本發明屬于生物制品技術領域，涉及一種人血白蛋白的制備方法及用該方法制備的人血白蛋白。
背景技術：
人血白蛋白是從健康人血漿中提取的蛋白制劑，人血白蛋白主要用于因失血、創傷及燒傷等引起的休克，腦水腫及大腦損傷所致的腦壓增高，對防治低蛋白血癥及肝硬化或腎病引起的水腫或腹水有較好的療效，是救死扶傷的必備藥物。目前國內主要采用低溫乙醇工藝進行分離純化，不同廠家采用低溫乙醇工藝的參數及工藝步驟略有不同，因此在市場上銷售的人血白蛋白制品質量有差異。激肽釋放酶原激活劑(pka)和多聚體含量是人血白蛋白制劑臨床應用上產生不良反應的最大因素，因此，如何在制備工藝中，探索降低pka以及多聚體含量的方法，一直是從業人員特別關注的重點。
血漿凝血因子?經表面激活成?a后，激活激肽釋放酶原(pk)，生成激肽釋放酶(k)，k使激肽酶釋放出緩激酶，導致血管舒張、毛細血管透性增加進而血壓下降等不良反應。這些活化的因子?片段就叫做激肽釋放酶原激活劑(pka)。臨床上在使用含大量pka的血液制品(如人血白蛋白等)過程中，會引起患者血壓下降、面色潮紅、呼吸困難等不良反應。對此國家相關部門有相應的強制規定：《中國藥典》2015年版三部規定人血白蛋白成品中“激肽釋放酶原激活劑(pka)”含量應不高于35iu/ml，
正常人體血液中并不存在白蛋白多聚體，由于含多聚體的白蛋白制品被注入人體后，可導致血液中白蛋白膠體滲透壓下降，在體內排泄加快，因此臨床使用多聚合體含量過高的白蛋白制品，將影藥物的安全有效。《中國藥典》2015年版三部規定人血白蛋白成品中“多聚體含量”應不高于5％。
技術實現要素：
本發明的目的是提供一種能夠有效降低人血白蛋白成品中激肽釋放酶原激活劑(pka)和多聚體的白蛋白制備方法。
為實現上述目的，本發明采用以下技術方案：
本發明提供一種人血白蛋白制備方法，該方法包括如下步驟：步驟一、以低溫乙醇法從人血漿中提取組分ⅳ上清液為原料；步驟二、對組分ⅳ上清液進行精濾處理；步驟三、將精濾處理獲得的澄清液用0.5mol/l醋酸(含40％乙醇)溶液調節ph調至4.80±0.1獲得組分ⅴ沉淀；步驟四、組分ⅴ沉淀溶解后純化處理獲得人血白蛋白成品；
其中步驟二所述的對組分ⅳ上清液進行精濾處理方法，
(1)降溫處理：組分ⅳ上清液降至-6—-10℃；
(2)硅藻土吸附：加入硅藻土，加量為2～10g/l，攪拌吸附時間≥30分鐘；
(3)濾板精濾：用濾板進行精濾，過濾時環境溫度控制在10℃以下，過濾壓力不超過0.3mpa，收集過濾后澄清液；
其中，步驟四所述的組分ⅴ沉淀溶解后純化處理獲得人血白蛋白成品具體過程包括如下步驟：
(1)純化：按最終每公斤沉淀30/95(l)補加95％乙醇和0℃注射用水至fⅴ沉淀重量的5倍體積進行攪拌溶解，然后調節ph至4.50～4.70，控制溫度在-2～-3℃進行攪拌過濾。
(2)超濾：用10kd膜包超濾器進行濃縮，再用1％和0.7％的氯化鈉溶液分別對制品進行等重量透析4次和5次的透析。
(3)配液，根據產品規格配制相應蛋白含量、na+含量≤150mmol/l、k+含量≤2mmol/l、辛酸鈉含量約為0.160±0.02mmol/g.蛋白質、ph值為6.8～7.0；
(4)巴氏滅活，巴氏滅活溫度為60±0.5℃，巴氏滅活時間為10小時；
(5)除菌分裝，用除菌濾芯根據產品規格進行除菌分裝
本發明還提供一種通過上述方法獲得的人血白蛋白，其中，該人血白蛋白成品中激肽釋放酶原激活劑(pka)含量應不高于12iu/ml；多聚體含量不高于2％；人血白蛋白僅與抗人血漿產生沉淀線，與抗馬、抗牛、抗豬、抗羊血漿不產生沉淀線；與正常人血漿比較，主要沉淀線為白蛋白。
本發明具有如下優點：
1、生產應用中操作簡便，工藝穩定不影響到最終產品的收得率。2、成品中激肽釋放酶原激活劑(pka)含量比《中國藥典》2015年版降低60％，多聚體含量比《中國藥典》2015年版降低60％，能極大提高人血白蛋白產品的安全性和有效性，具有良好臨床應用價值。
具體實施方式
下面結合具體實施例對本發明。
實施例1：
1.血漿獲得
通過本公司單采血漿站采集健康人血漿
2.血漿領取
按生產指令要求，提取所需數量7983.585kg的合格血漿。
3.血漿合并及融化
在d級潔凈廠，控制溶解水溫＜37℃，采用水浴融化法進行血漿融化。融化后的血漿溫度＜4℃。
4.組分ⅰ+ⅱ+ⅲ的乙醇沉淀及過濾分離
將融化后的血漿準確計量體積7549l后，按血漿體積的0.1倍的0.9％nacl溶液稀釋至8305l，用ph4.0緩沖液調整ph6.3，添加-15℃以下的95％乙醇2216l，最終溫度控制在-5℃；在反應液中分別按20g/l反應液加入硅藻土,用beco公司濾板進行固液分離，獲得組分ⅰ+ⅱ+ⅲ上清。
5.組分ⅳ上清獲得
將組分ⅰ+ⅱ+ⅲ上清13459l，用ph4.0緩沖液調整ph6.15，添加-15℃以下的95％乙醇4895l，最終溫度控制在-5℃；在反應液中分別按15g/l反應液加入硅藻土,用beco公司濾板進行固液分離，獲得組分ⅳ上清。
6.組分ⅳ精濾處理
將組分ⅳ降溫至-6～-10℃，加入臨江益瑞石公司的硅藻土，加量為2～10g/l，攪拌吸附時間≥30分鐘，用beco公司濾板對進行精濾，過濾時環境溫度控制在10℃以下，過濾壓力不超過0.3mpa，收集過濾后澄清液。
7.組分ⅴ沉淀獲得
將獲得的澄清液21201l用0.5mol/l醋酸(含40％乙醇)溶液調節ph調至4.80±0.1，降溫至-9～-10℃，用beco公司濾板對進行固液分離，獲得組分ⅴ沉淀。
8.人血白蛋白獲得
將組分v沉淀1047.8kg，按最終每公斤沉淀30/95(l)補加95％乙醇和0℃注射用水至fⅴ沉淀重量的5倍體積進行攪拌溶解，充分溶解2小時后，溶解液降溫至-3℃，用beco公司濾板對進行固液分離，將過濾后上清用10kd膜包超濾器進行濃縮，再用1％和0.7％的氯化鈉溶液分別對制品進行等重量透析4次和5次的透析，收集超濾液進行配液，最終配制為：蛋白含量20％、na+含量142mmol/l、k+含量0.1mmol/l、辛酸鈉含量0.158mmol/g.蛋白質、ph值6.8。
將配液后的蛋白液進行60℃連續10小時恒溫巴氏滅活,巴氏滅活后，除菌過濾分裝，得到人血白蛋白成品。
9.檢測
根據《中國藥典》2015年版三部，抽樣32瓶，進行檢測，結果如下如表1所示：
表1成品人血白蛋白檢測結果
可以知道，上述實施例僅為了說明發明原理而采用的示例性實施方式，然而本發明不僅限于此，本領域技術人員在不脫離本發明實質情況下，可以做出各種改進和變更，這些改進和變更也屬于本發明的保護范圍。