本發(fā)明涉及藥物化學(xué)領(lǐng)域，具體涉及一種水飛薊賓23-取代衍生物及其注射劑的制備方法和抗腫瘤的用途。
背景技術(shù)：
惡性腫瘤是嚴(yán)重危害人類(lèi)健康的重大疾病之一。腫瘤的防治已成為世界范圍內(nèi)廣泛重視的課題，抗腫瘤藥物的研制與開(kāi)發(fā)也具有極其迫切的需要。各種腫瘤的發(fā)病率和死亡率持續(xù)攀升，腫瘤的治療面臨著極大的挑戰(zhàn)(CA-Cancer.J.Clin.2016,66,115-132)。居高不下的腫瘤發(fā)病率和死亡率，也為腫瘤治療藥物提供了廣闊的市場(chǎng)空間，2014年全球的抗腫瘤藥物市場(chǎng)規(guī)模已經(jīng)達(dá)到了600億美元。
植物是新的生物活性分子的寶貴來(lái)源，從植物來(lái)源中尋找新的具有抗腫瘤活性的藥物越來(lái)越受到醫(yī)藥工作者的重視。從植物中已分離出許多抗癌藥物，如長(zhǎng)春新堿、表鬼臼毒素葡萄糖苷和紫杉醇等。相對(duì)于人工合成的化學(xué)藥物，這些天然來(lái)源的有效成分以其毒性較低的優(yōu)點(diǎn)在腫瘤治療中得到了大量的應(yīng)用。
水飛薊賓(Silybin，SLB)是從菊科藥用植物水飛薊種子的種皮中提取所得的一種黃酮木脂素類(lèi)化合物，呈黃色粉末，味苦。
現(xiàn)有技術(shù)中僅報(bào)道水飛薊賓具有明顯的抗自由基活性、促進(jìn)肝細(xì)胞的再生和修復(fù)以及保護(hù)、穩(wěn)定肝細(xì)胞膜等作用，被稱(chēng)為“天然的保肝藥”。臨床上用于慢性遷延性肝炎、慢性活動(dòng)性肝炎，初期肝硬化、肝中毒等病的治療。少有報(bào)道水飛薊賓這類(lèi)黃酮木脂素類(lèi)化合物對(duì)腫瘤具有抑制作用。
技術(shù)實(shí)現(xiàn)要素：
本發(fā)明所要解決的技術(shù)問(wèn)題是提供一種全新的具有抗腫瘤作用的水飛薊賓衍生物。
令人驚奇的是，對(duì)水飛薊賓進(jìn)行修飾進(jìn)行酯化反應(yīng)，得到的水飛薊賓衍生物具有非常好的抗腫瘤作用，特別是對(duì)胃癌、結(jié)腸癌、肺癌、前列腺癌和膀胱癌有非常好的效果。
本發(fā)明的一個(gè)目的是提供具有式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)及其藥學(xué)上可接受的鹽：
其中，R為氫、鈉、鉀、鎂，式(1)中2,3位和10,11位的立體構(gòu)型分別是或同時(shí)是R構(gòu)型或S構(gòu)型。
本發(fā)明的另一個(gè)目的為提供一種根據(jù)權(quán)利要求1所述的式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)及其藥學(xué)上可接受的鹽的制備方法，其特征在于：水飛薊賓在催化劑存在下，與1,2-苯二甲酸酐反應(yīng)，分別得到式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物和水飛薊賓3,23-取代衍生物，經(jīng)分離后，得到R為氫的式(1)化合物；根據(jù)需要，與適當(dāng)?shù)膲A反應(yīng)生成藥學(xué)上可接受的鹽。
優(yōu)選地，催化劑為N,N-二異丙基乙胺或三乙胺。
優(yōu)選地，水飛薊賓與1,2-苯二甲酸酐的摩爾比為1:1至1:3。
本發(fā)明的另一個(gè)目的為提供一種組合物，包括權(quán)利要求1中的具有式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)及其藥學(xué)上可接受的鹽、抗氧化劑、金屬離子螯合劑和pH調(diào)節(jié)劑。
優(yōu)選地，抗氧化劑為無(wú)水亞硫酸鈉。
優(yōu)選地，金屬離子螯合劑為依地酸二鈉。
優(yōu)選地，pH調(diào)節(jié)劑為氫氧化鈉。
優(yōu)選地，該組合物劑型為注射劑、片劑、膠囊劑、顆粒劑、包合物、固體分散體、緩控釋劑型，優(yōu)選為注射劑。
優(yōu)選地，該注射劑pH值在4.0～9.0之間，優(yōu)選6.8～7.0之間。
優(yōu)選地，該注射劑由如下質(zhì)量配比原輔料組成：
所述的pH調(diào)節(jié)劑適量是指將上述式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)及其藥學(xué)上可接受的鹽、無(wú)水亞硫酸鈉和依地酸二鈉溶于注射用水待完全溶解后，調(diào)節(jié)溶液pH值至4.0～9.0之間時(shí)所需要的pH調(diào)節(jié)劑的用量。
進(jìn)一步地，每天給予用者1次。
進(jìn)一步地，每天給予用者50mg或100mg。
進(jìn)一步地，給藥方式為靜脈滴注。
本發(fā)明的另一個(gè)目的為提供一種所述的組合物的制備方法，其特征在于：所述組合物的劑型為注射劑，包括以下步驟：
稱(chēng)取處方量的無(wú)水亞硫酸鈉和依地酸鈉，溶于注射用水中。另稱(chēng)取處方量的式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)及其藥學(xué)上可接受的鹽，分次加入攪拌使溶解。待全溶后，加處方量的注射用活性炭攪拌后，冷卻至室溫并定容。減壓過(guò)濾除去活性炭至澄清，用氫氧化鈉調(diào)節(jié)pH，然后用微孔濾膜過(guò)濾，灌于2mL安剖中，通氮?dú)?，熔封，滅菌，即得?/p>
優(yōu)選地，該注射劑滅菌方式為100-130℃流通蒸汽滅菌20–60min。
本發(fā)明的另一個(gè)目的為提供一種所述組合物的質(zhì)控方法，其特征在于：所述組合物的劑型為該注射劑，包括如下步驟：
(1)式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)及其藥學(xué)上可接受的鹽的鑒別：
稱(chēng)取樣品適量，加甲醇制成濃度為1mg/mL的溶液，加新配制的1mol/L鹽酸羥胺甲醇液0.5ml、6mol/L氫氧化鉀甲醇液0.2mL，加熱至沸，冷卻后加5％鹽酸酸化，最后加1％三氯化鐵溶液1～2滴，溶液應(yīng)顯紫紅色。
(2)式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)及其藥學(xué)上可接受的鹽的HPLC含量測(cè)定：
稱(chēng)取樣品適量，加甲醇溶解，制成0.12mg/mL的溶液，作為供試品溶液；另取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成0.12mg/mL的溶液作為對(duì)照品溶液。
色譜條件ODS C18柱，流動(dòng)相：甲醇：水：冰醋酸45：55：1，波長(zhǎng)：287nm；流速：1.0mL/min；進(jìn)樣量：5μL。
本發(fā)明的另一個(gè)目的為提供具有式(1)所示結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)及其藥學(xué)上可接受的鹽在制備抗腫瘤藥物中的應(yīng)用。
優(yōu)選地，所述腫瘤為胃癌、結(jié)腸癌、肺癌、前列腺癌和膀胱癌。
本發(fā)明通過(guò)化學(xué)修飾的方法，設(shè)計(jì)并合成出與水飛薊賓結(jié)構(gòu)有所差異的一種全新結(jié)構(gòu)的黃酮木脂素衍生物，即通過(guò)在水飛薊賓3，23位連接1,2-苯二甲酸基，經(jīng)過(guò)大量多次實(shí)驗(yàn)并對(duì)合成工藝進(jìn)行優(yōu)化，分離、純化，并多次重結(jié)晶得到高純度化合物，即水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)和水飛薊賓3,23-取代衍生物(SLB-3,23)，之后對(duì)兩個(gè)化合物進(jìn)行初步藥效學(xué)篩選，結(jié)果發(fā)現(xiàn)水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)具有非常好的抗腫瘤特性。上述全新結(jié)構(gòu)的目標(biāo)化合物不僅延長(zhǎng)整個(gè)分子共軛范圍和共軛強(qiáng)度，而且在疏水性、芳香性、電性等方面與水飛薊賓具有諸多差異化特征，正是由于上述特征的改變，經(jīng)改造后全新結(jié)構(gòu)的水飛薊賓23-取代衍生物及其鹽的水溶性和生物利用度不僅顯著提高，而且將其制成注射劑后，溶液的穩(wěn)定性增強(qiáng)，通過(guò)藥動(dòng)學(xué)和藥效學(xué)實(shí)驗(yàn)測(cè)試，發(fā)現(xiàn)水飛薊賓23-取代衍生物注射劑在大鼠體內(nèi)血藥濃度顯著增加，生物利用度明顯提高，且水飛薊賓23-取代衍生物注射劑對(duì)抗腫瘤的效果與水飛薊賓相比較，有顯著性差異，藥效學(xué)結(jié)果表明其在治療腫瘤疾病方面也有著意想不到的治療效果。
本發(fā)明的有益之處在于：通過(guò)化學(xué)修飾的方法，設(shè)計(jì)并合成出與水飛薊賓結(jié)構(gòu)有所差異的一種全新結(jié)構(gòu)的黃酮木脂素衍生物，目標(biāo)化合物的水溶性和生物利用度顯著增加，而且目標(biāo)化合物的注射劑具有明顯的抗腫瘤，對(duì)多種腫瘤細(xì)胞有顯著的抑制作用；再者，本發(fā)明是對(duì)天然藥物的結(jié)構(gòu)改造，原料來(lái)源方便，污染少，合成路線(xiàn)簡(jiǎn)便，成本低，能夠進(jìn)行大規(guī)模生產(chǎn)，具有潛在的社會(huì)效益和經(jīng)濟(jì)效益。
附圖說(shuō)明
圖1為水飛薊賓23-取代衍生物注射劑在大鼠體內(nèi)的藥-時(shí)曲線(xiàn)。
具體實(shí)施方式
下面結(jié)合具體實(shí)施例，進(jìn)一步闡述本發(fā)明。應(yīng)該理解，這些實(shí)施例僅用于說(shuō)明本發(fā)明而不用于限制本發(fā)明的范圍。此外應(yīng)理解，在閱讀了本發(fā)明的講授的內(nèi)容之后，本領(lǐng)域技術(shù)人員可以對(duì)本發(fā)明作各種改動(dòng)或修改，這些等價(jià)形式同樣落于本申請(qǐng)所附權(quán)利要求書(shū)所限定的范圍。
實(shí)施例1：水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)和水飛薊賓3,23-取代衍生物(SLB-3,23)的制備：
水飛薊賓4.82g(10mmoL)、1,2-苯二甲酸酐1.48g(10mmoL)、N,N-二異丙基乙胺3.0g(10mmoL)，加入到盛有40mL二氯甲烷的干燥圓底燒瓶中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過(guò)夜，G254薄層檢測(cè)跟蹤(展開(kāi)劑為二氯甲烷：甲醇：甲酸＝15：1：0.1)，反應(yīng)結(jié)束后以1M鹽酸洗滌有機(jī)層，用二氯甲烷提取3次，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥后濃縮，得到淡黃色固體，以甲醇和乙酸乙酯多次重結(jié)晶，分別得到水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)5.61g和水飛薊賓3,23-取代衍生物(SLB-3,23)0.56g，收率分別為88.9％和7.20％。
水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)核磁共振氫譜：1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝11.90(s,1H,Ar-OH),10.85(s,1H,Ar-OH),9.16(s,1H,Ar-OH),8.05(d,1H,J＝5.0Hz,Ar-H),7.91(d,1H,J＝5.5Hz,Ar-H),7.47(m,1H,Ar-H),7.26(m,1H,Ar-H),6.99-7.12(m,5H,Ar-H),6.88(d,1H,J＝5.0Hz,Ar-H),5.95(s,1H,Ar-H),5.90(s,1H,Ar-H),5.01(m,2H,CH,CH),4.81(d,1H,J＝1.5Hz,CH2),4.67(d,1H,J＝1.5Hz,CH2),4.55(m,1H,CH),4.48(m,1H,CH),3.90(s,3H,CH3)；ESI-MS:m/z＝631.5[M+H]+.
水飛薊賓3,23-取代衍生物(SLB-3,23)核磁共振氫譜：1H NMR(500MHz,d6-DMSO):δ＝9.06(s,1H,Ar-OH),8.16(m,2H,Ar-H),8.05(m,1H,Ar-H),7.92(m,1H,Ar-H),7.78-7.81(m,4H,Ar-H),7.20(d,1H,J＝1.5Hz,Ar-H),6.99-7.01(dd,1H,J＝7.5,1.5Hz,Ar-H),6.95-6.97(d,1H,J＝7.5Hz,Ar-H),6.91-6.93(dd,1H,J＝7.5,1.5Hz,Ar-H),6.89-6.90(d,1H,J＝3.5Hz,Ar-H),6.71-6.72(d,1H,J＝7.5Hz,Ar-H),6.47-6.48(d,1H,J＝2.5Hz,CH),6.35(s,1H,Ar-OH),6.26(d,1H,J＝1.5Hz,Ar-H),6.12(d,J＝1.5Hz,Ar-H),6.02-6.04(d,1H,J＝9Hz,CH),5.87(s,1H,Ar-OH),5.16-5.18(td,1H,J＝5,2.5Hz,CH),4.73-4.76(dd,1H,J＝12.5,5Hz,CH2),4.45-4.49(dd,1H,J＝12.5,5Hz,CH2),3.82(s,3H,CH3)；ESI-MS:m/z＝779.2[M+H]+.
實(shí)施例2：水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)和水飛薊賓3,23-取代衍生物(SLB-3,23)的制備：
水飛薊賓4.82g(10mmoL)、1,2-苯二甲酸酐2.96g(20mmoL)、N,N-二異丙基乙胺3.0g(10mmoL)，加入到盛有40mL二氯甲烷的干燥圓底燒瓶中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過(guò)夜，G254薄層檢測(cè)跟蹤(展開(kāi)劑為二氯甲烷：甲醇：甲酸＝15：1：0.1)，反應(yīng)結(jié)束后以1M鹽酸洗滌有機(jī)層，用二氯甲烷提取3次，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥后濃縮，得到淡黃色固體，以甲醇和乙酸乙酯多次重結(jié)晶，分別得到水飛薊賓23-取代的水飛薊賓衍生物5.76g和水飛薊賓3，23-取代的水飛薊賓衍生物0.61g，收率分別為91.2％和7.84％。
實(shí)施例3：水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)和水飛薊賓3,23-取代衍生物(SLB-3,23)的制備：
水飛薊賓4.82g(10mmoL)、1,2-苯二甲酸酐4.44g(30mmoL)、N,N-二異丙基乙胺3.0g(10mmoL)，加入到盛有40mL二氯甲烷的干燥圓底燒瓶中，室溫?cái)嚢璺磻?yīng)過(guò)夜，G254薄層檢測(cè)跟蹤(展開(kāi)劑為二氯甲烷：甲醇：甲酸＝15：1：0.1)，反應(yīng)結(jié)束后以1M鹽酸洗滌有機(jī)層，用二氯甲烷提取3次，有機(jī)層用無(wú)水硫酸鈉干燥后濃縮，得到淡黃色固體，以甲醇和乙酸乙酯多次重結(jié)晶，分別得到水飛薊賓23-取代的水飛薊賓衍生物5.71g和水飛薊賓3，23-取代的水飛薊賓衍生物0.65g，收率分別為90.6％和8.35％。
實(shí)施例4：水飛薊賓23-取代衍生物鈉鹽(SLB-23-Na)和水飛薊賓3,23-取代衍生物鈉鹽(SLB-3,23-Na)的制備：
分別取水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)和水飛薊賓3,23-取代衍生物(SLB-3,23)10g溶于50mL乙酸乙酯中，室溫下和氫氧化鈉甲醇溶液進(jìn)行反應(yīng)，沉淀析出，過(guò)濾，得到不溶于乙酸乙酯的水飛薊賓23-取代衍生物鈉鹽(SLB-23-Na)9.8g和水飛薊賓3,23-取代衍生物鈉鹽(SLB-3,23-Na)9.6g，收率分別為98.2％和93.0％。
實(shí)施例5：水飛薊賓23-取代衍生物鉀鹽(SLB-23-K)的制備：
水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)10g，溶于50mL乙酸乙酯中，室溫下和氫氧化鉀的甲醇溶液進(jìn)行反應(yīng)，沉淀析出，過(guò)濾，得到不溶于乙酸乙酯的水飛薊賓23-取代衍生物鉀鹽(SLB-23-K)9.6g，收率為95.8％。
實(shí)施例6：水飛薊賓23-取代衍生物鎂鹽(SLB-23-Mg)的制備：
水飛薊賓23-取代衍生物(SLB-23)10g，溶于50mL乙酸乙酯中，室溫下和氫氧化鉀的甲醇溶液進(jìn)行反應(yīng)，沉淀析出，過(guò)濾，得到不溶于乙酸乙酯的水飛薊賓23-取代衍生物鎂鹽(SLB-23-Mg)9.8g，收率為97.4％。
實(shí)施例7：水飛薊賓23-取代衍生物鈉鹽(SLB-23-Na)注射劑的制備：
無(wú)水亞硫酸鈉2.0g，依地酸鈉0.5g，溶于800mL注射用水中。加熱至80℃，取水飛薊賓23-取代衍生物鈉鹽(SLB-23-Na)25.0g，分次加入攪拌使溶解。待全溶后，加2％(w/w)注射用活性炭于80℃攪拌十分鐘，冷卻至室溫并定容至刻度。減壓過(guò)濾除去活性炭至澄清，調(diào)節(jié)pH至6.8～7.0，然后用微孔濾膜過(guò)濾，灌于2mL安剖中，通氮?dú)?，熔封?15℃流通蒸汽滅菌30min，即得。
實(shí)施例8：水飛薊賓23-取代衍生物鉀鹽(SLB-23-K)注射劑的制備：
無(wú)水亞硫酸鈉2.0g，依地酸鈉0.5g，溶于800mL注射用水中。加熱至80℃，取水飛薊賓23-取代衍生物鉀鹽(SLB-23-K)25.0g，分次加入攪拌使溶解。待全溶后，加2％(w/w)注射用活性炭于80℃攪拌十分鐘，冷卻至室溫并定容至刻度。減壓過(guò)濾除去活性炭至澄清，調(diào)節(jié)pH至6.8～7.0，然后用微孔濾膜過(guò)濾，灌于2mL安剖中，通氮?dú)猓鄯猓?15℃流通蒸汽滅菌30分鐘，即得。
實(shí)施例9：水飛薊賓23-取代衍生物鎂鹽(SLB-23-Mg)注射劑的制備：
無(wú)水亞硫酸鈉2.0g，依地酸鈉0.5g，溶于800mL注射用水中。加熱至80℃，取水飛薊賓23-取代衍生物鎂鹽(SLB-23-Mg)25.0g，分次加入攪拌使溶解。待全溶后，加2％(w/w)注射用活性炭于80℃攪拌十分鐘，冷卻至室溫并定容至刻度。減壓過(guò)濾除去活性炭至澄清，調(diào)節(jié)pH至6.8～7.0，然后用微孔濾膜過(guò)濾，灌于2mL安剖中，通氮?dú)?，熔封?15℃流通蒸汽滅菌30分鐘，即得。
實(shí)施例10：水飛薊賓23-取代衍生物注射劑與水飛薊賓葡甲胺的穩(wěn)定性比較：
取實(shí)施例7、8、9樣品適量，參照中國(guó)藥典2015年版四部穩(wěn)定性考察項(xiàng)目，我們對(duì)所制備的注射劑進(jìn)行6個(gè)月的穩(wěn)定性考察，結(jié)果見(jiàn)表1：
表1實(shí)施例7、8、9樣品穩(wěn)定性考察結(jié)果
從以上結(jié)果可以看出，本發(fā)明制備的水飛薊賓23-取代衍生物注射劑分別在經(jīng)過(guò)6個(gè)月的穩(wěn)定性試驗(yàn)后，其pH和含量與0月比較，無(wú)明顯差異，pH和含量均比較穩(wěn)定；而水飛薊賓葡甲胺注射液在經(jīng)過(guò)6個(gè)月的穩(wěn)定性試驗(yàn)考察后，其pH和含量明顯降低，6個(gè)月末含量已降至60％，表明水飛薊賓23-取代衍生物注射劑在6個(gè)月內(nèi)穩(wěn)定，且穩(wěn)定性?xún)?yōu)于水飛薊賓葡甲胺注射劑，極具研發(fā)前景。
實(shí)施例11：水飛薊賓23-取代衍生物注射劑與水飛薊賓葡甲胺有關(guān)物質(zhì)的比較：
色譜條件ODS C18柱，流動(dòng)相：甲醇：水：冰醋酸45：55：1，波長(zhǎng)：287nm；流速：1.0mL/min；稱(chēng)取樣品適量，加甲醇溶解，制成0.12mg/mL的溶液，作為供試品溶液；另取水飛薊賓對(duì)照品適量，加甲醇制成0.12mg/mL的溶液作為對(duì)照品溶液。分別取供試品溶液和對(duì)照品溶液進(jìn)樣5μL，記錄色譜圖，按外標(biāo)法以峰面積進(jìn)行雜質(zhì)含量計(jì)算。結(jié)果見(jiàn)表2。
表2實(shí)施例7、8、9樣品穩(wěn)定性考察結(jié)果
試驗(yàn)表明，本發(fā)明制備的水飛薊賓23-取代衍生物注射劑在室溫條件放置6個(gè)月后，雜質(zhì)含量小于0.5％，6個(gè)月內(nèi)無(wú)明顯變化，穩(wěn)定性良好，而水飛薊賓葡甲胺注射劑在室溫6個(gè)月后，雜質(zhì)含量明顯增加，且大于5％，說(shuō)明本發(fā)明制備的水飛薊賓23-取代衍生物注射劑穩(wěn)定，而且雜質(zhì)含量小，結(jié)果優(yōu)于水飛薊賓葡甲胺注射劑。
實(shí)施例12：水飛薊賓23-取代衍生物抗腫瘤作用研究：
體外分別培養(yǎng)胃癌細(xì)胞系MGC803、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、肺癌細(xì)胞SPC-A-1、前列腺癌細(xì)胞PC-3M以及膀胱癌細(xì)胞5637等不同腫瘤細(xì)胞，采用不同濃度(0～400μmol/L)的水飛薊賓23-取代衍生物分別處理以上腫瘤細(xì)胞后，MTT法檢測(cè)水飛薊賓23-取代衍生物對(duì)不同腫瘤細(xì)胞的增殖作用，并計(jì)算水飛薊賓23-取代衍生物對(duì)各腫瘤細(xì)胞的半數(shù)抑制濃度(IC50)，評(píng)價(jià)水飛薊賓23-取代衍生物抗腫瘤活性，結(jié)果見(jiàn)表3。
表3水飛薊賓23-取代衍生物對(duì)腫瘤細(xì)胞的增殖抑制活性結(jié)果
注：與水飛薊賓對(duì)照組比較，1)p<0.01；與水飛薊賓葡甲胺組比較，2)p<0.01。
實(shí)驗(yàn)結(jié)果可以看出，在0～400μmol/L濃度范圍內(nèi)，水飛薊賓對(duì)各腫瘤細(xì)胞的IC50值均在100μmol/L左右，水飛薊賓葡甲胺對(duì)照組的IC50值均大于50μmol/L，而本發(fā)明制備的水飛薊賓23-取代衍生物對(duì)各腫瘤細(xì)胞的IC50值均小于50μmol/L，尤其是實(shí)施例9，其IC50值均在20μmol/L以下，且結(jié)果具有顯著性差異(p<0.01)，說(shuō)明本發(fā)明制備的水飛薊賓23-取代衍生物對(duì)胃癌細(xì)胞MGC803、人結(jié)腸癌細(xì)胞HCT116、肺癌細(xì)胞SPC-A-1、前列腺癌細(xì)胞PC-3M以及膀胱癌細(xì)胞5637等腫瘤細(xì)胞有明顯的抑制作用。
實(shí)施例13：水飛薊賓23-取代衍生物與水飛薊賓葡甲胺的藥代動(dòng)力學(xué)比較：
15只SD大鼠隨機(jī)分為五組，每組3只，給藥前12hr禁食，將水飛薊賓、水飛薊賓葡甲胺溶液和水飛薊賓23-取代衍生物(按水飛薊賓)以50mg/Kg的劑量分別尾靜脈注射，給藥后0.083，0.25，0.50，1.0，2.0，4.0和8.0hr采血，測(cè)定大鼠體內(nèi)水飛薊賓的濃度，結(jié)果見(jiàn)表4，并繪制藥時(shí)曲線(xiàn)，結(jié)果見(jiàn)圖1。水飛薊賓葡甲胺溶液和水飛薊賓23-取代衍生物注射劑在大鼠體內(nèi)的血藥濃度經(jīng)時(shí)變化過(guò)程為二房室模型，且血藥濃度有明顯差異，本發(fā)明制備的水飛薊賓23-取代衍生物注射劑再大鼠體內(nèi)的濃度要遠(yuǎn)高于水飛薊賓和水飛薊賓葡甲胺，本發(fā)明制備的注射劑生物利用度明顯提高，為臨床上的使用提供理論依據(jù)。
表4水飛薊賓23-取代衍生物藥代動(dòng)力學(xué)結(jié)果(n＝3)
注：與水飛薊賓對(duì)照組比較，1)p<0.01；與水飛薊賓葡甲胺組比較，2)p<0.01。