一種具有抗癌活性的化合物及其制備方法與應用與流程

本發明涉及天然產物化學領域，具體涉及一種具有抗癌活性的化合物及其制備方法與應用。

背景技術：

青錢柳(拉丁文名：cyclocaryapaliurus.),別名：搖錢樹、麻柳，青錢李、山麻柳、山化樹。胡桃科、青錢柳屬植物，我國南方多省均有發現，多以零星分布。青錢柳乃冰川四紀幸存下來的珍稀樹種，僅存于中國。青錢柳被譽為植物界的大熊貓，醫學界的第三棵樹。人們知道，醫學界的第一棵樹——柳樹，產生了阿司匹林，消炎殺菌、抗血栓，揭開了人類健康史的第一次變革。繼心腦血管、癌癥、癌之后，高血糖現已成為人類的第二大殺手，這時人們發現了青錢柳，并將其芽葉炮制成青錢柳茶。

《中國中藥資源志要》記載，青錢柳葉具清熱消渴解毒之效。《全國中草藥名鑒》記載：青錢柳樹皮、葉、根有殺蟲止癢，消炎止痛祛風之功效。中醫臨床用于治療糖尿病,因其有藥理作用能明顯降低血糖、減脂肪和尿糖。

目前，尚未有從青錢柳中發現具有抗癌活性化合物的報道。

技術實現要素：

本發明的目的在于，克服現有技術的缺陷，從青錢柳中提取一種一種具有抗癌活性的化合物，所述化合物具有良好的抗癌活性。

具體而言，本發明提供的化合物具有如通式i所示的結構：

所述通式i中，r1代表-oh或-och3；

r2代表-oh、-och3或

r3代表c5～c6的直鏈或支鏈烯烴。

本發明優選所述r3代表所述r4代表-oh或-och3。

具體地，所述r3代表

作為本發明的優選方案，所述化合物選自如下具體化合物1～9：

本發明進一步提供了所述的化合物的制備方法，包括如下步驟：

(1)取錢柳青原料，用乙醇充分提取；將所得乙醇提取物溶于水，加入乙酸乙酯進行萃取，收集有機層；

(2)將所述有機層上樣于硅膠柱，以石油醚-乙酸乙酯混合溶劑或乙酸乙酯-甲醇混合溶劑為流動相進行洗脫，收集洗脫產物，即得。

作為本發明的一種優選方案，為了獲得化合物1或2，所述步驟(2)具體為：將所述有機層上樣于硅膠柱，以體積比為1:0～5:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為20:1～5:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于sephadexlh-20柱，以體積比為1:1的氯仿:甲醇為流動相進行洗脫；再將所得洗脫產物上樣于半制備液相色譜，以體積比為7:3的乙腈-水為流動相進行洗脫，依據保留時間收集化合物1和/或化合物2。

作為本發明的一種優選方案，為了獲得化合物3或4，所述步驟(2)具體為：將所述有機層上樣于硅膠柱，以體積比為1:0～10:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于sephadexlh-20柱，以體積比1:1的氯仿-甲醇為流動相進行洗脫；再將所得洗脫產物上樣于半制備液相色譜，以體積比為6.5:3.5的乙腈-水為流動相進行洗脫，依據保留時間收集化合物3和/或化合物4。

作為本發明的一種優選方案，為了獲得化合物5，所述步驟(2)具體為：將所述有機層上樣于硅膠柱，以體積比為1:0～10:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比20:1～2:1的二氯甲烷-甲醇進行洗脫；再將所得洗脫產物上樣于半制備液相色譜，以體積比為9:1的乙腈-水為流動相進行洗脫，得化合物5。

作為本發明的一種優選方案，為了獲得化合物6，所述步驟(2)具體為：將所述有機層上樣于硅膠柱，以體積比為1:0～10:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為40:1～15:1的二氯甲烷-甲醇為流動相進行洗脫；再將所得洗脫產物上樣于半制備液相色譜，以體積比為9:1的乙腈-水為流動相進行洗脫，得化合物6。

作為本發明的一種優選方案，為了獲得化合物7，所述步驟(2)具體為：將所述有機層上樣于硅膠柱，以體積比為1:0～1:1的石油醚-乙酸乙酯為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為20:0～10:1的二氯甲烷-乙酸乙酯為流動相進行洗脫，純化后，得化合物7。

作為本發明的一種優選方案，為了獲得化合物8，所述步驟(2)具體為：將所述有機層上樣于硅膠柱，以體積比為1:0～1:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為20:1～1:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為20:1～1:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于sephadexlh-20柱，以體積比1:1的氯仿-甲醇為流動相進行洗脫；再將所得洗脫產物上樣于半制備液相色譜，以體積比6:1的乙腈-水為流動相進行洗脫，得化合物8。

作為本發明的一種優選方案，為了獲得化合物9，所述步驟(2)具體為：將所述有機層上樣于硅膠柱，以體積比為1:0～10:1的乙酸乙酯-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為80:1～5:1的二氯甲烷-甲醇為流動相進行洗脫；將所得洗脫產物上樣于硅膠柱，以體積比為40:1～15:1的二氯甲烷-甲醇為流動相進行洗脫；再將所得洗脫產物上樣于半制備液相色譜，以體積比為8.5:1的乙腈-水為流動相進行洗脫，得化合物9。

本發明進一步保護所述化合物在制備抗癌藥物和保健品中的應用；優選為在制備抗乳腺癌和/或肝癌藥物和保健品中的應用。

本發明提供的化合物可有效抑制人乳腺癌細胞和肝癌細胞增殖，效果由于經典的抗癌化合物順鉑，抗癌活性良好，可用于制備藥品和保健品，具有潛在的應用價值。

附圖說明

圖1～圖6分別為化合物1的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜、hmbc譜以及roesy譜；

圖7～圖12分別為化合物2的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜、hmbc譜以及roesy譜；

圖13～圖18分別為化合物3的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜、hmbc譜以及roesy譜；

圖19～圖24分別為化合物4的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜、hmbc譜以及roesy譜；

圖25～圖30分別為化合物5的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜、hmbc譜以及roesy譜；

圖31～圖36分別為化合物6的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜、hmbc譜以及roesy譜；

圖37～圖42分別為化合物7的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜、hmbc譜以及roesy譜；

圖43～圖48分別為化合物8的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜、hmbc譜以及roesy譜；

圖49～圖53分別化合物9的氫譜、碳譜、cosy譜、hsqc譜以及hmbc譜；

圖54為化合物1-9對bt-549細胞系的增殖抑制率示意圖；

圖55為化合物1-9對smmc-7721細胞系的增殖抑制率示意圖。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。

實施例1

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物1，其結構如下所示：

所述化合物1的表征信息如圖1～6所示。

實施例2

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物2，其結構如下所示：

所述化合物2的表征信息如圖7～12所示。

實施例3

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物3，其結構如下所示：

所述化合物3的表征信息如圖13～18所示。

實施例4

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物4，其結構如下所示：

所述化合物4的表征信息如圖19～24所示。

實施例5

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物5，其結構如下所示：

所述化合物5的表征信息如圖25～30所示。

實施例6

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物6，其結構如下所示：

所述化合物6的表征信息如圖31～36所示。

實施例7

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物7，其結構如下所示：

所述化合物7的表征信息如圖37～42所示。

實施例8

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物8，其結構如下所示：

所述化合物8的表征信息如圖43～48所示。

實施例9

本實施例提供了一種具有抗癌活性的化合物9，其結構如下所示：

所述化合物9的表征信息如圖49～53所示。

實驗例：化合物抗癌活性的驗證

1、實驗原理

活細胞的線粒體內膜上存在琥珀酸脫氫酶，該酶可將黃綠色的噻唑藍(簡稱為mtt，為一種接受氫離子的染料)降解成藍紫色的甲臜，活細胞越多，生成的藍紫色的甲臜就越多，而死細胞因其線粒體內膜上的琥珀酸脫氫酶活性消失，無此功能。使用二甲基亞砜容解藍紫色的甲臜，并用酶標儀在490nm波長處測定吸光度值，可以定量反應出活細胞數量。

2、實驗方法

(1)實驗分組：實驗分為化合物1～9組、順鉑組及對照組。對照組不加藥；各組均設置4個濃度梯度，按終濃度2.5、5、10、20μm(μmol/l)加藥。以上每組均設3個復孔。

(2)細胞培養：取對數生長期的bt-549(人乳腺癌細胞)及smmc-7721(人肝癌細胞)細胞，吸出原培養液，無菌磷酸鹽緩沖液(pbs)洗滌兩次后加入適量的胰酶進行消化，并離心收集細胞，制成細胞懸液；對細胞進行計數，并稀釋細胞濃度為7x10⁴/ml，準備無菌的96孔細胞培養板并進行相應的標記，然后每孔加入100μl細胞懸液，置37℃，5％co2培養箱內培養。待細胞貼壁生長至80％左右時，實驗組每孔加入相應的藥物，置37℃，5％co2培養箱內培養48h。

培養48h后，吸出原培養液，無菌pbs洗滌兩次后每孔加入含0.5mg/mlmtt的培養基繼續培養4h。4h后小心吸出孔內培養基，每孔加入150μl二甲基亞砜，置搖床上勻速搖10min，使結晶充分溶解。再用酶標儀在490nm波長處測定各組吸光度值，計算細胞增殖抑制率，求出半數抑制率(ic50)。

3、實驗結果

運用不同濃度梯度青錢柳化合物作用于bt-549及smmc-7721細胞48h后，酶標儀測定各個孔吸光度，并計算細胞增殖抑制率。

化合物1-9對bt-549細胞系的增殖抑制率的ic50在14.66～31.94μm之間，其中化合物1、2、3、5、7、8、9對bt-549細胞增殖抑制率比對照品順鉑的活性更強(見圖54，表1)

化合物1-9對smmc-7721細胞系的增殖抑制率的ic50在16.73～33.37μm之間，其中化合物1對smmc-7721細胞增殖抑制率比對照品順鉑的活性更強(見圖55，表1)。

表1：化合物對smmc-77細胞系和bt-549細胞系的抑制率

由以上結果可知，本發明提供的化合物對乳腺癌及肝癌均具有良好的抗癌活性。

雖然，上文中已經用一般性說明、具體實施方式及試驗，對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發明要求保護的范圍。