本發明屬于蛋白質發酵
技術領域：
，具體涉及一種利用枯草芽孢桿菌發酵制備大豆肽的方法。
背景技術：
：大豆多肽即“肽基大豆蛋白水解物”的簡稱，是大豆蛋白質經蛋白酶作用再經特殊處理而得到的蛋白質水解產物。而我們通常所說的大豆多肽(soybeanpeptide)是指大豆蛋白經水解后，形成具有3-6個氨基酸殘基的多肽混合物，它的分子量低于1000u，而且主要是集中在在300u-700u之間。據研究，大豆中含有將近40％的蛋白質，人體中所需的必需氨基酸在大豆中都可以找到，而且其比例和含量都與人體必需氨基酸相似，所以說大豆是優質蛋白質的重要來源。大豆多肽的分子結構比較簡單以及相對分子質量比較小，大豆多肽的消化率與大豆蛋白的消化率相比顯得更高，因此大豆多肽的生物學效價更高。大豆肽中含有大量的且比例均衡的氨基酸，不僅能加快微生物的發酵速度而且還可以降低血壓及降低血脂的作用，人體內消化吸收蛋白質大多以多肽的形式。因此，大豆肽比大豆蛋白質更容易在腸道中消化吸收，還減少了脫水及腹瀉等不適應的情況，另外，大豆肽比糖類、脂肪更容易加速能量代謝更高程度的滿足人體的正常生理需求，并具有防病、治病、調節人體生理機能的作用，被廣大的老年人和肥胖人群所接受。而且大豆多肽沒有大豆本身的腥味以及苦澀的味道、沒有其他殘留物，大豆多肽受熱不凝結成固態和多肽液體不濃稠等特性；并且大豆肽與大豆蛋白相比較大豆肽更易溶于水而且吸水能力更強。因此，大豆肽不僅克服了大豆蛋白所不具備的理化功能的缺點，而且還具有大豆蛋白的豐富營養，是一種價格實惠的大豆深加工產品，是極具潛力的一種功能性食品基料，已逐漸成為21世紀的健康食品。由于大豆肽的諸多優點所以在食品工業中大豆肽的應用比較廣泛。如對于一些特殊的病人由于他們的消化功能健全或衰退，例如，一些老年人、嬰幼兒以及康復期的病人，他們的消化系統需要的營養品應具有易消化吸收且吸收速度快的特點，因此大豆肽可作為特殊病人的營養劑。大豆肽與其他材料搭配加工可以制成加工還可以與其他的輔料相互結合制成各種食品，如高蛋白、高果糖、低動物性脂肪、易消化的速溶性老年奶粉。在發酵工業中大豆肽還可以作為催化劑，大豆肽可以加速微生物生長發育促進微生物的代謝。在酸奶的加工、醬油的生產和火腿的發酵中等，大豆肽都發揮著功不可沒的功能。伴隨著我國經濟的發展，人們已越來越重視自身的健康問題，對大豆肽的營養功了解已普遍加深，在最近的幾年里市場的需求對大豆肽不斷的增加，并亟需開發出更適合、更有營養、有利人們健康的大豆肽產品。技術實現要素：為此，本發明所要解決的技術問題在于提供一種利用枯草芽孢桿菌發酵制備大豆肽的方法。為解決上述技術問題，本發明所述的利用枯草芽孢桿菌發酵制備大豆肽的方法，包括如下步驟：(1)取豆粕粉加水溶解得豆粕粉溶液，并將所述豆粕粉進行滅菌處理；(2)取滅菌后的豆粕粉溶液接種入枯草芽孢桿菌，并進行發酵培養；(3)取發酵液濾除殘渣，取濾液并調節濾液pH值至4-4.2，離心并收集上清液；(4)將所述上清液蒸發濃縮至黏稠狀少許液體，隨后冷凍至凝固態，并冷凍干燥至粉狀，即得大豆肽粉。所述步驟(1)中，所述豆粕粉和水的料液比為1：10-30。所述步驟(2)中，所述枯草芽孢桿菌的接種量為1wt％-5wt％。所述步驟(2)中，所述發酵溫度為25-45℃。所述步驟(2)中，所述發酵時間為16-48h。所述步驟(2)中，還包括在接種步驟前將所述豆粕粉溶液的pH值調節至6.0-8.0的步驟。所述步驟(3)中，所述離心步驟為3000-4000rpm低速離心。所述步驟(2)中，所述發酵步驟具體為：在發酵過程的后1/2發酵時間內，其發酵溫度相比于前1/2發酵時間內提升5℃。本發明還公開了由所述方法制備得到的大豆肽。本發明還公開了所述大豆肽用于制備抗氧化制劑的用途。本發明所述利用枯草芽孢桿菌發酵制備大豆肽的方法，以發酵豆粕為發酵原料，并優選各項工藝參數，所得大豆肽產品的水解度高達24.51％，更有效提高了大豆肽的得率。并且所得大豆肽產品的DPPH自由基清除率的IC50高達13.29mg/mL，超氧陰離子自由基清除率IC50高達3.99mg/mL。同時對發酵所得大豆肽粉的理化指標進行測定，結果表明所得的大豆肽粉中粗蛋白質含量高達80.14％，比未發酵豆粕中的蛋白質含量高出一倍多，大豆肽粉中多肽含量更高達73.61％。通過枯草芽孢桿菌對豆粕進行發酵，提高了大豆多肽的提取率，增強大豆肽的抗氧化能力，為大豆粕的綜合利用提供理論技術依據。本發明優選在整個發酵過程中，采用分段控溫的方式，更進一步的提高了大豆肽的提取率。附圖說明為了使本發明的內容更容易被清楚的理解，下面根據本發明的具體實施例并結合附圖，對本發明作進一步詳細的說明，其中，圖1為繪制的蛋白質標準曲線；圖2為繪制的大豆肽標準曲線；圖3-A為樣品的超氧陰離子自由基清除率測定結果；圖3-B為谷胱甘肽對超氧陰離子的清除能力測定結果；圖4-A為樣品的DPPH自由基的清除能力測定結果；圖4-B為谷胱甘肽對DPPH自由基的清除能力測定結果。具體實施方式實施例1取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉(取豆粕放入粉碎機中多次粉碎，并置于40目的篩子過濾3-4遍制得，下同)放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入200mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為7.0。向三角瓶中按照接種量為2％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為30℃、180r/min，培養發酵24h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例2取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入100mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為6.5。向三角瓶中按照接種量為1％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為25℃、180r/min，培養發酵16h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例3取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入300mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為8.0。向三角瓶中按照接種量為5％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為35℃、180r/min，培養發酵40h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例4取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入150mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為7.5。向三角瓶中按照接種量為3％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為40℃、180r/min，培養發酵32h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例5取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入250mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為6.0。向三角瓶中按照接種量為4％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為45℃、180r/min，培養發酵48h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例6取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入250mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為7.5。向三角瓶中按照接種量為2％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為35℃、180r/min，培養發酵48h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例7取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入300mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為7.0。向三角瓶中按照接種量為2％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為35℃、180r/min，培養發酵48h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例8取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入250mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為8.0。向三角瓶中按照接種量為2％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為35℃、180r/min，培養發酵24h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例9取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入300mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為7.0。向三角瓶中按照接種量為2％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為35℃、180r/min，培養發酵24h，隨后將雙顯恒溫振蕩器調為40℃、180r/min，繼續培養發酵24h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實施例10取清洗干凈的三角瓶，稱取10g豆粕粉放入三角瓶中，然后向三角瓶中加入250mL的去離子水，將裝有豆粕粉溶液的三角瓶用布包扎好，放入高溫高壓滅菌鍋中，于120℃殺菌20min，取出溫度降到常溫，并將溶液pH值調為8.0。向三角瓶中按照接種量為2％的計量接入直投式枯草芽孢桿菌，將雙顯恒溫振蕩器調為35℃、180r/min，培養發酵24h，隨后將雙顯恒溫振蕩器調為40℃、180r/min，繼續培養發酵24h。發酵結束后，將三角瓶從搖床取出，用4層紗布過濾掉發酵液中的殘渣，用去離子水清洗濾渣，再次過濾，如此重復兩遍，用鹽酸將濾液的pH值調至4.2，將調節好的濾液放入低速大容量離心機中調節轉速為4000r/min離心20min，取上清液測量其肽得率。同時用旋轉蒸發器將上清液蒸發至黏稠狀少許液體，取出蒸發后的液體倒入培養基中，培養基中的液體不宜過厚以免干燥不完全，將裝有液體的培養基放入冰箱中直到液體被凍住，取出放入冷凍干燥機中干燥，得大豆肽粉。實驗例實驗例1、大豆肽得率測定1.1測定方法(1)蛋白質標準曲線繪制蛋白質在范德華作用下能與考馬斯亮藍G250成一種藍色染料，反應后的溶液在波長為595nm處有最大吸收值，吸光值的與蛋白質含量成正比。因此可通過對溶液顏色變化進行比色分析，來測定溶液中蛋白質含量。考馬斯亮藍使用前需進行過濾處理以防有沉淀，對測量結果產生較大影響。準確配好100μg/mL的牛血清蛋白溶液。取6支試管，分別從0到5標上序號，按下表1中計量加入不同的試劑。繪制蛋白質的標準曲線，豆粕及大豆肽粉中的蛋白質含量用考馬斯亮藍法測定。表1蛋白質含量測定標準曲線的制作試劑012345去離子水/mL1.00.80.60.40.20牛血清蛋白溶液/(100μg/mL)00.20.40.60.81.0考馬斯亮藍G-250染液/mL5.05.05.05.05.05.0以蛋白質含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線如圖1所示。標準曲線的回歸方程為y＝0.0058x+0.0499，R2＝0.9977。(2)大豆肽標準曲線的繪制取6支試管按下表2的添加量分別加入牛血清蛋白、水和雙縮脲試劑，在540nm處測量各試管吸光度，繪制大豆肽的標準曲線，發酵液及大豆肽粉中的多肽含量用雙縮脲法測定。表2大豆肽含量測定標準曲線的制作試劑012345去離子水/mL5.04.03.02.01.00牛血清蛋白溶液/(5mg/mL)01.02.03.04.05.0雙縮脲試劑/mL2.02.02.02.02.02.0以蛋白質含量為橫坐標，吸光度為縱坐標，繪制標準曲線如圖2所示。標準曲線的回歸方程為y＝0.0987x+0.0123，R2＝0.9971。(3)大豆肽得率的測定稱取一定量的發酵液，加入2毫升雙縮脲試劑，然后在540nm處測量吸光度，重復3次，把結果代入上述標準曲線中得到大豆肽含量。按照公式如下計算大豆肽得率：T＝X/X1×100％式中：T――大豆肽提取率，以質量分數計％；X1――豆粕中蛋白質含量，單位為克每毫升(mg/mL)；X――發酵液中大豆肽含量，單位為克每毫升(mg/mL)。1.2測定結果按照上述1.1中方法測定上述實施例1-10中所述方法制得發酵液中大豆肽的得率，記錄于下表3中。表3各實施例中大豆肽含量測定結果可見，本發明所述利用枯草芽孢桿菌發酵制備大豆肽的方法，可有效利用豆粕為原料提取大豆肽，且大豆肽的提取效率較高。實驗例2抗氧化性能測定2.1水解度的測定--甲醛滴定法氨基酸為兩性電解質，氨基酸的羧基不能直接用堿來滴定。常溫狀態下甲醛可以與氨基快速結合，形成羥甲基化合物，促使-NH3釋放出H+，當H+釋放之后就可用NaOH標準溶液去滴定H+，我們可以根據消耗NaOH標準溶液體積計算出氨基酸的含量。蛋白質在酶的作用下，其水解包括下面三個過程①肽鍵斷裂：②質子交換過程：-CHR'-COOH-NH2-CHR"→-CHR'-COO-+NH3+-CHR"；③氨基滴定階段：將3mL的水解液(100℃的滅菌鍋中滅菌10min)放入100mL燒杯中，加入60mL去離子水，用0.05mol/L的NaOH標準溶液滴定至pH為8.2，加入10mL中性甲醛溶液，繼續滴定至pH為9.2，記下加入甲醛后消耗的NaOH標準溶液體積V1。空白組以相同體積未經水解的豆粕溶液做實驗，V0為加入中性甲醛后所耗的NaOH標準溶液體積。以上的滴定需在磁力攪拌器上進行保證溶液的充分混勻。水解度的計算見下式：式中，C--樣品蛋白濃度(mg/mL)；V--用于甲醛滴定的水解液的體積數(mL)；0.05--氫氧化鈉摩爾濃度(mol/L)；htot--每克黑豆蛋白質中肽鍵的毫摩爾數(7.8mmol/g)。按照上述方法對實施例7和8中所得大豆肽產物的水解度進行測定，結果見下表4。表4大豆肽水解度測定結果編號大豆肽得率/％實施例724.51實施例819.472.2超氧陰離子自由基清除率的測定當鄰苯三酚處在弱堿性的環境中時(pH為8.2的Tris-HCL緩沖液)它自身能夠迅速氧化分解，產生超氧陰離子自由基和黃棕色的中間產物，黃棕色的中間產物在325nm處有最大吸收波長，可根據黃棕色中間產物生成量來判斷Pyrogallol自氧化程度。反應體系有抗氧化劑的存在時，超氧陰離子被清除，黃棕色中間產物的生成減少，吸光度降低。在325nm最大吸收波長處進行吸光度測定，可以檢測抗氧化劑清除超氧陰離子自由基的能力。取質量濃度2％的大豆肽溶液0.1mL，然后加入0.05mol/L的Tris-HCl緩沖液和0.45mol/L焦性沒食子酸溶液0.1mL，空白組以相同體積的去離子水代替樣品溶液。放于漩渦混勻器混勻，待反應至4分鐘后時立即加入2％的鹽酸溶液0.1mL，依舊放于漩渦混勻器混勻，在325nm波長處測吸光度A。鹽酸溶液可以改變Pyrogallol的堿性環境，為了減少實驗誤差，在本實驗中鹽酸作為Pyrogallol氧化分解的促停劑來使用。以空白的吸光度為A0，加大豆肽樣品時吸光度為AS，按照如下公式計算超氧陰離子自由基清除率。取上述實施例7和實施例8中發酵所得的大豆肽，分別配置成濃度為1mg/mL、2mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL和1mg/mL、5mg/mL、10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL溶液，按照上述方法測其超氧陰離子清除率，結果見圖3-A、3-B所示。實施例7中大豆肽對自由基清除能力IC50為3.99mg/mL，實施例8中大豆肽對自由基清除能力IC50為5.25mg/mL。2.3DPPH·清除率的測定DPPH是一種穩定的有機自由基，在有機溶劑乙醇中呈現紫紅色，在波長為517nm處有最大吸收值。當反應體系中有自由基清除劑的存在時存在時，由于與其單電子配對而使其紫紅色逐漸消失吸光度減小，其減小的程度與其所接受的電子數成定量關系。DPPH法是一種測定大豆肽抗氧化能力的簡單有效的方法，在國內外廣泛應用。試劑配制：準確稱取4mgDPPH置于100mL的棕色容量瓶中，加入95％的乙醇定容至刻度線，將配好后的0.1mmol/LDPPH乙醇溶液，放入冰箱中避光保存備用。取相同質量濃度的大豆肽溶液0.5mL，在100℃的滅菌鍋中滅菌10min，加入3.5mL0.1mmol/LDPPH乙醇溶液混合均勻后，在室溫反應20min后，以4000r/min離心10min，于517nm處測量其吸光值Ai。空白組不加入DPPH·溶液而加入3.5mL95％的乙醇溶液，在相同的波長處測定其吸光值Aj。將樣品溶液換為相同體積的去離子水是對照組，并在相同波長處測量的吸光值A0，空白管是加入0.5mL去離子水和3.5mL95％的乙醇溶液，按如下公式計算DPPH·清除率。重復測量三次，取平均值。DPPH·清除率(％)＝[1-(Ai-Aj)/A0]×100％。分別取實施例7和8中所制得的含大豆肽，都配置成濃度為5mg/mL，10mg/mL、15mg/mL、20mg/mL、25mg/mL溶液，按照上述方法測其DPPH·清除率，結果見圖4-A、4-B所示。實施例7中大豆肽對DPPH自由基清除能力IC50為13.29mg/mL，實施例8中大豆肽對自由基清除能力IC50為15.52mg/mL。可見，本發明所述制備大豆肽的方法所得大豆肽產品的抗氧化性能較好。實施例3大豆肽粉感官評定3.1大豆肽粉的理化指標以GB/T22492-2008大豆肽粉的標準對冷凍干燥后的大豆肽粉進行理化指標測定，其檢測結果見表5。表5大豆肽粉的理化指標項目含量/％GB/T22492—2008標準大豆肽粉中粗蛋白含量/％80.14≥80.0大豆肽粉中多肽含量/％73.61≥55.03.2大豆肽粉的感官評定對冷凍干燥后的大豆肽粉進行感官評定，以GB/T22492-2008大豆肽粉中的感官要求為評價標準，將實施例7和8中經冷凍干燥后得到的大豆肽粉進行各項感官指標測定，測定標準及測定結果見下表6。表6大豆肽粉的感官指標及結果由表6數據可知本發明所述方法發酵制備出的大豆肽粉達到GB/T22492--2008大豆肽粉要求的三級指標，感官指標亦達到其要求。顯然，上述實施例僅僅是為清楚地說明所作的舉例，而并非對實施方式的限定。對于所屬領域的普通技術人員來說，在上述說明的基礎上還可以做出其它不同形式的變化或變動。這里無需也無法對所有的實施方式予以窮舉。而由此所引伸出的顯而易見的變化或變動仍處于本發明創造的保護范圍之中。當前第1頁1 2 3