本發明涉及化工提取技術領域，尤其是一種甜茶苷的提取方法。
背景技術：
廣西甜茶Rubus Suatrssimus S.Lee是薔薇科多年生藤木，為廣西特有的多年生無毒、低熱能、高甜度和具有保健功能的野生珍稀甜味植物，主產于廣西的瑤山、金秀、永福和岑溪等縣市。由于其味甜，故名甜茶。與羅漢果、合浦珍珠、廣西香料等齊名為廣西四大名品。在廣西民間具有悠久的應用歷史，長期以來當地人民一直當茶飲用，亦用來代糖加工食品，還可入藥。
甜茶葉的主要成分有甜茶苷、生物類黃酮、茶多酚、氨基酸、無機鹽、硒、鍺等。 主要甜味成分是甜茶苷，為斯替維醇和葡萄糖結合而成的四環二萜苷， 分子式 C20H50O13, 在化學結構上與甜葉菊苷（斯替維苷）相似。甜茶苷是一種高甜度低熱量的天然甜味劑，拿常見的蔗糖作對比，甜茶苷的甜度為它的300倍，而熱值僅是它的5%。經藥理實驗，甜茶苷能激活人的胰島素，具有降血糖、降血壓、促進新陳代謝、抑制胃酸過多，清熱潤肺、生生津解渴、降低血膽固醇、抑制和廷緩血管硬化、防治冠心病和糖尿病，并有高甜度、低熱值的特性，不但可作為藥用，還是口感好，是一種品質優良的食品添加劑、調味品，可代替蔗糖用于高血壓、糖尿病、肥胖癥、腎虛病等患者以及老年人和兒童的食品、保健品和藥品中。
以下是檢索到的專利：
1. 中國專利，名稱：一種從甜茶葉中提取甜茶苷的生產方法，申請號：201210302985.4，公布號：CN 102838644 A，申請人：長沙綠蔓生物科技有限公司，發明人：張寶堂，文晴，摘要：本發明提供了一種從甜茶中提取甜茶苷的生 產方法。該方法的工藝流程如下：甜茶原料藥破碎→溶劑提取→濃縮→乙醇沉淀→大孔樹脂純化→濃縮→聚酰胺樹脂層析→濃縮→結晶和重結晶→干燥→成品。使用該方法能生產出高品質的甜茶苷產品，減少物料損失，縮短生產周期，提高產品收率，降低生產成本，并且適合于工業化生產。利用該方法生產出的甜茶苷純度高于98%，產品純度高，成分較單一；顏色純白，色澤好；同時克服了工業化生產高含量高品質的甜茶提取物的技術難點，順利的實現了規模化生產。
2.中國專利，名稱：一種提取甜茶苷的新方法，申請號：201410402940.3，公布號：CN 104262425 A，申請人：桂林萊茵生物科技股份有限公司，發明人：趙軍，楊文國，李元元，羅勇為，黃華鳳，摘要：本發明涉及一種提取甜茶苷的新方法，包括：原料粉碎、溶劑提取、膜濃縮、離心、調 pH值、大孔樹脂純化、堿酸處理、洗脫、濃縮、復合離子交換樹脂層析、濃縮、結晶、干燥后得到成品，本方法能夠得到純度99％的甜茶苷產品，并且產品雪白，無苦味，溶劑殘留少，無農藥殘留。同時本方法大大減少了生產工序，節約生產成本，工藝穩定性好。
3. 中國專利，名稱：一種高純度甜茶苷的制備方法，申請號：201510627954.X，公布號：CN 105166198 A，申請人：重慶驕王天然產物股份有限公司，發明人：楊剛柱，徐小琴，衛偉，薛榮濤，摘要：一種高純度甜茶苷的制備方法，涉及食品加工領域。針對上述缺點，提供一種處理過程簡單，無污染、能耗低，產物純度高的高純度甜茶苷制備方法。該制備方法包括以下步驟 ：（1）將甜茶葉粉碎，經水提取后得到甜茶粉提取液；（2）提取液經中空纖維超濾膜和反滲透膜，得到濃縮液；（3）濃縮液干燥、粉碎，得到甜茶苷粗品；（4）甜茶苷粗品用乙醇溶解，過濾，重結晶，得到一次結晶產物；（5）一次結晶產物用乙醇溶解，過濾，重結晶，得到高純度甜茶苷。該制備方法處理過程無污染，通過膜系統使得分離和濃縮步驟合一，降低處理難度，得到的甜茶苷純度可以達到98%以上。
國內外對甜茶苷的分離提取、測試及藥理等方面進行了研究，對小規模提取較高純度的甜茶苷也有報道，但高含量的甜茶苷工業化生產報道不多。
技術實現要素：
本發明的目的是提供一種提取率高，物料損失少，產品純度高，低毒環保，適合于工業化大生產，所得產品純度高、無雜質的甜茶苷純品的制備方法。
本發明公開了一種甜茶苷天然香料的提取方法，包括如下步驟：
（1）酶解水提：將甜茶洗凈，粉碎到50-100目，超聲波提取2次，每次60-70min，第一次提取中，加入甜茶質量8-10倍，pH為5.0-5.5的緩沖溶液對甜茶進行提取，并加入纖維素酶，在30-40℃下提取，提取完成后于90℃進行酶滅活10min，第二次提取中，加入甜茶質量8-10倍，溫度為70-90℃的純水對甜茶進行提取；
（2）微波醇提：將步驟（1）得到的提取液合并濃縮，與濾渣一起置于微波提取裝置中，微波功率為300-400W，溫度為30-70℃，用體積分數為70-90%的乙醇溶液提取30-40min，離心過濾；
（3）大孔樹脂柱層析：將步驟（2）中的提取液減壓濃縮，用體積分數為50-70%的丙酮溶液溶解，溶解液通過大孔樹脂柱進行洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。
（4）聚酰胺樹脂柱純化：將浸膏與聚酰胺樹脂攪拌均勻，裝入聚酰胺樹脂層析柱，先用純水淋洗除雜，再用體積分數為10%-30%的乙醇溶液淋洗除雜，最后用體積分數為50%-70%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得甜茶苷提取物。
以上所述步驟（1）中所述緩沖溶液是鹽酸與磷酸二氫鈉配置成的緩沖溶液。
以上所述步驟（4）中所述大孔樹脂型號為AB-8、D101、HP20、HPD400、HPD-400A、HPD450或X-5。
以上所述甜茶苷提取物用于甜味劑，在醫藥上用于中藥的復方制劑。
本發明通過將干燥過后的甜茶葉，粉碎過篩，酶解，水提，微波醇提，過大孔樹脂吸附，丙酮洗脫，聚酰胺樹脂純化，噴霧干燥得到提取率不低于80%，純度不低于99%的甜茶苷純品。相對于現有技術具有以下技術效果的優勢 ：
1） 采用酶解法：纖維素酶可以破壞細胞壁結構，使細胞中的有效成分滲透出來，大大提高了產率，通過超聲波震蕩，加快了細胞壁的破裂，有利于活性成分的浸出與分離，提取速度大大加快，從而縮短了提取時間，提高了效率。
2） 將濃縮物加入乙醇溶液沉淀出不溶物，能有效將氨基酸等不溶物除去，提高產品純度。采用微波輔助提取方法又進一步提高了產率。
3） 本發明中，采用的是非極性大孔樹脂，由于該樹脂具有相當大的比表面積和適宜的孔徑，對苷類物質有特殊的選擇性，能將甜茶中的黃酮類物質、酚性物質、氨基酸等分開，保證了產品純度，丙酮作為洗脫劑的洗脫率最高80%以上洗脫效果更佳；
4） 本發明中還采用了聚酰胺樹脂層析，分三步分離純化甜茶苷，先用水和低濃度乙醇淋洗去除極性低的雜質，再用高濃度乙醇洗脫出有效成分，保證了產品純度，其分離操作簡單，易控制。
5）該方法中采用的溶劑、樹脂等都能循環使用，能降低物料損失，提高產品得率。
6）本發明工藝所得的甜茶苷的提取率不低于80%，純度不低于99%，為純白色結晶，是高含量高品質甜茶提取物，無苦味，甜度高，滿足了市場對高品質甜茶苷產品的需求問題。
具體實施方式
實施例1
將500g甜茶洗凈，粉碎到50-100目，加入4000g的鹽酸與磷酸二氫鈉配置成的緩沖溶液，pH為5.0，并加入纖維素酶，在40℃下超聲波提取60min，提取完成后90℃進行酶滅活10min，離心分離，將濾渣進行第二次提取，提取液4500g的85℃純水，超聲波提取70min，離心分離，合并兩次的提取液并濃縮，再與濾渣一起置于微波提取裝置中，微波功率為300W，溫度為50℃，用體積分數為90%的乙醇溶液提取30min，離心過濾，將提取液減壓濃縮后，用體積分數為70%的丙酮溶液溶解，溶解液通過AB-8型大孔樹脂柱進行洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將浸膏與聚酰胺樹脂攪拌均勻，裝入聚酰胺樹脂層析柱，先用純水淋洗除雜，再用體積分數為10%的乙醇溶液淋洗除雜，最后用體積分數為60%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得甜茶苷提取物。
實施例2
將500g甜茶洗凈，粉碎到50-100目，加入5000g 的鹽酸與磷酸二氫鈉配置成的緩沖溶液，pH為5.0，，并加入纖維素酶，在35℃下超聲波提取70min，提取完成后90℃進行酶滅活10min，離心分離，將濾渣進行第二次提取，提取液為5000g的70℃純水，超聲波提取60min，離心分離，合并兩次的提取液并濃縮，再與濾渣一起置于微波提取裝置中，微波功率為350W，溫度為70℃，用體積分數為80%的乙醇溶液提取30min，離心過濾，將提取液減壓濃縮后，用體積分數為70%的丙酮溶液溶解，溶解液通過HPD400型大孔樹脂柱進行洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將浸膏與聚酰胺樹脂攪拌均勻，裝入聚酰胺樹脂層析柱，先用純水淋洗除雜，再用體積分數為20%的乙醇溶液淋洗除雜，最后用體積分數為50%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得甜茶苷提取物。
實施例3
將500g甜茶洗凈，粉碎到50-100目，加入4500g 的鹽酸與磷酸二氫鈉配置成的緩沖溶液，pH為5.0，并加入纖維素酶，在30℃下超聲波提取65min，提取完成后90℃進行酶滅活10min，離心分離，將濾渣進行第二次提取，提取液為4000g的85℃純水，超聲波提取70min，離心分離，合并兩次的提取液并濃縮，再與濾渣一起置于微波提取裝置中，微波功率為400W，溫度為30℃，用體積分數為70%的乙醇溶液提取40min，離心過濾，將提取液減壓濃縮后，用體積分數為70%的丙酮溶液溶解，溶解液通過X-5型大孔樹脂柱進行洗脫，收集洗脫液，濃縮成浸膏。將浸膏與聚酰胺樹脂攪拌均勻，裝入聚酰胺樹脂層析柱，先用純水淋洗除雜，再用體積分數為30%的乙醇溶液淋洗除雜，最后用體積分數為70%乙醇溶液洗脫，收集洗脫液，噴霧干燥得甜茶苷提取物。