本發明屬于醫藥技術領域，具體涉及端錨聚合酶抑制劑、或其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物及其立體異構體，這些化合物的制備方法，含有這些化合物的藥物制劑及藥物組合物，以及這些化合物在制備治療和/或預防癌癥、阿爾茲海默癥、骨質疏松癥、皮膚病、心血管疾病、ii型糖尿病的藥物中的應用。
背景技術：
眾所周知，癌癥已經成為威脅人類生命和健康最嚴重的疾病之一，全世界每年約有九百余萬人罹患惡性腫瘤。因此，找到預防和治療癌癥的有效藥物和方法，成為當今社會刻不容緩的任務。癌癥是一種以喪失對細胞生長適當控制為特征的疾病。據報道，經典的wnt信號通路即β-catenin介導的wnt信號通路，與很多生物過程相關，例如細胞命運、細胞增殖、干細胞的維持等。wnt信號通路的異常激活可以導致多種癌癥，因此該信號通路成為抗腫瘤治療的熱門通路。
β-catenin和axin蛋白是經典wnt信號通路的重要組成部分。β-catenin過多會導致wnt信號傳導增加及相關核轉錄因子的活化，而axin過量會導致細胞內β-catenin降解并減少信號傳導。因此，wnt信號的傳導受到此兩種蛋白的相對穩定性來控制。當細胞沒有接受wnt信號刺激時，細胞質內大部分β-catenin都是以降解復合體的形式被蛋白酶體降解。而當wnt信號通路被異常激活后，β-catenin隨之被降解復合體大量解放，細胞質中增加的自由β-catenin，最終進入細胞核與淋巴增強子結合因子1相互作用，調節下游基因的表達。這些下游基因與許多癌癥有牽連。
β-catenin降解過程中形成的降解復合物主要由β-catenin、apc、axin、ck1、gsk3β組成。其中axin是一種支架蛋白，具有與其他蛋白作用的位點，能將β-catenin、apc、ck1、gsk3β結合在一起。ck1是一種酪氨酸激酶，能將β-catenin的ser45磷酸化，隨后gsk3β將β-catenin的thr41、ser37、ser33磷酸化，磷酸化的β-catenin再結合到β-trcp蛋白上，受泛素的共價修飾，從而被蛋白酶體降解。apc蛋白的作用是增強降解復合體與β-catenin的親和力。當wnt信號通路被激活后，活化的dvl蛋白會破壞降解復合體，使β-catenin大量釋放，引起游離β-catenin積累。有文獻報道，通過穩定細胞中axin蛋白，可以有效提高降解復合物的濃度，從促進β-catenin的降解。
端錨聚合酶tankyrases屬于adp-核糖聚合酶(parp)蛋白家族，人類的tankyrase1(tnks1)和2(tnks2)也分別被稱為parp-5a和parp-5b。端錨聚合酶能使axin蛋白發生聚adp核糖基化，為其后續進行泛素化及蛋白酶體降解進行標記，因此通過抑制端錨聚合酶的活性，可以使axin蛋白的濃度上升，從而導致β-catenin降解復合體的濃度升高，促進β-catenin的降解及wnt信號傳導減少。有文獻報道xav939和iwr-1-endo都屬于小分子端錨聚合酶抑制劑，可以穩定axin蛋白水平并抑制wnt信號通路。因此，通過抑制端錨聚合酶的作用，對癌癥治療的研究具有重大的意義。此外，wnt信號通路除于癌癥相關外，針對糾正wnt信號傳導異常還可以應用到其他的疾病領域，例如阿爾茲海默癥、骨質疏松癥、皮膚病、心血管疾病、ii型糖尿病。盡管本文重點介紹的是wnt通路與癌癥的關系，但此通路在其他疾病中同樣具有潛在的應用價值。同時，對端錨聚合酶的抑制也可以對其他生物功能產生影響，例如染色體末端保護(端粒)、有絲分裂期間的紡錘體組裝及脂肪細胞的葡萄糖轉運。因此，可以預見端錨聚合酶抑制劑還可以用于治療由此類抑制所介導的疾病。
目前還未有針對端錨聚合酶的小分子抑制劑進入臨床研究，因此針對此靶點在癌癥治療領域的應用存在巨大的需求。為此，我們希望可以開發出新結構的高效低毒的針對端錨聚合酶靶點的抗腫瘤藥物。本發明將提供一種新型結構的端錨聚合酶抑制劑，此結構的化合物對tnks1和tnks2具有較高的抑制作用，同時針對parp蛋白家族中的parp1和parp2具較好的選擇性，表現出較好的抗腫瘤作用。
技術實現要素：
本發明以開發針對端錨聚合酶的小分子抑制劑為目標，發明了對治療和/或預防端錨聚合酶介導的癌癥及相關疾病具有良好效果的端錨聚合酶抑制劑。具體的技術方案為如下：
方案1.通式(ⅰ)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體：
其中，x1、z、l各自獨立的選自ch、n原子；
x2選自nh；
r1選自氫原子、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、羥基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、氨基磺酰基c1-6烷基、氨基磺酰氨基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷基、3-14元環烷基、3-14元環烷基c1-6烷基、3-8元雜環基、3-8元雜環基c1-6烷基、6-14元芳基、6-14元芳基c1-6烷基、5-12元雜芳基或5-12元雜芳基c1-6烷基；
所述3-14元環烷基、3-14元環烷基c1-6烷基、3-8元雜環基、3-8元雜環基c1-6烷基、6-14元芳基、6-14元芳基c1-6烷基、5-12元雜芳基、或5-12元雜芳基c1-6烷基可任選被鹵素原子、氰基、氨基、硝基、羧基、羥基、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基磺酰氨基取代；
y選自任選被p1取代的c1-6烷基，p1選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷基、羥基c1-6烷氧基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷氧基羰基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基酰氨基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基氨基磺酰基、二(c1-6烷基)氨基磺酰基、羧基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、3-14元環烷基、3-14元環烷基c1-6烷基、3-14元環烷基c1-6烷氧基、3-8元雜環基、3-8元雜環基c1-6烷基、3-8元雜環基c1-6烷氧基、6-14元芳基、6-14元芳基c1-6烷基、5-12元雜芳基或5-12元雜芳基c1-6烷基；
q選自鍵、crbrc、nrd、o、s、c(o)、c(o)crbrc、c(o)ocrbrc、s(o)或s(o)2；
rb、rc分別獨立地選自氫原子、羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基磺酰氨基；
rd選自氫原子、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基磺酰基或c1-6烷基酰氨基；
r2、r3分別獨立地選自氫原子、鹵素原子、氰基、羥基、氨基、羧基、硝基、c1-6烷基、鹵代c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基c1-6烷氧基；
環a選自任選被取代基p2取代的6-14元芳基、5-12元雜芳基、3-14元環烷基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-6烷基、c1-6烷氧基、鹵代c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基羰基、c1-6烷氧基羰基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基羰氧基、c1-6烷基酰氨基或c1-6烷基磺酰氨基；
m選自1、2、3或4；
n選自0、1、2、3、4或5。
方案2.如方案1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，
其中，x1、z、l各自獨立的選自ch、n原子；
x2選自nh；
r1選自氫原子、3-6元環烷基、3-6元環烷基c1-4烷基、4-6元雜環基、4-6元雜環基c1-4烷基、苯基、苯基c1-4烷基、5-6元雜芳基或5-6元雜芳基c1-4烷基；
所述3-6元環烷基、3-6元環烷基c1-4烷基、4-6元雜環基、4-6元雜環基c1-4烷基、苯基、苯基c1-4烷基、5-6元雜芳基或5-6元雜芳基c1-4烷基可任選被鹵素原子、氰基、氨基、硝基、羧基、羥基、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基取代；
y選自任選被p1取代的c1-4烷基，p1選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷氧基羰基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基羰基氧基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基；
q選自鍵、crbrc、nrd、o、s、c(o)、c(o)crbrc、s(o)或s(o)2；
rb、rc分別獨立地選自氫原子、羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基氨基或二(c1-4烷基)氨基；
rd選自氫原子、c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、c1-4烷基羰基或c1-4烷基磺酰基；
r2、r3分別獨立地選自氫原子、鹵素原子、氰基、羥基、氨基、羧基、硝基、c1-4烷基、鹵代c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基或羧基c1-4烷基；
環a選自任選被取代基p2取代的苯基、5-6元雜芳基、5-6元環烷基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷氧基羰基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基羰氧基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基；
m選自1、2或3；
n選自0、1、2、3或4。
方案2-1.如方案2所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，
其中，x1、z、l各自獨立的選自ch、n原子；
x2選自nh；
r1選自環丙基、環丙基甲基、環丙基乙基、環丙基丙基、環丁基、環丁基甲基或環丁基乙基；
y選自任選被p1取代的甲基、乙基或丙基，p1選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基或二(c1-4烷基)氨基；
環a選自任選被取代基p2取代的苯基、5-6元雜芳基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基；
m選自1、2或3；
n選自0、1、2、3或4。
方案2-2.如方案2-1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，
其中，x1、z、l各自獨立的選自ch、n原子；
x2選自nh；
r1選自環丙基、環丙基甲基、環丙基乙基、環丙基丙基、環丁基、環丁基甲基或環丁基乙基；
y選自任選被p1取代的甲基、乙基或丙基，p1選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、甲氧基、乙氧基、三氟甲基、甲氨基或二甲氨基；
q選自鍵、crbrc、nrd、o、s、c(o)、c(o)crbrc、s(o)、s(o)2；
其中rb、rc分別獨立地選自氫原子、羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、溴原子、氯原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲酰基、乙酰基、甲基氨基、乙基氨基或二甲氨基；
rd選自氫原子、甲基、乙基、丙基、甲酰基、乙酰基、甲基磺酰基或乙基磺酰基；
r2、r3選自氫原子、鹵素原子、氰基、羥基、氨基、羧基、硝基、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、羥基甲基、氨基甲基或羧基甲基；
環a選自任選被取代基p2取代的苯基、5元含1-2個n原子的雜芳基、6元含1-2個n原子的雜芳基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲基氨基、二甲氨基、甲酰基、甲磺酰基、甲酰氨基或甲基磺酰氨基；
m選自1、2；
n選自0、1、2。
方案3.如方案2或2-1所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，具有式(ⅱ)所述的結構，
方案4.如方案3所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，
其中，x1、l各自獨立的選自ch、n原子；
環a選自任選被取代基p2取代的苯基或5-6元含氮雜芳基；
p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、c1-4烷基、c1-4烷氧基、鹵代c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基羰基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基酰氨基或c1-4烷基磺酰氨基。
方案5.如方案4所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，
其中，p2選自羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、鹵素原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲基氨基、二甲氨基、甲酰基、甲磺酰基、甲酰氨基或甲基磺酰氨基；
q選自crbrc、o、s、c(o)、c(o)crbrc、s(o)或s(o)2；
rb、rc分別獨立地選自氫原子、羥基、氨基、羧基、硝基、氰基、氟原子、氯原子、溴原子、甲基、乙基、丙基、甲氧基、乙氧基、丙氧基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、甲酰基、乙酰基、甲基氨基、乙基氨基或二甲氨基；
r2、r3選自氫原子、氟原子、氯原子、溴原子、氰基、羥基、氨基、羧基、硝基、甲基、乙基、丙基、三氟甲基、三氟乙基、三氟甲氧基、三氟乙氧基、羥基甲基、氨基甲基或羧基甲基。
方案6.如方案4或5所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，
其中，x1、l各自獨立的選自ch、n原子；
環a選自苯基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、噁唑基、異噁唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、嘧啶基、噠嗪基、吡嗪基。
方案7.如方案4或5所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，具有式(ⅱ-1)所述的結構，
其中，x1、l各自獨立的選自ch、n原子；
n選自0、1、2、3。
方案8.如方案4或5所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，
其中，環a選自5元含氮雜芳基。
方案9.如方案8所述的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體，
其中，環a選自5元含2個氮原子的雜芳基。
上述方案中的技術特征可以任意組合，所得到的技術方案均記載于本發明中。
本發明的部分化合物
發明詳述
在本申請的說明書和權利要求書中，化合物都是依據化學結構式而命名的，如果表示同一化合物時化合物的命名與化學結構式不符，以化學結構式或化學反應式為準。
本發明所述的“鹵素原子”包括氟原子、氯原子、溴原子和碘原子等。
本發明所述的“c1-6烷基”表示直鏈或支鏈的含有1-6個碳原子的烷基，包括例如“c1-4烷基”、“c1-3烷基”等，具體實例包括但不限于：甲基、乙基、正丙基、異丙基、正丁基、2-甲基丙基、1-甲基丙基、1,1-二甲基乙基、正戊基、3-甲基丁基、2-甲基丁基、1-甲基丁基、1-乙基丙基、正己基、4-甲基戊基、3-甲基戊基、2-甲基戊基、1-甲基戊基、3,3-二甲基丁基、2,2-二甲基丁基、1,1-二甲基丁基、1,2-二甲基丁基、1,3-二甲基丁基、2,3-二甲基丁基、2-乙基丁基、1,2-二甲基丙基等。
本發明所述的“c2-8烯基”是指含有至少一個雙鍵的碳原子數為2-8的直鏈或支鏈或環狀的烯基，包括例如“c2-6烯基”、“c2-4烯基”、“c2-3烯基”等，具體實例包括但不限于：乙烯基、1-丙烯基、2-丙烯基、2-丁烯基、3-丁烯基、2-甲基-1-丙烯基、1-甲基-2-丙烯基、1-戊烯基、2-戊烯基、3-戊烯基、2-甲基-1-丁烯基、3-甲基-1-丁烯基、2-甲基-3-丁烯基、1,1-二甲基-2-丙烯基、1-乙基-2-丙烯基、2-己烯基、3-己烯基、2-甲基-1-戊烯基、3-甲基-1-戊烯基、1-甲基-2-戊烯基、3-甲基-2-戊烯基、2-甲基-3-戊烯基、1-甲基-4-戊烯基、3-甲基-4-戊烯基、1,1-二甲基-3-丁烯基、1,2-二甲基-3-丁烯基、1,3-二甲基-2-丁烯基、2,2-二甲基-3-丁烯基、2,3-二甲基-2-丁烯基、2,3-二甲基-1-丁烯基、2-乙基-1-丁烯基、2-乙基-3-丁烯基等。
本發明所述的“c2-8炔基”是指含有三鍵的碳原子數為2-8的直鏈或支鏈的炔基，其中包括例如“c2-6炔基”、“c2-4炔基”、“c2-3炔基”等，具體實例包括但不限于：乙炔基、1-丙炔基、2-丁炔基、1-甲基-2-丙炔基、2-戊炔基、3-戊炔基、1-甲基-2-丁炔基、2-甲基-3-丁炔基、1,1-二甲基-2-丙炔基、1-乙基-2-丙炔基、2-己炔基、3-己炔基、1-甲基-2-戊炔基、1-甲基-3-戊炔基、2-甲基-3-戊炔基、1,1-二甲基-3-丁炔基、2-乙基-3-丁炔基、2-庚炔基、3-庚炔基等。
本發明所述的“c1-6烷氧基、c1-6烷基氨基、二(c1-6烷基)氨基、c1-6烷基硫基、c1-6烷基羰基、c1-6烷氧基羰基、c1-6烷基羰基氧基、c1-6烷基酰氨基、c1-6烷基磺酰基、c1-6烷基磺酰氨基、c1-6烷基氨基磺酰基、二(c1-6烷基)氨基磺酰基”是指以c1-6烷基-o-、c1-6烷基-nh-、(c1-6烷基)2-n-、c1-6烷基-s-、c1-6烷基-c(o)-、c1-6烷基-o-c(o)-、c1-6烷基-c(o)-o-、c1-6烷基-c(o)-nh-、c1-6烷基-so2-、c1-6烷基-so2-nh-、c1-6烷基-nh-so2-、(c1-6烷基)2-nh-so2-方式形成的基團，其中“c1-6烷基”的定義如前文所述。
本發明所述的“c1-4烷氧基、c1-4烷基氨基、二(c1-4烷基)氨基、c1-4烷基硫基、c1-4烷基羰基、c1-4烷氧基羰基、c1-4烷基羰基氧基、c1-4烷基酰氨基、c1-4烷基磺酰基、c1-4烷基磺酰氨基、c1-4烷基氨基磺酰基、二(c1-4烷基)氨基磺酰基”是指以c1-4烷基-o-、c1-4烷基-nh-、(c1-4烷基)2-n-、c1-4烷基-s-、c1-4烷基-c(o)-、c1-4烷基-o-c(o)-、c1-4烷基-c(o)-o-、c1-4烷基-c(o)-nh-、c1-4烷基-so2-、c1-4烷基-so2-nh-、c1-4烷基-nh-so2-、(c1-4烷基)2-nh-so2-方式形成的基團，其中“c1-4烷基”的定義如前文所述。
本發明所述的“鹵代c1-6烷基、羥基c1-6烷基、氨基c1-6烷基、羧基c1-6烷基、氨基磺酰基c1-6烷基、氨基磺酰氨基c1-6烷基、c1-6烷氧基c1-6烷基、鹵代c1-6烷氧基、羥基c1-6烷氧基”是指一至多個，例如1～4個、1～3個、1～2個鹵素原子、羥基、氨基、羧基、氨基磺酰基、氨基磺酰氨基、c1-6烷氧基分別取代c1-6烷基、c1-6烷氧基中的氫原子所形成的基團。
本發明所述的“鹵代c1-4烷基、羥基c1-4烷基、氨基c1-4烷基、羧基c1-4烷基、氨基磺酰基c1-4烷基、氨基磺酰氨基c1-4烷基、c1-4烷氧基c1-4烷基、鹵代c1-4烷氧基、羥基c1-4烷氧基”是指一至多個，例如1～4個、1～3個、1～2個鹵素原子、羥基、氨基、羧基、氨基磺酰基、氨基磺酰氨基、c1-4烷氧基分別取代c1-4烷基、c1-4烷氧基中的氫原子所形成的基團。
本發明所述的“3～14元環烷基”，是指含有3～14個碳原子的烷烴部分去除一個氫原子衍生的環狀烷基，包括例如“3～12元環烷基”、“3～8元環烷基”、“3～6元環烷基”、“3～5元環烷基”、“3～4元環烷基”、“4～7元環烷基”、“4～8元環烷基”、“4～6元環烷基”、“5～6元環烷基”等。其實例包括但不限于：環丙烷基、環丁烷基、環戊烷基、環己烷基、環庚烷基、環辛烷基、甲基環丙烷基、二甲基環丙烷基、甲基環丁烷基、二甲基環丁烷基、甲基環戊烷基、二甲基環戊烷基、甲基環己烷基、二甲基環己烷基等。
本發明所述的“雜原子”是指n、o、c(o)、s、so和/或so2等，優選n、o、s，更優選n、o。
本發明所述的“3～8元雜環基”是指含有3～8個環原子、且含有至少一個(例如1、2、3、4或5個)雜原子的飽和或部分飽和的單環雜環化合物除去一個氫原子得到的基團，包括例如“3～7元雜環基”、“3～6元雜環基”、“4～7元雜環基”、“4～6元雜環基”、“5～6元雜環基”、“5～6元含氮雜環基”、“5元含氮雜環基”、“6元含氮雜環基”、“5元飽和雜環基”、“6元飽和雜環基”等。具體實例包括但不僅限于：氮雜環丙烷基、2h-氮雜環丙烷基、二氮雜環丙烷基、3h-二氮雜環丙烯基、氮雜環丁烷基、1,4-二氧雜環己烷基、1,3-二氧雜環己烷基、1,3-二氧雜環戊烷基、1,4-二氧雜環己二烯基、四氫呋喃基、四氫吡喃基、二氫吡咯基、吡咯烷基、咪唑烷基、4,5-二氫咪唑基、吡唑烷基、4,5-二氫吡唑基、2,5-二氫噻吩基、四氫噻吩基、4,5-二氫噻唑基、哌啶基、哌嗪基、嗎啉基、4,5-二氫噁唑基、4,5-二氫異噁唑基、2,3-二氫異噁唑基、2h-1,2-噁嗪基、6h-1,3-噁嗪基、4h-1,3-噻嗪基、6h-1,3-噻嗪基、2h-吡喃基、2h-吡喃-2-酮基、3,4-二氫-2h-吡喃基等。
本發明所述的“5～12元雜芳基”是指含有5～12個環原子(其中至少一個環原子為雜原子，例如氮原子、氧原子或硫原子)的具有芳香性的環狀基團。包括例如“5～10元雜芳基”、“5～8元雜芳基”、“5～6元雜芳基”、“6～12元雜芳基”、“5-6元含氮雜芳基”、“5元含氮雜芳基”、“5～6元含1-2個n原子的雜芳基”、“5～6元含1個n原子的雜芳基”、“5～6元含2個n原子的雜芳基”、“5元含1-2個n原子的雜芳基”、“6元含1-2個n原子的雜芳基”、“5元含2個氮原子的雜芳基”等。具體實例包括但不僅限于呋喃基、噻吩基、吡咯基、噻唑基、異噻唑基、噻二唑基、噁唑基、異噁唑基、噁二唑基、咪唑基、吡唑基、1,2,3-三唑基、1,2,4-三唑基、1,2,3-噁二唑基、1,2,4-噁二唑基、1,2,5-噁二唑基、1,3,4-噁二唑基、吡啶基、2-吡啶酮基、4-吡啶酮基、嘧啶基、1,4-二氧雜環己二烯基、噠嗪基、吡嗪基、1,2,3-三嗪基、1,3,5-三嗪基、1,2,4,5-四嗪基、氮雜環庚三烯基、1,3-二氮雜環庚三烯基、氮雜環辛四烯基等。所述“5～6元雜芳基”是指5～14元雜芳基中含有5～6個環原子的具體實例。
本發明所述的“6～14元芳基”是指含有6～14個環碳原子的芳基，包括例如“6～8元芳基”、“6～7元芳基”其實例包括但不限于：苯基、萘基、環辛四烯基等。
本發明所述的“3-14元環烷基c1-6烷基、3-8元雜環基c1-6烷基、6-14元芳基c1-6烷基、5-12元雜芳基c1-6烷基”是指以3-14元環烷基、3-8元雜環基、6-14元芳基、5-12元雜芳基取代c1-6烷基中的氫原子形成的基團。
本發明所述的“3-6元環烷基c1-4烷基、4-6元雜環基c1-4烷基、苯基c1-4烷基、5-6元雜芳基c1-4烷基”是指以3-6元環烷基、4-6元雜環基、苯基、5-6元雜芳基取代c1-4烷基中的氫原子形成的基團。
本發明所述的
本發明還提供了上述化合物的兩個制備方法，但不僅限于以下方法，反應方程式如下：
制備方法一：
反應步驟：
步驟1中間體1的制備
通過購買或制備得到中間體1。
步驟2中間體2的制備
中間體1和原料1溶于適當溶劑(例如三乙胺與n,n-二甲基甲酰胺的混合溶液)中，室溫反應完全，加入水和有機溶劑(如二氯甲烷)，分液，有機相干燥，濃縮，經純化(例如硅膠柱層析)得到中間體2。
步驟3中間體3的制備
將中間體2溶于適當溶劑(例如四氫呋喃)中，0℃下加入原料2，室溫反應(例如10-20小時)，反應完全，過濾，加入水和有機溶劑(如二氯甲烷)，分液，有機相干燥，濃縮，經純化(例如硅膠柱層析)得到中間體3。
步驟4中間體4的制備
原料3和原料4溶于適當溶劑(例如二氯甲烷)中，加入適當反應物，室溫反應(例如2-6小時)，加入水和有機溶劑(如二氯甲烷)，分液，有機相干燥，濃縮，經純化(例如硅膠柱層析)得到中間體4。
步驟5中間體5的制備
將中間體4溶于適當溶劑(例如二氯甲烷和三氟乙酸的混合溶劑)中，室溫攪拌(例如0.2-5小時)，反應完全，濃縮，加入堿性溶液和有機溶劑，分液，有機相干燥，濃縮得中間體5。
步驟6通式(ⅰ)化合物的制備
將中間體3和中間體5溶于適當溶劑(例如四氫呋喃)中，室溫反應(例如0.2-1小時)，降至0℃，加入堿性溶劑(例如三乙胺)，升溫(例如20-30℃)，攪拌(例如1-5小時)，加入水和有機溶劑(例如乙酸乙酯)，分液，有機相干燥，濃縮，經制備液相分離得通式(ⅰ)化合物。
制備方法二：
反應步驟：
步驟1中間體1的制備
通過購買或制備得到中間體1。
步驟2中間體2的制備
見制備方法一“中間體2的制備”。
步驟3中間體3的制備
通過購買或制備得到中間體3。
步驟4中間體4的制備
原料2和中間體3溶于適當溶劑(例如二氯甲烷)中，室溫反應(例如1-5小時)，反應完畢，加入碎冰，加入濃鹽酸，用有機相(例如二氯甲烷)萃取，有機相濃縮，經純化(例如硅膠柱層析)得到中間體4。
步驟5中間體5的制備
將中間體4懸浮于水中，加入濃鹽酸，加熱，反應(例如10-20小時)，濃縮，加入有機溶劑(例如二氯甲烷和甲醇的混合溶劑)，過濾，濾餅干燥得中間體5。
步驟6中間體6的制備
將中間體5和原料3溶于有機溶劑(例如乙腈)，加入堿性試劑，加熱(例如30-80℃)，反應(例如2-5小時)，過濾，濾液濃縮，經純化(例如硅膠柱層析)得到中間體6。
步驟7通式(ⅰ)化合物的制備
將中間體6、hatu、二異丙基乙胺溶于適當溶劑(例如thf/dcm)中，加入中間體2，室溫反應(例如0.5-3小時)，濃縮，經純化(例如硅膠柱層析)得通式(ⅰ)化合物。
反應方程式中，r1、r2、r3、m、n、z、l、q、a、x1、x2和y如前文所定義。
本發明式(i)化合物的“立體異構體”是指當式(i)化合物存在不對稱碳原子時，會產生對映異構體，當化合物存在碳碳雙鍵或環狀結構時，會產生順反異構體，當化合物存在酮或肟時，會產生互變異構體，所有式(i)化合物的對映異構體、非對映異構體、消旋異構體、順反異構體、互變異構體、幾何異構體、差向異構體及其混合物，均包括在本發明范圍中。
本發明的通式(i)所示的任一化合物合成得到的若是消旋體，所需要的對映體純的化合物可以通過常規的手性拆分方法獲得，所述手性拆分的方法包括但不限于：手性固定相的色譜法(像高壓制備液相色譜、超臨界流體色譜)、化學拆分、膜拆分、毛細管電泳拆分等。
本發明的通式(i)所示的任一化合物藥學上可接受的鹽是指由藥學上可接受的、非毒性堿或酸制備的鹽，包括有機酸鹽、無機酸鹽、有機堿鹽、無機堿鹽。
有機酸鹽包括甲酸、乙酸、三氟乙酸鹽、苯磺酸、苯甲酸、對甲苯磺酸、樟腦磺酸、檸檬酸、甲磺酸、乙磺酸、丙磺酸、富馬酸、葡糖酸、谷氨酸、羥乙磺酸、乳酸、馬來酸、蘋果酸、扁桃酸、粘酸、雙羥萘酸、泛酸、琥珀酸、酒石酸等的鹽。
無機酸鹽包括氫溴酸、氫氯酸、硝酸、硫酸、磷酸等的鹽。
有機堿鹽包括伯、仲和叔胺，被取代胺包括天然存在的取代胺、環胺和堿離子交換樹脂，選自甜菜堿、咖啡因、膽堿、n,n’-二芐基乙二胺、二乙胺、2-二乙胺基乙醇、2-二甲胺基乙醇、乙醇胺、乙二胺、n-乙基-嗎啉、n-乙基哌啶、葡甲胺、氨基葡萄糖、海巴明、異丙基胺、甲基葡糖胺、嗎啉、哌嗪、哌啶、普魯卡因、嘌呤、可可堿、三乙胺、三甲胺、三丙胺、氨丁三醇等的鹽。天然氨基酸鹽如甘氨酸、丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、正亮氨酸、酪氨酸、胱氨酸、半胱氨酸、蛋氨酸、脯氨酸、羥基脯氨酸、組氨酸、鳥氨酸、賴氨酸、精氨酸、絲氨酸等的鹽。
無機堿鹽包括銨以及鋰、鈉、鉀、鈣、鎂、鋅、鋇、鋁、鐵、酮、亞鐵、錳、二價錳等的鹽。
本發明式(i)化合物的“酯”是指，當式(i)化合物存在羧基時，可以與醇發生酯化反應而形成的酯，當式(i)化合物存在羥基時，可以與有機酸、無機酸、有機酸鹽等發生酯化反應而形成的酯。酯在酸或者堿存在的條件下，可以發生水解反應生成相應的酸或醇。
通式(i)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯或其立體異構體可以是溶劑化物形式。若溶劑化物是水合物的情況下，水合作用可以在制備過程中完成或者可以利用原始無水產物的吸濕性逐漸進行。
本發明進一步要求保護包括上述的式(i)所示的任一化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體與一種或多種藥用載體和/或稀釋劑的藥物組合物，可以制成藥學上可接受的任一劑型。如片劑、膠囊劑、丸劑、顆粒劑、口服溶液劑、口服混懸劑、糖漿劑、注射液、注射用無菌粉末、注射用濃溶液、栓劑、吸入劑或噴霧劑等。
本發明所述的“載體”包括但不限于填充劑、稀釋劑、粘合劑、潤濕劑、崩解劑、潤滑劑、表面活性劑、防腐劑、著色劑、矯味劑、芳香劑、泡騰劑、乳化劑、絮凝劑、反絮凝劑、抑菌劑、增溶劑。
本發明進一步要求保護包括上面所述的式(i)任一化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體與其它一種或多種抗腫瘤劑和/或免疫抑制劑的藥物組合物。所述的抗腫瘤劑和/或免疫抑制劑為抗代謝物，包括但不限于卡培他濱、吉西他濱、培美曲塞二鈉；為生長因子抑制劑，包括但不限于帕唑帕尼、伊馬替尼、埃羅替尼、拉帕替尼、吉非替尼、凡德他尼；為抗體，包括但不限于赫賽汀、貝伐單抗；為有絲分裂抑制劑，選自紫杉醇、長春瑞濱、多西他賽、多柔比星；為抗腫瘤激素類，包括但不限于來曲唑、他莫西芬、氟維司群、氟他胺、曲普瑞林；為烷化劑類，包括但不限于環磷酰胺、氮芥、馬法蘭、瘤可寧、卡莫司汀；為金屬鉑類，包括但不限于卡鉑、順鉑、奧沙利鉑；為拓撲異構酶抑制劑，包括但不限于拓撲特肯喜樹堿、拓撲替康、依立替康；為免疫抑制類，包括但不限于依維莫司、西羅莫司、特癌適；為嘌呤類似物，包括但不限于6-巰基嘌呤、6-硫鳥嘌呤、硫唑嘌呤；為抗生素類，包括但不限于菌素d、柔紅霉素、阿霉素、米托蒽醌、博來霉素、普卡霉素；為腎上腺皮質抑制劑類，包括但不限于氨魯米特、地塞米松；為組蛋白去乙酰化酶抑制劑，包括但不限于伏立諾他。
本發明還提供了本發明式(i)所示的化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體在制備治療和/或預防端錨聚合酶介導的癌癥或相關疾病的藥物中的應用，所述癌癥相關的疾病包括但不限于腦癌，肺癌，非小細胞性肺癌，鱗狀上皮細胞癌，膀胱癌，胃癌，卵巢癌，腹膜癌，胰腺癌，乳腺癌，頭頸癌，子宮頸癌，子宮內膜癌，直腸癌，肝癌，腎癌，食管腺癌，食管鱗狀細胞癌，實體瘤，前列腺癌，甲狀腺癌，雌性生殖道癌，原位癌，淋巴瘤，神經纖維瘤，骨癌，皮膚癌，腦癌、結腸癌，睪丸癌，小細胞肺癌，胃腸道間質瘤，前列腺腫瘤，肥大細胞腫瘤，多發性骨髓瘤，黑色素瘤，膠質瘤，肉瘤，膠質母細胞瘤，星形細胞瘤，神經母細胞瘤，非霍奇金淋巴瘤，腦瘤，中樞神經系統腫瘤，神經膠質瘤，多形性膠質母細胞瘤，膠質肉瘤，組織細胞淋巴瘤；所述的相關疾病，包括但不限于阿爾茲海默癥、骨質疏松癥、皮膚病、心血管疾病、ii型糖尿病。
本發明化合物具有以下優點：
(1)本發明式(i)化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體具有優異的端錨聚合酶抑制活性，且能顯著增加axin2的蛋白量；
(2)本發明式(i)化合物、其藥學上可接受的鹽、酯、溶劑化物或其立體異構體顯示出良好的生物穩定性，作用更持久，生物利用度高；
(3)本發明化合物制備工藝簡單，藥品純度高，質量穩定，易于進行大規模工業生產。
以下通過生物學實驗進一步闡述本發明化合物有益效果，但不應將此理解為本發明化合物僅具有下列有益效果。
下述中實驗的縮寫所代表的含義如下：
adp：腺苷二磷酸；parp：多聚adp-核糖聚合酶
tnks：端錨聚合酶；dmso：二甲基亞砜
tween-20：吐溫-20；fbs：胎牛血清
p/s：青-鏈霉素；cck-8：細胞增殖-毒性檢測試劑盒
1×、5×其中的“×”：倍
實驗例1本發明化合物的體外酶學活性實驗
供試品：本發明化合物，其化學名稱和制備方法見化合物的制備實施例。
(一)化合物配制
化合物10mm儲備液的配制：分別稱取供試品適量(具體稱樣量請見下表)，加入適量dmso溶解，混勻，備用。
分別取10mm的儲備液，用dmso稀釋成濃度為1mm的溶液，作為母液。用dmso將上述母液10倍逐級稀釋制成一系列濃度的溶液，然后分別用水稀釋10倍，制成含10％dmso的溶液，濃度分別為：100μm、10μm、1μm、0.1μm。
(二)實驗方法
1.配制ph7.4的1×pbs
2.配制pbst(1×pbs，含0.05％tween-20)向燒杯中加入約200ml的1×pbs(ph7.4)，然后加入100μltween-20，混勻，即得pbst。
3.激酶反應
3.1包被組氨酸至96孔板
3.1.1用1×pbs稀釋5×組氨酸混合液1:5，每孔加入50μl1×組氨酸，4℃過夜；
3.1.2每孔用200μlpbst洗3次，每次用干凈的紙巾吸凈；
3.1.3每孔加入150μl封閉液，室溫孵育60-90min；
3.1.4每孔用200μlpbst洗3次，每次用干凈的紙巾吸凈。
3.2核糖基化反應
3.2.1.激酶在冰上融化，用前將激酶用1×parp分析緩沖液稀釋至說明書建議濃度，一直置于冰上，稀釋后不能重復利用；
3.2.2按說明書依次加入各反應液及化合物后室溫孵育1h；
3.2.3移棄反應液，200μlpbst洗三次，每次用干凈的紙巾吸凈。
3.3檢測
3.3.1streptavidin-hrp用封閉液稀釋50倍；
3.3.2每孔加入50μl稀釋的streptavidin-hrp，室溫孵育30min；
3.3.3每孔用200μlpbst洗三次，每次用干凈的紙巾吸凈；
3.3.4用前將hrp化學發光底物a和b各50μl冰上混勻，每孔加入100μl；
3.3.5酶標儀讀數。
4.計算公式
抑制率％＝[1-(t-p)/(p-b)]*100％
其中p是指陽性對照孔的化學發光讀數，b是指空白孔的化學發光讀數。t是指待測化合物孔的化學發光讀數。
(三)結果與結論：
表1.各個激酶酶學評價結果
由表1可見：本發明化合物對tnks1/2有較高的抑制活性，化合物1、化合物2、化合物6、化合物9、化合物20的ic50均小于10nm，化合物3、化合物4、化合物7、化合物10、化合物11的ic50均小于100nm，同時檢測本發明化合物對parp1/2的抑制作用，顯示ic50均在1000nm左右。說明本發明化合物針對tnks1/2具有較高的選擇性。
實驗例2本發明化合物對sw480細胞中axin2的蛋白的影響
供試品：本發明化合物，其化學名稱和制備方法見化合物的制備實施例。
(一)供試品的配制
化合物10mm儲備液的配制：分別稱取化合物適量(具體稱樣量請見下表)，加入適量dmso溶解，混勻，備用。
分別取10mm的儲備液，用dmso將上述母液逐級稀釋制成濃度為1mm，0.2mm的母液(×1000)，再分別用培養基稀釋1000倍，然后加入到6孔板相應的孔中，得到化合物溶液最終濃度為：1μm，0.2μm。
(二)實驗方法
1.細胞培養：人結直腸癌細胞sw480，用leibovitz'sl-15培養基+10％fbs+1％p/s的完全培養基，在無co2、37℃條件的培養箱中，培養細胞至80％融合度。
2.接種細胞：細胞傳兩代左右選擇生長狀態良好的細胞，消化、接種500,000細胞于6孔板中，37℃培養箱中培養過夜。
3.化合物處理：第二天，取出培養板，加入化合物(終濃度為0.2μm、1μm)，刺激細胞以及0.5％dmso對照，再放入37℃培養箱中培養。
4.24小時以后，吸棄培養基，冰上預冷的pbs洗兩次，盡量吸盡殘余的pbs。
5.10×細胞裂解液用雙蒸水稀釋成1×細胞裂解液。1×細胞裂解液加入蛋白酶抑制劑、絲/蘇氨酸磷酸酶抑制劑,、酪氨酸磷酸酶抑制劑。200μl/孔，冰上靜置5min，用細胞刮刮下細胞，在冰上靜置5min中，將細胞裂解液移至1.5ml離心管中，14000rpm，4℃，10min。取上清液移至新的離心管中，即為細胞總蛋白。
6.以bca蛋白定量試劑盒進行蛋白定量，加入相應的5×上樣緩沖液，煮沸10分鐘，短暫離心。-20℃保存或直接進行蛋白電泳。
7.根據標準操作進行電泳、轉膜，根據相應抗體的說明書進行一抗和二抗結合，以xrs凝膠成像系統掃膜。用imagej進行半定量分析。
(三)實驗結果與結論
表2本發明化合物對axin2的蛋白量的影響
由表2可見，本發明化合物能增加axin2的蛋白量。
具體實施方式
以下通過實施例形式的具體實施方式，對本發明的上述內容作進一步的詳細說明。但不應將此理解為本發明上述主題的范圍僅限于以下實施例。凡基于本發明上述內容所實現的技術均屬于本發明的范圍。
制備例1
(1)2-(氯甲基)喹唑啉-4(3h)-酮的制備
將2-氨基-苯甲酸甲酯(2.0g,13.2mmol)，2-氯乙腈(1.0g,13.2mmol)溶于1,4-二氧六環(20ml)中，加入濃鹽酸(20ml)，加熱至60℃，反應6小時。將固體過濾，濾餅用乙酸乙酯(50ml)洗滌，得產物(1.6g,產率62.1％)。
(2)2-(((環丙甲基)氨基)甲基)喹唑啉-4(3h)-酮的制備
將2-(氯甲基)喹唑啉-4(3h)-酮(1.0g,5.1mmol)溶于三乙胺(15ml,107.5mmol)和四氫呋喃(15ml)的混合溶液中，加入環丙甲胺(3.6g,50.6mmol)，25℃下反應16小時，lc-ms檢測反應完成，濃縮，剩余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得產物(0.8g,產率68.4％)。
(3)2-氯-n-(環丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(((環丙甲基)氨基)甲基)喹唑啉-4(3h)-酮(0.8g,3.5mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，加入2-氯乙酰氯(2.0g,17.7mmol)，25℃下反應16小時，lc-ms檢測反應完成，濃縮，剩余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得產物(0.6g,產率56.1％)。
制備例2
(1)1-乙酰哌啶-4-羧酸的制備
將哌啶-4-甲酸(6.78g,52.5mmol)加入到乙酸酐(50ml)中，升溫至50℃反應16小時。反應液濃縮，加入水(300ml)和乙酸乙酯(400ml)，分液，有機相用飽和食鹽水(200ml)洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，將所得固體加入乙醇(50ml)中，抽濾得產物(8.51g,產率:94.8％)。
(2)1-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酮的制備
將1-乙酰哌啶-4-羧酸(8.42g,49.2mmol)溶解于二氯甲烷(150ml)，加入n,n-二甲基甲酰胺(0.1ml)和草酰氯(5ml，59.04mmol)，25℃下反應2小時。反應液濃縮，再加入二氯甲烷(100ml)溶解。0℃下滴加到含有苯甲醚(10.64g,98.4mmol)和三氯化鋁(19.68g,147.6mmol)的二氯甲烷(400ml)中，滴加完畢繼續攪拌3小時。向反應液中加入4mol/l的鹽酸(100ml)淬滅，加入水(300ml)，分液，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產物(6.35g,產率:49.4％)。
(3)(4-甲氧基苯基)(哌啶-4-基)甲酮的制備
將1-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酮(6.35g,24.3mmol)加入到6mol/l的鹽酸(100ml)中，升溫至100℃反應16小時。反應液用碳酸氫鈉調節ph值至8，用乙酸乙酯(300ml×2)萃取，有機相合并，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產物(4.78g,產率:89.7％)。(4)2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸乙酯的制備
將(4-甲氧基苯基)(哌啶-4-基)甲酮(4.38g,20.0mmol)、2-溴乙酸乙酯(3.67g,22.0mmol)和n,n-二異丙基乙胺(5.16g,40.0mmol)溶于乙腈(100ml)，升溫到85℃反應16小時。反應液真空濃縮，加入水(200ml)，乙酸乙酯萃取(200ml×2)，有機相合并，飽和食鹽水洗(300ml)，無水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產物(5.43g,產率:89.0％)。
(5)2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(5.40g,17.7mmol)溶解于甲醇(30ml)中，加入2mol/l的氫氧化鋰溶液(27ml)，攪拌3小時。將反應液濃縮至約35ml，加入乙酸乙酯(20ml)萃取，所得水相用1mol/l的鹽酸調ph值至3，濃縮，將所得固體混合物加入四氫呋喃(100ml)中攪拌1小時，抽濾，濾餅用四氫呋喃(30ml)洗，濾液濃縮得產物(4.63g,產率:94.5％)。
制備例3
(1)4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸(10.0g,63.7mmol)溶于甲醇(100ml)中，加入二氯亞砜(11.4g,95.8mmol)，25℃下反應2小時，加熱至60℃，反應2小時。反應液真空濃縮，加入甲基叔丁基醚(80ml)，過濾得白色固體，真空干燥得產物(10.2g,產率:93.6％)。
(2)4-硝基-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(3.0g,17.5mmol)，4-甲基苯磺酸(0.3g,1.7mmol)溶解于二氯甲烷(50ml)中，冷卻至0℃，緩慢滴加3,4-二氫-2h-吡喃(2.2g,26.2mmol)。加完后升至25℃反應3小時，加入二氯甲烷(50ml)和水(50ml)，分液，有機相真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化得產物(3.4g,產率:76.2％)。
(3)4-氨基-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(3.3g,12.9mmol)溶于甲醇(50ml)，加入鈀碳(300mg)，通入氫氣，25℃下反應3小時。tlc檢測反應完全，過濾，濾液真空濃縮得產物(2.9g粗品)，不經純化直接用于下一步。
(4)4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-氨基-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(2.9g粗品,12.9mmol)和2-氯乙腈(2.0g,26.5mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環溶液(4mol/l,30ml)中，25℃下反應3小時，減壓蒸除溶劑，加入乙酸乙酯(30ml)，過濾，得到產物(2.5g,產率:89.3％)。
(5)5-(氯甲基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(2.5g,11.5mmol)懸浮于乙腈(40ml)中，加入飽和碳酸氫鈉水溶液(40ml)，加熱至50℃反應16小時。反應液真空濃縮，加入水(40ml)，過濾，固體用乙酸乙酯(20ml)洗滌，得產物(1.7g,產率:80.1％)。
(6)5-(氯甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(1.7g,9.2mmol)，4-甲基苯磺酸(0.16g,0.9mmol)溶解于二氯甲烷(30ml)中，冷卻至0℃，緩慢滴加3,4-二氫-2h-吡喃(1.2g,14.3mmol)，加完升至25℃反應3小時。加入二氯甲烷(50ml)和水(50ml)，分液，有機相真空濃縮，殘余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產物(1.1g,產率:44.5％)。
(7)5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(1.1g,4.1mmol)和環丙基甲胺(582mg,8.2mmol)溶于乙腈(50ml)中，加入碳酸鉀(3.0g,21.7mmol)，加熱至50℃反應2小時。反應液過濾，濾液真空濃縮，殘余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)純化得產物(0.85g,產率:68.4％)。
制備例4
(1)叔丁基-4-羥基哌啶-1-甲酸酯的制備
將叔丁基-4-氧代哌啶-1-甲酸酯(5.0g,25.1mmol)溶解于四氫呋喃(150ml)中，加入硼氫化鈉(1.9g,50.3mmol)，25℃下反應16小時，tlc檢測反應完成(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)。加入水(50ml)淬滅反應，用乙酸乙酯萃取(150ml×2)，合并有機相，旋轉蒸發除去溶劑，剩余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化，得到產物(4.5g,產率90％)。
(2)叔丁基4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-甲酸酯的制備
將叔丁基-4-羥基哌啶-1-甲酸酯(4.5g,22.4mmol)，4-羥基苯甲腈(2.7g,22.7mmol)和三苯基膦(8.8g,33.5mmol)溶解于四氫呋喃(80ml)中，冷卻至0℃，加入偶氮二甲酸二乙酯(5.8g,33.3mmol)。25℃下反應4小時，lc-ms檢測反應完成，濃縮，加入乙酸乙酯(150ml)和水(50ml)，分液，水相用乙酸乙酯(50ml)萃取，合并有機相，濃縮，剩余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化，得到產物(4.6g,產率67.6％)。
(3)4-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈的制備
將叔丁基-4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-甲酸酯(3.5g,11.6mmol)溶解于二氯甲烷(20ml)中，加入10ml三氟乙酸，25℃下攪拌4小時，濃縮，剩余物溶解在二氯甲烷(50ml)中，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)，分液，有機相用無水硫酸鈉干燥，過濾，濃縮，得產物(2.0g,產率85.2％)。
制備例5
(1)4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸(10.0g,63.7mmol)溶于甲醇(100ml)中，加入二氯亞砜(11.4g,95.8mmol)，25℃下反應16小時。反應液真空濃縮，殘余物加入甲苯(80ml)，真空濃縮得產物(10.41g,產率:95.6％)。
(2)1-甲基-4-硝基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(3.4g,19.9mmol)溶解于丙酮(50ml)中，加入碘甲烷(5.7g,40.22mmol)和碳酸鉀(5.5g,39.9mmol)，加熱至50℃，反應4小時。冷卻至室溫，過濾，濾液真空濃縮，殘余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化得產物(1.27g,產率:34.5％)。
(3)4-氨基-1-甲基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將1-甲基-4-硝基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(1.0g,5.4mmol)溶于甲醇(30ml)中，加入鈀碳(100mg)，通入氫氣，25℃下反應3小時，過濾，濾液真空濃縮得產物(0.8g,產率:95.2％)。
(4)4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1-甲基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將4-氨基-1-甲基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(0.8g,5.2mmol)和2-氯乙腈(0.8g,10.6mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環溶液(4mol/l,12ml)中，25℃下反應3小時。反應液真空濃縮，加入乙酸乙酯(30ml)，過濾得產物(0.8g,產率:66.7％)。
(5)5-(氯甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1-甲基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(0.8g,3.5mmol)懸浮于乙腈(20ml)中，加入飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)，加熱至50℃反應16小時。反應液真空濃縮，加入水(40ml)，過濾，所得固體用乙酸乙酯(20ml)洗滌，得產物(0.5g,產率:71.4％)。
(6)5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.5g,2.5mmol)溶于乙腈(30ml)中，加入環丙基甲胺(0.71g,10.0mmol)，25℃反應16小時。反應液濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產物(0.36g,產率:61.0％)。
制備例6
(1)4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸(20.0g,0.127mol)溶于甲醇(100ml)中，加入二氯亞砜(18.1g,0.152mol)，25℃下反應2小時，加熱至60℃，反應2小時。反應液真空濃縮，加入甲基叔丁基醚(80ml)，過濾得白色固體，真空干燥得產物(20.0g,產率92.1％)。
(2)1-(4-甲氧基芐基)-4-硝基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(20.0g,0.117mol)和碳酸鉀(32.3g,0.234mol)加入到乙腈(200ml)中，0℃滴加對甲氧基芐氯(21.9g,0.14mol)，滴加完畢25℃反應16小時，反應液真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化得標題化合物(20.5g,產率60.2％)。
(3)4-氨基-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-5-羧酸甲酯的制備
將1-(4-甲氧基芐基)-4-硝基-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(20.5g,70.4mmol)、氯化銨(5.65g,105.6mmol)和鐵粉(19.7g,352mmol)加入到乙醇(300ml)和水(100ml)的混合溶液中，加熱至85℃反應3小時。冷卻，過濾，濾液真空濃縮至約200ml，加入水(200ml)，乙酸乙酯萃取(500ml×2)，有機相合并，飽和食鹽水(300ml)洗，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產物(17.5g,產率95.2％)。
(4)5-(氯甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將4-氨基-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-5-羧酸甲酯(6.0g,23.0mmol)和2-氯乙腈(3.47g,46.0mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環溶液(4mol/l,200ml)中，100℃反應12小時。反應液真空濃縮，加入乙酸乙酯(150ml)和水(100ml)，分液，有機相真空濃縮得產物(5.5g,產率78.4％)。
(5)5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(5.5g,18.0mmol)和環丙基甲胺(2.55g,36.0mmol)溶于乙腈(50ml)中，加入碳酸鉀(7.45g,54.0mmol)，25℃反應2小時。反應液過濾，濾液真空濃縮，殘余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)純化得產物(2.0g,產率32.8％)。
制備例7
(1)4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸(30.0g,191.0mmol)溶于甲醇(300ml)中，加入二氯亞砜(34.1g,286.5mol)，25℃下反應16小時。反應液真空濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液(400ml)，乙酸乙酯萃取(500ml×2)，有機相合并，飽和食鹽水洗(300ml)，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產物(31.7g,產率96.9％)。
(2)1-(4-甲氧基芐基)-4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(27.67g,161.8mol)和碳酸鉀(26.79g,194.2mol)加入到乙腈(500ml)中，0℃滴加對甲氧基芐氯(27.87g,178.0mol)，滴加完畢25℃反應16小時，反應液真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化得產物(28.5g,產率60.5％)。
(3)4-氨基-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將1-(4-甲氧基芐基)-4-硝基-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(28.5g,97.8mmol)、氯化銨(3.67g,68.5mmol)和鐵粉(32.9g,587.6mmol)加入到乙醇(300ml)和水(100ml)的混合溶液中，加熱至85℃反應3小時。冷卻，過濾，濾液真空濃縮至約200ml，加入水(200ml)，乙酸乙酯萃取(500ml×2)，有機相合并，飽和食鹽水(300ml)洗，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產物(24.9g,產率97.5％)。
(4)4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯的制備
將4-氨基-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(14.4g,55.0mmol)和2-氯乙腈(6.19g,82.0mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環溶液(4mol/l,200ml)中，攪拌3小時。反應液真空濃縮，加入乙酸乙酯(30ml)，過濾得產物(13.1g,產率70.7％)。
(5)5-(氯甲基)-2-(4-甲氧基芐基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將4-((1-氨基-2-氯亞乙基)氨基)-1-(4-甲氧基芐基)-1h-吡唑-3-羧酸甲酯(13.1g,38.9mmol)懸浮于乙腈(100ml)中，加入飽和碳酸氫鈉溶液(100ml)，加熱至50℃反應16小時。反應液真空濃縮，加入水(100ml)，過濾，所得固體用乙酸乙酯(100ml)洗滌，真空干燥得產物(8.46g,產率71.4％)。
(6)5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-2-(4-甲氧基芐基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮的制備
將5-(氯甲基)-2-(4-甲氧基芐基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(8.46g,27.8mmol)溶于乙腈(200ml)中，加入環丙基甲胺(9.88g,139.0mmol)，25℃反應16小時。反應液真空濃縮，殘余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產物(7.48g,產率79.4％)。
實施例1n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(化合物1)的制備
(1)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸(0.3g)，hatu(246mg,0.65mmol),二異丙基乙胺(140mg,1.08mmol)溶于thf/dcm(20ml,1:1)中，加入2-(((環丙基甲基)氨基)甲基)喹唑啉-4(3h)-酮(124mg,0.54mmol)，25℃反應1小時，反應完畢后減壓蒸干，殘余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得產物(0.16g,產率:60.5％)。
分子式:c28h32n4o4分子量:488.59lc-ms(m/z):489.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ：.13.23(t,j＝6.8hz,1h),8.26-8.31(m,1h),7.95(s,2h),7.68-7.74(m,2h),7.48(s,1h),6.95(s,2h),4.63(s,1h),4.53(s,1h),3.87(s,3h),3.30-3.41(m,5h),2.99-3.10(m,2h),2.65(s,1h),2.52(s,2h),1.86-2.32(m,3h),1.00(s,1h),0.08-0.55(m,4h)。
實施例2n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-基)甲基)乙酰胺(化合物2)的制備
(1)(z)-2-(2-疊氮基-3-乙氧基-3-氧代丙烷-1-烯-1-基)苯甲酸的制備
將金屬鈉(1.38g,60mmol)溶于(200ml)乙醇中，加入2-甲酰基苯甲酸(1.5g,10mmol)，降溫至-10℃，緩慢滴加疊氮乙酸乙酯(5.16g,40mmol)的乙醇溶液(50ml)，滴加完畢繼續反應16小時，tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1)檢測反應完畢，稀鹽酸調節ph＝2，乙酸乙酯(50ml×3)萃取，有機相合并，無水硫酸鈉干燥，過濾，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝200:1)純化得產物(900mg,產率34.5％)。
(2)乙基1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲酸酯的制備
將(z)-2-(2-疊氮基-3-乙氧基-3-氧代丙烷-1-烯-1-基)苯甲酸(500mg,1.91mmol)溶于四氫呋喃(30ml)中，加入亞磷酸三乙酯(477mg,2.87mmol)，25℃攪拌16小時，tlc檢測(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)反應完畢，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)得產物(205mg,產率49.3％)。
(3)3-(羥甲基)異喹啉-1(2h)-酮的制備
將乙基1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲酸酯(205mg,0.944mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入硼氫化鈉(71.4mg,1.89mmol)，25℃反應16小時，tlc檢測(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)反應完畢，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產物(155mg,產率93.7％)。
(4)1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛的制備
將3-(羥甲基)異喹啉-1(2h)-酮(155mg,0.885mmol)，溶于二氯甲烷(20ml)中，0℃加入戴斯-馬丁氧化劑(525.9mg,1.24mmol)，25℃反應16小時，tlc檢測反應完畢(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)，濾去不溶物，濾液真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產物(103mg,產率67.2％)。
(5)3-(((環丙基甲基)氨基)甲基)異喹啉-1(2h)-酮的制備
將1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-甲醛(103mg,0.595mmol)溶于甲醇(15ml)中，加入環丙甲胺(84.6mg,1.19mmol)，分批加入氰基硼氫化鈉(93.6mg,1.49mmol)，25℃反應16小時，tlc檢測反應完成(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)純化得產物(55mg,產率40.5％)。
(6)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((1-氧代-1,2-二氫異喹啉-3-基)甲基)乙酰胺的制備
將3-(((環丙基甲基)氨基)甲基)異喹啉-1(2h)-酮(55mg,0.241mmol)和2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸(66.8mg,0.241mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(137.6mg,0.362mmol)和n,n-二異丙基乙胺(77.6mg,0.6mmol)，25℃反應1小時，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)純化得產物(32mg,產率27.2％)。
分子式：c29h33n3o4分子量：487.6lc-ms(m/z)：488.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:11.50-10.02(m,1h),8.33(d,j＝7.2,1h),7.94-7.92(m,2h),7.65-7.63(m,1h),7.52-7.48(m,2h),7.01-6.96(m,2h),6.51-6.42(m,1h),4.70-4.55(m,3h),3.89-3.67(m,7h),3.29-3.22(m,2h),2.75-2.45(m,2h),2.25-2.01(m,3h),0.91-0.87(m,2h),0.64-0.62(m,2h),0.49-0.44(m,1h),0.28-0.18(m,2h).
實施例3n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(化合物3)的制備
(1)叔丁基4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸酯的制備
將4-甲氧基苯甲酸(1.52g,10mmol)和1-叔丁氧羰基哌嗪(1.86g,10mmol)加入到二氯甲烷(80ml)中，25℃攪拌下加入1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳酰二亞胺鹽酸鹽(2.3g,12mmol)和4-二甲氨基吡啶(121mg,1.0mmol)，加料完畢后，25℃反應4小時，加水(100ml)和二氯甲烷(60ml)，分液，有機相用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮，得產物(2.8g,產率87.5％)。
(2)(4-甲氧基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮的制備
將叔丁基4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸酯(2.8g,8.7mmol)加入到二氯甲烷(20ml)和三氟乙酸(20ml)的混合溶劑中，25℃攪拌0.5小時，tlc檢測反應完全，濃縮，殘留液加入飽和碳酸氫鈉水溶液(150ml)和二氯甲烷(100ml)，分液，有機相用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮得產物(862mg,產率44.9％)。
(3)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-氯-n-(環丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(642.2mg粗品)和(4-甲氧基苯基)(哌嗪-1-基)甲酮(460mg,2.1mmol)溶于四氫呋喃(70ml)中，25℃攪拌0.5小時，降溫至0℃，加入三乙胺(636mg,6.3mmol)，緩慢升溫至25℃，攪拌3小時，加水(100ml)和乙酸乙酯(100ml)，分液，有機相用無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮，粗品經中壓制備液相分離(反相柱，乙腈/h2o＝0～64％)得終產物(300mg,產率:30.6％)。
分子式:c27h31n5o4分子量:489.58lc-ms(m/z)：490.3(m+h+)
1hnmr(400mhz,meod)δ:8.23-8.17(m,1h),7.85-7.78(m,1h),7.70-7.50(m,2h),7.40-7.36(m,2h),7.01-6.97(m,2h),4.76(s,1h),4.66(s,1h),3.84-3.64(m,6h),3.55(d,j＝6.8hz,1h),3.45(d,j＝12.4hz,2h),3.38(d,j＝6.8hz,1h),2.75-2.56(m,4h),1.35-1.30(m,1h),1.12-1.01(m,1h),0.57(d,j＝7.6hz,1h),0.43-0.40(m,1h),0.30(d,j＝5.2hz,1h),0.22(d,j＝4.8hz,1h).
實施例42-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(化合物4)的制備
(1)2-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-氯-n-(環丙基甲基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(306mg,1.0mmol)，4-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈(303mg,1.5mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，加入三乙胺(202mg,2.0mmol)，25℃下反應16小時，濃縮，剩余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得終產物(0.11g,產率23.4％)。
分子式:c27h29n5o3分子量:471.56lc-ms(m/e):472.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod)δ:8.18-8.23(m,1h),7.78-7.84(m,1h),7.56-7.71(m,2h),7.64(d,j＝8.8hz,2h),7.08(d,j＝8.8hz,2h),4.74(s,2h),4.59(s,3h),3.36-3.44(m,2h),2.84-2.88(m,2h),2.50-2.64(m,2h),2.05-2.16(m,2h),1.84-1.95(m,2h),0.82-1.05(m,1h),0.40-0.58(m,2h),0.20-0.32(m,2h).
實施例5n-(環丙基甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺(化合物5)的制備
(1)叔丁基4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-羧酸酯的制備
將4-羥基哌啶(3g,29.7mmol)溶于二氯甲烷(100ml)中，0℃加入三乙胺(7.52g,74.3mmol)，滴加二碳酸二叔丁酯(6.81g,31.2mmol)，滴加完畢25℃反應16小時，tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1)檢測反應完畢，降溫至0℃，滴加甲磺酰氯(3.74g,32.67mmol)，滴加完畢25℃反應3小時。tlc(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)檢測反應完畢，加水(100ml)，分液，有機相無水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產物(7.1g,產率85.6％)。
(2)叔丁基4-((4-甲氧基苯基)硫基)哌啶-1-羧酸酯的制備
將叔丁基4-((甲基磺酰基)氧基)哌啶-1-羧酸酯(2.79g,9.99mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(30ml)中，加入對甲氧基苯硫酚(1.4g,9.99mmol)和碳酸鉀(3.46g,25mmol)，75℃攪拌16小時，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)檢測反應完畢，濾去不溶物，加水(50ml)，乙酸乙酯(30ml×2)萃取，有機相水洗(50ml×2)，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝10:1)純化得產物(1.4g,產率43.3％)。
(3)叔丁基4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-羧酸酯的制備
將叔丁基4-((4-甲氧基苯基)硫基)哌啶-1-羧酸酯(1g,3.09mmol)溶于二氯甲烷(50ml)中，0℃下加入間氯過氧苯甲酸(質量分數70％,2.29g,9.27mmol)，加完后升溫至25℃攪拌16小時，tlc檢測反應完畢(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)，濾去不溶物，濾液真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產物(800mg,產率72.8％)。
(4)4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶的制備
將叔丁基4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-羧酸酯(100mg,0.28mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入三氟乙酸(2ml)，25℃攪拌1小時，tlc(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)檢測反應完畢，真空濃縮得產物(70mg,產率97.5％)。
(5)2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)乙酸乙酯的制備
將4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶(70mg,0.274mmol)溶于乙腈(10ml)中，加入三乙胺(55.5mg,0.548mmol)，溴乙酸乙酯(50.1mg,0.3mmol)，加完后升至85℃攪拌1小時，tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1)檢測反應完畢，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝100:1)得產物(85mg,產率90.8％)。
(6)2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)乙酸的制備
將2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)乙酸乙酯(85mg,0.249mmol)溶于甲醇(3ml)中，加入一水合氫氧化鋰(26mg,0.62mmol)，25℃攪拌2小時，tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1)檢測反應完畢，稀鹽酸調節ph＝2，減壓蒸除甲醇，加水(2ml)，乙酸乙酯萃取(5ml×5)，有機相合并，真空濃縮得產物(71mg,產率91％)。
(7)n-(環丙基甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫喹唑啉-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌啶-1-基)乙酸(71mg,0.227mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入2-(((環丙基甲基)氨基)甲基)喹唑啉-4(3h)-酮(52mg,0.227mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(129.3mg,0.34mmol)和n,n-二異丙基乙胺(73.4mg,0.568mmol)，25℃攪拌16小時，tlc(二氯甲烷:甲醇＝10:1)檢測反應完畢，濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)得終產物(32mg,產率26.9％)。
分子式：c27h32n4o5s分子量：524.64lc-ms(m/z)：525.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:12.7-10.3(m,1h),8.26-8.24(m,1h),7.85-7.72(m,3h),7.67-7.64(m,1h),7.49-7.47(m,1h),7.06-7.01(m,2h),4.58-4.48(m,2h),3.92-3.89(m,3h),3.36-3.26(m,4h),3.22-2.85(m,3h),2.50-2.45(m,1h),2.22-2.16(m,3h),2.05-1.72(m,3h),0.96-0.83(m,2h),0.53-0.20(m,4h)。
實施例6n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物6)的制備
(1)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸(150mg,0.54mmol)和n,n-二異丙基乙胺(139mg,1.08mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(224mg,0.59mmol)，25℃下反應15分鐘，再加入5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(164mg,0.54mmol)的n,n-二甲基甲酰胺溶液(2ml)，25℃下反應30分鐘。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，分液，有機相真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷/甲醇＝40:1)純化得到產物(210mg,產率69.1％)。
(2)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.21g,0.37mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入氯化氫的1,4-二氧六環溶液(4mol/l,5ml)，25℃下反應3小時，真空濃縮，殘余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得終產物(110mg,產率:62.1％)。
分子式：c25h30n6o4分子量：478.55lc-ms(m/z)：479.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.04-7.92(m,3h),6.97-6.93(m,2h),4.53(s,1h),3.88(s,3h),3.46-3.24(m,6h),2.65-2.29(m,3h),2.10-1.89(m,3h),1.10-0.85(m,3h),0.57-0.40(m,2h),0.28-0.18(m,2h).
實施例9n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物9)的制備
(1)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(360mg,1.5mmol)、2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸(416mg,1.5mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(684mg,1.8mmol)和n,n-二異丙基乙胺(581mg,4.5mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(10ml)中，室溫攪拌2小時。加入水(80ml)，用乙酸乙酯(100ml×2)萃取，有機相合并，用飽和食鹽水(150ml)洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產物(80mg,產率:10.1％)。
分子式：c26h32n6o4分子量：492.2lc-ms(m/z)：493.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.02-7.90(m,2h),7.90-7.81(m,1h),7.00-6.91(m,2h),4.62-4.42(m,2h),4.35-4.25(m,3h),3.88(s,3h),3.50-3.38(m,3h),3.30-3.22(m,1h),3.20-1.98(m，2h),2.78-2.60(m,1h),2.40-2.25(m,1h),2.12-2.03(m,1h),2.03-1.96(m,1h),1.96-1.80(m,1h),1.03-0.82(m,4h),0.62-0.36(m,2h),0.35-0.18(m,2h).
實施例102-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物10)的制備
(1)2-氯-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將5-((環丙基甲基氨基)甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.85g,2.8mmol)和三乙胺(1.1g,10.9mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，冷卻至0℃，緩慢滴加2-氯乙酰氯(0.63g,5.6mmol)，升溫至25℃，反應16小時，lc-ms檢測反應完成，將溶劑濃縮，加入乙酸乙酯(50ml)和水(20ml)，分液，有機相濃縮，剩余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得產物(0.53g,產率49.8％)。
(2)2-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-氯-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(500mg,1.3mmol)，4-(哌啶-4-基氧基)苯乙腈(0.26g,1.3mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，加入三乙胺(0.26g,2.6mmol)，25℃下反應16小時，lc-ms檢測反應完成，濃縮，剩余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得產物(0.21g,產率29.6％)。
(3)2-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.21g,0.38mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入氯化氫1,4-二氧六環溶液(5ml)，25℃下反應3小時，濃縮，剩余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得終產物(0.11g,產率61.1％)。
分子式:c24h27n7o3分子量:461.5lc-ms(m/z):462.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ:14.12(s,1h),12.73(s,1h),8.06(s,1h),7.70-7.74(m,2h),7.07-7.12(m,2h),4.49-4.65(m,3h),3.20-3.43(m,4h),2.72-2.81(m,2h),2.30-2.37(m,2h),1.87-2.02(m,2h),1.58-1.65(m,2h),0.82-1.03(m,1h),0.32-0.45(m,2h),0.11-0.23(m,2h)。
實施例112-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物11)的制備
(1)2-氯-n-(環丙基甲基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將5-((環丙基甲基氨基)甲基)-1-甲基-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.58g,2.5mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，冰水浴下加入2-氯乙酰氯(1.4g,12.4mmol)，升至25℃，反應16小時，lc-ms檢測反應完成，濃縮，剩余物加入乙酸乙酯(50ml)和飽和碳酸氫鈉溶液(20ml)，分液，有機相濃縮，剩余物經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝1:1)得產物(0.52g,產率67.5％)。
(2)2-(4-(4-氰基苯氧基)哌啶-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-氯-n-(環丙基甲基)-n-((1-甲基-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(500mg,1.6mmol)，4-(哌啶-4-基氧基)苯甲腈(0.32g,1.6mmol)溶于四氫呋喃(20ml)中，加入三乙胺(0.32g,3.2mmol)，25℃下反應16小時，lc-ms檢測反應完成，濃縮，剩余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得終產物(151mg,產率：19.9％)。
分子式:c25h29n7o3分子量:475.5lc-ms(m/z):476.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ:12.78(s,1h),7.93(s,1h),7.70-7.73(m,2h),7.08-7.12(m,2h),4.64(s,2h),4.48-4.51(m,1h),4.17(s,3h),3.20-3.42(m,4h),2.72-2.81(m,2h),2.30-2.37(m,2h),1.87-2.02(m,2h),1.58-1.65(m,2h),0.82-1.03(m,1h),0.32-0.45(m,2h),0.11-0.23(m,2h).
實施例12n-(環丙基甲基)-2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物12)的制備
(1)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸(0.4g,1.4mmol)，5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(0.42g,1.4mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(20ml)中，加入二異丙基乙胺(0.36g,2.8mmol)，2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n,n′-四甲基脲六氟磷酸酯(0.64g,1.7mmol)，25℃下，反應3小時，加入100ml水，乙酸乙酯(2×30ml)萃取，合并有機相，旋干，剩余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝30:1)得產物(0.46g,產率58.2％)。
(2)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.46g,0.8mmol)溶于二氯甲烷(5ml)中，加入氯化氫1,4-二氧六環溶液(5ml)，25℃下反應3小時，旋干，剩余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得產物(0.25g,產率65.8％)。
(3)n-(環丙基甲基)-2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.25g,0.5mmol)溶于甲醇(25ml)中，加入硼氫化鈉(0.1g,2.6mmol)，25℃下反應3小時，加入5ml水，濃縮，剩余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得產物(0.15g,產率62.5％)。
分子式:c25h32n6o4分子量:480.6lc-ms(m/z):481.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ:7.23,7.90(s,s,1h),7.20(d,j＝8.8hz,2h),6.87(d,j＝8.4hz,2h),4.61-4.68(m,2h),4.25(d,j＝8.2hz,1h),3.81(s,3h),3.44-3.50(m,2h),3.28-3.33(m,2h),3.12-3.15(m,1h),2.94-2.98(m,1h),1.98-2.15(m,3h),1.44-1.71(m,3h),0.95-1.18(m,2h),0.39-0.54(m,2h),0.17-0.26(m,2h).
實施例13n-(環丙基甲基)-2-(4-(甲氧基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物13)的制備
(1)2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)乙酸甲酯的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸甲酯(0.6g,2.0mmol)溶于甲醇(25ml)中，加入硼氫化鈉(0.15g,4.0mmol)，25℃下反應3小時，加入5ml水，旋干，剩余物經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)得產物(0.35g,產率57.4％)。
(2)2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)乙酸的制備
將2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)乙酸甲酯(0.35g,1.1mmol)溶于甲醇(20ml)中，加入2n氫氧化鈉(3.0ml,6.0mmol)，25℃下，反應3小時，濃縮，剩余物中加入20ml水，調節ph＝4，用乙酸乙酯(2×30ml)萃取，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，過濾，旋干，得標題產物0.23g，產率：74.2％。
(3)n-(環丙基甲基)-2-(4-(羥基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-1-(四氫-2h-吡喃-2-基)-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
參考實施例12第(1)步的制備方法制備。
(4)n-(環丙基甲基)-2-(4-(甲氧基(4-甲氧基苯基)甲基)哌啶-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
參考實施例12第(2)步的制備方法制備。
分子式:c26h34n6o4分子量:494.6lc-ms(m/z):495.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ:7.92,8.02(s,s,1h),7.13-7.19(m,2h),6.88-6.93(m,2h),4.59-4.66(m,3h),3.79(s,3h),3.77-3.84(m,1h),3.41-3.43(m,2h),3.30(s,3h),2.95-3.17(m,2h),2.07-2.21(m,2h),1.29-1.62(m,4h),0.88-1.01(m,3h),0.39-0.56(m,2h),0.10-0.20(m,2h)
實施例14n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物14)的制備
(1)乙基2-(哌嗪-1-基)乙酸酯的制備
將叔丁基4-(2-乙氧基-2-氧代乙基)哌嗪-1-羧酸(300mg,1.1mmol)加入到二氯甲烷(10ml)中，加入三氟乙酸(2ml)，反應2小時，反應液直接濃縮得產物(192mg粗品)，不經純化直接用于下一步。
(2)乙基2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸酯的制備
將乙基2-(哌嗪-1-基)乙酸酯(192mg粗品,1.1mmol)和三乙胺(333mg,3.3mmol)溶解于二氯甲烷(10ml)中，加入4-甲氧基苯甲酰氯(290mg,1.7mmol)，25℃下反應2小時，加入水(80ml)和二氯甲烷(80ml)，分液，有機相用無水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝5:1)純化得產物(285mg,兩步產率83.4％)。
(3)2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸的制備
將乙基2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸酯(285mg,0.9mmol)溶解于甲醇(10ml)中，加入2mol/l的氫氧化鋰溶液(4ml)，室溫攪拌3小時。將反應液濃縮至約8ml，加入乙酸乙酯(10ml)萃取，所得水相用1mol/l的鹽酸調ph值至3后濃縮。將所得固體混合物加入四氫呋喃(20ml)中，攪拌0.5小時，抽濾，濾餅用四氫呋喃洗(10ml)，濾液濃縮得產物(230mg,產率88.9％)。
(4)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸(230mg,0.8mmol)、5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-2-(4-甲氧基芐基)-2,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(272mg,0.8mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(380mg,1.0mmol)和n,n-二異丙基乙胺(310mg,2.4mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(8ml)中，室溫攪拌2小時。加入水(50ml)，乙酸乙酯(60ml×2)萃取，有機相合并，飽和食鹽水(150ml)洗，無水硫酸鈉干燥，濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產物(280mg,產率56.5％)。
(5)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(280mg,0.5mmol)溶解于三氟乙酸(10ml)中，加入苯甲醚(0.3ml)，加熱至回流反應8小時。反應液直接濃縮，粗品經硅膠柱層析得產物(25mg,產率11.2％)。
分子式：c24h29n7o4分子量：479.54lc-ms(m/z)：480.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:13.45,11.05(s,1h),8.10-7.95(m,1h),7.50-7.40(m,2h),7.02-6.89(m,2h),4.90-4.50(m,2h),4.18-3.95(m,2h),3.95-3.72(m,5h),3.65-3.55(m,1h),3.45-3.42(m,1h),3.40-3.25(m,2h),2.98-2.60(m,4h),1.10-0.80(m,2h),0.68-0.55(m,1h),0.50-0.38(m,1h),0.35-0.20(m,2h).
實施例15n-(環丙基甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物15)的制備
(1)叔丁基4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-羧酸酯的制備
將叔丁基哌嗪-1-羧酸酯(2.79g,15mmol)溶于二氯甲烷(40ml)中，加入三乙胺(3.03g,3.0mmol)，冰浴下慢慢加入4-甲氧基苯磺酰氯(3.1g,15mmol)，升至25℃反應12小時。反應液真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化得到產物(4.0g,產率74.9％)。
(2)1-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪的制備
將叔丁基4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-羧酸酯(4.0g,11.2mmol)加到二氯甲烷(20ml)中，加入三氟乙酸(10ml)，25℃下反應4小時。反應液真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)純化得到產物(2.5g,產率87.1％)。
(3)乙基2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)乙酸酯的制備
將1-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪(233mg,0.91mmol)和三乙胺(184mg,1.82mmol)溶于乙腈(20ml)，冰浴下滴加2-溴乙酸乙酯(167mg,1.0mmol)，滴加完畢，升溫到85℃繼續反應8小時。反應液真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)純化得產物(250mg,產率80.3％)。
(4)2-(4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基)乙酸的制備
將乙基2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)乙酸酯(250mg,0.73mmol)加入到乙醇(6ml)中，然后加入氫氧化鈉(84mg,2.1mmol)的水溶液(2ml)，25℃下反應8小時。用鹽酸將調節ph值到4，真空濃縮，所得粗品使用二氯甲烷/甲醇(10/1，20ml×2)洗滌，過濾除掉氯化鈉，所得濾液真空濃縮得到產物(200mg,產率87.3％)。
(5)n-(環丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯磺酰基)哌嗪-1-基)乙酰胺的制備
將2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)乙酸(170mg,0.54mmol)和n,n-二異丙基乙胺(139mg,1.08mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，再加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(224mg,0.59mmol)，反應液25℃下反應15分鐘，再加入5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(183mg,0.54mmol)的n,n-二甲基甲酰胺(2ml)溶液，25℃下反應30分鐘。加入水(20ml)和乙酸乙酯(20ml)，分液，有機相真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝40:1)純化得到產物(200mg,產率58.2％)。
(6)n-(環丙基甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(4-((4-甲氧基苯基)磺酰基)哌嗪-1-基)乙酰胺(200mg,0.31mmol)溶于三氟乙酸(20ml)中，加入催化量的苯甲醚(0.2ml)，于90℃下反應12小時。反應液真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)得終產物(120mg,產率75.1％)。
分子式：c23h29n7o5s分子量：515.59lc-ms(m/z)：516.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,dmso-d6)δ:9.78(brs,1h),8.01(brs,1h),7.73-7.60(m,2h),7.22-7.14(m,2h),4.56-4.48(m,2h),3.87-3.84(m,3h),3.70-3.00(m,8h),2.80-2.60(m,2h),0.90-0.80(m,1h),0.45-0.15(m,4h).
實施例16n-(環丙基甲基)-2-(4-(2-(4-甲氧基苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物16)的制備
(1)n-(環丙基甲基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(4-(2-(4-甲氧基苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(465mg,1.0mmol)和對甲氧基苯乙酸(166mg,1.0mmol)加入到n,n-二甲基甲酰胺(40ml)中，攪拌下加入三乙胺(202mg,2.0mmol)和2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(494mg,1.3mmol)，25℃下攪拌反應2小時，lc-ms檢測反應完全，加水(100ml)和乙酸乙酯(150ml)，分液，有機相用飽和食鹽水(100ml×2)洗滌，無水硫酸鈉干燥，抽濾，濾液濃縮得產物(600mg,產率97.8％)。
(2)n-(環丙基甲基)-2-(4-(2-(4-甲氧基苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-n-((2-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-2h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(4-(2-(4-甲氧基苯基)乙酰基)哌嗪-1-基)乙酰胺(600mg,0.98mmol)加入到三氟乙酸(50ml)和苯甲醚(0.5ml)中，升溫至80℃反應16小時。冷卻至室溫，減壓蒸除溶劑，加飽和碳酸氫鈉水溶液(100ml)，超聲震蕩出現沉淀，抽濾，濾餅用水(100ml)洗滌，真空干燥得終產物(410mg,產率84.8％)。
分子式：c25h31n7o4分子量：493.57lc-ms(m/z)：494.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:13.21,11.15(s,1h),8.04-7.97(m,1h),7.19-7.16(m,2h),6.89-6.86(m,2h),4.72(s,1h),4.55(s,1h),3.98-3.88(m,3h),3.81(s,3h),3.72(d,j＝3.6hz,3h),3.52-3.27(m,4h),2.71-2.67(m,2h),2.60-2.50(m,2h),0.99-0.91(m,1h),0.59-0.19(m,4h).
實施例172-(4-(4-氰基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物17)的制備
(1)2-(4-(4-氰基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將4-氰基苯甲酸(0.147g,1.0mmol)和n-(環丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(0.466g,1.0mmol)，溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，加入2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(0.418g,1.1mmol)，三乙胺(0.152g,1.5mmol)，25℃反應1小時后，倒入水(20ml)，乙酸乙酯萃取(10ml×3)，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，經柱層析(石油醚:乙酸乙酯＝2:1)得到產物(0.405g,產率68.1％)。
(2)2-(4-(4-氰基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-氰基苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.100g，0.17mmol)，溶于三氟乙酸(5ml)，滴加苯甲醚(0.1ml)，升溫至90℃反應2小時，反應完畢，將反應液濃縮，加入飽和碳酸氫鈉溶液(10ml)，乙酸乙酯萃取(10ml×3)，合并有機相，無水硫酸鈉干燥，減壓濃縮，經柱層析(二氯甲烷:甲醇＝10:1)得到終產物(50mg,產率61.7％)。
分子式：c24h26n8o3分子量：474.5lc-ms(m/z)：475.3(m+h+)
1hnmr(400mhz,dmso-d6)δ:14.03-14.15(m,1h),12.07-12.58(m,1h),8.15-8.29(m,1h),7.86-7.90(m,2h),7.51-7.57(m,2h),4.64(d,j＝21.6hz,1h),4.48(d,j＝17.2hz,1h),3.61(d,j＝28.4hz,2h),3.39-3.41(m,1h),3.19-3.32(m,5h),2.43-2.54(m,4h),0.87-1.03(m,1h),0.43(d,j＝7.6hz,1h),0.32(d,j＝7.2hz,1h),0.26(s,1h),0.10(s,1h).
實施例18n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物18)的制備
(1)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)-2-(哌嗪-1-基)乙酰胺(466mg,1.0mmol)，三乙胺(203mg,2.0mmol),加入到二氯甲烷(30ml)中，降至0℃，然后緩慢滴加4-氟苯甲酰氯(159mg,1.0mmol)保持0℃反應1小時，反應完畢后減壓蒸干，得產物(0.6g,粗品)。
(2)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-氟苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(0.6g,粗品)溶于三氟乙酸(10ml)中，然后加入苯甲醚(0.1ml)。加熱至90℃反應3小時，反應完畢后，濃縮，殘余物經硅膠柱層析(dcm:meoh＝20:1)得產物(0.26g,兩步產率:55.6％)。
分子式：c23h26fn7o3分子量：467.5lc-ms(m/z)：468.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ：7.99,8.06(s,s,1h),7.45-7.53(m,2h),7.09-7.14(m,2h),4.58,4.74(s,s,2h),3.72-4.20(m,4h),3.60(s,1h),3.44(s,1h),3.28-3.34(m,2h),2.76(s,4h),0.99-1.00(m,1h),0.59(d,j＝7.6hz,1h),0.43(d,j＝7.6hz,1h),0.27(d,j＝4.4hz,1h),0.22(d,j＝4.4hz,1h).
實施例192-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(化合物19)的制備
(1)4-氯苯甲酰氯的制備
將4-氯苯甲酸(1.57g,10.0mmol)溶于干燥的二氯甲烷(100ml)中，加入催化量的dmf(0.1ml)，冰浴，氮氣保護下緩慢加入草酰氯(1.52g,12.0mmol)，加完升至室溫(25℃)反應2小時。反應完畢，濃縮，加入二氯甲烷(20ml)，再次濃縮得產物1.7g,產率97.1％。
(2)叔丁基4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸酯的制備
將4-氯苯甲酰氯(1.7g,9.7mmol)溶于二氯甲烷中(20ml)，冰浴冷卻，加入三乙胺(1.01g10.0mmol)，緩慢加入n-boc-哌嗪(1.86g,10.0mmol)，加完后，升溫至25℃攪拌1小時，將反應液倒入水(50ml)中。用乙酸乙酯(100ml)萃取，無水硫酸鈉干燥，濃縮得標題產物2.9g，產率92.1％。
(3)(4-氯苯基)(哌嗪-1-基)甲酮的制備
將叔丁基4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-甲酸酯(2.9g,8.9mmol)溶于二氯甲烷(10ml)和三氟乙酸(10ml)的混合溶液中，室溫25℃反應2小時。反應完畢，濃縮得到粗產物1.8g。
(4)2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯的制備
將(4-氯苯基)(哌嗪-1-基)甲酮(1.8g,8.0mmol)溶于乙腈中(50ml)，加入溴乙酸乙酯(1.34g,8.0mmol)、碳酸鉀(1.1g,8.0mmol)，60℃反應4小時。反應完畢，抽濾，濾液減壓脫除溶劑得到粗產物，柱色譜(石油醚:乙酸乙酯＝3:1)分離得產物2.0g，產率80.3％。
(5)2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸的制備
將2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸乙酯(2.0g,6.4mmol)溶于甲醇中(30ml)，加入氫氧化鋰(154mg,6.4mmol)，室溫(25℃)反應4小時。反應完畢，加入稀鹽酸(1mol/l,10ml)，用乙酸乙酯(100ml)萃取，無水硫酸鈉干燥，柱色譜分離(dcm:meoh＝20:1)得產物1.5g，產率82.4％。
(6)2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酰氯的制備
將2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酸(566mg,2.0mmol)溶于干燥的二氯甲烷(20ml)中，加入催化量的dmf(0.05ml)，冰浴，氮氣保護下緩慢加入草酰氯(279mg,2.2mmol)，加完升至室溫(25℃)反應2小時。反應完畢，濃縮，加入二氯甲烷(20ml)，再次濃縮得產物550mg,產率91.4％。
(7)2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)乙酰氯(550mg,1.83mmol)溶于二氯甲烷中(20ml)，冰浴，加入三乙胺(202mg,2.0mmol)，緩慢加入5-(((環丙基甲基)氨基)甲基)-1-(4-甲氧基芐基)-1,6-二氫-7h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-7-酮(510mg,1.5mmol)，加完后，升至25℃攪拌1小時，將反應液倒入水(50ml)中。用乙酸乙酯(100ml)萃取，無水硫酸鈉干燥，柱色譜分離(dcm:meoh＝20:1)得產物207mg，產率22.8％。
(8)2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-氯苯甲酰基)哌嗪-1-基)-n-(環丙基甲基)-n-((1-(4-甲氧基芐基)-7-氧代-6,7-二氫-1h-吡唑并[4,3-d]嘧啶-5-基)甲基)乙酰胺(207mg,0.34mmol)溶于三氟乙酸(10ml)中，90℃反應2小時。反應完畢，冷至室溫(25℃)，加入乙酸乙酯(20ml)，析出固體，抽濾，濾出的固體干燥得產物100mg，產率60.2％。
分子式：c23h26cln7o3分子量：484.0lc-ms(m/z):484.2(m+h+)
1h-nmr(400mhz,meod-d4)δ:7.90-8.05(m,1h),7.44(d,j＝6.8hz,2h),7.41(d,j＝6.4hz,2h),4.63,4.67(s,s,2h),3.75-3.90(m,2h),3.50-3.65(m,2h),3.30-3.50(m,4h),2.55-2.75(m,4h),0.85-1.00(m,1h),0.40-0.60(m,2h),0.20-0.35(m,2h).
實施例20n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)乙酰胺(化合物20)的制備
(1)1-氨基-1h-咪唑-5-甲酸甲酯的制備
將1h-咪唑-5-甲酸甲酯(2g,15.86mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(50ml)，0℃加入氫化鈉(質量分數60％,760mg,19mmol)，攪拌0.5小時，加入o-(2,4-二硝基苯基)羥胺(3.47g,17.45mmol)，升溫至25℃反應16小時，tlc(二氯甲烷:甲醇＝20:1)檢測反應完全，加水(50ml)，乙酸乙酯萃取(50ml×2)，有機相合并，水洗(50ml×2)，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮得產物(1.1g,產率49.1％)。
(2)2-(氯甲基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3h)-酮的制備
將1-氨基-1h-咪唑-5-甲酸甲酯(1.1g,7.8mmol)溶于氯化氫的1,4-二氧六環溶液(4mol/l,10ml)中，加入氯乙腈(883.4mg,11.7mmol)，25℃攪拌1小時，真空濃縮，加入乙腈(10ml)和飽和碳酸氫鈉溶液(2ml)，50℃攪拌1小時。tlc檢測反應完全(二氯甲烷:甲醇＝20:1)，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝50:1)純化得產物(720mg,產率50％)。
(3)2-(((環丙基甲基)氨基)甲基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3h)-酮的制備
將2-(氯甲基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3h)-酮(500mg,2.71mmol)溶于乙腈(25ml)中，加入環丙甲胺(770.7mg,10.84mmol)，25℃反應16小時，tlc檢測反應完畢(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得產物(50mg,產率8.4％)。
(4)n-(環丙基甲基)-2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)-n-((4-氧代-3,4-二氫咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-2-基)甲基)乙酰胺的制備
將2-(4-(4-甲氧基苯甲酰基)哌啶-1-基)乙酸(63.2mg,0.228mmol)溶于n,n-二甲基甲酰胺(5ml)中，加入2-(((環丙基甲基)氨基)甲基)咪唑并[5,1-f][1,2,4]三嗪-4(3h)-酮(50mg,0.228mmol)、2-(7-偶氮苯并三氮唑)-n,n,n',n'-四甲基脲六氟磷酸酯(104.2mg,0.274mmol)和n,n-二異丙基乙胺(88.4mg,0.684mmol)，25℃攪拌1小時。tlc檢測反應完全(二氯甲烷:甲醇＝10:1)，加水(5ml)，乙酸乙酯萃取(10ml×3)，有機相合并，水洗，無水硫酸鈉干燥，真空濃縮，粗品經硅膠柱層析(二氯甲烷:甲醇＝20:1)純化得終產物(65mg,產率59.6％)。
分子式：c25h30n6o4分子量：478.55lc-ms(m/z)：479.3(m+h+)
1h-nmr(400mhz,cdcl3)δ:8.07-8.06(m,1h),7.96-7.86(m,3h),7.12-6.81(m,3h),4.52-4.40(m,2h),3.89(s,3h),3.43-3.25(m,4h),3.15-2.96(m,2h),2.68-2.57(m,1h),2.40-2.25(m,2h),2.10-2.00(m,2h),1.90-1.85(m,2h),0.98-0.85(m,1h),0.63-0.46(m,2h),0.34-0.24(m,2h)。