利用維生素B2提高乙偶姻產量的方法與流程

本發明屬于發酵工程技術領域，涉及一種利用維生素B2提高乙偶姻產量的方法。

背景技術：

乙偶姻是一種風味添加劑，可廣泛應用于制藥行業、化工行業等。保藏編號為CGMCC NO.7096的多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)CJX-518在生物代謝過程中主要產生2,3-丁二醇，也有少量的乙偶姻產生，目前，有研究報道通過外源添加維生素C來促進2,3-丁二醇的產量，但利用外源添加維生素B2來提高乙偶姻產量的報道尚未見到。

技術實現要素：

本發明的目的是克服現有技術的不足，提供一種利用維生素B2提高乙偶姻產量的方法。

本發明的技術方案概述如下：

一種利用維生素B2提高乙偶姻產量的方法，包括如下步驟：

將保藏編號為CGMCC NO.7096的多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)CJX-518培養獲得的種子按生物量為0.1～0.4的接種密度接入發酵培養基中，在32～42℃、攪拌轉速100～300rpm條件下發酵，在發酵0～24h時加入1～10g/L維生素B2，繼續發酵，得到含乙偶姻的發酵液；

所述發酵培養基按g/L配方:葡萄糖5-10，酵母粉1，蛋白胨10，NaCl 5，K₂HPO₄ 1，KCl 0.5,MgSO₄·7H₂O 0.7,FeSO₄·7H₂O 0.0003,MnSO₄·H₂O 0.005,pH 7.00，余量為水。

本發明的優點：

保藏編號為CGMCC NO.7096的多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)CJX-518在添加維生素B2的發酵培養基中培養，能提高乙偶姻的產量。

附圖說明

圖1為維生素B2對保藏編號為CGMCC NO.7096的多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)CJX-518發酵過程中乙偶姻產量的影響。

具體實施方式

本發明涉及的多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)，命名為Paenibacillus polymyxa CJX-518。并保藏于中國微生物菌種保藏管理委員會普通微生物中心，保藏號:CGMCC NO.7096。保藏地址為北京市朝陽區北辰西路1號院3號，保藏時間為2013年1月8日，并存活。以下將多粘類芽孢桿菌(Paenibacillus polymyxa)CJX-518保藏編號為CGMCC NO.7096簡稱CJX-518。

下面結合具體實施例對本發明作進一步的說明。

種子培養基(g/L)：葡萄糖5，淀粉30，酵母粉2，蛋白胨4，NaCl 0.5，K₂HPO₄ 1.5，MgSO₄·7H₂O 0.5，pH自然。

各實施例的種子是將CJX-518在種子培養基培養獲得。

實施例1

一種利用維生素B2提高乙偶姻產量的方法，包括如下步驟：

同時進行三組實驗，分別為1-1組；1-2組和1-3組：

分別將CJX-518種子按生物量為0.2的接種密度接入發酵培養基中，在37℃、攪拌轉速200rpm條件下發酵，1-1組在發酵0h時加入1g/L維生素B2；1-2組在發酵12h時加入1g/L維生素B2；1-3組在發酵24h時加入1g/L維生素B2，繼續發酵，使發酵的總時間72小時，得到含乙偶姻的發酵液；

空白組為將CJX-518種子按生物量為0.2的接種密度接入發酵培養基中，在37℃、攪拌轉速200rpm條件下發酵，使發酵的總時間72小時，得到含乙偶姻的發酵液；

1-1組乙偶姻的產量是3.7g/L；1-2組乙偶姻的產量是3.8g/L和1-3組乙偶姻產量是4g/L。其中1-3組的乙偶姻產量見圖1。

空白組乙偶姻產量是1.8g/L。

三個實驗組和一個空白組發酵培養基按g/L配方:葡萄糖5，酵母粉1，蛋白胨10，NaCl 5，K₂HPO₄ 1，KCl 0.5,MgSO₄·7H₂O 0.7,FeSO₄·7H₂O 0.0003,MnSO₄·H₂O 0.005,pH 7.00，余量為水。

圖1中：PP(PP為Paenibacillus polymyxa簡寫)為空白組；PP+Vb2(1-3組)，從圖中可以看出，在發酵16h時有乙偶姻產生，在在發酵24h時，加入Vb2，發酵總時間在72h時，乙偶姻產量為4g/L。

實施例2

一種利用維生素B2提高乙偶姻產量的方法，包括如下步驟：

實驗組是將CJX-518種子按生物量為0.1的接種密度接入發酵培養基中，在32℃、攪拌轉速100rpm條件下發酵，在發酵0h時加入5g/L維生素B2，繼續發酵，使發酵的總時間72小時，得到含乙偶姻的發酵液；

空白組為將CJX-518種子按生物量為0.1的接種密度接入發酵培養基中，在32℃、攪拌轉速100rpm條件下發酵，使發酵的總時間72小時，得到含乙偶姻的發酵液；

所述發酵培養基按g/L配方:葡萄糖8，酵母粉1，蛋白胨10，NaCl 5，K₂HPO₄ 1，KCl 0.5,MgSO₄·7H₂O 0.7,FeSO₄·7H₂O 0.0003,MnSO₄·H₂O 0.005,pH 7.00，余量為水。

乙偶姻的產量3.9g/L，空白組乙偶姻產量是1.92g/L

實施例3

一種利用維生素B2提高乙偶姻產量的方法，包括如下步驟：

將CJX-518種子按生物量為0.4的接種密度接入發酵培養基中，在42℃、攪拌轉速300rpm條件下發酵，在發酵24h時加入10g/L維生素B2，繼續發酵，使發酵的總時間72小時，得到含乙偶姻的發酵液；

空白組為將CJX-518種子按生物量為0.4的接種密度接入發酵培養基中，在42℃、攪拌轉速300rpm條件下發酵，使發酵的總時間72小時，得到含乙偶姻的發酵液；

所述發酵培養基按g/L配方:葡萄糖10，酵母粉1，蛋白胨10，NaCl 5，K2HPO4 1，KCl 0.5,MgSO₄·7H₂O 0.7,FeSO₄·7H₂O 0.0003,MnSO₄·H₂O 0.005,pH 7.00，余量為水。

乙偶姻的產量是3.87g/L，空白組乙偶姻產量是1.7g/L。