本發明涉及生物學研究領域，更具體的是涉及一種提高羊肚菌母種制做成功率的方法。
背景技術：
羊肚菌是一種珍稀食用菌品種,因其菌蓋表面凹凸不平、狀如羊肚而得名。羊肚菌(morchella)，又名草笠竹，是一種珍貴的食用菌和藥用菌。羊肚菌于1818年被發現。用于食積氣滯、脘腹脹滿、痰壅氣逆喘咳。羊肚菌又稱羊肚菜、羊蘑。其結構與盤菌相似，上部呈褶皺網狀，既像個蜂巢，也像個羊肚，因而得名。羊肚菌在山火之后的兩至三年內產量特高，因此北美的采摘者會根據山火來采集羊肚菌。然而，當火災被控制后，在同一個地區內，它的生長數量會年復一年地減少。
近年來，隨著羊肚菌產業被越來越多的人的了解和關注，也隨著種植技術越來越完善，因此有許多企業或者個體戶加入到了羊肚菌種植行業，為了縮減自己的種植投入成本，許多企業或者個體戶想自己生產羊肚菌菌種，可是卻往往在羊肚菌母種生產的這個環節中就失敗了，他們在制作母種的過程中，(1)會存在接入試管的羊肚菌子實體小塊不萌發的情況，現有的作羊肚菌母種過程中是：在無菌環境下用手術刀把整個羊肚菌子實體切割，留取菌柄部分，把菌柄縱面用手術刀劃開，菌柄內部中空，劃開后的菌柄內側和外側都用75％的酒精棉擦拭進行殺菌處理，酒精擦拭后用手術刀切下0.2厘米平方的羊肚菌子實體組織塊放入培養皿中心位置，封口后放入生化培養箱23—25度培養3天，在這樣的制作母種操作方式下，會導致接入的組織塊不萌發，因為酒精擦拭消毒的過程在殺死其它雜菌的同時也會殺死羊肚菌的組織塊，使接入培養皿的羊肚菌組織塊失去活性，直接導致制作失敗；
(2)還會出現接入到試管的羊肚菌子實體組織塊萌發出了菌絲體，但是卻不單是羊肚菌菌絲還有其他雜菌菌絲，羊肚菌菌絲和雜菌菌絲生長在一起后，就很難把它們單獨分離出來了，在生產第一步就失敗了，他們的母種制作成功率通常只有1％或更低。
技術實現要素：
本發明的目的在于：為了解決現有羊肚菌母種制純成功率低的技術問題，本發明提供一種提高羊肚菌母種制做成功率的方法。
本發明為了實現上述目的具體采用以下技術方案：
一種提高羊肚菌母種制做成功率的方法，其特征在于，包括如下步驟：
1、培養基的準備：制作母種培養基，母種培養基經過高壓滅菌、冷卻和凝固后放入培養皿中，然后在把培養皿放入放入超凈工作臺備用；
2、接種工具的準備：包手術刀等各種接種工具放入放入超凈工作臺備用；
3、子實體的準備：把準備好的羊肚菌新鮮子實體放入超凈工作臺，紫外線殺菌20～30分鐘后備用；
4、培養：在無菌環境下，用步驟2中的手術刀把步3中的整個羊肚菌切割，留取菌柄部分，把菌柄用手術刀劃開，取菌柄內側長度為0.2厘米的組織塊放入步驟1中的培養皿中心位置，培養皿封口后放入生化培養箱12℃～18℃下培養3～4天，組織塊四周長出菌絲，當培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長0.8cm～1cm時，進行下一步提純；
5、菌絲提純：把經過步驟4的培養皿放入超凈工作臺，把其他接種工具放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌20～30分鐘后關閉，打開超凈工作臺其它工作模式，把培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長接入凝固試管培養基斜面的中心位置后，用硅膠塞把試管口封嚴后放人生化培養箱12℃～18℃下培養，觀察長滿的菌絲體是否是羊肚菌的菌絲，從而得到羊肚菌母種。
進一步地，在步驟4中，當培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長1cm時，進行下一步提純。
進一步地，步驟1中母種培養基的配方為步驟1中母種培養基的配方為：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，蛋白胨5克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，水1000毫升。
羊肚菌母種培養基的配制方法：稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水1000ml煮沸半個小時，紗布過濾，將馬鈴薯濾液重新加入到鍋中，補水至1000ml,繼續加熱沸騰后加入20g瓊脂，繼續文火煮沸至瓊脂完全溶解后再次補水至1000毫升，在瓊脂溶解后加入葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，蛋白胨5克。分裝試管，每試管約5-10ml，視試管大小而定，把分裝好的塞好硅膠塞的試管放入手提式高壓鍋內滅菌，滅菌過程中先首排凈高壓鍋內冷空氣，待溫度升至122-124度時開始計時，30分鐘后滅菌結束，取出試管擺斜面，冷卻后貯存備用。
本發明的有益效果如下：
1、本發明根據羊肚菌是一種適合低溫培養的菌類，它室外大田的適合培養季節是秋天到春天的時間段，所以羊肚菌菌絲在一定的低溫下都能生長的很好，而雜菌菌絲在高溫培養條件下生長速度加快，在低溫條件下生長放緩，或者停止生長，利用這樣的原理，調低培養皿中羊肚菌子實體組織塊的培養溫度，有效的抑制了雜菌菌絲和雜菌孢子的生長，有效的提高了母種制作的成功率,通過本發明的方法使得培養出來的菌絲完全是羊肚菌菌絲的概率增加80％，如此也就提高了羊肚菌母種制作的成功率，能把羊肚菌母種制作成功率提高到60％左右。
2、當培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長1cm時，進行下一步提純，是一種更有選擇，能使羊肚菌母種制作成功率提高到61.5％左右。
具體實施方式
為了本技術領域的人員更好的理解本發明，以下實施例對本發明作進一步詳細描述。
實施例1
本實施例提供一種提高羊肚菌母種制做成功率的方法，包括如下步驟：
1、培養基的準備：制作母種培養基，母種培養基經過高壓滅菌、冷卻和凝固后放入培養皿中，然后在把培養皿放入放入超凈工作臺備用；
2、接種工具的準備：包手術刀等各種接種工具放入放入超凈工作臺備用；
3、子實體的準備：把準備好的羊肚菌新鮮子實體放入超凈工作臺，紫外線殺菌20分鐘后備用；
4、培養：在無菌環境下，用步驟2中的手術刀把步3中的整個羊肚菌切割，留取菌柄部分，把菌柄用手術刀劃開，取菌柄內側長度為0.2厘米的組織塊放入步驟1中的培養皿中心位置，培養皿封口后放入生化培養箱12℃下培養3天，組織塊四周長出菌絲，當培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長0.8cm時，進行下一步提純；
5、菌絲提純：把經過步驟4的培養皿放入超凈工作臺，把其他接種工具放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌20分鐘后關閉，打開超凈工作臺其它工作模式，把培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長接入凝固試管培養基斜面的中心位置后，用硅膠塞把試管口封嚴后放人生化培養箱12℃下培養，觀察長滿的菌絲體是否是羊肚菌的菌絲，從而得到羊肚菌母種。
本實施例能把羊肚菌母種制作成功率提高到62％。
實施例2
本實施例提供一種提高羊肚菌母種制做成功率的方法，包括如下步驟：
1、培養基的準備：制作母種培養基，母種培養基經過高壓滅菌、冷卻和凝固后放入培養皿中，然后在把培養皿放入放入超凈工作臺備用；
2、接種工具的準備：包手術刀等各種接種工具放入放入超凈工作臺備用；
3、子實體的準備：把準備好的羊肚菌新鮮子實體放入超凈工作臺，紫外線殺菌30分鐘后備用；
4、培養：在無菌環境下，用步驟2中的手術刀把步3中的整個羊肚菌切割，留取菌柄部分，把菌柄用手術刀劃開，取菌柄內側長度為0.2厘米的組織塊放入步驟1中的培養皿中心位置，培養皿封口后放入生化培養箱18℃下培養4天，組織塊四周長出菌絲，當培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長1cm時，進行下一步提純；
5、菌絲提純：把經過步驟4的培養皿放入超凈工作臺，把其他接種工具放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌30分鐘后關閉，打開超凈工作臺其它工作模式，把培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長接入凝固試管培養基斜面的中心位置后，用硅膠塞把試管口封嚴后放人生化培養箱18℃下培養，觀察長滿的菌絲體是否是羊肚菌的菌絲，從而得到羊肚菌母種。
本實施例能把羊肚菌母種制作成功率提高到61.3％。
實施3
本實施例提供一種提高羊肚菌母種制做成功率的方法，包括如下步驟：
1、培養基的準備：制作母種培養基，母種培養基經過高壓滅菌、冷卻和凝固后放入培養皿中，然后在把培養皿放入放入超凈工作臺備用；
2、接種工具的準備：包手術刀等各種接種工具放入放入超凈工作臺備用；
3、子實體的準備：把準備好的羊肚菌新鮮子實體放入超凈工作臺，紫外線殺菌25分鐘后備用；
4、培養：在無菌環境下，用步驟2中的手術刀把步3中的整個羊肚菌切割，留取菌柄部分，把菌柄用手術刀劃開，取菌柄內側長度為0.2厘米的組織塊放入步驟1中的培養皿中心位置，培養皿封口后放入生化培養箱16℃下培養3.5天，組織塊四周長出菌絲，當培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長0.9cm時，進行下一步提純；
5、菌絲提純：把經過步驟4的培養皿放入超凈工作臺，把其他接種工具放入超凈工作臺，開啟紫外線燈殺菌25分鐘后關閉，打開超凈工作臺其它工作模式，把培養皿里羊肚菌組織塊周圍的菌絲長接入凝固試管培養基斜面的中心位置后，用硅膠塞把試管口封嚴后放人生化培養箱16℃下培養，觀察長滿的菌絲體是否是羊肚菌的菌絲，從而得到羊肚菌母種。
實施例4
母種培養基的配方為：馬鈴薯200克，葡萄糖20克，瓊脂20克，蛋白胨5克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，水1000毫升。
羊肚菌母種培養基的配制方法：稱取200g馬鈴薯，洗凈去皮切碎，加水1000ml煮沸半個小時，紗布過濾，將馬鈴薯濾液重新加入到鍋中，補水至1000ml,繼續加熱沸騰后加入20g瓊脂，繼續文火煮沸至瓊脂完全溶解后再次補水至1000毫升，在瓊脂溶解后加入葡萄糖20克，磷酸二氫鉀3克，硫酸鎂1.5克，蛋白胨5克。分裝試管，每試管約5-10ml，視試管大小而定，把分裝好的塞好硅膠塞的試管放入手提式高壓鍋內滅菌，滅菌過程中先首排凈高壓鍋內冷空氣，待溫度升至122-124度時開始計時，30分鐘后滅菌結束，取出試管擺斜面，冷卻后貯存備用。
以上所述，僅為本發明的較佳實施例，并不用以限制本發明，本發明的專利保護范圍以權利要求書為準，凡是運用本發明的說明書的內容所作的等同結構變化，同理均應包含在本發明的保護范圍內。