本發明涉及灰樹花生產領域，特別是一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法。
背景技術：
灰樹花(舞茸)多糖是灰樹花中的一種提取物，由葡聚糖、葡萄糖、木糖、巖藻糖、木糖、甘露糖、豐乳糖及少量蛋白質的異聚糖復合物組成。灰樹花多糖中含有一種蛋白多糖，中文名叫舞茸地復仙（舞茸D-fraction）它的蛋白和多糖的比例是7：3平均分子量是100萬。多糖部分由具有β-(1-3)側鏈的β-(1-6)葡聚糖和具有β-(1-6)側鏈的β-(1-3)葡聚糖組成。多糖成分中只有這種舞茸地復仙最有抗癌防癌的作用。
灰樹花（Grifolafrondosa）是一種藥食兩用菌，其多糖是主要的一類活性成分，作為一種生物反應調節劑，灰樹花多糖具有增強免疫功能、抑制腫瘤、抗HIV病毒、穩定血壓、降低血糖、改善脂肪代謝等生理活性，且無毒副作用。熱水浸提法是多糖提取最普遍應用的方法之一，但該方法存在耗時長，提取率不高等缺點，并存在很大程度的原料浪費。
技術實現要素：
本發明對現有的灰樹花多糖提取方法，進行了綜合性研究，結合現有技術，針對熱水浸提法存在的提取率不高、原料浪費嚴重的問題，公開了一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，本發明的灰樹花多糖分離純化方法，具有提取率高，原料利用率高的特點。
為解決以上技術問題，本發明提供的技術方案是:
一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）使用醇溶液對灰樹花子實體原料進行浸泡脫脂，脫脂完畢后，通過離心設備，進行固液分離，得到一次固相物和一次提取液；
（2）使用去離子水對步驟 （1）中所得的一次固相物，進行沸水冷凝回流浸提，浸提完畢后，再次通過離心設備，進行固液分離，得到二次固相物和二次提取液；
（3）將步驟（2）中所得的二次提取液，經濃縮、去蛋白、堿中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，得灰樹花水提多糖；
（4）使用堿性水溶液對步驟 （2）中所得的二次固相物進行浸提，浸提完畢后固液分離，得到三次提取液；
（5）將步驟（4）中所得的三次提取液，經酸中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，即得灰樹花堿提多糖。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟（1） 中，所述醇溶液與灰樹花子實體原料的重量比為 8-10 ：1，醇溶液為85－95%乙醇（w/v）溶液。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （2） 中，進行沸水冷凝回流浸提時，水體溫度控制在90－100℃之間，煎煮時間控制在2－4小時。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （2） 中，所述離子水與灰樹花原料的重量比為 8－10 ：1，提取次數共計2次。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）中，對二次提取液進行濃縮時，通過框架式薄膜濃縮器或真空濃縮機，進行濃縮，直至二次提取液的波美度達到25°～30°。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）中，去蛋白的具體條件為，向經過濃縮的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混濁，并于3－6℃下靜置12－24小時，離心去蛋白。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）中，向經過去蛋白的二次提取液中，滴加10%氫氧化鈉水溶液，進行中和，直至PH為6.8-7.2之間。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）和（5）中，進行透析脫鹽時，透析袋埋在吸水力強的聚乙二醇或甘油中，分別對步驟（3）中經過堿中和的二次提取液和步驟（5）中經過酸中和的三次提取液，進行透析36－48小時。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）和（5）中，醇沉的具體步驟為：
A、冷卻的步驟 （3）中的二次提取液和步驟 （5）中的三次提取液至10℃；
B、隨后采用三慢二快的攪拌節奏，緩慢向二次提取液和三次提取液中加入乙醇，并控制二次提取液和三次提取液內的含醇量達54％～65％；
C、最后，將加入了乙醇的二次提取液和三次提取液密封，并保存于低溫環境下，環境溫度控制在5℃~10℃。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （3）和（5）中，進行洗滌時，通過無水乙醇和丙酮依次洗滌兩次。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟（3）和步驟（5）中，進行噴霧干燥時，采用超聲波噴霧干燥工藝，設定進風溫度為85~95℃，進氣壓力設定為0.1~0.25MPa，進料量控制在30~50mL/min，同時設定出風溫度為70~90℃。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （4） 中，所述堿性水溶液與二次固相物的重量比為 8-10 ：1，堿性水溶液為5%氫氧化鈉水溶液。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟 （4） 中，進行浸提時，水體溫度控制在90－100℃之間，煎煮時間控制在2－4 小時。
上述的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其中，步驟（5） 中，進行酸中和時，通過向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液進行中和，直至PH值為7.0。
本發明的有益效果為：
本發明公開的一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其具體步驟包括：1）灰樹花子實體原料浸泡脫脂，離心得到一次固相物和一次提取液；2）一次固相物進行沸水冷凝回流浸提，離心得到二次固相物和二次提取液；3）二次提取液水提得灰樹花水提多糖；4）二次固相物進行浸提后固液分離，得到三次提取液；5）三次提取液堿提得灰樹花堿提多糖；采用本發明對灰樹花子實體進行多糖提取，結合了水提和堿提兩種提取方式，綜合提取灰樹花多糖，可以綜合提高灰樹花多糖的提取率，提取率達到現有提取率的122%，同時大幅度降低了原料的浪費，是一種高利用率、高提取率的灰樹花多糖分離純化的方法，適合大范圍推廣。
附圖說明
圖1本發明流程圖。
具體實施方式
實施例一
一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）使用醇溶液對灰樹花子實體原料進行浸泡脫脂，脫脂完畢后，通過離心設備，進行固液分離，得到一次固相物和一次提取液；
（2）使用去離子水對步驟 （1）中所得的一次固相物，進行沸水冷凝回流浸提，浸提完畢后，再次通過離心設備，進行固液分離，得到二次固相物和二次提取液；
（3）將步驟（2）中所得的二次提取液，經濃縮、去蛋白、堿中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，得灰樹花水提多糖；
（4）使用堿性水溶液對步驟 （2）中所得的二次固相物進行浸提，浸提完畢后固液分離，得到三次提取液；
（5）將步驟（4）中所得的三次提取液，經酸中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，即得灰樹花堿提多糖。
其中，步驟（1） 中，所述醇溶液與灰樹花子實體原料的重量比為 9.5 ：1，醇溶液為85－95%乙醇（w/v）溶液。
其中，步驟 （2） 中，進行沸水冷凝回流浸提時，水體溫度控制在95℃，煎煮時間控制在3.3小時。
其中，步驟 （2） 中，所述離子水與灰樹花原料的重量比為 8.5 ：1，提取次數共計2次。
其中，步驟 （3）中，對二次提取液進行濃縮時，通過框架式薄膜濃縮器或真空濃縮機，進行濃縮，直至二次提取液的波美度達到28°。
其中，步驟 （3）中，去蛋白的具體條件為，向經過濃縮的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混濁，并于3－6℃下靜置24小時，離心去蛋白。
其中，步驟 （3）中，向經過去蛋白的二次提取液中，滴加10%氫氧化鈉水溶液，進行中和，直至PH為6.8-7.2之間。
其中，步驟 （3）和（5）中，進行透析脫鹽時，透析袋埋在吸水力強的聚乙二醇或甘油中，分別對步驟（3）中經過堿中和的二次提取液和步驟（5）中經過酸中和的三次提取液，進行透析36－48小時。
其中，步驟 （3）和（5）中，進行洗滌時，通過無水乙醇和丙酮依次洗滌兩次。
其中，步驟（3）和步驟（5）中，進行噴霧干燥時，采用超聲波噴霧干燥工藝，設定進風溫度為90℃，進氣壓力設定為0.2MPa，進料量控制在40mL/min，同時設定出風溫度為82℃。
其中，步驟 （4） 中，所述堿性水溶液與二次固相物的重量比為 8-10 ：1，堿性水溶液為5%氫氧化鈉水溶液。
其中，步驟 （4） 中，進行浸提時，水體溫度控制在90℃之間，煎煮時間控制在3小時。
其中，步驟（5） 中，進行酸中和時，通過向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液進行中和，直至PH值為7.0。
實施例二
一種灰樹花水提多糖和堿提多糖分離純化的方法，其特征在于，包括以下步驟：
（1）使用醇溶液對灰樹花子實體原料進行浸泡脫脂，脫脂完畢后，通過離心設備，進行固液分離，得到一次固相物和一次提取液；
（2）使用去離子水對步驟 （1）中所得的一次固相物，進行沸水冷凝回流浸提，浸提完畢后，再次通過離心設備，進行固液分離，得到二次固相物和二次提取液；
（3）將步驟（2）中所得的二次提取液，經濃縮、去蛋白、堿中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，得灰樹花水提多糖；
（4）使用堿性水溶液對步驟 （2）中所得的二次固相物進行浸提，浸提完畢后固液分離，得到三次提取液；
（5）將步驟（4）中所得的三次提取液，經酸中和、透析脫鹽、醇沉、洗滌后，噴霧干燥，即得灰樹花堿提多糖。
其中，步驟（1） 中，所述醇溶液與灰樹花子實體原料的重量比為 8.2 ：1，醇溶液為85－95%乙醇（w/v）溶液。
其中，步驟 （2） 中，進行沸水冷凝回流浸提時，水體溫度控制在97℃之間，煎煮時間控制在3.8小時。
其中，步驟 （2） 中，所述離子水與灰樹花原料的重量比為 8－10 ：1，提取次數共計2次。
其中，步驟 （3）中，對二次提取液進行濃縮時，通過框架式薄膜濃縮器或真空濃縮機，進行濃縮，直至二次提取液的波美度達到28°。
其中，步驟 （3）中，去蛋白的具體條件為，向經過濃縮的二次提取液中，滴加5－30%三氯乙酸（w/v），直至溶液不再混濁，并于3－6℃下靜置24小時，離心去蛋白。
其中，步驟 （3）中，向經過去蛋白的二次提取液中，滴加10%氫氧化鈉水溶液，進行中和，直至PH為6.8-7.2之間。
其中，步驟 （3）和（5）中，進行透析脫鹽時，透析袋埋在吸水力強的聚乙二醇或甘油中，分別對步驟（3）中經過堿中和的二次提取液和步驟（5）中經過酸中和的三次提取液，進行透析36－48小時。
其中，步驟 （3）和（5）中，進行洗滌時，通過無水乙醇和丙酮依次洗滌兩次。
其中，步驟（3）和步驟（5）中，進行噴霧干燥時，采用超聲波噴霧干燥工藝，設定進風溫度為92℃，進氣壓力設定為0.25MPa，進料量控制在43mL/min，同時設定出風溫度為87℃。
其中，步驟 （4） 中，所述堿性水溶液與二次固相物的重量比為 8.9：1，堿性水溶液為5%氫氧化鈉水溶液。
其中，步驟 （4） 中，進行浸提時，水體溫度控制在92℃之間，煎煮時間控制在3.6小時。
其中，步驟（5） 中，進行酸中和時，通過向三次提取液中，滴加2mol/L HCL溶液進行中和，直至PH值為7.0。
實施例三
如實施例一、實施例二中所述，步驟 （3）和（5）中，醇沉的具體步驟為：
A、冷卻的步驟 （3）中的二次提取液和步驟 （5）中的三次提取液至10℃；
B、隨后采用三慢二快的攪拌節奏，緩慢向二次提取液和三次提取液中加入乙醇，并控制二次提取液和三次提取液內的含醇量達54％～65％；
C、最后，將加入了乙醇的二次提取液和三次提取液密封，并保存于低溫環境下，環境溫度控制在5℃~10℃。
以上所述，僅為本發明較佳的具體實施方式，但本發明的保護范圍并不局限于此，任何熟悉本技術領域的技術人員在本發明揭露的技術范圍內，可輕易想到的變化或替換，都應涵蓋在本發明的保護范圍內。因此，本發明的保護范圍應該以權利要求書的保護范圍為準。