一種ASE法提取山楂中金絲桃苷的方法與流程

本發明屬于山楂中有效成分的提取領域，尤其是一種ASE法提取山楂中金絲桃苷的方法。

背景技術：

山楂葉為薔薇科植物山里紅(Crataegus pinnatifida Bge.var major N.E.Br.)，具有活血化瘀，理氣通脈，用于氣滯血瘀，胸悶憋氣，心悸見忘，眩暈耳鳴。

研究結果表明山楂中金絲桃苷是已經被證實治療心血管疾病，并有解痙鎮痛，保護胃黏膜、肝組織及調節血脂，增強免疫力，抗抑郁及對心腦缺血的保護作用。

2015年版藥典記載的提取及測定山楂中金絲桃苷的方法為：本品細粉約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取至提取液無色，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，加甲醇繼續提取至無色(約4小時)，提取液蒸干，殘渣加稀乙醇溶解，轉移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，作為供試品貯備液。在15000r/min下離心3min，取上清液。

本發明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進行考察，《中國藥典》使用三氯甲烷除雜后，采用甲醇索提至無色，雜質較少。

而三氯甲烷毒性較大；另外，按照藥典方法進行，耗時至少需4小時。

技術實現要素：

針對上述不足，本發明旨在提供一種毒性小、耗時短的ASE法提取山楂中金絲桃苷的方法。

為了實現上述技術效果，本發明提供的技術方案是這樣的：一種ASE法提取山楂中金絲桃苷的方法，依次包括下述步驟：

步驟1：采用ASE萃取法對山楂粉末進行萃取，先用正己烷對山楂粉末進行除雜，再用乙醇萃取除雜后的樣品，并收集乙醇萃取液；

步驟2：用乙醇將乙醇萃取液定容至50ml，離心，取上清液；

所述的除雜步驟的參數為：壓力為1500psi，溫度為80℃，時間為5min，次數為2次，沖洗體積為100％，吹掃時間為100s；

所述的萃取步驟的參數為：壓力為1500psi，溫度為110℃，時間為5min，次數為1次，沖洗體積為100％，吹掃時間為100s。

優選地，所述的步驟1包括下述子步驟：

步驟S1：將山楂樣品粉碎，過三號篩，取1g與1g石英砂混合均勻；

步驟S2：在放有濾膜的10ml ASE萃取池中加1g硅藻土，再將步驟1所得的混合物倒入，并加石英砂至其低于池口2mm；

步驟S3：用25ml正己烷萃取除雜，再用25ml乙醇對其進行萃取提純，收集乙醇萃取液。

優選地，所述的步驟2包括下述子步驟：

步驟SS1：將收集所得的乙醇萃取液用乙醇定容至50ml；

步驟SS2：在15000r/min下離心3min，取上清液。

本發明與傳統方法相比，具有以下優點：

1.本發明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進行考察，《中國藥典》使用三氯甲烷除雜后，采用甲醇索提至無色，雜質較少。而三氯甲烷毒性較大，故采用極性相對較接近的正己烷作為除雜溶劑，甲醇、作為提取溶劑進行了溶劑考察，結果顯示正己烷除雜，甲醇提取后金絲桃苷含量與2015年版《中國藥典》含量一致，且雜質峰基本相同，故采用與藥典一致的提取溶劑。

2.在除雜過程中，藥典方法加入三氯甲烷索提取液無色，時間相對較長，且三氯甲烷毒性較大，我們采用了多次萃取除雜的方式，發現80℃，提取5min，2次即可達到除去大部分雜質，再多的提取時間和次數已經無明顯影響，而相對高的溫度對提取效果影響不大，故最終確定最佳除雜工藝組合為提取溫度80℃，提取時間5min，提取次數2次。提取過程中采用110℃，提取5min，提取1次即可達到與藥典含量接近，更多的提取時間、溫度、次數對結果已經無明顯影響。

最終確定最佳提取工藝組合為提取溫度110℃，提取時間5min，提取次數1次。

附圖說明

圖1為藥典方法提取山楂葉中金絲桃苷的色譜圖；

圖2為ASE法萃取山楂葉中金絲桃苷的色譜圖。

具體實施方式

下面結合具體實施方式，對本發明的權利要求做進一步的詳細說明，但不構成對本發明的任何限制，任何在本發明權利要求保護范圍內所做的有限次的修改，仍在本發明的權利要求保護范圍之內。

實施例1

1、儀器設備及試劑

1.1儀器：

電子分析天平(XA205DU)、ASE350快速溶劑萃取儀(美國DIONEX公司)。

1.2試劑：試劑與溶液(除特別注明外，本實驗所用試劑均為分析純)

水：符合GB/T 6682規定的一級水；正己烷(C₆H₁₄)：分析純；乙醇(C₂H₆O)：分析純；乙腈(C₂H₃N)：色譜純(液相色譜用)；磷酸(H₃PO₄)：分析純；石英砂：粒徑約2mm。

2、方法

2.1 2015年版藥典方法

本品細粉約1g，精密稱定，置索氏提取器中，加三氯甲烷加熱回流提取至提取液無色，棄去三氯甲烷液，藥渣揮去三氯甲烷，加甲醇繼續提取至無色(約4小時)，提取液蒸干，殘渣加稀乙醇溶解，轉移至50ml量瓶中，加稀乙醇至刻度，搖勻，在15000r/min下離心3min，取上清液。

2.2快速溶劑萃取法(ASE)

樣品經粉碎機粉碎，過三號篩，約1.0g，精密稱定，與1g石英砂混合均勻，待用，在預先放好過濾膜的10ml萃取池中先加入1g硅藻土，后加入混合均勻的樣品，再加入適量石英砂，輕輕振搖使之與池口在同一水平線下2mm處，擰緊萃取池上蓋。萃取(包括除雜和提取2步，見ASE條件方法)結束后，把萃取液轉移于50ml容量瓶中，用烯乙醇稀釋至刻度，在15000r/min下離心3min，取上清液。

2.3 ASE萃取條件

所述的除雜步驟的參數為：壓力為1500psi，溫度為80℃，時間為5min，次數為2次，沖洗體積為100％，吹掃時間為100s；

所述的萃取步驟的參數為：壓力為1500psi，溫度為110℃，時間為5min，次數為1次，沖洗體積為100％，吹掃時間為100s。

3.結果

取相同批號的樣品1.0g，共4份，精密稱定，按ASE提取方法提取供試品溶液，進樣量為1μL，進行平行試驗，測得樣品中金絲桃苷的含量見表1，RSD為3.9％.

試驗表明ASE提取方法重復性良好。

表1重現性試驗結果

表2可以看出采用ASE儀器1、ASE儀器2和藥典方法提取后的結果以及ASE儀器之間的重復性均良好。

表2樣品采用藥典方法與ASE方法測定含量的結果對比

4.討論

ASE提取溶劑的選擇：本發明曾對快速溶劑萃取使用的溶劑進行考察，《中國藥典》使用三氯甲烷除雜后，采用甲醇索提至無色，雜質較少。而三氯甲烷毒性較大，故采用極性相對較接近的正己烷作為除雜溶劑，甲醇、作為提取溶劑進行了溶劑考察，結果顯示正己烷除雜，甲醇提取后金絲桃苷含量與2015年版《中國藥典》含量一致，且雜質峰基本相同，故采用與藥典一致的提取溶劑。

ASE提取條件的優化：在除雜過程中，藥典方法加入三氯甲烷索提取液無色，時間相對較長，且三氯甲烷毒性較大，我們采用了多次萃取除雜的方式，發現80℃，提取5min，2次即可達到除去大部分雜質，再多的提取時間和次數已經無明顯影響，而相對高的溫度對提取效果影響不大，故最終確定最佳除雜工藝組合為提取溫度80℃，提取時間5min，提取次數2次。提取過程中采用110℃。提取5min，提取1次即可達到與藥典含量接近，更多的提取時間、溫度、次數對結果已經無明顯影響。最終確定最佳提取工藝組合為提取溫度110℃，提取時間5min，提取次數1次。

以上所述的僅為本發明的較佳實施例，凡在本發明的精神和原則范圍內所作的任何修改、等同替換和改進等，均應包含在本發明的保護范圍之內。