本發明涉及藥物化學和藥物治療學領域。具體涉及新的硼酸類化合物及其制備方法和用途，尤其一種作為20s蛋白酶體抑制劑的硼酸類化合物及其制備方法。
背景技術：
研究報道了泛素-蛋白酶體通路(ubiquitin-proteasomepathway，簡稱upp)是真核細胞中蛋白質降解的主要途徑，能夠調控參與細胞周期控制的蛋白質水平，維持不同細胞過程的生物體內平衡。研究顯示，在大部分哺乳動物細胞中，該通路能夠識別和降解錯誤折疊的蛋白質；大量實驗證明，癌癥、心腦血管疾病以及神經退行性疾病的發病都與泛素-蛋白酶體通路有重要的聯系。
研究公開了在泛素-蛋白酶體通路中，多重催化的蛋白酶復合物26s蛋白酶體是水解蛋白的主要組分，由兩個調節顆粒19s蛋白酶體和一個圓柱形的20s蛋白酶體組成，19s蛋白酶體位于20s蛋白酶體的兩端，由18個亞基組成，控制蛋白底物進入20s蛋白酶體空腔中的識別、折疊和易位；20s蛋白酶體由28個亞基構成4個堆疊環，其中7個不同的α亞基(α1-α7)形成兩個外部腔室，7個不同的β亞基(β1-β7)形成具有蛋白水解活性位點的中心腔室；有關中心腔室中的三個亞基蛋白水解活性已被研究確定，其包括：β1亞基具有谷氨酰轉肽水解活性(pgph)，β2亞基具有胰蛋白酶樣活性(t-l)，β5亞基具有糜蛋白酶樣活性(ct-l)。
硼替佐米是共價型可逆的選擇性蛋白酶體抑制劑，主要抑制糜蛋白酶樣活性，其于2003年由千年制藥公司在美國上市，目前已用于臨床治療多發性骨髓瘤。然而，臨床數據顯示，硼替佐米仍存在著較多的毒副作用，例如腹瀉、嘔吐、疼痛性外周神經病變以及血小板減少癥等。迄今為止，這些毒副作用的機制尚不清楚，此外，硼替佐米的臨床使用需要每周兩次的靜脈注射或皮下注射給藥方案，給患者帶來了極大的不便。因此，研制開發一種毒副作用低、給藥靈活、能夠口服的新型蛋白酶體抑制劑具有十分重要的現實意義。
技術實現要素：
本發明的目的在于克服現有技術的缺陷，提供一種結構新穎且具有抑制蛋白酶體功能的硼酸類化合物。
本發明的另一目的在于提供上述硼酸類化合物的制備方法。
本發明進一步目的在于提供上述硼酸類化合物在用于制備治療與蛋白酶體相關疾病藥物中的用途。
具體的，
本發明提供了式i結構的硼酸類化合物，
其中：
x為o或者nh；
r為芳基或者雜芳基；
n為0或者1。
在本發明的一些實施例中，式i化合物具有以下結構：
其中：
x為o或者nh；
r為芳基或者雜芳基；
n為0或者1。
在本發明的一些實施例中，式i化合物具有以下結構：
其中：
x為o或者nh；
r為芳基或者雜芳基；
n為0或者1。
在本發明的一些實施例中，式i-a化合物具有以下結構：
其中：
x為o或者nh；
r為芳基或者雜芳基；
n為0或者1。
在本發明的一些實施例中，式i-a化合物具有以下結構：
其中：
x為o或者nh；
r為芳基或者雜芳基；
n為0或者1。
在本發明的一些實施例中，式i-b化合物具有以下結構：
其中：
x為o或者nh；
r為芳基或者雜芳基；
n為0或者1。
在在本發明的一些實施例中，式i-b化合物具有以下結構：
其中：
x為o或者nh；
r為芳基或者雜芳基；
n為0或者1。
本發明中，
術語“芳基”用于表示芳族碳環基，包括單環或者多環芳烴；
術語“雜芳基”用于表示取代的或未取代的芳族碳環基，其環結構包括1-4個雜原子；也用于表示具有兩個或者多個環的芳族碳環基；
虛線和粗線用于表示一個或多個立體中心的化學結構，指示化學結構中立體中心的絕對立體化學結構；
本發明中，結構圖式中所描述的鍵并非表示較優的立體結構，含有一個或多個立體中心的化學結構包含所有可能的立體異構體形式以及其混合物；
術語“抑制劑”用于表示能夠阻斷或減少酶、酶系統、受體或者其他藥理學靶標活性的化合物。
術語“治療”用于表示包括逆轉、減輕或阻止臨床病癥及相關的病理狀態，以改善或穩定患者的情況。
本發明進一步提供了所述的化合物的制備方法：
本發明的化合物可以通過多種合成方法來制備，用于制備本發明化合物的一部分原料可以來源于商業試劑公司，另一部分則可以使用本領域公知的簡明轉換方法制備。
具體的，所示的通式i化合物可根據下述通用合成路線制備，其中通式i化合物的取代基具有前文所述的意義。該合成方法僅為示例性的說明本發明，而并非將其限制于該發明。本發明中，按下述路線合成式i-a化合物：
式iii-1在n-buli作用下得到式iii-2，式iii-2與b(och3)3反應得到式iii-3，式iii-3與iii-4-a經酯交換反應得到式iii-5-a，式iii-5-a與金屬試劑i-bumgbr反應，再經無水zncl2催化得到式iii-6-a，式iii-6-a與lin(sime3)2反應得到式iii-7-a，式iii-7-a在hcl作用下脫保護得到式iii-8-a，式iii-8-a與式iv-1經縮合反應得到式iv-2-a，式iv-2-a脫除與b連接的基團得到式i-a；
按下述路線合成式i-b化合物：
式iii-1在n-buli作用下得到式iii-2，式iii-2與b(och3)3反應得到式iii-3，式iii-3與iii-4-b經酯交換反應得到式iii-5-b，式iii-5-b與金屬試劑i-bumgbr反應，再經無水zncl2催化得到式iii-6-b，式iii-6-b與lin(sime3)2反應得到式iii-7-b，式iii-7-b在hcl作用下脫保護得到式iii-8-b，式iii-8-b與式iv-1經縮合反應得到式iv-2-b，式iv-2-b脫除與b連接的基團得到式i-b。
更具體的，本發明按下述路線合成通式i化合物：
其中，通式i化合物的取代基具有前文所述的意義。
合成式i-a化合物：
1)式iii-1結構的化合物在-110℃條件下與n-buli反應得到式iii-2所示的有機鋰中間體；2)式iii-2結構的化合物在-110℃條件下與b(och3)3反應得到iii-3所示的硼酸二甲酯結構；3)式iii-3結構的化合物與式iii-4-a所示的手性蒎烷二醇在室溫條件下進行酯交換反應得到iii-5-a所示的硼酸酯結構；
4)式iii-5-a結構的化合物先在-78℃條件下與金屬試劑i-bumgbr反應，后又在室溫條件下經無水zncl2催化得到iii-6-a所示的硼酸酯結構；
5)式iii-6-a結構的化合物在-78℃條件下與lin(sime3)2反應得到式iii-7-a所示的雙(三甲基硅)保護的氨基硼酸酯結構；
6)式iii-7-a結構的化合物在-78℃條件下與hcl作用脫除雙(三甲基硅)保護得到式iii-8-a所示的無保護的氨基硼酸酯鹽酸鹽結構；
7)式iii-8-a結構的化合物與式iv-1結構的化合物在縮合劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(縮寫為edc·hcl)和1-羥基苯并三氮唑(縮寫為hobt)存在的條件下反應得到式iv-2-a所示的硼酸酯結構；
8)式iv-2-a結構的化合物在室溫條件下與2-甲基丙基硼酸發生酯交換反應得到式i-a所示的目標硼酸化合物。
合成式i-b化合物：
1)式iii-1結構的化合物在-110℃條件下與n-buli反應得到式iii-2所示的有機鋰中間體；
2)式iii-2結構的化合物在-110℃條件下與b(och3)3反應得到iii-3所示的硼酸二甲酯結構；
3)式iii-3結構的化合物與式iii-4-b所示的手性蒎烷二醇在室溫條件下進行酯交換反應得到iii-5-b所示的硼酸酯結構；
4)式iii-5-b結構的化合物先在-78℃條件下與金屬試劑i-bumgbr反應，后又在室溫條件下經無水zncl2催化得到iii-6-b所示的硼酸酯結構；
5)式iii-6-b結構的化合物在-78℃條件下與lin(sime3)2反應得到式iii-7-b所示的雙(三甲基硅)保護的氨基硼酸酯結構；
6.式iii-7-b結構的化合物在-78℃條件下與hcl作用脫除雙(三甲基硅)保護得到式iii-8-b所示的無保護的氨基硼酸酯鹽酸鹽結構；
7)式iii-8-b結構的化合物與式iv-1結構的化合物在縮合劑1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺鹽酸鹽(縮寫為edc·hcl)和1-羥基苯并三氮唑(縮寫為hobt)存在的條件下反應得到式iv-2-b所示的硼酸酯結構；
8)式iv-2-b結構的化合物在室溫條件下與2-甲基丙基硼酸發生酯交換反應得到式i-b所示的目標硼酸化合物。
本發明進行了藥理學研究實驗，結果表明，所制得的通式i化合物具有良好的蛋白酶體抑制活性，部分化合物在納摩爾水平下表現出良好的蛋白酶體抑制活性，可用于制備蛋白酶體抑制劑，用于治療與蛋白酶體相關的疾病。
具體實施方式
以下結合實施例對本發明作進一步的說明，但是這些實施例并不限制本發明的范圍。
本發明實驗方法中用于制備本發明化合物的一部分原料可以來源于商業試劑公司，另一部分則可以使用本領域公知的簡明轉換方法制備；化合物結構通過核磁共振(nmr)和液質聯用(lcms)確定；nmr測定使用varian400mhz核磁共振儀，測定試劑為cdcl3、cd3od和dmso-d6，內標為tms，化學位移(δ)以ppm為單位；lcms測定使用agilenttechnologies6120液質聯用儀；柱層析使用yamazenai-580s中壓制備色譜儀進行產物純化。
實施例1：制備二氯亞甲基鋰(化合物iii-2)
lichcl2
(iii-2)
在氮氣保護條件下，向200ml無水四氫呋喃中加入無水二氯甲烷(4.6ml，72mmol)，溫度降至-110℃，逐滴滴加1.6m的正丁基鋰正己烷溶液(38ml，60mmol)，滴加完畢后，繼續在-110℃溫度下攪拌1小時；反應溶液未經純化直接用于下步反應。
實施例2：制備二氯亞甲基硼酸二甲酯(化合物iii-3)
在氮氣保護條件下，溫度繼續控制在-110℃，向實施例1制備好的化合物iii-2溶液中加入硼酸三甲酯(8ml，72mmol)，繼續在-110℃溫度下攪拌1小時，然后加入5nhcl溶液12ml，反應慢慢升至室溫，將反應液轉入分液漏斗中，分出有機相，水相利用乙醚萃取(3×10ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑得白色固體8.7g，產率92％；反應產物未經純化直接用于下步反應。
實施例3：制備(+)-α-蒎烷二醇(化合物iii-4-a)
在氮氣保護條件下，向100ml叔丁醇中加入me3no·2h2o(11g，102mmol)的水溶液，攪拌下依次加入(+)-α-蒎烯(15ml，97mmol)、吡啶(7ml)和四氧化鋨(51mg，0.2mmol)，然后升溫至回流，24小時后tlc檢測顯示反應完全，反應降至室溫，加入nahso3(1.2g，12mmol)攪拌1小時，將反應液轉入分液漏斗中，分出有機相，水相利用乙醚萃取(3×20ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝30：1)得白色固體15g，產率91％。
實施例4：制備二氯亞甲基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯(化合物iii-5-a)
向150ml無水四氫呋喃中加入實施例2化合物iii-3(10g，63mmol)和實施例3化合物iii-4-a(7.2g，42mmol)，室溫攪拌，18小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得無色油狀液體10g，產率91％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ5.39(s,1h),4.46(d,1h,j＝8.8hz),2.33(m,2h),2.12(t,1h,j＝5.2hz),1.94(m,2h),1.46(s,3h),1.30(s,3h),1.21(d,1h,j＝11.2hz),0.84(s,3h).。
實施例5：制備2-甲基-4-氯-丁基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯(化合物iii-6-a)
在氮氣保護條件下，向100ml無水乙醚中加入實施例4化合物iii-5(10g，38mmol)，溫度降至-78℃，逐滴滴加2m的異丁基溴化鎂乙醚溶液(17ml，33mmol)，滴加完畢后，加入干燥的zncl2粉末，反應慢慢升至室溫，20小時后tlc檢測顯示反應完全，過濾除去固體，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝200：1)得無色油狀液體7.6g，產率81％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ4.36(d,1h,j＝9.1hz),3.52(m,1h),2.35(m,1h),2.24(m,1h),2.08(t,1h,j＝5.4hz),1.92(m,2h),1.87(d,1h,j＝1.6hz),1.79(m,1h),1.62(m,1h),1.41(s,3h),1.29(s,3h),1.18(d,1h,j＝11.0hz),0.92(d,3h,j＝6.6hz),0.90(d,3h,j＝6.6hz),0.84(s,3h).。
實施例6：2-甲基-4-氨基-丁基硼酸-(+)-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽(化合物iii-8-a)的制備
在氮氣保護條件下，向100ml無水四氫呋喃中加入實施例5化合物iii-6-a(4.5g，16mmol)，溫度降至-78℃，逐滴滴加1m的lin(sime3)2四氫呋喃溶液(24ml，24mmol)，滴加完畢后，反應慢慢升至室溫，24小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，加入50ml正己烷溶解，過濾除去固體，濾液溫度降至-78℃，加入2m的hcl乙醚溶液(24ml，48mmol)，反應慢慢升至室溫，出現大量白色固體，過濾并用乙醚洗滌，得到白色固體3.2g，產率66％。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ7.84(s,3h),7.41(s,1h),7.29(s,1h),7.16(s,1h),4.44(m,1h),2.74(m,1h),2.32(m,1h),2.18(m,1h),1.99(t,1h,j＝5.5hz),1.88(m,1h),1.73(m,2h),1.47(m,2h),1.35(s,3h),1.24(s,3h),1.11(d,1h,j＝10.8hz),0.86(d,6h,j＝6.5hz),0.81(s,3h).。
實施例7：(-)-α-蒎烷二醇(化合物iii-4-b)的制備
在氮氣保護條件下，向100ml叔丁醇中加入me3no·2h2o(11g，102mmol)的水溶液，攪拌下依次加入(-)-α-蒎烯(15ml，97mmol)、吡啶(7ml)和四氧化鋨(51mg，0.2mmol)，然后升溫至回流，20小時后tlc檢測顯示反應完全，反應降至室溫，加入nahso3(1.2g，12mmol)攪拌1小時，將反應液轉入分液漏斗中，分出有機相，水相利用乙醚萃取(3×20ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝30：1)得白色固體14g，產率85％。
實施例8：二氯亞甲基硼酸-(-)-α-蒎烷二醇酯(化合物iii-5-b)的制備
向150ml無水四氫呋喃中加入實施例2化合物iii-3(10g，63mmol)和實施例7化合物iii-4-b(7.2g，42mmol)，室溫攪拌，23小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝10：1)得無色油狀液體9g，產率81％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ5.39(s,1h),4.46(d,1h,j＝8.7hz),2.33(m,2h),2.12(t,1h,j＝5.4hz),1.94(m,2h),1.46(s,3h),1.30(s,3h),1.20(d,1h,j＝11.2hz),0.84(s,3h).。
實施例9：2-甲基-4-氯-丁基硼酸-(-)-α-蒎烷二醇酯(化合物iii-6-b)的制備
在氮氣保護條件下，向100ml無水乙醚中加入實施例8化合物iii-5-b(10g，38mmol)，溫度降至-78℃，逐滴滴加2m的異丁基溴化鎂乙醚溶液(17ml，33mmol)，滴加完畢后，加入干燥的zncl2粉末，反應慢慢升至室溫，22小時后tlc檢測顯示反應完全，過濾除去固體，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝200：1)得無色油狀液體5.8g，產率62％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ4.36(d,1h,j＝8.8hz),3.52(m,1h),2.35(m,1h),2.24(m,1h),2.08(t,1h,j＝5.4hz),1.91(s,2h),1.87(s,1h),1.79(m,1h),1.61(m,1h),1.41(s,3h),1.29(s,3h),1.18(d,1h,j＝11.1hz),0.92(d,3h,j＝6.6hz),0.90(d,3h,j＝6.6hz),0.84(s,3h).。
實施例10：2-甲基-4-氨基-丁基硼酸-(-)-α-蒎烷二醇酯鹽酸鹽(化合物iii-8-b)的制備
在氮氣保護條件下，向100ml無水四氫呋喃中加入實施例9化合物iii-6-b(4.5g，16mmol)，溫度降至-78℃，逐滴滴加1m的lin(sime3)2四氫呋喃溶液(24ml，24mmol)，滴加完畢后，反應慢慢升至室溫，18小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，加入50ml正己烷溶解，過濾除去固體，濾液溫度降至-78℃，加入2m的hcl乙醚溶液(24ml，48mmol)，反應慢慢升至室溫，出現大量白色固體，過濾并用乙醚洗滌，得到白色固體4.1g，產率85％。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ7.85(s,3h),7.42(s,1h),7.29(s,1h),7.16(s,1h),4.45(d,1h,j＝8.3hz),2.76(m,1h),2.32(m,1h),2.20(m,1h),2.00(t,1h,j＝5.3hz),1.88(s,1h),1.73(m,2h),1.48(t,2h,j＝7.3hz),1.36(s,3h),1.25(s,3h),1.11(dd,1h,j＝5.5hz,j＝10.6hz),0.86(d,6h,j＝4.8hz),0.82(s,3h).。
實施例11：(s)-2-苯氧基-3-苯基丙酸甲酯的制備
在氮氣保護條件下，向50ml無水甲苯中依次加入(r)-2-羥基-3-苯基丙酸甲酯(1.1g，6mmol)、苯酚(0.38g，4mmol)和三苯基膦(1.6g，6mmol)，溫度降至0℃攪拌，逐滴滴加diad(1.2g，6mmol)的無水甲苯溶液，反應慢慢升至室溫，24小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，向剩余物中加入10ml乙醚和10ml正己烷，過濾除去固體，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝50：1)得產物0.58g，產率57％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.30(d,4h,j＝4.4hz),7.23(m,3h),6.95(t,1h,j＝7.4hz),6.83(d,2h,j＝7.8hz),4.81(m,1h),3.72(s,3h),3.25(m,2h).ms(esi)m/z257.0[m+h]+,279.0[m+na]+.
(s)-2-苯氧基-3-苯基丙酸的制備
向5ml四氫呋喃中加入(s)-2-苯氧基-3-苯基丙酸甲酯(0.35g，1.4mmol)，室溫攪拌，加入7ml的1m氫氧化鈉溶液，6小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，向剩余物中加入6m的hcl溶液酸化，利用乙醚萃取(3×5ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑得白色固體0.33g，產率97％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ9.94(s,1h),7.29(m,7h),6.98(t,1h,j＝7.4hz),6.85(d,2h,j＝8.2hz),4.85(m,1h),3.29(m,2h).ms(esi)m/z241.0[m-h]-.
((r)-3-甲基-1-((s)-2-苯氧基-3-苯基丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-1)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-2-苯氧基-3-苯基丙酸(27mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，13小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，5小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝100：1)得白色固體17mg，產率44％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ7.26(m,7h),6.96(m,3h),5.11(m,1h),3.26(m,2h),2.66(t,1h,j＝7.3hz),1.48(m,1h),1.24(t,2h,j＝7.1hz),0.81(d,6h,j＝6.6hz).ms(esi)m/z354.0[m-h]-,368.0[m+ch2-h]-,382.0[m+2ch2-h]-.。
實施例12：(s)-2-(1-萘氧基)-3-苯基丙酸甲酯的制備
在氮氣保護條件下，向50ml無水甲苯中依次加入(r)-2-羥基-3-苯基丙酸甲酯(1.1g，6mmol)、1-萘酚(0.58g，4mmol)和三苯基膦(1.6g，6mmol)，溫度降至0℃攪拌，逐滴滴加diad(1.2g，6mmol)的無水甲苯溶液，反應慢慢升至室溫，24小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，向剩余物中加入10ml乙醚和10ml正己烷，過濾除去固體，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝60：1)得產物0.56g，產率46％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.31(m,1h),7.78(m,1h),7.40(m,8h),7.24(m,1h),6.64(d,1h,j＝7.6hz),5.03(m,1h),3.71(s,3h),3.41(m,2h).ms(esi)m/z307.0[m+h]+,329.0[m+na]+.
(s)-2-(1-萘氧基)-3-苯基丙酸的制備
向5ml四氫呋喃中加入(s)-2-(1-萘氧基)-3-苯基丙酸甲酯(0.56g，1.8mmol)，室溫攪拌，加入9ml的1m氫氧化鈉溶液，6小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，向剩余物中加入6m的hcl溶液酸化，利用乙醚萃取(3×5ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑得白色固體0.52g，產率99％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ9.68(s,1h),8.27(m,1h),7.79(m,1h),7.39(m,9h),6.67(d,1h,j＝7.7hz),5.07(m,1h),3.44(m,2h).ms(esi)m/z291.0[m-h]-.
((r)-3-甲基-1-((s)-2-(1-萘氧基)-3-苯基丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-2)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-2-(1-萘氧基)-3-苯基丙酸(32mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，16小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，5小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝80：1)得白色固體15mg，產率34％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ8.24(m,1h),7.80(m,1h),7.36(m,9h),6.84(t,1h,j＝7.9hz),5.29(m,1h),3.42(m,2h),2.70(t,1h,j＝7.1hz),1.43(m,1h),1.19(t,2h,j＝6.1hz),0.78(d,6h,j＝7.3hz).ms(esi)m/z404.0[m-h]-,418.0[m+ch2-h]-,432.0[m+2ch2-h]-.。
實施例13：(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪氧基)丙酸甲酯的制備
在氮氣保護條件下，向50ml無水甲苯中依次加入(r)-2-羥基-3-苯基丙酸甲酯(1.1g，6mmol)、2-羥基吡嗪(0.38g，4mmol)和三苯基膦(1.6g，6mmol)，溫度降至0℃攪拌，逐滴滴加diad(1.2g，6mmol)的無水甲苯溶液，反應慢慢升至室溫，29小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，向剩余物中加入10ml乙醚和10ml正己烷，過濾除去固體，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝30：1)得產物0.47g，產率45％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.30(d,1h,j＝1.1hz),8.12(d,1h,j＝2.8hz),7.98(m,1h),7.30(m,5h),5.42(m,1h),3.71(s,3h),3.28(m,2h).ms(esi)m/z259.0[m+h]+,281.0[m+na]+.
(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪氧基)丙酸的制備
向5ml四氫呋喃中加入(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪氧基)丙酸甲酯(0.47g，1.8mmol)，室溫攪拌，加入9ml的1m氫氧化鈉溶液，5小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，向剩余物中加入6m的hcl溶液酸化，利用乙醚萃取(3×5ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑得白色固體0.39g，產率89％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.29(s,1h),8.12(s,1h),8.06(s,1h),7.31(m,5h),5.46(m,1h),3.32(m,2h).ms(esi)m/z245.0[m+h]+,266.9[m+na]+.
((r)-3-甲基-1-((s)-3-苯基-2-(2-吡嗪氧基)丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-3)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪氧基)丙酸(27mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，17小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，7小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝60：1)得黃色固體18mg，產率46％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ8.30(s,1h),8.17(t,1h,j＝2.6hz),8.10(m,1h),7.26(m,5h),5.72(m,1h),3.34(d,2h,j＝4.9hz),2.65(t,1h,j＝7.3hz),1.51(m,1h),1.24(t,2h,j＝7.1hz),0.83(d,6h,j＝6.7hz).ms(esi)m/z356.0[m-h]-,370.0[m+ch2-h]-,384.0[m+2ch2-h]-.。
實施例14：(s)-3-苯基-2-(苯氨基)丙酸的制備
在氮氣保護條件下，向10ml無水n，n-二甲基乙酰胺中依次加入(s)-2-氨基-3-苯基丙酸(125mg，0.75mmol)、溴苯(80mg，0.5mmol)、碳酸鉀(140mg，1mmol)和碘化亞銅(15mg，0.08mmol)，溫度升至90℃攪拌，48小時后tlc檢測顯示反應完全，反應降至室溫，加入5ml乙酸乙酯和1ml水，溫度降至0℃，利用6m的hcl溶液調ph至3，分出有機相，水相利用乙酸乙酯萃取(3×10ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)得產物69mg，產率57％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.31(m,4h),7.20(t,3h,j＝6.3hz),6.84(t,1h,j＝7.2hz),6.65(d,2h,j＝5.2hz),4.30(m,1h),3.21(m,2h).ms(esi)m/z240.0[m-h]-.
((r)-3-甲基-1-((s)-3-苯基-2-(苯氨基)丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-4)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-3-苯基-2-(苯氨基)丙酸(27mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，8小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，5小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝70：1)得白色固體14mg，產率36％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ7.28(m,7h),7.00(m,3h),4.43(m,1h),3.22(m,2h),2.69(t,1h,j＝6.6hz),1.24(m,1h),1.04(t,2h,j＝6.2hz),0.73(d,6h,j＝7.2hz).ms(esi)m/z353.0[m-h]-,367.0[m+ch2-h]-,380.9[m+2ch2-h]-.。
實施例15：(s)-2-(1-萘氨基)-3-苯基丙酸的制備
在氮氣保護條件下，向50ml無水n，n-二甲基乙酰胺中依次加入(s)-2-氨基-3-苯基丙酸(1.2g，7.2mmol)、1-溴萘(1g，4.8mmol)、碳酸鉀(1.3g，9.6mmol)和碘化亞銅(0.13g，0.7mmol)，溫度升至90℃攪拌，48小時后tlc檢測顯示反應完全，反應降至室溫，加入30ml乙酸乙酯和10ml水，溫度降至0℃，利用6m的hcl溶液調ph至3，分出有機相，水相利用乙酸乙酯萃取(3×20ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝2：1)得產物0.7g，產率50％。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ12.77(s,1h),8.25(m,1h),7.76(m,1h),7.29(m,8h),6.39(m,2h),4.26(d,1h,j＝0.7hz),3.26(m,2h).ms(esi)m/z289.8[m-h]-.
((r)-3-甲基-1-((s)-2-(1-萘氨基)-3-苯基丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-5)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-2-(1-萘氨基)-3-苯基丙酸(32mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，16小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，7小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得白色固體12mg，產率27％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ8.10(d,1h,j＝7.9hz),7.92(m,1h),7.76(d,1h,j＝8.1hz),7.62(m,2h),7.35(m,6h),7.12(d,1h,j＝7.2hz),4.69(m,1h),3.55(m,2h),2.80(t,1h,j＝7.9hz),1.26(m,1h),0.98(t,2h,j＝7.2hz),0.66(d,6h,j＝7.4hz).ms(esi)m/z403.3[m-h]-,417.3[m+ch2-h]-,431.3[m+2ch2-h]-.。
實施例16：(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪氨基)丙酸的制備
在氮氣保護條件下，向50ml無水n，n-二甲基乙酰胺中依次加入(s)-2-氨基-3-苯基丙酸(1.6g，9.5mmol)、2-溴吡嗪(1g，6.3mmol)、碳酸鉀(1.7g，12.6mmol)和碘化亞銅(0.2g，0.9mmol)，溫度升至90℃攪拌，48小時后tlc檢測顯示反應完全，反應降至室溫，加入30ml乙酸乙酯和10ml水，溫度降至0℃，利用6m的hcl溶液調ph至3，分出有機相，水相利用乙酸乙酯萃取(3×20ml)，合并有機相，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝1：1)得產物0.7g，產率46％。1hnmr(dmso-d6,400mhz)δ12.66(s,1h),7.99(d,1h,j＝1.4hz),7.87(m,1h),7.65(d,1h,j＝2.8hz),7.40(d,1h,j＝8.1hz),7.26(d,3h,j＝4.3hz),7.18(m,1h),4.55(m,1h),3.14(m,1h),2.96(m,1h).ms(esi)m/z242.0[m-h]-.
((r)-3-甲基-1-((s)-3-苯基-2-(2-吡嗪氨基)丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-6)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪氨基)丙酸(27mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，13小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，6小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得黃色固體12mg，產率31％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ7.99(s,1h),7.54(d,2h,j＝5.8hz),7.08(m,5h),3.98(m,1h),2.99(d,2h,j＝55.0hz),2.19(t,1h,j＝7.6hz),1.73(m,1h),1.62(t,2h,j＝5.7hz),0.94(d,6h,j＝6.1hz).ms(esi)m/z369.1[m+ch2-h]-,383.3[m+2ch2-h]-.。
實施例17：(s)-2-(芐氧基)-3-苯基丙酸甲酯的制備
向50ml二氯甲烷和50ml正己烷混合溶劑中加入(s)-2-羥基-3-苯基丙酸甲酯(2.1g，11.5mmol)，室溫攪拌，逐滴滴加2，2，2-三氯乙酰胺芐酯(3.5g，13.8mmol)，滴加完畢后，加入催化量的三氟甲磺酸，10小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝50：1)得產物1.3g，產率42％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.22(m,10h),4.67(d,1h,j＝11.9hz),4.37(d,1h,j＝11.9hz),4.14(m,1h),3.72(s,3h),3.06(m,2h).ms(esi)m/z271.2[m+h]+,293.2[m+na]+.
(s)-2-(芐氧基)-3-苯基丙酸的制備
向20ml二氧六環中加入(s)-2-(芐氧基)-3-苯基丙酸甲酯(1.3g，4.8mmol)，室溫攪拌，加入24ml的2mhcl溶液，溫度升至70℃，6小時后tlc檢測顯示反應完全，加入飽和食鹽水，利用旋轉蒸發儀除溶劑，水相利用乙酸乙酯萃取(3×10ml)，合并有機相，利用飽和碳酸氫鈉溶液萃取(3×10ml)，合并水相，加入6m的hcl溶液調ph至1，利用乙酸乙酯萃取(3×20ml)，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑得產物0.94g，產率76％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.23(m,10h),4.65(d,1h,j＝11.7hz),4.42(d,1h,j＝11.7hz),4.20(m,1h),3.12(m,2h).ms(esi)m/z255.1[m-h]-.
((r)-1-((s)-2-(芐氧基)-3-苯基丙酰胺基)-3-甲基丁基)硼酸(化合物i-7)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-2-(芐氧基)-3-苯基丙酸(28mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，14小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，5小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝80：1)得白色固體18mg，產率44％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ7.24(m,10h),4.57(m,1h),4.45(m,1h),4.32(d,1h,j＝1.3hz),3.06(m,2h),2.65(t,1h,j＝7.6hz),1.52(m,1h),1.39(t,2h,j＝7.7hz),0.86(d,6h,j＝5.5hz).ms(esi)m/z368.2[m-h]-,382.2[m+ch2-h]-,396.2[m+2ch2-h]-.。
實施例18：2，2，2-三氯乙酰胺(1-萘甲基)酯的制備
向50ml乙醚中加入1-萘甲醇(1.6g，10mmol)，室溫攪拌，加入60％的氫化鈉(0.8g，20mmol)，繼續攪拌10分鐘后，加入三氯乙腈(2.2g，15mmol)，2小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝100：1)得產物2g，產率66％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.50(s,1h),8.07(d,1h,j＝8.0hz),7.90(t,2h,j＝7.4hz),7.65(d,1h,j＝6.8hz),7.53(m,3h),5.79(s,2h).
(s)-2-(1-萘甲氧基)-3-苯基丙酸甲酯的制備
向50ml二氯甲烷和50ml正己烷混合溶劑中加入(s)-2-羥基-3-苯基丙酸甲酯(1g，5.5mmol)，室溫攪拌，逐滴滴加2，2，2-三氯乙酰胺(1-萘甲基)酯(2g，6.6mmol)，滴加完畢后，加入催化量的三氟甲磺酸，12小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑得產物0.7g，產率40％。反應產物未經純化直接用于下步反應。
(s)-2-(1-萘甲氧基)-3-苯基丙酸的制備
向20ml二氧六環中加入(s)-2-(1-萘甲氧基)-3-苯基丙酸甲酯(0.7g，2.2mmol)，室溫攪拌，加入26ml的2mhcl溶液，溫度升至70℃，4小時后tlc檢測顯示反應完全，加入飽和食鹽水，利用旋轉蒸發儀除溶劑，水相利用乙酸乙酯萃取(3×10ml)，合并有機相，利用飽和碳酸氫鈉溶液萃取(3×10ml)，合并水相，加入6m的hcl溶液調ph至1，利用乙酸乙酯萃取(3×20ml)，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑得產物0.12g，產率18％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ7.45(m,12h),5.12(d,1h,j＝11.5hz),4.84(d,1h,j＝11.5hz),4.31(m,1h),3.12(m,2h).ms(esi)m/z305.1[m-h]-.
((r)-3-甲基-1-((s)-2-(1-萘甲氧基)-3-苯基丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-8)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-2-(1-萘甲氧基)-3-苯基丙酸(34mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，14小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，5小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝100：1)得白色固體13mg，產率28％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ7.99(m,1h),7.85(t,2h,j＝8.8hz),7.35(m,9h),4.94(d,1h,j＝9.1hz),4.62(s,1h),4.42(m,1h),3.05(m,2h),2.59(t,1h,j＝5.6hz),1.60(m,1h),1.42(t,2h,j＝7.2hz),0.84(d,6h,j＝6.5hz).ms(esi)m/z418.2[m-h]-,432.2[m+ch2-h]-,446.2[m+2ch2-h]-.。
實施例19：2，2，2-三氯乙酰胺(2-吡嗪甲基)酯的制備
向5ml乙醚中加入2-羥甲基吡嗪(100mg，0.9mmol)，室溫攪拌，加入60％的氫化鈉(80mg，2mmol)，繼續攪拌10分鐘后，加入三氯乙腈(202mg，1.4mmol)，2小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(石油醚：乙酸乙酯＝30：1)得產物160mg，產率70％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.79(s,1h),8.56(m,2h),5.51(s,2h).ms(esi)m/z255.0[m+h]+.
(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪甲氧基)丙酸甲酯的制備
向5ml二氯甲烷和5ml正己烷混合溶劑中加入(s)-2-羥基-3-苯基丙酸甲酯(180mg，1mmol)，室溫攪拌，逐滴滴加2，2，2-三氯乙酰胺(2-吡嗪甲基)酯(316mg，1.2mmol)，滴加完畢后，加入催化量的三氟甲磺酸，12小時后tlc檢測顯示反應完全，利用旋轉蒸發儀除溶劑得產物156mg，產率57％。反應產物未經純化直接用于下步反應。
(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪甲氧基)丙酸的制備
向5ml二氧六環中加入(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪甲氧基)丙酸甲酯(156mg，0.57mmol)，室溫攪拌，加入6ml的2mhcl溶液，溫度升至70℃，3小時后tlc檢測顯示反應完全，加入飽和食鹽水，利用旋轉蒸發儀除溶劑，水相利用乙酸乙酯萃取(3×5ml)，合并有機相，利用飽和碳酸氫鈉溶液萃取(3×5ml)，合并水相，加入6m的hcl溶液調ph至1，利用乙酸乙酯萃取(3×5ml)，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑得產物36mg，產率24％。1hnmr(cdcl3,400mhz)δ8.56(m,5h),7.85(s,1h),7.31(d,2h,j＝6.0hz),4.85(s,1h),4.25(d,1h,j＝14.1hz),4.07(d,1h,j＝14.1hz),3.24(m,2h).
((r)-3-甲基-1-((s)-3-苯基-2-(2-吡嗪甲氧基)丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-9)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-3-苯基-2-(2-吡嗪甲氧基)丙酸(28mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，20小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，7小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝30：1)得黃色固體12mg，產率29％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ8.60(t,2h,j＝34.3hz),8.02(d,1h,j＝7.9hz),7.61(m,6h),4.39(d,1h,j＝13.7hz),4.22(d,1h,j＝14.1hz),3.72(m,1h),3.20(m,2h),2.91(t,1h,j＝12.9hz),2.02(m,1h),1.56(t,2h,j＝7.2hz),0.94(d,6h,j＝24.5hz).ms(esi)m/z370.1[m-h]-,398.2[m+2ch2-h]-.。
實施例20：(s)-2-(芐氨基)-3-苯基丙酸的制備
向10ml水中加入(s)-2-氨基-3-苯基丙酸(165mg，1mmol)，室溫攪拌，依次加入芐氯(158mg，1.3mmol)和碳酸鉀(138mg，1mmol)，1小時后再加入芐氯(158mg，1.3mmol)和碳酸鉀(138mg，1mmol)，24小時后tlc檢測顯示反應完全，過濾并用乙醚洗滌，濾餅利用6m的hcl溶液酸化，出現大量白色固體，過濾得到產物201mg，產率79％。1hnmr(d2o-naoh,400mhz)δ7.05(m,10h),3.48(d,1h,j＝12.7hz),3.30(d,1h,j＝12.8hz),3.07(t,1h,j＝6.8hz),2.63(m,2h).ms(esi)m/z254.1[m-h]-.
((r)-((s)-2-(芐氨基)-3-苯基丙酰胺基)-3-甲基丁基)硼酸(化合物i-10)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-2-(芐氨基)-3-苯基丙酸(28mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，10小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，3小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得白色固體11mg，產率27％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ7.23(m,10h),3.72(d,1h,j＝13.1hz),3.62(d,1h,j＝6.8hz),3.37(t,1h,j＝6.9hz),3.11(m,2h),2.90(t,1h,j＝9.9hz),2.03(m,1h),1.59(t,2h,j＝8.2hz),0.85(d,6h,j＝13.5hz).ms(esi)m/z367.1[m-h]-,395.3[m+2ch2-h]-.。
實施例21：(s)-2-((1-萘甲基)氨基)-3-苯基丙酸的制備
向50ml水中加入(s)-2-氨基-3-苯基丙酸(1g，6mmol)，室溫攪拌，依次加入1-氯甲基萘(1.3g，7.5mmol)和碳酸鉀(0.9g，6mmol)，1小時后再加入1-氯甲基萘(1.3g，7.5mmol)和碳酸鉀(0.9g，6mmol)，30小時后tlc檢測顯示反應完全，過濾并用乙醚洗滌，濾餅利用6m的hcl溶液酸化，出現大量白色固體，過濾得到產物0.69g，產率38％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ7.60(m,12h),4.75(d,1h,j＝13.2hz),4.59(d,1h,j＝13.7hz),4.09(m,1h),3.24(m,2h).ms(esi)m/z306.2[m+h]+.
((r)-3-甲基-1-((s)-2-((1-萘甲基)氨基)-3-苯基丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-11)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-2-((1-萘甲基)氨基)-3-苯基丙酸(34mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，15小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，5小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得白色固體13mg，產率28％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ7.53(m,12h),4.15(m,2h),3.72(m,1h),3.02(d,2h,j＝7.2hz),2.61(t,1h,j＝7.4hz),1.48(m,1h),1.08(t,2h,j＝6.9hz),0.83(d,6h,j＝7.5hz).ms(esi)m/z417.2[m-h]-,431.2[m+ch2-h]-,445.3[m+2ch2-h]-.。
實施例22：(s)-3-苯基-2-((2-吡嗪甲基)氨基)丙酸的制備
向5ml水中加入(s)-2-氨基-3-苯基丙酸(83mg，0.5mmol)，室溫攪拌，依次加入2-氯甲基吡嗪(75mg，0.6mmol)和碳酸鉀(69mg，0.5mmol)，1小時后再加入2-氯甲基吡嗪(75mg，0.6mmol)和碳酸鉀(69mg，0.5mmol)，26小時后tlc檢測顯示反應完全，過濾并用乙醚洗滌，濾餅利用6m的hcl溶液酸化，出現大量淡黃色固體，過濾得到產物103mg，產率80％。1hnmr(d2o–naoh,400mhz)δ8.08(m,3h),6.86(m,5h),3.49(d,1h,j＝14.4hz),3.33(d,1h,j＝14.6hz),2.90(m,1h),2.48(m,2h).ms(esi)m/z256.0[m-h]-.
((r)-3-甲基-1-((s)-3-苯基-2-((2-吡嗪甲基)氨基)丙酰胺基)丁基)硼酸(化合物i-12)的制備
在氮氣保護條件下，向5ml無水二氯甲烷中加入(s)-3-苯基-2-((2-吡嗪甲基)氨基)丙酸(28mg，0.11mmol)，室溫攪拌，加入hobt(18mg，0.13mmol)，繼續攪拌10分鐘后加入edc·hcl(25mg，0.13mmol)，然后加入實施例6化合物iii-8-a(50mg，0.17mmol)和dipea(0.04ml，0.22mmol)，17小時后tlc檢測顯示反應完全，反應液分別用5％nahco3溶液、10％檸檬酸溶液、5％nahco3溶液和飽和食鹽水洗滌，向有機相中加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，所得產物直接加入到5ml甲醇中，室溫攪拌，加入2-甲基丙基硼酸(22mg，0.22mmol)和5ml正己烷，然后加入1m的hcl溶液(0.33ml，0.33mmol)，6小時后tlc檢測顯示反應完全，靜置反應液至分層，下層用正己烷洗滌，加入無水硫酸鈉干燥，干燥完畢后過濾，利用旋轉蒸發儀除溶劑，柱層析分離(二氯甲烷：甲醇＝50：1)得黃色固體11mg，產率27％。1hnmr(cd3od,400mhz)δ8.09(s,1h),7.21(s,1h),6.95(s,1h),6.13(m,5h),4.04(d,1h,j＝13.4hz),3.81(d,1h,j＝3.2hz),3.54(m,1h),3.15(m,2h),2.80(t,1h,j＝8.9hz),2.02(m,1h),1.58(t,2h,j＝10.2hz),0.89(d,6h,j＝7.3hz).ms(esi)m/z369.0[m-h]-,397.0[m+2ch2-h]-.。
實施例23：本發明化合物蛋白酶體抑制活性的測定實驗
本實施例中采用購自chemicon(chemicon,usa)的20s蛋白酶體試劑盒進行測試。該測試方法的基本原理為20s蛋白酶體水解熒光底物suc-llvy-amc(suc-leu-leu-val-tyr-amc，suc為琥珀酰基，amc為7-酰胺-4-甲基香豆素)，釋放出具有熒光的amc，通過改變待測試化合物的濃度，利用spectramaxm5酶標儀(380nm/460nm)測得不同濃度下釋放出amc的熒光值，從而判斷化合物對20s蛋白酶體糜蛋白酶樣活性位點(ct-l)的抑制程度，利用graphpadprism軟件計算化合物對20s蛋白酶體糜蛋白酶樣活性位點抑制的ic50值；表1現示了部分化合物對20s蛋白酶體糜蛋白酶樣活性位點抑制的ic50值如。
表1.受試化合物對人類20s蛋白酶體糜蛋白酶樣活性位點的抑制作用
·ic50值為至少兩次獨立試驗的平均值。