一種腺苷鈷胺晶型及其制備方法與應用與流程

本發明涉及一種腺苷鈷胺晶型及其制備方法與應用，屬于結晶技術領域。

背景技術：

腺苷鈷胺(cobamamide也稱為adocbl或coenzymeb12，又稱脫氧腺苷鈷胺素)，為暗紅色結晶或粉末，極具引濕性，見光極易分解。略溶于水，在乙醇中幾乎不溶，在丙酮或乙醚中不溶。其化學名稱為5,6-二甲基苯并咪唑基-5`-脫氧腺嘌呤核苷基鈷胺，分子式為c72h100con18o17p，結構式如式1所示。

目前，腺苷鈷胺在國際上用作生化試劑和實驗試劑，只在我國用作藥品，已應用多年，腺苷鈷胺原料藥和片劑收載于中國藥典2010版和2015版。腺苷鈷胺早期主要用于治療惡性貧血，亦可與葉酸合用，用于治療各種巨幼細胞貧血，抗葉酸藥引起的貧血等。近年來，腺苷鈷胺適應范圍不斷擴展，被用于包括神經根炎，多發性神經炎、末梢神經炎、眼肌麻痹，肝病，癌癥，慢性萎縮性胃炎，生殖系統疾病治療等領域，在臨床應用過程中展現了顯著的治療效果(①劉瀾波.臨床合理用藥雜志,2017,10(2c):43-44.②鄂瑞芳.現代藥物與臨床,2017,32(1):46-50.)，是極具前景的多種疾病的治療藥物。

腺苷鈷胺在制備和存儲過程中，易產生氰鈷胺、羥鈷胺等雜質(①楊洪淼.中國生化藥物雜志,2015,35(6):157-164.②晏敏紅.海峽藥學,2013,25(8):62-65)，這些雜質與腺苷鈷胺結構類似，同屬于鈷胺素類化合物。鈷胺素類化合物易于形成類質同晶物(grubergk.vitaminb12andb12-proteins,wiley-vch,wein-heim,1998,p335ff.)，也就是說雜質易于與腺苷鈷胺共同結晶析出而難以除去。目前，有關腺苷鈷胺的精制方法多采用樹脂吸附的方法，而通過重結晶過程除去腺苷鈷胺雜質具有極大的技術難度。

我國藥典2015版列出的腺苷鈷胺原料藥的要求是雜質含量不得高于1％，該雜質含量用于注射劑制備時，明顯偏高，在我國對藥品質量評價體系不斷完善、評價標準不斷提高的大背景下，尋找能夠降低雜質的、操作簡便的、符合綠色化學理念的精制方法具有重要的價值。

圍繞著降低腺苷鈷胺雜質的目的，我們考察了不同的重結晶條件對降低雜質的影響，研究過程中發現了新的腺苷鈷胺晶型，而且，發現該晶型的制備條件具有有效降低雜質的作用。

腺苷鈷胺具強的引濕性，因此，其與水分子的結合情況是需要首先考慮的問題。文獻調研(①savageh.actacrystallographica,1984,40(a1):c24-c24.②bouquierejp.actacrystallographica,1993,49(1):79-89.③bouquierejp.actacrystallographica,sectionb:structurescience,1994,b50(5):566-578.)證實，從丙酮-水混合溶劑中析出的腺苷鈷胺以水合物的形式存在，1分子腺苷鈷胺可結合17個水分子，這些水分子以兩種形式存在，一種形式是有序水，這部分水分子有序排列于溶劑口袋中，另一種形式是無序水，這部分水分子無序排列于溶劑通道中(圖1所示)。兩種結合形式的水分子與腺苷鈷胺的化學鍵的結合方式不同，因此，腺苷鈷胺存在著分兩次脫水的化學結構基礎。通過實驗和tg-dsc檢測，發現腺苷鈷胺在100℃以下脫去無序水，200℃以上脫去有序水，隨后發生完全分解(圖例可參看附圖5)。

有關腺苷鈷胺晶體結構及晶型的研究現狀如下：

文獻(matterncft.journalofbiologicalchemistry,1960,235(2):489-491)報道了腺苷鈷胺的單晶結構，該檢測用的單晶的制備條件為：4℃，為含87.5％(體積)丙酮的水溶液。由于在x-射線下，光敏感的腺苷鈷胺發生部分分解，因此所獲得的數據需要較多的數學處理，獲得的單晶為正交晶系p212121。然后，文獻(ouyangl.inorganicchemistry2004,43,1235-1241)重新確定了從水與丙酮混合溶劑中得到的腺苷鈷胺的單晶結構，其晶體為正交晶系p212121，但是，該文獻未提供粉末衍射數據。我們重復該實驗過程獲得的腺苷鈷胺晶體，其粉末衍射(p-xrd)圖譜見圖2，該晶體的x-射線粉末衍射在衍射角2θ＝6.9±0.1，7.9±0.1，9.8±0.1，13.2±0.1，14.3±0.1，16.2±0.1，18.1±0.1，19.0±0.1，20.1±0.1，21.2±0.1處有特征峰。為敘述方便，我們將其定義為a晶型腺苷鈷胺。

專利jp47022716公布于1972年，該專利公布了在17℃以上和17℃以下水中重結晶獲得的腺苷鈷胺的2個晶型。該專利提供了兩個晶型和丙酮-水混合體系中獲得的晶型的x-粉末衍射圖譜，但是，圖譜質量較差，僅能看出較強峰的特征。從該專利附圖中可以看出，丙酮-水中結晶所獲得結晶的粉末衍射主峰2θ＝6.9(強度100)，與晶型a最強峰一致，17℃以上結晶獲得的晶型的粉末衍射主峰2θ＝9.1，17.0，17℃以下結晶獲得的晶型的粉末衍射主峰2θ＝6.6，13.0。兩個從單一溶劑水中析出的晶型的粉末衍射特征峰與本發明區別明顯，且未涉及降低雜質的作用，故不再贅述。

專利zl104130303有關腺苷鈷胺化合物及其藥物組合物，提及一種從異丙醇、吡啶和乙醚的混合溶劑中獲得的腺苷鈷胺晶體，該專利說明書附上了粉末衍射圖譜，同樣采用cu-kα靶輻射，其衍射角2θ＝6.1±0.1，11.2±0.1，17.0±0.1，19.1±0.1，21.0±0.1，22.2±0.1，23.5±0.1處有特征峰。為敘述方便，我們將其定義為b晶型腺苷鈷胺。

綜上所述，目前，已經報道了從混合溶劑中析出了兩種腺苷鈷胺晶型，晶型a從丙酮-水混合溶劑中析出，該晶型為人們認識已久，但是對光、熱、酸堿均不穩定。晶型b的穩定性較晶型a得到了提高，但其制備過程(zl104130303)存在著三個不足之處：

(1)采用吡啶和乙醚做溶劑，吡啶氣味濃烈，有強烈刺激性，能麻醉中樞神經系統，高濃度吸入后，對人體產生嚴重危害，且吡啶沸點較高，為115℃，難以除去，會帶來溶劑殘留問題。另一溶劑乙醚極易揮發，存放時易產生過氧化物，使用時易導致操作人員產生麻醉癥狀，安全隱患問題嚴重。

(2)制備過程需要3～6分鐘降溫至-15～-10℃，在-15℃靜置10～12小時。需要降溫和低溫操作。

(3)在重復該專利方法時，發現腺苷鈷胺原料并未完全溶解，實驗過程幾乎無降低雜質的作用。

雜質的研究及控制是確保藥品安全的關鍵要素之一，是藥品研發中尤其是注射劑研發過程中風險控制意識的重要體現，目前，我國2015版藥典規定的腺苷鈷胺原料藥雜質含量不超過1％，市售腺苷鈷胺的雜質含量普遍大于0.7％，存著在通過進一步的精制，達到降低雜質的空間。我們通過重結晶技術的研究，獲得了一種以較高收率獲得新的晶型且進一步降低腺苷鈷胺雜質的方法，目前，尚未有類似方法的報道。

技術實現要素：

為了解決現有技術的問題，本發明的第一個目的提供一種腺苷鈷胺新晶型，所獲得的新晶型穩定性得到提高，更有利于產品的存貯和降低后續的制劑難度。

本發明的第二個目的是在于提供一種有較高收率的、條件溫和的新晶型的制備方法，該制備方法可有效降低腺苷鈷胺原料藥雜質含量，可用于腺苷鈷胺的精制。

本發明所述的制備方法獲得了一種新的腺苷鈷胺晶型，使用cu-kα靶輻射，其單晶衍射圖譜見圖3，為單斜晶系p21。c晶型與文獻報道的單晶構型相比，為不同的晶系，其晶體數據對比見表1。

本發明所述的制備方法獲得了一種腺苷鈷胺晶型，采用cu-kα靶輻射，其x-射線粉末衍射在衍射角2θ＝5.1±0.1，6.3±0.1，7.0±0.1，7.6±0.1，8.0±0.1，8.6±0.1，9.4±0.1，13.2±0.1，13.8±0.1，15.0±0.1，17.5±0.1，19.1±0.1，21.4±0.1，23.5±0.1，25.3±0.1處有特征峰，如圖4所示。命名為c晶型腺苷鈷胺。

文獻報道的a，b晶型和本發明制備的晶型的x-粉末衍射的2θ角度和相對強度對比匯總于表2。從表中可以看出，三種晶型的2θ角度和相對強度的區別明顯，可以判斷為不同晶型。

本發明的腺苷鈷胺晶型(c晶型)的制備方法，其步驟如下：

(1)采用潛溶劑溶解腺苷鈷胺粗品；

紅燈照明條件下；室溫，將腺苷鈷胺粗品加入到5-7倍質量的水中，攪拌5-30分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入潛溶劑，觀察到10min內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液；

(2)采用反溶劑重結晶法得到腺苷鈷胺精制品；

紅燈照明條件下；向上述溶液中加入反溶劑，得到懸浮液，室溫，靜置過夜，抽濾，異丙醇洗滌，在20～25℃，真空干燥3～8小時，得到腺苷鈷胺晶型；我們命名為c晶型。

所述的步驟(1)中的潛溶劑為水與溶劑丙酮或乙腈的混合溶劑，優選丙酮。水與丙酮或乙腈的體積比為1：0.3～0.5；優選體積比為水：丙酮＝1：0.4。

所述的步驟(2)中的反溶劑為異丙醇或叔丁醇，優選為異丙醇。反溶劑一次性加入體系中，加入的量為步驟(1)中溶解腺苷鈷胺時加入的水的體積的1～5倍；優選為水：異丙醇＝1：2.6。

本發明腺苷鈷胺精制過程的溶解與析出狀態，取樣拍照見圖15。

本發明的制備方法所用的原料為市售的腺苷鈷胺，其p-xrd圖譜與a晶型腺苷鈷胺一致(圖2)，其tg-dsc熱分析圖譜見圖5，電鏡(sem)圖譜見圖6，紅外圖譜(ir)見圖7，含量(hplc)圖譜見圖8。從tg-dsc圖譜可以看出，a晶型腺苷鈷胺在206±2℃出現一個特征放熱峰，并且，100℃以下，發生無序水的脫去伴隨失重約12％，在206℃發生有序水的脫去，隨后發生分解。從sem可以看出，用來做原料的市售腺苷鈷胺粒度大小不一，外觀呈不規則片狀。按照中國藥典2015版檢測方法，hplc檢測主成分含量為99.24％，總雜質為0.76％。

本發明所制備得到的c晶型腺苷鈷胺，其tg-dsc圖譜如圖9所示，sem圖譜見圖10，紅外圖譜(ir)見圖11，hplc圖譜見圖12。其dsc圖譜分析結果顯示，在210±2℃出現一個特征吸熱峰。在100℃以下發生無序水的脫去并伴隨失重約12％。從sem可以看出，本發明所制備的腺苷鈷胺粒度均勻，外觀呈規則塊狀。按照中國藥典2015版檢測方法，hplc檢測主成分含量為99.51％，總雜質為0.49％。

我國2015版藥典要求在60℃，減壓干燥至恒重時，腺苷鈷胺原料藥干燥失重不得超過12％，實驗證實在該條件下，脫去的為無序水(或其它溶劑)，因此，腺苷鈷胺原料藥可失去的無序水(或其它溶劑)含量應為12％以下。需要進一步說明的一個問題是，腺苷鈷胺以水合物或溶劑化物形式存在，不同無序水(或其它溶劑)含量的c晶型腺苷鈷胺是否具有相同的粉末衍射特征？通過改變干燥溫度和時間，獲得多個不同無序水(或其它溶劑)含量的c晶型腺苷鈷胺樣品，進行tg-dsc和x-粉末衍射分析，發現本發明方法所制得的的c晶型腺苷鈷胺其粉末衍射特征與含水(或其它溶劑)量無關。為方便說明，選擇有代表性的三個不同含水(或其它溶劑)量的c晶型腺苷鈷胺樣品a，b，c附圖說明。圖13為三個樣品的tg-dsc分析圖譜，圖14為三個樣品的x-粉末衍射圖譜。從圖13-14可以看出，三個c晶型腺苷鈷胺樣品在100℃以下，分別失重5.2％，7.4％和9.3％，但均在210±2℃出現特征吸熱峰，三個樣品的p-xrd在2θ角度和相對強度方面完全一致。以上研究證實，本方法制備的腺苷鈷胺c晶型的無序水(或其它溶劑)不在晶胞中占位，對其p-xrd特征峰無影響。也就是說，本發明所制備的腺苷鈷胺晶型，隨著干燥條件的變化，當無序水含量發生變化時，其晶型的的x-粉末衍射特征不發生變化。

本發明所述的腺苷鈷胺的精制方法為采用潛溶劑-反溶劑重結晶法。所謂潛溶劑是指藥物在混合溶劑中的溶解度一般是各單一溶劑溶解度的相加平均值，在混合溶劑中各溶劑在某一比例時，藥物的溶解度比在各單純溶劑中溶解度出現極大值，這種現象稱為潛溶(cosolvency)，這種溶劑稱為潛溶劑(cosolvent)。

選用市售的a晶型腺苷鈷胺，通過大量實驗研究發現，難溶性藥物腺苷鈷胺在水-丙酮體系，或者水-乙腈體系可形成潛溶，表3列出了腺苷鈷胺在這兩種體系中的溶解度(中國藥典2015版溶解度測定方法)。從表中可以看出，腺苷鈷胺在水中略溶，不溶于丙酮或乙腈中，但是，當水-丙酮體系，或者水-乙腈體系的體積比達到1：0.3～0.4時，此時，腺苷鈷胺溶解度比在單一水溶劑中溶解度增大10倍以上。

采用潛溶原理，在少量的水-丙酮混合溶劑中，可以溶解大量的腺苷鈷胺，再結合異丙醇作為反溶劑的操作，可快速析出腺苷鈷胺c晶型，收率大于98％，規模可實現單批次精制腺苷鈷胺50克，達到了工業生產的級別。

經過實驗驗證，獲得的腺苷鈷胺c晶型溶解于以上所述的潛溶劑后，以丙酮為反溶劑時，可析出a晶型，即以丙酮為反溶劑時，c晶型會轉化為與市售品相同的a晶型，但該過程未發生雜質含量的變化，只發生了晶型的轉化。也就是說，當必須使用a晶型為原料藥時，可通過c晶型的制備達到降低雜質的目的，然后將c晶型轉化為a晶型。

本發明方法具有以下有益效果：

潛溶劑-反溶劑重結晶法用于難溶性藥物腺苷鈷胺精制時，可用少量低毒性溶劑、溫和的反應條件和大于98％的收率獲得較高純度的腺苷鈷胺精制品。本發明所制備的腺苷鈷胺c晶型粒度均勻，外觀呈規則塊狀，按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的主成分含量大于99.5％，總雜質小于0.5％，顯著優于精制前，為解決鈷胺素類化合物存在的類質同晶問題，提供了可選擇的有效方法。

本發明所獲得的腺苷鈷胺c晶型，單晶結構及x-粉末衍射特征未見文獻報道。本發明所制備的腺苷鈷胺c晶型穩定性研究數據見表4-6，從實驗結果可以看出，5小時以內，市售品的a晶型發生迅速降解，而自制品c晶型僅發生輕微的含量下降，可見c晶型穩定性較商品化的a晶型明顯提高；c晶型腺苷鈷胺對高溫、高濕的穩定性也顯著高于a晶型腺苷鈷胺。

本發明所獲得的腺苷鈷胺c晶型，溶解度與a晶型相近，a晶型溶解時采用的潛溶劑的條件對c晶型完全適用。也就是本發明的制備條件可用于腺苷鈷胺的二次重結晶，實驗發現，二次結晶具有進一步降低雜質的作用。

表1a、c晶型的單晶數據

表2腺苷鈷胺三種晶型的x-粉末衍射對比

表3腺苷鈷胺原料在水-丙酮、水-乙腈中的溶解度(25℃±2℃)

附圖說明

圖1腺苷鈷胺水合物水分子分布圖；

圖2a晶型腺苷鈷胺x-粉末衍射圖；

圖3c晶型腺苷鈷胺單晶衍射圖；

圖4c晶型腺苷鈷胺x-粉末衍射圖；

圖5a晶型腺苷鈷胺tg-dsc圖；

圖6a晶型腺苷鈷胺sem圖(放大1000倍)；

圖7a晶型腺苷鈷胺hplc圖；

圖8a晶型腺苷鈷胺ir圖；

圖9c晶型腺苷鈷胺tg-dsc圖；

圖10c晶型腺苷鈷胺sem圖(放大1000倍)；

圖11c晶型腺苷鈷胺ir圖；

圖12c晶型腺苷鈷胺hplc圖；

圖13a無序水含量為5.2％的c晶型腺苷鈷胺的tg-dsc圖；

圖13b無序水含量為7.4％的c晶型腺苷鈷胺的tg-dsc圖；

圖13c無序水含量為9.3％的c晶型腺苷鈷胺的tg-dsc圖；

圖14不同無序水含量的c晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖；

圖15腺苷鈷胺精制過程的溶解與析出圖示。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。

本發明制備及檢測晶型所用的儀器的結構及性能如下：

紅燈為5w康帥照明led紅燈球泡，廈門康帥電子有限公司。

x-射線單晶衍射分析采用rigakuxtalabpromm007x射線衍射儀，cu-kα靶，在150k下收集數據。

x-射線粉末衍射分析采用brukerd8advance型x射線衍射儀，cu-kα靶，鎳單色器，工作電壓40kv，工作電流40ma，步長0.02o。

tga-dsc分析，采用美國ta公司q600熱重分析儀，升溫速率10k/min。n2保護以20ml/min的速率通過dsc小室。

sem分析，冷場發射掃描電子顯微鏡，德國zeiss公司，型號zeisssupra55，分辨率：1.0nm(15kv)/1.7nm(1kv)，加速電壓：0.1kv-30kv。

ir分析，紅外色譜儀，賽默飛世爾科技(中國)有限公司，型號5225veronardmadison，wi.53711。kbr壓片。

hplc分析，agilent公司，型號1260，色譜柱為intertsustainc18，檢測方法為中國藥典2015版第二部，腺苷鈷胺。

實驗例1：

紅燈照明條件下，室溫。將市售腺苷鈷胺1g加入到7ml水中，攪拌5分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入3.5ml丙酮，1分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入35ml異丙醇，同時攪拌5min，攪拌速率控制在400r/min，此時體系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用異丙醇洗滌(3*10ml)，25℃真空干燥7小時，得到c晶型腺苷鈷胺0.982g，收率98.2％。

所獲得c晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖4一致，tg-dsc圖譜與圖9一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.5％，總雜質為0.5％。

實驗例2：

紅燈照明條件下，室溫。將市售腺苷鈷胺10g加入到60ml水中，攪拌10分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入24ml丙酮，3分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入156ml異丙醇，同時攪拌5min，攪拌速率控制在300r/min，此時體系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用異丙醇洗滌(3*20ml)，25℃真空干燥7小時，得到c晶型腺苷鈷胺9.930g，收率99.3％。

所獲得c晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖4一致，tg-dsc圖譜與圖9一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.6％，總雜質為0.5％。

實驗例3：

紅燈照明條件下，室溫。將市售腺苷鈷胺50g加入到250ml水中，攪拌30分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入75ml丙酮，10分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入250ml異丙醇，同時攪拌1min，攪拌速率控制在100r/min，此時體系逐漸渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用異丙醇洗滌(3*50ml)，25℃真空干燥7小時，得到c晶型腺苷鈷胺49.200g，收率98.4％。

該條件下所獲的晶體粒度可達0.2mm，可用于x-單晶衍射檢測，其單晶衍射圖譜見圖3，所獲得c晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖9一致，tg-dsc圖譜與圖5一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.5％，總雜質為0.5％。

將本實驗例所獲得的c晶型腺苷鈷胺進行穩定性研究，實驗結果見表4-6所示，從實驗結果可以看出，5小時以內，市售品的a晶型發生迅速降解，而自制品c晶型僅發生輕微的含量下降，可見c晶型穩定性較商品化的a晶型明顯提高；c晶型腺苷鈷胺對高溫、高濕的穩定性也顯著高于a晶型腺苷鈷胺。

表4腺苷鈷胺光照實驗結果對比

注：樣品分攤至培養皿中，厚度約為4mm，置于5000lx的光櫥中，按照實驗方案取樣后，采用中國藥典2015版第二部腺苷鈷胺檢測方法檢測含量。

表5腺苷鈷胺高溫實驗結果對比

注：樣品分攤至培養皿中，厚度約為4mm,置于60℃恒溫干燥箱中，按照實驗方案取樣后，采用中國藥典2015版第二部腺苷鈷胺檢測方法檢測含量。

表6腺苷鈷胺高濕實驗結果對比

注：樣品分攤至培養皿中，厚度約為4mm,置于高濕(相對濕度75％)條件下，按照實驗方案取樣后，采用中國藥典2015版第二部腺苷鈷胺檢測方法檢測含量。

實驗例4：

紅燈照明條件下，室溫。將市售腺苷鈷胺2g加入到14ml水中，攪拌10分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入6ml乙腈，3分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入35ml異丙醇，同時攪拌5min，攪拌速率控制在600r/min，此時體系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用異丙醇洗滌(3*15ml)，25℃真空干燥8小時，得到c晶型腺苷鈷胺1.966g，收率98.3％。

所獲得c晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖4一致，tg-dsc圖譜與圖9一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.6％，總雜質為0.5％。

實驗例5：

紅燈照明條件下，室溫。將市售腺苷鈷胺5g加入到36ml水中，攪拌16分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入15ml乙腈，10分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入85ml正丙醇，同時攪拌5min，攪拌速率控制在500r/min，此時體系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用異丙醇洗滌(3*25ml)，25℃真空干燥7小時，得到c晶型腺苷鈷胺4.901g，收率98.0％。

所獲得c晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖4一致，tg-dsc圖譜與圖9一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.5％，總雜質為0.5％。

實驗例6：

紅燈照明條件下，室溫。將實驗例2制備的c晶型腺苷鈷胺1g加入到7ml水中，攪拌15分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入2.6ml乙腈，5分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入25ml丙酮，同時攪拌5min，攪拌速率控制在500r/min，此時體系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用乙腈洗滌(3*10ml)，25℃真空干燥7小時，得到a晶型腺苷鈷胺0.990g，收率99.0％。

所獲得a晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖2一致，tg-dsc圖譜與圖5一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.6％，總雜質為0.5％。

實驗例7：

紅燈照明條件下，室溫。將實驗例2制備的c晶型腺苷鈷胺1g加入到7ml水中，攪拌25分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入3ml丙酮，5分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入25ml丙酮，同時攪拌5min，攪拌速率控制在500r/min，此時體系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用丙酮洗滌(3*10ml)，25℃真空干燥7小時，得到a晶型腺苷鈷胺0.991g，收率99.1％。

所獲得a晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖2一致，tg-dsc圖譜與圖5一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.6％，總雜質為0.5％。

實驗例8：

紅燈照明條件下，室溫。將實驗例2制備的c晶型腺苷鈷胺1g加入到7ml水中，攪拌25分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入2.6ml乙腈，5分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入19ml異丙醇，同時攪拌5min，攪拌速率控制在500r/min，此時體系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用異丙醇洗滌(3*10ml)，25℃真空干燥7小時，得到c晶型腺苷鈷胺0.996g，收率99.6％。

所獲得c晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖4一致，tg-dsc圖譜與圖9一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.7％，總雜質為0.4％。

實驗例9：

紅燈照明條件下，室溫。將實驗例2制備的c晶型腺苷鈷胺1g加入到7ml水中，攪拌25分鐘至糊狀，保持攪拌，向上述糊狀物中加入3ml丙酮，5分鐘內，腺苷鈷胺完全溶解，得到澄清溶液。向上述溶液中加入18ml異丙醇，同時攪拌5min，攪拌速率控制在600r/min，此時體系渾濁。然后，室溫靜置過夜，抽濾析出的晶體，濾餅用異丙醇洗滌(3*10ml)，25℃真空干燥7小時，得到c晶型腺苷鈷胺0.993g，收率99.3％。

所獲得c晶型腺苷鈷胺的x-粉末衍射圖譜與圖4一致，tg-dsc圖譜與圖9一致。按照中國藥典2015版的檢測方法進行含量分析，得到的腺苷鈷胺含量為99.7％，總雜質為0.4％。

本發明公開和提出的腺苷鈷胺晶型及其制備方法與應用，本領域技術人員可通過借鑒本文內容，適當改變條件路線等環節實現，盡管本發明的方法和制備技術已通過較佳實施例子進行了描述，相關技術人員明顯能在不脫離本發明內容、精神和范圍內對本文所述的方法和技術路線進行改動或重新組合，來實現最終的制備技術。特別需要指出的是，所有相類似的替換和改動對本領域技術人員來說是顯而易見的，他們都被視為包括在本發明精神、范圍和內容中。