本發明涉及一種馬泡瓜提取物的制備方法，屬于植物提取
技術領域：
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背景技術：
：馬泡瓜，又稱馬寶、小野瓜、小馬泡，屬于葫蘆科黃瓜屬，是北方地區普遍生長的一種野生植物。馬泡瓜有香有甜，有酸有苦，瓜皮顏色有青的，白的，有帶青條的。種子淡黃色，扁平，長橢園形，表面光滑，種仁白色。在過去，馬泡瓜被人民當作雜草，鋤之唯恐不盡，但是自從搞野生植物綜合利用以后，發現馬泡瓜是一種一物能自夠多用、經濟價值高的野生植物，特別是種子里含有大量的油分，可榨油，是一種很好的，極有發展前途的油料作物。中國專利公開號為CN104531340A專利公開了一種馬泡籽油提取方法：取秋后發黃的馬泡瓜，將果皮內漿汁擠壓出來，剔除漿肉，將馬泡籽放置在陽光下晾曬，碎過30目篩體，加入乙醇浸提，將浸提液用CO2萃取法進行萃取，得到所述馬泡籽油。該提取方法提取率偏低，而且馬泡瓜中的許多有效成分未能保留如維生素E、糖類物質等。技術實現要素：針對上述現有技術的不足，本發明所要解決的技術問題是提出了一種馬泡瓜提取物的制備方法。一種馬泡瓜提取物的制備方法，包括以下步驟：1)將風干的馬泡瓜果實洗凈、消毒，粉碎成100～120目，并在60℃條件下干燥15～20min后，依次加入馬泡瓜果實干燥后重量0.02～0.04％的鹽酸溶液和5～8倍的60～80％乙醇攪拌，攪拌5～8min后用膠體磨研磨30～40min；2)將步驟1)所得的料液保持在溫度40～50℃，并調節pH為4～6，同時加入占馬泡瓜果實干燥后重量0.1～0.3％的復合酶酶解2～3h，其中，復合酶是由2～4重量份纖維素酶和1～3重量份果膠酶混合而成；3)將步驟2)所得的酶解液于90～100℃保持6～9min滅菌后，置于超聲頻率30～50kHz，溫度30～40℃下進行超聲提取，提取10～15min，過濾，得到濾液1和濾渣1，備用；4)在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量6～8倍的70～80％乙醇攪拌，攪拌10～15min后用膠體磨研磨30～40min，并置于600～700W下進行微波提取，提取3～5min后加熱到80～90℃，回流提取1～2h，過濾，得到濾液2和濾渣2，備用；5)在步驟4)所得的濾渣2中加入濾渣2重量6～8倍的水攪拌，攪拌20～25min后用膠體磨研磨40～60min，并加熱到90～100℃，回流提取40～60min，過濾，得到濾液3，備用；6)合并濾液1、2、3，并將濾液置于4000～5000轉/min的離心機上離心5～10min，過濾，得到馬泡瓜提取液1，備用；7)先將占馬泡瓜提取液10.3～0.5重量份的聚乙二醇加熱50～60℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.2～0.4重量份的明膠、0.03～0.05重量份的殼聚糖和步驟6)所得的馬泡瓜提取液1攪拌均勻，最后靜置2～4h，過濾除去沉淀，得到馬泡瓜提取液2，備用；8)將步驟7)所得的馬泡瓜提取液2依次通過孔徑為0.1～1μm的微濾膜、孔徑為0.01～0.2μm的超濾膜進行純化，得到馬泡瓜提取液3，備用；9)將步驟8)所得的馬泡瓜提取液3通過聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用20～30％乙醇水溶液、40～60％乙醇水溶液洗柱，收集40～60％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到馬泡瓜提取物。進一步，步驟2)中，將步驟1)所得的料液保持在溫度45℃，并調節pH為5，同時加入占馬泡瓜果實干燥后重量0.2％的復合酶酶解2.5h，其中，復合酶是由3重量份纖維素酶和2重量份果膠酶混合而成。進一步，步驟4)中，在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量7倍的75％乙醇攪拌，攪拌12min后用膠體磨研磨35min，并置于700W下進行微波提取，提取4min后加熱到85℃，回流提取1.5h，過濾，得到濾液2和濾渣2，備用。進一步，步驟9)中，將步驟8)所得的馬泡瓜提取液3通過聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用25％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液洗柱，收集50％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到馬泡瓜提取物。與現有技術相比，本發明的有益效果是：1、本發明采用膠體磨研磨、纖維素酶和果膠酶酶解技術、超聲提取技術、微波提取技術、乙醇回流以及濾膜和聚酰胺柱純化技術等，使馬泡瓜保留許多有效成分如油類物質、維生素E和糖類物質等，且能提高馬泡瓜有效成分的提取率和效率。其中，多次膠體磨研磨，提高了細胞破碎率，且粒度均勻，從而提高提取效率；濾膜和聚酰胺柱純化技術，提高了除雜率，從而提高提取物純化率。2、本發明采用整個馬泡瓜的果實(包括果皮、果肉、籽)來提取馬泡瓜，使馬泡瓜提取物的有效成分更加豐富，同時達到了合理利用原料的目的，避免浪費。3、本發明在馬泡瓜提取液中加入聚乙二醇、明膠和殼聚糖，減少了馬泡瓜提取物中油類物質、維生素E和糖類物質等有效成分因氧化、揮發等因素而導致的損失，同時，也延長了馬泡瓜提取物的貯存期。具體實施方式實施例1一種馬泡瓜提取物的制備方法，包括以下步驟：1)將風干的馬泡瓜果實洗凈、消毒，粉碎成120目，并在60℃條件下干燥18min后，依次加入馬泡瓜果實干燥后重量0.03％的鹽酸溶液和7倍的70％乙醇攪拌，攪拌7min后用膠體磨研磨35min；2)將步驟1)所得的料液保持在溫度45℃，并調節pH為5，同時加入占馬泡瓜果實干燥后重量0.2％的復合酶酶解2.5h，其中，復合酶是由3重量份纖維素酶和2重量份果膠酶混合而成；3)將步驟2)所得的酶解液于95℃保持8min滅菌后，置于超聲頻率40kHz，溫度35℃下進行超聲提取，提取12min，過濾，得到濾液1和濾渣1，備用；4)在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量7倍的75％乙醇攪拌，攪拌12min后用膠體磨研磨35min，并置于700W下進行微波提取，提取4min后加熱到85℃，回流提取1.5h，過濾，得到濾液2和濾渣2，備用；5)在步驟4)所得的濾渣2中加入濾渣2重量7倍的水攪拌，攪拌22min后用膠體磨研磨50min，并加熱到95℃，回流提取50min，過濾，得到濾液3，備用；6)合并濾液1、2、3，并將濾液置于5000轉/min的離心機上離心8min，過濾，得到馬泡瓜提取液1，備用；7)先將占馬泡瓜提取液10.4重量份的聚乙二醇加熱55℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.3重量份的明膠、0.04重量份的殼聚糖和步驟6)所得的馬泡瓜提取液1攪拌均勻，最后靜置3h，過濾除去沉淀，得到馬泡瓜提取液2，備用；8)將步驟7)所得的馬泡瓜提取液2依次通過孔徑為1μm的微濾膜、孔徑為0.2μm的超濾膜進行純化，得到馬泡瓜提取液3，備用；9)將步驟8)所得的馬泡瓜提取液3通過聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用25％乙醇水溶液、50％乙醇水溶液洗柱，收集50％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到馬泡瓜提取物。實施例2一種馬泡瓜提取物的制備方法，包括以下步驟：1)將風干的馬泡瓜果實洗凈、消毒，粉碎成100目，并在60℃條件下干燥15min后，依次加入馬泡瓜果實干燥后重量0.02％的鹽酸溶液和5倍的60％乙醇攪拌，攪拌5min后用膠體磨研磨30min；2)將步驟1)所得的料液保持在溫度40℃，并調節pH為4，同時加入占馬泡瓜果實干燥后重量0.1％的復合酶酶解2h，其中，復合酶是由2重量份纖維素酶和1重量份果膠酶混合而成；3)將步驟2)所得的酶解液于90℃保持6min滅菌后，置于超聲頻率30kHz，溫度30℃下進行超聲提取，提取10min，過濾，得到濾液1和濾渣1，備用；4)在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量6倍的70％乙醇攪拌，攪拌10min后用膠體磨研磨30min，并置于600W下進行微波提取，提取3min后加熱到80℃，回流提取1h，過濾，得到濾液2和濾渣2，備用；5)在步驟4)所得的濾渣2中加入濾渣2重量6倍的水攪拌，攪拌20min后用膠體磨研磨40min，并加熱到90℃，回流提取40min，過濾，得到濾液3，備用；6)合并濾液1、2、3，并將濾液置于4000轉/min的離心機上離心5min，過濾，得到馬泡瓜提取液1，備用；7)先將占馬泡瓜提取液10.3重量份的聚乙二醇加熱50℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.2重量份的明膠、0.03重量份的殼聚糖和步驟6)所得的馬泡瓜提取液1攪拌均勻，最后靜置2h，過濾除去沉淀，得到馬泡瓜提取液2，備用；8)將步驟7)所得的馬泡瓜提取液2依次通過孔徑為0.1μm的微濾膜、孔徑為0.01μm的超濾膜進行純化，得到馬泡瓜提取液3，備用；9)將步驟8)所得的馬泡瓜提取液3通過聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用20％乙醇水溶液、40％乙醇水溶液洗柱，收集40％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到馬泡瓜提取物。實施例3一種馬泡瓜提取物的制備方法，包括以下步驟：1)將風干的馬泡瓜果實洗凈、消毒，粉碎成120目，并在60℃條件下干燥20min后，依次加入馬泡瓜果實干燥后重量0.04％的鹽酸溶液和8倍的80％乙醇攪拌，攪拌8min后用膠體磨研磨40min；2)將步驟1)所得的料液保持在溫度50℃，并調節pH為6，同時加入占馬泡瓜果實干燥后重量0.3％的復合酶酶解3h，其中，復合酶是由4重量份纖維素酶和3重量份果膠酶混合而成；3)將步驟2)所得的酶解液于100℃保持9min滅菌后，置于超聲頻率50kHz，溫度40℃下進行超聲提取，提取15min，過濾，得到濾液1和濾渣1，備用；4)在步驟3)所得的濾渣1中加入濾渣1重量8倍的80％乙醇攪拌，攪拌15min后用膠體磨研磨40min，并置于700W下進行微波提取，提取5min后加熱到90℃，回流提取2h，過濾，得到濾液2和濾渣2，備用；5)在步驟4)所得的濾渣2中加入濾渣2重量8倍的水攪拌，攪拌25min后用膠體磨研磨60min，并加熱到100℃，回流提取60min，過濾，得到濾液3，備用；6)合并濾液1、2、3，并將濾液置于5000轉/min的離心機上離心10min，過濾，得到馬泡瓜提取液1，備用；7)先將占馬泡瓜提取液10.5重量份的聚乙二醇加熱60℃，至全部熔融，冷卻到室溫，然后依次加入0.4重量份的明膠、0.05重量份的殼聚糖和步驟6)所得的馬泡瓜提取液1攪拌均勻，最后靜置4h，過濾除去沉淀，得到馬泡瓜提取液2，備用；8)將步驟7)所得的馬泡瓜提取液2依次通過孔徑為1μm的微濾膜、孔徑為0.2μm的超濾膜進行純化，得到馬泡瓜提取液3，備用；9)將步驟8)所得的馬泡瓜提取液3通過聚酰胺柱層析，先用水洗柱至流出液澄清，再用分別用30％乙醇水溶液、60％乙醇水溶液洗柱，收集60％乙醇洗脫液，濃縮，干燥，即可得到馬泡瓜提取物。另外，申請人對實施例1～3和
背景技術：
(CN104531340A)制備的提取物進行油類物質測定，測定結果如表1所示。表1提取物的油類物質測定結果類型油類物質得率(％)實施例117.2實施例215.6實施例316.0
背景技術：
8.2當然，上面只是本發明優選的具體實施方式作了詳細描述，并非以此限制本發明的實施范圍，凡依本發明的原理、構造以及結構所作的等效變化，均應涵蓋于本發明的保護范圍內。當前第1頁1 2 3