本發明涉及一種用于紅富士蘋果授粉花粉懸浮液的制備方法，屬于果樹授粉
技術領域：
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背景技術：
：蘋果大多自花不育，需異花授粉，果實由子房和花托發育而成。植物自交不親和性是被子植物中普遍存在的限制自花受精的機制，它阻止基因型相同的花粉管在雌蕊中正常生長，完成受精。該反應涉及到70多個科，250多個屬。自交不親和的發生防止了近親繁殖、促進異花授粉受精，有利于物種多樣性。根據其控制因子的不同，自交不親和的類型可分為孢子體型和配子體型。配子體自交不親和性是指在花粉和雌蕊的相互作用過程中，花粉的行為決定于花粉粒內壁蛋白的性質，也就是由花粉粒本身的單倍體基因型決定的，薇科多種果樹如梨、蘋果、甜櫻桃、杏、果梅、李和扁桃等表現出配子體型自交不親和性。自交不親和現象在一定程度上推動了物種的進化，但是在經濟作物的生產中比如蘋果生產中也造成了一定的障礙。由于這些果樹自花授粉不能結實，在生產上必須配置授粉品種，或進行人工輔助授粉才能保證座果，從而增加了生產成本。目前，克服自交不親和的方法一般可歸為生物學方法、物理學方法和化學處理法三大類。其中化學處理法一般是在蘋果花期噴施3～10%的nacl溶液，nacl的濃度與自交不親和的程度有關，但是這會導致花粉會出現不同程度的皺縮而無法萌發，影響花粉的活性，使得蘋果的結果率會非常低，嚴重影響果園的產量和效益。因此，迫切尋找一種不影響花粉的活性，提高花粉的座果率的授粉花粉懸浮液。技術實現要素：本發明所要解決的技術問題：針對傳統的蘋果授粉方法影響花粉的活性，導致花粉出現不同程度的皺縮而無法萌發，降低了蘋果的座果率，嚴重影響果園的產量和效益的問題，提供了一種用于紅富士蘋果授粉花粉懸浮液的制備方法。為解決上述技術問題，本發明采用的技術方案是：一種用于紅富士蘋果授粉花粉懸浮液的制備方法，其特征在于具體制備步驟為：（1）在珊夏蘋果樹處于花期時，選取花朵和花蕾并采摘，在避光環境中收集珊夏蘋果花粉，將珊夏蘋果花粉置于白熾燈下干燥，將干燥后花粉過篩除雜，收集除雜后的花粉，并裝入無菌離心管中，置于4℃的環境下避光保存；（2）按重量份數計，分別稱取50～60份蔗糖、5～7份乳糖、10～20份葡萄糖、0.01～0.03份維生素c、0.1～0.3份硼酸、0.02～0.04份硫酸鎂、0.01～0.03份硝酸鉀、0.01～0.03份硝酸鈣加入到900～1000份去離子水中，攪拌混合后滅菌，滅菌后得液體培養基；（3）將除雜后避光保存的花粉加入液體培養基中，攪拌后置于培養箱中，在黑暗環境下培養，得到花粉培養液，放入低溫冰箱中儲存，儲存后取出解凍，得解凍液；（4）按重量份數計，分別選取100～120份解凍液、10～15份蔗糖、0.02～0.04份硼酸、0.001～0.003份硫酸鋅，攪拌后得珊夏蘋果花粉萌發液；（5）將阿拉伯膠溶液和珊夏蘋果花粉萌發液混合，即可得用于紅富士蘋果的授粉花粉懸浮液。步驟（1）中所述的白熾燈的功率為25～30w。步驟（1）中所述除雜后保存的花粉和液體培養基的質量比為1:1000。步驟（3）中所述的培養箱溫度為20～25℃，培養時間為5～7h。步驟（3）中所述的低溫冰箱溫度為-15～-10℃。步驟（3）中所述的解凍溫度為5～8℃。步驟（5）中所述的阿拉伯膠溶液和珊夏蘋果花粉萌發液是按質量比1:10混合。本發明與其他方法相比，有益技術效果是：（1）本發明將收集得到的珊夏蘋果花粉，通過培養法培養珊夏蘋果花粉，在離體培養環境中，培養基承擔起柱頭和花柱的功能，通過培養，可以提高珊夏蘋果花粉的原本的活性和萌發率；（2）本發明將培養得到的花粉培養液進行冷凍保存，保存的目的是為了將花粉萌發率降到最低值，為后續花粉的萌發率和花粉管的伸長做準備，可以提高花粉的敏感度；（3）本發明將培養得到的花粉培養液中添加硼酸、蔗糖、硫酸鋅，給花粉培養提供碳源，加入硼酸是提升花粉細胞內部的代謝和吸收蔗糖的過程，能夠加快珊夏蘋果花粉萌發和花粉管伸長，使花粉的萌發率得到提高；（4）本發明選取最有利于紅富士花粉萌發和生長的懸浮液配方和溫度，制備的用于紅富士蘋果授粉花粉懸浮液不會影響花粉的活性，易于花粉萌發，提高了紅富士蘋果的座果率。具體實施方式在珊夏蘋果樹處于花期時，從生長正常、樹勢健壯的珊夏蘋果樹上選取開放的花朵和花蕾并采摘；將采摘后的花朵和花蕾置于避光環境中，用鑷子去掉花瓣，收集3～5g珊夏蘋果花粉，將珊夏蘋果花粉置于白熾燈下，在25～30w條件下干燥10～12h，將干燥后花粉過25～30目篩除雜，收集除雜后的花粉，并裝入無菌離心管中，置于4℃的環境下避光保存，備用；按重量份數計，分別稱取50～60份蔗糖、5～7份乳糖、10～20份葡萄糖、0.01～0.03份維生素c、0.1～0.3份硼酸、0.02～0.04份硫酸鎂、0.01～0.03份硝酸鉀、0.01～0.03份硝酸鈣加入到900～1000份去離子水中，在50～70r/min轉速下攪拌混合15～20min后，在紫外燈下滅菌處理15～20min，滅菌后得液體培養基；按質量比1:1000，將備用除雜后避光保存的花粉加入液體培養基中，以60～70r/min轉速攪拌混合1～2min，攪拌后置于培養箱中，并設置培養箱溫度為20～25℃，在黑暗的環境下培養5～7h；培養結束后得到花粉培養液并置于燒杯中，將燒杯放入低溫冰箱中，先在-15～-10℃下儲存2～3天，儲存后將從低溫冰箱中取出的燒杯先置于5～8℃下解凍8～10h，得解凍液，按重量份數計，分別選取100～120份解凍液、10～15份蔗糖、0.02～0.04份硼酸、0.001～0.003份硫酸鋅，以40～50r/min轉速攪拌3～5min，攪拌后即可得珊夏蘋果花粉萌發液；稱取1～3g阿拉伯膠加入到1000～1200ml去離子水中，攪拌至阿拉伯膠溶解，得阿拉伯膠溶液，按質量比1:10將阿拉伯膠溶液和上述珊夏蘋果花粉萌發液混合，以50～70r/min轉速攪拌混合3～5min后，即可得用于紅富士蘋果的授粉花粉懸浮液。實例1在珊夏蘋果樹處于花期時，從生長正常、樹勢健壯的珊夏蘋果樹上選取開放的花朵和花蕾并采摘；將采摘后的花朵和花蕾置于避光環境中，用鑷子去掉花瓣，收集5g珊夏蘋果花粉，將珊夏蘋果花粉置于白熾燈下，在30w條件下干燥12h，將干燥后花粉過30目篩除雜，收集除雜后的花粉，并裝入無菌離心管中，置于4℃的環境下避光保存，備用；按重量份數計，分別稱取60份蔗糖、7份乳糖、20份葡萄糖、0.03份維生素c、0.3份硼酸、0.04份硫酸鎂、0.03份硝酸鉀、0.03份硝酸鈣加入到1000份去離子水中，在70r/min轉速下攪拌混合20min后，在紫外燈下滅菌處理20min，滅菌后得液體培養基；按質量比1:1000，將備用除雜后避光保存的花粉加入液體培養基中，以70r/min轉速攪拌混合2min，攪拌后置于培養箱中，并設置培養箱溫度為25℃，在黑暗的環境下培養7h；培養結束后得到花粉培養液并置于燒杯中，將燒杯放入低溫冰箱中，先在-10℃下儲存3天，儲存后將從低溫冰箱中取出的燒杯先置于8℃下解凍10h，得解凍液，按重量份數計，分別選取120份解凍液、15份蔗糖、0.04份硼酸、0.003份硫酸鋅，以50r/min轉速攪拌5min，攪拌后即可得珊夏蘋果花粉萌發液；稱取3g阿拉伯膠加入到1200ml去離子水中，攪拌至阿拉伯膠溶解，得阿拉伯膠溶液，按質量比1:10將阿拉伯膠溶液和上述珊夏蘋果花粉萌發液混合，以70r/min轉速攪拌混合5min后，即可得用于紅富士蘋果的授粉花粉懸浮液。實例2在珊夏蘋果樹處于花期時，從生長正常、樹勢健壯的珊夏蘋果樹上選取開放的花朵和花蕾并采摘；將采摘后的花朵和花蕾置于避光環境中，用鑷子去掉花瓣，收集3g珊夏蘋果花粉，將珊夏蘋果花粉置于白熾燈下，在25w條件下干燥10h，將干燥后花粉過25目篩除雜，收集除雜后的花粉，并裝入無菌離心管中，置于4℃的環境下避光保存，備用；按重量份數計，分別稱取50份蔗糖、5份乳糖、10份葡萄糖、0.01份維生素c、0.1份硼酸、0.02份硫酸鎂、0.01份硝酸鉀、0.01份硝酸鈣加入到900份去離子水中，在50r/min轉速下攪拌混合15min后，在紫外燈下滅菌處理15min，滅菌后得液體培養基；按質量比1:1000，將備用除雜后避光保存的花粉加入液體培養基中，以60r/min轉速攪拌混合1min，攪拌后置于培養箱中，并設置培養箱溫度為20℃，在黑暗的環境下培養5h；培養結束后得到花粉培養液并置于燒杯中，將燒杯放入低溫冰箱中，先在-15℃下儲存2天，儲存后將從低溫冰箱中取出的燒杯先置于5℃下解凍8h，得解凍液，按重量份數計，分別選取100份解凍液、10份蔗糖、0.02份硼酸、0.001份硫酸鋅，以40r/min轉速攪拌3min，攪拌后即可得珊夏蘋果花粉萌發液；稱取1g阿拉伯膠加入到1000ml去離子水中，攪拌至阿拉伯膠溶解，得阿拉伯膠溶液，按質量比1:10將阿拉伯膠溶液和上述珊夏蘋果花粉萌發液混合，以50r/min轉速攪拌混合3min后，即可得用于紅富士蘋果的授粉花粉懸浮液。實例3在珊夏蘋果樹處于花期時，從生長正常、樹勢健壯的珊夏蘋果樹上選取開放的花朵和花蕾并采摘；將采摘后的花朵和花蕾置于避光環境中，用鑷子去掉花瓣，收集4g珊夏蘋果花粉，將珊夏蘋果花粉置于白熾燈下，在27w條件下干燥11h，將干燥后花粉過27目篩除雜，收集除雜后的花粉，并裝入無菌離心管中，置于4℃的環境下避光保存，備用；按重量份數計，分別稱取55份蔗糖、6份乳糖、15份葡萄糖、0.02份維生素c、0.2份硼酸、0.03份硫酸鎂、0.02份硝酸鉀、0.02份硝酸鈣加入到950份去離子水中，在60r/min轉速下攪拌混合17min后，在紫外燈下滅菌處理17min，滅菌后得液體培養基；按質量比1:1000，將備用除雜后避光保存的花粉加入液體培養基中，以65r/min轉速攪拌混合2min，攪拌后置于培養箱中，并設置培養箱溫度為22℃，在黑暗的環境下培養6h；培養結束后得到花粉培養液并置于燒杯中，將燒杯放入低溫冰箱中，先在-12℃下儲存2天，儲存后將從低溫冰箱中取出的燒杯先置于7℃下解凍9h，得解凍液，按重量份數計，分別選取110份解凍液、12份蔗糖、0.03份硼酸、0.002份硫酸鋅，以45r/min轉速攪拌4min，攪拌后即可得珊夏蘋果花粉萌發液；稱取2g阿拉伯膠加入到1100ml去離子水中，攪拌至阿拉伯膠溶解，得阿拉伯膠溶液，按質量比1:10將阿拉伯膠溶液和上述珊夏蘋果花粉萌發液混合，以60r/min轉速攪拌混合4min后，即可得用于紅富士蘋果的授粉花粉懸浮液。采用實例1至實例3制備的授粉花粉懸浮液進行授粉試驗，采用質量分數為7%的氯化鈉溶液作為對照試驗，在山東煙臺福山某果園進行試驗，具體試驗的方法為：1.在4月份紅富士蘋果開花前進行套袋，防止自然授粉；2.在5月份選擇四棵開花的紅富士蘋果樹，分別將實例1至3及對照例于下午16:00噴灑至紅富士蘋果盛開的花朵上進行授粉，每棵果樹上噴灑的授粉花粉懸浮液的量為100g，在授粉前統計每棵蘋果樹上的開花總數；3.在授粉后30天，統計蘋果樹上的結果數，并計算其座果率，統計數據如下表1。表1實驗組蘋果結果數開花總數座果率（%）對照例17027462實例130036582實例223026786實例326029289如表1所示，本發明制備的花粉懸浮液授粉效果好，大大提高了紅富士蘋果的座果率，提高了果農的經濟效益。當前第1頁12