利用特異性揮發物篩選昆蟲相關嗅覺蛋白的方法與流程

本發明涉及生物技術領域，具體地說，涉及一種利用特異性揮發物篩選昆蟲相關嗅覺蛋白的方法。

背景技術：

昆蟲對氣味分子的識別和鑒定主要依賴于高度敏感的嗅覺系統，其包括一系列的過程，首先脂溶性小分子化合物的氣味物質借助氣味結合蛋白等小分子量觸角蛋白的攜帶，穿過氣－液相界面到達嗅覺受體，在觸角嗅覺受體內完成對氣味的識別，然后刺激神經元，將化學信號轉變為電信號，逐級上傳形成神經沖動，使昆蟲產生特異的生理和行為反應。其在對氣味識別過程中涉及到的嗅覺相關蛋白主要包括氣味結合蛋白(odorant binding proteins,OBPs)、氣味受體(odorant receptors,IRs)、氣味降解酶(odorant degrading enzymes,ODEs)、離子型受體(ionotropic receptors,IRs)以及感覺神經元膜蛋白(sensory neuron membrane proteins,SNMPs)。自從首個氣味結合蛋白于1981年在多音天蠶蛾中被發現以來，通過生物化學、遺傳學、分子生物學、生物物理學、結構生物學以及RNA干擾和電生理學等一系列的研究方法和手段，共計8個目50余種昆蟲嗅覺蛋白的功能在逐步被揭示，昆蟲嗅覺蛋白的研究越來越受到有關科學工作者的關注。

隨著多個昆蟲基因組測序工作的陸續完成，已經明確昆蟲嗅覺蛋白多達上百種，但是如何能夠快速、準確的明確這些蛋白的功能是目前急需解決的一個課題。目前對昆蟲嗅覺蛋白的功能研究基本是在單個蛋白的基礎上進行的，較為常用的方法是根據基因的同源性進行引物設計，克隆相關基因，隨后開展蛋白功能研究。但是，由于嗅覺蛋白種類較多，未經篩選的開展所有嗅覺蛋白的功能研究是非常龐大的任務。同時，由于昆蟲嗅覺蛋白與其所識別的化合物之間并非一一對應的關系，昆蟲識別某一種化合物可能是多個蛋白在共同作用，僅僅某一個蛋白的功能研究并不能完整、準確的解析昆蟲對某一種特異性揮發物的識別機理。因此，如果在開展嗅覺蛋白功能研究之前，能夠首先快速、準確和系統、完整的篩選出與識別特異性揮發物相關的嗅覺蛋白，不僅讓我們有針對性地開展嗅覺蛋白的功能研究，節約了時間，對于我們系統而完整的開展昆蟲對信息化合物的嗅覺識別機理也具有重要意義。

華北大黑鰓金龜屬鞘翅目金龜科，是世界性的農業害蟲，為我國東北、華北、西北地區以及東南沿海省等地區地下害蟲的優勢類群。金龜甲的幼蟲通稱“蠐螬”，其在土壤中發生為害，咬食植物的幼苗、根、莖、種子及塊根、塊莖等，對玉米、薯類、豆類、棉花、花生、甜菜及小麥等農作物和蔬菜、果樹、林木幼苗等造成危害，降低產量，影響品質，嚴重地塊可造成絕收，據調查統計，植物地下受害部分的86％是由蠐螬危害造成的。華北大黑鰓金龜成蟲具有聚集取食習性，尤其對蓖麻具有偏嗜性。研究表明，蓖麻對華北大黑鰓金龜成蟲誘集效果明顯。因此，利用寄主植物或其揮發物誘集成蟲為華北大黑鰓金龜成蟲防治提供了可能，而華北大黑鰓金龜對寄主植物的準確識別和定位主要依賴于高度敏感的嗅覺系統，其中篩選識別特異化合物識別的相關嗅覺是其最重要的方面。

技術實現要素：

本發明的目的是提供一種利用特異性揮發物篩選昆蟲相關嗅覺蛋白的方法。

為了實現本發明目的，本發明利用特異性揮發物篩選昆蟲相關嗅覺蛋白的方法，從公共數據庫或通過測序技術獲取在昆蟲觸角中表達的嗅覺基因信息，利用特異性揮發物處理昆蟲24-48h，然后檢測昆蟲觸角中不同嗅覺基因的表達量，與對照未經過特異性揮發物處理的昆蟲相比，將表達量增加的嗅覺基因，其所編碼的蛋白作為候選的昆蟲相關嗅覺蛋白。

所述特異性揮發物主要是指可引起昆蟲特異行為反應的揮發性化合物，包括寄主植物揮發物、昆蟲性信息素和聚集信息素等。

前述方法包括以下步驟：

1)提取昆蟲觸角RNA，轉錄組測序獲得大量在昆蟲觸角中表達的嗅覺基因；

2)將昆蟲成蟲置于設有透氣孔的養蟲箱中，饑餓處理24-48h(優選24h)；然后將可持續釋放特異性揮發物的容器放入養蟲箱中，24-48h(優選24h)后取昆蟲觸角，提取RNA；同時設立對照組，即饑餓處理后的昆蟲進行正常飼喂，24-48h(優選24h)后取昆蟲觸角，提取RNA；

3)檢測昆蟲觸角中不同嗅覺基因表達量的變化。

前述方法中，步驟2)所述昆蟲成蟲為羽化后2日齡成蟲。其中，可持續釋放特異性揮發物處理組昆蟲與對照組昆蟲同日齡。

前述方法中，步驟2)所述養蟲箱的材質包括有機玻璃，養蟲箱的頂端設有一個直徑為1cm小孔作為透氣孔，箱體為正方體或長方體。養蟲箱的容積不能小于0.3m³，否則影響成蟲的正常活動，也不能大于1m³，否則揮發物的處理難以達到預期效果。每次提取RNA均需50頭成蟲的觸角。

前述方法中，步驟2)將5個可持續釋放特異性揮發物的容器分別置于養蟲箱的四個角落和中間。其中，所述可持續釋放特異性揮發物的容器為盛有特異性揮發物溶液的玻璃瓶，所述玻璃瓶用封口膜封口，封口膜上設有若干透氣孔。

前述方法中，步驟3)是將觸角RNA反轉錄成cDNA，并利用熒光定量PCR檢測昆蟲觸角中不同嗅覺基因的表達量。

前述方法中，所述昆蟲相關嗅覺蛋白包括但不限于氣味結合蛋白。所述昆蟲包括但不限于華北大黑鰓金龜。

前述方法中，所述特異性揮發物包括芳樟醇，反-2-己烯醇等。

用于熒光定量PCR的引物序列見表1。

表1引物序列(5′-3′)

熒光定量PCR的反應體系為：

每個反應體系對應于表1中一對引物組合。

反應程序為：95℃60s；95℃5s，60℃15s，40個循環。

本發明利用特異性揮發物處理昆蟲，建立一種有效、快速篩選昆蟲相關嗅覺蛋白的方法。該方法高效、簡單，可操作性強，能夠在大量的嗅覺基因中快速準確且系統、完整篩選獲得靶標基因，為研究昆蟲對特異性揮發物的嗅覺識別機理提供技術支持。

附圖說明

圖1為本發明實施例1中利用熒光定量PCR檢測芳樟醇處理華北大黑鰓金龜雄蟲觸角后不同OBPs基因的表達結果；其中，CK代表空白對照，芳樟醇為華北大黑鰓金龜性信息素成分，OBP1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、16、21、22、24、25、26、27、28為華北大黑鰓金龜雄蟲觸角中表達的氣味結合蛋白。

圖2為本發明實施例2中利用熒光定量PCR檢測反-2-己烯醇處理華北大黑鰓金龜雌蟲觸角后不同OBPs基因的表達結果；其中，CK代表空白對照，反-2-己烯醇為華北大黑鰓金龜寄主植物揮發物成分，OBP1、2、3、4、5、6、7、8、9、10、11、13、14、15、16、17、18、23、27為華北大黑鰓金龜雌蟲觸角中表達的氣味結合蛋白。

具體實施方式

以下實施例用于說明本發明，但不用來限制本發明的范圍。若未特別指明，實施例均按照常規實驗條件，如Sambrook等分子克隆實驗手冊(Sambrook J&Russell DW,Molecular Cloning:a Laboratory Manual,2001)，或按照制造廠商說明書建議的條件。

實施例1華北大黑鰓金龜觸角中識別性信息素芳樟醇氣味結合蛋白的篩選

1、提取華北大黑鰓金龜觸角RNA，轉錄組測序獲得大量在昆蟲觸角中表達的嗅覺基因，含OBP、CSP、OR、IR和SNMP。結果如下：

>HoblOBP1

MRSNIKMFKNSALFILGIILPSVLCMSEEMEALAKQLHDDCVAQTGVDEAHISTVKDQKGFPDDEKFKCYLKCLMTEMAIVGDDGVVDVEAAVGVLPDEYKDKAEPIMRKCGVIPGANPCDNVYQTHKCYYDTDAKSYMIV

>HoblOBP2

MKYFVVFAALCAYVLADTLQEHSQKVMEEIINVGAECAEKLGATPEDIDKLMKEQIPDSRAGLCVVSCANKKFGLQNADGTVNRGSTLVNIEKVKDIDNDMYKKMSSVWSTCSENTPNDSDECNTGVHLVKCMKEEGAKLGLNKETMGF

>HoblOBP3

MMKVPLVLVLLAGLCLRISCTITDAQMKAARKLIRNTCRTKTKISDEQIESMHKGIWPDDDEVMKCYTHCCLATMKLQSKDGGFDKELAEKQYPKFPESIKESLIESLEKCADSGEGLTKKCDLSYAFFKCVYFYNPEGYIFP

>HoblOBP4

MTMFLYFLIVNIFLVETTQGAMTNAQIEATQRMVRRTCKSKMKITSDDELDGMLNGKWDNLSPATLCYLHCCVKMIKMVTGDGHVDYDSSLKQINNLPEPKRHPLIDSLNNCKDAGKSLTDKCEIAHEICKCFYFSNPGAYIIP

>HoblOBP5

MKFFVLLSFIAFANCMDQDFLTKATARMSQYVEECAKDAGATKDDLAELMEIRIPSRKEGKCLLACYNKKYGIQDKDGKLDKEASIEAMKDLKLADTELYDKAVKLFDTCIDQVPNQDCECNTAAIFMYCFNINGGLMGLQPGMVPM

>HoblOBP6

MLPVVILYFCLIGADSATQLHELFNTNAMKMGFQCLEEVGATEDTLQKIANREIPTSREGMCLITCIHQKFGMQNSDGTTNRAGTLLFLEALKDDPFYSQTKDHFMECLDTVSNDDEKCVIGAKFMECLSIGGMKKGIL

>HoblOBP7

MYYIVFLVFLTVDIALTQLIMPEYDKEQSQCVKELNLDADKIQKLSQAEGEITKDEKCVLRCVLQKIGVIDAQGVPIQDEIDKQFSKFKNIDMSKCIPPSSITDPCEQTYKLTTCFLSLLEAAA

>HoblOBP8

MMKLQLVLVLLLGLCLQVSSAINEAQMKAARKLIRNTCRTKTKISDEQIEDMHKGIWNDDDDVTKCYTHCCMGIMKMQNKHGGFDRELAAKQYPQIPESMRESLVSSLEGCADSGEGLTKKCDISYAFFKCVYFSNPEEYILP

>HoblOBP9

MKISLFCFALCVAIVNASIEKYIDQLTTEIATAKTECAKQVGASVDDVVEVSQGKTPTSKEGKCIISCVLKLFGGQDSNGKINKHAVIGKIEELKPIDTDVYEKFSSVWKSCSEKTSDDNDGCDSAAKLMICLAQEVDKHGISKKLIGL

>HoblOBP10

MKEIVLYFFILILMKANCLNQPNYAYECMAELGVSWSQMEEFEKSNPPHNIKCLSLCMGEKSGYITNKQINETAVLEELPSGVSIDFEQCKDITGIDDCDEFFKILECIREQFAKSMDDLKKT

>HoblOBP11

MPLLCIGADDPDKEKLREAAKTIMYDCKDKVSASDADVQSLLDKTLPTTKEGACLLECIFTTSKVMKDGTLDKDATLKTLESVLKKDKDKEAKMTQVLDACQKEIGKGTDDKCQTAKMIAECLQKQGKLAGLGPAS

>HoblOBP12

LNGKWDNLSSASLCYLHCCLKMIKMVTGDGHVDYDSTLKQINNLPEPKRHLLAEGLDNCKDEGKSLTDKCEIAYKICKCFYYNNPEAYIIP

>HoblOBP13

MKSIIVLFALIVISAGLTAKEEEKIKEFAKECRTSSGIEREKLEKLRNGDIEDDPKVKDFISCLFKKLSLQKSDGNIDQDIFKSKLSSKLTEAEKETIINDCINLKGSNDSETAFLLYKCYRSKTPSHNADLLV

>HoblOBP14

MKNIYINYFIVTLINVFLILEYAYAETATDLLRKKLCIRESNVNPSLVANADEGVFAGNRELKCYFRCYYLESGFINDSGEIQTEVIKSKIPQKIDKKIVQQAIDRCKKIKGSDSCETAYEVQKCLYNSKLQI

>HoblOBP15

MNKIFVVSAVLLGIASAYDFSDAYFNQLLTKEFDDLTLSESSFSHPRARRDDEAAQCHHRHKLCCGDDVLYGLHDKIKDKKKECLKEVTGKEFNGGPPFTCEELEQRKKEMICVAECIGKKNGVLDTDGNVKEEELRKHVKETITGLDWFQPQMDDVITKCIAEAKEAADKREADSCNPSELKLIHCFFKEMQLSCPADQITDQARCDALRESVKKHDFPPPH

>HoblOBP16

MKTIALVVLFAVLVSCQDSEEKRAERVRKYREECVQETKVDPALIDKADAGDFADTRELKCFAKCFYTKAGFFSEKGELLLDVVKTKIPPEHEREKALTIIELCKDLKGSDACETAYAIHKCYFQNAHAAQLHKN

>HoblOBP17

MKRMILLISLATFVISEKQDLIQYGEKCAEELGLGPSDLSEFKEKILSRAEMNHNSKCMARCTAEKAGLIVDGVLNEAAVSKCLPDGVDLEKCKALTGDDDCDKFYKIFRCLDKEKLEKSTM

>HoblOBP18

MKFLILLSALVTFITCTDQNFLDKANEKMTKYLQECAETTGATKDDMMELMEIKIPTRKEAKCLLACYHKKYGIQDKDGKLDKVASIEAMQDLKVADPELYDKAVKLFDTCIEQVPNQDCECETAAIFMYCFNIYGQMMGLKPGMVPM

>HoblOBP19

ILSLCLLNVVCVTKLQRMIKDAIAHLGTECLSETSDATMSDVQDLVDHVRPTTRKALCLITCIHTKAGMQDEHGKLKEEGGLNFVEPLKQEDMDYYEISKEHFINCINTVPDDAEACIVGGRFN

>HoblOBP20

QCLEEIGATEDTLKKIANREIPTSREGMCLITCIHEKFGMQYSDGKTNRAGTLIFLEPLKEDLAYYSRTKDHFMECLDTVSNEDEKCVIGTKLMECLSIG

>HoblOBP21

MKQFVIVVALCVIVSVQAITDEQKAKVKEYQTACVASTGVDPKLVEEGEKGNFITDAKLREFISCFLKKTGIQDEAGEIQASVIKQKLANDYTEAEIDAVLAKCKSSGGTPAEVAAAFYKCYWANASKHVPLV

>HoblOBP22

MKSFIVLFALIVISTALTDEQKEKIKTIGKQCKASSEVEREKLEKLRNGEIENDPKLKAFLRCTFEKLEFQKPDGTIDKEKVKSRLPSKLSETEKEEIVNECTNVTETDVTEIAYSVYKCYRSKTTAHNADLFL

>HoblOBP23

MTKVVLLFIVLIVAIQAKKKLSADEIKQINQDCLKSSGMDSSVIKNIVSYDTFPKASDKYTKYLECMYVNQGYLDKDGLISYETIEDFILDFYDLDTVKLAIEPCVVHQDGKSGGERAYNTAKCLIKNLEKLEKQHEKEHKDITGKLA

>HoblOBP24

MNMKYNIVLLLLCVICTYNEALLSQTDQIEAAKLCANQTGIAPKSIAKLTRKLSVPKKDPAVKFFLVCVYKYVGLQDQNGDMNFQKIREQLKNDFFKYDTDTIVDNCSSVKGNTHEDNAYLVTQCLLKQIRKLSKSNKNKD

>HoblOBP25

MEKIILLMCILSLEDVQAFSSDNQNQAITKCIQKTGVDESIVTRMGVTLDIPDNSVVKKFLACLNKKLGFQNEEGDMLFDNLRGNLVGMSSEEVNSTVSTCKQVKGTNSIENSYLVTKCIFRKIKSIIKLKKRK

>HoblOBP26

MKPDTSLVIVLMFAFVIIECESIPVLAKNVSQINEECSKQTGISNDVAKNLTSTQQMPKPSETYYKFLECLYKRQNYFDDDGNVSYRNIENFLSNYYEKSILRKAMAPCEDLQVGTSLGERAYNAGSCIIKNLVTIEAQEDGESINSSEESANDI

>HoblOBP27

MKFIVLVLSALTFINAYDYEDYYFDDIIMEQFELPHGRLQRNMENKSTNGDSCCNKFFKPRSPSTKKEECLKELGITKLPKLSKITEEQQQQVKCYYECRFRNHIDANGELFRAKQPQLRKIYKERMEWLAPKIDDIFDKCLTNLKPAEKVENECNDIGLRFTYCFWREAQLECPLDEQVNPEECQVLQEYLKKHNHILPTP

>HoblOBP28

MLVDGIEKLELDAWDNENNAKYDNGEANQESRYNKELFKTCCEEPSFLFLQYHFEGIGKECYKKLERHSHVHNSTKRPGNDTRTNTCIAECIAKKLDLINDGGFASKIKIHKLLTKAFSNVDWFLNEFNIHGWGCIDQKQGNQTDCNTVPIKAAYCLWRQIQLRCPMDRIKDQIKCRKIKRKISKIDALTEKEEKETEPRD

>HoblOBP29

KATCLRSCILKSMNMLKDSKINLDMINEFIKIVHNEEPEKIEPMKKNAVECLDKVKDMSDDCKMAYAFIQCYV

>HoblCSP1

MRLIFYSFLIYLAIADERYTTKYDNIDIDAVISTERLLQNYIKCLLDLVACTEEGSELKKNMPDAIQNDCSKCSDKQKEGSDKLILYLINNKPEYWQLLEEKYDPTGENTKKFIESKRMMTERTAMYTTVSK

>HoblCSP2

MYKVFIFVIIALVVAVISEKKNDNEEYTSQYDGIDIPKLLANRRLVLGYCKCLLSKGACSPDGAELKRVLPEALETDCRKCSKKHKHSARLVLHHLIDHEPKCWKELEGKFDPEGTYAKKYKHNSTLED

>HoblCSP3

MYKFVFAFFSLLIIAKILADDKYSSEFDSINYNEVLGNKRLVASYCNCLLDKGPCTAPAEYLKKILPEALETDCAKCTDKQRKSIPTLAKAIVGNDSDDCFKELAKRYDPTGEYRKRYKDVLEN

>HoblCSP4

MIKFFIILSVLVVLVLSKPEDGKYTTKYDNLDLDAILNNDRLRGAYNKCLKNAGPCTPDAEELKKVLPDAIENTCSKCNKKQKNGARKVIKFAMEKKPEEWQELKKIYDPEGKYEEKYKDWINKDD

>HoblCSP5

MKCYSLIFVLCVSVLVVNAQNKYTTKYDNIDIDSILANQRILTNYLKCLMEEGPCTNEGKELKRTLPDALANGCNKCNDRQRTTAEKVIRHLIKNRNNDWKRLTAKYDPTGDYRRKYEAQYNIKA

>HoblCSP6

MFLTIVLIILPVVSLAADAEPPGGYYVTRFDHFDIENILNHKRLVVYYAACLLDKGPCTPQGTEFKNILPDAIKTNCLRCTEKQRVVTTLSIRRLQKEYPDIWSQLRKKWDPSGENVKRLLSSANKPKPVVPFVPLILDKFGDGGDVEPSEITSTTETTVLTSSTLMNALLTTSLVQSTTATPTSTSTKQNTKQTVAVTSRPFNSIGPNLIVPNPRILIDKVIHTANLVLNSILKG

>HoblCSP7

MKNFVLLLIFISVPSILAEEKYTTKYDNVDLNEILRNKRLLKNYTNCLLSRGICSNDGAELKRLLPDVIETGCSKCSEKQRNGFAIILKHLIDKESKIWTELEQKYDPSGTYR

>HoblOrco

MMKFKPQGLVADLMPNIKLMKFAGHFMLNYYAENSGAVHTLRLGFCFGHLFLMLLQFGFTFGNLVQESDDVNDLAANTITVLFFTHCIVKFIYFGVRQKLFYRTLGIWNQSNSHPLFLESNNRYHQLALTKMRRLLIIVMVGTIGSWIAWTTITFFGDSVHNRKDPNNENETITEEIPRLLIRSWYPWDAMSGIPYYVSLIYQIYYVGFSMLHSNLLDSLFCSWLIFACEQLQHLKEIMKPLMELSATLDTYVPKSADLFRAHSASSQDKLTESDYNARNEDAHMRAMYSTHQEMGVTYRSGQLQEFSSGGIGPNALTKKQELMVRSAIKYWVERHKHVVRLVTAIGDAYGIALLLHMLTSTITLTLLAYQATKIDGVNKYALTVLGYLFYALAQVFHFCIFGNRLIEESSSVMEAAYSCHWYDGSEEAKTFVQIVCQQCQKAMSISGAKFFTISLDLFASVLGATVTYFMVLVQLK

>HoblOR1

MRRLSFEFTKAIYNDSVKKYMWFGKLLLEMLCAWPSKEGLFKRAIGWLFFCNLAVVEIFHAAYCAQNYSNIGDAVMVGATVTTTLEAMVRFYIMLSKREIINKILTKVWKKFWPVEVLDPVKRKKIQNKAKFRFWLNLIFFSSSLISSTNVNLAPYLSDNELIFKSSFPFDWNKPYVYEFLYVWQYFSNELVVFMINAFDFFFMSLVCICTIQYIIMQEVFANILSKDSRRHRQVIFGDRGKHMTDKEMLKKCLEQHEMLIEICNELDNSFNRAILIQFVVNTAANCAAFVTLKFDRSQFTKMLTYAVAHLSQLFYYCLAGQDLQYESQRLSDFIYDSDWQSSYNRDFRKSIVLMIQRSQKPQCLTALGLVNLDFLSFVQIMRLSFSFYTLLDGFLADE

>HoblOR2

MSAGNTTKPVIRKLSLEFSRDVYKDGVKMCILPGKVLLQGVCCWPDDEGLRMKIVGWFLFWNLFVIEIFHASYVFLNFNDIGDAVDAGATVTTTMEGLVRLHIMLTKKGVINSTLVKIWKQFWSLDVIEPVKRKKIKRQAQTAVMLTSIFLGSSIISNSQITGTPFIRNRGLVLKSVFPFDWRQYYFYEIIYIWQYYSDWFVLFMINAFDFFFIALVIICSVQYVIMQEIFKYILTDESKRHRKIIFGERGETMTDREMLFECLEQHKLLIGICNELESSFNIPILIQFFT STCGICAATLIMKVDYSQFSKMFTLVGAHISQLFCYCYVGQHLAFESDYLAYAIYDCGWHIDYDRSFRKALLLMMQRSQRTQRLTAAGITELDYASFLGILRLSFSFYTLLNNLFMKNVGQ

>HoblOR3

MNSKKSENYFKVHFFVLNLLGISMNSMKNPIKNLLYKTYSLLLFLFCFVFYPISELVFVLCSGNVEDSTFVFSFLLTQILGALKLVIVVIYKRKIISFCKSIETKPFLPDQNRSGQMEFMHIENAIRTSNNQAYFFHSFVVIVISQRYFYTSRAPGYYESTFDQTSNITIVKYVRMTPFYTILPFEQINSPGHEITVLYQVISAAVIGFMIGAVDAIIGGILCHIKAQLFILKDCLASYEQRAVYLMNKDGIYIDNREFAKHEMNKFNYSGNVRKLPSVLQKYVDVCVIQLIKHHQKIIELADGAEDTFSLLMLVQFLFSLLLICFQLFQLSICEIRSTKFVSMICYFFLMVLQLALYCWYGNEIMYHSSSLSDAIFESNWIVANAKTQKSLLIMMMRVYRPIKMTAGKFSVLSLESFMAIIRGSGSYFMVLKNTQSAV

>HoblOR4

MNNEYVMSFCLYHLHILGLNPFKQSIFSKLRAGFVALITCVLYGFNLAALFHDNNGIKSLQNTIDALPCGQQTSVRLLYLLICGNKMKQLYEMTNETWPNDICGSKLKERLQFDSERFKSFFKSYSTYLVTIVIIYLITPSFYTYRRLTTEWYLPCKLESDMCYLSARLAQVVYFMLIIYQIIIFDGMCWAFLFCLFLETEKVKYSFKYLNIEELNSKNEVNRKFCSIVKHHCYLLEFLKRFNAVYSLQMLNHFLTIAAALCFGMFLVSKDGFPPTTFENARFIPYVIGYNTQLYICCYSGEVIYSQLISIADAIYESMWYLNNHSNVSNGIRLGIQVSQIGNKVTIGGLWPLSLSTFVSVFKTSVSLNAILQTVYINAERSI

>HoblOR5

MSDNFFNVNFTMLKMSGIWIPDSKSSLIVKIMYWAYNFVWIGYSCLFFCPSELVYFATTLSNLEDLVKNVNMGMTHFLANIKVCLWFYYRKEIMGIIETLGAYGRRYESYGDFDNEKILKKAKKFKDIFSVLFLNFAMFTSISSCLICFYNTMELDLPKGGRIELKLPYFSYVPWDYRRSKILFSIAIWYQFFPVFNYAYIIVGFDTLYTAILGYVSAQLDIIQGAFSTIRPRCIVRLGLEVPEDVLRDPPELMNEMNKEMNKIVDHLQVLLDICTRLEEIYSYVILAQVMISLIVFCTCIFLVSLLPMFSLNFAAEMIYMVAIECQLLIYCVFGNKVTLSSSNIPNSIYIGDWYSSNISFKRSMLITMSRMQRPIYFTIGKFTPLTLSTFVTISRASYSFFAVLKNSEL

>HoblOR6

MVCPCEEILSSPRWILELLGCWPMKSPTKTYTIKMFVASVFTIAFPTMLCFEILFVYKNYNVLMQILNFLIPYVYVLCKYTIFTFQQKQLFILLNCTKSKLFNQSPSNDKILRPIADVIIMVTKVFRFTLVFALLMIALLPLSETKLYPVPISHDLGRYSILMYVFQITCLSIGGWLCMGFDCGFIALAAIGIGQIDILKLRLSSVIQDLVVNKNTFSKSVEQLKTQTKINKALRACILHHFAIEEYCKRLSNLFSTTIFIQYLMSILALAITMSRILTITELSVKILELVFILMFIFTQLITYSWSGHQIMIKSSEIGEACYMVKWYYYDASNRRILFLIMERAKRPLYIKASMFAKTTLTTCINILRCTYSIFTILSMSYREN

>HoblOR7

MKGHSENFFDINLIFLKYSGLLPPKNKSNISYTLYKILRFFAVIITVILGTTGAIIGVIENIYNFNVLIELLNVALTMFLSAIKSVFWLINSKSIEEIMQTLATNEFDYEQTEVFKPNILKEKARRIGRNYTLILWILTQLTLGFAYIPAISLSFWYYVNDLPITNITTFQTLPYYIHIPFAYNTAMKYCLACIVQAVPCYMYANILVGVDTLFMNILNLIGTHMLILQGAFKTMRKRCLKKIAGPSLAPDGLHNSNEMEYYMMLEMKKSINHLQMLFQCCYKLEEIFKYVSLFQALGSVIILCSSLLMLSTTSCVSKEFGNEIFYFIGINVQMGLYCSFGNQVTLKALDLPQAIWESEWLECRKSYKICILMTMMRLKKPVYLTAGKFAPLLLNTHISVLKGSYSYYTVLKSMDK

>HoblOR8

VCNMFAKTYRFFVGITIAFYAIFPFIEHTLPLPGWFPFDKKKHSYSLYVYHLVCLILNGYNHTSLDCINAAMISIASAQLEILKDNLHNLRRNEDDDLTIDQEDVVVRKRVKKCVLHHNVIVKFVADIEDMFSNVLLVQFLCSIIIMCVTGFQVFVIPPARMHYITLVLYFCCNLTQIAIYSWFGHDILAKSSDIGLACYMTEWNVLSPKSRKLIFIIMERSKVPIILTAGKFINLSLNTFMMIVRTSYSYLAVLQHMYKT

>HoblOR9

MGHINCLEPLIKPKWLLIKSGLWPMENISVLIAIKYFLNFALDVTILGIILQNIVNAISTNNMNLLNWSICVLLPLTNYYTKAVTLFVNKKHLRSILNDLDSDIFNYNSEKLNRHIRKIYAISNMMIRYFAFVISTFVFVFGVLPIITNIRPIVPASFKTGKFTRLYNVAHLFAVIFVGYNSTAFDVLFMSLMALCGAQLDILKERLSNVFVDASEIYEDASSNMKFTDINVVVGCILKDCVALHEAINRFVMKLDILLSFPLLTQYGIGCFIICNTILELTIMGHLDSANIIGLCGYSGVVFAQIAVYHWLGNEILYKSDEIIQSCYLSQWYKLDLKSQKCIMLLMERAKRSLVITLYKFVFISLESLGVIVRWSYSIFALIKARYK

>HoblOR10

MNTNQFKQINKDYFKIHFFVLKFFGISIKPVEDSLSGIAYKIYSVILFILCFVCYPTSLFFFLYLNADLENATLVLCFLLTYILGTFKLIIILIFKRKITTFSAHIENEPFLPDNRRSNDREFIYVENAIRTCNNQGYIFHTFVVLIVVQRLYYAAIDAGYYKNFWDFSTNTTIVKHVKSTPFYTVLPFEPIDFPYYEITVMYQAYCSATYGFVIGATDAIICGIMCHIKAQLLILKNCLKTYIQRGIYIMKEDKVHINIQELEKHQELNKDSVYAVPLVLQQYVEISITELIKHHQKILELAEGAEDTFSFLMLVQFVFSLALICFQLFQLSIYSIPSVKFFSMFSYLLLMLYQLFVYCYHGNEVMLYSLSIIDAIFESNWVMVNVKCQKSLLLSMLRASRPIKMTAGKFVYLSLDSFMSIVRGSGSYFMVLTNMNARKH

>HoblOR11

ILYSVASRMRKMFSVMLLFHYFVTVATTCSDLFILVKYVDITVIGIKFTVLVFIFGQFAYYTFPSDEVACQFSDIARALYMSKWYRTNIKVQKSLLFIMMKCQRTKYFTGAGLMDINADAFGSVVRKTFSFFTIMRNILNK

>HoblOR12

MLLNATITKSVSYLNFKGLNPFISRSKSAKFKAIIFLFTETMATISIALCIFVSSLGSDSFMDSVTGMICATQTICKQIILLLFQDDFIDVVHYIKEFWAANKFGKEPAKQIDVIHNTTERLLKMFKYLLSIAAIAFLVKPFLEEELVLPVSWLSVCSIHESMICYTINYISQCFYIGDLIFSLLIFDELFFKLLTYGYCELEQVKYALSFLKTKNTTSEKESKIMLEMVIIIKHHSRALEYIDKVDKLFSMVLLCQFSTSVCGGCMGLFVLTYEGLPPKLNTALKNVPYVLGVLSQIFIYCVAGQKIAEQSESVADMAYNMRWWIKHQPQVGRAICLIMQRAYKRKQMTAGGVWNLDMITFVAVRSVVMSNRN

>HoblOR13

MSTSRLSLRRLSLEFTKDIYKDGIKICLLPGKILLQGCCCWPDSGTLYSKIIGWFLFWNLIVMEIFHTAYVVKNFRNIGDAVSTGATVTTTMEGFVRVYVMVTKGHVINTILVKVWKQFWPLDAIEPKRRQKIQRKAQLSVLLTSILFFCSASSNSLITSTPYIRNHGMLLKSVFPFEWNQLYVYELIYIWQYYSDWFVLFMINAFDFFFVALVTVCFLQYVIMQDVIKFILSEKSRSQRIIIFGKRGQSISDKEMLYKCLEQHKLINGICNELEESFNIAILIQFFVSTTTLCAAALIMKVDYSQFSKMLTFAGAHLAQLFCYCYVGHQLSYESTSLAYAIYTCDWHINYDRNFRKALVLMIQRSQKVQNLTAAGVTELNFTSFVGIMRLSFSFYTLLNNLLMKNENE

>HoblOR14

MGKIMQIFSRFLRNLDILKRNSDILNDDGKCTLIVSEFVLCLVNFWPENHTIRTRITFFTLLAAYISMQISFFMFLVTSIEDIGSFTKIMSSLSVGMQVIAKMSILFFKYNELNAIIRIIRYEFWPATTMGKLIKNQIRSKLTFILIGCIAIYLLGMLFLLQIAAAPLMKGIRILPYNSWYPFDWSQSPTYEVLYILQSFMIIYVTENIVVGCDFLFFSICFNCTVQFNLLCEVFKEIGNGREMELLNYLFRLPGTFYRPTMNEVDVNERKLMVLCIQHHQKLLNICLQLNKLFNYGHLYQFVASVTGLCASCYLITNENSANGRSLVASYFVAHASQLFQYCAVSNEVTHASLELSTAAFQCGWHKKEYSDFRKCLSIVLQRSQKGVPVKAAGLFVLNYASFVTMMRSTFSLYTFLNNFTEQ

>HoblOR15

MSKRIIHYDSINFERRIMSVFGFYSGLGFEGNSLTKLVFKISITSGILFIYTMIIKIFLVTNDLEVVFEIFHILITETAFVLKAILFYQALPKLYSLEELLRGPTFNQHTEDQDRFISKAIFTYKLFARSFQFTSWGAMITYSLCPIIDGTILAIPIWTPFDEDKYKIYAQFFEIICFIVLSTIDVAIDCISTSMINLMAIQLDILNDNLRRIGQNRSTGSYLEQEKQIQNDLVRYVQHYIAIIRFVSDTQDIFSVGIFIQIFTSVVAICTTGIQIALRTSGTFISTLLYFQTMIIEIGMFCWFSQDIITKSSQIGESCYISEWYTCNTSTKRSIFIIMERAKKEIKFRAGGVFEMSLTTFVMILRNSYSYFAVLMRVYKN

>HoblOR16

IDAAQNGASIEKINAMIATLFLIVTCCLKIGVCTFQSRLFFSIVEDLHSIRFNSHDPKYNKPLEDAIQLINFFAKVFRVCVFMIVLFHIVFPLFGRTPLSIYPTFELENHPYISHGIQIITVGIAAWNLTCVDLFFGAMITIAITQIDILRLKLQHFTADAKQEFLKRRKRENCSYHTISNEILVDCVDLHIAVIRFLKKVEDMVTIILLVQYSAGVVIVCNNILQLTKSDSIFSPDFIQPFSFLCGVILDLVIYHWLGNEIIAKSDKIGEACYTSEWYICNAKTHKTLFMIMEKAKKPLNIKIYKFTDLSFQSFVAILHAAFSVYTLLDTVAEEN

>HoblOR17

NNIDNLSEILPVFLAVLLLIVKRINIASRSSEFLLTLLVLEKTEFNNHPEGLMGPIKRCVRISKTLTKIFKVVMICVIIFYVMLPFVEDKPLLLPLSFDLGRFEKATCIFQVISFSYCCMSVVCVDLFCALLLSLATAQLEVLELRLRNIVSEAKFSNGSSILNYKRDLDQRVYKILRKCIKHHLSIISLVRQIEKTYTVPLFLQYTLGIGIICFLLLQLSYTVQPGTLQFLLLCNCLVAILNELLLYHYFGNELIFQSLRIRDACYMSEWYECSPFIRKMLVIIMERTKIPLAITVYGYCLVSLESLSALFRWSYSIFALLSTVYWKVNQ

>HoblOR18

MLGIFGLYSRRDDENGVFFKIRRALIAVFSTVMLICLFIKMYENRNNLLDIFETCYYFMVQAAFVIKLYIYFYHLPDLHALEEMLSGKIFNSLSKEQEMYISDAMKSHKIFAGCYQFCCVCCAIIYSIFPAMDGQALAVPIYSPFNVEKYRMFLYCFEVCCFFMTACNNSSFDGMTVGLTTIMSAQLDVLKDNLKHAADRDMGGKFLEQEKKIKDRLRNCVRHHNAILEFTAKTQDIFSTGVFFQILASMLGICLTGLQSLMVPWGSVQFASVGLFLVTEIIQIGMFCWFGENIIIKSSEIELSCYMSEWRSCSTSNKRIFLIIMENAKTPIKFTAKGLFILSLGTFVMVLRSGYSYFAVLRQVSQK>HoblOR19

RISRASCKKRNELRICIKHHQLLLSIFGRMQLIYSWVLLLQYLMTLGMACVQLYILNTGELDIADTIELVIYLGTMYTEFGYYSIPVEEISSEFSGIVNAIYMSSWYEKDMATKRILLNVMTTAQVPKYLYAGGMIQVNMDTFGSVFRKSFSLYLVLKNLVK

>HoblOR20

MEEEYVMSFGLSFLRAVGFSPFNPGLLDHIKSSALILTTTFIYCLNILPMIIEYDGVQSLESSIDSIPAGEQVMVKLLTTWILRNKMKYLYEMVNQKWPDDIYGNEFEIKLNNNAKNFKRIFALCKAQFMFSSLIYTSKPLFVQARVLATQLYVPCDLLSNSCYITFLGIQNIYIVIVATGEVVFDFIFHAFLFFAYIELEKIKYGFRNLDIMGKKENNEKIVYSEFCKIIKHHNFILEFLHNLNNIYSLQLLNHFITLSANIVLAILFMNKDGFPPSYDEMARYIPYLITILSQLFLYCLAGEGIYSQLASVGDAIYESKWYNMKQSSSLTKGMILVIQISHINRINRKLTIGNIWPLNLATFMSVVKSSFSLQACLQTAYNTDDTM

>HoblOR21

NCTALIRFLITTIHLTYCKEDTIEKELCVTVKPLLIPTPGPLNTISGRWILGGFQCICLILYAWQIIAYDTLFACFLIYVDCNVHILRYFFETITERSINKLQLRCCSTPNLELTQQMNIQMRTGTINLQNLIITCEEIMDVFKYVILLQVLFALFILMTSLYVAASVPVFGASFTYQLEYYMTIVTQLSLYCWFGNEITLSFTKIPDAIYNNNWVVSNKSFKRSMLINTIRMNKPIYIKIGMVAPLNLNVLIYILRASYSYFAVIKNKY

>HoblOR22

MANIKCIKTITTPIWMLRKTSFWPEQTYTKTFILTSIFNNIFHFTIYTLLILDIINALKSNDIKLFNWVIGILIPITNYYAKAVTIIYNKKCLFSILDDFKSNIFNSHTEKHNLHIQLIRKVSHLIMRYLIITMGIFVLIFSVPSFFTNGLLFIPPPFEIENFDVLYKFVNLIAACYIGYNCGGLDVLFLTFLALCVAQLQILKERLKNILEDAKKINVESKYKMDLDIILADILRECVLLHKKINRFVEKLGVLLSLPLFVQYVSGCVMICFSIIQLTLGSKRSALDIIGLCGYSSATFGQMSAYHYLGNEIIYQSNEIVESCYLSRWYELNPKFQKRILLLMERATRPLILSAYKFVFISLASLGVIVQWSYSLYAVTKAKYG

>HoblOR23

SKMSSDEFNGGSEVCDSILPYYIVIPFDISTKISCCFALIFQILPFVVFAWQITAHDLLFAVFLIALKCHFIIVRGAFETLRSRCLKMLNLQPHYNILHDRDNIKLDNAMKTEMRKCTQYYQIIIKLAQEVENSFTHIILVQVLIVIFIMVSCLYMMSSLVITSGKFFAEVNFVIAILIQITFYCWFGNEMTLASADICSGIYDNNWLSASESFKRSMLIQMIRSSRITYITVGKFSAVTLLTLASILRGSYSYFALLSNLKE

>HoblOR24

LRNAATTEIYACVKHHELLLSVFSCMKKMYFWMLLFHYAVTLITGCSQLYVILVSSTDTADLIGTLIYVNGMLVQFAYYSFPAEEMVFELRSVSVAVYMSMWYEKDASVRKTLLMIMMKSQQQEYLSAGGIIDMNVNAFGSVIRKVFSFYTVLHNVLSN

>HoblOR25

MKLHCLVTKNGQIRKILKEISGDVFQPKSEYQEQLIITSLLTIRRCTKLLIYISLGS CVFFVVLPLVNRSDEKPLPGKLWFPFNTSNHPVYDILYIYETIAVILHPLTHICMDTIPLALMAFICGQFDVLHDTLTNLKIFATERLESNTKRTKDDLHEEMNKLLIECIIRHQETKRLANEVNDVYTSHFFAQLVNCVSVLSLIMYKLTMIPIASVGFFTLALYLTCLLGLLLLYCWYGNEIVSKSSAVYLAAYSSDWTGCPISFQKNLLFMMLHLQRPVTMYAGRFFPLSLDVYTAILRFTWSYFTLLLNIDE

>HoblOR26

AVLTVLFFGILDSILSRFKSNDYNDWSMPLAPFSLFKVTTNTQFILVCLYQSTCLLICASIISSIDLLMGSVLAHMKTQFTILKNTIRSMQSNDDLAEEVTERHSQKTSVDLLQNKLQYVVTYHQSLIDLAHQFEDVFSFLLLTLFIGNFVVLCFTMYHASLYPLSNTKALMDFAYVIAICVQLLLTCYWGNELTLESESVAFACYDVKFVGTSPNFQKELALMIQRSQRPIVLTAGKFVNLSLNSYVSILRMSYSYYMVL

>HoblOR27

MSMSFILTSFKVLVWFYYRKDLLKITKLLEENSSRFKDYNFDSEDIISKEKLFKDLWTKSFFLASSLVSVSAGFLSTTEALTSGEKYVEFKNGSQYFYNQKLPYYSLVPFDQTSSKLAYIKAVVYQCLALLSCGYITVGLDMMFVAIMSLTNAHFILLKNAFRRIGAVRIERLNITSTICIEQSTMLRRACENELNKCIKHLQMLIRICQSLENIYSPVVLMQVLISLVVLCTCLYQVSSIPFGAKLLGNDLAYLLAIEIQVVVYCYVGSKLTHSALDIPSAIYESSWLTASLTYKKTMIMTMMRMQKPIHITIGKFSPLTLNTFLSIGKMSYSIFTMLKSRN

>HoblOR28

VKTLQSLMHFTHIFLKYLFLMYYKVDIEKILVDILKYFWKTWMFKKQIAEEVEKIYKTVESIQKCTIFLAAIVLLVHTLRPLFDKSHIYLLETYTPSSYAIGALLLISQCYTLYFGFCVAIGFDLIYFSLCVHLILQTRLLKEKLREVFENSRDNSSFKLGYCIQHHQFLFSLFLRKKAIYSLMLLFHYFVSLITGCSVLFEILSSNTDLGNAIIELTVIVFFMGQFGFYTFLAEQIAFEFSDISDAIYLTQWYNSNIFLQKCMLHIMMKSQRIHYFSGGGLIDINVDAFGSVLRKTFSFCAIMQNLINK

>HoblOR29

MVPPPFDTGRFNIVYIFFHSLSVMYLCVNSTGYDVFYLTLMALCVAELNILEERITNVLEDVSEGHDSREKISLENIKPLLKRTLRECIILHDAIIAFVKKLSIVLSFPLFVQYTCGCFMLCNTVLQMTIVSDKVTESCYLSMWYATDTLSQKTLMLIMERAKRSLILQLYGFVNISLDSLGVIIR

>HoblOR30

FVSLVIYTLCITMELMTYCWFGNEIIMKSSEISTSAYKTEWLNSSISFQKDLQFFMLLTEKPVKITAGNFFTLSVETFTTIMRSTWSYFAVLRQKYVEDVLE

>HoblOR31

YCFMGGLIVQLGGIFTYETCMKNSVKTNKDMTCGYGYKVHYPYEYQSGISQIAHIAVGVYSLSFVAASASLFLCLFICCVEYITVRIDHLNDMLLKVFEVEDYEDQSFTMKLCLEYHILITGLAEQANSCLLILSTAALFNYSSTIGLSLFAMLKGNITKPLVSAIGFTCSIFILSAYGQQIINKYEAIGTAVYNSKWYHSSPLLRKHVLLIVMRAQKPLLLQVGLGFYFHLPLFT

>HoblOR32

LLILHFYYFCIGFPVVFGFDLIYFALCVHVIIQTRLLKRKLKNVSRNCGKNSVSELNSCIQHHQFLFSMFLRMKDVYSMMFLFHHFLTLISTCSTLFEVLNGHNTDLTNYFIKFVLILLFISQFAYYALPAAQVASEFSEVSDAIYISEWYNKEVVLQKCMLFIMMKAQRIHYFSGGGLMDINTDTLGSVIRKTFSFYAIIRNLINK

>HoblOR33

RNDNQSLLIKTHQKRMLRFCYVFVCMGITTCSLFAVFPFADPRELKLPLSGWYPFAEEPFVILFIYQITALSVIGVSNISLDCIIVCFLNHICIQIDLLNHELRYMRGVCLEKLKARYKINSKHEFKIKLQMLMNAELESCIIHHQTILSMTRDFQQIFSVGIFTVFIFGCATLCMTMLQFVMVSIKSIKFVSLVI

>HoblOR34

EKVIKCVEYHIFIMSFFKNLRKLCSSLFLCQYTIALVSICTELYAFSNTKEEFDITELFKSMFYTSTILLEFGMYCFCSQYVVDEIRSLSDAIYASRWYECKTNFQKDLMFIIMRTQSQTEFTAGGLVAMDVQAFTSVIKRAFSFYALMKSLF

>HoblOR35

PFEIDFSIKLLIQIMDFFYVLWVGITCVLIGFVVGCAELIIIRVRHLNIMFKDALSFASCVNSKKLLVTCVKYHAHIISLTDRYNKCFDKFVMLFLMQTGPTIAVASFSIIIEPKISVMLHLSGWVVTLFILCISGQRLTDESLVISQSVYDTEWYQIDISLRKYVILILMQSQRPLRAKMWMFSEASYMTFAKVIKMSYSIITLLNGTLARKN

>HoblOR36

LYSLLKLRFLESNVKLFEDGAKYTIIFSQIIANFINIWPEKFSTSTMICFSVTFLVCILQEVSLFVFLITSIEDVDSFTKVLASMSIVMQSMVKGGTFYYKAKEMNDVIKIIRTEFWPSNTMGKDLDHKIRGNSKILLTVLLAQYLFAVAFLLFYVILPLIQGTKQLPHTSWYPFDWSASPAYQVIYCLQAYITAYFNENVVCAYDYLYCTICANCVAQFRLLSEAIKQIGTGREDEIARSLLKISGVSYRPILKVEDFSERRLLVICIRHHQKLIEVSNRLNNIFGNGHLVQVFASVLGSCT

>HoblOR37

QVFASVLGSCTTIYRITMKNGLNDLTLLISCYMAHFMQLLEYCALSNELSYWSTCLSETAFQSCWYEKKYSDIRRCLSILIMRSQKPISMNGLGLFELNYVFFMSVMRFTFSLYTFLSRFSE>HoblOR38

KKLKKLVEKMNEILAVPLFIQSVLGAVILCLAMYKLTKVAPMSGEALTYINYYIAMLIQLSVYFWYSNEILWKSDELSNSAYQCQWVDKTTSFKRNLLFFILSAHSPLKIYGGYFVVLSMDLLIAIVKFSWTCFTLLKSM

>HoblOR39

FPLFVQYVCGCFTICNAILQLTVMKESGSSNLLSMCAYTGVTFGQMTAYHWLGNEIIFKSNQIIQSSYCSKWYALNTKHQKELLLLMERAKRPLIIQLYKFIYISLDSLGVIVRWAYSVFALIS

>HoblOR40

GLCKLYSWMKYNKKIQRMLRTIDERFWDTSIVNEKLSTGLSLRVQLISKTVASHIFISVGLCLMIVIFPLVQYPDGRKQLPSAIWFPYNTDKRPLYEITYVLLGISNHISVLVNLNYDSLYVYFMQNISIQF

>HoblOR41

LQLTLWSNKIINATYSSKWYELDIGAQTKLLILMERAKRPLNVQVYKFIFISLESLVTVVRWAYSVFALLRARYS

>HoblOR42

ICSASLILKVDNSQFLKMLTFAAGNTAQLFYYCYAGHQLAYESNRLADAVCGCDWHLHYDRSFRKALIMIIQRSQKGQSLTAAGITTLDFASFLAIMRLSFSFYTLLSNLLMKNKN

>HoblOR43

YHQQQLLCSAPKCALYFSIRKKLDNIIKIVWYEFWPSNMMGTIVEKNIKSDSKTLLVGFLIEYGVGCVFLLLFIIAPAMTGIRQLPYNAWYPFDWSRTPTYEILYLFQVYIDIYIIANTVCGYDFLYGSICANCVAQFRLLNETIKK

>HoblIR25a

MLNLFYLVLFIASCDRLRTQTIQNINVLYANEEDNDVADKAVDVALDYVKRNSKLGVKVDIRKVVGNRTDSKGMLDSLCKTYGSMLDNKGPPHLVLDTTMTGLVSETVKSFVKALQLPTISGSFGQEGDLRQWRDIDDAQQNYLIQIMPPADIIPELIRSIVINQNISNAAILFDNSYVMDHKFKSLLQNVATRHVIRPIQDDSAIRDQLQNLRKLDIVNFFILGSIVNIRKVLDVADSISYFNRKFAWHSITQDKGDLKCMCKNATVLFAKPVMDTKYQDRLGLIKTSYQLTSDPEISAAFYFDLALQAFLSIKNMINDGGWPSNQSYITCDDYDGKNSPDRKGFNLKKYFGKDPTETPSYGPMNIARNGESFMQFNMQLTAVSVRAGSSDKAVNLGTWKAGFNNNMSLIDPESMGNYTADIVYRVATVLQAPFVMVDSEAVKGYSGYCIDLIDEIANILKFDYEIFVVPDGKFGNMDLKGNWNGIVKELMEKKADIGLGSISVMAERENVIDFTVPYYDLVGITILMKLPKTPTSLFKFLTVLENDVWLCILAAYFFTSFLMWIFDRYSPYSYQNNRDKYKDDEEKREFNLKECLWFCMTSLTPQGGGEAPKNLSGRLVAATWWLFGFIIIASYTANLAAFLTVSRLDTPVESLDDLSKQYKIQYAPLNGSASMTYFERMANIEAKFYDIWKDMSLNDSLSDVERAQLAVWDYPVSDKYTKMWQAMKEAGLPNTLDEAVERVRSSRSSSEGFAFLGDATDIRYLELTNCDLQMVGEEFSRKPYAIAVQQGSPLKDQFNTAILQLLNRRQLERLKEKWWTNNPKALKCEKQDDQSDGISIQNIGGVFIVIFVGIGLASITLAFEYWWYKYRKTSKVITIQDNPQQSVQKHKSKPDNSKTMALGKLYPRSRF

>HoblIR8a

HRRSIDRNWLYDLVSGQVLSLQCPEQQKGLPISLQASCREFTLKESFWFALTSFTPQGGGEAPKSLSGRTLVAAYWLFVVLMLATFSSNLSAFLTVEMMQTSVQSLEQLAQQSRINYTVVEASQTHHYFINMKNAEDTLYRLWKELTLNASTDETQYRVWDYPIREQYGHILIAINDSIPVANAAEGFRKVNEYTDFAFIHDSAEIKYEVSRNCNLTEVGEVFAEKPYAVAIQQGSQLNDEISKTILDLQKDRFFEYLQAKYWNYSKRGECDNSDNNEGITLESLGGVFIATLFGLALAMVTLVGEIIYYKRKRTKKVYPPGKDIQSIRTVSVKPAIPDSITFGTTFKPVLPDKDNLRVSPFTLYPRSRNRIN

>HoblIR64a

SSSVICDLQEMQMYSPLQTRTSLQKHSPFRNMLGFCMIRLFETGVSTRLRNIYDARKSKCTSNSFSIRTRVGLHEFSAVLYIYIIGIVASVTILTIEIIIYKKNYLHLYPFTH

>HoblIR75a

RQKIKNIKFRVQQYGLLLCRSSKSFHFVKEKLKNLNLRIDSNLYVALKSTVGEYEVHEFYNPGYKNGGTLMSYNSFNYTQRGAFASNYLSGYQMRKDMRSVHLRVAFVVTKKVSAPLEYLKDQRTKQFDTSSKVNFGIFGHMIDIHRYRWDVVITPAWFGSKRHGVEIGLANVLHQNLADISGSSGLMTPGRVEAFDFGVGTYLFRTSFLFRNPYTYDDDVGEALVLRPFSRGAWLCAGLFALILGLSLKLVFQFETRVLKRTSQTYSLCSIVVITIAAFCQQGEFYFRIDLQKLNDETTFSNIGSGLHYNSVCGRVLLLQLLVFAYVLYNYYTSSIVSSVINSKKKTLDTLEELVKSDLDIGIERIAYARVLNATNNPILFHLNNEANANNTRISFFPQSEGIQKIREGNFAYLAETITAYNDMDRVFSNEEICETVELDGARPTLIYIVGKKNGQYNELFSISYRQIVHSGLLQRQQKIFTNQKPHCLNAIQFVQVGFGQLTSAFVLLTAGYGITLMILLIEIVHFRIKSGSYKNIQ

>HoblIR40a

YFLRNIHEAMKVILITNPRYDAYRVYYNQATSHRKHHMTMVNWWTKHKKLFKYPTLPASIDIFKDFKGKIIYVPVIHKPPWHFVRYKNNSFDILGGRDDKLLRLIAEKLNFRYQYIDPPERIQGSSFSPNGSFEGVLGLIWKREVEFFLGDVALTWERFNAVEFSFLTLADSDAFVTHAPDTLNEAFALVRPFHWKVWPVIILTFLISGPALYALITIPNSWQPRFLIKSRRKLFGECIWFTFSLFLRQSEKEPSSSHKSRFFIILLSIAATYVIDDMYSANLTSLLAKPGREKSINNLVQLEKAIKLKGFQLYVEKYSSTYGLLENGTSIYGRLW

>HoblIR21a

LGSSAPRILTSWRNGSLTRPQVKLFSKKMHTGFSGHRFITSVAHQPPFVIKRGLDENDDIVWDGIEIRLLKMLSRMYNFTLDIKAAKDDISKSPADKVIDYVNDGTVNVGLSGIYLTKERLENLDVGYPHSYDCAAFISLTSTALPRYRAIMGPFQWTVWLALTITYLFAIFPLAFSDKHTLKHLLTKPEEMENMFWYVFGTFTNCFTFGKDTWTKSPKITPRLLMGFYWIFTTIITACYTGSIIAFITIPIFPTTVDTIQQLLSGRFQIGTLDKGGWEFWFRNSSDKNSQKLLKNLEFLPNIESGLRNITKAFFWPYAFLGSKAQLDYIVQTNFTTTNKKSLFHISSECFVPFGVSVVFGKYSIYKDIIDRGISYISQSGLIIKLEHDIRWDFMRSPTGKLLQANSMNTLKLISVEDRSLTLDDTQGTFLLLFAGFLGGMLSLIFERVGGCFKCYKKRRFSTSSSISSKPRSYDEPTPREKLDSIQYSYDEFQLLNNVQENNRNKTDVDAEFENMHHINKELQKTSTNLIVRTFNFDKLFGEENLNSHHETVEDH

>HoblIR76b

QTYMWIQNTRCKG-IE-ASFYFCSKMALIDIILIGLCANLTCPGDKIPDLSKRTRSLLREQEELIRNYTLKIATVHNPPLSIIETVDGVLRARGIAFEYIEILQNKLGFKYELVKPPDNSLRPEDNGIIGMLSRNEVDIGAAFLPPFPYLSNYIRFSTNLDKGEWVVLMRRPPVSATGSGLLAPFTFQVWLLILVSLFAVGPIIYFLILLQSRLCKEDDNIIYPLPSCVWFVYGALLKQGSTLSPHTDSSRILFATWWIFITILTAFYTANLTAFLTLSRFTLPISSITDIGTKKYSWVSPKGSAIEAALDIDDTFKQSLDGSHGQFSEEDASIILDNWVTRRDYMYIGERPIVEHLMYRDYLAKIDMNIAEGDRCTFVITKWVVRDNMRAFGYSPEFPFQKLFDNLLEHLVESGIVMYSLRKGLPDTQICPLDLGSKERQLQNTDLLMTYYIVAGGFIVSTVAFAGELLSKKCSGRVKSRKATASKDLFTISKKRKKGVLNEDHLFPPPPPYHALFKPPFPHSENAKTKTINGRDYWVVKSTDGDTRLIPIRAPSAFLFQYDN

>HoblIR93a

CKMLPVQLLIGLGFVNFVFSNNFPSLLSANATLAIVIDKEYLGDNYESIKSTIEDYIYITKRDRLKHGGINVFYYSWTSITIRKEISAILTIAS CADTWKLFKRANVENILHMAISESDCPRLPPNEGFTIPTIVRGEELPQILLDLRSIKAYDWQSVVILYDDSLGRDFVTRVLTSLTIDTKEVTGGGTAVSLIKLDKHNTGLDKTSIKNTLSTIAARLSGTNFLVIVSMELVTYVMETATALRLVDTNNQWLYVISNHKLNNKSISGILKNLKEGNNVAFLYNISTSGAKCKEGMECHIREMLDAFSNALDVAILDEFELAGQVSDEEWDAIRPTKLERRNFLLDTMKAYLIKNSVCGNCTAWQMQACDTWGKEFKTSSSSEFSLIQVGYWRLGSGPSMTDVLFPHVAHGFRGKSFPLISFHNPPWQIIKINKTGGANCRGLVFDIINELAKSLNFTYTVIVLDNGQNVSGNNSNYNNEISYGVTYTIPERVIEMVQNKFVFLAAAAYTVTEQSKTMVNFTMPVSTQTYSLLAARPKELSRALLFMSPFTYNTWLCLLLSIFVVGPLLYIVHKYSPANEYNGMNVRGGLSSVYNCIWYIYGALLQQGGLYLPYADSARIVVGAWWLVVLVLSTTYCGNLVAFLTFPNSDKPITTINELLNRRDTITWSITPASFFEYEIKMSNEPKHQILYQGSTKGIKNFEEMIKNIELGKHVHIDWKIRLQYIMKKQFLSKSTCDLSMSKEDFFEEKLGIIVAQDNPYLGRINREIKRLHQVGLIEKWLRDYLPKRDRCFKTKGGSGVNNHTVNLDDMQGCFFVLFLGCSISFLLICFERLFYKYQKKREKKVVQPFIS

>HoblIR68a

CINVLLFYFLQIFVQESEDLLSPHNKTQKSLLQIKHDDCQTYIILISNGQQVSRLLRYGDRYRILDTRAKFIMLHDHRLFHKSLHYLWKRIVNIIFIKEYVGMKKSGDTTIAIPWFEISTVPFPSPIHNVFVPKRLDIWRKSKFRSGVNLFQDKTSDLRNQTLNIVVMKHTPATTNTLLVQDDTVRAVMGDGSKGFAGLEVEILAAVSKAMNFKCKLYEAPNADVEFWGKKHPGGQYTGLIGEMIGGKADVALGDLYYTSYILELMDLTVPYNAECLTFLTPESLSDNSWKTLILPFKLFMWLAVIFCLFFCGIVFHYLAQFHCNINRLKRNAQNSDEIFPKKNQTLTLPTISIDQMNYNSKYFLMKQQFVTKRETNDPEGLYLFSDFSNSMLYTYSMLVMVSLPKLPTGWSLRMLVGWYWLYCTLVVVSYRASMTAILANPAPRVTIDTLQELVNSKLSYGSWSEVNKDLFKTSSDPISQTIGNNFQIIRNSSMAVEKVSEGKFALYENVYFLKEAFVIRQLQVQSATNSTENQVTEQVSNKPGERNLHIMKNCAINMPISIGLQKNSPIKPRADKYIRKVLEGGLIKKWLDDVMQPTLNAERPSTLQTTKALMSMQKFIGAIVALFIGYLIGFAALCTEIIYFHYIVKRHPNFNKYSRRIN

>Hobl SNMP1

MQFPARLALASGIILTCITIFGWVAFPNLIKSKIKTGVTLKPGSELREMYMKIPFAITFKIYVFNLTNPEDVAKGKTPIVQEVGPYMFEEWRSKVFVSEDDEDDTMTFYSKETFIFRPDQSSPLTGNEVLTIPHPLIVAILLTVVRDKPSALNLINKAMNSIFKNPKTPFLTATFKQIFFDGVIVNCSVSDFAGKAVCTQLKTEGAKDFEFIEENVFKFSLLGTKNGTASNKYKVKRGLKDYRDTGRVIEYNDMTELSVWPTKECNQFHGTEGTIFPGLTPHGSEIPSFAAMLCRSMGAKYLGDTKYNGIPVSRYTLDFGDQTNNPEDKCYCPSPDECMKKGVMDLRKCSGPVVASMPHFYNADPSYANGVKGVFPDKDKHELYLLFEITTGSPLAARNRLQFSMPLLPIPKVDVMKNCPDTLVPMFWVEESIDLNKTMTKPIKTMFVTMKTVRIISWIILLGTIGGLCYAAFLYYKRSREVQITPVKSVSQKKDNAISTVMTKSAGGVSNPAVSDNEIDKY

>Hobl SNMP2

MYKNCPIIVGVSGLAVLILGIVCTWYGFPALVESQINQNIILENGSQAFKVWQKQPFPLHFKVYFFNVTNPEEIMVGATPILREVGPYVYDLYIEREVTEVNEDADTIEYFLTKRFHFNPSMSGCRSDHEMVTIINAPLMGTLLKTNSISSHLLKMVHDGYQFIYPGIIDMFLRVQIKDLLFGGIPVYCSAQEITSLCSAMRFALPSTMKRAPNKMDFIFSMFGKFNETSFGPFEMTRGIKNTTRGSIISYQEEQMLDYWSGDLCNMLNGSDSGLYERMFEPVDKVYTFTPEICRSVGISFEKKMKKSNFVVYKYSGTQESLSHRGSDQCFCENVGDKNYECPLDGLVNLDSCLRAPIFMSNPHFYLADESLLNYTVGLAPRKRAHESFLILEPNTATPLKGAKRTQMNVEVKRFDLFPLTKYMPEGIFPILWIEEGMELPHNLLAHLENSFMKITMLDYIKWIIILAGIALMILSFILIMQQERLMCFSSKGSLTINDGKHMVTHIKAYDDMSFSPPSGYPKPDDPIFKLVAAHSNNNNNSSNVAWPYRE

2、將2日齡的華北大黑鰓金龜雄性成蟲150頭置于3個80cm×80cm×80cm的有機玻璃箱中，頂端開一個直徑1cm的小孔作透氣孔，養蟲箱內不放置任何寄主植物，饑餓處理24h；隨后將5個分別盛有1mL芳樟醇溶液玻璃瓶(5mL)分別放置于養蟲箱的四個角落和中間，打開玻璃瓶蓋子，瓶口封封口膜，封口膜上面用針扎5個小洞，用來緩慢揮發化合物，24h后提取華北大黑鰓金龜觸角總RNA，反轉錄成cDNA，用熒光定量PCR檢測不同嗅覺基因表達量的差異。同時以饑餓處理24h，正常飼養(以小葉女貞新鮮葉片飼養)24h的成蟲為對照，提取RNA，熒光定量檢測不同嗅覺基因表達量。以上處理設立3次重復。

以Actin為內參基因，引物序列見表1；qPCR反應體系及反應條件如下：

qPCR反應體系：

qPCR反應程序：95℃預變性60s；95℃5s，60℃15s，40個循環。

結果表明，華北大黑鰓金龜雄蟲對于其性信息素芳樟醇具有明顯的行為反應，其在對芳樟醇的識別過程中，OBP作為信息化合物的運輸載體，與芳樟醇識別相關的OBPs在其處理后表達量出現明顯變化。根據熒光定量PCR結果(圖1)，與飼喂新鮮樹葉的對照相比，利用芳樟醇處理華北大黑鰓金龜雄蟲后多個OBPs基因表達量顯著增加，其中OBP7、8、9、11、13、15、27、28蛋白表達量增加3倍以上，這些蛋白均可能在芳樟醇的識別中具有重要作用。

與傳統的逐個OBP功能研究相比，本方法一次即可獲得多個與化合物相關的OBPs，效率明顯提高，且3次生物學重復試驗穩定，誤差小。

實施例2華北大黑鰓金龜觸角中識別寄主植物揮發物反-2-己烯醇氣味結合蛋白的篩選

采用與實施例1相同的方法，用能引起華北大黑鰓金龜明顯行為反應的寄主植物揮發物反-2-己烯醇處理華北大黑鰓金龜雌性成蟲，同樣以饑餓處理24h，正常飼養(以小葉女貞新鮮葉片飼養)24h的成蟲為對照，提取RNA，熒光定量檢測不同嗅覺基因表達量。并設立3次重復。

結果表明，與飼喂新鮮樹葉的對照相比，利用反-2-己烯醇處理華北大黑鰓金龜雌蟲后多個OBPs基因表達量顯著增加，其中OBP4、9、13蛋白表達量極顯著增加，OBP11和16蛋白表達量也明顯增加(圖2)，這些蛋白均可能在反-2-己烯醇的識別中具有重要作用。

雖然，上文中已經用一般性說明及具體實施方案對本發明作了詳盡的描述，但在本發明基礎上，可以對之作一些修改或改進，這對本領域技術人員而言是顯而易見的。因此，在不偏離本發明精神的基礎上所做的這些修改或改進，均屬于本發明要求保護的范圍。

序列說明：

SEQ ID NO:1-52為熒光定量PCR所用引物序列。其中，SEQ ID NO:1-2為一對引物組合，SEQ ID NO:3-4為一對引物組合，以此類推。

序列表

<110> 中國農業科學院植物保護研究所

<120> 利用特異性揮發物篩選昆蟲相關嗅覺蛋白的方法

<130> KHP161116845.4Q

<160> 52

<170> PatentIn version 3.3

<210> 1

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 1

gccgcctctt caacttcttt a 21

<210> 2

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 2

ccacaggatt ccatacccaa g 21

<210> 3

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 3

attgtgggag atgatggtg 19

<210> 4

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 4

cggttctgct tatccttgt 19

<210> 5

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 5

ggaacagata cccgacagt 19

<210> 6

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 6

gatgtccttg accttctcg 19

<210> 7

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 7

cactgttgcc tggcgactat 20

<210> 8

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 8

atccttcacc agagtcagcg 20

<210> 9

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 9

gctgcccttt ctttctatc 19

<210> 10

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 10

tctcctgacc atcctttg 18

<210> 11

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 11

agaccaagtt ccaaatcagg 20

<210> 12

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 12

tcccatcaat cctccgtta 19

<210> 13

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 13

tgggctttca gtgtcttg 18

<210> 14

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 14

ctctattcgt tgttccgtct 20

<210> 15

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 15

gacaaggagc aaagtcaatg 20

<210> 16

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 16

cagccgcctc taacaaa 17

<210> 17

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 17

ggaatgatga tgacgacg 18

<210> 18

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 18

cccctccaaa cttgaaac 18

<210> 19

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 19

aaatagcgac ggcaaagaca ga 22

<210> 20

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 20

cacccatcat tatcatcgga ag 22

<210> 21

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 21

aatgtatggc agagttaggc 20

<210> 22

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 22

ttcgtcgcaa tcgtcaa 17

<210> 23

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 23

tccgacaaca aaagaaggc 19

<210> 24

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 24

ctggcaagcg tccaatac 18

<210> 25

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 25

gccgaaaagg agacgatta 19

<210> 26

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 26

gttatggctg ggcgtttta 19

<210> 27

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 27

catacgcaga aaccgcaaca 20

<210> 28

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 28

aacacgcctt catccgcat 19

<210> 29

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 29

atgacgaagc cgcaca 16

<210> 30

<211> 17

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 30

aaccaatcca gcccagt 17

<210> 31

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 31

tccagcactc attgataagg 20

<210> 32

<211> 16

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 32

gtttcgcaag catccg 16

<210> 33

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 33

aatcgttgtc gctttatgtg 20

<210> 34

<211> 21

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 34

atttcggatc tactcctgtt g 21

<210> 35

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 35

cgacggcact tactgatga 19

<210> 36

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 36

ggatcgtttt cgatttctcc 20

<210> 37

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 37

ccagatagaa gctgccaagc 20

<210> 38

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 38

tcatgtcccc attttggtct 20

<210> 39

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 39

tggaagatgt ccaagccttc 20

<210> 40

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 40

tttggaagcc caatttcttg 20

<210> 41

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 41

cccgatactt cgttagtgat 20

<210> 42

<211> 19

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 42

cgttgctgat tcctgtttg 19

<210> 43

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 43

tgaatgccgt tttaggaatc 20

<210> 44

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 44

accattccat gcgttcct 18

<210> 45

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 45

gtcaatacat ccccaaccat 20

<210> 46

<211> 20

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 46

atttgattaa cgatggtggc 20

<210> 47

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 47

gaagagttag gtttaggacc aa 22

<210> 48

<211> 22

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 48

gccgcaatca tcatcaccag tt 22

<210> 49

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 49

gaaatatctc caggaatg 18

<210> 50

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 50

ggtaacaggc taacaaac 18

<210> 51

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 51

ggacagtagc gtcataaa 18

<210> 52

<211> 18

<212> DNA

<213> 人工序列

<400> 52

aatcttcaat cgtctcgt 18