本發明涉及生物工程領域，具體涉及一種羊胎盤小分子肽的制備方法及其應用。
背景技術：
在自然界中羊胎盤的營養結構最接近于人類胎盤，并含有大量與人胎盤相近、具有多功效的營養成分。羊胎盤的的蛋白質含量在80％以上，氨基酸含量豐富，種類齊全，配比合理。脂肪10％以下，其中含豐富的卵磷脂、腦磷脂、脂多糖，含多種維生素和微量元素，以及多種免疫球蛋白。
鑒于羊胎盤具有重要的營養價值，羊胎盤中的羊胎素對人體來說是異性蛋白，分子量大于10000d具有一定的過敏性，行業內多采用水解液進行水解提取羊胎盤的有效成分進行提取，促進人體對羊胎盤有效成分大分子蛋白有效吸收和利用，該法水解過程的破壞了羊胎盤活性物質。
技術實現要素：
有鑒于此，本申請提供了一種羊胎盤小分子肽的制備方法及其應用，所述制備方法操作簡單，制備快速，提高了羊胎盤小分子肽產率，所得羊胎盤小分子肽活性的分子量小，對羊胎盤小分子肽活性的影響小，利于人體吸收利用。
為解決以上技術問題，本發明提供的技術方案是提供一種羊胎盤小分子肽的制備方法，包括以下步驟：
1)以羊胎盤為原料，經過預處理、第一次粉碎、破壁、加水勻漿，得到混合溶液；
2)所述步驟1)得到的所述混合溶液離心，得到澄清液；
3)所述步驟2)得到的澄清液超濾，得到細胞原液；
4)所述步驟3)得到的所述細胞原液經冷凍干燥后，第二次粉碎，得到羊胎盤小分子肽。
優選的，所述預處理過程包括：清洗、除雜、切塊。
優選的，所述清洗過程為超聲清洗。
優選的，所述原料與所述加水勻漿所加水重量比為1：(1.5～2.0)。
優選的，所述原料與所述加水勻漿所加水重量比為1：1.8。
優選的，所述加水勻漿時間為20～40min。
優選的，所述破壁過程具體為：進行兩次超聲破壁操作。
優選的，所述離心過程具體為：進行兩次離心操作。
優選的，所述離心過程離心條件為：轉速為1500～1800rpm。
優選的，所述離心過程離心條件為：轉速為1800rpm。
優選的，所述離心過程離心條件為：溫度為10～20℃。
優選的，所述超濾過程具體為：使用孔徑0.003μm的超濾膜進行超濾處理。
優選的，所述冷凍干燥過程，冷凍干燥溫度為-30～-40℃，壓力為-10～-25pa。
優選的，所述冷凍干燥過程，冷凍干燥溫度為-30℃，壓力為-20pa。
優選的，所述壓力以大氣壓力取作參考零點。
優選的，得到的羊胎盤小分子肽分子量小于10000d。
本發明技術方案還提供了一種羊胎盤小分子肽制備方法的應用，由上述的羊胎盤小分子肽制備方法在制備具有抗氧化、增強免疫力、補充維生素保健食品中的應用。
優選的，所述保健食品包括所述羊胎盤小分子肽、青稞提取物、紅景天提取物、葡萄仔提取物、蟲草提取物、藏當歸提取物和波菱瓜提取物。
本申請與現有技術相比，其詳細說明如下：
本發明提供的羊胎盤小分子肽制備方法中羊胎盤原料經預處理和粉碎后，兩次破壁利用超聲波對細胞內所產生的空穴作用，得到粒度極小的微粉，同時，打破細胞壁，提高羊胎盤有活性物質的釋放量，利于小分子肽的溶出，提取效率高，從而提高1.2％的羊胎盤小分子肽產率，提取時間短性，從而縮短制備時間。
本發明提供的羊胎盤小分子肽制備方法中對破壁的得到的微粉進行加水勻漿處理，充分溶解羊胎盤中的活性物質，操作簡單、快速。
本發明提供的羊胎盤小分子肽制備方法中勻漿后的混合溶液采用兩次離心操作充分固液分離處理，得到澄清液，提高了羊胎盤小分子肽產率。澄清液使用孔徑0.003μm的超濾膜進行超濾處理得到細胞活液，一方面有效除菌，避免高溫滅菌影響羊胎盤物質活性，另一方面選擇性分離得到分子量小于10000d的活性物質。
本發明提供的羊胎盤小分子肽制備方法中對細胞進行冷凍干燥，避免影響其活性。冷凍干燥后進一步粉碎保證了得到的羊胎盤小分子肽分子量小于10000d。
本發明提供的制備方法操作簡單，快速，提高了羊胎盤小分子肽產率，所得羊胎盤小分子肽活性的分子量小，對羊胎盤小分子肽活性的影響小，制得的羊胎盤小分子肽分子量小，易吸收，活性高，利于人體吸收利用。
本發明制備方法操作簡單快速，制得的羊胎盤小分子分子量小，活性高，改方法可廣泛應用于制備具有抗氧化、增強免疫力、補充維生素保健食品。
具體實施方式
為了使本領域的技術人員更好地理解本發明的技術方案，下面結合具體實施例對本發明作進一步的詳細說明。
本發明提供的技術方案是提供一種羊胎盤小分子肽的制備方法，包括以下步驟：
1)以羊胎盤為原料，經過預處理、第一次粉碎、破壁、加水勻漿，得到混合溶液；
2)所述步驟1)得到的所述混合溶液離心，得到澄清液；
3)所述步驟2)得到的澄清液超濾，得到細胞原液；
4)所述步驟3)得到的所述細胞原液經冷凍干燥后，第二次粉碎，得到羊胎盤小分子肽。
按照本發明，所述預處理過程包括：清洗、除雜、切塊。優選的，所述清洗過程為超聲清洗。
按照本發明，所述原料與所述加水勻漿所加水重量比為1：(1.5～2.0)。所述原料與所述加水勻漿所加水重量比為1：1.8。所述加水勻漿時間為20～40min。充分溶解羊胎盤中的活性物質，操作簡單、快速
按照本發明，所述破壁過程具體為：進行兩次超聲破壁操作。提高羊胎盤有活性物質的釋放量，利于小分子肽的溶出，提取效率高，提高羊胎盤小分子肽產率，提取時間短性，從而縮短制備時間。
按照本發明，所述離心過程具體為：進行兩次離心操作。所述離心過程離心條件為：轉速為1500～1800rpm，溫度為10～20℃。優選的，所述離心過程離心條件為：轉速為1800rpm。
按照本發明，所述超濾過程具體為：使用孔徑0.003μm的超濾膜進行超濾處理。一方面有效除菌，避免高溫滅菌影響羊胎盤物質活性，另一方面選擇性分離得到分子量小于5000d的活性物質。
按照本發明，所述冷凍干燥過程，冷凍干燥溫度為-30～-40℃，壓力為-10～-25pa。優選的，所述冷凍干燥過程，冷凍干燥溫度為-30℃，壓力為-20pa。按照本發明，得到的羊胎盤小分子肽分子量小于10000d。
本發明技術方案還提供了一種羊胎盤小分子肽制備方法的應用，由上述的羊胎盤小分子肽制備方法在制備具有抗氧化、增強免疫力、補充維生素保健食品中的應用。優選的，所述保健食品包括所述羊胎盤小分子肽、青稞提取物、紅景天提取物、葡萄仔提取物、蟲草提取物、藏當歸提取物和波菱瓜提取物。
實施例1～3
一種羊胎盤小分子肽的制備方法，包括以下步驟：
以羊胎盤為原料，經過清洗、除雜、切塊、第一次粉碎、兩次超聲破壁，得到微粉；
微粉加水勻漿，得到混合溶液；所述原料與所述加水勻漿所加水重量比為1：1.8；
所述混合溶液臺式離心機離心得到固相和液相，液相用管式離心機離心，得到澄清液；
所述澄清液使用孔徑0.003μm的超濾膜進行超濾處理，得到細胞原液；
所述細胞原液經冷凍干燥后，第二次粉碎，得到羊胎盤小分子肽。
制備條件：均漿時間、所述離心條件、所述冷凍干燥過程溫度、所述冷凍干燥過程壓強見表1。
試驗結果：所述步驟3)得到的得到羊胎盤小分子肽產率、所述步驟3)得到的得到羊胎盤小分子肽分子量見表1。
表1
實施例4
本實施例除下述特征外，其他均與實施例1相同：所述原料與所述加水勻漿所加水重量比為1：1.5。試驗結果：所述步驟3)得到的得到羊胎盤小分子肽產率為0.53％、所述步驟3)得到的得到羊胎盤小分子分子量小于10000d。
實施例5
本實施例除下述特征外，其他均與實施例1相同：所述原料與所述加水勻漿所加水重量比為1：2.0。試驗結果：所述步驟3)得到的得到羊胎盤小分子肽產率為0.53％、所述步驟3)得到的得到羊胎盤小分子分子量小于10000d。
實施例6
本實施例除下述特征外，其他均與實施例1相同：不進行破壁處理過程。試驗結果：所述步驟3)得到的得到羊胎盤小分子肽產率為0.51％、所述步驟3)得到的得到羊胎盤小分子分子量小于10000d。
實施例7
一種羊胎盤小分子肽的制備方法的應用，所述應用具體為：制備具有抗氧化、增強免疫力、補充維生素保健食品的方法，包括：
采用實施例1制備方法制備得到羊胎盤小分子肽，所述羊胎盤小分子肽具有調節機體的免疫功能，能清除體內過多的自由基。維持體內自由基和抗氧化酶之間的平衡的作用；
所述羊胎盤小分子肽與青稞提取物、紅景天提取物、葡萄仔提取物、蟲草提取物、藏當歸提取物、波菱瓜提取物復配得到所述保健食品。
以上僅是本發明的優選實施方式，應當指出的是，上述優選實施方式不應視為對本發明的限制，本發明的保護范圍應當以權利要求所限定的范圍為準。對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明的精神和范圍內，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。