本發明屬于化學領域，涉及p2y12受體抑制劑替格瑞洛氘代前藥衍生物，及其制備方法和在抗血小板凝集的應用。
背景技術：
急性冠脈綜合征(acutecoronarysyndrome，acs)是一種嚴重威脅人類健康的心血管類疾病，據世界衛生組織(who)2008年統計，全球有接近1/4的死亡病例來源于心腦血管類疾病。在急性冠脈綜合征(acutecoronarysyndrome，acs)的病理生理過程中，血小板在動脈粥樣硬化斑塊破裂后的血栓形成及進展中起重要作用。二磷酸腺苷(adp)受體p2y12抑制劑是近年來抗血小板聚集藥物的研究熱點，p2y1受體是血小板活化的起始途徑，adp首先與p2y1受體結合，引起磷酸二酯酶(pde)活化、血小板變形等，形成快速可逆但作用較弱短暫的血小板聚集，隨后釋放的adp可通過與p2y12受體結合，激活并放大該信號通路，形成穩定而持久的血小板聚集，因此臨床上已經開發數種針對p2y12受體的藥物，能有效阻斷adp介導的信號通路，從而抑制血小板活化與聚集。
在2011年，口服型的可逆的選擇性p2y12受體抑制劑替格瑞洛(brilique，ticagrelor)被批準上市，其結構式如下：
替格瑞洛為非前體藥物，不需要代謝活化，能直接作用于p2y12受體，在體內可快速生成其主要循環代謝產物ar-c124910xx，藥物本身及其代謝產物均有活性，可快速強效地抑制adp介導的血小板聚集，而且有效性不受肝臟cyp2c19基因多態性影響。與氯吡格雷相比，替格瑞洛作為一種新型抗血小板藥物，無需代謝激活，起效迅速，能明顯降低心梗、心血管死亡等首要終點事件，沒有引起嚴重的并發癥的發生，并且替格瑞洛與p2y12受體可逆結合，對于那些先期服藥后需要進行經冠狀動脈介入治療的病人尤為重要。成功上市的替格瑞洛已經成為格雷類口服抗血小板聚集不可缺少的藥物。
技術實現要素：
本發明提供了一種半衰期更長和生物利用度更高的氘代替格瑞洛衍生物及其光學異構體或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物。
本發明還提供了一種上述氘代替格瑞洛衍生物的制備方法以及該氘代替格瑞洛衍生物在制備抗凝藥物中的應用。
一種氘代替格瑞洛衍生物，包括具有如下所示結構通式(i)結構的化合物、及其光學異構體或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物：
其中：r1為丙烷基、氘代的丙烷基；作為優選，r1為1-d-丙烷基，1,1-2d-丙烷基，丙烷基-d7；
r2為h、氘代乙酰基，纈氨酰基，甘氨酰基或脯氨酰基；作為優選，所述r2為h、纈氨酰基。
更進一步地，所述氘代替格瑞洛衍生物包括下述優選化合物、及其光學異構體或其藥學上可接受的鹽或溶劑合物：
相對于替格瑞洛，氘代衍生物化合物(i-1)～化合物(i-3)在肝微粒體溶液中的代謝穩定性高于替格瑞洛，特別是化合物(i-2)和化合物(i-3)的代謝穩定性更高。
為進一步增強藥物的吸收，本發明將乙酰基，纈氨酰基，甘氨酰基或脯氨酰基等引入到上述氘代衍生物中，封閉了替格瑞洛的代謝位點；特別是，將纈氨酰基引入到氘代衍生中，提高了藥物的生物利用度，同時延長了藥物的半衰期。
本發明還提供了一種制備式(i-i)所示化合物的方法，包括：將含有氘代乙酰基，纈氨酰基，甘氨酰基或脯氨酰基的前體化合物與式(ii)所示的化合物進行反應，最后脫保護得到所述的式(i-i)所示化合物，其中r1定義同上，r2為氘代乙酰基，纈氨酰基，甘氨酰基或脯氨酰基：
以r2為纈氨酰基為例，其是由如下方法制備得到：
dcc與dmap存在條件下，boc-纈氨酸與式(ii)所示的化合物在有機溶劑中進行反應，反應得到的中間體，經過脫保護反應，最終得到式(i-i)所示的化合物。
當r2為h時，式(i)所示的化合物結構如下式(i-ii)所示：
式(i-ii)所示的化合物，一般由下述方法制備：化合物1與化合物2在縛酸劑存在下脫出氯化氫，得到化合物3，化合物3經過還原反應得到化合物4，化合物4經過環化反應得到化合物5，化合物5與(1r,2s)-2-(3,4-二氟苯基)環丙-1-胺扁桃酸鹽在縛酸劑存在下進行反應，脫除氯化氫，得到化合物6，化合物6脫保護得到所述的化合物(i-ii)，反應過程如下：
上式中，化合物1一般由氘代乙二醇與溴化芐反應進行脫除反應，然后再經過溴代反應，再與芐基((3as,4r,6s,6ar)-6-羥基-2,2-二甲基四氫-4h-環戊二烯[d][1,3]二氧雜環戊烷-4-基)氨基甲酸酯反應，最后脫保護得到。化合物2一般由硫代巴比妥酸經過取代反應、硝基化反應以及氯代反應得到。
本發明的又一個目的是提供所述替格瑞洛氘代衍生物及其生理條件下可接受的鹽在制備抗血小板凝集藥物中的應用。
本發明的又一個目的是提供所述替格瑞洛氘代衍生物及其生理條件下可接受的鹽在制備預防或者治療血栓和栓塞相關疾病的藥物，尤其是用于制備預防和治療動脈粥樣硬化疾病、心肌梗死、中風、缺血性腦栓塞、外周動脈疾病、急性冠脈綜合征或者冠脈介入術后的血栓形成的藥物中的應用。
本發明通過對替格瑞洛進行改造，將氘代氫引入到替格瑞洛中，提供了一種氘代替格瑞洛衍生物，改善了藥物的藥動學性能，延長了替格瑞洛的半衰期和生物利用度。
附圖說明
圖1化合物i-4～i-6在人肝微粒體代謝穩定性曲線圖。
具體實施方式
本發明結合實施例作進一步的說明。以下的實施例是說明本發明，而不是以任何方式限制本發明。
實施例1嘧啶中間體ii-3的合成
步驟1:冰浴下，將naoh(1.2g，31.0mmol)溶于水(7ml)中，緩慢加入硫代巴比妥酸(2.0g，13.8mmol)，攪拌10min，緩慢加入1-氘代碘丙烷(2.9g，16.0mmol)和n-甲基吡洛烷酮(4.1g，41.0mmol)。室溫反應20h，加1n鹽酸，調體系ph值為6.5，攪拌30min，加6n鹽酸，調體系ph值為2.5，攪拌30min。抽濾，濾餅經水洗，得到白色固體(化合物ii-1)1.95g。收率：75.0％；1hnmr(500mhz,dmso)δ5.12(s,1h),3.06(t,j＝7.0hz,1h),1.64(p,j＝7.0hz,2h),0.96(t,j＝7.0hz,3h).esi-ms:m/z＝188.0[m+h]+。
步驟2：冰浴下，將化合物ii-1(1.8g，9.4mmol)溶于三氟乙酸(6ml)中，室溫攪拌40min，體系冷卻到0℃，緩慢加入發煙硝酸(426mmol，19.5ml)，加入完畢，0℃反應30min，室溫反應過夜。冰浴下，加入冰水攪拌3h，析出淡黃色固體，抽濾，得到1.2g化合物ii-2。收率：57.0％；1hnmr(500mhz,dmso)δ3.15(t,j＝7.0hz,1h),1.73–1.62(m,2h),0.97(t,j＝7.0hz,3h).esi-ms:m/z＝233.1[m+h]+。
步驟3：冰浴下，將n,n-二甲基苯(267mg，2.2mmol)滴入pocl3(1ml)中，攪拌10min，緩慢加入化合物ii-2(480mg，2.1mmol)，回流反應2h，冰水浴冷卻到室溫，減壓濃縮，得到化合物ii-3的濃縮液，無需純化直接用于下一步反應。
實施例2嘧啶中間體ii-6的合成
步驟1：操作過程同制備化合物ii-1，只是用d7-氘代碘丙烷(1.7g，9.6mmol)代替1-氘代碘丙烷，得到白色固體(化合物ii-4)920mg。收率：75.0％；1hnmr(500mhz,dmso)δ6.07(s,1h)。esi-ms:m/z＝194.0[m+h]+。
步驟2：操作過程同制備化合物ii-2，只是用化合物ii-4(900mg，4.6mmol)代替化合物ii-1，得到白色固體(化合物ii-5)521mg。收率：42.0％；1hnmr(500mhz,dmso)。esi-ms:m/z＝239.1[m+h]+。
步驟3：操作過程同制備化合物ii-3，只是用化合物ii-5(900mg，3.8mmol)代替ii-2，得到化合物ii-6的濃縮液，無需純化直接用于下一步反應。
實施例3中間體ii-10的合成
步驟1：將氘代乙二醇(1.0g，15.0mmol)溶于dcm(20ml)中，加入氧化銀(4.7g，20.6mmol)，冰浴下，緩慢加入溴化芐(2.3g，13.7mmol)。室溫反應5h，抽濾，濾液經水、飽和食鹽水洗滌，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：3)得無色液體(化合物ii-7)1.96g。收率：91.0％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.41–7.27(m,5h),4.59(s,2h)。esi-ms:m/z＝157.1[m+h]+。
步驟2:將化合物ii-7(2.0g，12.5mmol)溶于dcm(20ml)中，加入cbr4(6.2g，18.8mmol)，冰浴下，緩慢加入三苯基膦(4.9g，18.8mmol)。室溫反應6h，加二氯甲烷，經水、飽和食鹽水洗滌，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：20)得無色液體(化合物ii-8)2.5g。收率：95.0％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.45–7.24(m,5h),4.62(d,j＝1.0hz,2h)。esi-ms:m/z＝219.0[m+h]+。
步驟3：冰浴下，將中間體ii-8(1.3g，4.4mmol)加入nah(157mg，6.5mmol)的dmf(20ml)溶液中，反應10min，加入化合物芐基((3as,4r,6s,6ar)-6-羥基-2,2-二甲基四氫-4h-環戊二烯[d][1,3]二氧雜環戊烷-4-基)氨基甲酸酯(951mg，4.4mmol)，冰浴下，緩慢加入三苯基膦(4.9g，18.8mmol)。室溫反應過夜，加水淬滅，乙酸乙酯萃取，經水、飽和食鹽水洗滌，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：3)得無色液體(化合物ii-9)262mg。收率：31.0％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.39–7.23(m,10h),6.07(d,j＝8.5hz,1h),5.32(s,1h),5.08(s,2h),4.60–4.56(m,2h),4.44(d,j＝12.5hz,1h),4.24–4.18(m,1h),3.90(d,j＝4.0hz,1h),2.17(m,j＝14.5hz,1h),1.86(d,j＝14.5hz,1h),1.44(s,3h),1.29(s,3h)。esi-ms:m/z＝446.2[m+h]+。
步驟4：將化合物ii-9(540mg,1.2mmol)溶解在甲醇中，加入pd/c(10％,500mg)，氫氣條件下，室溫反應過夜。經硅藻土抽濾，將濾液減壓濃縮，得到化合物ii-10的濃縮液，無需純化直接用于下一步反應。esi-ms:m/z＝222.1[m+h]+。
實施例4中間體ii-11的合成
將化合物ii-10(544mg，2.5mmol)溶于無水thf中，加入無水tea(414mg，4.1mmol)，冰浴下，緩慢加入化合物ii-3(550mg，2.1mmol)的無水thf溶液，0℃反應4h。減壓除掉溶劑，加入etoac，1n鹽酸洗，飽和碳酸氫鈉洗，水洗，飽和食鹽水洗，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：2)得油狀液體(化合物ii-11)635mg。收率：71.0％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.69(d,j＝7.5hz,1h),4.78–4.71(m,1h),4.68(dd,j＝5.5,1.5hz,1h),4.56(dd,j＝5.5,1.5hz,1h),3.99(d,j＝4.5hz,1h),3.12(m,1h),2.37(m,1h),1.95(d,j＝14.5hz,1h),1.46(s,3h),1.30(s,3h),1.30–1.26(m,3h),0.93–0.81(m,2h)。esi-ms:m/z＝454.1[m+h]+。
實施例5中間體ii-12的合成
操作過程同制備化合物ii-11，只是用化合物ii-6(500mg，1.8mmol)代替化合物ii-3，得到油狀液體(化合物-12)374mg。收率：45.2％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ8.64(d,j＝7.5hz,1h),4.74–4.69(m,1h),4.65(dd,j＝5.5,1.5hz,1h),4.54(dd,j＝5.5,1.5hz,1h),3.96(d,j＝4.5hz,1h),2.37–2.30(m,1h),1.92(d,j＝14.5hz,1h),1.44(s,3h),1.27(s,3h).esi-ms:m/z＝460.2[m+h]+。
實施例6中間體ii-14的合成
將4,6-二氯-2-(丙基巰基)-5-氨基嘧啶ii-13(723mg，3.1mmol)溶于1，4-二氧六環內，加入化合物10(616mg，2.7mmol)，碘化鈉(83mg，0.5mmol)和三乙胺(842mg，8.3mmol)，120℃燜罐反應7h，減壓濃縮，加入etoac，水洗，飽和食鹽水洗，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：1)得油狀液體(化合物ii-14)630mg。收率：56.0％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ5.46(d,j＝5.5hz,1h),5.08(s,1h),4.82(d,j＝5.5hz,1h),4.02(t,j＝4.0hz,1h),3.43(s,2h),3.08(s,2h),2.27(s,1h),2.23(t,j＝12.5hz,1h),1.56(s,1h),1.41(m,2h),1.46(s,3h)1.28(s,3h),1.05–0.90(m,3h)。esi-ms:m/z＝423.2[m+h]+。
實施例7中間體ii-15的合成
將化合物ii-11(635mg，1.4mmol)溶于乙醇中，加入nh4cl(300mg，5.6mmol)，加熱回流直至固體全部溶解，加入fe粉(628mg，11.2mmol)，反應4h。減壓除掉溶劑，加入etoac，水洗，飽和食鹽水洗，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮，得油狀液體(化合物ii-15)491mg。無需純化直接用于下一步反應。
實施例9中間體ii-16的合成
操作過程同制備化合物ii-15，只是用化合物ii-12(500mg，1.1mmol)代替化合物ii-11，制備得到500mg的油狀物(化合物ii-16)。無需純化直接用于下一步反應。
實施例10中間體ii-17的合成
在0℃下，將化合物ii-14(630mg，1.5mmol)溶于乙酸(3.7ml)中，緩慢加入nano2(113mg，1.64mmol)的水溶液，攪拌45min。加入飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅反應，etoac萃取，水洗，飽和食鹽水洗，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：3)得油狀液體600mg(化合物ii-17)，直接用于下一步。
實施例11中間體ii-18的合成
操作過程同制備化合物ii-17，只是用化合物ii-15(491mg，1.1mmol)代替化合物ii-14。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：3)得油狀液體500mg(化合物ii-18)，直接用于下一步。
實施例12中間體ii-19的合成
操作過程同制備化合物ii-17，只是用化合物ii-16(500mg，1.0mmol)代替化合物ii-14。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：3)得油狀液體300mg(化合物ii-19)，直接用于下一步。
實施例13中間體ii-20的合成
將化合物ii-17(600mg,1.4mmol)，中間體(1r,2s)-2-(3,4-二氟苯基)環丙-1-胺扁桃酸鹽(664mg,2.1mmol)加入乙腈中攪拌，加入三乙胺，直到溶清為止。反應4h，減壓除掉溶劑，加入etoac，1n鹽酸洗，飽和碳酸氫鈉洗，水洗，飽和食鹽水洗，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：5)得油狀液體563mg(化合物ii-20)。收率：72.0％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.11–6.83(m,3h),6.56(s,1h),5.43(s,1h),5.07(s,1h),4.89(d,j＝5.5hz,1h),4.16(t,j＝4.0hz,1h),3.04(m,2h),3.07–2.89(m,1h),2.48(dt,j＝14.0,6.0hz,1h),2.27(d,j＝13.5hz,2h),2.16(d,j＝12.5hz,1h),1.75–1.65(m,2h),1.50(s,3h),1.43(d,j＝9.0hz,1h),1.39(s,3h),1.11–0.90(m,3h).esi-ms:m/z＝567.1[m+h]+。
實施例14中間體ii-21的合成
操作過程同制備化合物ii-20，只是用化合物ii-18(500mg，1.1mmol)代替化合物ii-17。收率：71.2％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.22–6.90(m,3h),6.50(s,1h),5.54(s,1h),5.19(s,1h),4.90(s,1h),4.04(s,1h),3.11(s,1h),2.74–2.63(m,1h),2.46(d,j＝13.5hz,1h),2.23–2.10(m,1h),1.81(s,1h),1.70(d,j＝17.0hz,2h),1.56(s,3h),1.40(s,1h),1.39(s,3h),1.15–0.96(m,3h),0.93–0.82(m,1h).esi-ms:m/z＝568.2[m+h]+。
實施例15中間體ii-22的合成
操作過程同制備化合物ii-20，只是用化合物ii-19(300mg，0.7mmol)代替化合物ii-17，得油狀液體307mg(化合物ii-22)。收率：82.3％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.17–6.95(m,3h),6.48(s,1h),5.53(d,j＝4.5hz,1h),5.16(s,1h),4.88(d,j＝6.0hz,1h),4.01(t,j＝4.0hz,1h),3.09(s,1h),2.70–2.58(m,1h),2.44(s,1h),2.13(d,j＝16.0hz,1h),1.54(s,3h),1.42–1.39(m,1h),1.38(d,j＝4.5hz,1h),1.36(s,3h).esi-ms:m/z＝574.2[m+h]+。
實施例16化合物i-1的合成
冰浴下，將化合物ii-20(70mg，0.1mmol)溶于90％cf3cooh中，攪拌30min，緩慢加入飽和碳酸氫鈉淬滅，二氯甲烷萃取，水洗，飽和食鹽水洗，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝1：1)得白色固體57mg(化合物i-1)。收率：87.7％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.18–6.92(m,3h),6.83(s,1h),5.04–4.87(m,1h),4.71–4.60(m,1h),4.29(t,j＝8.0hz,1h),4.02(t,j＝5.0hz,1h),3.12(s,1h),3.00(m,2h),2.51(m,1h),2.15(s,1h),1.66(dd,j＝14.0,7.0hz,3h),1.40(m,2h),1.08–0.83(m,3h).esi-ms:m/z＝527.2[m+h]+。
實施例17化合物i-2的合成
操作過程同制備化合物i-1，只是用化合物ii-21(30mg，0.05mmol)代替化合物ii-20，得油狀液體20mg(化合物i-2)。收率：71.5％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.21–6.92(m,3h),6.81(s,1h),4.94(d,j＝8.0hz,1h),4.72–4.61(m,1h),4.28(d,j＝4.0hz,1h),4.03(t,j＝5.0hz,1h),3.20–2.98(m,2h),2.56–2.44(m,1h),2.15(s,1h),1.70–1.59(m,3h),1.46–1.32(m,2h),0.98(m,3h).esi-ms:m/z＝528.2[m+h]+。
實施例18化合物i-3的合成
操作過程同制備化合物i-2，只是用化合物ii-22(72mg，0.1mmol)代替化合物ii-20，得白色固體50mg(化合物ii-3)。收率：83.3％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.18–6.92(m,3h),6.83(s,1h),5.04–4.87(m,1h),4.71–4.60(m,1h),4.02(t,j＝5.0hz,1h),3.12(s,1h),2.51(m,1h),2.15(s,1h),1.66(dd,j＝14.5,7.0hz,3h),1.40(m,2h),.esi-ms:m/z＝534.2[m+h]+。
實施例19化合物i-4的合成
步驟1：將化合物dcc(74mg，0.3mmol)與dmap(87mg，0.7mmol)溶于無水二氯甲烷中，加入boc-纈氨酸(78mg，0.3mmol)，攪拌10min，冰浴下緩慢加入化合物ii-20(94mg，0.2mmol)，反應2h，硅藻土抽濾，濾液經水洗，飽和食鹽水洗，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮得粗產品。
步驟2：向粗產品中加入90％的cf3cooh(1.4ml)，反應20min，加入飽和碳酸氫鈉水溶液淬滅，加入乙酸乙酯萃取，水洗，飽和食鹽水洗，合并有機層，無水硫酸鈉干燥，抽濾，減壓濃縮。經柱層析(乙酸乙酯：石油醚＝2：1)得白色固體94mg(化合物i-4)。收率：85％；1hnmr(500mhz,dmso)δ9.35(d,j＝4.0hz,1h),7.40–7.18(m,3h),7.06(s,1h),5.13(d,j＝6.0hz,1h),4.94(q,j＝9.5hz,1h),4.53(t,j＝9.5hz,1h),3.90(s,1h),3.75(t,j＝5.0hz,1h),3.13(d,j＝5.0hz,2h),2.96–2.78(m,2h),2.61(dt,j＝13.5,8.5hz,1h),2.15–2.07(m,1h),2.03–1.96(m,1h),1.87–1.79(m,1h),1.58–1.42(m,3h),1.36(dd,j＝13.5,6.0hz,1h),0.82(m,9h).esi-ms:m/z＝626.2[m+h]+。
實施例20化合物i-5的合成
操作過程同制備化合物i-4，只是用ii-21(95mg，0.2mmol)代替ii-20，得白色固體90mg(化合物i-5)。收率：80％；1hnmr(500mhz,dmso)δ9.35(d,j＝3.5hz,1h),7.38–7.19(m,3h),7.04(m,1h),5.13(d,j＝6.5hz,1h),4.94(m,1h),4.53(t,j＝9.5hz,1h),3.90(s,1h),3.75(d,j＝5.0hz,1h),3.13(t,j＝6.0hz,2h),2.64–2.56(m,1h),2.15–2.06(m,1h),1.99(m,1h),1.83(dd,j＝12.0,6.5hz,1h),1.64(d,j＝6.5hz,1h),1.56–1.43(m,3h),1.36(dd,j＝13.5,6.0hz,1h),0.86–0.75(m,9h).esi-ms:m/z＝627.2[m+h]+。
實施例21化合物i-6的合成
操作過程同制備化合物i-4，只是用化合物ii-22(95mg，0.2mmol)代替化合物ii-20，得白色固體87mg(化合物i-6)。收率：77％；1hnmr(500mhz,cdcl3)δ7.30(d,j＝6.5hz,1h),7.11(d,j＝8.0hz,1h),7.08(s,1h),7.05(d,j＝11.5hz,1h),6.97(s,1h),5.02–4.93(m,1h),4.66(dd,j＝7.5,5.0hz,1h),4.24(dd,j＝5.0,1.5hz,1h),4.01–3.94(m,1h),3.38(d,j＝4.5hz,1h),2.98–2.83(m,2h),2.43(m,1h),2.18–1.99(m,2h),1.28(m,2h),0.99–0.94(m,3h),0.90(m,3h).esi-ms:m/z＝633.2[m+h]+。
實施例22：化合物對肝微粒體穩定性檢測
微粒體的準備：瑞德肝臟疾病研究(上海)有限公司；稱取1mg男性蒙古人種肝微粒體加入到800μl的pbs緩沖液中，再將1mg(溶于200μlpbs緩沖液中)nadph加入到上述的肝微粒體溶液中即可得到1mg/l的肝微粒體溶液；
向上述1485μl的1mg/l的肝微粒體溶液中加入15μl化合物(見表1，濃度為100μm/l，溶劑為dmso)，渦旋至樣品均勻，在37℃下孵育，在各個時間點0min、30min、1h、2h、4h吸取60μl于ep管中，迅速加入300μl乙腈(溶解有內標化合物)沉淀蛋白，渦旋，離心，吸取上清液340μl進lc/ms即可。
實驗結果如表1。替格瑞洛在120min內代謝了29.1％，氘代衍生物i-1～i-3分別代謝了15.3％，8.7％和8.6％，因此，本發明的氘代衍生物的代謝穩定性高于替格瑞洛。
表1i-1～i-3在人肝微粒體中的代謝動力學參數
實施例23：人肝微粒體代謝穩定性
為了進一步增強化合物的吸收及代謝穩定性，我們將纈氨酸引入氘代替格瑞洛衍生物中，制成前藥i-4～i-6，并考察了其在肝微粒體中的代謝穩定性以及其母體藥物的釋放情況。如圖1所示，化合物i-4～i-6能分別釋放出母體藥物i-1～i-3，其中，化合物i-5和i-6釋放率更高，說明前藥形式i-4～i-6能實現代謝活化，并保持穩定。
實施例24：sd大鼠體內的口服藥物血藥濃度：
精密稱取適量化合物(見表2)，用cmc-na溶液溶解分別配制成5mg/ml溶液用于動物灌胃給藥，給藥前進行過濾出菌，給藥劑量均為10mg/kg。
每只動物每次異氟烷麻醉后通過眼眶取血約0.10ml血液，edtak2抗凝，po組采集時間點為：灌胃后15min，30min，1h，2h，4h，6h，8h和24h。并于1小時之內離心分離血漿(離心條件：5000轉/分鐘，10分鐘，4℃)。取上清液進樣分析。
lc-ms-ms分析采用正離子方式檢測。所得濃度-時間數據，用das3.0藥代動力學軟件，采用統計矩法進行計算，得到大鼠灌胃給予化合物后主要吸收動力學參數t1/2、auc(0-t)、auc(0-∞)等。
為了進一步探索替格瑞洛衍生物否能改善其在大鼠體內的代謝情況，我們對化合物i-5和i-6進行了大鼠體內藥動學的研究，經10mg/kg灌胃給藥后，經不同時間15min，30min，1h，2h，4h，6h，8h和24h分別監測血漿中的氘代替格瑞洛衍生物i-2和i-3的濃度(原型藥物i-5和i-6在體內未檢出)，其結果如下表所示：
表2化合物i-5和i-6的藥物代謝動力學參數
從表2中我們發現，通過前藥設計，化合物i-5和i-6分別能在大鼠體內釋放出母體藥物i-2和i-3，化合物i-5和i-6的半衰期均有所改善，分別延長了12.4％和43.5％。化合物i-6的藥時曲線下面積auc(0-∞)值增加了11.7％，顯示出良好的藥代動力學性質。