本發明涉及一種藻類保存方法，更具體的說是涉及一種海洋餌料微藻的保存方法。
背景技術：
：微藻是一類在陸地、海洋分布廣泛，營養豐富、光合利用度高的自養植物，細胞代謝產生的多糖、蛋白質、色素等，使其在食品、醫藥、基因工程、液體燃料等領域具有很好的開發前景。藻類個體大小懸殊，其中，只有在顯微鏡下才能分辨其形態的微小藻類類群被人們稱為微藻(microalgae)，故此微藻不是一個分類學上的名稱。微藻種類繁多，微藻細胞中含有：蛋白質、脂類、藻多糖、β-胡蘿卜素、多種無機元素(如Cu，Fe，Se，Mn，Zn等)等高價值的營養成分和化工原料。微藻的蛋白質含量很高，是單細胞蛋白(SCP)的一個重要來源。微藻所含的維生素A、維生素E、硫氨素、核黃素、吡多醇、維生素B12、維生素C、生物素、肌醇、葉酸、泛酸鈣和煙酸等增加了其作為SCP的價值。藻中類胡蘿卜素含量較高，具有著色和營養的作用，可用來防治癌癥、抗輻射、延緩衰老，增強機體免疫力等生理作用。化學合成均為反式的β-胡蘿卜素，對人體有致癌、致畸的作用，而順式異構體在抗癌、抗心血管疾病功能比全反式異構體高，藻粉中β-胡蘿卜素含量高達14％。藻細胞中甘油含量較高，是優質的化妝品原料，也是化工、輕工和醫藥工業中用途極廣的有機中間體。同時，也是海產品飼養中較好的飼料。但是在當做飼料使用過程中，很難一直會有新鮮的微藻，現有技術中缺乏對于微藻保存的方法。技術實現要素：針對現有技術存在的不足，本發明的目的在于提供一種海洋餌料微藻的保存方法。為實現上述目的，本發明提供了如下技術方案：一種海洋餌料微藻的保存方法：步驟1：微藻的培養步驟1-1：培養微藻的天然海水需沉淀、砂濾、過濾、滅菌、冷卻等處理后使用；步驟1-2微藻的初級培養：控溫室恒溫培養；步驟1-3微藻的擴大培養：將初級培養的藻種培養后，采用半封閉式充氣培養進行擴大培養；步驟2：微藻的濃縮采用無機絮凝劑對擴大培養的藻液進行濃縮；步驟3：微藻的收集收集上述步驟濃縮的微藻；步驟4：微藻的保存保存上述步驟收集的微藻，添加3-5g/L的甘油，置于4-5℃的冰箱內冷藏保存。作為本發明的進一步改進，所述步驟步驟1-2中，微藻的初級培養：微藻采用3-5L三角錐瓶在控溫室恒溫培養，溫度為25±2℃，光照周期12∶12，每天搖藻3次。作為本發明的進一步改進，所述步驟1-3中，將初級培養的藻種培養7-10天后，接種到50-60L的塑料白桶，采用半封閉式充氣培養，接種比例為1∶8-1∶20，光照為室外太陽光，室外溫度為25±5℃。作為本發明的進一步改進，所述步驟2：停止對塑料白桶充氣裝置，添加絮凝劑后，靜置沉淀。作為本發明的進一步改進，所述步驟2中，絮凝劑濃度為0.3-0.9g/L，絮凝時間為30-120min，微藻沉淀度為50-95％。作為本發明的進一步改進，所述步驟2中絮凝劑種類為聚合氯化鋁、明礬、復合絮凝劑中至少一種。作為本發明的進一步改進，所述步驟3中，待微藻濃縮后，抽吸白桶的上清液，棄液，收集桶底部沉淀的微藻。作為本發明的進一步改進，所述復合絮凝劑包括下列重量份組成：硅藻土：10份丙烯酰胺：2份硫酸銨：0.05份硅酸鈉：10份丙烯基氯化二甲基硅烷：1份烯丙胺基三甲基硅烷：1份丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯：1份聚合氯化鋁：3份硅藻糖：1份。作為本發明的進一步改進，所述復合絮凝劑包括下述方法制備：步驟A：將硅藻土搗碎，與硅酸鈉充分混合，在50℃恒溫條件下保溫1小時；步驟B：將丙烯酰胺、硫酸銨、丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷加入到保溫后的混合物中，之后升高溫度至120℃進行聚合，1小時；步驟C：降溫至80℃，將聚合氯化鋁、丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯、硅藻糖加入，在80℃下保溫1小時，得到復合絮凝劑。本發明的有益效果，能夠對微藻進行一個長時期的保存。經過保存后的微藻經過恢復后仍然具有較好的活性。首先是步驟1中，取出作為微藻保存的載體的海水，進行初步處理，能夠防止海水中的有害物質會對微藻造成損害。另外，中在控溫環境下對微藻進行初級培養，使得微藻能夠處于一個生長期，微藻在生產過程中會產生生長素，之后在進行擴大培養，在半封閉式充氣的條件下，能夠最大程度保證生長素不會被破壞，從而促使后期微藻恢復后仍然具有較好的活性。步驟2中加入絮凝劑，使得微藻能夠凝聚在一起，這樣便于對微藻的收集，同時也減小了微藻的保存體積，方便運輸和儲藏。而在絮凝劑上可以選用常見的聚合氯化鋁和明礬。同時本申請也提供一種自制的復合絮凝劑。復合絮凝劑，以硅藻土、丙烯酰胺、硅酸鈉為主體，首先配置硅藻土與硅酸鈉的混合物，在保溫過程中，使得硅藻土和硅酸鈉更好地混合，同時也能偶使得硅藻土和硅酸鈉上的活性基團處于一個活化狀態，之后加入丙烯酰胺與其發生聚合反應，同時加入丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷作為偶聯劑，使得載體上形成三維網狀結構，特別是選用丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷能夠進一步保護生長素的穩定性，提高微藻的存活率。加入聚合氯化鋁之后，能夠使得聚合氯化鋁在80℃下能夠附著在整個高分子載體上，使得絮凝效果更佳集中，同時在載體本身也具有較好的絮凝效果，這樣就可以提高絮凝效果。而丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯的加入能夠起到一個很好的分散劑的作用，使得在聚合前，各物料之間能夠均勻混合在一起，使得聚合出來的絮凝劑在性質上能夠更加均勻，同時丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯也作為一個中間媒介，參與整個聚合反應中去，能夠降低整個聚合反應的溫度，各通過丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯相互交聯在一起。硅藻糖本身的結構就與本發明的載體具有較好的相容性，因此加入過程后能夠在短時間內分散均勻，同時海藻糖本身具有對微藻具有保護作用，能夠使得微藻在經過保存供以后，長時間存放后仍然具有較好的活性。具體實施方式實施例一：一種海洋餌料微藻的保存方法：步驟1：微藻的培養步驟1-1：培養微藻的天然海水需沉淀、砂濾、過濾、滅菌、冷卻等處理后使用；步驟1-2微藻的初級培養：控溫室恒溫培養；步驟1-3微藻的擴大培養：將初級培養的藻種培養后，采用半封閉式充氣培養進行擴大培養；步驟2：微藻的濃縮采用無機絮凝劑對擴大培養的藻液進行濃縮；步驟3：微藻的收集收集上述步驟濃縮的微藻；步驟4：微藻的保存保存上述步驟收集的微藻，添加5g/L的甘油，置于5℃的冰箱內冷藏保存。所述步驟步驟1-2中，微藻的初級培養：微藻采用5L三角錐瓶在控溫室恒溫培養，溫度為25±2℃，光照周期12∶12，每天搖藻3次。所述步驟1-3中，將初級培養的藻種培養19天后，接種到50L的塑料白桶，采用半封閉式充氣培養，接種比例為1∶10，光照為室外太陽光，室外溫度為25±5℃。所述步驟2：停止對塑料白桶充氣裝置，添加絮凝劑后，靜置沉淀。作為本發明的進一步改進，所述步驟2中，絮凝劑濃度為0.3g/L，絮凝時間為60min，微藻沉淀度為80％。所述步驟2中絮凝劑種類為聚合氯化鋁。所述步驟3中，待微藻濃縮后，抽吸白桶的上清液，棄液，收集桶底部沉淀的微藻。實施例二一種海洋餌料微藻的保存方法：步驟1：微藻的培養步驟1-1：培養微藻的天然海水需沉淀、砂濾、過濾、滅菌、冷卻等處理后使用；步驟1-2微藻的初級培養：控溫室恒溫培養；步驟1-3微藻的擴大培養：將初級培養的藻種培養后，采用半封閉式充氣培養進行擴大培養；步驟2：微藻的濃縮采用無機絮凝劑對擴大培養的藻液進行濃縮；步驟3：微藻的收集收集上述步驟濃縮的微藻；步驟4：微藻的保存保存上述步驟收集的微藻，添加5g/L的甘油，置于5℃的冰箱內冷藏保存。所述步驟步驟1-2中，微藻的初級培養：微藻采用5L三角錐瓶在控溫室恒溫培養，溫度為25±2℃，光照周期12∶12，每天搖藻3次。所述步驟1-3中，將初級培養的藻種培養19天后，接種到50L的塑料白桶，采用半封閉式充氣培養，接種比例為1∶10，光照為室外太陽光，室外溫度為25±5℃。所述步驟2：停止對塑料白桶充氣裝置，添加絮凝劑后，靜置沉淀。作為本發明的進一步改進，所述步驟2中，絮凝劑濃度為0.3g/L，絮凝時間為60min，微藻沉淀度為80％。所述步驟2中絮凝劑種類為明礬。所述步驟3中，待微藻濃縮后，抽吸白桶的上清液，棄液，收集桶底部沉淀的微藻。實施例三一種海洋餌料微藻的保存方法：步驟1：微藻的培養步驟1-1：培養微藻的天然海水需沉淀、砂濾、過濾、滅菌、冷卻等處理后使用；步驟1-2微藻的初級培養：控溫室恒溫培養；步驟1-3微藻的擴大培養：將初級培養的藻種培養后，采用半封閉式充氣培養進行擴大培養；步驟2：微藻的濃縮采用無機絮凝劑對擴大培養的藻液進行濃縮；步驟3：微藻的收集收集上述步驟濃縮的微藻；步驟4：微藻的保存保存上述步驟收集的微藻，添加5g/L的甘油，置于5℃的冰箱內冷藏保存。所述步驟步驟1-2中，微藻的初級培養：微藻采用5L三角錐瓶在控溫室恒溫培養，溫度為25±2℃，光照周期12：12，每天搖藻3次。所述步驟1-3中，將初級培養的藻種培養19天后，接種到50L的塑料白桶，采用半封閉式充氣培養，接種比例為1∶10，光照為室外太陽光，室外溫度為25±5℃。所述步驟2：停止對塑料白桶充氣裝置，添加絮凝劑后，靜置沉淀。作為本發明的進一步改進，所述步驟2中，絮凝劑濃度為0.3g/L，絮凝時間為60min，微藻沉淀度為80％。所述步驟2中絮凝劑種類為復合絮凝劑。所述步驟3中，待微藻濃縮后，抽吸白桶的上清液，棄液，收集桶底部沉淀的微藻。所述復合絮凝劑包括下列重量份組成：硅藻土：10份丙烯酰胺：2份硫酸銨：0.05份硅酸鈉：10份丙烯基氯化二甲基硅烷：1份烯丙胺基三甲基硅烷：1份丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯：1份聚合氯化鋁：3份硅藻糖：1份。作為本發明的進一步改進，所述復合絮凝劑包括下述方法制備：步驟A：將硅藻土搗碎，與硅酸鈉充分混合，在50℃恒溫條件下保溫1小時；步驟B：將丙烯酰胺、硫酸銨、丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷加入到保溫后的混合物中，之后升高溫度至120℃進行聚合，1小時；步驟C：降溫至80℃，將聚合氯化鋁、丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯、硅藻糖加入，在80℃下保溫1小時，得到復合絮凝劑。將實施例一、實施例二、實施例三中，選用的微藻為微綠球藻，分別保存1個月、3個月、半年、1年的時間后，對其進行藻類恢復試驗，并記錄藻液中藻密度，并計算存活率。藻液中活藻密度采用平板藻落計數法，測定方法參考《工業微生物實驗技術手冊》(中國輕工業出版社，1997)。藻類恢復方法為：配置營養液：硝酸銨30～150毫克磷酸二氫鉀2毫克檸檬酸鐵5毫克海水(過濾煮沸)1000毫升。直接將實施例中藻類放入到營養液中進行培養即可。藻類存活率一個月三個月半年一年實施例一96％91％88％80％實施例二94％90％89％83％實施例三95％93％92％88％本發明的有益效果，能夠對微藻進行一個長時期的保存。經過保存后的微藻經過恢復后仍然具有較好的活性。首先是步驟1中，取出作為微藻保存的載體的海水，進行初步處理，能夠防止海水中的有害物質會對微藻造成損害。另外，中在控溫環境下對微藻進行初級培養，使得微藻能夠處于一個生長期，微藻在生產過程中會產生生長素，之后在進行擴大培養，在半封閉式充氣的條件下，能夠最大程度保證生長素不會被破壞，從而促使后期微藻恢復后仍然具有較好的活性。步驟2中加入絮凝劑，使得微藻能夠凝聚在一起，這樣便于對微藻的收集，同時也減小了微藻的保存體積，方便運輸和儲藏。而在絮凝劑上可以選用常見的聚合氯化鋁和明礬。同時本申請也提供一種自制的復合絮凝劑。復合絮凝劑，以硅藻土、丙烯酰胺、硅酸鈉為主體，首先配置硅藻土與硅酸鈉的混合物，在保溫過程中，使得硅藻土和硅酸鈉更好地混合，同時也能偶使得硅藻土和硅酸鈉上的活性基團處于一個活化狀態，之后加入丙烯酰胺與其發生聚合反應，同時加入丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷作為偶聯劑，使得載體上形成三維網狀結構，特別是選用丙烯基氯化二甲基硅烷、烯丙胺基三甲基硅烷能夠進一步保護生長素的穩定性，提高微藻的存活率。加入聚合氯化鋁之后，能夠使得聚合氯化鋁在80℃下能夠附著在整個高分子載體上，使得絮凝效果更佳集中，同時在載體本身也具有較好的絮凝效果，這樣就可以提高絮凝效果。而丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯的加入能夠起到一個很好的分散劑的作用，使得在聚合前，各物料之間能夠均勻混合在一起，使得聚合出來的絮凝劑在性質上能夠更加均勻，同時丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯也作為一個中間媒介，參與整個聚合反應中去，能夠降低整個聚合反應的溫度，各通過丙烯酸乙氧基乙氧基乙酯相互交聯在一起。硅藻糖本身的結構就與本發明的載體具有較好的相容性，因此加入過程后能夠在短時間內分散均勻，同時海藻糖本身具有對微藻具有保護作用，能夠使得微藻在經過保存供以后，長時間存放后仍然具有較好的活性。以上所述僅是本發明的優選實施方式，本發明的保護范圍并不僅局限于上述實施例，凡屬于本發明思路下的技術方案均屬于本發明的保護范圍。應當指出，對于本
技術領域：
的普通技術人員來說，在不脫離本發明原理前提下的若干改進和潤飾，這些改進和潤飾也應視為本發明的保護范圍。當前第1頁1 2 3