本發明涉及生物工程技術領域，尤其是一種類海膽肽口服液的制備方法。
背景技術：
近年來，關于活性氧自由基（ROS）的研究日益增多。許多研究已經證實：活性氧自由基與癌癥、肝病、老年癡呆癥、關節炎、糖尿病等疾病的產生有關。凡是能干擾自由基鏈式反應中鏈引發和鏈增長過程，清除ROS的化合物統稱為抗氧化劑。抗氧化劑有內源性和外源性兩大類。前者包括生物體新陳代謝過程中產生的抗氧化酶、尿酸、泛醌、谷胱甘肽等，后者包括一些合成或者天然的抗氧化劑，如丁基羥基茴香醚、植物多酚等等。由于化學合成的酚類抗氧化劑的安全性受到質疑，天然抗氧化劑已成為國內外競相研究的熱點。
海膽之名始載于《本草原始》，是一種在世界各地食用廣泛的海洋水產。海膽的生殖腺是海膽黃，含有大量的蛋白質，海膽黃中蛋白質可占干重的44.5%，其營養價值類似于酪蛋白，含有17中氨基酸，不但具有很高的食用價值，還有極好的藥用功能，是制備抗氧化劑—活性肽的天然原料。同時，以海膽黃為原料制備海膽肽口服液的技術已有公開報道，例如，2015年9月2日公開的CN104872673A中國發明專利申請公開說明書中就公開這樣一種“海膽肽口服液及其制備方法”，其是將新鮮海膽剝開后，取出海膽黃與水混合磨漿，加入脂肪酶進行酶解脫脂，超濾收集截留液，即為海膽黃粗蛋白溶液，將海膽黃粗蛋白溶液采用菠蘿蛋白酶和生姜蛋白酶階段性協同酶解，酶解液再經過濾、超濾，調配和濃縮后得到海膽肽口服液。但是，海膽產量有限，并且海膽黃容易自溶，海膽捕撈出水后，放置半日至一日，就可能發軟變質，失去原有的營養價值。因此，以海膽黃為原料制備活性肽及產品易受到捕撈季節、地理條件等影響，且生產成本高。
技術實現要素：
為了克服現有以海膽黃為原料制備活性肽及產品易受到捕撈季節等影響及生產成本高的不足，本發明提供一種工藝合理、易于操作、原料來源不受限制、生產成本低的類海膽肽口服液的制備方法，該方法利用生物工程技術獲得大量2～6個氨基酸組成的小肽為主要成分的類海膽肽，可被人體不經消化而直接吸收，制備的類海膽肽口服液營養價值、口感淳厚、酸甜適中。
本發明解決其技術問題所采用的技術方案為：一種類海膽肽口服液及其制備方法，其特征在于：經過下列工藝步驟：
（1）、海膽黃細胞RNA的提取
（1.1）、勻漿處理
稱取100～200mg海膽黃組織在液氮中磨碎，加入1～2ml TRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理；
（1.2）、靜置
將步驟（1.1）中得到的勻漿后的混合物在室溫條件下靜置3～5min，使核酸蛋白復合物完全分離；
（1.3）、離心去雜質
將步驟（1.2）中得到的靜置后的混合物于2～8℃條件下，10000g離心8～10min，收取上清液；
（1.4）、抽提
將步驟（1.3）中得到的上清液中加入其體積10%～20%的氯仿，劇烈振蕩15～20s，室溫靜置2～3min；
（1.5）、離心
將步驟（1.4）中得到的室溫靜置后的混合物于2～8℃條件下，10000g離心10～15min；樣品分為三層：有機相、水相和中間層；
（1.6）、沉淀
將步驟（1.5）中的水相層轉移到新試管中，按體積比1:1～2的比例加入異丙醇，室溫靜置8～10min，于2～8℃條件下，10000g離心8～10min，管側和管底出現膠狀沉淀，移去上清液，即得RNA沉淀；
（1.7）、洗滌
向步驟（1.6）中得到的RNA沉淀中加入1～1.5ml、濃度為75%的乙醇溶液進行洗滌，再于2～8℃條件下，6000～7500g離心3～5min，棄上清液，得洗滌后的RNA沉淀；
（1.8）、干燥
將步驟（1.7）中得到的洗滌后的RNA沉淀室溫放置干燥5～10min，然后加入25～200μl無RNase的水，用槍頭吸打混勻，于55～60℃條件下靜置8～10min，使RNA溶解，-70℃保存，備用；
（2）、反轉錄
將步驟（1.8）中得到的保存的RNA采用RT-PCR的方法，利用反轉錄酶SuperScriptTMII和隨機引物進行反轉錄，獲得海膽黃細胞的cDNA；
（3）、構建表達載體
將步驟（2）中得到的海膽黃細胞的cDNA以反轉錄產物為模板，利用大量隨機引物：引物L-隨機和R-隨機 PCR擴增25個循環后回收，酶切后，回收產物與pET32(a)載體連接，轉化大腸桿菌DH5α，得到含有表達載體pET32(a)-隨機的大腸桿菌，挑取菌落，接種入LB液體培養基，待菌液濃度為OD值接近1.0時，向其中加入菌液體積10%～15%的甘油，-70℃保存，得到轉化入表達載體的菌株；
（4）、蛋白表達
挑取步驟（3）中保存的菌株，接種體積為10ml LB液體培養基，37℃振蕩培養8～12h；將10ml菌液加入到500ml LB液體培養基中，37℃振蕩培養8～12h；將500ml菌液接種至50～80L發酵罐中，跟蹤菌體生長指標，待OD600≈0.4～0.6，向其中加入IPTG至終濃度為0.3～0.4mM，繼續振蕩培養6h；開罐取菌液，12000g離心30～60s，用發酵液體積10%～20%的、濃度為1%的SDS溶液進行重懸，混勻，冰上超聲破碎；12000g離心30～60s，取上清液，即為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物；
（5）、酶切
將步驟（4）中的海膽黃RNA隨機原核表達粗產物采用復合蛋白酶進行充分酶切，得到類海膽酶切溶液；其中，所述的復合蛋白酶為中性蛋白酶、木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶、胰蛋白酶中的兩種或多種；復合蛋白酶使用量為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物質量的1%～2.5%；
（6）、超濾濃縮
將步驟（5）中得到的類海膽酶切溶液利用2000Kd的超濾管進行超濾，收集濾過液，即得2000Kd以下的2～6個氨基酸大小的類海膽肽溶液；
（7）、調配
稱取步驟（6）中得到的類海膽肽溶液加入其質量6%～6.5%的枸杞提取液、1%～1.5%的薄荷提取液、0.00015～0.00018%的乳酸鏈球菌素混合均勻，得調配液；
（8）、滅菌
將步驟（7）中得到的調配液經精濾膜精濾后，進行高溫瞬時滅菌；
（9）、灌裝
將步驟（8）中得到的滅菌后的精濾液用灌裝機按預設重量進行分瓶真空灌裝，封口，獲得類海膽肽口服液。
所述的枸杞提取液其是稱取枸杞采用去離子水沖洗后，按照料液比1:30～40添加去離子水，浸泡2～3h，蒸煮20～30min，過濾，收集濾液后進行抽濾，澄清透過液即得枸杞提取液。
所述的薄荷提取液其稱取薄荷采用去離子水沖洗后，按照料液比1:30～40添加去離子水，浸泡2～3h，打漿，蒸煮20～30min，過濾，收集濾液后進行抽濾，澄清透過液即得薄荷提取液。
所述的勻漿后的混合物靜置時的室溫控制為15～30℃。
所述的高溫瞬時滅菌的滅菌溫度為120～140℃，滅菌時間為4～6s。
所述的真空灌裝的真空度為0.04～0.05Mpa，灌裝溫度控制在60～75℃。
本發明先是選取海膽黃組織通過氯仿抽提方法，獲得海膽黃細胞RNA；再采用RT-PCR的方法，得到海膽黃細胞的cDNA，然后利用隨機引物進行PCR，得到各種隨機的基因片段，然后將得到的基因片段克隆入原核表達載體，進行誘導表達，得到隨機基因編碼的隨機蛋白，這些蛋白有一個共同的特點，都是來源于海膽黃細胞的RNA，即均為海膽黃細胞中所含有蛋白或蛋白片段，氨基酸組成與海膽黃細胞的氨基酸組成基本類似，克服了生產原料受限的問題，所得到的蛋白用于后期的口服液加工使用，使得到的口服液產品具有海膽黃的氨基酸組成，不影響營養價值和功效，以達到提供與海膽黃多肽類似的抗氧化作用。本發明采用的是原核表達的方法，因原核表達技術成熟，價格低廉，易于操作，降低了生產成本。本發明將枸杞提取液和薄荷提取液與類海膽肽溶液進行調配，不添加任何化學物質，使類海膽肽口服液口感淳厚，酸甜適中，鮮味十足。枸杞提取液和薄荷提取液中含有豐富的枸杞多糖、有機酸、苷類和黃酮類物質，其抗氧化活性大大提高了海膽肽口服液的營養價值和保健功能。本發明的類海膽肽口服液的制備方法，其工藝合理，操作可行，易實現規模化生產。
具體實施方式
下面結合實施例對本發明作進一步說明。
實施例1
一種類海膽肽口服液及其制備方法，經過下列工藝步驟：
（1）、海膽黃細胞RNA的提取
（1.1）、勻漿處理
稱取150mg海膽黃組織在液氮中磨碎，加入1.5ml TRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理；
（1.2）、靜置
將步驟（1.1）中得到的勻漿后的混合物在室溫控制為20℃條件下靜置4min，使核酸蛋白復合物完全分離；
（1.3）、離心去雜質
將步驟（1.2）中得到的靜置后的混合物于5℃條件下，10000g離心9min，收取上清液；
（1.4）、抽提
將步驟（1.3）中得到的上清液中加入其體積16%的氯仿，劇烈振蕩18s，室溫靜置3min；
（1.5）、離心
將步驟（1.4）中得到的室溫靜置后的混合物于5℃條件下，10000g離心12min；樣品分為三層：有機相、水相和中間層；
（1.6）、沉淀
將步驟（1.5）中的水相層轉移到新試管中，按體積比1:1.6的比例加入異丙醇，室溫靜置9min，于5℃條件下，10000g離心9min，管側和管底出現膠狀沉淀，移去上清液，即得RNA沉淀；
（1.7）、洗滌
向步驟（1.6）中得到的RNA沉淀中加入1.2ml、濃度為75%的乙醇溶液進行洗滌，再于5℃條件下，7000g離心4min，棄上清液，得洗滌后的RNA沉淀；
（1.8）、干燥
將步驟（1.7）中得到的洗滌后的RNA沉淀室溫放置干燥8min，然后加入100μl無RNase的水，用槍頭吸打混勻，于58℃條件下靜置9min，使RNA溶解，-70℃保存，備用；
（2）、反轉錄
將步驟（1.8）中得到的保存的RNA采用RT-PCR的方法，利用反轉錄酶SuperScriptTMII和隨機引物進行反轉錄，獲得海膽黃細胞的cDNA；
（3）、構建表達載體
將步驟（2）中得到的海膽黃細胞的cDNA以反轉錄產物為模板，利用大量隨機引物：引物L-隨機和R-隨機 PCR擴增25個循環后回收，酶切后，回收產物與pET32(a)載體連接，轉化大腸桿菌DH5α，得到含有表達載體pET32(a)-隨機的大腸桿菌，挑取菌落，接種入LB液體培養基，待菌液濃度為OD值接近1.0時，向其中加入菌液體積12%的甘油，-70℃保存，得到轉化入表達載體的菌株；
（4）、蛋白表達
挑取步驟（3）中保存的菌株，接種體積為10ml LB液體培養基，37℃振蕩培養10h；將10ml菌液加入到500ml LB液體培養基中，37℃振蕩培養10h；將500ml菌液接種至65L發酵罐中，跟蹤菌體生長指標，待OD600≈0.5，向其中加入IPTG至終濃度為0.35mM，繼續振蕩培養6h；開罐取菌液，12000g離心45s，用發酵液體積15%的、濃度為1%的SDS溶液進行重懸，混勻，冰上超聲破碎；12000g離心45s，取上清液，即為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物；
（5）、酶切
將步驟（4）中的海膽黃RNA隨機原核表達粗產物采用復合蛋白酶進行充分酶切，得到類海膽酶切溶液；其中，所述的復合蛋白酶為中性蛋白酶和胰蛋白酶，中性蛋白酶使用量為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物質量的1%，胰蛋白酶使用量為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物質量的1.2%；
（6）、超濾濃縮
將步驟（5）中得到的類海膽酶切溶液利用2000Kd的超濾管進行超濾，收集濾過液，即得2000Kd以下的2～6個氨基酸大小的類海膽肽溶液；
（7）、調配
稱取步驟（6）中得到的類海膽肽溶液加入其質量6.,2 %的枸杞提取液、1.2%的薄荷提取液、0.00016%的乳酸鏈球菌素混合均勻，得調配液；其中，枸杞提取液其是稱取枸杞采用去離子水沖洗后，按照料液比1:35添加去離子水，浸泡2.5h，蒸煮25min，過濾，收集濾液后進行抽濾，澄清透過液即得枸杞提取液；薄荷提取液其稱取薄荷采用去離子水沖洗后，按照料液比1:32添加去離子水，浸泡3h，打漿，蒸煮25min，過濾，收集濾液后進行抽濾，澄清透過液即為薄荷提取液；
（8）、滅菌
將步驟（7）中得到的調配液經孔徑為0.5微米的精濾膜精濾后，進行高溫瞬時滅菌，其滅菌溫度為130℃，滅菌時間為5s；
（9）、灌裝
將步驟（8）中得到的滅菌后的精濾液用灌裝機按每瓶100g進行分瓶真空灌裝，其真空度為0.045Mpa，灌裝溫度控制在70℃，封口，獲得類海膽肽口服液。
本實施例得到隨機基因編碼的隨機蛋白的氨基酸組成與海膽黃細胞的氨基酸組成基本類似，克服了生產原料受限的問題，所得到的類海膽蛋白營養價值高和抗氧化功效好。其采用的原核表達方法技術成熟，價格低廉，易于操作，降低了生產成本。其將類海膽肽與枸杞提取液和薄荷提取液進行調配，得到的口服液口感淳厚，酸甜適中。枸杞提取液和薄荷提取液中含有豐富的枸杞多糖、有機酸、苷類和黃酮類物質，其抗氧化活性大大提高了海膽肽口服液的營養價值和保健功能。其制備方法工藝合理，操作可行，易實現規模化生產。
實施例2
一種類海膽肽口服液及其制備方法，經過下列工藝步驟：
（1）、海膽黃細胞RNA的提取
（1.1）、勻漿處理
稱取200mg海膽黃組織在液氮中磨碎，加入2ml TRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理；
（1.2）、靜置
將步驟（1.1）中得到的勻漿后的混合物在室溫控制為30℃條件下靜置3min，使核酸蛋白復合物完全分離；
（1.3）、離心去雜質
將步驟（1.2）中得到的靜置后的混合物于8℃條件下，10000g離心8min，收取上清液；
（1.4）、抽提
將步驟（1.3）中得到的上清液中加入其體積20%的氯仿，劇烈振蕩20s，室溫靜置3min；
（1.5）、離心
將步驟（1.4）中得到的室溫靜置后的混合物于8℃條件下，10000g離心15min；樣品分為三層：有機相、水相和中間層；
（1.6）、沉淀
將步驟（1.5）中的水相層轉移到新試管中，按體積比1: 2的比例加入異丙醇，室溫靜置10min，于8℃條件下，10000g離心10min，管側和管底出現膠狀沉淀，移去上清液，即得RNA沉淀；
（1.7）、洗滌
向步驟（1.6）中得到的RNA沉淀中加入1.5ml、濃度為75%的乙醇溶液進行洗滌，再于8℃條件下， 7500g離心3min，棄上清液，得洗滌后的RNA沉淀；
（1.8）、干燥
將步驟（1.7）中得到的洗滌后的RNA沉淀室溫放置干燥10min，然后加入200μl無RNase的水，用槍頭吸打混勻，于60℃條件下靜置8min，使RNA溶解，-70℃保存，備用；
（2）、反轉錄
將步驟（1.8）中得到的保存的RNA采用RT-PCR的方法，利用反轉錄酶SuperScriptTMII和隨機引物進行反轉錄，獲得海膽黃細胞的cDNA；
（3）、構建表達載體
將步驟（2）中得到的海膽黃細胞的cDNA以反轉錄產物為模板，利用大量隨機引物：引物L-隨機和R-隨機 PCR擴增25個循環后回收，酶切后，回收產物與pET32(a)載體連接，轉化大腸桿菌DH5α，得到含有表達載體pET32(a)-隨機的大腸桿菌，挑取菌落，接種入LB液體培養基，待菌液濃度為OD值接近1.0時，向其中加入菌液體積15%的甘油，-70℃保存，得到轉化入表達載體的菌株；
（4）、蛋白表達
挑取步驟（3）中保存的菌株，接種體積為10ml LB液體培養基，37℃振蕩培養12h；將10ml菌液加入到500ml LB液體培養基中，37℃振蕩培養12h；將500ml菌液接種至80L發酵罐中，跟蹤菌體生長指標，待OD600≈0.6，向其中加入IPTG至終濃度為0.4mM，繼續振蕩培養6h；開罐取菌液，12000g離心60s，用發酵液體積120%的、濃度為1%的SDS溶液進行重懸，混勻，冰上超聲破碎；12000g離心60s，取上清液，即為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物；
（5）、酶切
將步驟（4）中的海膽黃RNA隨機原核表達粗產物采用復合蛋白酶進行充分酶切，得到類海膽酶切溶液；其中，復合蛋白酶為木瓜蛋白酶、菠蘿蛋白酶和胰蛋白酶；木瓜蛋白酶使用量為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物質量的0.5%，菠蘿蛋白酶使用量為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物質量的1%，胰蛋白酶使用量為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物質量的1%；
（6）、超濾濃縮
將步驟（5）中得到的類海膽酶切溶液利用2000Kd的超濾管進行超濾，收集濾過液，即得2000Kd以下的2～6個氨基酸大小的類海膽肽溶液；
（7）、調配
稱取步驟（6）中得到的類海膽肽溶液加入其質量6.5%的枸杞提取液、1%的薄荷提取液、0.00018%的乳酸鏈球菌素混合均勻，得調配液；其中，枸杞提取液其是稱取枸杞采用去離子水沖洗后，按照料液比1:30添加去離子水，浸泡2h，蒸煮20min，過濾，收集濾液后進行抽濾，澄清透過液即得枸杞提取液；薄荷提取液其稱取薄荷采用去離子水沖洗后，按照料液比1:30添加去離子水，浸泡2h，打漿，蒸煮20min，過濾，收集濾液后進行抽濾，澄清透過液即為薄荷提取液；
（8）、滅菌
將步驟（7）中得到的調配液經孔徑為0.5微米的精濾膜精濾后，進行高溫瞬時滅菌，其滅菌溫度為120℃，滅菌時間為6s；
（9）、灌裝
將步驟（8）中得到的滅菌后的精濾液用灌裝機按每瓶80g進行分瓶真空灌裝，其真空度為0.05Mpa，灌裝溫度控制在60℃，封口，獲得類海膽肽口服液。
本實施例得到隨機基因編碼的隨機蛋白的氨基酸組成與海膽黃細胞的氨基酸組成基本類似，克服了生產原料受限的問題。其采用的原核表達方法技術成熟，易于操作，生產成本低。本實施例將類海膽肽與枸杞提取液和薄荷提取液進行調配，得到類海膽肽口服液口感淳厚，酸甜適中。其制備方法工藝合理，操作可行，易實現規模化生產。
實施例3
一種類海膽肽口服液及其制備方法，經過下列工藝步驟：
（1）、海膽黃細胞RNA的提取
（1.1）、勻漿處理
稱取100mg海膽黃組織在液氮中磨碎，加入1ml TRIzol，用勻漿儀進行勻漿處理；
（1.2）、靜置
將步驟（1.1）中得到的勻漿后的混合物在室溫控制為15℃條件下靜置5min，使核酸蛋白復合物完全分離；
（1.3）、離心去雜質
將步驟（1.2）中得到的靜置后的混合物于2℃條件下，10000g離心10min，收取上清液；
（1.4）、抽提
將步驟（1.3）中得到的上清液中加入其體積10%的氯仿，劇烈振蕩15s，室溫靜置2min；
（1.5）、離心
將步驟（1.4）中得到的室溫靜置后的混合物于2℃條件下，10000g離心10min；樣品分為三層：有機相、水相和中間層；
（1.6）、沉淀
將步驟（1.5）中的水相層轉移到新試管中，按體積比1:1的比例加入異丙醇，室溫靜置8min，于2℃條件下，10000g離心8min，管側和管底出現膠狀沉淀，移去上清液，即得RNA沉淀；
（1.7）、洗滌
向步驟（1.6）中得到的RNA沉淀中加入1ml、濃度為75%的乙醇溶液進行洗滌，再于2℃條件下，6000g離心5min，棄上清液，得洗滌后的RNA沉淀；
（1.8）、干燥
將步驟（1.7）中得到的洗滌后的RNA沉淀室溫放置干燥5min，然后加入25μl無RNase的水，用槍頭吸打混勻，于55℃條件下靜置10min，使RNA溶解，-70℃保存，備用；
（2）、反轉錄
將步驟（1.8）中得到的保存的RNA采用RT-PCR的方法，利用反轉錄酶SuperScriptTMII和隨機引物進行反轉錄，獲得海膽黃細胞的cDNA；
（3）、構建表達載體
將步驟（2）中得到的海膽黃細胞的cDNA以反轉錄產物為模板，利用大量隨機引物：引物L-隨機和R-隨機 PCR擴增25個循環后回收，酶切后，回收產物與pET32(a)載體連接，轉化大腸桿菌DH5α，得到含有表達載體pET32(a)-隨機的大腸桿菌，挑取菌落，接種入LB液體培養基，待菌液濃度為OD值接近1.0時，向其中加入菌液體積10%的甘油，-70℃保存，得到轉化入表達載體的菌株；
（4）、蛋白表達
挑取步驟（3）中保存的菌株，接種體積為10ml LB液體培養基，37℃振蕩培養8h；將10ml菌液加入到500ml LB液體培養基中，37℃振蕩培養8h；將500ml菌液接種至50L發酵罐中，跟蹤菌體生長指標，待OD600≈0.4，向其中加入IPTG至終濃度為0.3mM，繼續振蕩培養6h；開罐取菌液，12000g離心30s，用發酵液體積10%的、濃度為1%的SDS溶液進行重懸，混勻，冰上超聲破碎；12000g離心30s，取上清液，即為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物；
（5）、酶切
將步驟（4）中的海膽黃RNA隨機原核表達粗產物采用復合蛋白酶進行充分酶切，得到類海膽酶切溶液；其中，所述的復合蛋白酶為木瓜蛋白酶與菠蘿蛋白酶；木瓜蛋白酶使用量為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物質量的0.6%，菠蘿蛋白酶使用量為海膽黃RNA隨機原核表達粗產物質量的0.4%；
（6）、超濾濃縮
將步驟（5）中得到的類海膽酶切溶液利用2000Kd的超濾管進行超濾，收集濾過液，即得2000Kd以下的2～6個氨基酸大小的類海膽肽溶液；
（7）、調配
稱取步驟（6）中得到的類海膽肽溶液加入其質量6%的枸杞提取液、1.5%的薄荷提取液、0.00015%的乳酸鏈球菌素混合均勻，得調配液；其中，枸杞提取液其是稱取枸杞采用去離子水沖洗后，按照料液比1: 40添加去離子水，浸泡3h，蒸煮30min，過濾，收集濾液后進行抽濾，澄清透過液即得枸杞提取液；薄荷提取液其稱取薄荷采用去離子水沖洗后，按照料液比1: 40添加去離子水，浸泡3h，打漿，蒸煮30min，過濾，收集濾液后進行抽濾，澄清透過液即為薄荷提取液；
（8）、滅菌
將步驟（7）中得到的調配液經孔徑為0.5微米的精濾膜精濾后，進行高溫瞬時滅菌，其滅菌溫度為140℃，滅菌時間為4s；
（9）、灌裝
將步驟（8）中得到的滅菌后的精濾液用灌裝機按每瓶120g進行分瓶真空灌裝，其真空度為0.04Mpa，灌裝溫度控制在75℃，封口，獲得類海膽肽口服液。
本實施例得到隨機基因編碼的隨機蛋白的氨基酸組成與海膽黃細胞的氨基酸組成基本類似，營養價值高和抗氧化功效好。將類海膽肽與枸杞提取液和薄荷提取液進行調配，得到類海膽肽口服液含有豐富的枸杞多糖、有機酸、苷類和黃酮類物質，其抗氧化活性高，口感淳厚，酸甜適中。該制備方法工藝合理，操作可行。