一種吉祥草中的化合物及其制備與應用的制作方法

本發明屬于醫藥技術領域，具體來說，涉及到一種吉祥草中的化合物及其制備與應用。

背景技術：

吉祥草為百合科植物吉祥草屬的全草。主要分布在我國華東、中南、西南各省區，在貴州、湖南、云南、廣西、四川等苗族人口主要聚居區，對吉祥草的使用都較廣泛，是我國西南苗族地區常用的傳統草藥之一。味甘，性涼，具有清肺止咳、涼血止血、解毒利咽等功效，民間常用于治療支氣管炎、肺炎、肺結核、陰虛哮喘、吐血、咯血、黃疸、治跌打損傷、扭挫傷、遺精、急驚風、日翳、疳積、肝癌、膽結石、風濕關節炎疼痛、水腫等病癥。吉祥草在中醫臨床中應用廣泛，近年來對吉祥草化學和藥理的深入研究，對認識吉祥草及其成分多方面的藥理作用及臨床傳統應用提供了理論依據。

現代科學研究證明，吉祥草中含有甾體類、黃酮類、木脂素類、萜類、有機酸、揮發油等多種化學成分。其藥理作用主要表現在抗溶血、止咳、化痰及抗炎作用、殺滅釘螺作用、cAMP磷酸二酯酶抑制作用、降血糖作用、鎮痛等作用。目前，吉祥草大部分的功效都得到了相關物質基礎的支持，但在抗真菌活性還有所欠缺，有待進行深入的研究。

技術實現要素：

針對上述問題，通過實驗與研究，本發明提供了一種吉祥草中的化合物及其制備與應用。

本發明所述的吉祥草中的化合物命名為3,8-二羥基-β-蒎烯，分子式為：C₁₀H₁₆O₂，結構式如下：

本發明所述的吉祥草中的化合物3,8-二羥基-β-蒎烯的制備方法，所述方法具體為：取吉祥草干燥全草，用95％的乙醇加熱回流提取，提取液減壓濃縮至無醇味，得浸膏；取浸膏，用水混懸后依次用石油醚、乙酸乙酯萃取；取乙酸乙酯萃取物，拌樣后上硅膠柱層析，用氯仿-甲醇(50:1→2:1)進行梯度洗脫，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脫部分，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，經硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮(20:1→5:1)進行梯度洗脫，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脫部分，濃縮回收溶劑，得到3,8-二羥基-β-蒎烯。

本發明所述的吉祥草中的化合物3,8-二羥基-β-蒎烯的應用，所述化合物3,8-二羥基-β-蒎烯用于抗真菌藥物的制備。

附圖說明

圖1：表示3,8-二羥基-β-蒎烯的結構式。

圖2：表示3,8-二羥基-β-蒎烯的MS質譜圖。

圖3：表示3,8-二羥基-β-蒎烯的¹H-NMR和¹³C-NMR數據。

具體實施方式

下面結合具體的實施例對本發明所述的制備方法做進一步說明，但是本發明的保護范圍并不限于此。

實施例1

取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇30L加熱回流提取3次，每次2h，提取液減壓濃縮至無醇味，得浸膏650g；取浸膏，用2.5L水混懸后依次用2.5L石油醚、2.5L乙酸乙酯萃取兩次；取乙酸乙酯萃取物173g，拌樣后上硅膠柱層析，用氯仿-甲醇進行梯度洗脫，比例依次為：50:1、40:1、30:1、20:1、10:1、2:1，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脫部分，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，經硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮進行梯度洗脫，比例依次為：20:1、15:1、10:1、5:1，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脫部分，濃縮回收溶劑，得到3,8-二羥基-β-蒎烯7mg。

實施例2

取吉祥草干燥全草5kg，用95％的乙醇40L加熱回流提取3次，每次3h，提取液減壓濃縮至無醇味，得浸膏680g；取浸膏，用3L水混懸后依次用3L石油醚、3L乙酸乙酯萃取兩次；取乙酸乙酯萃取物188g，拌樣后上硅膠柱層析，用氯仿-甲醇進行梯度洗脫，比例依次為：50:1、35:1、30:1、25:1、15:1、5:1、2:1，，收集氯仿-甲醇(30:1)洗脫部分，用Sephadex LH-20凝膠柱層析分離，收集氯仿-甲醇(1:1)部分，經硅膠柱色譜分離，用石油醚-丙酮進行梯度洗脫，比例依次為：20:1、15:1、10:1、5:1，收集石油醚-丙酮(10:1)洗脫部分，濃縮回收溶劑，得到3,8-二羥基-β-蒎烯9mg。

吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯:無色油狀；(c 0.68,CHCl₃)；¹H and ¹³C-NMR(CDCl₃),見圖3；HR-EIMS m/z:168.1150[M+H]⁺(100)；(calcd for C₁₀H₁₆O₂,168.1148)，見圖2。

藥理實驗

吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯對白色念珠菌的體外抑制作用。用生理鹽水將白色念珠菌標準菌株ATCC90028制備成濃度為0.5麥氏單位，再用RPMIl640液體培養基按1：2000比例進行稀釋，用作接種菌液；參照美國臨床實驗室標準化委員酵母菌的液體培養基稀釋法抗真菌藥物敏感性試驗標準方案(NCCLS M27-A2方法)，將受試菌株分組并進行實驗，陰性對照組加入1mLRPMll640液體培養基；生長對照組加入0.9mL接種菌液及0.1mLRPMI l640液體培養基；藥物組分別加入0.9mL的接種菌液和經用RPMIl640液體培養基稀釋的不同濃度吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯供試液0.1mL(終濃度：12.5、25、50、100、200、400mg·L^-1)，輕輕混和并蓋上帶孔的蓋子，放入35℃溫箱，培養48h。參考NCCLS的M27-A2的常量法判讀MIC結果，即培養基清亮所對應的最低藥物濃度判定為MIC，讀取吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯對白色念珠菌標準菌株ATCC90028的MIC值。

經試驗，陰性對照組均未見生長現象，生長對照組生長良好，藥物組吉祥草單萜化合物3,8-二羥基-β-蒎烯對ATCC90028菌株的最小抑菌濃度(MIC)為200mg·L^-1，因此，化合物3,8-二羥基-β-蒎烯具有抗真菌作用。