4?氧?烷基化特特拉姆酸類化合物及其制備方法與流程

本發(fā)明涉及醫(yī)藥領域，具體涉及4-氧-烷基化特特拉姆酸類化合物及其制備方法。
背景技術：
：學習記憶能力在日常生活中極為重要，而多種疾病導致的學習記憶能力損傷給患者帶來了極大的損傷，常見的學習記憶損傷的疾病包含了帕金森癥，亨廷頓癥，各類癡呆，精神分裂癥，孤獨癥等。阿爾茨海默病(alzihemer’sdisease)是一種常見的神經(jīng)退行性疾病，伴隨有記憶衰退，神經(jīng)元死亡等癥狀，主要臨床標志為老年斑和神經(jīng)纖維糾結。目前，對該疾病的治療手段較為匱乏。在十余年前美國fda批準了2類共計五個治療性化合物，包括膽堿酯酶抑制劑和nmda受體拮抗劑，但都只能短暫地改善疾病的癥狀，而不能阻止疾病的病程。因此，科學界和企業(yè)界均積極投身于對疾病機制的理解和相關藥物的開發(fā)。為了理解疾病和開發(fā)藥物，人們制作了多種帶有人類致病基因的動物模型，并用于治療藥物的開發(fā)工作。目前，最主流的假說為淀粉樣蛋白假說，即認為abeta蛋白是造成神經(jīng)病理病變的主要原因，并據(jù)此構建了多個轉基因模型。根據(jù)這一假說，藥廠開發(fā)了多種針對abeta蛋白的疫苗和該蛋白形成過程中多種酶的磷酸化抑制劑，但是到目前為止，這些努力都因無效而告終。我們認為，在患者發(fā)病后再減少該毒性蛋白已經(jīng)為時過晚，應當通過減少該蛋白的毒性入手，開發(fā)治療藥物。因此，本發(fā)明從改善動物模型的認知功能出發(fā)，尋找治療阿爾茲海默病的藥物，并發(fā)現(xiàn)一系列新型化合物具有治療效果好，藥理特性好，安全性高等特征。這些化合物不僅具有治療阿爾茲海默癥的潛力，還有治療帕金森癥，亨廷頓癥，血管性癡呆，精神分裂癥，孤獨癥等疾病的潛力。技術實現(xiàn)要素：本發(fā)明的目的是提供4-氧-烷基化特特拉姆酸類化合物及其制備方法。本發(fā)明所提供的4-氧-烷基化特特拉姆酸類化合物，其結構式如式i所示：上述式i中，r1可選自其中，r3可為c1-c6的烷氧基，具體可為甲氧基；表示連接端。r2可選自其中r4可為2、3或4位單取代的鹵素，具體可為2、3或4位單取代的氟，2、3或4位單取代的c1-c6的烷基或烷氧基，具體可為2或4位取代的甲基或4位取代的甲氧基，酯基，具體可為4位取代的-oac，4位取代的4位取代的-cn，4位取代的-no2，雙取代的烷氧基，具體可為2,3位雙取代的甲氧基或2,5位雙取代的甲氧基；表示連接端。上述式i所示化合物的鹽也屬于本發(fā)明的保護范圍。具體地，本發(fā)明所提供的式i所示4-氧-烷基化特特拉姆酸類化合物為下述化合物中的一種：上述式i所示4-氧-烷基化特特拉姆酸類化合物是按照包括下述步驟的方法制備得到的：1)使得式ii所示化合物與式iii所示化合物反應，得到式iv所示化合物；上述式ii、式iv中，r1可選自其中，r3可為c1-c6的烷氧基，具體可為甲氧基；boc代表叔丁氧羰基；式iii、式iv中，r2可選自其中r4可為2、3或4位單取代的鹵素，具體可為2、3或4位單取代的氟，2、3或4位單取代的c1-c6的烷基或烷氧基，具體可為2或4位取代的甲基或4位取代的甲氧基，酯基，具體可為4位取代的-oac，4位取代的4位取代的-cn，4位取代的-no2，雙取代的烷氧基，具體可為2,3位雙取代的甲氧基或2,5位雙取代的甲氧基；表示連接端；2)使得式iv所示化合物脫除boc保護，得到式i所示化合物。上述方法步驟1)中，式ii所示化合物與式iii所示化合物的摩爾比可為1：1-10。所述反應在堿性條件下進行，所述堿具體可為碳酸鉀。所述反應的溫度可為0-100度，時間可為0.1-24小時。所述反應在有機溶劑中進行，所述有機溶劑具體可為乙腈。上述方法步驟2)中，所述脫除boc保護在三氟乙酸作用下進行。式iv所示化合物與三氟乙酸的摩爾比可為1：1-20，具體可為1:3。所述脫除boc保護的反應溫度為-10-30度，具體可為室溫，時間為0.5-24小時，具體可為5小時。所述脫除boc保護在有機溶劑中進行，所述有機溶劑具體可為二氯甲烷。上述式i所示4-氧-烷基化特特拉姆酸類化合物或其鹽可用于制備治療老年癡呆病、帕金森癥、亨廷頓癥、血管性癡呆、精神分裂癥、孤獨癥等疾病的藥物。經(jīng)動物實驗驗證，本發(fā)明的化合物具有挽救動物模型的記憶效果，安全性高，不具有致誘變性，口服和靜脈注射后均能在血液中停留數(shù)個小時，并能進入大腦。附圖說明圖1為化合物51311,50561,51351,51151,51121,51332,51081,51091,51221,51101,51071,51131,51321,51341,51111,51301對老年癡呆果蠅記憶力改善作用圖。圖2為化合物60111,60241,60201,51471,51541,60221,60131,51551,51571,60251,51731,51561,60121,60231,60211對老年癡呆果蠅記憶力改善作用圖。圖3為化合物50561，51311，51351,51151,51121改善老年癡呆果蠅記憶力的量效關系圖。圖4為化合物50561(10mg/kg)改善ad小鼠空間學習記憶。圖5為化合物50561(1,0.1mg/kg)不改善ad小鼠空間學習記憶。a為小鼠給藥操作示意圖；b為小鼠水迷宮測試潛伏期；c-d為訓練前后小鼠在目標象限的停留時間百分比；e為訓練前后小鼠穿越平臺的次數(shù)；f訓練前后小鼠游泳速度的變化。圖6為利用膜片鉗技術在hek-293的herg穩(wěn)定細胞株上所記錄到的50561對herg鉀通道的濃度-效應關系曲線。圖7為靜脈注射50561后的血漿及大腦藥物濃度時間曲線圖。圖8為口服50561后的血漿及大腦藥物濃度時間曲線圖。具體實施方式下面通過具體實施例對本發(fā)明進行說明，但本發(fā)明并不局限于此。下述實施例中所使用的實驗方法如無特殊說明，均為常規(guī)方法；下述實施例中所用的試劑、生物材料等，如無特殊說明，均可從商業(yè)途徑得到。實施例1、(50561)化合物的制備1.1、(中間體1)的制備將l-苯丙氨酸(20g,121.07mmol)溶于500ml四氫呋喃和水的混合溶液中(v/v1:1)，冰浴下攪拌10分鐘，分批加入氫氧化鈉(10.7g,266.4mmol)和二碳酸二叔丁酯(29.1g,133.2mmol)，加入完畢后室溫下攪拌10小時，tlc監(jiān)測顯示反應完全。減壓蒸去四氫呋喃，并加入500ml二氯甲烷，攪拌下滴加2n鹽酸水溶液至水層ph值為5左右，分取有機層并用200ml飽和食鹽水洗1次，無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸干溶劑得粗產(chǎn)品，產(chǎn)率99％，無需進行進一步純化即可進行下一步反應。1.2、(中間體2)的制備將中間體1(25g,94.2mmol)溶于500ml無水二氯甲烷中，依次加入米氏酸(14.9g,103.7mmol)，4-二甲氨基吡啶(17.3g,141.3mmol)，冰浴下攪拌10分鐘，滴加二環(huán)己基碳二亞胺(21.4g,103.7mmol)的二氯甲烷溶液(100ml)，滴加完畢后，反應液繼續(xù)在冰浴下攪拌10小時，tlc監(jiān)測反應完畢。過濾，濾液用5％的硫酸氫鉀水溶液洗6次，每次200ml，飽和食鹽水洗1次，無水硫酸鈉干燥，減壓蒸干溶劑得淡黃色固體，加入500ml石油醚攪拌后過濾得目標產(chǎn)物為白色固體(30g,產(chǎn)率77％)，無需進行進一步純化即可進行下一步反應。1.3、(中間體3)的制備將中間體2(25g，63.9mmol)溶于400ml乙酸乙酯中，回流反應5小時。冷卻至室溫，減壓蒸干乙酸乙酯得白色固體即為目標產(chǎn)物(17.6g,95％)，產(chǎn)物無需進行進一步純化。1.4、(01311，中間體15)的制備將中間體3(289mg,1.0mmol)溶于5ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(207mg,1.5mmol)，4-氟芐溴(227mg,1.2mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體15為無色油狀物(158mg，產(chǎn)率40％)。分子量：397.45.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34(dd,j＝8.2,5.4hz,2h),7.19(m,3h),7.10(t,j＝8.5hz,2h),6.98(m,2h),4.91(s,1h),4.84(m,2h),4.71(dd,j＝5.3,3.0hz,1h),3.43(dd,j＝14.0,5.2hz,1h),3.14(dd,j＝14.0,2.8hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.79,168.75,163.06(d,j＝248.3hz),149.47,134.24,130.21(d,j＝8.4hz),130.05(d,j＝3.3hz),129.59,128.35,127.11,115.93(d,j＝21.7hz),96.18,82.78,72.65,60.38,35.55,28.30.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.20.1.5、(50561)化合物的制備將中間體15(397mg,1.0mmol)溶于10ml二氯甲烷中，冰浴下加入三氟乙酸(223μl,3.0mmol)，反應液在室溫下攪拌反應5小時。反應完畢后，加入90ml二氯甲烷稀釋反應液，10％nahco3水溶液洗1洗，飽和食鹽水洗1次，無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干溶劑，柱層析分離純化得實施例1：白色固體360mg，產(chǎn)率為82％。分子量：297.33.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37(dd,j＝8.4,5.3hz,2h),7.27(m,3h),7.18(m,2h),7.11(t,j＝8.5hz,2h),5.77(s,1h),5.06(s,1h),4.95(m,2h),4.27(dd,j＝9.2,3.6hz,1h),3.21(dd,j＝13.7,3.7hz,1h),2.67(dd,j＝13.7,9.0hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.94,173.55,163.04(d,j＝247.8hz),136.55,130.64(d,j＝3.5hz),130.06(d,j＝8.4hz),129.27,128.79,127.17,115.91(d,j＝21.7hz),95.23,72.60,58.86,38.77.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.58.實施例2、(51121)化合物的制備2.1、(50951，中間體16)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2-氟芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體16為無色油狀物(259mg,產(chǎn)率65％)。分子量：397.45。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.38(m,2h),7.18(m,5h),6.99(m,2h),4.95(m,3h),4.70(s,1h),3.43(dd,j＝13.9,4.7hz,1h),3.13(d,j＝13.9hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.67,168.62,160.93(d,j＝249.0hz),149.46,134.13,131.27(d,j＝8.3hz),130.75(d,j＝3.2hz),129.62,129.62,127.03,124.54(d,j＝3.7hz),121.43(d,j＝14.4hz),115.83(d,j＝21.1hz),96.09,82.65,67.12(d,j＝4.2hz),60.34,35.44,28.27.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-117.44.2.2、(51121)化合物的制備以中間體16(402mg,1.01mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例2：白色固體258mg，產(chǎn)率為86％。分子量：297.33.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.39(m,1h),7.19(m,7h),6.39(brs,1h),5.08(s,1h),5.02(m,2h),4.28(dd,j＝8.4,3.8hz,1h),3.16(dd,j＝13.7,4.1hz,1h),2.72(dd,j＝13.6,8.1hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.72,173.78,160.85(d,j＝248.7hz),136.26,130.91(d,j＝8.3hz),130.42(d,j＝3.5hz),129.34,128.54,126.95,124.45(d,j＝3.7hz),122.00(d,j＝14.4hz),115.74(d,j＝21.2hz),95.20,66.95(d,j＝4.1hz),58.68,38.35.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-117.70.實施例3、(51131)化合物的制備3.1、(50941，中間體17)的制備采用中間體15相同的合成方法，以3-氟芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體17為無色油狀物(158mg,產(chǎn)率40％)。分子量：397.45。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37(m,1h),7.21(m,3h),7.04(m,5h),4.91(s,1h),4.88(m,2h),4.74(m,1h),3.43(dd,j＝14.0,5.4hz,1h),3.18(dd,j＝14.1,3.0hz,1h),1.60(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.76,168.59,163.00(d,j＝247.3hz),149.50,136.62(d,j＝7.5hz),134.31,130.58(d,j＝8.3hz),129.61,128.41,127.17,123.40(d,j＝3.0hz),115.97(d,j＝21.0hz),114.84(d,j＝22.2hz),96.40,82.83,72.42(d,j＝2.0hz),60.42,35.69,28.33.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-111.95.3.2、(51131)化合物的制備以中間體17(308mg,0.77mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例3：白色固體229mg，產(chǎn)率為100％。分子量：297.33.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.20(m,9h),5.76(s,1h),5.05(s,1h),4.98(m,2h),4.30(dd,j＝9.2,3.7hz,1h),3.23(dd,j＝13.7,3.7hz,1h),2.69(dd,j＝13.6,9.0hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.82,173.41,163.06(d,j＝246.9hz),137.24(d,j＝7.5hz),136.52,130.54(d,j＝8.2hz),129.28,128.83,127.22,123.31(d,j＝3.0hz),115.83(d,j＝21.1hz),114.74(d,j＝22.2hz),95.45,72.36(d,j＝2.0hz),58.84,38.80.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.12.實施例4、(51091)化合物的制備4.1、(51031，中間體18)的制備采用中間體15相同的合成方法，以4-甲基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體18為無色油狀物(176mg,產(chǎn)率45％)。分子量：393.48。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.22(m,7h),6.98(m,2h),4.91(s,1h),4.86(m,2h),4.70(dd,j＝5.2,3.1hz,1h),3.44(dd,j＝14.0,5.2hz,1h),3.13(dd,j＝14.0,3.0hz,1h),2.39(s,3h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.00,168.91,149.61,139.15,134.33,131.24,129.72,129.64,128.44,128.36,127.12,96.15,82.72,73.46,60.47,35.52,28.37,21.38.4.2、(51091)化合物的制備以中間體18(176mg,0.45mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例4：白色固體96mg，產(chǎn)率為73％。分子量：293.37。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(m,9h),5.50(s,1h),5.06(s,1h),4.95(m,2h),4.25(dd,j＝9.5,3.4hz,1h),3.23(dd,j＝13.6,3.5hz,1h),2.63(dd,j＝13.6,9.4hz,1h),2.39(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.20,173.64,138.95,136.76,131.79,129.60,129.27,128.84,128.29,127.17,95.03,73.37,58.95,38.88,21.39.實施例5、(51101)化合物的制備5.1、(51041，中間體19)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2-甲基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體19為無色油狀物(205mg,產(chǎn)率52％)。分子量：393.48。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.23(m,7h),6.97(m,2h),4.97(s,1h),4.92(m,2h),4.72(m,1h),3.45(dd,j＝14.0,5.1hz,1h),3.13(dd,j＝14.0,2.5hz,1h),2.38(s,3h),1.60(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.02,168.84,149.61,137.07,134.29,132.32,130.82,129.70,129.45,128.37,127.13,126.41,96.09,82.75,71.88,60.45,35.54,28.37,19.05.5.2、(51101)化合物的制備以中間體19(205mg,0.52mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例5：白色固體114mg，產(chǎn)率為75％。分子量：293.37。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.27(m,9h),5.78(s,1h),5.11(s,1h),4.99(m,2h),4.26(dd,j＝9.4,3.4hz,1h),3.21(dd,j＝13.6,3.5hz,1h),2.64(dd,j＝13.6,9.3hz,1h),2.38(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.17,173.67,137.19,136.66,132.75,130.76,129.40,129.31,129.26,128.77,127.12,126.31,94.91,71.92,58.93,38.80,19.00.實施例6、(51071)化合物的制備6.1、的制備將2,3-二甲氧基苯甲醛(1.66g,10mmol)溶于50ml無水四氫呋喃中，冰浴下攪拌10分鐘，分批加入四氫鋰鋁(0.19g，5mmol)，冰浴下攪拌反應30分鐘，飽和氯化銨水溶液淬滅反應，乙酸乙酯萃取3次(100ml×3)，合并有機層，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干溶劑即得目標產(chǎn)物(1.6g，產(chǎn)率95％)，無需進行進一步純化即可進行下一步反應。6.2、的制備將2,3-二甲氧基苯甲醇(1.6g，9.5mmol)溶于50ml無水二氯甲烷中，冰浴下攪拌10分鐘，緩慢滴加三溴化磷(0.87g，3.2mmol)，滴加完畢后冰浴下繼續(xù)反應1小時。加入200ml二氯甲烷稀釋反應液后，水洗(50ml×3)，飽和食鹽水洗(100ml×1)，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干溶劑后的粗產(chǎn)品，經(jīng)柱層析純化得2,3-二甲氧基芐溴(2.1g，產(chǎn)率96％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.03(m,1h),6.96(dd,j＝7.8,1.7hz,1h),6.88(dd,j＝8.0,1.6hz,1h),4.57(s,2h),3.97(s,3h),3.87(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ152.89,147.55,131.95,124.22,122.61,113.13,60.90,55.91,28.24.6.3、(51011，中間體20)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2,3-二甲氧基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體20為無色油狀物(191mg,產(chǎn)率43％)。分子量：439.51。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.05(m,8h),4.97(s,1h),4.94(m,2h),4.69(dd,j＝4.6,2.8hz,1h),3.88(s,6h),3.43(dd,j＝13.9,5.2hz,1h),3.13(dd,j＝13.9,2.5hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.97,168.82,152.75,149.54,147.56,134.19,129.71,128.24,127.87,126.98,124.24,121.65,113.56,95.94,82.53,68.68,61.15,60.36,55.88,35.41,28.27.6.4、(51071)化合物的制備以中間體20(191mg,0.43mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例6：白色固體114mg，產(chǎn)率為78％。分子量：339.39.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.23(m,5h),7.11(m,1h),6.97(m,2h),5.70(brs,1h),5.12(s,1h),5.03(m,2h),4.25(dd,j＝9.3,3.5hz,1h),3.90(s,6h),3.21(dd,j＝13.6,3.6hz,1h),2.66(dd,j＝13.7,9.3hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.23,173.77,152.84,147.57,136.69,129.30,128.76,128.59,127.10,124.31,121.49,113.36,94.92,68.62,61.29,58.89,55.95,38.81.實施例7、(51341)化合物的制備7.1、的制備將2,5-二甲氧基苯甲醇(1.68g，10mmol)溶于50ml無水二氯甲烷中，冰浴下攪拌10分鐘，緩慢滴加三溴化磷(1.0g，3.7mmol)，滴加完畢后冰浴下繼續(xù)反應1小時。加入200ml二氯甲烷稀釋反應液后，水洗(50ml×3)，飽和食鹽水洗(100ml×1)，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干溶劑后的粗產(chǎn)品，經(jīng)柱層析純化得2,5-二甲氧基芐溴(2.2g，產(chǎn)率96％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ6.91(m,1h),6.82(m,2h),4.54(s,2h),3.85(s,3h),3.77(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ153.43,151.69,126.93,116.41,115.07,112.20,56.24,55.81,29.07.7.2、(51201，中間體21)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2,5-二甲氧基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體21為無色油狀物(247mg,產(chǎn)率56％)。分子量：439.51。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.19(m,3h),7.02(m,2h),6.88(m,3h),4.95(s,1h),4.93(s,2h),4.70(dd,j＝5.4,2.8hz,1h),3.82(s,3h),3.78(s,3h),3.44(dd,j＝13.9,5.2hz,1h),3.14(dd,j＝13.9,2.8hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.01,168.92,153.59,151.54,149.56,134.21,129.73,128.22,127.00,123.41,116.14,114.59,111.60,95.99,82.52,68.53,60.37,55.92,55.85,35.41,28.29.7.3、(51341)化合物的制備以中間體21(247mg,0.56mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例7：白色固體130mg，產(chǎn)率為68％。分子量：339.39.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(m,5h),6.96(d,j＝2.5hz,1h),6.88(m,2h),5.67(s,1h),5.08(s,1h),5.02(m,2h),4.26(dd,j＝9.1,3.6hz,1h),3.83(s,3h),3.79(s,3h),3.22(dd,j＝13.7,3.6hz,1h),2.67(dd,j＝13.6,9.1hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.24,173.87,153.67,151.47,136.68,129.33,128.74,127.09,124.15,115.67,114.23,111.63,94.96,68.30,58.85,56.05,55.90,38.78.實施例8、(51221)化合物的制備8.1、(50971，中間體22)的制備采用中間體15相同的合成方法，以4-甲氧基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體22為無色油狀物(143mg,產(chǎn)率35％)。分子量：409.48.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.30(m,2h),7.20(m,3h),6.97(m,4h),4.91(s,1h),4.83(m,2h),4.69(dd,j＝5.1,3.1hz,1h),3.84(s,3h),3.43(dd,j＝14.0,5.2hz,1h),3.12(dd,j＝14.1,3.0hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.97,168.94,160.32,149.60,134.32,130.20,129.71,128.34,127.10,126.28,114.34,96.04,82.70,73.35,60.46,55.47,35.49,28.35.8.2、(51221)化合物的制備以中間體22(167mg,0.41mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例8：白色固體77mg，產(chǎn)率為61％。分子量：309.37.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.29(m,5h),7.18(d,j＝7.2hz,2h),6.94(d,j＝8.7hz,2h),5.66(s,1h),5.06(s,1h),4.92(m,2h),4.24(dd,j＝9.3,3.5hz,1h),3.83(s,3h),3.21(dd,j＝13.6,3.6hz,1h),2.64(dd,j＝13.6,9.2hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.16,173.75,160.18,136.69,130.00,129.29,128.77,127.12,126.85,114.29,94.96,73.22,58.92,55.46,38.78.實施例9、(51471)化合物的制備9.1、的制備將3-乙酰氧基-4-甲氧基苯甲醛(1.94g，10mmol)溶于50ml無水四氫呋喃中，冰浴下攪拌10分鐘，分批加入四氫鋰鋁(0.19g，5mmol)，冰浴下攪拌反應30分鐘，飽和氯化銨水溶液淬滅反應，乙酸乙酯萃取3次(100ml×3)，合并有機層，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干溶劑即得目標產(chǎn)物(1.9g，產(chǎn)率97％)，無需進行進一步純化即可進行下一步反應。9.2、的制備將3-乙酰氧基-4-甲氧基苯甲醇(1.9g，9.7mmol)溶于50ml無水二氯甲烷中，冰浴下攪拌10分鐘，緩慢滴加三溴化磷(1.0g，3.7mmol)，滴加完畢后冰浴下繼續(xù)反應1小時。加入200ml二氯甲烷稀釋反應液后，水洗(50ml×3)，飽和食鹽水洗(100ml×1)，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干溶劑后的粗產(chǎn)品，經(jīng)柱層析純化得3-乙酰氧基-4-甲氧基芐溴(2.4g，產(chǎn)率96％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.23(dd,j＝8.4,2.2hz,1h),7.10(d,j＝2.2hz,1h),6.91(d,j＝8.4hz,1h),4.46(s,2h),3.82(s,3h),2.31(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ168.90,151.29,139.72,130.35,127.68,123.79,112.44,56.05,33.14,20.71.9.3、(51371，中間體23)的制備采用中間體15相同的合成方法，以3-乙酰氧基-4-甲氧基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體23為無色油狀物(176mg,產(chǎn)率38％)。分子量：467.52。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.20(m,4h),7.06(s,1h),6.98(m,3h),4.91(s,1h),4.81(m,2h),4.70(dd,j＝5.3,3.0hz,1h),3.86(s,3h),3.42(dd,j＝14.0,5.3hz,1h),3.14(dd,j＝14.1,3.0hz,1h),2.34(s,3h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.87,168.92,168.78,151.82,149.55,140.00,134.31,129.68,128.36,127.11,126.68,123.13,112.52,96.12,82.74,72.70,60.44,56.12,35.57,28.34,20.75.9.4(51471)化合物的制備以中間體23(176mg,0.38mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例9：白色固體77mg，產(chǎn)率為56％。分子量：367.40.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(m,6h),7.10(d,j＝2.1hz,1h),7.00(d,j＝8.4hz,1h),5.38(s,1h),5.07(s,1h),4.89(m,2h),4.24(dd,j＝9.7,3.5hz,1h),3.87(s,3h),3.22(dd,j＝13.6,3.6hz,1h),2.62(dd,j＝13.6,9.5hz,1h),2.34(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.07,173.46,169.03,151.74,140.02,136.76,129.26,128.88,127.27,127.22,127.06,123.09,112.53,95.04,72.67,58.95,56.16,38.94,20.80.實施例10、(51351)化合物的制備10.1、的制備將4-乙酰氧基苯甲醛(1.64g，10mmol)溶于50ml無水四氫呋喃中，冰浴下攪拌10分鐘，分批加入四氫鋰鋁(0.19g，5mmol)，冰浴下攪拌反應30分鐘，飽和氯化銨水溶液淬滅反應，乙酸乙酯萃取3次(100ml×3)，合并有機層，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干溶劑即得目標產(chǎn)物(1.5g，產(chǎn)率90％)，無需進行進一步純化即可進行下一步反應。10.2、的制備將4-乙酰氧基苯甲醛(1.5g，9.0mmol)溶于50ml無水二氯甲烷中，冰浴下攪拌10分鐘，緩慢滴加三溴化磷(0.9g，3.3mmol)，滴加完畢后冰浴下繼續(xù)反應1小時。加入200ml二氯甲烷稀釋反應液后，水洗(50ml×3)，飽和食鹽水洗(100ml×1)，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸干溶劑后的粗產(chǎn)品，經(jīng)柱層析純化得3-乙酰氧基-4-甲氧基芐溴(1.8g，產(chǎn)率87％)。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.40(d,j＝8.2hz,2h),7.07(d,j＝8.2hz,2h),4.48(s,2h),2.30(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ169.36,150.57,135.38,130.28,122.01,32.80,21.21.10.3、(51211，中間體24)的制備采用中間體15相同的合成方法，以4-乙酰氧基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體24為無色油狀物203mg,產(chǎn)率46％)。分子量：437.49.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37(d,j＝8.1hz,2h),7.20(m,3h),7.15(d,j＝8.1hz,2h),6.98(m,2h),4.92(s,1h),4.86(m,2h),4.72(t,j＝4.1hz,1h),3.43(dd,j＝14.0,5.3hz,1h),3.15(dd,j＝14.1,3.0hz,1h),2.32(s,3h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.85,169.36,168.71,151.17,149.53,134.29,131.77,129.64,129.38,128.38,127.13,122.17,96.22,82.77,72.71,60.42,35.58,28.33,21.21.10.4、(51351)化合物的制備以中間體24(203mg,0.46mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例10：白色固體113mg，產(chǎn)率為72％。分子量：337.38.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.40(d,j＝8.5hz,2h),7.27(m,3h),7.17(m,4h),5.81(s,1h),5.06(s,1h),4.94(m,2h),4.27(dd,j＝9.1,3.7hz,1h),3.21(dd,j＝13.7,3.7hz,1h),2.68(dd,j＝13.6,9.0hz,1h),2.32(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.95,173.56,169.41,151.04,136.54,132.35,129.28,129.27,128.76,127.12,122.10,95.19,72.62,58.84,38.72,21.22.實施例11、(51321)化合物的制備11.1、(51181，中間體25)的制備采用中間體15相同的合成方法，以4-溴甲基苯甲酸甲酯替代4-氟芐溴，制備得到中間體25為無色油狀物(169mg,產(chǎn)率39％)。分子量：437.49.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.08(d,j＝7.7hz,2h),7.40(d,j＝7.8hz,2h),7.21(m,3h),7.00(m,2h),4.94(m,2h),4.92(s,1h),4.75(dd,j＝5.6,3.1hz,1h),3.93(s,3h),3.42(dd,j＝14.0,5.4hz,1h),3.19(dd,j＝13.9,3.1hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.83,168.56,166.58,149.50,139.07,134.36,130.73,130.18,129.61,128.44,127.57,127.18,96.43,82.88,72.54,60.44,52.39,35.77,28.34.11.2、(51321)化合物的制備以中間體25(169mg,0.39mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例11：白色固體93mg，產(chǎn)率為72％。分子量：337.38.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.09(d,j＝8.0hz,2h),7.45(d,j＝8.0hz,2h),7.25(m,5h),5.72(s,1h),5.04(m,3h),4.31(dd,j＝9.2,3.7hz,1h),3.94(s,3h),3.24(dd,j＝13.6,3.8hz,1h),2.70(dd,j＝13.6,9.1hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.85,173.33,166.65,139.68,136.52,130.59,130.16,129.26,128.84,127.49,127.22,95.48,72.48,58.84,52.39,38.85.實施例12、(51332)化合物的制備12.1、(51191，中間體26)的制備采用中間體15相同的合成方法，以4-氰基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體26為無色油狀物(236mg,產(chǎn)率58％)。分子量：404.47。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.69(d,j＝8.0hz,2h),7.41(d,j＝8.0hz,2h),7.20(m,3h),6.99(m,2h),4.35(m,2h),4.91(s,1h),4.76(dd,j＝5.7,3.1hz,1h),3.40(dd,j＝14.0,5.6hz,1h),3.21(dd,j＝14.1,3.1hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.63,168.34,149.40,139.35,134.36,132.67,129.51,128.45,128.01,127.18,118.33,112.79,96.59,82.98,71.95,60.38,35.86,28.31.12.2、(51332)化合物的制備以中間體26(236mg,0.58mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例12：白色固體88mg，產(chǎn)率為49％。分子量：304.35.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.72(d,j＝7.9hz,2h),7.48(d,j＝7.9hz,2h),7.30(m,3h),7.20(d,j＝7.2hz,2h),5.54(s,1h),5.04(m,3h),4.32(dd,j＝9.5,3.7hz,1h),3.24(dd,j＝13.7,3.8hz,1h),2.69(dd,j＝13.6,9.3hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.58,172.96,139.94,136.47,132.74,129.21,128.95,128.03,127.35,118.44,112.82,95.73,71.99,58.82,38.96.實施例13、(51081)化合物的制備13.1、(51021，中間體27)的制備采用中間體15相同的合成方法，以4-硝基芐溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體27為無色油狀物(211mg,產(chǎn)率50％)。分子量：424.45。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.26(d,j＝8.5hz,2h),7.46(d,j＝8.4hz,2h),7.22(m,3h),7.02(m,2h),5.00(m,2h),4.95(s,1h),4.79(dd,j＝5.4,3.2hz,1h),3.41(dd,j＝14.0,5.7hz,1h),3.24(dd,j＝14.0,3.0hz,1h),1.60(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.66,168.29,149.50,148.24,141.24,134.48,129.57,128.56,128.12,127.29,124.17,96.73,83.11,71.69,60.47,36.02,28.38.13.2、(51081)化合物的制備以中間體27(211mg,0.50mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例13：白色固體110mg，產(chǎn)率為68％。分子量：324.34.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.28(d,j＝8.4hz,2h),7.54(d,j＝8.4hz,2h),7.26(m,5h),5.84(s,1h),5.09(m,2h),5.08(s,1h),4.35(dd,j＝9.0,3.9hz,1h),3.24(dd,j＝13.7,4.0hz,1h),2.74(dd,j＝13.7,8.9hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.53,173.05,148.14,141.85,136.37,129.24,128.88,128.10,127.29,124.12,95.82,71.66,58.78,38.85.實施例14、(51111)化合物的制備14.1、(51051，中間體28)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2-溴甲基萘替代4-氟芐溴，制備得到中間體28為無色油狀物(70mg,產(chǎn)率16％)。分子量：429.52。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.89(m,3h),7.81(s,1h),7.55(m,2h),7.46(d,j＝8.4hz,1h),7.19(s,3h),7.02(d,j＝4.3hz,2h),5.06(m,2h),4.99(s,1h),4.76(s,1h),3.45(dd,j＝13.9,5.2hz,1h),3.19(dd,j＝13.7,2.2hz,1h),1.61(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.03,168.81,149.56,134.35,133.47,133.18,131.58,129.69,128.89,128.36,128.14,127.90,127.57,127.12,126.85,126.76,125.41,96.26,82.75,73.59,60.48,35.65,28.34.14.2、(51111)化合物的制備以中間體28(140mg,0.33mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例14：白色固體94mg，產(chǎn)率為88％。分子量：329.40。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.87(m,4h),7.53(m,3h),7.25(m,5h),5.55(s,1h),5.14(m,2h),5.13(s,1h),4.30(dd,j＝9.4,3.5hz,1h),3.25(dd,j＝13.6,3.6hz,1h),2.67(dd,j＝13.6,9.3hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.17,173.55,136.70,133.47,133.24,132.15,129.29,128.88,128.85,128.15,127.93,127.47,127.20,126.78,126.74,125.43,95.24,73.55,58.95,38.93.實施例15、(51311)化合物的制備15.1、(51171，中間體29)的制備采用中間體15相同的合成方法，以1-溴甲基萘替代4-氟芐溴，制備得到中間體29為無色油狀物(206mg,產(chǎn)率48％)。分子量：429.52。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.96(m,3h),7.61(m,2h),7.50(m,2h),7.17(m,3h),6.94(m,2h),5.33(m,2h),5.08(s,1h),4.73(dd,j＝5.1,3.0hz,1h),3.43(dd,j＝14.0,5.2hz,1h),3.08(dd,j＝14.0,3.0hz,1h).1.60(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.91,168.79,149.47,134.17,133.84,131.45,130.16,129.73,129.65,128.98,128.24,127.88,127.01,126.97,126.34,125.28,123.31,96.21,82.64,71.79,60.41,35.38,28.28.15.2、(51311)化合物的制備以中間體29(206mg,0.48mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例15：白色固體122mg，產(chǎn)率為77％。分子量：329.40。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.95(m,3h),7.53(m,4h),7.20(m,5h),5.71(s,1h),5.41(m,2h),5.23(s,1h),4.26(dd,j＝9.2,3.5hz,1h),3.18(dd,j＝13.6,3.5hz,1h),2.62(dd,j＝13.6,9.3hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.14,173.63,136.63,133.92,131.64,130.26,130.12,129.28,129.01,128.75,127.83,127.12,126.96,126.33,125.33,123.47,95.16,71.94,58.96,38.75.實施例16、(51301)化合物的制備16.1、(51161，中間體30)的制備采用中間體15相同的合成方法，以肉桂基溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體30為無色油狀物(124mg,產(chǎn)率31％)。分子量：405.49.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.38(m,5h),7.20(m,3h),7.04(m,2h),6.70(d,j＝15.9hz,1h),6.31(dt,j＝15.9,6.3hz,1h),4.89(s,1h),4.71(dd,j＝5.2,3.1hz,1h),4.57(m,2h),3.46(dd,j＝14.0,5.2hz,1h),3.17(dd,j＝14.0,3.1hz,1h).1.61(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.85,168.79,149.51,135.58,135.53,134.23,129.66,128.75,128.60,128.26,127.04,126.76,121.26,95.89,82.65,72.00,60.36,35.51,28.28.16.2、(51301)化合物的制備以中間體30(124mg,0.3mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例16：白色固體70mg，產(chǎn)率為75％。分子量：305.38.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.31(m,10h),6.72(d,j＝16.0hz,1h),6.34(dd,j＝15.4,7.0hz,1h),5.79(s,1h),5.04(s,1h),4.62(m,2h),4.26(d,j＝8.9hz,1h),3.22(d,j＝13.7hz,1h),2.68(dd,j＝13.6,8.9hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.05,173.76,136.60,135.84,135.26,129.32,128.81,128.75,128.56,127.12,126.82,121.91,94.88,72.02,58.88,38.76.實施例17、(51151)化合物的制備17.1、(51061，中間體31)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2-溴甲基噻吩替代4-氟芐溴，制備得到中間體31為無色油狀物(124mg,產(chǎn)率32％)。分子量：386.48.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.43(d,j＝4.9hz,1h),7.17(m,4h),7.06(m,1h),6.99(m,2h),5.05(m,2h),4.94(s,1h),4.70(m,1h),3.45(dd,j＝14.0,4.9hz,1h),3.11(dd,j＝14.0,2.5hz,1h),1.60(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.36,168.69,149.54,135.87,134.18,129.72,129.02,128.36,127.84,127.26,127.11,96.24,82.78,67.64,60.42,35.39,28.35.17.2、(51151)化合物的制備以中間體31(124mg,0.32mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例17：白色固體71mg，產(chǎn)率為77％。分子量：285.36.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.40(d,j＝5.0hz,1h),7.26(m,3h),7.17(m,3h),7.05(t,j＝3.9hz,1h),5.71(s,1h),5.14(m,2h),5.09(s,1h),4.25(d,j＝6.5hz,1h),3.20(dd,j＝13.6,2.6hz,1h),2.65(dd,j＝13.5,9.2hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.53,173.48,136.60,136.55,129.32,128.78,128.61,127.53,127.17,127.15,95.24,67.71,58.86,38.67.實施例18、(51571)化合物的制備18.1、(51521，中間體32)的制備采用中間體15相同的合成方法，以β-溴苯乙烷替代4-氟芐溴，制備得到中間體32為無色油狀物(339mg,產(chǎn)率86％)。分子量：393.48。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.36(m,2h),7.26(m,3h),7.10(m,3h),6.68(m,2h),4.76(s,1h),4.64(dd,j＝5.2,3.0hz,1h),4.13(m,1h),3.95(m,1h),3.38(dd,j＝13.9,5.2hz,1h),3.07(t,j＝6.5hz,2h),3.00(dd,j＝13.9,3.0hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.03,168.83,149.50,137.26,134.08,129.54,129.07,128.76,128.20,127.09,126.90,95.44,82.59,72.06,60.27,35.38,35.15,28.30.18.2、(51571)化合物的制備以中間體32(339mg,0.86mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例18：白色固體207mg，產(chǎn)率為82％。分子量：293.37.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(m,2h),7.21(m,6h),7.03(d,j＝6.9hz,2h),6.42(s,1h),4.88(s,1h),4.19(dd,j＝8.2,3.8hz,1h),4.08(m,2h),3.06(m,3h),2.62(dd,j＝13.7,8.1hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.39,137.32,136.21,129.33,129.02,128.73,128.53,126.96,126.91,94.40,71.89,58.79,38.18,35.10.實施例19、(51731)化合物的制備19.1、(51711，中間體33)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2-(2-溴乙基)吡啶替代4-氟芐溴，制備得到中間體33為無色油狀物(201mg,產(chǎn)率51％)。分子量：394.47。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.60(d,j＝4.0hz,1h),7.65(td,j＝7.6,1.9hz,1h),7.15(m,5h),6.72(dd,j＝6.9,2.6hz,2h),4.82(s,1h),4.60(dd,j＝5.4,2.9hz,1h),4.29(m,2h),3.34(dd,j＝13.8,5.3hz,1h),3.23(m,2h),2.96(dd,j＝13.9,2.9hz,1h),1.57(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.02,168.88,157.27,149.74,149.54,136.68,134.07,129.53,128.25,126.98,123.92,122.15,95.63,82.61,70.52,60.23,37.26,35.38,28.31.19.2、(51731)化合物的制備以中間體33(200mg,0.51mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例19：白色固體86mg，產(chǎn)率為58％。分子量：294.35.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ8.59(d,j＝4.3hz,1h),7.65(td,j＝7.7,1.9hz,1h),7.22(m,5h),7.06(m,2h),5.95(s,1h),4.96(s,1h),4.34(m,2h),4.18(dd,j＝8.8,3.8hz,1h),3.26(t,j＝6.6hz,2h),3.05(dd,j＝13.7,3.8hz,1h),2.56(dd,j＝13.7,8.6hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.32,174.13,157.43,149.69,136.70,136.39,129.27,128.66,127.03,123.78,122.06,94.49,70.46,58.73,38.45,37.29.實施例20、(51551)化合物的制備20.1、(51501，中間體34)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2-環(huán)己基乙基溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體34為無色油狀物(341mg,產(chǎn)率85％)。分子量：399.53。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.20(m,3h),7.00(m,2h),4.78(s,1h),4.66(dd,j＝5.4,3.0hz,1h),3.89(m,2h),3.43(dd,j＝14.0,5.3hz,1h),3.13(dd,j＝14.0,3.0hz,1h),1.68(m,7h),1.59(s,9h),1.45(m,1h),1.25(m,3h),0.96(m,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.51,169.09,149.65,134.42,129.65,128.31,127.08,95.28,82.63,69.68,60.38,35.99,35.59,34.34,33.36,33.06,28.37,26.49,26.25,26.20.20.2、(51551)化合物的制備以中間體34(341mg,0.85mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例20：白色固體216mg，產(chǎn)率為84％。分子量：299.41.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(m,5h),5.75(s,1h),4.93(s,1h),4.21(dd,j＝9.0,3.6hz,1h),3.96(m,2h),3.18(dd,j＝13.7,3.7hz,1h),2.65(dd,j＝13.6,9.0hz,1h),1.71(m,7h),1.46(m,1h),1.25(m,3h),0.97(m,2h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.65,174.03,136.69,129.30,128.71,127.08,94.07,69.70,58.79,38.75,35.97,34.51,33.34,33.18,26.52,26.26.實施例21、(51541)化合物的制備21.1、(51491，中間體35)的制備采用中間體15相同的合成方法，以2-苯氧乙基溴替代4-氟芐溴，制備得到中間體35為無色油狀物(309mg,產(chǎn)率75％)。分子量：409.48。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(t,j＝7.7hz,2h),7.15(m,3h),7.05(m,3h),6.95(d,j＝8.1hz,2h),4.86(s,1h),4.71(dd,j＝5.1,3.0hz,1h),4.30(m,3h),4.17(m,1h),3.46(dd,j＝13.9,5.1hz,1h),3.16(dd,j＝13.9,2.9hz,1h),1.61(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.93,168.70,158.22,149.57,134.15,129.79,128.34,127.11,121.61,114.57,95.93,82.78,69.94,65.32,60.39,35.41,28.37.21.2、(51541)化合物的制備以中間體35(309mg,0.76mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例21：白色固體215mg，產(chǎn)率為92％。分子量：309.37。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(t,j＝7.8hz,2h),7.21(m,5h),6.97(m,3h),6.25(s,1h),4.99(s,1h),4.27(m,5h),3.15(dd,j＝13.7,3.8hz,1h),2.73(dd,j＝13.7,8.0hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.97,173.75,158.32,136.17,129.69,129.44,128.53,126.98,121.48,114.64,94.90,69.79,65.52,58.59,38.27.實施例22、(51561)化合物的制備22.1、(51511，中間體36)的制備采用中間體15相同的合成方法，以1-溴戊烷替代4-氟芐溴，制備得到中間體36為無色油狀物(299mg,產(chǎn)率83％)。分子量：359.47。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.19(m,3h),6.99(m,2h),4.78(s,1h),4.66(dd,j＝5.4,3.0hz,1h),3.85(m,2h),3.42(dd,j＝14.0,5.3hz,1h),3.14(dd,j＝14.0,3.0hz,1h),1.78(m,2h),1.59(s,9h),1.40(m,4h),0.94(t,j＝6.9hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.50,169.06,149.62,134.40,129.64,128.30,127.07,95.26,82.60,71.68,60.36,35.61,28.35,28.33,28.07,22.36,14.01.22.2、(51561)化合物的制備以中間體36(299mg,0.83mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例22：白色固體210mg，產(chǎn)率為97％。分子量：259.35。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.24(m,5h),5.74(s,1h),4.93(s,1h),4.22(dd,j＝9.2,3.6hz,1h),3.93(m,2h),3.19(dd,j＝13.7,3.6hz,1h),2.65(dd,j＝13.6,9.0hz,1h),1.78(m,2h),1.41(m,4h),0.95(t,j＝6.8hz,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.67,174.04,136.72,129.29,128.72,127.07,94.05,71.63,58.81,38.79,28.35,28.10,22.42,14.06.實施例23、(60231)化合物的制備23.1、(中間體10)的制備將l-酪氨酸(10g，55.2mmol)溶于300ml1,4-二氧六環(huán)和水的混合溶液中(v/v1:1)，室溫下依次加入三乙胺(11.2g，110.7mmol)和二碳酸二叔丁酯(13.3g，60.9mmol)，室溫下攪拌10小時，tlc監(jiān)測反應完畢。減壓蒸去1,4-二氧六環(huán)，并加入500ml二氯甲烷，攪拌下滴加2n鹽酸水溶液至水層ph值為5左右，分取有機層并用200ml飽和食鹽水洗1次，無水硫酸鎂干燥，過濾并減壓蒸干溶劑得粗產(chǎn)品，產(chǎn)率99％，無需進行進一步純化即可進行下一步反應。23.2、(中間體11)的制備將中間體10(7.7g，27.4mmol)溶于100mln,n-二甲基甲酰胺中，冰浴下攪拌10分鐘，依次加入碳酸鉀(8.3g，60.1mmol)和碘甲烷(7.8g，55.0mmol)，冰浴下攪拌30分鐘，室溫攪拌過夜。將反應液倒入300ml乙酸乙酯中，水洗2次(300ml*2)，飽和食鹽水洗1次(100ml*1)，無水硫酸鈉干燥，過濾，蒸干溶劑得粗產(chǎn)品，柱層析分離純化得目標產(chǎn)物，產(chǎn)率89％。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.03(d,j＝8.6hz,2h),6.82(d,j＝8.7hz,2h),4.96(d,j＝8.3hz,1h),4.54(m,1h),3.78(s,3h),3.71(s,3h),3.02(m,2h),1.42(m,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ172.56,158.75,155.22,130.40,128.03,114.08,80.02,55.35,54.65,52.33,37.58,28.43.23.3、(中間體12)的制備將中間體11(8.5g，27.5mmol)溶于200ml甲醇和水的混合溶液中(v/v1:1),室溫下分批加入氫氧化鈉(4.4g，110mmol)，室溫攪拌過夜。加入10％鹽酸水溶液調節(jié)ph值至5左右，500ml二氯甲烷萃取，有機層用100ml飽和食鹽水洗1次，無水硫酸鈉干燥，過濾，減壓蒸去溶劑得目標產(chǎn)物，產(chǎn)率95％。無需進行進一步純化即可進行下一步反應。23.4、(中間體13)的制備采用中間體2相同的合成方法，產(chǎn)率85％，產(chǎn)物無需進行進一步純化即可進行下一步反應。23.5、(中間體14)的制備采用中間體3相同的合成方法，產(chǎn)率90％。23.6、(60171，中間體37)的制備將中間體14(1.97g,6.2mmol)溶于30ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(937mg,6.78mmol)，1-溴甲基萘(1.5g,6.78mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體37為無色油狀物(522mg，產(chǎn)率18％)。分子量：459.54。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.99(d,j＝8.2hz,1h),7.94(d,j＝7.7hz,2h),7.53(m,4h),6.82(d,j＝8.5hz,2h),6.69(d,j＝8.5hz,2h),5.36(dd,j＝66.5,11.5hz,2h),5.08(s,1h),4.69(dd,j＝5.1,2.9hz,1h),3.75(s,3h),3.37(dd,j＝14.2,5.1hz,1h),3.02(dd,j＝14.2,3.0hz,1h),1.60(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.02,168.95,158.59,149.50,133.89,131.50,130.65,130.21,129.79,129.02,127.94,127.01,126.39,126.04,125.32,123.36,113.69,96.30,82.65,71.82,60.60,55.19,34.49,28.33.23.7、(60231)化合物的制備以中間體37(522mg,1.34mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例23：白色固體268mg，產(chǎn)率為66％。分子量：359.43.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.99(d,j＝8.2hz,1h),7.93(d,j＝7.5hz,2h),7.55(m,4h),7.06(d,j＝8.5hz,2h),6.80(d,j＝8.6hz,2h),5.65(d,j＝9.5hz,1h),5.42(m,2h),5.22(s,1h),4.23(dd,j＝9.1,3.5hz,1h),3.77(s,3h),3.12(dd,j＝13.8,3.6hz,1h),2.59(dd,j＝13.8,9.1hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.22,173.66,158.75,133.94,131.66,130.31,130.28,130.12,129.01,128.52,127.82,126.97,126.34,125.34,123.49,114.17,95.15,71.91,59.14,55.36,37.88.實施例24、(60201)化合物的制備24.1、(60141，中間體38)的制備將中間體14(1.16g,3.6mmol)溶于20ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(552mg,4.0mmol)，4-氟芐溴(755mg,4.0mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體38為無色油狀物(324mg，產(chǎn)率21％)。分子量：427.47。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.34(m,2h),7.11(t,j＝8.6hz,2h),6.88(d,j＝8.6hz,2h),6.72(d,j＝8.6hz,2h),4.91(s,1h),4.85(m,2h),4.66(dd,j＝5.1,2.9hz,1h),3.74(s,3h),3.38(dd,j＝14.2,5.2hz,1h),3.07(dd,j＝14.2,3.0hz,1h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.84,168.86,163.07(d,j＝248.3hz),158.61,149.46,130.56,130.24(d,j＝8.4hz),130.08(d,j＝3.4hz),126.05,115.94(d,j＝21.8hz),113.74,96.25,82.73,72.63,60.51,55.18,34.58,28.31.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.18.24.2、(60201)化合物的制備以中間體38(324mg,0.76mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例24：白色固體140mg，產(chǎn)率為56％。分子量：327.36.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37(m,2h),7.11(m,4h),6.83(d,j＝8.2hz,2h),5.44(s,1h),5.06(s,1h),4.93(m,1h),4.22(dd,j＝9.4,3.5hz,1h),3.79(s,3h),3.15(dd,j＝13.8,3.7hz,1h),2.59(dd,j＝13.8,9.2hz,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.97,173.78,162.98(d,j＝247.9hz),158.67,130.62(d,j＝3.3hz),130.29,130.06(d,j＝8.3hz),128.29,115.86(d,j＝21.7hz),114.07,95.20,72.53,58.99,55.31,37.68.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.59.實施例25、(60111)化合物的制備25.1、(60051，中間體39)的制備將中間體14(638mg,2.0mmol)溶于10ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(304mg,2.2mmol)，4-乙酰氧基芐溴(504mg,2.2mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體39為無色油狀物(307mg，產(chǎn)率33％)。分子量：467.52.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.38(d,j＝8.4hz,2h),7.15(d,j＝8.5hz,2h),6.88(d,j＝8.6hz,2h),6.73(d,j＝8.6hz,2h),4.92(s,1h),4.88(m,2h),4.67(dd,j＝5.1,2.9hz,1h),3.75(s,3h),3.39(dd,j＝14.2,5.1hz,1h),3.08(dd,j＝14.2,3.0hz,1h),2.32(s,3h),1.59(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ174.90,169.37,168.85,158.68,151.19,149.53,131.80,130.61,129.41,126.09,122.19,113.81,96.30,82.74,72.70,60.57,55.23,34.62,28.35,21.22.25.2、(60111)化合物的制備以中間體39(307mg,0.66mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例25：白色固體160mg，產(chǎn)率為66％。分子量：367.40.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.40(d,j＝8.4hz,2h),7.14(d,j＝8.4hz,2h),7.09(d,j＝8.5hz,1h),6.82(d,j＝8.5hz,1h),5.64(s,1h),5.05(s,1h),4.96(m,2h),4.22(dd,j＝9.0,3.6hz,1h),3.78(s,3h),3.14(dd,j＝13.8,3.6hz,1h),2.62(dd,j＝13.8,9.0hz,1h),2.32(s,3h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.03,173.56,169.43,158.77,151.06,132.38,130.28,129.29,128.45,122.12,114.20,95.19,72.63,59.04,55.37,37.87,21.25.實施例26、(60241)化合物的制備26.1、(中間體4)的制備采用中間體1相同的合成方法，以l-亮氨酸為原料，產(chǎn)率99％，產(chǎn)物無需進行進一步純化即可進行下一步反應。26.2、(中間體5)的制備采用中間體2相同的合成方法，產(chǎn)率82％，產(chǎn)物無需進行進一步純化即可進行下一步反應。26.3、(中間體6)的制備采用中間體3相同的合成方法，粗產(chǎn)物經(jīng)過柱層析分離純化得目標產(chǎn)物，產(chǎn)率77％。26.4、(60181，中間體40)的制備將中間體6(400mg,1.57mmol)溶于5ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(238mg,1.72mmol)，1-溴甲基萘(381mg,1.72mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體40為無色油狀物(138mg，產(chǎn)率22％)。分子量：395.5.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.90(m,3h),7.51(m,4h),5.40(s,2h),5.27(s,1h),4.48(dd,j＝6.8,3.0hz,1h),1.76(m,3h),1.53(s,9h),0.82(t,j＝6.4hz,6h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ177.24,169.38,149.27,133.82,131.46,130.17,129.73,128.92,127.82,126.87,126.28,125.19,123.32,95.07,82.50,72.12,59.35,39.34,28.23,23.91,23.79,23.02.26.5、(60241)化合物的制備以中間體40(138mg,0.35mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例26：白色固體65mg，產(chǎn)率為63％。分子量：295.38.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.92(m,3h),7.52(m,4h),6.63(s,1h),5.40(s,2h),5.23(s,1h),4.12(dd,j＝9.8,3.5hz,1h),1.76(m,1h),1.64(m,1h),1.40(m,1h),0.91(d,j＝6.3hz,6h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ177.80,174.53,133.91,131.63,130.42,130.00,128.95,127.62,126.86,126.28,125.30,123.51,94.42,71.88,56.53,41.57,25.61,23.61,21.88.實施例27、(60211)化合物的制備27.1、(60151，中間體41)的制備將中間體6(1.0g,3.92mmol)溶于20ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(595mg,4.31mmol)，4-氟芐溴(815mg,4.31mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體41為無色油狀物(304mg，產(chǎn)率21％)。分子量：363.43.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(m,2h),7.07(m,2h),5.10(s,1h),4.95(m,2h),4.48(dd,j＝6.8,3.1hz,1h),1.78(m,3h),1.51(s,9h),0.87(d,j＝6.3hz,6h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ177.09,169.27,163.00(d,j＝248.1hz),149.28,130.19(d,j＝3.4hz),129.92(d,j＝8.4hz),115.90(d,j＝21.7hz).95.14,82.60,72.73,59.28,39.46,28.24,24.02,23.82,23.08.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.38.27.2、(60211)化合物的制備以中間體41(304mg,0.84mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例27：白色固體156mg，產(chǎn)率為71％。分子量：263.31.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(m,2h),7.08(t,j＝8.4hz,2h),6.70(s,1h),5.06(s,1h),4.93(m,2h),4.10(dd,j＝9.9,3.4hz,1h),2.00(s,1h),1.76(m,1h),1.65(m,1h),1.39(m,1h),0.94(d,j＝6.6hz,6h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ177.60,174.52,162.97(d,j＝247.8hz),130.78(d,j＝3.2hz),129.89(d,j＝8.3hz),115.85(d,j＝21.8hz),94.43,72.49,56.44,41.56,25.59,23.65,21.87.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.84.實施例28、(60121)化合物的制備28.1、(60081，中間體42)的制備將中間體6(1.0g,3.92mmol)溶于20ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(595mg,4.31mmol)，4-乙酰氧基芐溴(988mg,4.31mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體42為無色油狀物(406mg，產(chǎn)率26％)。分子量：403.48。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35(d,j＝8.5hz,2h),7.12(d,j＝8.5hz,2h),5.12(s,1h),4.95(m,2h),4.49(dd,j＝6.8,3.0hz,1h),2.30(s,3h),1.80(m,3h),1.53(s,9h),0.89(d,j＝6.3hz,6h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ177.19,169.42,169.37,151.05,149.30,131.89,129.13,122.15,95.16,82.65,72.81,59.30,39.48,28.27,24.07,23.83,23.10,21.23.28.2、(60121)化合物的制備以中間體42(406mg,1.01mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例28：白色固體164mg，產(chǎn)率為54％。分子量：303.6.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37(d,j＝8.3hz,2h),7.11(d,j＝8.3hz,2h),6.74(s,1h),5.06(s,1h),4.94(m,2h),4.10(dd,j＝9.9,3.5hz,2h),2.30(s,3h),1.78(m,1h),1.65(m,1h),1.39(m,1h),0.95(d,j＝6.4hz,6h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ177.61,174.47,169.42,150.95,132.51,129.12,122.04,94.39,72.52,56.41,41.57,25.58,23.65,21.87,21.22.實施例29、(60251)化合物的制備29.1、(中間體7)的制備采用中間體1相同的合成方法，以l-蛋氨酸為原料，產(chǎn)率99％，產(chǎn)物無需進行進一步純化即可進行下一步反應。29.2、(中間體8)的制備采用中間體2相同的合成方法，產(chǎn)率80％，產(chǎn)物無需進行進一步純化即可進行下一步反應。29.3、(中間體9)的制備采用中間體3相同的合成方法，粗產(chǎn)物經(jīng)過柱層析分離純化得目標產(chǎn)物，產(chǎn)率86％。29.4、(60191，中間體43)的制備將中間體9(1.16g,4.24mmol)溶于20ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(645mg,4.67mmol)，1-溴甲基萘(1.03mg,4.67mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體43為無色油狀物(469mg，產(chǎn)率27％)。分子量：413.53。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.89(m,3h),7.50(m,4h),5.42(m,2h),5.29(s,1h),4.55(dd,j＝5.4,2.7hz,1h),2.29(m,2h),2.13(m,2h),1.91(s,3h),1.51(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.38,169.09,149.14,133.75,131.36,130.24,129.48,128.92,127.99,126.99,126.29,125.11,123.16,95.70,82.75,72.21,59.30,29.34,28.13,27.29,15.54.29.5、(60251)化合物的制備以中間體43(469mg,1.13mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例29：白色固體215mg，產(chǎn)率為61％。分子量：313.42.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.91(m,3h),7.52(m,4h),7.05(s,1h),5.40(m,2h),5.26(s,1h),4.22(dd,j＝8.0,3.8hz,1h),2.50(m,2h),2.08(m,1h),2.00(s,3h),1.81(m,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.47,174.59,133.85,131.56,130.18,130.07,128.96,127.79,126.92,126.29,125.25,123.40,94.97,71.98,57.15,31.39,29.96,15.50.實施例30、(60221)化合物的制備30.1、(60161，中間體44)的制備將中間體9(920mg,3.37mmol)溶于15ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(512mg,3.71mmol)，4-氟芐溴(700mg,3.70mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體44為無色油狀物(307mg，產(chǎn)率24％)。分子量：381.46。1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.32(m,2h),7.07(m,2h),5.13(s,1h),4.97(m,2h),4.56(dd,j＝5.4,2.9hz,1h),2.27(m,4h),2.02(s,3h),1.51(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.38,168.99,163.05(d,j＝248.3hz),149.24,130.06(d,j＝8.6hz),130.04(d,j＝3.2hz),115.93(d,j＝21.8hz),95.78,82.91,72.88,59.28,29.37,28.20,27.51,15.74.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.10.30.2、(60221)化合物的制備以中間體44(307mg,0.80mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例30：白色固體138mg，產(chǎn)率為61％。分子量：281.35.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.33(dd,j＝8.3,5.2hz,2h),7.07(t,j＝8.5hz,2h),5.08(s,1h),4.94(m,2h),4.21(dd,j＝8.0,3.8hz,1h),2.54(m,2h),2.12(m,1h),2.07(s,3h),1.81(m,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.34,174.48,162.99(d,j＝247.7hz),130.64(d,j＝3.3hz),129.95(d,j＝8.4hz),115.87(d,j＝21.7hz),95.04,72.61,57.06,31.45,30.10,15.61.19fnmr(376mhz,cdcl3)δ-112.64.實施例31、(60131)化合物的制備31.1、(60091，中間體45)的制備將中間體9(400mg,1.47mmol)溶于5ml乙腈中，室溫下依次加入k2co3(223mg,1.62mmol)，4-乙酰氧基芐溴(369mg,1.62mmol)，回流反應5小時。冷卻至室溫，過濾除去固體，蒸干濾液，柱層析純化得中間體45為無色油狀物(160mg，產(chǎn)率26％)。分子量：421.5.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.35(d,j＝8.5hz,2h),7.11(d,j＝8.5hz,2h),5.14(s,1h),4.98(m,2h),4.57(dd,j＝5.3,2.9hz,1h),2.37(m,2h),2.29(s,3h),2.25(m,1h),2.16(m,1h),2.02(s,3h),1.52(s,9h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ175.42,169.33,169.09,151.11,149.23,131.68,129.25,122.15,95.79,82.92,72.94,59.29,29.33,28.21,27.48,21.19,15.76.31.2、(60131)化合物的制備以中間體45(160mg,0.38mmol)為原料，采用實施例1相同的合成方法，制備得到實施例31：白色固體68mg，產(chǎn)率為56％。分子量：321.39.1hnmr(400mhz,cdcl3)δ7.37(d,j＝8.2hz,2h),7.12(d,j＝8.4hz,2h),6.77(s,1h),5.09(s,1h),4.96(m,2h),4.21(dd,j＝8.1,3.7hz,1h),2.55(m,2h),2.30(s,3h),2.12(m,1h),2.08(s,3h),1.82(m,1h).13cnmr(100mhz,cdcl3)δ176.36,174.33,169.40,151.02,132.35,129.17,122.09,95.02,72.67,57.04,31.40,30.15,21.23,15.60.生物活性測定法的實施例本發(fā)明化合物的活性測試采用本領域已知的方法測定,所使用的陽性對照為fda批準的治療老年癡呆癥藥物鹽酸美金剛(購自sigma，貨號m9292)，其余所使用的化合物按照上述實施例中公開的方法制備。實施例32果蠅活性測定果蠅具有經(jīng)典的學習記憶范式，稱為巴甫洛夫嗅覺相關瞬間記憶。在一個訓練項目期間,將約100只果蠅的組順序暴露于兩種氣味3-辛醇,或4-甲基環(huán)己醇60秒,在兩者之間暴露于新鮮空氣45秒。在暴露于第一種氣味期間使果蠅進行足部電擊(1.5秒脈沖3.5秒間隔，60v)，在暴露于第二種氣味期間不進行電擊。為了檢測“瞬間記憶”(又稱為“學習”),在訓練至t迷宮的選擇點之后立即轉移果蠅并強迫在兩種氣味之間選擇。然后,在它們各自的t迷宮臂中將果蠅捕獲、麻醉和計數(shù)。從該組果蠅在t迷宮中的分布計算行為指數(shù)。50：50的分布表明果蠅沒有任何學習(pi＝0)，而0：100的分布表明果蠅具有“完美學習”(pi＝100)。在各個試驗中對照組與實驗組年齡匹配。候選化合物藥效評價：選取轉入且表達人源abeta42基因的果蠅，稱之為疾病對照果蠅；選取含有但不表達人員abeta42基因的果蠅，稱之為健康對照。在果蠅羽化后的第二天，選取雄性果蠅，并從第三天開始，將待測試的藥物(100um，每100只果蠅喂食50ul)喂食給果蠅，連續(xù)7天，每天4個小時，在第十天對果蠅進行上述記憶測試。圖1為化合物51311,50561,51351,51151,51121,51332,51081,51091,51221,51101,51071,51131,51321,51341,51111,51301對老年癡呆果蠅記憶力改善作用圖。圖中誤差線為標準誤差，***,p<0.001；**,p<0.01，*,p<0.05；n.s,無統(tǒng)計學顯著性差異。由圖1可知：化合物51311，50561，51351，51151和51121具有最好的改善果蠅學習記憶的能力。圖2為化合物60111,60241,60201,51471,51541,60221,60131,51551,51571,60251,51731,51561,60121,60231,60211對老年癡呆果蠅記憶力改善作用圖。圖中誤差線為標準誤差，***,p<0.001；**,p<0.01，*,p<0.05；n.s,無統(tǒng)計學顯著性差異。由圖2可知，化合物60111具有很好的改善果蠅學習記憶的能力。圖3為化合物50561，51311，51351,51151,51121改善老年癡呆果蠅記憶力的量效關系圖。由圖3可知，這五種化合物(50561，51311，51351,51151,51121)隨著劑量的升高，活性均有一定程度的增加，并最終達到或超過陽性化合物鹽酸美金剛的水平。實施例33小鼠活性測定以化合物50561為例，進行小鼠活性測定。小鼠品系含有app/ps1的轉基因小鼠購自美國jackson實驗室。轉基因小鼠與b6/c3背景的小鼠雜交，后代自交并進行基因分型，單籠飼養(yǎng)至約8個月。在測試前一周，每天通過灌胃方式對小鼠給予指定劑量的藥物，之后通過水迷宮測試衡量小鼠的空間記憶能力。將直徑為1.5米的水箱充滿25度恒溫的水，添加脫脂·奶使得水面不透明，并將一個透明平臺放置在水箱的特定象限，并提供遠端暗示作為空間參考。將小鼠放入水中，使之游泳直至其找到水面下的平臺位置。整個過程由軟件跟蹤并記錄從下水到找到平臺的時間，稱之為潛伏期。如果小鼠在60秒內仍然未找到平臺，則人工將其引導至平臺上，并將潛伏期記錄為60秒。每天對每只小鼠進行四輪上述測試，每輪測試間隔1個小時使小鼠休息。每只小鼠當日的潛伏期為四輪測試的潛伏期平均值。圖4為化合物50561(10mg/kg)改善ad小鼠空間學習記憶。a為小鼠給藥操作示意圖；b為小鼠水迷宮測試潛伏期；c-d為訓練前后小鼠在目標象限的停留時間百分比；e為訓練前后小鼠穿越平臺的次數(shù)；f為訓練前后小鼠游泳速度的變化。圖中誤差線為標準誤差，***,p<0.001；**,p<0.01，*,p<0.05；n.s,無統(tǒng)計學顯著性差異。由圖4可知：在10mg/kg的劑量下，50561具有良好的挽救小鼠空間記憶的能力。圖5為化合物50561(1,0.1mg/kg)不改善ad小鼠空間學習記憶。a為小鼠給藥操作示意圖；b為小鼠水迷宮測試潛伏期；c-d為訓練前后小鼠在目標象限的停留時間百分比；e為訓練前后小鼠穿越平臺的次數(shù)；f訓練前后小鼠游泳速度的變化。由圖5可知：在1mg/kg和0.1mg/kg下，化合物50561不具有挽救小鼠空間記憶的能力。實施例34以化合物50561為例，進行安全性評估。化合物50561的安全性評估1：鉀離子通道阻斷快速激活的人延遲整流外向鉀電流(ikr)主要由herg離子通道介導，參與人類心肌細胞復極化。藥物阻斷這一電流是導致臨床上出現(xiàn)qt間期延長綜合征，甚至急性心律紊亂乃至猝死的主要原因。本實驗選取穩(wěn)定細胞株hek-herg(來源于軍事醫(yī)學科學院)，采用全細胞膜片鉗技術記錄herg電流。取細胞懸液加于35mm的培養(yǎng)皿中，置于倒置顯微鏡載物臺上。待細胞貼壁后，用細胞外液灌流，流速為1–2ml/min。玻璃微電極由微電極拉制儀兩步拉制，充灌電極內液后其入水電阻值為2-5mω。建立全細胞記錄模式后，保持鉗制電位為-80mv。給予去極化電壓至+60mv持續(xù)850ms，然后復極化至-50mv維持1275ms引出herg尾電流。電流穩(wěn)定后采用從低濃度到高濃度胞外連續(xù)灌流給藥的方式。從低濃度開始，持續(xù)灌流至藥效穩(wěn)定，然后進行下一濃度的灌流。當化合物或者陽性對照物對herg電流抑制率小于50％時，連續(xù)五個電流值的cv<10％；當化合物或者陽性對照物對herg電流抑制率大于50％小于70％時，連續(xù)五個電流值的cv<20％；如果電流幅度減小小于200pa，或者抑制率大于70％，連續(xù)五個電流值cv<30％。稱取一定量的供試品溶于dmso中，配制成30mm的儲備溶液。實驗前用dmso將上述儲備溶液按照10倍及3倍逐級稀釋，然后進一步用細胞外液稀釋到所需濃度。工作濃度溶液使用前應檢查有無沉淀析出，如果有沉淀析出，將稀釋儲備液，提高細胞外液中dmso終濃度，但細胞外液中dmso最終濃度不超過0.5％。實驗中采用從低濃度到高濃度連續(xù)灌流的方式。測試供試品的半數(shù)抑制濃度(ic50)由logistic方程最佳擬合得出。供試品對herg的阻斷效應見表1。在處理數(shù)據(jù)時，通過patchmaster軟件進行刺激發(fā)放及信號采集；膜片鉗放大器放大信號，濾波為10khz。使用fitmaster，excel和spass21.0等進行進一步數(shù)據(jù)分析和曲線擬合。數(shù)據(jù)均以均值±標準差表示。在數(shù)據(jù)處理中，判斷對herg的阻斷效應時，將尾電流的峰值和其基線進行校正。用尾流的抑制率表示不同濃度下各化合物的作用。抑制率＝100×(給藥前尾電流峰值-給藥后尾電流峰值)/給藥前尾電流峰值％。ic50數(shù)值由hill方程進行擬合所得：y：i/icontrol；max：為100％；min：為0％；[drug]：供試品濃度；nh：hill斜率；ic50：測試物的最大半數(shù)抑制濃度。表1化合物50561對herg的阻斷效應表1.*細胞3在給予10m以后，漏電流(leakcurrents)數(shù)值指標大于200pa，因此補充細胞4，又因其效應匹配，也放在最終分析中。圖6為利用膜片鉗技術在hek-293的herg穩(wěn)定細胞株上所記錄到的50561對herg鉀通道的濃度-效應關系曲線。將鉗制電位保持在-80mv，去極化至60mv維持0.85s然后復極化至-50mv持續(xù)1.275s引出herg尾流峰電流。根據(jù)hill方程將herg電流抑制率和其相應的濃度進行曲線擬合。圖中每個點以均值±標準差(n＝4)表示。數(shù)據(jù)經(jīng)擬合分析提示50561對herg電流的ic50值為26.68m，hill系數(shù)是1.01。實施例35以化合物50561為例，進行安全性評估。安全性評估化合物50561的安全性評估2：miniames實驗在組氨酸含量很低的特殊培養(yǎng)基中培養(yǎng)鼠傷寒沙門氏菌的組氨酸營養(yǎng)缺陷型菌株，因其缺少營養(yǎng)一般很難分裂。如果待測化合物具有誘變性，大量細胞發(fā)生回復突變，自行合成組氨酸，發(fā)育成肉眼可見的菌落。鑒于化學物質的致突變作用與致癌作用之間密切相關，故此法現(xiàn)廣泛應用于致癌物的篩選。某些化學物質需經(jīng)代謝活化才有致變作用，在測試系統(tǒng)中加入哺乳動物微粒體酶s9，可排除代謝活化后產(chǎn)生誘變性的影響。經(jīng)過測試，在ta98/100兩個菌株中，無論是否存在s9，50561都不會引發(fā)超過2倍的菌落數(shù)變化，故認為其沒有明顯的致誘變性。50561小鼠miniames實驗表2不含有s9的情況下，50561不會引發(fā)突變表3含有s9的情況下，50561不會引發(fā)突變實施例36以化合物50561為例，進行安全性評估?；衔?0561的安全性評估3：mtd實驗小鼠是評價供試品毒性常用的嚙齒類動物，也是早期臨床前安全性評價的重要一環(huán)。本實驗采取以灌胃形式給予小鼠劑量梯度的50561觀察其毒性的方式檢測其毒性。本實驗采取每劑量濃度給予10只小鼠的設計，其中雌雄各半。雄性動物的體重大概為18-23克，雌性動物的體重大概為17-21克用簡單隨機化程序隨機分組。所有用于實驗的動物體重都在各性別平均體重的±20％之間。如果在研究中沒有足夠的動物滿足研究所需的體重范圍，通知專題負責人以便采取合理的措施。動物到達實驗室后須適應至少3天。在此期間，每天一次進行日?；\邊觀察，并且在做實驗之前必須進行一次詳細臨床觀察。任何有疾病癥狀或身體異常的動物將報告給主治獸醫(yī)和專題負責人，并且在可能的時候排除。適合做實驗的動物將會按照之前描述的隨機分組方法分配到各實驗組。實驗過程中所有動物，給藥結束后連續(xù)觀察4小時，給藥結束至給藥后3天上下午各觀察一次，之后每天觀察1次，觀察包括但不僅限于：皮膚，毛，眼，耳，鼻，口腔，胸腔，腹部，外生殖器，四肢和腳，呼吸道及循環(huán)系統(tǒng)，自主效應(如流涎)，神經(jīng)系統(tǒng)(如震顫，抽搐，應激反應以及反常行為)應重點觀察。發(fā)死亡的動物、瀕死或計劃內安樂死的所有動物將進行完整的解剖檢查。固定工作時間以外發(fā)現(xiàn)死亡的動物可置于冰箱內過夜，在下一個工作日立刻進行解剖。實驗結束時(給藥結束后的第14天)，所有需要解剖的動物將被安樂死并尸檢。動物的外部異常情況要詳細檢查，例如可觸及的腫塊。皮膚將沿著腹中線剪開，任何皮下腫塊都要與動物癥狀觀察的發(fā)現(xiàn)相結合從而進行確認。觀察腹腔，胸腔，顱腔是否有異常，摘取有病變的臟器，稱量重量后，記錄并保存于固定液中。結果如表4所示，cr小鼠對50561的最大耐受量：500mg/kg>mtd≥250mg/kg。表4濃度存活數(shù)備注250mg/kg10體重約2g下降，很快恢復，狀態(tài)良好500mg/kg8體重約2g下降，個別活動下降，狀態(tài)良好，死亡個體臟器無異常750mg/kg0死亡個體臟器無異常1000mg/kg0死亡個體臟器無異常實施例37以化合物50561為例進行藥代動物學評價。藥物在體內的分布是決定藥物劑量和療效的重要指標之一，因此優(yōu)秀的候選化合物應當具有較好的藥代特性。此外，由于本發(fā)明涉及的化合物擬用于治理阿爾茲海默這一中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病，故化合物在腦內和血液的分配關系也是需要重點考察的對象之一。本實驗通過口服和灌胃兩個途徑給予小鼠50561，并檢測其指定時間點時血液和腦中化合物的濃度，確定其藥代動物學參數(shù)。本實驗使用雄性icr小鼠48只，購于上海西普爾-必凱實驗動物有限公司?？诜M給藥前禁食10-14小時。給藥后4小時后恢復飼料。靜脈給藥組在給藥后0.083h，0.25h，0.5h，1h，2h，4h，8h和24h采集樣品；口服給藥組在給藥后0.25h，0.5h，1h，2h，4h，6h，8h和24h，經(jīng)心臟采血約0.5ml，肝素鈉抗凝，血液樣本采集后置于冰上，離心分離血漿(離心條件：8000轉/分鐘，6分鐘，4℃)。收集的血漿分析前存放于–80℃。動物采集完血漿樣品后，采集腦組織，用生理鹽水沖洗，濾紙吸干水分，立即稱重，然后放入標記好的管子中(一個腦組織一個管子)，待測樣品在存放入-80℃冰箱之前臨時放置在冰上。生物樣品分析方法及所有樣品的分析由美迪西普亞(上海)生物醫(yī)藥有限公司分析實驗室完成，分析樣品的同時進行質控樣品的日內準確度評價，并要求超過66.7％的質控樣品的準確度在80-120％之間。進行藥代參數(shù)計算時，cmax之前的blq(包括“nopeak”)按照0計算；cmax之后出現(xiàn)的blq(包括“nopeak”)一律不參與計算。winnonlinprofessionalv5.2(pharsight,usa)計算以下藥代動力學參數(shù)：auc(0-t)、auc(0-∞)、t1/2、mrt(0-∞)、cmax、tmax。通過不同時間點的血藥濃度數(shù)據(jù)，組織/血漿的比值將通過下面的公式進行計算：組織/血漿比值(ml/g)＝組織的血藥濃度/血漿血藥濃度圖7圖8為icr小鼠分別靜脈和口服給予50561后的血漿及腦組織藥物濃度-時間曲線圖。動物的腦組織/血漿比值見表5。圖7為靜脈注射50561后的血漿及大腦藥物濃度時間曲線圖。圖8為口服50561后的血漿及大腦藥物濃度時間曲線圖。表5icr小鼠靜脈和口服給予50561后血藥濃度由此可知：50561在靜脈注射和口服后，腦組織的含量高于血液中的含量，表明該化合物具有良好的血腦屏障通透性。當前第1頁12