一種用于質譜檢測的蛋白封閉劑及其應用的制作方法

文檔序號：11766650閱讀：373來源：國知局

本發明涉及質譜檢測領域，特別涉及一種用于質譜檢測的蛋白封閉劑及其應用。

背景技術：

蛋白質譜技術就是一種將質譜儀用于研究蛋白質的技術。它的基本原理是蛋白質經過蛋白酶的酶切消化后成肽段混合物，在質譜儀中肽段混合物電離形成帶電離子，質譜分析器的電場、磁場將具有特定質量與電荷比值(即質荷比，m/z)的肽段離子分離開來，經過檢測器收集分離的離子，確定每個離子的m/z值。經過質量分析器可分析出每個肽段的m/z，得到蛋白質所有肽段的m/z圖譜，即蛋白質的一級質譜峰圖。離子選擇裝置自動選取強度較大肽段離子進行二級質譜分析，輸出選取肽段的二級質譜峰圖，通過和理論上蛋白質經過胰蛋白酶消化后產生的一級質譜峰圖和二級質譜峰圖進行比對而鑒定蛋白質。

然而，由于質譜操作中的容器和移液器吸頭等對蛋白質具有非特異吸附作用，會把質譜的目的蛋白吸附在容器和移液器吸頭的表面，從生物體中提取微量蛋白樣本，往往會有很大的損失。為了盡可能減少蛋白提取的損失，常將容器，吸管，移液器吸頭等進行封閉的處理。目前常用的封閉劑為天然易得的蛋白質，這類蛋白能很好的封閉掉非特異吸附位點，從而大大減少目的蛋白的損失。但是，由于這類蛋白封閉劑始終添加在樣本提取純化過程中，假如提取的蛋白用于后續的質譜檢測，那么會造成很大的污染。

技術實現要素：

有鑒于此，本發明提供一種用于質譜檢測的蛋白封閉劑，不僅能有效封閉質譜檢測環境中的非特異性的蛋白質結合位點，而且還能不被蛋白水解酶水解，大大避免了質譜檢測的污染。

為了實現上述發明目的，本發明提供以下技術方案：

本發明提供了一種用于質譜檢測的封閉蛋白，所述封閉蛋白的氨基酸如seqid.no1所示，所述seqid.no1中x為自然界存在的氨基酸，且不屬于精氨酸和賴氨酸。

作為優選，所述seqid.no1中x為組氨酸。

本發明所提供的一種用于質譜檢測的封閉蛋白在封閉質譜檢測環境中的非特異性的蛋白質結合位點的應用。

作為優選，所述的封閉蛋白不被蛋白水解酶水解。

作為優選，所述的蛋白水解酶為胰酶。

本發明還提供了一種用于質譜檢測的封閉蛋白的制備方法，包括：

1)構建原核表達載體，所述原核表達載體包括seqid.no1，得到重組封閉蛋白原核表達載體，使得重組封閉蛋白原核表達載體表達所述封閉蛋白；

2)將所述重組封閉蛋白原核表達載體整合到原核生物中，使得所述原核生物表達所述封閉蛋白，收集獲得所述的封閉蛋白。

作為優選，所述原核表達載體含有組氨酸標簽。

本發明還提供了一種用于質譜檢測的蛋白封閉劑，包括用于質譜檢測的封閉蛋白和緩沖液。

作為優選，所述緩沖液為pbs溶液或nacl溶液。

本發明還提供了一種用于質譜檢測的試劑盒，包括：用于質譜檢測的蛋白封閉劑和質譜檢測試劑。

有鑒于此，本發明所要解決的技術問題在于提供了一種封閉蛋白，該封閉蛋白能把質譜檢測環境中的非特異性的蛋白質結合位點封閉起來，使得檢測的目的蛋白不會吸附在容器、吸管、移液器吸頭的表面，減少了目的蛋白的損失；而且，該封閉蛋白不含精氨酸和賴氨酸，質譜檢測的蛋白水解酶不會水解該封閉蛋白，使得質譜檢測時蛋白水解酶不會水解封閉蛋白，不會產生目的蛋白以外的多肽片段，顯著增大了質譜檢測的準確性。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例或現有技術中的技術方案，下面將對實施例或現有技術描述中所需要使用的附圖作簡單地介紹。

圖1示本發明的封閉蛋白與牛血清白蛋白酶解前后的sds-page圖譜；

其中，a為牛血清白蛋白溶液的蛋白條帶；b為胰酶水解后的牛血清白蛋白溶液的蛋白條帶；c為封閉蛋白溶液的蛋白條帶；d為胰酶水解后的封閉蛋白的蛋白條帶。

具體實施方式

本發明公開了本發明提供一種用于質譜檢測的蛋白封閉劑，不僅能有效封閉質譜檢測環境中的非特異性的蛋白質結合位點，而且還能不被蛋白水解酶水解，大大避免了質譜檢測的污染，本領域技術人員可以借鑒本文內容，適當改進工藝參數實現。特別需要指出的是，所有類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，它們都被視為包括在本發明。本發明的方法及應用已經通過較佳實施例進行了描述，相關人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和應用進行改動或適當變更與組合，來實現和應用本發明技術。

本發明提供的一種用于質譜檢測的蛋白封閉劑，其中所用原料及試劑均可由市場購得。

下面結合實施例，進一步闡述本發明：

實施例1

用于質譜檢測的封閉蛋白的制備，具體方法如下：

根據seqidno.1的蛋白質序列人工合成對應的封閉蛋白dna序列。將封閉蛋白dna序列重組到商業的原核表達載體(pet系列載體)中，得到重組封閉蛋白原核表達載體(pet-bsamut-his)，pet-bsamut-his載體含有6個his蛋白標簽用于純化，將pet-bsamut-his載體整合在大腸桿菌中大量表達封閉蛋白。表達出來bsamut-his蛋白后，用ni離子柱子純化。得到高純度的封閉蛋白(bsamut-his蛋白)，該封閉蛋白不含賴氨酸及精氨酸。

將純化后的封閉蛋白與pbs混合，獲得用于質譜檢測的蛋白封閉劑。

實施例2

將實施例1獲得的用于質譜檢測的封閉蛋白進行蛋白酶酶解驗證，具體操作如下：

試驗組為實施例1的用于質譜檢測的封閉蛋白；對照組為牛血清白蛋白。用胰酶水解試驗組與對照組的蛋白，胰酶水解的條件按常規條件進行。水解前后分別進行sds-page驗證。

從圖1可知，a為牛血清白蛋白溶液的蛋白條帶；b為胰酶水解后的牛血清白蛋白溶液的蛋白條帶；c為封閉蛋白溶液的蛋白條帶；d為胰酶水解后的封閉蛋白的蛋白條帶，c和d的蛋白條帶說明封閉蛋白無法被胰酶水解，因此，實施例的封閉蛋白在對質譜環境進行封閉后，蛋白水解酶不會作用封閉蛋白，不會對質譜數據造成污染。

以上所述僅是本發明的優選實施方式，應當指出，對于本技術領域的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理的前提下，還可以做出若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。

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