本發明涉及生物醫藥領域，具體地，涉及用于治療牙痛的紅茶菌代謝產物及其制備方法。
背景技術：
：紅茶菌雖然在我國有悠久的歷史，但對它的科學研究卻起步較晚。我國著名微生物學家方心芳先生于1951年《黃海》雜志第12卷第5期刊登了《海寶是什么》一文，這是我國關于紅茶菌的首篇科學論文。文中認為紅茶菌的微生物種類主要是醋酸菌和酵母，同時指出紅茶菌中的醋酸菌不只一種，但以膜醋菌為主。20世紀70年代末期到80年代初期，紅茶菌飲料在我國非常流行，一些介紹紅茶菌效果及制作方法的文章大量涌現。從20世紀初期到中期，一些醫生和學者紛紛報道了紅茶菌在治療各種疾病中的效果和作用。從20世紀中期開始一直到現在，有關紅茶菌的微生物組成及相互作用、發酵條件、菌液成分、作用機理等方面的研究陸續有文獻報道。紅茶菌菌種的類型及菌種間的相互關系用于發酵培養紅茶菌的菌種主要是醋酸菌和酵母菌，有的紅茶菌有少量乳酸菌[主要是保加利亞乳桿菌(lactobacteriumbulagricum)]。到目前為止，人們從各種紅茶菌中分離到的醋酸菌有：木醋桿菌(acetobacterxylinum)、擬木醋桿菌(acetobacterxylinoides)、葡萄糖酸桿菌(bacteriumgluconicum)、產酮醋桿菌(acetobacterketogenum)、弱氧化醋酸菌(acetobactersuboxydans)、葡萄糖醋酸菌(gluconobacterliquefaciens)、醋化醋桿菌(acetobacteraceti)和巴氏醋桿菌(acetobacterpasteurianus)，其中最主要的是木醋桿菌。酵母菌有釀酒酵母(saccharomycescerevisiae)、不顯酵母(saccharomycesinconspicus)、路德類酵母(saccharomycodesludwigii)、粟酒裂殖酵母(schizosaccharomycespombe)、熱帶假絲酵母(candidatropicans)、克魯斯假絲酵母(candidacrusei)、漢遜德巴利酵母(debaryomyceshansenii)、酒香酵母(brettanyomyces)、克勒克酵母(kloeckera)、拜耳接合酵母(zygosaccharomycesbailii)等。發酵紅茶菌的菌種是由上述的一種或多種醋酸菌和上述的一種或多種酵母菌組成，有的還有乳酸菌。不同的菌種組成，其菌液中代謝產物的種類和數量也會有所不同。酵母菌和醋酸菌在紅茶菌中是互惠互利的共生關系。在發酵開始階段，由于醋酸菌不能直接利用蔗糖或利用蔗糖的速度很慢，由酵母菌將蔗糖降解為葡萄糖和果糖并進一步發酵產生乙醇，醋酸菌則在培養液中有了葡萄糖、果糖和乙醇之后開始大量生長繁殖，將葡萄糖和果糖氧化產生葡萄糖酸、乙酸等代謝產物，并將酵母產生的乙醇氧化生成乙酸。有資料表明，酵母菌產生的乙醇能刺激醋酸菌的生長，產生更多的纖維素膜和乙酸，而醋酸菌產生的乙酸又會刺激酵母菌產生乙醇，而乙酸、乙醇的存在可保護醋酸菌和酵母菌，使它們免受其它微生物的侵染。一些學者對紅茶菌菌液中所含成分進行了分析，由于所采用的菌種、培養條件、分析方法、分析的側重點等方面都不盡相同，因此不同的資料其結果也不同。德國的güntherw.frank(1991)認為紅茶菌中含有葡萄糖醛酸、葡萄糖酸、醋酸、酒精、乳酸、氨基酸、蛋白質、葉酸、地衣酸、vc和多種b族維生素等[14]。c.-h.liu等人(1995)對來自臺灣的兩種紅茶菌用hplc進行分析，顯示該紅茶菌中含有甘油、乙酸和乙醇。美國的michaelr.roussin(1996)報道了用hplc/ms/pdad(高效液相色譜/質譜/光電掃描)方法對來自美國和世界其他地方的19個紅茶菌試樣進行了化學成分分析，結果沒有找到以前幾乎是公認的功能因子-葡萄糖醛酸，而且各種維生素的含量很少，不過檢出了許多前人沒有檢出的物質。他們從這19種紅茶菌中檢出了40多種化學物質。而這些物質進入人體后如何起作用還需進一步的科學研究。紅茶菌健身作用的機理是非常復雜的，到目前為止，還沒有完全搞清楚，需要進一步深入研究。同時，還應加強它的應用研究，使之更充分地為人類的健康事業服務。目前，紅茶菌的培養條件和菌種的要求都非常嚴格，也限制了紅茶菌的大量培養及其應用的進一步開展，因此，提供一種光譜性的紅茶菌的培養方法是非常有必要的；且目前還沒有發現有紅茶菌治療牙疼的報道。技術實現要素：本發明的目的是提供一種用于治療牙痛的紅茶菌代謝產物及其制備方法，該該培養方法選擇了以無菌水、酒與蜂蜜以及紅茶水按照特定的比例進行混合、發酵制得母菌液，接著將母菌液與糖水制得的培養液進行混合進行發酵一定時間后將培養結束后的所述培養液進行固液分離，取下層液體即為所述紅茶菌代謝產物。該制備方法中母菌液的制備過程簡單，原料簡單易得，且紅茶菌的培養條件易控制、培養的菌種污染率小。且用該制備方法制得的紅茶菌代謝產物能夠有效用于治療牙痛，且作為治療牙痛的藥物副作用小，可以廣泛使用。為了實現上述目的，本發明提供了一種用于治療牙痛的紅茶菌代謝產物的制備方法，其中，所述培養方法由以下步驟組成：1)將水煮沸后加入糖，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至20-35℃，即制得所述培養液；2)接種培養：先將培養器消毒、潤洗，接著將所述母菌液和所述培養液按照1：20-50的體積比放入到所述培養器中，并用紗布封口，將所述培養器放置于光照強度為0.1萬-0.8萬lx的弱光環境、通風且溫度為30-35℃的條件下發酵培養7-14天；3)將培養結束后的所述培養液進行固液分離，取下層液體即為所述紅茶菌代謝產物。通過上述技術方案，本發明中選擇了以無菌水、酒與蜂蜜以及紅茶水按照特定的比例進行混合、發酵制得母菌液，接著將母菌液與糖水制得的培養液進行混合進行發酵一定時間后將培養結束后的所述培養液進行固液分離，取下層液體即為所述紅茶菌代謝產物。該制備方法中母菌液的制備過程簡單，原料簡單易得，且紅茶菌代謝產物的培養條件易控制、培養的菌種污染率小；該培養方法可以推廣使用大量培養紅茶菌代謝產物，且制得的紅茶菌代謝產物對于治療牙痛具有很好的治療效果。本發明的其他特征和優點將在隨后的具體實施方式部分予以詳細說明。具體實施方式以下對本發明的具體實施方式進行詳細說明。應當理解的是，此處所描述的具體實施方式僅用于說明和解釋本發明，并不用于限制本發明。在本文中所披露的范圍的端點和任何值都不限于該精確的范圍或值，這些范圍或值應當理解為包含接近這些范圍或值的值。對于數值范圍來說，各個范圍的端點值之間、各個范圍的端點值和單獨的點值之間，以及單獨的點值之間可以彼此組合而得到一個或多個新的數值范圍，這些數值范圍應被視為在本文中具體公開。本發明提供了一種用于治療牙痛的紅茶菌代謝產物的制備方法，其中，所述培養方法由以下步驟組成：1)將水煮沸后加入糖，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至20-35℃，即制得所述培養液；2)接種培養：先將培養器消毒、潤洗，接著將所述母菌液和所述培養液按照1：20-50的體積比放入到所述培養器中，并用紗布封口，將所述培養器放置于光照強度為0.1萬-0.8萬lx的弱光環境、通風且溫度為30-35℃的條件下發酵培養7-14天；3)將培養結束后的所述培養液進行固液分離，取下層液體即為所述紅茶菌代謝產物。上述技術方案中，所述母菌液可以選擇醋酸菌、酵母菌的單獨菌液或者多種組合的菌液進行發酵，但是為了提高培養的成功率，以及考慮降低成本，優選地，所述母菌液是由下述方法制得：將無菌水、酒與蜂蜜按照100：10-20：10-20的重量比進行混合制得混合液，將所述混合液置于15-30℃的敞口、陰暗條件下發酵10-15天，發酵結束后分離出所述混合液表面漂浮的一層薄膜即為母菌種；再將所述母菌種、紅茶水、所述糖水按照1：40-50：30-40的重量比混合、于15-30℃的敞口、陰暗條件下培養3-5天即制得所述母菌液。在上述技術方案中，所述無菌水的溫度可以控制在較寬的范圍內，但是為了促進母菌種的發酵生長，優選地，所述無菌水的溫度為40-60℃。另外，在上述技術方案中，所用的酒的種類及其酒精度均可以在寬的范圍內選擇，但是為了進一步提高菌種的培養效率以減少污染的概率，優選地，所述酒為白酒或米酒，且所述白酒或米酒的酒精度為30％-50％。在本發明中所用糖的種類可以在寬的范圍內選擇，為了促進紅茶菌的發酵培養，優選地，所述糖選自單糖、二糖或多糖；所述單糖為葡萄糖，所述二糖為麥芽糖、蔗糖或乳糖，所述多糖為淀粉；更優選地，所述步驟1)中糖與水的重量比為1：20-30。在上述技術方案中，所述培養器的材質可以在寬的范圍內選擇，但是為減少材質對紅茶菌培養過程中的污染，優選地，所述培養器的材質為玻璃瓶或陶瓷。所述潤洗的過程可以是用無菌水多次沖洗，或者直接用培養液沖洗幾次，但是為了提高潤洗效果進而促進紅茶菌的培養，優選地，所述潤洗的過程為：用母菌液沖洗所述培養器2-3次。另外，為了在本發明步驟2)中，消毒的方法可以有多種選擇，但是為了減少操作過程給培養器帶來新的污染源進而污染菌種，優選地，在步驟2)中，所述消毒的過程是將培養器放置于沸水中煮10-30min。在發明中，所述的所述固液分離的過程可以是過濾、離心等，但是為了提高制備效率，且為了避免破壞菌種、污染代謝產物，優選地，所述固液分離的方法為：直接用過濾的方式將培養液的表面漂浮的紅褐色絮狀物或塊狀物分離出，或者直接用濾網兜或紗布將所述紅褐色絮狀物或塊狀物撈出后取下層液體即為所述紅茶菌代謝產物。本發明還提供了一種如上述培養方法所制得的用于治療牙痛的紅茶菌代謝產物。本發明中所述紅茶菌代謝產物的使用要點為：單次治療時，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續治療3-4周。以下將通過實施例對本發明進行詳細描述。制備例1將無菌水(40℃)、白酒(酒精度30體積％)與蜂蜜按照100：10：10的重量比進行混合制得混合液，將所述混合液置于15℃的敞口、陰暗條件下發酵15天，發酵結束后分離出所述混合液表面漂浮的一層薄膜即為母菌種；再將所述母菌種、紅茶水、所述糖水按照1：40：30的重量比混合、于15℃的敞口、陰暗條件下培養3天即制得所述母菌液；記作w1。制備例2將無菌水(60℃)、米酒(酒精度50體積％)與蜂蜜按照100：20：20的重量比進行混合制得混合液，將所述混合液置于30℃的敞口、陰暗條件下發酵10天，發酵結束后分離出所述混合液表面漂浮的一層薄膜即為母菌種；再將所述母菌種、紅茶水、所述糖水按照1：50：40的重量比混合、于30℃的敞口、陰暗條件下培養5天即制得所述母菌液；記作w2。制備例3按照制備例1的方法制得制得所述母菌液；記作w3，不同的是所用酒為酒精度為50體積％的白酒。制備例4按照制備例1的方法制得所述母菌液；記作w4，不同的是所用酒為市售的雪花啤酒。制備例5按照制備例1的方法制得所述母菌液；記作w5，不同的是所用酒為市售的長城葡萄酒。制備例6按照制備例1的方法制得所述母菌液；記作w5，不同的是所述無菌水的溫度為10℃。實施例11)制備培養液：將水煮沸后加入糖(糖與水重量比為1：20)，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至35℃，即制得所述培養液；2)接種培養：先將陶瓷培養器放置于沸水中煮15min進行消毒、用母菌液(w1)進行潤洗3次，接著將所述母菌液(w1)和所述培養液按照1：20的體積比放入到所述培養器中，并用紗布封口，將所述陶瓷培養器放置于光照強度為0.1萬lx的弱光環境、通風且溫度為30℃的條件下發酵培養14天，最后用濾網兜撈出培養結束后的培養液的表面漂浮的紅褐色絮狀物或塊狀物，取下層液體即為制得的所述紅茶菌代謝產物；記作a1。實施例21)制備培養液：將水煮沸后加入糖(糖與水重量比為1：25)，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至25℃，即制得所述培養液；2)接種培養：先將陶瓷培養器放置于沸水中煮30min進行消毒、用母菌液(w2)進行潤洗3次，接著將所述母菌液(w2)和所述培養液按照1：35的體積比放入到所述培養器中，并用紗布封口，將所述陶瓷培養器放置于光照強度為0.5萬lx的弱光環境、通風且溫度為35℃的條件下發酵培養10天，最后用濾網兜撈出培養結束后的培養液的表面漂浮的紅褐色絮狀物或塊狀物，取下層液體即為制得的所述紅茶菌代謝產物；記作a2。實施例31)制備培養液：將水煮沸后加入糖(糖與水重量比為1：30)，待糖溶化后制得糖水，接著將所述糖水冷卻至25℃，即制得所述培養液；2)接種培養：先將玻璃培養器放置于沸水中煮25min進行消毒、用母菌液(w3)進行潤洗3次，接著將所述母菌液(w3)和所述培養液按照1：50的體積比放入到所述培養器中，并用紗布封口，將所述玻璃培養器放置于光照強度為0.8萬lx的弱光環境、通風且溫度為35℃的條件下發酵培養7天，最后用濾網兜撈出培養結束后的培養液的表面漂浮的紅褐色絮狀物或塊狀物，取下層液體即為制得的所述紅茶菌代謝產物；記作a3。對比例1按照實施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產物，記作b1，不同的是所用母菌液為w4。對比例2按照實施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產物，記作b2，不同的是所用母菌液為w5。對比例3按照實施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產物，記作b3，不同的是所用母菌液為w6。對比例4按照實施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產物，記作b4，不同的是所用母菌液為純醋酸菌液。對比例5按照實施例1的方法制得所述紅茶菌代謝產物，記作b5，不同的是所用培養器為鋁制得培養器。檢測例1按照上述實施例1-3以及對比例1-5的方法各自獨立重復100組培養實驗，并統計a1-a3以及b1-b5的紅茶菌代謝產物的被污染情況、計算其對應的培養成功率；當紅茶菌顏色為灰色或灰綠色則證明紅茶菌及其代謝產物被污染了，即視為培養不成功；具體結果見表1。表1a1a2a3b1b2b3b4b5成功率98％96％97％80％82％80％76％79％通過上述實施例和對比例的檢測結果來看，本發明提供的制備方法培養紅茶菌的被污染率較小，且培養成功率高達97％左右；而在本發明提供的培養方法范圍以外的培養條件都會明顯降低了其培育的成功率。應用例1選擇8位患有牙痛的患者分別服用a1-a3及b1-b5進行治療，并記錄治療后患者的牙痛緩解情況，具體結果見表2：患者1：單次治療，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物a1含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續3周。患者2：單次治療，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物a2含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續3周。患者3：單次治療，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物a3含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續3周。患者4：單次治療，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物b1含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續3周。患者5：單次治療，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物b2含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續3周。患者6：單次治療，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物b3含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續3周。患者7：單次治療，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物b4含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續3周。患者8：單次治療，將5-8毫升所述紅茶菌代謝產物b5含于牙痛部30-60秒，然后吐出或咽下，反復3-5次；每周治療1-2次，連續3周。表2治療一周治療兩周治療三周患者1明顯緩解完全緩解完全緩解患者2明顯緩解明顯緩解完全緩解患者3完全緩解完全緩解完全緩解患者4輕微緩解輕微緩解輕微緩解患者5未緩解未緩解輕微緩解患者6未緩解未緩解輕微緩解患者7未緩解未緩解未緩解患者8未緩解未緩解未緩解以上詳細描述了本發明的優選實施方式，但是，本發明并不限于上述實施方式中的具體細節，在本發明的技術構思范圍內，可以對本發明的技術方案進行多種簡單變型，這些簡單變型均屬于本發明的保護范圍。另外需要說明的是，在上述具體實施方式中所描述的各個具體技術特征，在不矛盾的情況下，可以通過任何合適的方式進行組合，為了避免不必要的重復，本發明對各種可能的組合方式不再另行說明。此外，本發明的各種不同的實施方式之間也可以進行任意組合，只要其不違背本發明的思想，其同樣應當視為本發明所公開的內容。當前第1頁12