苦杏仁苷的制備方法與流程

本發(fā)明涉及一種中藥有效成分的提取分離純化工藝領(lǐng)域，具體的，本發(fā)明涉及一種苦杏仁苷的制備方法。

背景技術(shù)：

苦杏仁苷是苦杏仁的一種主要成分，具有鎮(zhèn)咳平喘，抗腫瘤降血壓以及抗凝血等作用，已經(jīng)作為祛痰止咳，輔助性抗癌藥物廣泛用于醫(yī)藥領(lǐng)域，此外它還對(duì)氣滯，腸燥便秘，水腫脹滿等病癥具有良好的臨床治療效果。目前，用于分離苦杏仁苷的方法大多為大孔樹脂柱層析、正相柱層析及反相柱層析聯(lián)用及結(jié)晶法。由于大孔樹脂柱層析、正相柱層析及反相柱層析聯(lián)用方法等方法制備樣品得率低、制備量小、污染大、耗時(shí)長(zhǎng)、成本高，無法進(jìn)行規(guī)?；闹苽?，且在制備過程中因使用到大量的吸附填料，使樣品原有的生物活性大打折扣，使制備得到的物質(zhì)活性降低，生產(chǎn)效益低下，不適合推廣使用。

技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：

基于此，本發(fā)明在于克服現(xiàn)有技術(shù)的缺陷，提供一種苦杏仁苷的制備方法，利用所述方法制備出的苦杏仁苷純度高，單次制備量大，并對(duì)樣品活性無影響，也無外加污染，制備得到的樣品可用于藥品，化妝品，保健品等。

其技術(shù)方案如下：

一種制備苦杏仁苷的方法，包括如下步驟：

s1、提取物制備：取苦杏仁藥材為原料，粉碎過篩、滅酶、脫脂、過濾取濾渣、用酒精溶解、超聲提取、過濾，濾液濃縮得到苦杏仁苷的提取物；

s2、正相柱層析分離：以體積比為(70～90):(10～30)的乙酸乙酯-甲醇為洗脫溶劑、硅膠為填料進(jìn)行正相柱層析分離所述苦杏仁苷的提取物，所述苦杏仁苷的提取物與洗脫溶劑的質(zhì)量比為(1～5):(8～20)，收集含有苦杏仁苷的洗脫溶劑，減壓蒸餾得到苦杏仁苷粗品；

s3、高速逆流色譜純化：配制體積比為(0.5～1.5):(1～5):(1～4)的乙酸乙酯-正丁醇-水的溶劑體系，所述溶劑體系包括作為固定相的上層和作為流動(dòng)相的下層，取適量所述流動(dòng)相溶解所述苦杏仁苷粗品，將所述溶劑體系泵入高速逆流色譜的色譜柱中，然后將溶解后的苦杏仁苷粗品泵入高速逆流色譜洗脫分離，收集含有苦杏仁苷的流份，干燥得到苦杏仁苷，其中，所述高速逆流色譜的參數(shù)設(shè)置如下：轉(zhuǎn)速為200～500rpm，分離溫度為17～23℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為240～260nm，流動(dòng)相的流速為8～15ml/min。

本發(fā)明采用正相柱層析和高速逆流色譜聯(lián)用的方法分離苦杏仁苷，先通過超聲提取的方法從苦杏仁中獲得苦杏仁苷提取物，將苦杏仁苷提取物進(jìn)行正相柱層析，得到苦杏仁苷粗品，再使粗品通過高速逆流色譜分離純化。由于高速逆流色譜不需要固體支撐體，苦杏仁苷的分離僅依據(jù)其在固定相、流動(dòng)相中分配系數(shù)的不同就可實(shí)現(xiàn)，無需大量使用吸附填料，因而避免了因不可逆吸附而引起的樣品損失、失活、變性等，不僅使苦杏仁苷能夠充分回收，回收的苦杏仁苷更能保持其本來的特性，且由于被分離的苦杏仁苷粗品與液態(tài)固定相之間能夠充分接觸，使得樣品的制備量大大提高。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s3中所述乙酸乙酯-正丁醇-水的溶劑體系中乙酸乙酯-正丁醇-水的體積比為1:2:3。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述固定相保留值為70～85％。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s3中所述流動(dòng)相的流速為10～15ml。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s3中所述轉(zhuǎn)速為350～500rpm。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s3中所述檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟s1為：提取物制備：取苦杏仁藥材為原料，粉碎過篩、滅酶，以料液比為1:1～5的比例加入石油醚脫脂，過濾取濾渣，以料液比1:5～15的比例加入酒精溶解濾渣，水浴65～75℃超聲提取，過濾，濾液低壓濃縮得到主含苦杏仁苷的提取物。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟s1為：提取物制備：取苦杏仁藥材為原料，粉碎過60目篩、60～65℃滅酶處理，以料液比為1:1～5的比例加入石油醚，于水浴65～75℃回流40～60分鐘脫脂、過濾取濾渣，以料液比1:5～15的比例加入酒精溶解濾渣，于功率55～65w、水浴65～75℃超聲提取40～60分鐘，過濾，濾液另置，濾渣按上述操作反復(fù)提取3～5次，合并濾液，濾液低壓濃縮得到主含苦杏仁苷的提取物。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述步驟s2為：正相柱層析分離：以體積比為(70～90):(10～30)的乙酸乙酯-甲醇為洗脫溶劑、硅膠為填料進(jìn)行正相柱層析分離，分離前按質(zhì)量比(1～2):(1～3)的比例混合填料硅膠和苦杏仁苷的提取物，得到填料-提取物拌樣，正相柱層析分離過程中，苦杏仁苷的提取物與洗脫溶劑的質(zhì)量比為(1～5):(8～20)，根據(jù)正相薄層色譜判定洗脫液中是否含有苦杏仁苷，收集苦杏仁苷粗品。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s2所述洗脫溶劑中乙酸乙酯和甲醇的體積比為(80～90):(10～20)。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s2中所述苦杏仁苷的提取物與洗脫溶劑的質(zhì)量比為(1～3):(10～15)。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s3中所述溶劑體系泵入高速逆流色譜的色譜柱的過程為：溶劑體系的上層液于儀器靜態(tài)泵入高速逆流色譜柱中，溶劑體系的下層液于儀器動(dòng)態(tài)泵入色譜柱中，上相為固定相，下相為流動(dòng)相。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s3中所述溶解后的苦杏仁苷粗品在固定相、流動(dòng)相平衡后被泵入色譜柱中。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s3所述高速逆流色譜純化的過程中，通過高速逆流色譜的記錄儀得到的逆流色譜圖譜判定流份中是否含有苦杏仁苷。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，所述高速逆流色譜的色譜柱的體積為1000ml。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，單次通過單根高速逆流色譜柱的苦杏仁苷粗品為3～8g。

在其中一個(gè)實(shí)施例中，步驟s2減壓蒸餾制備目標(biāo)物的過程中同時(shí)回收洗脫溶劑。

本發(fā)明的有益效果在于：

本發(fā)明采用正相柱層析制備得苦杏仁苷粗品，再經(jīng)高速逆流色譜儀分離純化制備高純度的苦杏仁苷，該制備方法耗時(shí)短，苦杏仁苷純度高，單次制備量大，可進(jìn)行規(guī)?；闹苽洌页杀镜?；該采用高速逆流色譜分離的方法因未大量使用吸附填料，對(duì)樣品活性影響較小，保留了原有的生物活性；制備出的產(chǎn)品也無外加污染，可用于藥品，化妝品，保健品等。

附圖說明

圖1為制備苦杏仁苷的工藝流程圖。

圖2為實(shí)施例1中記錄儀記錄的高速逆流色譜分離苦杏仁苷的逆流色譜圖譜。

具體實(shí)施方式

為使本發(fā)明的目的、技術(shù)方案及優(yōu)點(diǎn)更加清楚明白，以下結(jié)合附圖及具體實(shí)施方式，對(duì)本發(fā)明進(jìn)行進(jìn)一步的詳細(xì)說明。應(yīng)當(dāng)理解的是，此處所描述的具體實(shí)施方式僅用以解釋本發(fā)明，并不限定本發(fā)明的保護(hù)范圍。

如圖1為從杏仁藥材中制備苦杏仁苷的工藝流程圖，在本發(fā)明的實(shí)施例中，是將苦杏仁苷粗品加入到高速逆流色譜的單根色譜中。高速逆流色譜中色譜柱的數(shù)量為6個(gè)，可理解，在其他實(shí)施例，對(duì)于苦杏仁苷的制備和純化，還可按照類似的鑒定方法在多根色譜柱中同時(shí)進(jìn)行，在此不再贅述。

以下各實(shí)施例所用原料均為普通市售產(chǎn)品。

實(shí)施例1

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、取1.1千克苦杏仁藥材為原料，粉碎過60目篩、于烘箱60℃滅酶60分鐘，以料液比為1:3的比例加入石油醚，于水浴70℃回流50分鐘脫脂、抽濾取濾渣，以料液比1:10的比例加入酒精溶解濾渣，于功率60w、水浴70℃超聲提取50分鐘，過濾，濾液另置，濾渣按上述操作反復(fù)提取3次，合并濾液，濾液低壓濃縮得到苦杏仁苷的提取物204.9g。

s2、正相柱層析分離：取27g提取物，以體積比為85：15的乙酸乙酯-甲醇為洗脫溶劑、硅膠為填料進(jìn)行正相柱層析分離所述苦杏仁苷的提取物，分離前按質(zhì)量比1:1.5的比例混合填料硅膠和苦杏仁苷的提取物得到填料-提取物拌樣，再用270ml洗脫溶劑溶解填料-提取物拌樣，正相柱層析分離過程中，所述苦杏仁苷的提取物與填料的質(zhì)量比為1:10，收集苦杏仁苷粗品。

s3、高速逆流色譜純化：配制體積比為1:2:3的乙酸乙酯-正丁醇-水的溶劑體系，所述溶劑體系包括作為固定相的上層和作為流動(dòng)相的下層，取500ml所述流動(dòng)相溶解所述苦杏仁苷粗品，將所述溶劑體系泵入高速逆流色譜的色譜柱中，然后將溶解后的苦杏仁苷粗品泵入高速逆流色譜洗脫分離，并根據(jù)記錄儀得到的逆流色譜圖譜判定流份中是否含有苦杏仁苷(出現(xiàn)圖2所示圖譜說明流份中含有苦杏仁苷)，收集含有苦杏仁苷的流份，干燥得到苦杏仁苷，其中，所述高速逆流色譜的參數(shù)設(shè)置如下：轉(zhuǎn)速為350rpm，分離溫度為17～23℃，檢測(cè)波長(zhǎng)為254nm，流動(dòng)相的流速為8ml/min。

制備過程中，步驟s2收集的苦杏仁苷粗品的質(zhì)量，步驟s3制備得到的苦杏仁苷的質(zhì)量及純度見表1，在高速逆流色譜純化的過程中，記錄儀記錄的高速逆流色譜分離苦杏仁苷的逆流色譜圖譜見圖2。

實(shí)施例2

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相同。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于，溶劑體系乙酸乙酯-正丁醇-水的體積比為0.5:5:4。

實(shí)施例3

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相同。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于，溶劑體系乙酸乙酯-正丁醇-水的體積比為1.5:1:1。

實(shí)施例4

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相同。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于，轉(zhuǎn)速為500rpm。

實(shí)施例5

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相同。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于，轉(zhuǎn)速為200rpm。

實(shí)施例6

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相同。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于，流速為10ml/min。

實(shí)施例7

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相同。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于，流速為15ml/min。

實(shí)施例8

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于乙酸乙酯與甲醇的體積比為7:3。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例9

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于乙酸乙酯與甲醇的體積比為9:1。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例10

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于乙酸乙酯與甲醇的體積比為8:2。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例11

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于所述苦杏仁苷的提取物與填料的質(zhì)量比為5:8。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例12

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于所述苦杏仁苷的提取物與填料的質(zhì)量比為1:20。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例13

按下列步驟制備苦杏仁苷:

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于所述苦杏仁苷的提取物與填料的質(zhì)量比為1:15。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相同。

實(shí)施例14

按下列步驟制備苦杏仁苷:

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于所述苦杏仁苷的提取物與填料的質(zhì)量比為3:10。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相同。

對(duì)比例1

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、正相柱層析分離：與實(shí)施例1相同。

s3、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1相似，區(qū)別在于，溶劑體系乙酸乙酯-正丁醇-水的體積比為2:1:3。

對(duì)比例2

按下列步驟制備苦杏仁苷：

s1、提取物制備：直接取按實(shí)施例1步驟1所述方法制備的提取物。

s2、高速逆流色譜純化：與實(shí)施例1步驟s3相似，區(qū)別在于，使用高速逆流色譜直接對(duì)苦杏仁苷的提取物進(jìn)行純化。

s3、正相柱層析分離：與實(shí)施例1步驟s2相似，區(qū)別在于，此步驟是對(duì)經(jīng)高速逆流色譜分離的苦杏仁苷進(jìn)行層析分離。

以上各實(shí)施例制備得到的苦杏仁苷粗品的質(zhì)量、苦杏仁苷質(zhì)量、固定相保留值及苦杏仁苷的純度見表1。

表1

從實(shí)施例1至14可知，利用本發(fā)明所述方法制備的苦杏仁苷的純度高達(dá)99.2％，且單根色譜柱進(jìn)行分離純化時(shí)的產(chǎn)量可以超過1.8g，產(chǎn)量高。此外，由于該制備過程僅通過正相層析柱和高速逆流色譜，比傳統(tǒng)工藝更加簡(jiǎn)便和省時(shí)。通過實(shí)施例1和對(duì)比例1的對(duì)比可知，步驟s3中乙酸乙酯-正丁醇-水的用量比例對(duì)苦杏仁苷的純度影響較大，超過一定范圍，其純度會(huì)顯著下降。通過實(shí)施例1和對(duì)比例2的對(duì)比可知，步驟s2和步驟s3的先后順序?qū)嘈尤受盏募兌群褪章视绊懸草^大，先進(jìn)行正相柱層析分離再進(jìn)行高速逆流色譜純化可提高苦杏仁苷的純度和收率。

以上所述實(shí)施例的各技術(shù)特征可以進(jìn)行任意的組合，為使描述簡(jiǎn)潔，未對(duì)上述實(shí)施例中的各個(gè)技術(shù)特征所有可能的組合都進(jìn)行描述，然而，只要這些技術(shù)特征的組合不存在矛盾，都應(yīng)當(dāng)認(rèn)為是本說明書記載的范圍。

以上所述實(shí)施例僅表達(dá)了本發(fā)明的幾種實(shí)施方式，其描述較為具體和詳細(xì)，但并不能因此而理解為對(duì)發(fā)明專利范圍的限制。應(yīng)當(dāng)指出的是，對(duì)于本領(lǐng)域的普通技術(shù)人員來說，在不脫離本發(fā)明構(gòu)思的前提下，還可以做出若干變形和改進(jìn)，這些都屬于本發(fā)明的保護(hù)范圍。因此，本發(fā)明專利的保護(hù)范圍應(yīng)以所附權(quán)利要求為準(zhǔn)。