狼毒大戟中松香烷型二萜類化合物及制備方法與流程

本發明涉及來源于藥用植物狼毒大戟（Euphorbia fischerianaSteud.）的松香烷型二萜化合物，特別是一種抑制結核菌活性強的狼毒大戟中松香烷型二萜類化合物及制備方法。

背景技術：

狼毒大戟為大戟科(Euphorbiaceae)大戟屬植物狼毒大戟（Euphorbia fischerianaSteud.）根部，屬于多年生草本植物，主要分布在中國東北、河北和河南等省區資源豐富,藥源充足。狼毒大戟始載于《神農本草經》,在很早以前，狼毒大戟在民間就用于醫學和防治疾病，主要用于抗癌和治療結核。目前，已有關于狼毒大戟中化合物的相關報道，如有文獻記載狼毒大戟中富含二萜類化合物，結構類型主要有松香烷型、異海松烷型和巴豆烷型等。下示所列化合物均是已經公開的從狼毒大戟中分離提取的松香烷型二萜類化合物：

。

如何從狼毒大戟中分離提取出藥理活性更強的化合物是目前需要解決的技術問題。

技術實現要素：

本發明是為了解決現有技術所存在的上述技術問題，提供一種抑制結核菌活性強的狼毒大戟中松香烷型二萜類化合物及制備方法。

本發明的技術解決方案是：一種狼毒大戟中松香烷型二萜類化合物，其特征在于結構式如下：

上述狼毒大戟中松香烷型二萜類化合物的制備方法，其特征在于按照如下步驟進行：

a. 取狼毒大戟干燥根莖，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至乙醇完全蒸出，得到水提取液；

b. 加水稀釋提取液，再用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物，乙酸乙酯萃取物，正丁醇萃取物及水層粗提物；

c. 合并石油醚萃取物及乙酸乙酯萃取物，依次通過大孔樹脂、硅膠柱層析、中壓液相制備色譜、制備型高效液相色譜分離得到：

所述中壓液相制備色譜的分離條件如下：

Falsh柱；

流速：20 ml/min；

檢測波長：210nm、280nm；

柱溫：30℃；

流動相（1）：0-30min甲醇：水=35：65；30-180min甲醇：水=35:65-80:20；流動相（2）：0-30min甲醇：水=45:55；30-180min甲醇：水=45:55-80:20；流動相（3）：0-30min甲醇：水=40:60；30-180min甲醇：水=40:60-60:40；

所述高效液相色譜的分離條件如下：

色譜柱：YMC C₁₈(2)；

流速：8 ml/min；

檢測波長：210nm、280nm；

柱溫：30℃；

流動相：0-30min甲醇：水=10:90-45:55；30-65min甲醇：水=45:55-90:10；65-70min甲醇：水=90:10。

本發明從狼毒大戟中分離提取出多種松香烷型二萜類化合物，通過波譜數據分析鑒定，化合物中有四種（A1~A4）為未見報道的新化合物，而新化合物中有兩種（A3, A4）抑制結核菌的活性明顯高于現有技術，可作為抗結核病的首選藥物。

附圖說明

圖1.本發明實施例中二萜類成分高效液相色譜圖。

圖2.本發明實施例所得產物與狼毒大戟對結核桿菌抑制作用對比圖。

具體實施方式

實施例1：

按照如下步驟進行：

a. 取大戟科(Euphorbiaceae)大戟屬植物狼毒大戟（Euphorbia fischerianaSteud.）干燥根莖25 Kg，粉碎后用95%乙醇回流提取3次，每次2小時，合并提取液，減壓濃縮至乙醇完全蒸出，得到水提取液（LDJ-6）；

b. 加水稀釋提取液，再用石油醚、乙酸乙酯、正丁醇萃取，分別得到石油醚萃取物，乙酸乙酯萃取物，正丁醇萃取物及水層粗提物；

c. 合并石油醚萃取物及乙酸乙酯萃取物（共1959g），依次通過大孔樹脂、硅膠柱層析、中壓液相制備色譜（RpC-18）、制備型高效液相色譜（Ultimate 3000 高效液相色譜儀、DAD檢測器）分離得到9種產物（A1~A9），高效液相色譜圖如圖1所示。

所述中壓液相制備色譜的分離條件如下：

Falsh柱；

流速：20 ml/min；

檢測波長：210nm、280nm；

柱溫：30℃；

流動相（1）：0-30min甲醇：水=35：65；30-180min甲醇：水=35:65-80:20；流動相（2）：0-30min甲醇：水=45:55；30-180min甲醇：水=45:55-80:20；流動相（3）：0-30min甲醇：水=40:60；30-180min甲醇：水=40:60-60:40；

所述高效液相色譜的分離條件如下：

色譜柱：Diamonsil C₁₈(2)（5μm, 250*4.6mm）；

流速：8 ml/min；

檢測波長：210nm、280nm；

柱溫：30℃；

流動相：0-30min甲醇：水=10:90-45:55；30-65min甲醇：水=45:55-90:10；65-70min甲醇：水=90:10。

進一步通過MS、HRMS、¹H NMR、¹³C NMR、HSQC、HMBC、¹H-¹H COSY、NOESY等光譜技術對所分離得到的產物進行結構鑒定。

1．新結構化合物A1~A4的波譜數據如下：

質譜參數見表1。

表1

核磁共振碳譜數據（125 MHz）見表2。

表2

核磁共振氫譜數據 (500 MHz)見表3。

表3

2. 已知結構化合物A5~A9的核磁共振碳譜數據見表4。

最終，本發明所提取分離得到的9種產物結構如下：

以結核桿菌為模式菌對化合物進行活性評價。

本發明以結核桿菌為模式菌，對所得9種（A1~A9）松香烷型二萜類化合物及狼毒大戟水提取液（LDJ-6）進行了抗結核桿菌活性評價。針對全菌體初篩，0.1 mg/ml終末濃度條件下有抑制效果的單體，抑制作用見圖2。

從圖2中可以看出松香烷型二萜類化合物A3、A4對結核桿菌的抑制作用明顯高于其他對比物。可以本發明的松香烷型二萜類化合物A3或A4制成適于人或動物使用的任何劑型，在其藥物組合物中的含量通常為0.1~95質量百分比。