本發(fā)明涉及一種可用于次氯酸檢測(cè)的熒光傳感器和應(yīng)用,具體來(lái)說(shuō),涉及可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器及應(yīng)用,屬于化學(xué)材料制備及分析檢測(cè)領(lǐng)域。
背景技術(shù):
活性氧物種(ROS)是廣泛存在于生物細(xì)胞中一種非常重要的物種,其在生物細(xì)胞中的信號(hào)傳導(dǎo)、分化、遷移和細(xì)胞免疫中均起著非常重要的作用。但是ROS都擁有共同的特性既在生物體內(nèi)的活性較高、含量較低、分布不均,如何去探索他們?cè)谏矬w內(nèi)的功用變得尤為重要。內(nèi)源性的次氯酸(HOCl)作為ROS中的重要的一員,是過(guò)氧化氫(H2O2)與氯離子在髓過(guò)氧化物酶(MPO)的催化下反應(yīng)得到的。此外,HOCl被自然界中的多種生物以細(xì)菌殺手的身份用于防御系統(tǒng)。作為一種高效的殺菌武器,其機(jī)理是由于細(xì)菌缺少分解HOCl的酶而必然受到HOCl強(qiáng)氧化性,高活性的作用,導(dǎo)致細(xì)菌死亡。在人體內(nèi),HOCl也是非常重要的,正常水平的HCOl對(duì)于人體健康的維持非常重要。然而人體內(nèi)HOCl水平的異常變化時(shí)會(huì)導(dǎo)致如下的疾病:如關(guān)節(jié)炎,動(dòng)脈硬化癥等。目前,HOCl被應(yīng)用到一些食品制品的表面處理和生活用水的消毒處理,這些處理難免會(huì)殘留一定量的HOCl,長(zhǎng)期攝入含有HOCl的水或者食品,對(duì)人體的消化系統(tǒng)也會(huì)產(chǎn)生不利影響。并且次氯酸因強(qiáng)氧化性和漂白性,使得含有HOCl的生活用水會(huì)給日常生活帶來(lái)諸多不便。
目前,已經(jīng)發(fā)展起來(lái)的檢測(cè)次氯酸的方法很多,但是主要以小分子傳感器為主。然而,涉及到小分子傳感器,便不能忽視其所特有的缺陷,首先是小分子傳感器大多數(shù)在純有機(jī)溶劑或者混合溶劑中工作,因?yàn)橛袡C(jī)溶劑的生物毒性限制了它的可應(yīng)用性;其次是小分子傳感器在水中會(huì)因?yàn)楸舜酥g的π-π相互作用導(dǎo)致聚集,進(jìn)一步限制了可應(yīng)用性。這也導(dǎo)致這類傳感器在實(shí)際檢測(cè)中運(yùn)用的可行性降低。因此,發(fā)明一種簡(jiǎn)單、低成本、優(yōu)良的水溶性、生物毒性低、且高效的快速檢測(cè)技術(shù)具有相當(dāng)重要的現(xiàn)實(shí)意義和應(yīng)用前景。近年來(lái),聚合物熒光傳感器因其優(yōu)異的水溶性、低細(xì)胞毒性、無(wú)有機(jī)溶劑殘留、可設(shè)計(jì)性強(qiáng)、高靈敏度、高選擇性等優(yōu)點(diǎn),受到了越來(lái)越多的關(guān)注,在化學(xué)、醫(yī)學(xué)和環(huán)境科學(xué)等研究領(lǐng)域顯示了極其廣闊的應(yīng)用前景。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素:
本發(fā)明的目的在于提供一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器及應(yīng)用,該熒光傳感器以聚乙二醇單甲醚鏈轉(zhuǎn)移劑(PEG-TTC),苯乙烯(St),4-溴-1,8-萘酰二酐和異硫氰酸烯丙酯為原料制備。進(jìn)一步應(yīng)用研究表明,該熒光傳感器能夠?qū)崿F(xiàn)對(duì)次氯酸的高靈敏度、高選擇性的快速比率檢測(cè)。
本發(fā)明的目的是通過(guò)下述方式實(shí)現(xiàn)的:
一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器,由兩親性接枝共聚物在水中自組裝而成,所述兩親性接枝共聚物的結(jié)構(gòu)式為:
式中n/x/y為90~10:20~5:1,R為C6-C20的正烷基中的一種。
一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器的制備,包括以下步驟:
(1)將一定量的4-(2-氨乙基)嗎啉和4-溴-1,8-萘酰二酐溶解于乙二醇甲基醚中,置于N2保護(hù)和避光的條件下,快速升溫至110~130℃攪拌4小時(shí),再加一定量的蒸餾水沉淀,抽濾得到所需產(chǎn)物,真空干燥,得產(chǎn)物1;
(2)取一定量的產(chǎn)物1溶解于乙二胺,將混合溶液置于避光和N2保護(hù)的條件下70~90℃攪拌4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分(85~95%)乙二醇甲基醚,過(guò)柱提純產(chǎn)物,真空干燥,得到產(chǎn)物2;
(3)將一定量的產(chǎn)物2和異硫氰酸烯丙酯溶解于乙醇與二氯甲烷體積比為1:1的混合溶液中,置于N2保護(hù)和避光的條件下,20~30℃攪拌4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后抽濾,真空干燥,得產(chǎn)物3;
(4)將聚乙二醇單甲醚鏈轉(zhuǎn)移劑(PEG-TTC,分子量為5000)、苯乙烯、產(chǎn)物3和偶氮二異丁腈溶解于0.5~2 mL的N,N-二甲基酰胺(DMF)中,保持聚乙二醇單甲醚鏈轉(zhuǎn)移劑濃度為0.01~0.1 mol/L,冰浴條件下抽真空-充氮?dú)庋h(huán)三次,然后快速升溫至80~100℃反應(yīng)4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后用乙醚沉淀,抽濾,真空干燥,得產(chǎn)物4;
(5)取步驟(2)合成的產(chǎn)物4配成一定濃度的四氫呋喃(THF)溶液,然后取以0.1~0.4 mL的溶液定容到1 mL,在快速攪拌的條件下將10 mL的水緩慢加入到上述溶液中,滴加完成之后繼續(xù)攪拌10~30 min,然后在室溫下減壓除去THF,定容到10 mL得到所需的熒光傳感器,即一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器。
根據(jù)上述制備方法制備的聚合物熒光傳感器,所述步驟(1)中,4-(2-氨乙基)嗎啉和4-溴-1,8-萘酰二酐摩爾比為1~2:1;所述步驟(2)中,產(chǎn)物1在乙二胺中的濃度為0.1~1 mol/L;所述步驟(3)中,N-(氨乙基嗎啉)-4-氨乙基-1,8-萘酰二酐和異硫氰酸烯丙酯的摩爾比為1:1~2;保持N-(氨乙基嗎啉)-4-氨乙基-1,8-萘酰二酐在混合溶液中的濃度為0.01~0.1 mol/l;所述步驟(4)中,聚乙二醇單甲醚鏈轉(zhuǎn)移劑(PEG-TTC)、苯乙烯、產(chǎn)物1和偶氮二異丁腈摩爾比為3.5:660~688:12~40:1;所述步驟(5)中,產(chǎn)物2在四氫呋喃中的濃度為0.5~3 mg/mL。
根據(jù)上述制備方法制備的熒光傳感器,其具體的反應(yīng)過(guò)程如下:
式中n/x/y為90~10:20~5:1,R為C6-C20的正烷基中的一種。
本發(fā)明提供了一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器在比率檢測(cè)次氯酸中的應(yīng)用。
本發(fā)明以聚乙二醇單甲醚鏈轉(zhuǎn)移劑(PEG-TTC),苯乙烯(St),4-溴-1,8-萘酰二酐和異硫氰酸烯丙酯為原料來(lái)制備所需要的聚合物熒光傳感器,該聚合物熒光傳感器在的pH為5的緩沖溶液稀釋之后,在有HOCl存在時(shí),在444 nm處會(huì)隨著HOCl濃度的增加出現(xiàn)顯著的熒光增強(qiáng)現(xiàn)象,而在551 nm處,隨著HOCl濃度的增加呈現(xiàn)明顯的熒光下降現(xiàn)象,進(jìn)而表現(xiàn)出明顯的比率檢測(cè)效果。并且隨著次氯酸濃度的增加,可見(jiàn)光下溶液逐漸由明亮的綠色變?yōu)闊o(wú)色,而在紫外光下,溶液由明亮的綠色熒光逐漸變?yōu)槊髁恋乃{(lán)色熒光。顯示出明顯的比色效果。而且該熒光傳感器對(duì)次氯酸的檢測(cè)具有明顯的高選擇性快速響應(yīng),并且能達(dá)到高靈敏度檢測(cè)的效果。相比于現(xiàn)有的一些檢測(cè)技術(shù),本發(fā)明中的熒光化學(xué)傳感器成本投入較少,合成路線簡(jiǎn)單、后處理方便、可直接對(duì)次氯酸實(shí)現(xiàn)快速特異性識(shí)別,尤其是在溶酶體等生理環(huán)境pH為5左右的生物體內(nèi)環(huán)境的應(yīng)用有著極其重要的意義。
總而言之,本發(fā)明提供了一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器及其應(yīng)用,該聚合物熒光傳感器制備簡(jiǎn)單,靈敏度高,有望在生物材料科學(xué)領(lǐng)域得到廣泛應(yīng)用。
附圖說(shuō)明
圖1為制備的聚合物熒光傳感器的粒徑圖。
圖2為制備的聚合物熒光傳感器對(duì)次氯酸的識(shí)別示意圖。
圖3為不同HOCl濃度時(shí),聚合物熒光傳感器的熒光發(fā)射光譜變化圖(激發(fā)波長(zhǎng):420 nm),[HOCl] = 0(a),1.0×10-7 mol/l(b), 2.0×10-7 mol/l(c), 3.0×10-7 mol/l(d),6×10-7 mol/l(e),1.0×10-6mol/l(f), 1.5×10-6mol/l(g), 2×10-6 mol/l(h),3.0×10-6mol/l(i)。
圖4為聚合物熒光傳感器隨HOCl濃度變化的熒光強(qiáng)度變化值對(duì)應(yīng)的擬合曲線和該曲線所對(duì)應(yīng)的函數(shù)圖。
圖5為各種離子對(duì)該聚合物熒光傳感器熒光比率強(qiáng)度的選擇性對(duì)比數(shù)據(jù)圖,加入后的離子的濃度均為5.0×10-5 mol/l,次氯酸濃度為1.0×10-6 mol/L,I444和I551為各離子和過(guò)氧化物加入前后的熒光傳感器在以420nm為激發(fā)波長(zhǎng),444 nm和551 nm為發(fā)射波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度變化值。
圖6為各種離子對(duì)聚合物熒光傳感器的熒光比率強(qiáng)度的干擾性對(duì)比數(shù)據(jù)圖,加入后的各種離子的濃度均為5.0×10-5 mol/l,次氯酸濃度為1.0×10-6 mol/L,I444和I551為各離子和過(guò)氧化物加入前后的熒光傳感器在以420nm為激發(fā)波長(zhǎng),444 nm和551 nm為發(fā)射波長(zhǎng)處的熒光強(qiáng)度變化值。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合附圖及具體實(shí)施例對(duì)本發(fā)明作進(jìn)一步詳細(xì)說(shuō)明。
實(shí)施例1:一種可比率檢測(cè)次氯酸的熒光傳感器的制備,具體步驟以下:
(1)將4-溴-1,8-萘酰二酐(10 mmol)和4-(2-氨乙基)嗎啉(10 mmol)溶解于乙二醇甲基醚(10 mL)中,置于N2保護(hù)和避光的條件下,快速升溫至120℃攪拌4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后直接加入到40 mL的蒸餾水沉淀,抽濾得到所需產(chǎn)物,真空干燥,得產(chǎn)物1;
(2)取步驟(1)合成的產(chǎn)物1(3 mmol)溶解于10 mL的乙二胺,將混合溶液置于避光和N2保護(hù)的條件下80℃攪拌4 h,反應(yīng)結(jié)束后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分(85~95%)乙二醇甲基醚,過(guò)柱提純產(chǎn)物,真空干燥,得到產(chǎn)物2;
(3)將步驟(2)合成的產(chǎn)物2(0.82 mmol)溶解于乙醇(8 mL)與二氯甲烷(6 mL) 的混合溶液中,異硫氰酸烯丙酯(0.90 mmol)溶于2 mL的二氯甲烷中,置于N2保護(hù)和避光的冰浴條件下,將溶有異硫氰酸烯丙酯的二氯甲烷溶液緩慢滴加到溶有N-(氨乙基嗎啉)-4-氨乙基-1,8-萘酰二酐的混合溶液中,滴加完成之后25℃攪拌4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后抽濾,真空干燥,得產(chǎn)物3,收率為68%;
(4)取步驟(3)合成的產(chǎn)物3(0.2 mmol),與PEG-TTC(0.02 mmol)、苯乙烯(3.8 mmol)和偶氮二異丁腈(0.0057 mmol)一起溶于1 mL的DMF中,冰浴條件下抽真空和充氮?dú)庋h(huán)三次。升溫至90℃反應(yīng)4 h,反應(yīng)結(jié)束后用15 mL乙醚沉淀,離心,真空干燥,得到黃綠色固體產(chǎn)物4;
(5)取步驟(4)合成的產(chǎn)物4配制為濃度為2 mg/mL的四氫呋喃(THF)溶液,然后取0.2 mL的溶液定容到1 mL,在快速攪拌的條件下將10 mL的水緩慢加入到上述溶液中,滴加完成之后繼續(xù)攪拌30 min,然后利用常溫減壓方法除去THF,定容到10 mL得到所需的熒光傳感器,即一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器。該聚合物熒光傳感器以納米粒子的形式存在,其粒徑數(shù)據(jù)如圖1所示。
實(shí)施例2:一種可比率檢測(cè)次氯酸的熒光傳感器的制備,具體步驟以下:
(1)將4-溴-1,8-萘酰二酐(10 mmol)和4-(2-氨乙基)嗎啉(10 mmol)溶解于乙二醇甲基醚(10 mL)中,置于N2保護(hù)和避光的條件下,快速升溫至120℃攪拌4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后直接加入到40 mL的蒸餾水沉淀,抽濾得到所需產(chǎn)物,真空干燥,得產(chǎn)物1;
(2)取步驟(1)合成的產(chǎn)物1(3 mmol)溶解于10 mL的乙二胺,將混合溶液置于避光和N2保護(hù)的條件下80℃攪拌4 h,反應(yīng)結(jié)束后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分(85~95%)乙二醇甲基醚,過(guò)柱提純產(chǎn)物,真空干燥,得到產(chǎn)物2;
(3)將步驟(2)合成的產(chǎn)物2(0.82 mmol)溶解于乙醇(8 mL)與二氯甲烷(6 mL) 的混合溶液中,異硫氰酸烯丙酯(0.82 mmol)溶于2 mL的二氯甲烷中,置于N2保護(hù)和避光的冰浴條件下,將溶有異硫氰酸烯丙酯的二氯甲烷溶液緩慢滴加到溶有N-(氨乙基嗎啉)-4-氨乙基-1,8-萘酰二酐的混合溶液中,滴加完成之后25℃攪拌4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后抽濾,真空干燥,得產(chǎn)物3;
(4)取步驟(3)合成的產(chǎn)物3(0.4 mmol),與PEG-TTC(0.02 mmol)、苯乙烯(3.6 mmol)和偶氮二異丁腈(0.0057 mmol)一起溶于1 mL的DMF中,冰浴條件下抽真空和充氮?dú)庋h(huán)三次。升溫至90℃反應(yīng)4 h,反應(yīng)結(jié)束后用15 mL乙醚沉淀,離心,真空干燥,得到黃綠色固體產(chǎn)物4;
(5)取步驟(4)合成的產(chǎn)物4配制為濃度為2 mg/mL的四氫呋喃(THF)溶液,然后取0.2 mL的溶液定容到1 mL,在快速攪拌的條件下將10 mL的水緩慢加入到上述溶液中,滴加完成之后繼續(xù)攪拌30 min,然后利用常溫減壓方法除去THF,定容到10 mL得到所需的熒光傳感器,即一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器。該聚合物熒光傳感器以納米粒子的形式存在,其粒徑數(shù)據(jù)如圖1所示。
實(shí)施例3:一種可比率檢測(cè)次氯酸的熒光傳感器的制備,具體步驟以下:
(1)將4-溴-1,8-萘酰二酐(10 mmol)和4-(2-氨乙基)嗎啉(10 mmol)溶解于乙二醇甲基醚(10 mL)中,置于N2保護(hù)和避光的條件下,快速升溫至120℃攪拌4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后直接加入到40 mL的蒸餾水沉淀,抽濾得到所需產(chǎn)物,真空干燥,得產(chǎn)物1;
(2)取步驟(1)合成的產(chǎn)物1(3 mmol)溶解于10 mL的乙二胺,將混合溶液置于避光和N2保護(hù)的條件下80℃攪拌4 h,反應(yīng)結(jié)束后旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去大部分(85~95%)乙二醇甲基醚,過(guò)柱提純產(chǎn)物,真空干燥,得到產(chǎn)物2;
(3)將步驟(2)合成的產(chǎn)物2(0.82 mmol)溶解于乙醇(8 mL)與二氯甲烷(6 mL) 的混合溶液中,異硫氰酸烯丙酯(1.07 mmol)溶于2 mL的二氯甲烷中,置于N2保護(hù)和避光的冰浴條件下,將溶有異硫氰酸烯丙酯的二氯甲烷溶液緩慢滴加到溶有N-(氨乙基嗎啉)-4-氨乙基-1,8-萘酰二酐的混合溶液中,滴加完成之后25℃攪拌4小時(shí),反應(yīng)結(jié)束后抽濾,真空干燥,得產(chǎn)物3;
(4)取步驟(3)合成的產(chǎn)物3(0.1 mmol),與PEG-TTC(0.02 mmol)、苯乙烯(3.9 mmol)和偶氮二異丁腈(0.0057 mmol)一起溶于1 mL的DMF中,冰浴條件下抽真空和充氮?dú)庋h(huán)三次。升溫至90℃反應(yīng)5 h,反應(yīng)結(jié)束后用15 mL乙醚沉淀,離心,真空干燥,得到黃綠色固體產(chǎn)物4;
(5)取步驟(4)合成的產(chǎn)物4配制為濃度為2 mg/mL的四氫呋喃(THF)溶液,然后取0.2 mL的溶液定容到1 mL,在快速攪拌的條件下將10 mL的水緩慢加入到上述溶液中,滴加完成之后繼續(xù)攪拌30 min,然后利用常溫減壓方法除去THF,定容到10 mL得到所需的熒光傳感器,即一種可比率檢測(cè)次氯酸的聚合物熒光傳感器。該聚合物熒光傳感器以納米粒子的形式存在,其粒徑數(shù)據(jù)如圖1所示。
實(shí)施例4:次氯酸的檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。
取9個(gè)5 mL樣品瓶,分別加入實(shí)施例1中所得的熒光傳感器溶液0.3 mL(該聚合物熒光傳感器原溶液的濃度為0.02 mg/mL),依次加入2.7 mL的pH為5的緩沖溶液溶液,攪拌3min之后分別將濃度為[HOCl] = 0(a),1.0×10-4 mol/L(b),2.0×10-4 mol/L(c),3.0×10-4 mol/L(d),6×10-4 mol/L(e),1.0×10-3mol/L(f),1.5×10-3mol/L(g),2×10-3 mol/L(h),3.0×10-3 mol/ L(i)的3μl次氯酸溶液加入9個(gè)樣品瓶中,常溫下攪拌1 min后,以420nm為激發(fā)波長(zhǎng),分別測(cè)定每個(gè)樣品的熒光發(fā)射光譜,得9個(gè)樣品的熒光發(fā)射光譜變化圖,見(jiàn)圖3。測(cè)定結(jié)果表明:該聚合物熒光傳感器在444 nm處的熒光強(qiáng)度隨著次氯酸濃度的逐漸增加而逐步上升,而在551 nm處的熒光強(qiáng)度明顯下降。根據(jù)圖3中444 nm和551 nm處熒光強(qiáng)度比率變化值與濃度的變化關(guān)系可作出對(duì)應(yīng)的擬合后的比較理想的函數(shù)曲線圖和該曲線所對(duì)應(yīng)的函數(shù)圖(y=a +b*x,a=0.0460,b=0.0012,R2=0.9972),見(jiàn)圖4。
實(shí)施例5:其它離子和過(guò)氧化物影響的對(duì)比檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。
取14個(gè)5 mL樣品瓶,分別裝入實(shí)施例1中所得的聚合物熒光傳感器溶液0.3 mL(該熒光傳感器濃度為0.02 mg/mL),然后依次加入2.7 mL的pH為5的緩沖溶液,攪拌3 min之后分別將濃度為5.0×10-2mol/L的NO2-、SO32-、SO42-、NO3-、HPO42-、H2PO4-、NO?(亞硝基自由基)、HO?(羥基基自由基)、t-BuO?(過(guò)氧化叔丁基自由基)、1O2(單線態(tài)氧)、H2O2(過(guò)氧化氫)、TBHP(過(guò)氧化叔丁醇)溶液和濃度為1.0×10-3mol/L 的HClO溶液各取3μL加入另外前13個(gè)樣品瓶中,14號(hào)樣品為空白樣。然后分別測(cè)定14個(gè)樣品在420 nm波長(zhǎng)激發(fā)下的熒光光譜數(shù)據(jù),得到在444 nm和551 nm波長(zhǎng)發(fā)射處的熒光比率變化值,結(jié)果見(jiàn)圖5。測(cè)定結(jié)果表明:除了次氯酸外,其它上述各種離子和過(guò)氧化物對(duì)所制備的聚合物熒光傳感器的熒光比率強(qiáng)度沒(méi)有明顯影響。
實(shí)施例6:其它離子和過(guò)氧化物共存時(shí)的影響的對(duì)比檢測(cè)實(shí)驗(yàn)。
取14個(gè)5 mL樣品瓶,分別裝入實(shí)施例1中所得的聚合物熒光傳感器溶液0.3mL(該聚合物熒光傳感器濃度為0.02 mg/mL),然后依次加入2.7 mL的pH為5的緩沖溶液,攪拌3 min之后,1號(hào)為空白樣品,其余樣品瓶依次加入 1.0×10-3mol/L的HClO溶液3μL,繼續(xù)攪拌1 min,然后分別將3μL的濃度為5.0×10-2mol/L的NO2-、SO32-、SO42-、NO3-、HPO42-、H2PO4-、NO?(亞硝基自由基)、HO?(羥基基自由基)、t-BuO?(過(guò)氧化叔丁基自由基)、1O2(單線態(tài)氧)、H2O2(過(guò)氧化氫)、TBHP(過(guò)氧化叔丁醇)加入到3號(hào)至14號(hào)樣品瓶中。攪拌5 min之后然后分別測(cè)定14個(gè)樣品在420 nm為波長(zhǎng)激發(fā)下的熒光光譜數(shù)據(jù),得到在444 nm和551 nm波長(zhǎng)發(fā)射處的熒光比率變化值,結(jié)果見(jiàn)圖6。測(cè)定結(jié)果表明:除了次氯酸外,其它上述各種離子和過(guò)氧化物對(duì)所制備的聚合物熒光傳感器的熒光比率強(qiáng)度沒(méi)有明顯影響。
上述實(shí)施例用來(lái)解釋說(shuō)明本發(fā)明,而不是對(duì)本發(fā)明進(jìn)行限制,在本發(fā)明的精神和權(quán)利要求的保護(hù)范圍內(nèi),對(duì)本發(fā)明所作出的任何修改和改變,都落入本發(fā)明的保護(hù)范圍。