本發明涉及一種用于評估(分析)人類患者的潛在不良反應的風險的方法，所述潛在不良反應的風險是由給所述患者施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的，所述方法包括測定所述患者體內b細胞：t細胞比率，其中約1:5或更低的比率指示所述患者具有潛在不良反應的風險。因此，本發明涉及一種用于給b細胞：t細胞比率為約1:5或更低的患者施用cd19xcd3雙特異性抗體的方法(給藥方案)，所述方法包括(a)在第一時間段施用第一劑量的所述抗體，以及不間斷地(b)在第二時間段施用第二劑量的所述抗體，其中所述第二劑量超過第一劑量。在某些實施方案中，在第三時間段施用第三劑量的所述抗體。該給藥方案可應用于用于治療惡性cd19陽性淋巴細胞的方法，或可應用于用于緩解和/或預防由施用所述雙特異性抗體而介導的不良反應的方法。本發明還涉及cd19xcd3雙特異性抗體在制備本發明方法所使用的藥物組合物中的用途。本發明還公開了藥物包或試劑盒，所述藥物包或試劑盒包括在本發明的方法/給藥方案中定義的第一劑量和第二劑量以及任選的第三劑量的所述抗體。
背景技術：
基于抗體的癌癥療法需要具有與癌細胞的表面緊密結合的靶抗原才能起效。通過與表面靶標的結合，抗體可直接向癌細胞傳遞死亡信號，或者如果所述抗體是雙特異性抗體，可通過如募集細胞毒性t細胞而間接向癌細胞傳遞死亡信號。在理想的治療方案中，靶抗原在每個癌細胞上大量存在且容易接近，而在正常細胞中不存在、被屏蔽或少量存在。這種情況就為一個治療窗提供了基礎，其中一定量的基于抗體的治療藥物避開正常細胞而有效地攻擊癌細胞。
盡管抗體是治療多種疾病尤其是癌癥的有效手段，但是抗體給藥未必沒有副作用。不良反應可能導致患者健康狀況出現可逆或不可逆的變化。由于不良反應可能是有害的且不希望發生的，因此非常期望避免不良反應的發生。然而，雖然已知藥物會引發不良反應，但是藥物具有顯著的有益療效或甚至可以挽救生命，因此開具并施用藥物是不可避免或所接受的。
在臨床試驗中，可在不良反應(ae)和嚴重不良反應(sae)之間進行大體區分。具體來說，不良反應可根據不良反應的通用術語標準(ctcae)劃分為5個等級。1級涉及輕微ae，2級涉及中度ae，3級涉及嚴重ae，4級涉及致命或致殘ae，而5級為涉及ae的死亡。
抗體療法中觀察到的不良反應是發生與輸注相關的副作用，如細胞因子釋放綜合征(“crs”)。其他被描述為與crs相關的副作用不僅包括疲勞、嘔吐、心動過速、高血壓、背痛，還包括如癲癇發作、腦病、腦水腫、無菌性腦膜炎和頭痛的中樞神經系統反應(cns反應)
不僅在施用與t細胞受體結合的單克隆抗體時觀察到細胞因子釋放和神經性反應，在施用與t細胞受體的cd3部分結合的cd19xcd3單鏈雙特異性抗體(稱為blinatumomab(mt103))時也能觀察到。
blinatumomab(mt103)是一種以淋巴瘤為靶向的重組雙特異性單鏈cd19xcd3抗體，其與幾乎所有的b細胞和b腫瘤細胞表面上的cd19結合，同時可以與t細胞嚙合，從而觸發t細胞殺死該靶b細胞或b腫瘤細胞。blinatumomab由組裝成單個多肽鏈的四個免疫球蛋白可變結構域組成。該可變結構域中的兩個形成cd19的結合位點，所述cd19是一種在大多數b細胞和b腫瘤細胞上表達的細胞表面抗原。另外兩個可變結構域形成t細胞上的cd3復合物的結合位點。blinatumomab被設計成用于指揮體內細胞毒性或細胞破壞性t細胞來對抗腫瘤細胞，代表了一種治療癌癥的新療法。目前，blinatumomab正處于臨床試驗階段。
如wo99/54440中所述，在對b細胞系慢性淋巴細胞白血病(b-cll)患者進行重復團注施用blinatumomab的以往研究中，觀察到不良反應。如wo99/54440的圖19和圖20所示，響應分別兩次輸注施用3微克和10微克所述雙特異性單鏈抗體20分鐘，均發現了tnf、il-6和il-8的釋放，每次給藥后伴隨著細胞因子釋放。細胞因子的最大釋放量是在施用10微克雙特異性單鏈抗體后觀察到的。接下來的臨床試驗是以團注的方式給b細胞系惡性腫瘤患者施用劑量遞增的cd19xcd3雙特異性單鏈抗體，期間也觀察到不良反應。根據回顧性分析，22名患者中的7名出現早期神經性反應，包括如錯亂、共濟失調、言語障礙或定向障礙。
為了嘗試更好地控制這些不希望發生的副作用，cd19xcd3雙特異性單鏈抗體的給藥方式發生了改變，其中由團注改為更長時間的連續靜脈內施用所述抗體。如bargou等人(science321(2008):974-7)所示，以低至0.005毫克/平方米/天的劑量對非何杰金氏淋巴瘤患者連續給藥超過4周，其血液中的淋巴瘤靶細胞被清除。在0.015mg/m2/d劑量水平下，首次觀察到部分和全部腫瘤消退，并且以0.06mg/m2/d劑量水平治療的全部7名患者體內均具有觀察到腫瘤消退(上文引用的bargou等人)。cd19xcd3雙特異性單鏈抗體還導致骨髓和肝臟中腫瘤細胞的清除。然而，盡管這項(還在進行的)研究為cd19xcd3雙特異性單鏈抗體形式在血細胞源癌癥的治療中有治療潛能這一概念確立了臨床證據，但是在上述臨床試驗過程中仍發現了神經性反應。因此，由于blinatumomab是一種非常有前景的、可用于治療非何杰金氏淋巴瘤(nhl)、急性淋巴母細胞白血病(all)、慢性淋巴細胞白血病(cll)和/或外套細胞淋巴瘤的候選藥物，所以在用cd19xcd3雙特異性單鏈抗體治療有此需要的患者時，高度期望減少或者甚至完全避免不希望的副作用。
顯然，要設計一種基于cd19xcd3抗體的、又不會引起cns(神經性)反應(包括神經性反應)的療法是有難度的；換言之，希望能提供基于cd19xcd3抗體的藥物療法，患者對其的耐受力有所提升，即不希望的不良反應如cns反應有所減少或者甚至不發生。
盡管允許更為逐步激活t細胞群的藥物手段和方法(參見wo2007/068354)已有助于避免進行cd19xcd3雙特異性單鏈抗體治療的患者出現嚴重不良副作用，但遺憾的是這些措施仍不能避免神經性反應，尤其是在抗體給藥劑量超過5至10微克/m2/d(即24h)的病例中。
技術實現要素：
因此，本發明的基礎技術問題是要提供克服上述難題的給藥方案和方法。
本發明解決了這種需求，并就此提供了涉及用于給人類患者施用cd19xcd3雙特異性抗體的方法和給藥方案的具體實施方案。
本文將對這些具體實施方案進行表征和描述，權利要求中也會有所反映。
應注意到，除非上下文另有明確指代，本文所用的單數形式“一個”、“一種”和“某個(種)”均涵蓋復數形式。因此，例如，提及“一種試劑”，包括一種或多種此類不同試劑；而提及“該方法”，就包括提及本領域普通技術人員已知的等效步驟和方法，這些步驟和方法是可改變的，或可用本文描述的方法所取代的。
本發明引用的所有出版物和專利通過引用以其全文整并入。如通過引用并入的資料與本說明書相抵觸或不一致，本說明書將優先于任何此類資料。
除非另有指代，在一系列元素之前的術語“至少”應理解為是指該系列中每一個元素。本領域技術人員將識別或僅利用常規實驗就能確定本文描述的本發明的具體實施方案的許多等同物。意圖這些等同物被本發明涵蓋。
除非上下文另外要求，貫穿本說明書始終和下文的權利要求中的詞語“包含”和變型如“含有”和“包含著”應理解為指代含有某個指定的整體或步驟或者某些整體或步驟的集合，但不排除任何其他整體或步驟或者整體或步驟的集合。
本說明書全篇引用了多篇文件。無論上文還是下文的本文所引用的每篇文件(包括所有專利、專利申請、科學出版物、制造商的說明書、說明書等)，通過引用以其整體形式并入本說明書。本文均不能理解為承認本發明由于在先發明而無權早于此類公開內容。
如按照本文提供的給藥方案，就可以施用cd19xcd3雙特異性單鏈抗體且患者可以耐受，從不良反應角度考慮，尤其是從在抗體(還包括cd19xcd3雙特異性抗體)給藥期間觀察到的包括神經性反應在內的cns反應角度考慮，這項發現絕對是非同凡響的。
具體地，本發明人觀察到，如果那些被施用cd19xcd3雙特異性抗體的患者的b細胞：t細胞比率為約1:5或更低，他們將出現cns事件。因此，本發明首次確立了低b細胞：t細胞比率是在治療白血病和淋巴瘤中出現的惡性cd19陽性淋巴細胞過程中，發生包括神經性反應在內的不良反應的潛在高風險因素(參見實施例2、3和4)。
特別是，本申請的發明人觀察到外周血中b細胞：t細胞比率低的非何杰金氏淋巴瘤(nhl)患者和急性淋巴母細胞白血病(all)患者出現早期神經性反應的風險增加。該神經性反應主要出現在進行cd19xcd3雙特異性抗體治療的第一天或頭幾天。尤其是，該神經性反應大多數在開始治療后約12至120小時后出現。這些神經性反應是短暫的、完全可逆的，在停止治療后3至72小時內可緩解且無后遺癥。
這些意外發現是本發明人在用cd19xcd3雙特異性抗體進行多項臨床試驗研究中得到的：
“短期”輸注(團注)試驗中，22名患者中的7名具有早期神經性反應。所述7名患者中的6名的b細胞：t細胞比率在治療前就較低，即b細胞：t細胞比率為約1:5或更低。其余15名患者未出現神經性反應，其中僅有1名患者的b細胞：t細胞比率低。
在nhl臨床試驗(參見上文引用的bargou等人)中，一共39名患者接受治療直至2008年8月。此時，已發現所有因神經性反應而永久終止cd19xcd3雙特異性抗體治療的患者體內b細胞：t細胞比率低(即b細胞：t細胞比率的閾值低于1:5)。特別是，在10名b細胞：t細胞比率低的患者中觀察到5個神經性反應(5/10)，而未發現b細胞：t細胞比率高(即b細胞：t細胞比率高于1:5)的患者具有將致使cd19xcd3雙特異性抗體治療永久終止的神經性反應(0/29)。
此后，建立了一個低b細胞：t細胞比率的患者(即早期神經性反應風險增加的患者)的特殊群組，以便于對理論概述進行前瞻性分析，特別是為高風險患者尋找緩解步驟。
自從建立了單獨的高風險患者群組以來，8名nhl患者接受了前瞻性治療(截至2009年7月的數據)：6名患者的b細胞：t細胞比率低，2名患者的b細胞：t細胞比率高。再次發現沒有b細胞：t細胞比率高的患者具有神經性反應，而6名b細胞：t細胞比率低的患者中有3名具有神經性反應，從而造成治療終止。
一共69名nhl患者，包括b細胞慢性淋巴細胞白血病(cll)患者和外套細胞淋巴瘤(mcl)患者，接受了團注和連續輸注兩種方式的cd19xcd3雙特異性抗體治療：
觀察到61％的b細胞：t細胞比率低的患者具有神經性反應。相比之下，只有2％的b細胞：t細胞比率高的患者出現這些不良反應(參見下述實施例)。
在另一項ii期臨床試驗研究中，通過連續輸注的方式給成年all患者施用15μgcd19xcd3雙特異性單鏈抗體/天/平方米患者體表面積，給藥至少4周。11名b細胞：t細胞比率低于1:5的高風險組all患者中1名患者出現神經性反應，從而導致治療終止。相比之下，6名b細胞：t細胞比率高于1:5的低風險組患者沒有出現神經性反應。
此外，在對39名nhl患者進行的回顧性分析中，確定了外周血中1:5至1:10或低于1:5至1:10的b細胞對t細胞(b:t)比率基線是隨后發生神經性ae的唯一預測因素。該預測值在另8名患者中得到了前瞻性證實(參見實施例1)。
總之，這些數據確定了低b細胞：t細胞比率，即約1:5或更低的b細胞：t細胞比率，是一個在治療如nhl、mcl、cll和all的白血病和淋巴瘤中出現的惡性cd19陽性淋巴細胞時，采用cd19xcd3雙特異性抗體治療的患者體內發生不良反應(包括神經性反應)的潛在高風險因素(參見實施例1和4)。
因此，本發明的目的在于，提供一種方法，所述方法允許鑒別在采用cd19xcd3雙特異性抗體治療時可能處于遭受不良反應的風險的患者。該方法將提高藥物依從性，因為鑒別處于遭受不良反應的風險的患者，允許調整cd19xcd3雙特異性抗體的給藥方案。事實上，本發明人已經應用了他們的發現，即約1:5或更低的b細胞：t細胞比率可以是一個在采用cd19xcd3雙特異性抗體進行治療時遭受不良反應的潛在風險因素，并由此開發出一種旨在預防和/或緩解這些不良反應的給藥方案。
相應地，本發明的第一方面是提供一種用于評估(分析)人類患者的潛在不良反應的風險的方法，所述潛在不良反應的風險是由給所述患者施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的，所述方法包括測定來自所述患者的樣品中所述患者的b細胞：t細胞比率，其中約1:5或更低的比率指示所述患者具有潛在不良反應的風險。
“評估(分析)……風險”是指本發明第一部分所述的方法旨在評估或分析患者是否具有出現不良反應的更高或更低的可能性或概率(即，分別增加的或降低的風險)。相應地，普遍認為風險未必意味著患者會或者不會出現不良反應。
在本發明中，當患者的b細胞：t細胞比率為約1:5或更低時，所述患者具有(處于)潛在不良反應(還包括不良反應的發作)的增加的風險；而b細胞：t細胞比率高于1:5的患者不具有(不處于)潛在不良反應(還包括不良反應的發作)的風險，或至少具有(處于)降低的風險。
因此，約1:5或更低的b細胞：t細胞比率指示不良反應的風險，而高于1:5的b細胞：t細胞比率則不指示不良反應的風險。
所以，本發明第一部分所述方法上下文中所使用的術語“指示”是指，如果b細胞：t細胞比率為約1:5或更低，則患者的潛在不良反應的風險增加，；如果當b細胞：t細胞比率高于1:5時，則患者的潛在不良反應的風險降低。
“不良反應”為采用cd19xcd3雙特異性抗體治療患者時由藥物治療引起的有害且不希望的效果。不良反應又稱為“副作用”。某些不良反應只在開始治療、增加治療強度或終止治療時出現。本發明人觀察到，在采用cd19xcd3雙特異性抗體治療患者時可見的不良反應在開始治療后約12至120小時出現且是可逆的。
不良反應可能引起醫療并發癥。本發明人觀察到采用cd19xcd3雙特異性抗體治療的患者出現神經性反應。這些神經性反應如果不能停止或避免，則導致無法順應cd19xcd3雙特異性抗體治療。
然而，如本文中所述，發明人發現，b細胞：t細胞比率是患者是否處于潛在不良副作用的風險的指標。具體地，約1:5或更低的b細胞：t細胞比率是患者處于潛在副作用的風險的指標，而高于約1:5的b細胞：t細胞比率是患者不具有潛在副作用的風險或者至少具有潛在副作用的降低的風險的指標。
如上文所述，本發明第一部分所述的方法用于評估(分析)不良反應的風險，并且評估風險包括評估/分析可能性或概率。因此，提及不良反應的情況下所使用的術語“潛在”指的是就算患者的b細胞：t細胞比率可能為約1:5或更低，所述患者不一定會出現不良反應。
同理，就算患者的b細胞：t細胞比率可能高于約1:5，所述患者不一定就不會出現不良反應。因此，術語“潛在”意味著，本發明的第一部分的方法提供了針對患者是否會出現不良反應的預測，但不言自明，它無法提供100％可靠的預測，因為除b細胞：t細胞比率以外，如性別、年齡、體重、營養狀況、身體狀況、以往藥物治療情況等個體因素也可能對患者是否會出現不良反應造成影響。
根據本發明，不良反應的優選表征是神經性反應(本文中有時也稱為“cns反應”或“cns事件”，鑒于此，這些術語可等同使用)。所述神經性反應優選為選自錯亂、共濟失調、定向障礙、言語障礙、失語癥、言語損傷、小腦癥狀、震顫、失用癥、癲癇發作、癲癇大發作抽搐、癱瘓以及平衡紊亂。
不良反應的程度可例如根據nci不良反應的通用術語標準(ctcae)3.0版(出版日：2003年12月12日)進行測量。級別是指不良反應的嚴重性。3.0版ctcae對每種不良反應采用獨特的嚴重性臨床描述而示出了1級到5級：
1級：輕微不良反應
2級：中度不良反應
3級：嚴重不良反應
4級：致命或致殘的不良反應
5級：患者死亡
“患者”是即將或正在采用cd19xcd3雙特異性抗體進行治療的人個體。根據本發明，患者疑似或被認為具有或者已經具有惡性cd19陽性淋巴細胞(尤其是b細胞)。在后一種情況下，所述患者已被診斷為具有此類細胞。這些惡性cd19陽性淋巴細胞(尤其是b細胞)出現在正發展白血病和/或淋巴瘤的患者體內，以及/或者出現在患有白血病和/或淋巴瘤的患者體內。因此根照本發明，患者需要治療惡性cd19陽性淋巴細胞。優選地，即將或正在采用cd19xcd3雙特異性抗體進行治療的患者是根據本文所述的本發明第一部分的方法診斷的(或已經被診斷的)。
本發明第一部分所述方法的上下文中所使用的“由……介導的”是指，患者可能或可能不出現的不良反應是由施用cd19xcd3雙特異性抗體引起的。換言之，cd19xcd3抗體是可能導致患者出現潛在不良反應的成因。
可以通過團注給藥或者連續給藥的形式進行給藥，優選連續給藥。
根據本發明，術語“樣品”意指從人類患者獲得的任何生物樣品，所述樣品含有多核苷酸或多肽或其部分。生物樣品包括體液(如血液、血清、血漿、尿液、唾液以及脊髓液)和其中發現惡性cd19陽性淋巴細胞的組織來源。從患者獲得活組織切片和體液的方法是本領域所熟知的。一般來說，優選來源是含有外周血單核細胞(pbmc)、特別是b細胞和t細胞的生物樣品。含有外周血單核細胞(pbmc)、特別是b細胞和t細胞的的樣品優選取自人類患者的外周血。
其他優選樣品為全血、血清、血漿或滑液，最優選的是血漿或血清。然而，尤其優選的是來自人類患者的外周血的樣品。
本文中所用的“b細胞：t細胞比率”是指b細胞數量與t細胞數量的比率。優選地，測定取自人類患者的樣品中的所述比率。優選地，所述樣品取自人類患者的外周血。例如，外周血樣品中b細胞或t細胞的數量可通過本領域通常采用的任何方法測定，如通過facs分析法。
b細胞：t細胞比率優選為約1:5或更低，包括b細胞：t細胞比率為約1:6、1:7、1:8、1:9、1:10、1:11、1:12、1:13、1:14、1:15、1:20、1:100、1:200、1:400、1:500、1:1000、1:2000、1:3000、1:4000、1:5000或甚至更低，優選為1:9、1:10、1:50、1:100、1:500、1:1000，特別優選為1:9。
“測定b細胞：t細胞比率”包括：：
(a)測定來自患者的樣品中的、優選患者的外周血樣品中的b細胞總數；
(b)測定來自患者的樣品中的、優選患者的外周血樣品中的t細胞總數；
(c)計算步驟(a)中b細胞數量與步驟(b)中t細胞數量的比率，從而得到b細胞：t細胞比率。
值得注意的是，低b細胞：t細胞比率還可視為高t細胞：b細胞比率，反之亦然。因此，本文提供的針對低b細胞：t細胞比率的比率應相應地顛倒。
相比之下，b細胞：t細胞比率高于約1:5(優選1:9)的患者，包括b細胞：t細胞比率高于約1:4、1:3、1:2、1:1、2:1、3:1、4:1、5:1、6:1、7:1、8:1、9:1、10:1或更高的患者，在施用cd19xcd3雙特異性抗體時，遭受潛在不良反應的風險降低。
因此，本發明還預見了一種用于評估(分析)人類患者的潛在不良反應的風險的方法，所述潛在不良反應的風險是由給所述患者施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的，所述方法包括測定來自所述患者的樣品中所述患者的b細胞：t細胞比率，其中高于約1:5(優選1:9)的比率指示所述患者具有潛在不良反應的風險低。
發明人觀察到b細胞：t細胞比率為約1:5或更低的患者處于潛在不良反應的增加的風險，由此得出允許采用cd19xcd3雙特異性抗體治療這些患者的概念。考慮到這點，已經闡明，在能夠加大劑量之前，需要通過施用低劑量抗體若干天而使此類高風險患者的t細胞預適應或部分激活。因此已發現，每個時間單位給藥劑量的顯著下降提高高風險患者對所述抗體的耐受性。
實質上，本發明人發現，使患者在采用cd19xcd3雙特異性抗體治療之前“適應”cd19xcd3雙特異性抗體有益于避免不希望的不良反應(特別是不希望的神經性反應)(參見實施例6和7)。
因此，本發明的第二方面涉及一種用于給b細胞：t細胞比率為約1:5或更低的人類患者施用cd19xcd3雙特異性抗體(給藥方案)的方法，所述方法包括：
(a)在第一時間段施用第一劑量的所述抗體；以及不間斷地
(b)在第二時間段施用第二劑量的所述抗體；
其中所述第二劑量超過所述第一劑量。
本發明上下文中的術語“方法”應理解為包括用于本發明的方法的“給藥方案”。
本發明的上下文中“施用cd19xcd3雙特異性抗體”或“正施用cd19xcd3雙特異性抗體”或其任意語法形式是指cd19xcd3抗體是以藥物組合物的形式，所述藥物組合物任選地含有藥學上可接受的載體。因此，應理解為給人類患者施用含有cd19xcd3雙特異性抗體的藥物組合物。
所有語法形式的術語“施用(給藥)”意指cd19xcd3雙特異性抗體(以藥物組合物的形式)作為單獨的治療藥劑或與其他治療藥劑相結合地給藥。
因此預見到，本發明的藥物組合物用于協同治療方法，即與其他藥劑或藥物一起協同給藥，例如，其他用于治療患者的惡性cd19陽性淋巴細胞的藥物，以及/或者在本發明所述方法的情況下可能有益的任何其他治療藥劑。
例如，如果實施本發明所述方法以用于治療b細胞急性淋巴母細胞白血病或侵襲性nhl，它可與鞘內化療(inthrathecalchemotherapy)有利地結合，從而清除cns中的靶b細胞。例如，可以在根據本文中描述的方法施用cd19xcd3雙特異性單鏈抗體之前進行髓內化療。
本文中所述藥物組合物的給藥優選為靜脈內給藥。情況為，在本發明所述方法中，步驟(a)中的施用途徑以及/或者步驟(b)中的施用途徑為靜脈內給藥。可通過團注或連續(持續)給藥，優選連續給藥。
cd19xcd3雙特異性抗體(例如以藥物組合物的形式)的給藥可以為團注或連續(或有時本文也稱為持續)給藥，優選連續或持續給藥。連續給藥是指基本上無間斷地給藥。“基本上無間斷”包括連續給藥但通常不含連續流動或空間延伸。
在某些實施方案中，所述的第一劑量并無治療活性，即其為亞治療劑量。為實現本發明的目的，5μg/m2/d或更低的劑量被當做是亞治療性的，但并無嚴格限制。
在本發明的一個優選實施方案中，第二劑量具有治療活性。
“治療有效量”或“有治療活性的”意指給所施用的目標產生療效的cd19xcd3雙特異性抗體的劑量。
確切劑量將取決于治療的目的，并且是本領域技術人員運用已知技術可以確定的。如本領域所熟知的以及上文所述，可能需要根據年齡、體重、基本健康狀況、性別、飲食習慣、藥物相互作用以及情況的嚴重性進行調整，并且該調整是本技術領域技術人員通過常規實驗可以確定的。本發明所述的各方法或方法步驟的療效可另外通過所有已有指示療效的方法和途徑檢測。例如預見到，可以通過外科切除或活組織檢查受影響的組織/器官，隨后用免疫組化(ihc)或比較免疫學技術分析的方式來檢測療效。或者還預見到，檢測患者血清內腫瘤標記物(如果存在)，來判定治療方法是否已產生療效。此外或可選地，還可以評估相應患者的整體狀況(身體健康、有幸福感、腫瘤介導的病癥的減少等)，從而幫助技術從業者評價是否已產生療效。技術人員知道許多能讓他或她觀察到本發明所述化合物療效的其他方法。
本發明的第三方面涉及一種用于治療b細胞：t細胞比率為約1:5或更低的人類患者的惡性cd19陽性淋巴細胞的方法，所述方法包括：
(a)在第一時間段施用第一劑量的cd19xcd3雙特異性抗體；以及不間斷地
(b)在第二時間段施以第二劑量的所述抗體；
其中所述第二劑量高于所述第一劑量。
白血病及/或淋巴瘤中發現惡性cd19陽性淋巴細胞(特別是b細胞)。因此，在一個優選實施方案中，cd19陽性淋巴細胞是淋巴瘤或白血病細胞。
“惡性”描述了導致逐步惡化的疾病、特別是淋巴瘤或白血病以及本文中所述疾病的淋巴細胞(特別是b細胞)。該術語是對癌癥(在本發明中就是淋巴瘤和白血病以及本文中所述疾病)的最常見的描述。惡性cd19陽性淋巴細胞(特別是b細胞)無法自己限制生長，能侵入相鄰組織中，還可能擴散到遠距離組織(轉移)。本文中所用的“惡性”與癌性同義。
然而，由于“正常”(非惡性的)淋巴細胞(特別是b細胞)也表達cd19，預期cd19xcd3雙特異性抗體也結合這些正常淋巴細胞(特別是b細胞)，并且一旦募集細胞毒性t細胞(由于cd19xcd3雙特異性抗體的第二特異性)，造成這些正常b細胞減少。但是，預期這些正常b細胞群在沒有cd19xcd3雙特異性抗體情況下將重建。leandro及同事觀察到，風濕性關節炎患者體內b細胞在因抗-cd20抗體導致的b細胞損耗后重建(arthritisrheum.2006feb；54(2):613-20)。如cd20，cd19同樣在幾乎所有b細胞上表達，可預期b細胞在因cd19xcd3雙特異性抗體而損耗后也將重建。
淋巴瘤優選地是惰性或侵襲性b細胞非何杰金氏淋巴瘤(bnhl)、外套細胞淋巴瘤(mcl)或慢性淋巴白血病(cll)。在本發明的含義內，術語“b細胞非何杰金氏淋巴瘤”或“b細胞源非何杰金氏淋巴瘤”包括惰性及侵襲性b細胞非何杰金氏淋巴瘤(bnhl)。本文中所用的術語“惰性或侵襲性b細胞非何杰金氏淋巴瘤(bnhl)”指的是惡性b細胞源腫瘤性疾病。惰性bnhl是低度惡性淋巴瘤。侵襲性bnhl是高度惡性淋巴瘤。b細胞非何杰金氏淋巴瘤(bnhl)可能有利地是濾泡性淋巴瘤、淋巴漿細胞淋巴瘤、邊緣區細胞淋巴瘤、外套細胞淋巴瘤(mcl)、彌漫性大型b細胞淋巴瘤(dlbcl)、伯基特氏淋巴瘤、小淋巴細胞淋巴瘤(sll/cll)以及任意其它b細胞源亞型。本文中所用的術語“b細胞白血病”可能有利地是任意b細胞白血病(如慢性淋巴細胞白血病或急性淋巴細胞白血病)。更多參考參見如http://www.cancer.org。優選地，如以下實施例所示，惰性b細胞非何杰金氏淋巴瘤可采用針對性抗人cd3及人cd19的雙特異性單鏈抗體進行治療。
白血病優選地是b細胞急性淋巴母細胞白血病(all)。
本發明的第四方面涉及一種方法，用于緩解和/或預防對b細胞：t細胞比率為1:5或更低的患者施以cd19xcd3雙特異性抗體而介導產生的不良反應，所述方法包括：
(a)在第一時間段中施以第一劑量所述抗體，不間斷的
(b)在第二時間段中施以第二劑所述抗體
其中所述第二劑的劑量高于第一劑量。
不良反應優選的是優選自錯亂、共濟失調、定向障礙、言語障礙、失語、言語障礙、小腦癥狀、震顫、失用、癲癇發作、癲癇大發作抽搐、癱瘓以及平衡紊亂的一種或多種神經性反應(參見實施例2和3)。
具體地，在用cd19xcd3雙特異性抗體進行治療的起始階段發現的神經性反應包括如錯亂和定向障礙。文中所用的“錯亂”是指喪失下述能力：通過時間、地點以及個人身份將自己正確定位于世界的定向能力，和正確回憶在先事件或學習新事物的記憶能力。患者通常難以集中精力，思維不僅模糊不清而且經常顯著變慢。具有神經性反應的患者還會失憶。錯亂經常導致識人和/或地點或者辨別時間和日期的能力喪失。感到定向障礙在錯亂中是普遍的，決策能力受損。神經性反應還包括說話不清和/或選詞困難。此類障礙能損害語言表達和理解二者以及讀寫。伴隨著神經性反應，可能某些患者除了尿失禁還出現眩暈和頭昏。
在用cd19xcd3雙特異性抗體治療b細胞依賴性淋巴或白血病惡性腫瘤時，出現的神經性反應還受以下因素影響：
1.藥物的存在
cd19xcd3雙特異性抗體將t細胞毒性重新靶向如b細胞淋巴瘤或白血病細胞中存在的惡性cd19陽性淋巴細胞。鑒于此，可以合理推測患者體內存在的cd19xcd3雙特異性抗體正是引發不良反應的原因。此外，僅在cd19xcd3雙特異性抗體具有生物學活性的身體部分觀察到副作用。因此，推定用cd19xcd3雙特異性抗體進行治療而引發的神經性反應取決于患者腦脊液(csf；液體)中所述抗體的出現。cd19xcd3雙特異性抗體以及t細胞只在低b細胞：t細胞比率的nhl患者的腦脊液中發現，這一事實可以支持上述推定。如文中所述，此類患者群在接受抗體治療后出現神經性反應的風險高。這一發現可表明，cd19xcd3雙特異性抗體能夠進入高風險nhl和all患者的分開血管和cns(包括腦部)的血管周隙。在那兒，cd19xcd3雙特異性抗體隨后結合t細胞來靶向局部b細胞(不論是良性的還是惡性的)，這可能導致局部細胞因子釋放，隨后可引起神經性反應。
2.藥物的劑量
另外，神經性反應看起來取決于cd19xcd3雙特異性抗體的劑量。例如，在高風險患者組中，以5μg/m2體表面積進行cd19xcd3雙特異性抗體連續給藥時沒有觀察到神經性反應，但以15μg/m2體表面積或更高進行cd19xcd3雙特異性抗體連續給藥時，觀察到神經性反應。由于這個原因，如文中所述，低于5μg/d/m2的劑量被認為是亞治療性的。從示于所附實施例的數據明顯可見藥物劑量的作用。該觀察發現可提示，在低b細胞：t細胞比率的高風險患者中，神經性反應是劑量依賴性的。
3.靶細胞和效應細胞的存在
如前所述，推定cd19xcd3雙特異性抗體治療時出現的神經性反應取決于pvs/cns中存在i)靶細胞，即攜帶cd19-抗原的b細胞以及ii)效應細胞，即攜帶cd3抗原的細胞毒性活性t細胞。
鑒于此，假設來自pvs/cns的例如靶b細胞的損耗應該會導致避免神經性反應，這是很有趣的。實際上，這正是在所提到的ii期研究中所觀察到的，在該ii期研究中，目前正在用cd19xcd3雙特異性抗體治療b細胞系急性淋巴母細胞白血病(all)患者。
在all中，通常在cns中白血病病灶的發生率較高。因此，每位加入文中所述ii期臨床研究的all患者過去都已接受過標準all療法，包括靜脈內甲氨蝶呤和/或鞘內化療，以預防中樞神經系統舊病復發。除此之外，他們中的某些人還接受軸索(neuroaxis)輻射治療。此后，all患者接受了一項鞏固治療，即連續給藥15μg/d/m2的cd19xcd3雙特異性抗體的若干次為期四周的治療周期。至今為止，17名用cd19xcd3雙特異性抗體治療的all患者中僅有1名出現了神經性反應。該名患者是11名屬于b細胞：t細胞比率低于1:5的高風險組患者當中的一名。6名b細胞：t細胞比率高于1:5的低風險組患者無一出現神經性反應。因此可以假設，所述(癥狀前)中樞神經系統(cns)治療降低了all患者出現神經性反應的風險，原因在于已經從pvs和cns中(包括腦部)除去了b淋巴靶細胞。然而，因這些組織中無b靶細胞，細胞毒性t細胞沒有被完全激活。因此，所述患者群觀察到的神經性反應出現頻率較低。
因此，在上述pvs/cns中有靶b細胞的情況下，缺少上述某種因素可能有助于預防神經性反應。然而，例如鞘內化療并不是nhl治療的可選療法。舉例來說，鞘內化療在惰性nhl治療中不起作用，而對于侵襲性nhl，尚不清楚鞘內化療是否可作為可選治療方案。此外，鞘內化療對all患者具有高毒性，因此涉及相當大的健康風險。
鑒于上文所述，要減少上述任一指示因素而不喪失療效是一項不輕松的任務，因為比如要避免nhl的pvs/cns中存在b細胞并不容易實現。此外，已經發現，包括預給藥或協同給藥高劑量類固醇在內的其他措施無法預防高風險患者的神經性反應。
然而，通過采用本發明所述的方法/給藥方案，可以為處于此類不良反應高風險的患者(如果他們的b細胞：t細胞比率約為1:5或更低的話)緩解和/或預防不良反應的發生。本發明預見了提供甚至不受上述可影響采用cd19xcd3雙特異性抗體治療的因素影響的給藥方案(方法)。
因此，本發明的優選方面涉及一種用于評估(分析)人類患者的潛在不良反應的風險的方法，所述潛在不良反應的風險是由給人類患者施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的，所述方法包括測定來自所述患者的樣品中b細胞：t細胞比率，其中約1：5或更低的比率指示所述患者具有潛在不良反應的風險，其中給所述患者：
(a)在第一時間段施用第一劑量的所述抗體；不間斷地
(b)在第二時間段施用第二劑量的所述抗體；
其中所述第二劑量高于所述第一劑量；
以用于
(i)治療惡性cd19陽性淋巴細胞；和/或
(ii)緩解和/或預防由cd19xcd3雙特異性抗體的施用介導的不良反應。
優選地，在此優選方面，如下文所述，在第三時間段給患者施用以第三劑量的所述抗體。相應地，文中在該三階段方法(給藥方案)情況下所述的具體實施方案和方面可應用于該優選方面。
本發明所述方法的一方面，所述第二時間段超過所述第一時間段。術語“超過”是指第二時間段至少比第一時間段長一天。
本發明所述的每個方法(給藥方案)可以重復比如一次、兩次、三次、四次、五次、六次或更多次；并且在任何情況下，只要對緩解和/或治療患者的惡性cd19陽性淋巴細胞、進而治療淋巴瘤或白血病產生有益的作用，可盡可能多地重復。按照本發明的教導，從業者可根據患者的b細胞：t細胞比率來決定患者是否需要提前通過采用本發明所述的給藥方案(即在施用高劑量cd19xcd3雙特異性抗體之前施用低劑量，以使患者“適應”)使患者“適應”進一步的采用cd19xcd3雙特異性抗體的治療。
應理解，本文所述的劑量或天的范圍用量通過為1、2、3、4或5的增量進行示例。然而在增量高于1的情況下，這些范圍還包括較小的增量，例如以增量為1示例的那些范圍(10至30包括如10、11、12、13、13等直至30)，或再更小的增量，如小數點后的數值。
本發明的另一方面預見了所述第一時間段為至少3天，不排除更長的時間段，如8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。由此，“更長”不限于1(一)整天為最小的時間單位，即也可以是1/2天或完整小時數。但最小時間單位優選是一整天。
相應地，所述第一時間段超過3天。更優選地，預見到所述第一時間段為3到10天，特別優選7天。
文中所用的定義為“x至y”的時間區間等同于定義為“x和y之間”的時間區間。這兩種時間區間具體都包括上限和下限。即意味著例如時間區間為“3至10天”或在“3至10天”之間包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天和/或8天。
如文中所述，本發明人觀察到，在第一時間段使b細胞：t細胞比率為約1:5或更低的人類患者“適應”采用cd19xcd3雙特異性抗體的治療，允許在第二時間段采用增大的第二劑量的抗體治療該人類患者，借此可以更好地控制不良反應(特別是神經性反應)，即可避免不良反應的發生，或至少將不良反應保持在依據ctcae的可接受級別內。
然而，為達到此改善目的，需通過在第一時間段給b細胞：t細胞比率為約1:5或更低的人類患者施用第一劑量的抗體(其中所述第一劑量低于后續(第二)劑量)，而使其“適應”cd19xcd3雙特異性抗體。給藥可以是團注給藥或連續給藥，優選連續給藥。
與第一時間段的持續時間相同，第二時間段的持續時間可以根據例如人類患者的年齡、性別、體重等而改變。
因此，本發明的再一方面預見了所述第二時間段為最少18天長，不排除甚至更長的時間段，如19天、20天、25天、30天、35天、40天、45天、49天、50天、55天、60天、65天、60天、65天、70天、75天、80天、81天、82天、83天、84天、85天、86天、87天、88天或90天。據此，“更長”不限于1(一)整天為最小的時間單位，即也可以是1/2天或完整小時數。但最小時間單位優選是一整天。
相應地，所述第二時間段超過18天。更優選地，預見到所述第二時間段為18到81天，特別優選21天或49天。
文中所用的定義為“x至y”的時間區間等同于定義為“x和y之間”的時間區間。這兩種時間區間具體都包括上限和下限。即意味著如時間區間為“18至81天”或在“18至81天”之間包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、32天、34天、36天、38天、40天、42天、44天、46天、48天、50天、52天、54天、56天、58天、60天、61天、62天、63天和/或64天。
在本發明方法/給藥方案的更優選的實施方案中，所述第一時間段為3天至10天，而所述第二時間段為18天至81天。
在甚至更優選的實施方案中，所述第一時間段為7天，所述第二時間段為21天或49天。
在文中所述臨床試驗中，觀察到治療nhl的劑量15μg/m2/d導致在計算機斷層掃描中可見的腫瘤收縮。還觀察到all治療中的劑量15μg/m2/d導致微小殘留病，甚至可以清除微小殘留病。
微小殘留病(mrd)是指治療期間或治療后，當患者處于緩解期(沒有疾病的癥狀或跡象)時患者體內殘留的少量白血病/淋巴瘤細胞。至少十年前還沒有足夠靈敏的評估/檢測癌癥的方法來檢測mrd。但現在已有非常靈敏的、基于dna、rna或蛋白的分子生物學檢測方法，這些方法可測量組織樣品中微量水平的癌細胞，有時可達百萬正常細胞中存在1個癌細胞的水平。
在癌癥、尤其是白血病的治療中，mrd檢測具有幾項重要作用：判定治療是否根除癌癥或這是否有殘留，從而比較不同治療的功效，監測患者緩解期狀況以及白血病或癌癥的復發，以及選擇最能滿足這些需求的治療手段(個性化治療)。
因此，在本發明方法/給藥方案的又一方面中，所述第一劑量為1至15μg/m2/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m2/d。特別優選的劑量為5或15μg/m2/d。
文中所用的定義為“x和y之間”的劑量區間等同于定義為“x至y”的劑量區間。這兩種劑量區間具體都包括上限和下限。即意味著例如劑量區間為在“1和15之間”或“1至15”包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m2/d的劑量。
“d”表示一天。
“m2”表示一平方米患者體表面積(bsa)。“正常”bsa的平均值一般取為成人約1.73m2、新生兒約0.25m2、兩歲兒童約0.5m2、9歲兒童約1.07m2、10歲兒童約1.14m2、12-13歲兒童約1.33m2，而男性約為1.9m2，女性約為1.6m2。
然而，還可以用以下公式之一更為精確地計算bsa(在計算bsa時，以下每個公式都可以使用)：
-mosteller公式(mosteller,nengljmed1987oct22；317(17):1098)：
bsa(m2)＝([身高(cm)x體重(kg)]/3600)1/2或以英寸和磅計：
bsa(m2)＝([身高(in)x體重(lbs)]/3131)1/2
-dubois公式(dubois,archintmed191617:863-871)：
bsa(m2)＝0.007184x身高(cm)0.725x體重(kg)0.425
-haycock公式(haycock,thejournalofpediatrics197893:1:62-66)：
bsa(m2)＝0.024265x身高(cm)0.3964x體重(kg)0.5378
-gehan公式(gehan,cancerchemotherrep197054:225-35)：
bsa(m2)＝0.0235x身高(cm)0.42246x體重(kg)0.51456
-boyd公式(boyd,universityofminnesotapress,1935)：
bsa(m2)＝0.0003207x身高(cm)0.3x體重(克)(0.7285-(0.0188xlog10(克)
術語“μg”包括“cd19xcd3雙特異性抗體制備物的微克數”。優選地，不超過10％的所述cd19xcd3雙特異性抗體制備物折疊錯誤。由此可知，在優選的實施方案中，正確折疊的cd19xcd3雙特異性抗體占90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或甚至達到100％。可想象到，抗體制備物可能任選地包含其他成分，如凍干保護劑、表面活性劑、填充劑、粘合劑及/或膨脹劑等。優選地，這些其他成分的含量沒有包括在本發明“劑量”和/或方法(給藥方案)所用的術語“μg”內。
例如，1μg/m2/d的劑量是指1μgcd19xcd3雙特異性抗體在一天內對每平方米人體表面均勻或連續給藥。“在一天內連續”是指允許無間斷的長期進行的輸注。
本發明所述方法/給藥方案的再一個方面中，所述的第二劑量處于15至60μg/m2/d，或15至90μg/m2/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55和60μg/m2/d，或15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、80和90μg/m2/d。特別優選的劑量是60或90μg/m2/d。因而所述第二劑量具有治療活性。
在優選的實施方案中，所述第一劑量為5至15μg/m2/d，而第二劑量為15至60或15至90μg/m2/d。
文中所用的定義為“x與y之間”的劑量區間等同于定義為“x至y”的劑量區間。這兩種時間區間具體都包括上限和下限。即意味著如劑量區間為在“15與60之間”或“15至60”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和/或60μg/m2/d的劑量。
應理解，本文所述的范圍通過為5的增量進行示例。然而，這些范圍還包括較小的增量，如以增量為1示例的那些范圍(10至30包括如10、11、12、13、13等直至30)，或再更小的增量，如小數點后的數值。
優選地，對于治療惡性cd19陽性淋巴細胞，或對于緩解和/預防由施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的不良反應，用于施用cd19xcd3雙特異性抗體的方法不包括以下給藥方案：
(i)按5μg/m2雙特異性抗體的劑量給藥一天，隨后在該時間段的剩余時間里(第二天以及接下來連續的每一天)以15μg/m2為日劑量給藥；以及/或者
(ii)按15μg/m2雙特異性抗體的劑量給藥一天，隨后在該時間段的剩余時間里(第二天以及接下來連續的每一天)以45μg/m2為日劑量給藥；以及/或者
(iii)按5μg/m2雙特異性抗體的劑量給藥一天，再按15μg/m2給藥一天，隨后在該時間段的剩余時間里(第三天以及接下來連續的每一天)以45μg/m2為日劑量給藥；以及/或者
(iv)按少于10-80μg/m2雙特異性抗體的劑量給藥一天，隨后(第二天以及接下來連續的每一天)以10-80μg/m2的劑量給藥；以及/或者
(v)按少于10-80μg/m2雙特異性抗體的劑量給藥一天，再按少于10-80μg/m2的劑量給藥一天，隨后(第三天以及接下來連續的每一天)以少于10-80μg/m2的劑量給藥。
如文中所述，b細胞：t細胞比率高于1:5的患者不必須通過本發明的給藥方案適于cd19xcd3雙特異性抗體的治療。這些患者出現潛在不良反應的風險較低，可以以5μg至75μg/平米體表面積/天的恒定劑量接受cd19xcd3雙特異性抗體給藥而治療至少4周。所述給藥優選連續給藥。
在本發明方法(給藥方案)的另一個實施方案中，所述方法還包括在第一和第二時間段的第一劑量和第二劑量后在第三時間段施用第三劑量的所述抗體。因此，本發明提供了一種三3階段方法(給藥方案)。
第三劑量的給藥是靜脈內給藥。可以團注的形式或連續地給藥，優選連續給藥。
在本發明所述方法的一方面，所述第三時間段超過所述第一和第二時間段。術語“超過”是指第三時間段至少比第一和第二時間段長一天。
與第一和第二時間段的持續時間相同，第三時間段的持續時間可以根據例如人類患者的年齡、性別、體重等而改變。
本發明的三階段給藥方案方面預見到，所述第一時間段為最少3天長，不排除甚至更長的時間段，如8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。由此，“更長”不限于1(一)整天為最小的時間單位，即也可以是1/2天或完整小時數。但最小時間單位優選是一整天。
相應地，所述第一時間段超過3天。更優選地，預見到所述第一時間段為3到10天，特別優選7天。
文中所用的定義為“x至y”的時間區間等同于定義為“x和y之間”的時間區間。這兩種時間區間具體都包括上限和下限。即意味著如時間區間為“3至10天”或在“3至10天”之間包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天和/或8天。
本發明的三階段給藥方案方面預見到，所述第二時間段為最少3天長，不排除甚至更長的時間段，如8天、9天、10天、11天、12天、13天或14天。由此，“更長”不限于1(一)整天為最小的時間單位，即也可以是1/2天或完整小時數。但最小時間單位優選是一整天。
相應地，所述第一時間段超過3天。更優選地，預見到所述第一時間段為3到10天，特別優選7天。
文中所用的定義為“x至y”的時間區間等同于定義為“x和y之間”的時間區間。這兩種時間區間具體都包括上限和下限。即意味著如時間區間為“3至10天”或在“3至10天”之間包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天和/或8天。
本發明的三階段給藥方案方面預見到，所述第三時間段為最少8天長，不排除甚至更長的時間段，如8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、32天、34天、36天、38天、40天、42天、、44天、46天、48天、50天、52天、54天、56天、58天、60天、61天、62天、63天、64天、65天、66天、67天、68天、69天、70天和/或71天。由此，“更長”不限于1(一)整天為最小的時間單位，即也可以是1/2天或完整小時數。但最小時間單位優選是一整天。
因此，所述第一時間段超過8天。更優選地，預見到所述第一時間段為8到78天，特別優選14天或42天。
文中所用的定義為“x至y”的時間區間等同于定義為“x和y之間”的時間區間。這兩種時間區間具體都包括上限和下限。即意味著例如時間區間為“18至78天”或在“18至78天”之間包括1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天、8天、9天、10天、11天、12天、13天、14天、15天、16天、17天、18天、19天、20天、21天、22天、23天、24天、25天、26天、27天、28天、29天、30天、32天、34天、36天、38天、40天、42天、44天、46天、48天、50天、52天、54天、56天、58天、60天、61天、62天、63天、64天、65天、66天、67天、68天、69天、70天和/或71天。
在本發明的三階段方法/給藥方案的更優選的實施方案中，所述第一時間段為3至10天，所述第二時間段為3至10天，而所述第三時間段為8至78天。
在甚至更優選的實施方案中，所述第一時間段為7天，所述第二時間段為7天，而所述第三時間段為14天或42天。
在本發明三階段方法/給藥方案的實施方案中，所述第三劑量超過所述第一劑量和第二劑量。所述第二和第三劑量優選地具有治療活性。值得注意的是，所述第二劑量超過所述第一劑量。
因此，在本發明三階段方法/給藥方案的另一方面，所述第一劑量為1至15μg/m2/d，優選為5至15μg/m2/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m2/d。特別優選的劑量為5或10μg/m2/d。
在本發明三階段方法/給藥方案的另一方面，所述第二劑量為1至15μg/m2/d，優選為5至15μg/m2/d，即1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m2/d。特別優選的劑量為15μg/m2/d。
文中所用的定義為“x與y之間”的劑量區間等同于定義為“x至y”的劑量區間。這兩種劑量區間具體都包括上限和下限。即意味著如劑量區間為在“1與15之間”或“1至15”包括1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、12、13、14、15μg/m2/d的劑量。
在本發明三階段方法/給藥方案的另一方面，所述第三劑量為15至60μg/m2/d，優選為20至60μg/m2/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55和60μg/m2/d。特別優選的劑量為60μg/m2/d。或者，所述第三劑量為15至90μg/m2/d，優選為60至90μg/m2/d，即15、20、25、30、35、40、45、50、55、60、70、80和90μg/m2/d。
在本發明三階段方法/給藥方案的優選實施方案中，所述第一劑量為1至15μg/m2/d，所述第二劑量為1至15μg/m2/d，而所述第三劑量為15至60或15至90μg/m2/d。
特別優選地，所述第一劑量為5μg/m2/d，所述第二劑量為15μg/m2/d，而所述第三劑量為60μg/m2/d。或者，所述第三劑量可為90μg/m2/d。
文中所用的定義為“x與y之間”的劑量區間等同于定義為“x至y”的劑量區間。這兩種劑量區間具體都包括上限和下限。即意味著例如劑量區間為在“15與60之間”或“15至60”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59和/或60μg/m2/d的劑量。同樣地，意味著例如劑量區間為在“15與90之間”或“15至90”包括15、16、17、18、19、20、21、22、23、24、25、26、27、28、29、30、31、32、33、34、35、36、37、38、39、40、41、42、43、44、45、46、47、48、49、50、51、52、53、54、55、56、57、58、59、60、61、62、63、64、65、66、67、68、69、70、71、72、73、74、75、76、77、78、79、80、81、82、83、84、85、86、86、87、88、89或90μg/m2/d的劑量。
鑒于本發明人觀察到三階段(步)方法/給藥方案有助于避免本文中所述的不良反應，本發明涉及一種治療患者體內的惡性cd19陽性淋巴細胞的方法，所述方法包括(a)在第一時間段施用第一劑量的所述抗體；(b)在第二時間段施用第二劑量的所述抗體；以及不間斷地(c)在第三時間段施用第三劑量的所述抗體。
本發明還涉及一種用于治療患者體內的惡性cd19陽性淋巴細胞的方法，所述方法包括(a)在第一時間段施用第一劑量的所述抗體；(b)在第二時間段施用第二劑量的所述抗體；以及不間斷地(c)在第三時間段施用第三劑量的所述抗體。
此外，本發明還涉及一種用于緩解和/或預防通過給人類患者施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的不良反應的方法，所述方法包括(a)在第一時間段施用第一劑量的所述抗體；(b)在第二時間段施用第二劑量的所述抗體；以及不間斷地(c)在第三時間段施用第三劑量的所述抗體。
優選地，第一、第二及第三時間段正如本文中別處描述。
關于劑量，地如本文中別處描述，優選第二劑量超過第一劑量，而第三劑量超過第二劑量。更優選地，第一劑量為5μg/m2/d，第二劑量為15μg/m2/d而第三劑量為60μg/m2/d。或者，第三劑量還可為90或120μg/m2/d。
如上文所記錄，本發明涉及使用cd19xcd3雙特異性抗體的治療方法/給藥方案，所述抗體含有能與人cd3-ε鏈的表位結合的第一結合域和能與人cd19結合的第二結合域。對于根據本發明方法所述的雙特異性分子的實施例在wo99/54440、wo2004/106381以及wo2008/119565中有詳細描述。其中公開的所有具體cd19xcd3雙特異性抗體(包括其變體、片段及等同物等)，是本發明特別優選的cd19xcd3雙特異性抗體。
文中所用的“cd19xcd3雙特異性抗體”(包括cd19xcd3雙特異性單鏈抗體)是指含有兩個結合域的單多肽鏈。該單鏈抗體在本發明的方法/給藥方案中是優選的。每個結合域包含至少一個來自抗體重鏈的可變區(“vh或h區”)，其中第一結合域的vh區與cd3ε分子特異結合，而第二結合域的vh區與cd19特異結合。兩個結合域任選地通過短多肽間隔序列彼此相連。一個非限制性的多肽間隔序列的例子為gly-gly-gly-gly-ser(g-g-g-g-s)及其重復序列。每個結合域可以還包括一個來自抗體輕鏈的可變區(“vl或l區”)，第一和第二結合域各自內部的vh區和vl區通過多肽接頭彼此相連，例如ep623679b1所公開及要求保護的類型，但無論如何都足夠長以允許第一結合域的vh區和vl區與第二結合域的vh區和vl區相互配對，以使得它們能夠特異結合于相應的第一和第二結合域。這種cd19xcd3雙特異性單鏈抗體在wo99/54440和wo2004/106381中有詳細描述。
與本發明相關的術語“結合域”表征與給定靶結構/抗原/表位特異性結合/相互作用的多肽的結構域。因此，所述結合域為“抗原相互作用位點”。依據本發明，術語“抗原相互作用位點”定義了能特異性與特定抗原或特定抗原組(如不同物種中的同一種抗原)相互作用的多肽基序。所述結合/相互作用還應理解為定義了“特異性識別”。依據本發明，術語“特異性識別”是指抗體分子能特異相互作用于和/或結合于抗原(如本文中定義的人cd3抗原)上至少2個氨基酸、優選至少3個、更優選至少4個氨基酸。這種結合可用“鎖鑰原理”的特異性來例證。因此，一級、二級或三級結構以及所述結構的次級修飾使得結合域的氨基酸序列中的特定基序與抗原相互結合。抗原相互作用位點與其特定抗原的特異性相互作用還可導致所述位點與抗原的簡單結合。此外，結合域/抗原相互作用位點與其特定抗原的特異性相互作用還可導致信號起始，如由于抗原構象改變的誘導、抗體的寡聚等。依據本發明的結合域的優選實例是抗體。結合域可以是單克隆或多克隆抗體，或來源于單克隆或多克隆抗體。
術語“抗體”包括仍保留結合特異性的抗體衍生物或功能片段。用于制備抗體的技術是本領域所熟知且在如harlow和lane"antibodies,alaboratorymanual",coldspringharborlaboratorypress,1988以及harlow和lane“usingantibodies:alaboratorymanual”coldspringharborlaboratorypress,1999中有所描述。術語“抗體”還包括不同類別的免疫球蛋白(ig’s，即iga、igg、igm、igd以及ige)以及不同亞類(如igg1、igg2等)。
術語“抗體”的定義還包括其具體體現，如嵌合體、單鏈人源化抗體以及抗體片段，例如，尤其是，fab片段。抗體片段或衍生物還包括f(ab')2、fv、scfv片段，或單結構域抗體、單可變結構域抗體或僅含有一個可變結構域的免疫球蛋白單可變結構域，其中可能是不依賴于其他v區或結構域而與抗原或表位特異結合的vh或vl；參見例如以上引用的harlow和lane(1988)以及(1999)。該免疫球蛋白單可變結構域不僅包括單獨的抗體單可變結構域多肽，還包括組成抗體單可變結構域多肽序列的一個或多個單體的較大多肽。
文中所用的cd3ε是指作為t細胞受體的一部分表達的分子，且其含義通常歸入現有技術的含義。在人的情況下，它包括所有已知的單獨或獨立結合形式的cd3亞基，例如cd3ε、cd3δ、cd3γ、cd3ζ、cd3α及cd3β。人cd3ε的genbank登錄號為nm_000733。
人cd19蛋白的genbank登錄號為aaa69966。
優選地，本發明方法/給藥方案中所用的雙特異性抗體的結構域配置為vl(cd19)-vh(cd19)-vh(cd3)-vl(cd3)。
然而，還預見到，本發明的方法可以采用具有如下其他結構域配置的cd19xcd3雙特異性單鏈抗體實現：
vh(cd19)-vl(cd19)-vh(cd3)-vl(cd3)，
vl(cd19)-vh(cd19)-vl(cd3)-vh(cd3)，
vh(cd19)-vl(cd19)-vl(cd3)-vh(cd3)，
vl(cd3)-vh(cd3)-vh(cd19)-vl(cd19)，
vh(cd3)-vl(cd3)-vh(cd19)-vl(cd19)，
vl(cd3)-vh(cd3)-vl(cd19)-vh(cd19)，或
vh(cd3)-vl(cd3)-vl(cd19)-vh(cd19)。
本發明方法所采用的優選cd19xcd3雙特異性抗體包含：
(a)抗cd3重鏈cdr，其示為：seqidno:11中的cd3cdr-h1(rytmh)，更優選的是seqidno:11中的(gytftrytmh)，seqidno:12中的cd3cdr-h2(yinpsrgytnynqkfkd)和seqidno:13中的cd3cdr-h3(yyddhycldy)；和/或
(b)抗cd3輕鏈cdr，其示為seqidno:14中的cd3cdr-l1(rasssvsymn)，seqidno:15中的cd3cdr-l2(dtskvas)和seqidno:16中的cd3cdr-l3(qqwssnplt)；和/或
(c)抗cd19重鏈cdr，其示為：seqidno:17中的cd19cdr-h1(sywmn)，更優選的是seqidno:17中的(gyafssywmn)，seqidno:18中的cd19cdr-h2(qiwpgdgdtnyngkfkg)和seqidno:19中的cd19cdr-h3(retttvgryyyamdy)；和/或
(d)抗cd19輕鏈cdr，其示為：seqidno:20中的cd19cdr-l1(kasqsvdydgdsyln)，seqidno:21中的cd19cdr-l2(dasnlvs)和seqidno:22中的cd19cdr-l3(qqstedpwt)。
用于本發明方法的cd19xcd3雙特異性單鏈抗體更優選地包含cd3輕重鏈cdr。甚至更優選地，用于本發明方法的cd19xcd3雙特異性單鏈抗體包含cd3輕重鏈cdr以及cd19輕重鏈cdr。
文中提到的cdr與卡巴特編碼系統一致。卡巴特編碼制是一種廣泛用于以一致的形式編碼抗體中殘基的標準(kabat等人,sequencesofproteinsofimmunologicalinterest,1991)。
或者，本發明方法所采用的優選cd19xcd3雙特異性抗體包含：
(a)如seqidno:3所示的cd19可變重鏈(核苷酸序列如seqidno:4所示)；和/或
(b)如seqidno:5所示的cd19可變輕鏈(核苷酸序列如seqidno:6所示)；和/或
(c)如seqidno:7所示的cd3可變重鏈(核苷酸序列如seqidno:8所示)；和/或
(d)如seqidno:9所示的cd3可變輕鏈(核苷酸序列如seqidno:10所示)。
更優選地，本發明方法所采用的cd19xcd3雙特異性抗體包含cd19可變重鏈和輕鏈以及/或者cd3可變重鏈和輕鏈。甚至更優選地，本發明方法所采用的cd19xcd3雙特異性抗體包含cd19可變重鏈和輕鏈以及cd3可變重鏈和輕鏈。
又或者，所述雙特異性單鏈抗體優選地包含選自以下的氨基酸序列：
(a)seqidno:1所述的氨基酸序列；
(b)由seqidno:2所述的核酸序列編碼的氨基酸序列；
(c)由具有與(b)中的核酸序列至少70％、80％、90％、95％或99％同一性的核酸序列編碼的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能夠與cd3和cd19特異結合；及
(d)由(b)中核苷酸序列的遺傳密碼簡并而成的核酸序列編碼的氨基酸序列，其中所述氨基酸序列能夠與cd3和cd19特異結合。
應理解，序列同一性是以完整氨基酸序列確定的。可用gcg軟件包(geneticscomputergroup,575sciencedrive,madison,wisconsin,usa53711(1991))中含有的gap或bestfit程序進行序列比對(needleman和wunschj.mol.biol.48(1970),443-453；smith和waterman,adv.appl.math2(1981),482-489)。測定和識別與文中所述cd19xcd3雙特異性抗體(優選的是mt103)的氨基酸序列有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列，對于本領域技術人員來說是一種常規方法。例如，根據克里克的擺動假說，反密碼子的5’堿基不像另外兩個堿基有空間局限，因而可能發生不標準的堿基配對。換言之，三聯密碼子的第三個位點是可變的，所以兩個在第三位點不同的三聯密碼子能編碼相同的氨基酸殘基。所述假說是為本領域技術人員所熟知的(參加例如http://en.wikipedia.org/wiki/wobble_hypothesis；crick,jmolbiol19(1966):548–55)。測定與文中所述cd19xcd3雙特異性單鏈抗體的核苷酸或氨基酸序列有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的氨基酸序列的細胞毒性，對于本領域技術人員來說也是一種常規方法。cd19xcd3雙特異性單鏈抗體或與cd19xcd3雙特異性單鏈抗體的氨基酸序列有例如70％、80％、90％、95％、96％、97％、98％或99％序列同一性的抗體構建體的細胞毒性可用如wo99/54440中所述方法進行測定。
尤其優選地，所述cd19xcd3雙特異性單鏈抗體具有seqidno:1所述氨基酸序列。
還特別優選wo99/54440所述的cd19xcd3雙特異性抗體mt103以及wo2004/106381和wo2008/119565所述的那些cd19xcd3雙特異性抗體。
此外本發明還涉及一種cd19xcd3雙特異性抗體，用于：
(i)給人類患者施用cd19xcd3雙特異性抗體，或
(ii)治療人類患者體內的惡性cd19陽性淋巴細胞；或
(iii)緩解或預防由給人類患者施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的不良反應，
其中所述抗體按照上文中任一權利要求所限定的給藥方案給藥。
本發明還涉及一種cd19xcd3雙特異性抗體：
(i)給人類患者施用cd19xcd3雙特異性抗體，或
(ii)治療人類患者體內的惡性cd19陽性淋巴細胞；或
(iii)緩解或預防由給人類患者施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的不良反應，
其中所述抗體按照上文中任一權利要求所限定的方法給藥。
本發明的再一方面涉及cd19xcd3雙特異性抗體在制備藥物組合物中的用途，其中藥物組合物被上文中任一權利要求所限定的方法所采用。
本發明所述的藥物組合物可任選地包含藥物載體。合適藥物載體的實例是本領域所熟知的，包括磷酸鹽緩沖鹽水溶液、滅菌溶液等。靜脈內載體包括流體和營養補充劑、電解質補充劑(如基于林格氏葡萄糖的補充劑)等等。還可以存在防腐劑及其他添加劑，如抗微生物劑、抗氧化劑、螯合劑及惰性氣體等。另外，本發明所述的藥物組合物可以包含本文中別處所述的其它藥劑，例如化療藥物。
本發明的再一方面涉及一種包括本文中所限定的第一劑量和第二劑的(藥物)試劑盒或藥物包。
在另一個實施方案中，本發明涉及一種(藥物)試劑盒或藥物包，其包括本文中所限定的第一劑量和第二劑，以及包括在三階段給藥方案/方法情況下所限定的第三劑量。
另一方面，(藥物)試劑盒或藥物包包括在三階段給藥方案/方法情況下所限定的全部三個劑量，即第一、第二和第三劑量。
由此，所述第一、第二和第三劑量一起包裝在一個密封的藥物包或試劑盒里。應理解，在此方面，“第一劑量”、“第二劑量”和“第三劑量”含有給定時間段(為第一時間段或者第二時間段)所使用的相應的單劑數量。比方說，這意味著本發明藥物包或試劑盒中所包括的“第一劑量”或“第二劑量”含有比如7個的單獨日劑量。由此，包裝的日劑量數反映了預期的時間段(如果所述的時間段為x天則含x天的劑量，如果時間段為y天則含y天的劑量，諸如此類)。這些實施方案中，(藥物)試劑盒或藥物包在單個包裝中包括在單獨容器里的日劑量。
或者，還預見到，預期的第一劑量和/或第二劑量和/或第三劑量沒有按各自的日劑量數分開，而是全部或部分的被包含在單個容器中(比如在一個輸注包中)，其中包含第一時間段和/或第二時間段所需的部分(如1至3天)或全部(即第一或第二時間段)的劑量。這意味著，單個容器包含比方說第一劑量的7個日劑量，可在第一時間段等使用
應理解，本發明的(藥物)試劑盒或藥物包還可以幾乎包括各時間段所需的日劑量(不論是否分開)。或者，(藥物)試劑盒或藥物包被制備成使得其包括本文中所限定的第一和第二時間段所需的日劑量數(不論是否分開)，即“第一劑量”、“第二劑量”和“第三劑量”在單個包裝里。這樣的一個包裝在理想狀態下應足夠患者的完整治療(包括第一和第二時間段)使用。本發明的試劑盒及包的部分可單獨包裝到小瓶或瓶子里，或者混合包裝到容器或多容器裝置中。試劑盒的生產遵循優選的標準流程，這是本領域熟練技術人員已知的。
此外，本發明涉及上文所述的藥物包或試劑盒以及依照本發明方法順序使用的書面說明。所述的藥物包或試劑盒可能還包括標簽或印跡，用于指示內含物可用于治療人類患者體內的淋巴瘤或白血病的惡性cd19陽性淋巴細胞；或用于緩解或預防由給患者施用cd19xcd3雙特異性抗體而介導的不良反應。
還預見到，本發明的藥物包或試劑盒進一步包括用于給患者施用第一劑量和/或第二劑量和/或第三劑量的工具，和/或通常用于治療藥劑輸注的緩沖液、小瓶、特氟龍袋或輸注袋。由此，“工具”包括一種或多種選自注射器、皮下注射針頭、套管、導管、靜脈內給藥的輸注袋、靜脈內注射工具、小瓶、緩沖液、穩定劑、有助于技術人員準備本發明的相應劑量和輸注液的書面說明等的物件。
還預見到，本發明的藥物包或試劑盒進一步包括化療藥劑。
本發明的再一方面提供了一種藥物包或試劑盒，其中所述第一劑量和/或第二劑量的設置使得其適用于(準備好)給予根據下文權利要求中任一項的方法的給藥方案。
具體實施方案
以下實施例例證了本發明。這些實施例不可解釋為限制本發明的范圍。包括所述實施例僅為了進行例證，且本發明僅受權利要求的限制。
實施例1
在采用cd19-特異性bite抗體blinatumomab治療的一小組非何杰金氏淋巴瘤患者中，鑒定可逆的神經性不良反應的預測因素
blinatumomab是一種cd19/cd3雙特異性抗體構建體，屬于雙特異性t細胞銜接器(
實施例2
對采用cd19xcd3雙特異性抗體治療的患者的觀察結果摘要(1)
觀測結果摘要(1)
早期cns事件的共同特征：
●首個癥狀出現在開始mt103輸注后12-48小時：激動、言語損傷、時而震顫、失用癥
●導致輸注停止的更嚴重癥狀出現在輸注后24-72小時：錯亂、定向障礙、失用癥、失語癥、癲癇
●mt103輸注停止后，在1-3天內cns癥狀完全消失；通常沒有后遺癥。
●大部分cns事件進入多克隆t細胞的早期激活和重新分配期
緩慢發作的cns事件的特征：
●偏向于小腦癥狀
●在治療期間的不同時間點出現，常是治療開始或逐步增強時
●震顫、輕微言語損傷、輕微書寫損傷；可持續若干天
其他cns事件
●與其他cns事件無確鑿關系的觀察到的其他癥狀：頭疼、發熱、惡心
cns事件的mt103劑量響應關系
●cns事件的劑量響應關系明顯；臨界值是劑量水平5μg/m2/d至15μg/m2/d。
實施例3
對采用cd19xcd3雙特異性抗體治療的患者的觀測結果摘要(2)
觀測結果摘要(2)
cns事件顯現出可預測性
●cns事件與低b細胞：t細胞比率(或低b細胞計數)相關
●小于1:10的b細胞：t細胞比率被鑒定為發生cns事件的表觀臨界值
●未見其他生化或臨床參數與cns事件相關
對具有cns事件、但大多數無病理發現的患者進行顱腦核磁共振
csf分析提示bbb開放和神經炎性事件
●大多數受累患者體內發現可檢測水平的mt103及蛋白和血清白蛋白水平升高，提示血腦屏障(bbb)出現的短暫故障
●無cns事件的一名患者的csf中未發現mt103
●csf分析還表明在一些受累患者中，單核細胞和t淋巴細胞計數增加，指示了神經炎癥過程
●cns事件是否反映bbb的逐步開放(激動>錯落>失語癥>共濟失調>癲癇)？
cns事件的發生率可與疾病和/或腫瘤負荷相關
●當劑量為15μg/m2/d時，3/8(37％)的nhl患者以及僅1名(1/11)(9％)all“高風險”患者出現cns事件
●b-all患者常規性地接受可能降低cns中腫瘤細胞負荷的鞘內化療(以及靜脈內甲氨蝶呤)(“潛隱性腫瘤性腦膜炎(occultmeningeosisneoplastica)”)
實施例4
采用cd19xcd3雙特異性抗體治療的患者的cns事件總結
nhl患者的臨床相關cns事件的總結
實施例5
在臨床試驗中采用cd19xcd3雙特異性抗體治療的患者的cns事件的劑量依賴性
正在進行的nhl試驗中的cns事件的劑量依賴性
●以具有的低b細胞：t細胞比率(<1:10)確定“高風險”患者
●劑量組中的劃分考慮起始劑量
§多于48名患者應接受額外治療和單獨患者重新開始治療(導致變為“高風險”患者)
*首輪治療過后達到臨界b細胞：t細胞比率
+包括劑量逐步增加的患者
實施例6
1名具有潛在不良反應的高風險患者，接受15μg/m2/天治療7天，60μg/m2/天治療21天，沒有出現不良反應(神經性反應)。
108-003號患者
●女性，66歲
●2級fl，ivb(fd：09/2006)
●相關病史：貧血，血小板減少，(用2x澤娃靈(zevalin)進行預治療和及用fl進行骨髓滲透)，ggt和ap升高，苯二氮平類藥物濫用，
2.金黃色葡萄球菌敗血癥(伴隨椎間盤炎及膿腫)
●在先淋巴瘤治療：
-6xr-chop14，8xr09/2006-02/2007
-r單劑05/07
-1.澤娃靈11/07
-2.澤娃靈01/08
●按最初b細胞：t細胞比率(1:10，5)劃分，屬高風險(群組15/60)，
●2009年1月5日開始治療(15μg/m2/24h)
●發熱、頭疼兩天——口服撲熱息痛和安乃近進行簡單處理
●1月12日劑量增至60μg/m2/24h
●又出現發熱、頭疼——口服撲熱息痛和安乃近進行簡單處理
●無神經性事件
●對劑量“級”的耐受力強
●骨髓功能疑似改善
實施例7
1名具有潛在不良反應的高風險患者，接受5μg/m2/d治療7天，60μg/m2/d治療21天后，出現輕微不良反應(神經性反應)。
●mcl，男性，42歲
●b細胞：t細胞比率為1:12
●2009年1月19日以5micg/m2/天的劑量開始治療
●第一天：發熱又發冷、頭疼、無其他問題
●步驟：1月26日：發熱6h后，嚴重頭疼
●2009年1月27日：疲勞、惡心、嘔吐，內窺鏡檢查(無病理學發現)，頻率高達170/min的絕對心律失常→替代鉀和洋地黃毒甙后1天內緩解
●進行顱腦ct掃描和csf；ct：無病理學發現
●csf：蛋白質略微升高，55mg/dl；細胞：23細胞/micl，主要是單核細胞和一些被激活的淋巴細胞
●2009年1月27日下午：輕微震顫，失用癥，“精神狀態遲鈍”；晚上：輕微言語損傷(小腦？)；后兩天內緩慢改善；2009年1月29日基于持續的輕微癥狀，決定施以地塞米松
●癥狀緩慢減輕，于2009年3月31日完全緩解
●在進一步的治療中：又出現彈吉他困難
●治療4周后：-37％
●治療8周后：pr/cru
實施例8
1名具有潛在不良反應的高風險患者接受根據本發明所述的治療方案。
患者108-005
●男性，71歲，fliiib
●b細胞：t細胞比率：57:1363(即1:23.9，低)
●首次診斷為1997年
●多次在先治療：12xrituximab(單劑)，6xrituximab-bendamustin，6xr-chop，自體sct
●blinatumomab治療開始時間：2009年8月17日
●治療持續時間：8周
●耐受性良好(無sae)
●無神經性不良事件
●8周后ct掃描：-65％＝淋巴瘤局部緩解
實施例9
另外1名具有潛在不良反應的高風險患者接受根據本發明所述的治療方案。
患者109-031
●男性，60歲，濾泡性淋巴瘤ivae
●b細胞：t細胞比率：0:492(低)
●首次診斷：2009年5月
●在先治療：前期w.長春新堿/去氧皮質酮，6xr-chop
●blinatumomab治療開始時間：2009年11月30日
●治療持續時間：8周
●耐受性良好(每步驟都出現發紅癥狀-響應類固醇)
●無神經性不良反應
●8周后淋巴瘤減少56％(淋巴瘤局部緩解)
序列表
<110>安進研發（慕尼黑）股份有限公司
<120>用于施用cd19xcd3雙特異性抗體的給藥方案
<130>lc12310003p-d
<150>61/255,290
<151>2009-10-27
<150>09174104.1
<151>2009-10-27
<160>22
<170>patentinversion3.5
<210>1
<211>498
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>cd19xcd3雙特異性單鏈抗體
<400>1
aspileglnleuthrglnserproalaserleualavalserleugly
151015
glnargalathrilesercyslysalaserglnservalasptyrasp
202530
glyaspsertyrleuasntrptyrglnglnileproglyglnpropro
354045
lysleuleuiletyraspalaserasnleuvalserglyilepropro
505560
argpheserglyserglyserglythraspphethrleuasnilehis
65707580
provalglulysvalaspalaalathrtyrhiscysglnglnserthr
859095
gluaspprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelysgly
100105110
glyglyglyserglyglyglyglyserglyglyglyglyserglnval
115120125
glnleuglnglnserglyalagluleuvalargproglyserserval
130135140
lysilesercyslysalaserglytyralaphesersertyrtrpmet
145150155160
asntrpvallysglnargproglyglnglyleuglutrpileglygln
165170175
iletrpproglyaspglyaspthrasntyrasnglylysphelysgly
180185190
lysalathrleuthralaaspgluserserserthralatyrmetgln
195200205
leuserserleualasergluaspseralavaltyrphecysalaarg
210215220
arggluthrthrthrvalglyargtyrtyrtyralametasptyrtrp
225230235240
glyglnglythrthrvalthrvalserserglyglyglyglyserasp
245250255
ilelysleuglnglnserglyalagluleualaargproglyalaser
260265270
vallysmetsercyslysthrserglytyrthrphethrargtyrthr
275280285
methistrpvallysglnargproglyglnglyleuglutrpilegly
290295300
tyrileasnproserargglytyrthrasntyrasnglnlysphelys
305310315320
asplysalathrleuthrthrasplysserserserthralatyrmet
325330335
glnleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcysala
340345350
argtyrtyraspasphistyrcysleuasptyrtrpglyglnglythr
355360365
thrleuthrvalserservalgluglyglyserglyglyserglygly
370375380
serglyglyserglyglyvalaspaspileglnleuthrglnserpro
385390395400
alailemetseralaserproglyglulysvalthrmetthrcysarg
405410415
alaserserservalsertyrmetasntrptyrglnglnlyssergly
420425430
thrserprolysargtrpiletyraspthrserlysvalalasergly
435440445
valprotyrargpheserglyserglyserglythrsertyrserleu
450455460
thrilesersermetglualagluaspalaalathrtyrtyrcysgln
465470475480
glntrpserserasnproleuthrpheglyalaglythrlysleuglu
485490495
leulys
<210>2
<211>1494
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>cd19xcd3雙特異性單鏈抗體
<400>2
gatatccagctgacccagtctccagcttctttggctgtgtctctagggcagagggccacc60
atctcctgcaaggccagccaaagtgttgattatgatggtgatagttatttgaactggtac120
caacagattccaggacagccacccaaactcctcatctatgatgcatccaatctagtttct180
gggatcccacccaggtttagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccat240
cctgtggagaaggtggatgctgcaacctatcactgtcagcaaagtactgaggatccgtgg300
acgttcggtggagggaccaagctcgagatcaaaggtggtggtggttctggcggcggcggc360
tccggtggtggtggttctcaggtgcagctgcagcagtctggggctgagctggtgaggcct420
gggtcctcagtgaagatttcctgcaaggcttctggctatgcattcagtagctactggatg480
aactgggtgaagcagaggcctggacagggtcttgagtggattggacagatttggcctgga540
gatggtgatactaactacaatggaaagttcaagggtaaagccactctgactgcagacgaa600
tcctccagcacagcctacatgcaactcagcagcctagcatctgaggactctgcggtctat660
ttctgtgcaagacgggagactacgacggtaggccgttattactatgctatggactactgg720
ggccaagggaccacggtcaccgtctcctccggaggtggtggatccgatatcaaactgcag780
cagtcaggggctgaactggcaagacctggggcctcagtgaagatgtcctgcaagacttct840
ggctacacctttactaggtacacgatgcactgggtaaaacagaggcctggacagggtctg900
gaatggattggatacattaatcctagccgtggttatactaattacaatcagaagttcaag960
gacaaggccacattgactacagacaaatcctccagcacagcctacatgcaactgagcagc1020
ctgacatctgaggactctgcagtctattactgtgcaagatattatgatgatcattactgc1080
cttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctcagtcgaaggtggaagtgga1140
ggttctggtggaagtggaggttcaggtggagtcgacgacattcagctgacccagtctcca1200
gcaatcatgtctgcatctccaggggagaaggtcaccatgacctgcagagccagttcaagt1260
gtaagttacatgaactggtaccagcagaagtcaggcacctcccccaaaagatggatttat1320
gacacatccaaagtggcttctggagtcccttatcgcttcagtggcagtgggtctgggacc1380
tcatactctctcacaatcagcagcatggaggctgaagatgctgccacttattactgccaa1440
cagtggagtagtaacccgctcacgttcggtgctgggaccaagctggagctgaaa1494
<210>3
<211>124
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>vh抗cd19
<400>3
glnvalglnleuglnglnserglyalagluleuvalargproglyser
151015
servallysilesercyslysalaserglytyralaphesersertyr
202530
trpmetasntrpvallysglnargproglyglnglyleuglutrpile
354045
glyglniletrpproglyaspglyaspthrasntyrasnglylysphe
505560
lysglylysalathrleuthralaaspgluserserserthralatyr
65707580
metglnleuserserleualasergluaspseralavaltyrphecys
859095
alaargarggluthrthrthrvalglyargtyrtyrtyralametasp
100105110
tyrtrpglyglnglythrthrvalthrvalserser
115120
<210>4
<211>372
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>vh抗cd19
<400>4
caggtgcagctgcagcagtctggggctgagctggtgaggcctgggtcctcagtgaagatt60
tcctgcaaggcttctggctatgcattcagtagctactggatgaactgggtgaagcagagg120
cctggacagggtcttgagtggattggacagatttggcctggagatggtgatactaactac180
aatggaaagttcaagggtaaagccactctgactgcagacgaatcctccagcacagcctac240
atgcaactcagcagcctagcatctgaggactctgcggtctatttctgtgcaagacgggag300
actacgacggtaggccgttattactatgctatggactactggggccaagggaccacggtc360
accgtctcctcc372
<210>5
<211>111
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>vl抗cd19
<400>5
aspileglnleuthrglnserproalaserleualavalserleugly
151015
glnargalathrilesercyslysalaserglnservalasptyrasp
202530
glyaspsertyrleuasntrptyrglnglnileproglyglnpropro
354045
lysleuleuiletyraspalaserasnleuvalserglyilepropro
505560
argpheserglyserglyserglythraspphethrleuasnilehis
65707580
provalglulysvalaspalaalathrtyrhiscysglnglnserthr
859095
gluaspprotrpthrpheglyglyglythrlysleugluilelys
100105110
<210>6
<211>333
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>vl抗cd19
<400>6
gatatccagctgacccagtctccagcttctttggctgtgtctctagggcagagggccacc60
atctcctgcaaggccagccaaagtgttgattatgatggtgatagttatttgaactggtac120
caacagattccaggacagccacccaaactcctcatctatgatgcatccaatctagtttct180
gggatcccacccaggtttagtggcagtgggtctgggacagacttcaccctcaacatccat240
cctgtggagaaggtggatgctgcaacctatcactgtcagcaaagtactgaggatccgtgg300
acgttcggtggagggaccaagctcgagatcaaa333
<210>7
<211>119
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>vh抗cd3
<400>7
aspilelysleuglnglnserglyalagluleualaargproglyala
151015
servallysmetsercyslysthrserglytyrthrphethrargtyr
202530
thrmethistrpvallysglnargproglyglnglyleuglutrpile
354045
glytyrileasnproserargglytyrthrasntyrasnglnlysphe
505560
lysasplysalathrleuthrthrasplysserserserthralatyr
65707580
metglnleuserserleuthrsergluaspseralavaltyrtyrcys
859095
alaargtyrtyraspasphistyrcysleuasptyrtrpglyglngly
100105110
thrthrleuthrvalserser
115
<210>8
<211>357
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>vh抗cd3
<400>8
gatatcaaactgcagcagtcaggggctgaactggcaagacctggggcctcagtgaagatg60
tcctgcaagacttctggctacacctttactaggtacacgatgcactgggtaaaacagagg120
cctggacagggtctggaatggattggatacattaatcctagccgtggttatactaattac180
aatcagaagttcaaggacaaggccacattgactacagacaaatcctccagcacagcctac240
atgcaactgagcagcctgacatctgaggactctgcagtctattactgtgcaagatattat300
gatgatcattactgccttgactactggggccaaggcaccactctcacagtctcctca357
<210>9
<211>106
<212>prt
<213>人工序列
<220>
<223>vl抗cd3
<400>9
aspileglnleuthrglnserproalailemetseralaserprogly
151015
glulysvalthrmetthrcysargalaserserservalsertyrmet
202530
asntrptyrglnglnlysserglythrserprolysargtrpiletyr
354045
aspthrserlysvalalaserglyvalprotyrargpheserglyser
505560
glyserglythrsertyrserleuthrilesersermetglualaglu
65707580
aspalaalathrtyrtyrcysglnglntrpserserasnproleuthr
859095
pheglyalaglythrlysleugluleulys
100105
<210>10
<211>318
<212>dna
<213>人工序列
<220>
<223>vl抗cd3
<400>10
gacattcagctgacccagtctccagcaatcatgtctgcatctccaggggagaaggtcacc60
atgacctgcagagccagttcaagtgtaagttacatgaactggtaccagcagaagtcaggc120
acctcccccaaaagatggatttatgacacatccaaagtggcttctggagtcccttatcgc180
ttcagtggcagtgggtctgggacctcatactctctcacaatcagcagcatggaggctgaa240
gatgctgccacttattactgccaacagtggagtagtaacccgctcacgttcggtgctggg300
accaagctggagctgaaa318
<210>11
<211>10
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd3cdr-h1
<400>11
glytyrthrphethrargtyrthrmethis
1510
<210>12
<211>17
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd3cdr-h2
<400>12
tyrileasnproserargglytyrthrasntyrasnglnlysphelys
151015
asp
<210>13
<211>10
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd3cdr-h3
<400>13
tyrtyraspasphistyrcysleuasptyr
1510
<210>14
<211>10
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd3cdr-l1
<400>14
argalaserserservalsertyrmetasn
1510
<210>15
<211>7
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd3cdr-l2
<400>15
aspthrserlysvalalaser
15
<210>16
<211>9
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd3cdr-l3
<400>16
glnglntrpserserasnproleuthr
15
<210>17
<211>10
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd19cdr-h1
<400>17
glytyralaphesersertyrtrpmetasn
1510
<210>18
<211>17
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd19cdr-h2
<400>18
glniletrpproglyaspglyaspthrasntyrasnglylysphelys
151015
gly
<210>19
<211>15
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd19cdr-h3
<400>19
arggluthrthrthrvalglyargtyrtyrtyralametasptyr
151015
<210>20
<211>15
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd19cdr-l1
<400>20
lysalaserglnservalasptyraspglyaspsertyrleuasn
151015
<210>21
<211>7
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd19cdr-l2
<400>21
aspalaserasnleuvalser
15
<210>22
<211>9
<212>prt
<213>人工
<220>
<223>cd19cdr-l3
<400>22
glnglnserthrgluaspprotrpthr
15