本發明屬于N-苯酰胺-肟類化合物，尤其涉及具有抗乙肝病毒活性的N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物。
背景技術：
乙型病毒性肝炎(viral hepatitis type B)，簡稱乙肝，是由乙型肝炎病毒(Hepatitis B virus，HBV)引起的常見傳染病，具有傳染性強、流行面廣泛、傳播途徑復雜、發病率較高等特點。乙肝是一個嚴重的全球衛生問題，可造成慢性肝病和慢性感染，其患者死于肝硬化和肝癌的風險很高。全球約1/2人口生活在HBV易感染地區，約20億人被證明曾感染HBV，3-4億人為HBV慢性感染，每年約78萬人死于急性或慢性乙肝，在世界上導致死亡的病因中列居第10。中國是全世界感染乙肝病毒人數最多的國家，全國約6.9億人曾感染乙肝病毒，其中1.2億人長期攜帶乙肝病毒。
乙肝的治療措施主要包括抗病毒、免疫調節、抗炎保肝、抗纖維化等，其中抗病毒是關鍵。目前，抗病毒藥物有兩大類，干擾素和核苷類似物。干擾素存在價格昂貴等問題。核苷類似物是20世紀80年代以來抗病毒藥物研究的焦點，成為目前乙肝治療的首選藥物，用的比較多的有拉米夫定、恩替卡韋、阿德福韋酯、替比夫定等，該類藥物競爭參與了HBV中DNA的合成，導致HBV DNA合成受到干擾和終止，但是核苷類藥物長期服用會導致普遍的耐藥性和停藥反跳。
為改善目前核苷類似物藥物使用中HBV產生耐藥性等問題，亟待尋找一些與核苷類藥物結構和作用機理不同的新藥物是目前抗HBV藥物開發的方向之一。
技術實現要素：
本發明要解決的技術問題是提供具有抗乙肝病毒活性的N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物。
為解決上述技術問題，本發明采用以下技術方案：
具有抗乙肝病毒活性的N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物，其結構為以下通式：
其中，R1代表CH3、OCH3、Cl；R2代表H、CH3、
N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物分別具有以下的結構式：
第一種化合物
第二種化合物
第三種化合物
第四種化合物
第五種化合物
第六種化合物
第七種化合物
第八種化合物
第九種化合物
上述N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物在制備抗乙肝病毒藥物方面的應用。
經長期研究探索，發明人發現了具有抗乙肝病毒活性的N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物，其結構為以下通式：
通過體外HepG2.2.15細胞活性實驗證實，本發明的N-苯基-4-苯基丁酰胺肟對HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)都具有一定抑制作用。相同條件下，陽性對照藥物拉米夫定對HBsAg和HBeAg的抑制率分別為50.9％和45.2％，而本發明的化合物對HBsAg和HBeAg的抑制率最高可達91.7％和59.5％。由于本發明的新型N-苯基-4-苯基丁酰胺肟與核苷類似藥物的結構不同，既具有顯著的抑制HBV活性而且毒性低，有望進一步開發成為抗乙肝病毒的新藥。
具體實施方式
本發明的N-苯基-4-苯基丁酰胺肟，可按以下步驟制備：
1)稱取1當量(50mmol)的甲苯、苯甲醚或氯苯于250mL的單口圓底燒瓶，加入50mL的二氯甲烷，裝上CaCl2干燥管，冰浴條件下分批加入2當量(100mmol)無水AlCl3，0.5h加完，繼續冰浴攪拌20min后，室溫攪拌過夜。TLC檢測，原料完全反應后，加入稀釋冰鹽酸停止反應(pH＜3)，得到白色固體，抽濾，依次用水(3×50mL)、飽和食鹽水(3×50mL)洗，最后用EtOH/H2O重結晶得到4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酸、4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酸或4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酸。
2)稱取1當量(10mmol)步驟1)制得的4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酸、4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酸或4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酸，1當量(10mmol)的苯胺，5％4-二甲氨基吡啶于100mL的單口圓底燒瓶，加入20mL四氫呋喃，裝上CaCl2干燥管，冰浴攪拌10min，分批加入1.1當量(11mmol)的二環己基碳二亞胺，20min加完，繼續冰浴攪拌0.5h后，室溫攪拌，TLC檢測，原料完全反應后，加入1mL水繼續攪拌(除去多余的二環己基碳二亞胺)，10min后停止反應。抽濾除去反應過程中生成的白色固體二環己基脲，濾液用減壓蒸餾除去溶劑后用EtOH/H2O重結晶得到白色晶體N-苯基-4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酰胺、N-苯基-4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺或N-苯基-4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
3)稱取1當量(10mmol)步驟2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酰胺、N-苯基-4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺或N-苯基-4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酰胺，1.2當量(12mmol)的鹽酸羥胺，1.2當量(12mmol)的吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，待原料反應完全后，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為4∶1∶1的溶劑，進行洗脫，得到第一種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺，第四種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺和第七種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
4)稱取1當量(10mmol)步驟2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酰胺、N-苯基-4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺或N-苯基-4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酰胺，1.2當量(12mmol)的鹽酸甲氧胺，1.2當量(12mmol)的吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，原料完全反應后，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為12∶2∶1的溶劑，進行洗脫，得到第二種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺，第五種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺和第八種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
5)稱取1當量(10mmol)步驟2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酰胺、N-苯基-4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺或N-苯基-4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酰胺，1.2當量(12mmol)的鹽酸芐氧胺，1.2當量(12mmol)的吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，待到原料完全反應后，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為12∶2∶1的溶劑，進行洗脫，得到第三種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺，第六種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺和第九種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
為進一步說明本發明如何制備本發明的N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物，參考上述制備步驟列舉如下實施例。
實施例1第一種化合物的制備
(1)稱取10mmol甲苯于250mL的單口圓底燒瓶，加入20mL的二氯甲烷，插上裝有CaCl2的干燥管，冰浴條件下分批加入20mmol無水AlCl3，0.5h加完，繼續冰浴攪拌20min后，室溫攪拌過夜。TLC檢測，原料完全反應后，加入稀釋的冰鹽酸停止反應(pH＜3)，得到白色固體，抽濾，依次用水(3×50mL)、飽和食鹽水(3×50mL)洗，最后用EtOH/H2O重結晶得到4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酸。
(2)稱取10mmol實施例步驟(1)制得的4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酸，10mmol苯胺，5％4-二甲氨基吡啶于100mL的單口圓底燒瓶，加入20mL四氫呋喃，裝上裝有CaCl2的干燥管，冰浴攪拌10min，分批加入11mmol二環己基碳二亞胺，20min加完，繼續冰浴攪拌0.5h后，室溫攪拌，TLC檢測，反應6h后沒有原料點，加入1mL水繼續攪拌(除去多余的二環己基碳二亞胺)，10min后停止反應。抽濾除去反應過程中生成的白色固體二環己基脲，濾液用減壓蒸餾除去溶劑后加入50mL水，乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮后用EtOH/H2O重結晶得到白色晶體N-苯基-4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酰胺。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸羥胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，7h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為4∶1∶1的溶劑，進行洗脫，得到第一種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺。
第一種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：分子式17H18N2O2分子量：282.33；
理化性質：白色晶體，熔點160.0～160.9℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水；
核磁共振數據1H NMR(600MHz，MeOD)δ：7.44(d，J＝8.2Hz，2H，H-6，10)，7.37(dd，J＝8.6，1.0Hz，2H，H-2’，6’)，7.19-7.13(m，2H，H-3’，5’)，7.06(d，J＝8.0Hz，2H，H-7，9)，6.98-6.93(m，1H，H-4’)，3.05-3.00(m，2H，H-3)，2.53-2.47(m，2H，H-2)，2.21(s，3H，H-11)；13C NMR(151MHz，MeOD)δ：171.83(C-1)，157.19(C-4)，138.76(C-8)，138.38(C-1’)，132.96(C-5)，128.75(C-7，9)，128.32(C-3’，5’)，125.96(C-6，10)，123.77(C-4’)，120.01(C-2’，6’)，32.98(C-2)，21.80(C-3)，19.86(C-11).質譜數據ESIMS：m/z305.1261[M+Na]+.
實施例2第二種化合物的制備
(1)與實施例1的步驟(1)相同。
(2)與實施例1的步驟(2)相同。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸甲氧胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，6h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為12∶2∶1的溶劑，進行洗脫，得到第二種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺。
第二種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：C18H20N2O2分子量296.36；
理化性質：白色晶體，熔點94.4～95.3℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水；
核磁數據1H NMR(600MHz，DMSO)δ：9.91(s，1H，H-NH)，7.58(t，J＝8.4Hz，4H，H-6，10，2’，6’)，7.31-7.26(m，2H，H-3’，5’)，7.22(d，J＝8.0Hz，2H，H-7，9)，7.02(t，J＝7.4Hz，1H，H-4’)，3.91(s，3H，H-1”)，3.01-2.96(m，2H，H-3)，2.52-2.48(m，2H，H-2)，2.32(s，3H，H-11)；13C NMR(151MHz，DMSO)δ：170.26(C-1)，157.46(C-4)，139.62(C-1’)，139.30(C-8)，132.45(C-5)，129.58(C-7，9)，129.12(C-3’，5’)，126.56(C-6，10)，123.53(C-4’)，119.56(C-2’，6’)，62.12(C-1”)，33.40(C-2)，22.43(C-3)，21.27(C-11).質譜數據ESIMS：m/z 297.1607[M+H]+，319.1411[M+Na]+.
實施例3第三種化合物的制備
(1)與實施例1的步驟(1)相同。
(2)與實施例1的步驟(2)相同。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲基苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸芐氧胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，6h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為12∶2∶1的溶劑，進行洗脫，得到第三種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺。
第三種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-甲基苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：C24H24N2O2分子量：372.45；
理化性質：白色晶體，熔點119.5～120.5℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水；
核磁共振數據1H NMR(600MHz，DMSO)δ：9.95(s，1H，H-NH)，7.53(dd，J＝7.5，5.1Hz，4H，H-6，10，2’，6’)，7.38(d，J＝7.4Hz，2H，H-3”，7”)，7.34(t，J＝7.4Hz，2H，H-4”，6”)，7.30-7.25(m，3H，H-3’，5’，5”)，7.19(d，J＝7.9Hz，2H，H-7，9)，7.03(t，J＝7.4Hz，1H，H-4’)，5.17(s，2H，H-1”)，3.06-2.98(m，2H，H-3)，2.51(dd，J＝8.1，6.6Hz，2H，H-2)，2.28(s，3H，H-11)；13C NMR(151MHz，DMSO)δ：170.46(C-1)，157.93(C-4)，139.50(C-8)，139.36(C-1’)，138.47(C-2”)，132.34(C-5)，129.60(C-7，9)，129.15(C-3’，5’)，128.79(C-3”，7”)，128.27(C-4”，6”)，128.14(C-5”)，126.56(C-6，10)，123.77(C-4’)，119.72(C-2’，6’)，75.80(C-1”)，33.26(C-2)，22.52(C-3)，21.21(C-11).質譜數據ESIMS：m/z373.2[M+H]+，395.1[M+Na]+.
實施例4第四種化合物的制備
(1)稱取10mmol苯甲醚于250mL的單口圓底燒瓶，加入20mL的二氯甲烷，插上裝有CaCl2的干燥管，冰浴條件下分批加入20mmol無水AlCl3，0.5h加完，繼續冰浴攪拌20min后，室溫攪拌過夜。TLC檢測，原料完全反應后，加入稀釋的冰鹽酸停止反應(pH＜3)，得到白色固體，抽濾，依次用水(3×50mL)、飽和食鹽水(3×50mL)洗，最后用EtOH/H2O重結晶得到4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酸。
(2)稱取10mmol實施例步驟(1)制得的4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酸，10mmol苯胺，5％4-二甲氨基吡啶于100mL的單口圓底燒瓶，加入20mL四氫呋喃，裝上裝有CaCl2的干燥管，冰浴攪拌10min，分批加入11mmol二環己基碳二亞胺，20min加完，繼續冰浴攪拌0.5h后，室溫攪拌，TLC檢測，反應6h后沒有原料點，加入1mL水繼續攪拌(除去多余的二環己基碳二亞胺)，10min后停止反應。抽濾除去反應過程中生成的白色固體二環己基脲，濾液用減壓蒸餾除去溶劑后加入50mL水，乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮后用EtOH/H2O重結晶得到白色晶體N-苯基-4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸羥胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，7h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為4∶1∶1的溶劑，進行洗脫，得到第四種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺。
第四種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：C17H18N2O3分子量：298.33；
理化性質：白色晶體，熔點161.4～162.0℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水；
核磁共振數據1H NMR(600MHz，CD3OD_SPE)δ：7.51-7.48(m，2H，H-6，10)，7.40-7.36(m，2H，H-2’，6’)，7.19-7.14(m，2H，H-3’，5’)，6.98-6.94(m，1H，H-4’)，6.82-6.78(m，2H，H-7，9)，3.68(s，3H，H-11)，3.05-2.99(m，2H，H-3)，2.53-2.47(m，2H，H-2)；13C NMR(151MHz，CD3OD_SPE)δ：171.86(C-1)，160.52(C-8)，156.93(C-4)，138.38(C-1’)，128.32(C-3’，5’)，128.13(C-5)，127.38(C-6，10)，123.77(C-4’)，120.01(C-2’，6’)，113.47(C-7，9)，54.35(C-11)，33.03(C-2)，21.76(C-3).質譜數據ESIMS：m/z297.1231[M-H]-.
實施例5第五種化合物的制備
(1)與實施例4的步驟(1)相同。
(2)與實施例4的步驟(2)相同。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸甲氧胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，6h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為12∶2∶1的溶劑，進行洗脫，得到第五種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺。
第五種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：分子式C18H20N2O3分子量：312.36；
理化性質：白色晶體，熔點125.6～126.5℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水；
核磁共振數據1H NMR(600MHz，DMSO)δ：9.95(s，1H，H-NH)，7.68(d，J＝8.6Hz，2H，H-6，10)，7.61(d，J＝8.0Hz，2H，H-2’，6’)，7.32(t，J＝7.7Hz，2H，H-3’，5’)，7.06(t，J＝7.3Hz，1H，H-4’)，7.00(d，J＝8.6Hz，2H，H-7，9)，3.94(s，3H，H-1”)，3.82(s，3H，H-11)，3.04-2.99(m，2H，H-3)，2.54(t，J＝8.0Hz，2H，H-2)；13C NMR(151MHz，DMSO)δ：170.32(C-1)，160.62(C-8)，157.12(C-4)，139.61(C-1’)，129.12(C-3’，5’)，128.05(C-6，10)，127.57(C-5)，123.54(C-4’)，119.58(C-2’，6’)，114.39(C-7，9)，62.04(C-1”)，55.67(C-11)，33.45(C-2)，22.38(C-3).質譜數據ESIMS：m/z 313.1551[M+H]+，355.1367[M+Na]+.
實施例6第六種化合物的制備
(1)與實施例4的步驟(1)相同。
(2)與實施例4的步驟(2)相同。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸芐氧胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，6h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為12∶2∶1的溶劑，進行洗脫，得到第六種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺。
第六種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-甲氧基苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：C24H24N2O3分子量388.45；
理化性質：白色晶體，熔點119.0～119.6℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水。
核磁共振數據1H NMR(600MHz，DMSO)δ：9.92(s，1H，H-NH)，7.66-7.60(m，2H，H-6，10)，7.57(d，J＝7.6Hz，2H，H-2’，6’)，7.41(d，J＝7.2Hz，2H，H-3”，7”)，7.39-7.33(m，2H，H-4”，6”)，7.32-7.26(m，3H，H-3’，5’，5”)，7.03(t，J＝7.4Hz，1H，H-4’)，6.98-6.94(m，2H，H-7，9)，5.19(s，2H，H-1”)，3.77(s，3H，H-11)，3.06-3.00(m，2H，H-3)，2.55-2.51(m，2H，H-2)；13C NMR(151MHz，DMSO)δ：170.30(C-1)，160.66(C-8)，157.55(C-4)，139.59(C-1’)，138.64(C-2”)，129.13(C-3’，5’)，128.78(C-3”，7”)，128.31(C-4”，6”)，128.11(C-6，10)，128.10(C-5”)，127.57(C-5)，123.56(C-4’)，119.58(C-2’，6’)，114.41(C-7，9)，75.74(C-1”)，55.69(C-11)，33.37(C-2)，22.46(C-3).質譜數據ESIMS：m/z389.1870[M+H]+，411.1676[M+Na]+.
實施例7第七種化合物的制備
(1)稱取10mmol氯苯于250mL的單口圓底燒瓶，加入20mL的二氯甲烷，插上裝有CaCl2的干燥管，冰浴條件下分批加入20mmol無水AlCl3，0.5h加完，繼續冰浴攪拌20min后，室溫攪拌過夜。TLC檢測，原料完全反應后，加入稀釋的冰鹽酸停止反應(pH＜3)，得到白色固體，抽濾，依次用水(3×50mL)、飽和食鹽水(3×50mL)洗，最后用EtOH/H2O重結晶得到4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酸。
(2)稱取10mmol實施例步驟(1)制得的4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酸，10mmol苯胺，5％4-二甲氨基吡啶于100mL的單口圓底燒瓶，加入20mL四氫呋喃，裝上裝有CaCl2的干燥管，冰浴攪拌10min，分批加入11mmol二環己基碳二亞胺，20min加完，繼續冰浴攪拌0.5h后，室溫攪拌，TLC檢測，反應6h后沒有原料點，加入1mL水繼續攪拌(除去多余的二環己基碳二亞胺)，10min后停止反應。抽濾除去反應過程中生成的白色固體二環己基脲，濾液用減壓蒸餾除去溶劑后加入50mL水，乙酸乙酯萃取(3×50mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮減壓濃縮后用EtOH/H2O重結晶得到白色晶體N-苯基-4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸羥胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，8h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為4∶1∶1的溶劑，進行洗脫，得到第七種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
第七種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-羥基亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：C16H13ClN2O2分子量：302.75；
理化性質：白色晶體，熔點154.8～155.6℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水；
核磁共振數據1H NMR(600MHz，Me0D)δ：7.59-7.51(m，2H，H-6，10)，7.37(dd，J＝8.5，1.0Hz，2H，H-2’，6’)，7.27-7.21(m，2H，H-7，9)，7.20-7.12(m，2H，H-3’，5’)，7.00-6.92(m，1H，H-4’)，3.03(dd，J＝8.6，7.3Hz，2H，H-3)，2.51(dd，J＝9.3，6.6Hz，2H，H-2)；13C NMR(151MHz，MeOD)δ：171.69(C-1)，155.88(C-4)，138.33(C-1’)，134.59(C-8)，134.44(C-5)，128.34(C-3’，5’)，128.20(C-7，9)，127.48(C-6，10)，123.81(C-4’)，120.00(C-2’，6’)，32.85(C-2)，21.55(C-3).質譜數據ESIMS：m/z301.0737[M-H]-.
實施例8第八種化合物的制備
(1)與實施例7步驟(1)相同。
(2)與實施例7步驟(2)相同。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸甲氧胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，6h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為12∶2∶1的溶劑，進行洗脫，得到第八種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
第八種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-甲氧亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：C17H17ClN2O2分子量：316.78；
理化性質：白色晶體，熔點151.3～152.4℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水；
核磁共振數據1H NMR(600MHz，DMSO)δ：9.91(s，1H，H-NH)，7.71(d，J＝8.5Hz，2H，H-6，10)，7.55(d，J＝7.6Hz，2H，H-2’，6’)，7.48(dd，J＝8.4，1.4Hz，2H，H-7，9)，7.28(t，J＝7.8Hz，2H，H-3’，5’)，7.03(t，J＝7.3Hz，1H，H-4’)，3.93(s，3H，H-1”)，2.99(t，J＝8.0Hz，2H，H-3)，2.54-2.47(m，2H，H-2)；13C NMR(151MHz，DMSO)δ：170.17(C-1)，156.75(C-4)，139.54(C-1’)，134.46(C-8)，134.13(C-5)，129.13(C-3’，5’)，129.03(C-7，9)，128.47(C-6，10)，123.57(C-4’)，119.57(C-2’，6’)，62.36(C-1”)，33.21(C-2)，22.35(C-3).質譜數據ESIMS：m/z317.1048[M+H]+，339.0866[M+Na]+.
實施例9第九種化合物的制備
(1)與實施例7步驟(1)相同。
(2)與實施例7步驟(2)相同。
(3)稱取10mmol實施例步驟(2)制得的N-苯基-4-氧代-4-(4-氯苯基)丁酰胺，12mmol鹽酸芐氧胺，12mmol吡啶于100mL的圓底燒瓶，加入20mL二氯甲烷，70℃攪拌反應，TLC檢測，6h后沒有原料點，停止反應。減壓蒸餾除去溶劑，加入20mL水，乙酸乙酯萃取(3×20mL)，合并有機層，并依次用水(3×20mL)、飽和食鹽水(3×20mL)洗滌，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，通過硅膠柱層析分離，流動相組成為：石油醚(沸點60-90℃)∶乙酸乙酯∶二氯甲烷的體積比為12∶2∶1的溶劑，進行洗脫，得到第九種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
第九種化合物的化學名稱為：(E)-N-苯基-4-芐氧亞氨基-4-(4-氯苯基)丁酰胺。
結構式：
分子式：C23H21ClN2O2分子量：392.8780；
理化性質：白色晶體，熔點116.0～117.9℃。溶于氯仿、乙酸乙酯、丙酮、甲醇和乙醇中，難溶于水；
核磁共振數據1H NMR(600MHz，DMSO)δ：9.95(s，1H，H-NH)，7.70(t，J＝8.3Hz，2H，H-6，10)，7.56(dd，J＝22.3，8.0Hz，2H，H-2’，6’)，7.47(d，J＝7.2Hz，2H，H-7，9)，7.42(t，J＝6.9Hz，2H，H-3”，7”)，7.36(dd，J＝6.4，5.3Hz，2H，H-4”，6”)，7.33-7.25(m，3H，H-3’，5’，5”)，7.03(dd，J＝12.2，6.3Hz，1H，H-4’)，5.22(s，2H，H-1”)，3.13-2.98(m，2H，H-3)，2.55(dt，J＝16.4，8.2Hz，2H，H-2)；13C NMR(151MHz，DMSO)δ：170.16(C-1)，157.17(C-4)，139.58(C-1’)，138.36(C-2”)，134.54(C-8)，134.14(C-5)，129.12(C-3’，5’)，129.04(C-7，9)，128.81(C-3”，7”)，128.50(C-6，10)，128.34(C-4”，6”)，128.19(C-5”)，123.57(C-4’)，119.59(C-2’，6’)，76.08(C-1”)，33.18(C-2)，22.46(C-3).質譜數據ESIMS：m/z393.1370[M+H]+，415.1164[M+Na]+.
體外抗HBV實驗
體外試驗實施例1至9所得N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物對HepG2 2.2.15細胞的毒性以及對HBsAg和HBeAg的抑制。
培養HepG2 2.2.15細胞所用DMEM培養基為含10％胎牛血清、0.03％谷氨酰胺、G418 380μg/ml和卡那霉素50μg/ml的溶液。培養條件為37℃、5％CO2，2-3天換一次培養液，4-5天傳代一次。N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物分別用DMSO配成母液，4℃保存，臨用時用DMEM培養基配成所需濃度。
HepG2 2.2.15細胞接種于96孔板中的DMEM培養基中，分別加入N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物處理9天。第9天除去上清液后加入DMEM培養基，每孔加入20μL MTT(5mg/mL)，37℃再培養4h，實驗結束，棄掉上清液，每孔加入150μL DMSO溶解孔內生成的MTT-甲瓚，用酶標儀在490nm波長檢測各孔吸光度值，對各孔細胞生成的甲瓚進行定量。與對照組(細胞存活率100％)進行比較，計算出各孔細胞存活率，以判斷藥物的細胞毒作用。
HepG22.2.15細胞以1×106/mL接種于96孔板的培養液中，培養24小時后分別加入不同濃度的各種N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物的DMSO溶液。設無血清培養基組為陰性對照組，拉米夫定組為陽性對照組。實驗設計為時間依從性，加入N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物后每3天收集上清液一次，再加入含有N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物的DMEM培養基，共孵育9天。收集第9天上清液，用ELISA法檢測HepG2 2.2.15細胞上清液中HBsAg和HBeAg。
表1化合物對HepG2 2.2.15細胞的細胞毒性作用和對HBsAg和HBeAg的抑制作用
實驗結果表明，本發明的N-苯基-4-苯基丁酰胺肟及其衍生物對HBV表面抗原(HBsAg)和e抗原(HBeAg)都具有一定抑制作用，相同條件下的陽性對照藥物拉米夫定的對HBsAg和HBeAg的抑制率分別為50.9％和45.2％，本發明中的化合物對HBsAg和HBeAg的抑制率最高可達91.7％和59.5％優于拉米夫定。由于本發明的新型N-苯基-4-苯基丁酰胺肟與核苷類似藥物的結構不同，既具有顯著的抑制HBV活性而且毒性低，有望進一步開發成為抗乙肝病毒的新藥。