武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏日期2023年3月21日，保藏號為cctcc?no：m?2023387。本發明進一步提供了上述短發酵劑乳桿菌的按任意比例混合的混合物。

2、本發明還涉及一種藥物，包括前述的短發酵劑乳桿菌和藥學上可接受的賦型劑、載體、輔料、媒介物。

3、賦型劑、載體、輔料、媒介物的實例包括但不限于抗粘劑、粘合劑、包衣、壓縮助劑、崩解劑、染料、滑潤劑、乳化劑、填充劑(稀釋劑)、成膜劑或包衣、調味劑、芳香劑、助流劑(流動增強劑)、潤滑劑、吸附劑、懸浮或分散劑或甜味劑。例示性賦型劑、載體、輔料、媒介物包括但不限于：丁基化羥基甲苯(bht)、碳酸鈣、磷酸鈣(一氫)、硬脂酸鈣、交聯羧甲纖維素、交聯聚乙烯吡咯烷酮、檸檬酸、交聯聚維酮、半胱氨酸、乙基纖維素、明膠、羥基丙基纖維素、羥基丙基甲基纖維素、乳糖、硬脂酸鎂、麥芽糖醇、甘露糖醇、蛋氨酸、甲基纖維素、對羥基苯甲酸甲酯、微晶纖維素、聚乙二醇、聚維酮、預膠化淀粉、對羥基苯甲酸丙酯、視黃醇棕櫚酸酯、蟲膠、二氧化硅、羧基甲基纖維素鈉、檸檬酸鈉、乙醇酸淀粉鈉、山梨糖醇、淀粉(玉米)、硬脂酸、硬脂酸、蔗糖、滑石、二氧化鈦、維生素a、維生素e、維生素c及木糖醇。

4、所述藥物可呈注射制劑的形式或口服制劑形式經制備。所述的注射制劑依據物態分類包括液體注射劑、注射用粉劑、注射用片劑；依據注射部分分類包括皮內注射劑、皮下注射劑、肌肉注射劑、靜脈注射劑、脊椎腔注射劑；優選的所述注射制劑的溶劑包括注射用水或生理鹽水。

5、用于口服使用的制劑包括含有與無毒的藥學上可接受的賦形劑混合的活性成分的片劑。這些賦形劑可以是例如惰性稀釋劑或填充劑(例如，蔗糖、山梨糖醇、糖、甘露糖醇、微晶纖維素、包括馬鈴薯淀粉的淀粉、碳酸鈣、氯化鈉、乳糖、磷酸鈣、硫酸鈣或磷酸鈉)；制粒劑及崩解劑(例如，包括微晶纖維素的纖維素衍生物、包括馬鈴薯淀粉的淀粉、交聯羧甲纖維素鈉、藻酸鹽或藻酸)；粘合劑(例如，蔗糖、葡萄糖、山梨糖醇、阿拉伯膠、藻酸、藻酸鈉、明膠、淀粉、預膠化淀粉、微晶纖維素、硅酸鎂鋁、羧甲基纖維素鈉、甲基纖維素、羥丙基甲基纖維素、乙基纖維素、聚乙烯吡咯烷酮或聚乙二醇)；以及潤滑劑、助流劑及抗粘劑(例如，硬脂酸鎂、硬脂酸鋅、硬脂酸、二氧化硅、氫化植物油或滑石)。用于口服使用的制劑也可呈可咀嚼片劑形式，或呈硬明膠膠囊形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如，馬鈴薯淀粉、乳糖、微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合，或呈軟明膠膠囊形式，其中活性成分與水或油介質(例如，花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。粉劑、顆粒劑及丸劑可以使用上文在片劑或膠囊下提到的成分以常規方式使用例如混合器、流化床設備或噴霧干燥設備來制備。

6、用于口服制劑的其他藥學上可接受的賦形劑包括但不限于著色劑、調味劑、增塑劑、保濕劑及緩沖劑。用于口服使用的制劑也可呈可咀嚼片劑形式，或呈硬明膠膠囊形式，其中活性成分與惰性固體稀釋劑(例如，馬鈴薯淀粉、乳糖、微晶纖維素、碳酸鈣、磷酸鈣或高嶺土)混合，或呈軟明膠膠囊形式，其中活性成分與水或油介質(例如，花生油、液體石蠟或橄欖油)混合。粉劑、顆粒劑及丸劑可以使用上文在片劑或膠囊下提到的成分以常規方式使用例如混合器、流化床設備或噴霧干燥設備來制備。

7、在一些實施方案中，施用包括經肌肉內、靜脈內(例如，呈無菌溶液形式且在適用于靜脈內使用的溶劑系統中)、皮內、動脈內、腹膜內、病變內、顱內、關節內、前列腺內、胸膜內、氣管內、鼻內、玻璃體內、陰道內、直腸內、經表面、腫瘤內、經腹膜、皮下、結膜下、囊內、經粘膜、心包內、臍內、眼內、經口(例如，片劑、膠囊、囊片、囊形片或糖漿)、經表面(例如，呈乳膏、凝膠、洗劑或軟膏形式)、經局部、通過吸入、通過注射或通過輸注(例如，以乳膏或脂質組合物形式連續輸注、直接地浸泡靶標細胞的局部灌注、置管、灌洗)施用本文所述的藥物。

8、本發明還涉及一種藥物組合物，包括前述的短發酵劑乳桿菌和聯用藥物，所述聯用藥物為其他與短發酵劑乳桿菌起到協同作用的物質，包括但不限于其他種菌，如：干酪乳桿菌（l.?casei）、嗜酸乳桿菌（l.?acidophilus）、植物乳桿菌（l.?plantarum）、瑞士乳桿菌（l.?helveticus）、發酵乳桿菌（l.?fermentum）、彎曲乳桿菌（l.?curvatus）、米酒乳桿菌(l.?sake)?、保加利亞乳桿菌（l.?bulgaricus）、嗜熱鏈球菌、乳鏈球菌、乳脂鏈球菌、長雙歧桿菌、短雙歧桿菌、兩歧雙歧桿菌、嬰兒雙歧桿菌、青春雙歧桿菌等；或者其他藥物活性成分，如5-羥色胺再攝取抑制劑（ssri）、5-羥色胺和去甲腎上腺素再攝取抑制劑（snri）、三環類抗抑郁藥（tac）、單胺氧化酶抑制劑（maoi）、四環類抗抑郁藥（teca）、去甲腎上腺素和特異性5-羥色胺能抗抑郁藥（nassa）等。

9、用藥劑量

10、所述藥物/藥物組合物的用藥劑量為107~1012cfu。

11、用藥周期以能夠實現效果為準，包括但不限于每日1-3次，每周3-7天服用等，還和具體制劑的作用濃度有關。

12、發酵劑、功能性菌劑

13、一種包含前述短發酵劑乳桿菌的發酵組合物或發酵劑或功能性菌劑，包括前述短發酵劑乳桿菌菌液制備得到的菌液、或進一步處理得到的粉劑、或顆粒劑；所述發酵劑中還可以進一步含有一種以上互不拮抗的微生物菌劑，選自耐酸乳桿菌、植物乳桿菌、保加利亞乳桿菌中的一種以上制備得到復合菌劑。

14、有效菌劑濃度、活菌數為107~1012cfu。

15、發酵劑或功能性菌劑亦可用作功能性食品、營養品。

16、營養組合物

17、一種包含前述短發酵劑乳桿菌的營養組合物，包括上述短發酵劑乳桿菌以及食品、營養品、補充物、益生菌或共生菌。

18、所述食品，包括上述短發酵劑乳桿菌以及實現食品功能的輔助物質，呈現的形式包括但不限于?“膳食補充劑”“發酵食品”等。

19、所述膳食補充劑包括前述短發酵劑乳桿菌菌液制備得到的菌液或進一步處理得到的粉劑，并進一步加入纖維素、維生素、礦物質等營養物質處理得到。

20、所述發酵食品包括乳制品、豆制品或者果蔬制品等。所述的乳制品是牛奶、酸奶油或干酪等。所述的豆制品是豆奶、豆豉或豆醬等。所述的果蔬制品是黃瓜、胡蘿卜、甜菜、芹菜或圓白菜制品等。

21、所述益生菌是指活的微生物，當它以合適的量提供時，對于宿主有機體的健康會有益。

22、所述共生菌是指那些含有益生素和益生菌的混合物的食品。它們通常包含利于生長和/或代謝活性的益生組分，以及總的來說與諸如但不限于短發酵劑乳桿菌與低聚果糖或低聚半乳糖相組合的益生菌效果。

23、制藥、治療用途

24、本發明涉及的短發酵劑乳桿菌或組合物在制備用于治療、緩解、預防、抑郁癥和/或焦慮的藥物或發酵菌劑中的用途。所述抑郁癥的表現包括但不限于：a）放棄逃脫的希望；b）行為絕望；c）無法逃逸惡環境；d）愉悅感缺失；e）對獎勵刺激缺乏興趣；f）長期的情緒低落，感到悲傷、空虛、無望；g）思維遲緩、反應遲鈍、記憶力和注意力減退；h）自我評價降低，產生無用感、無望感和無價值感；i）感覺自己有罪，感覺自己有病；j）出現幻覺、幻聽、幻視；k）對幾乎所有活動都沒什么興趣，或覺得不好玩；l）意識活動減退，表現為行為緩慢，生活被動、疏懶，不想做事，不愿和周圍人接觸交往，常獨坐一旁，或整日臥床，閉門獨居、疏遠親友、回避社交；m）出現惡心、嘔吐、心慌、胸悶、出汗等癥狀；n）在未節食的情況下體重明顯減輕或增加，食欲一直在減退或增加；o）失眠或睡眠過多；p）經常坐立不安，經常感到疲勞或精力，包括物理誘發的環境因素導致的、化學物質因素導致的、特殊食物導致的等。具體地，因慢性束縛應激（cums）導致的，或慢性不可預見性動物應激模型（cums）導致的，或習得性無助（lh）模型導致的，或社會挫敗（sd）模型導致的，或氨基酸食物（aad）導致的，或皮質酮（cort）所導致的，或遺傳（家族病史或基因關聯，患者的一級親屬（父母兒女親兄弟姐妹）罹患抑郁癥的風險大約是一般人的2-10倍，遺傳度是31%-42%）、醫學（患有其他生理疾病、創傷或是服用某些藥物，例如：帕金森綜合征、癲癇、消化系統疾病、甲狀腺功能減退等疾病都可能會導致抑郁癥）、心理（包括患者如何看待他人和自己，如何與外界建立聯系；幾種可能誘發抑郁癥的心理特質包括：抗壓能力弱、無助感、憤怒、絕望感、自信心弱等）、環境（指外界可能導致抑郁癥的事件或現象，其中比較常見的幾種社會因素包括：家庭問題，比如夫妻矛盾；生活壓力，比如失業；創傷性事件，比如交通事故、親人去世；童年時期的心理創傷，比如被忽視、虐待、父母早逝等；此外文化背景因素在一定程度上也會導致抑郁癥）因素導致的，但并不限于這些原因所導致。

25、該株短發酵劑乳桿菌有望在其他神經系統疾病，如：抑郁癥、焦慮癥、孤獨癥、精神分裂癥、強迫癥、恐怖癥、雙向情感障礙、人格障礙比、躁狂癥、妄想癥、疑病癥、神經衰弱、精神發育遲滯、癡呆癥、失眠癥、心理生理精神障礙、情感性精神障礙、偏執性精神障礙、酒依賴精神障礙、物質依賴精神障礙、反應性精神障礙（急性應激反應、創傷后應激障礙、適應障礙、性生理障礙（性變態、易性癖、戀童癖等）、人格障礙反社會型人格障礙、沖動型人格障礙、認知障礙、阿爾茲海默癥、癲癇、帕金森病等中具有同樣的預防或緩解作用。

26、有益效果

27、本發明公開了減緩小鼠抑郁樣癥狀的短發酵劑乳桿菌的制備方法及應用。該株短發酵劑乳桿菌從健康人腸道分離獲得，來源安全可控，易于在體外培養，在腸道定植效率較高，并在不同的抑郁模型中均能顯著改善抑郁樣行為，可用于制備具有抗抑郁功能的食品、保健品和藥品，為臨床干預和控制抑郁癥等相關的精神類疾病提供新的思路，具有良好和廣泛的應用前景。同時短發酵劑乳桿菌廣泛存在發酵食品和人體腸道中，本發明也證明該菌株對體重、內臟器官、肝臟和腸道組織均沒有副作用，具備較高的安全性；在ph3.0的模擬胃液和0.3%膽鹽的模擬腸液中也均具有較好的耐受性，說明其具有良好的耐酸耐膽鹽能力，更有利于成藥后的藥效發揮。

28、生物保藏說明

29、短發酵劑乳桿菌( levilactobacillus?brevis)?ibiome003，保藏日期2023年3月21日，保藏地點為中國典型培養物保藏中心，地址為湖北省武漢市武昌區八一路武漢大學中國典型培養物保藏中心，保藏號為cctcc?no：m?2023387。