用于發酵富含碳水化合物的作物的方法與流程

            文檔序號:11446146閱讀:1423來源:國知局
            優先權數據本國際專利申請要求于2015年12月11日提交的美國專利申請號14/966,650、2015年11月13日提交的美國專利申請號14/940,390、2015年3月30日提交的美國臨時專利申請號62/139,881、和2015年3月3日提交的美國臨時專利申請號62/127,637的優先權,這些專利各自特此通過引用并入本申請。發明領域本發明總體上涉及用于發酵富含碳水化合物的作物的方法。發明背景許多發酵微生物將碳水化合物轉化為乙醇。最廣泛使用的發酵微生物,啤酒酵母和面包酵母,是釀酒酵母的菌株。乙醇具有作為飲料、運輸燃料和其他有機化合物的前體的顯著的經濟價值。發酵微生物可以將葡萄糖、果糖、麥芽糖(葡萄糖二聚體)和蔗糖(葡萄糖-果糖二聚體)直接轉化為乙醇。在此,葡萄糖和果糖的單體和二聚體將被稱為簡單糖,并且將簡單糖轉化為乙醇的發酵微生物將被稱為酵母。酵母在無氧(沒有氧)環境中將簡單糖發酵成乙醇。將1摩爾葡萄糖或果糖(或0.5摩爾蔗糖)發酵成2摩爾乙醇和2摩爾二氧化碳,并釋放出118kj的熱量。這意味著發酵18%的糖溶液將導致34℃的溫升,這意味著需要冷卻發酵培養基。發酵1升18%的糖溶液(1摩爾葡萄糖)也將產生2摩爾的二氧化碳,其具有在20℃和大氣壓下的約48升的體積。典型的酵母在20℃-40℃之間最有效地發酵,但具有下降至5℃的顯著的發酵活性(白葡萄酒在7℃-15℃之間發酵)。酵母細胞在高于42℃的溫度下逐漸死亡。釀酒酵母對ph相對不敏感,并且將在從2.9至7.2的ph范圍內發酵。這在arroyo-lópez,“溫度、ph以及糖濃度對釀酒酵母、非釀酒酵母及其種間雜種的生長參數的影響(effectsoftemperature,phandsugarconcentrationonthegrowthparametersofsaccharomycescerevisiae,s.kudriavzeviiandtheirinterspecifichybrid)”,國際食品微生物學雜志(internationaljournaloffoodmicrobiology)131.2(2009):120-127(將其特此通過引用結合在此)中更詳細地進行描述。大多數釀酒酵母菌株具有約10微米的直徑。具有約5微米的細胞大小的釀酒酵母菌株是dry,可從美國喬治亞州德盧斯的lallemandbiofuels&distilledspirits公司獲得。它產生最高達按體積計20%(按重量計16%)的乙醇濃度,因此可以通過此酵母發酵具有最高達按重量計32%碳水化合物的富含碳水化合物的作物。這意味著可以在發酵前將作物脫水,使得所得到的乙醇濃度更高。在簡單糖存在下,酵母細胞粘附于表面(如薄壁細胞)。這在verstrepen和klis,“酵母的絮凝、粘附和生物膜形成(flocculation,adhesionandbiofilmformationinyeasts)”,分子微生物學(molecularmicrobiology)60.1(2006):5-15(將其特此通過引用結合在此)中進行了描述。釀酒酵母以冷凍干燥的形式出售,并且易于處理。它被歸類為gras(通認安全的),并且通常在日常飲食中消耗-例如,面包是用釀酒酵母酵母制成的。淀粉是葡萄糖的聚合物,并且菊粉是主要是果糖、在一端具有葡萄糖的聚合物。在淀粉和菊粉可以通過酵母轉化成乙醇之前,它們必須首先通過對應地淀粉酶和菊粉酶、或通過酸轉化成簡單糖。淀粉在酵母是活性的溫度范圍內不溶于水,并且在此相同的溫度范圍內只有約5%的菊粉可溶。存在可供使用的淀粉酶,這些淀粉酶在酵母有效起作用的溫度范圍內有效地將淀粉轉化成葡萄糖。一個實例是來自美國杜邦工業生物科學公司(dupontindustrialbiosciences,usa)的002酶制劑。這含有在里氏木霉中表達的白曲霉α-淀粉酶和來自里氏木霉的葡糖淀粉酶,其協同作用以將顆粒淀粉底物水解成葡萄糖。內活性的α-淀粉酶和外活性的葡糖淀粉酶在各種乙醇發酵條件下催化了顆粒淀粉的完全水解。存在可供使用的菊粉酶,這些菊粉酶在酵母有效起作用的溫度范圍內有效地將菊粉轉化成果糖。一個實例是可從丹麥諾維信公司(novozymesa/s,denmark)獲得的果糖酶l酶配制品。許多作物在儲存薄壁細胞內含有碳水化合物。這些富含碳水化合物的薄壁細胞通常在具有80%至90%水的單個大液泡中具有10%至20%的碳水化合物。這些碳水化合物通常包含簡單糖和多糖。在此,含有大量的富含碳水化合物的薄壁細胞的這些富含碳水化合物的作物的部分將被稱為富含碳水化合物的薄壁組織。具有富含碳水化合物的薄壁組織的所有作物在薄壁細胞中含有一定量的簡單糖,并且一些含有大量的多糖。存在兩種類型的具有富含碳水化合物的薄壁組織的作物,禾本科草(禾本科和薯蕷屬)中的單子葉植物(monocotyledon)(單子葉植物((monocot))以及雙子葉植物(dicotyledon)(雙子葉植物(dicot))。它們差別在于薄壁細胞彼此粘附的方式。單子葉植物通過胞間層中的果膠和半纖維素二者粘附并且雙子葉植物通過胞間層中的果膠粘附。最廣泛種植的在秸稈中具有富含碳水化合物的薄壁組織的作物是甘蔗(sugarcane)(甘蔗(saccharumofficinarum)),甜高粱(雙色高粱)和熱帶玉米雜交種(玉蜀黍)。這些都是禾本科草(禾本科)中的單子葉植物。甘蔗和熱帶玉米雜交種在儲存薄壁細胞中含有簡單糖,并且甜高粱在儲存薄壁細胞中含有90%的簡單糖和10%的淀粉。最廣泛種植的在塊莖中具有富含碳水化合物的薄壁組織的作物是馬鈴薯(potato)(馬鈴薯(solanumtuberosum)),甘薯(sweetpotato)(甘薯(ipomoeabatatas)),木薯(木薯)(木薯(manihotesculenta)),山藥(yam)(薯蕷屬(genusdioscorea))和洋姜(菊芋(helianthustuberosus))。土豆、甘薯、木薯和洋姜是雙子葉植物,而山藥是單子葉植物。馬鈴薯、甘薯、木薯和山藥在儲存薄壁細胞中含有淀粉,并且洋姜在儲存薄壁細胞中含有菊粉。最廣泛種植的果實中具有富含碳水化合物的薄壁組織的作物是蘋果、葡萄和橘子。這些都是雙子葉植物,并且在儲存薄壁細胞中含有葡萄糖和果糖。存在用于發酵具有富含碳水化合物的薄壁組織的作物的熟知的技術。通常將秸稈在一系列輥之間粉碎,以通過使薄壁細胞破裂來提取汁,并且然后將該汁與殘留固體分離并發酵。通常將甜菜切成約4毫米厚的小薄片(甜菜絲),并且糖用流動的熱水提取,并且然后發酵。通常將果實擠壓以提取富含糖的汁,然后將該汁發酵。淀粉作物通常通過將塊莖加熱到高于糊化溫度并在糊化的淀粉下使用淀粉酶,隨后發酵葡萄糖轉化成乙醇。富含菊粉的作物通常通過以下方式發酵:加熱直到菊粉溶解、提取汁、用酸水解轉化成果糖并且然后發酵果糖。所有這些技術都是相當資本密集的。富含碳水化合物的薄壁組織中的儲存薄壁細胞是薄壁多角細胞。甜菜薄壁細胞具有約100微米的直徑,其中壁厚為約2微米。秸稈中的薄壁細胞為約360微米長并且直徑為60微米,其中壁厚為約2微米。儲存薄壁組織的特征在gibson的“植物材料的層次結構和力學(thehierarchicalstructureandmechanicsofplantmaterials)”,皇家學會界面(journaloftheroyalsocietyinterface)9.76(2012):2749-2766(將其特此通過引用結合在此)中更詳細地進行描述。薄壁細胞緊密堆積在一起,但由于堆積不完美,它們之間存在小的間隙。這些間隙被稱為質外體或胞間隙。這些間隙相互連接,并且水可通過這些間隙流過薄壁組織。在steudle的“在植物中的水運:質外體的作用(watertransportinplants:roleoftheapoplast)”,植物和土壤(plantandsoil)187.1(1996):67-79(將其特此通過引用結合在此)中有關于水流過質外體的更多細節。水在軸向方向(上/下)上流過甜菜薄壁組織中的質外體但通過在根部的凱氏帶在徑向方向(入/出)上受到限制。這在amodeo的“甜菜儲存根中的徑向和軸向水運輸(radialandaxialwatertransportinthesugarbeetstorageroot)”,實驗植物學雜志(journalofexperimentalbotany)50.333(1999):509-516(將其特此通過引用結合在此)中更詳細地進行描述。類似地,水在軸向方向上流過富含碳水化合物的秸稈的薄壁組織中的質外體,但受到節間長度(秸稈的連續部分)的限制。水不會在徑向上流動,因為秸稈的外部是不透水的。大多數富含碳水化合物的秸稈的節間長度是在100mm與300mm之間。甘蔗的質外體(胞間隙)對于被各種細菌定殖是足夠大的。這在dong的“甘蔗莖的固氮內生菌(對于質外體的新作用)”,植物生理學(plantphysiology)105.4(1994):1139-1147和tejera的“甘蔗莖的非原質體液中的氮化合物:與內生菌相關的一些影響(nitrogencompoundsintheapoplasticsapofsugarcanestem:someimplicationsintheassociationwithendophytes)”,植物生理學雜志(journalofplantphysiology)163.1(2006):80-85中更詳細地描述,兩者都特此通過引用結合在此。類似地,其他物種的富含碳水化合物的薄壁組織的質外體對于被細菌定殖是足夠大的。有可能通過使用真空灌注(infusion)(也稱為真空浸漬)填充富含碳水化合物的薄壁組織的質外體。這涉及用液體包圍薄壁組織,施加真空,等待液體和氣體從薄壁組織排出,釋放真空并等待液體填充質外體。這在gras的“一些蔬菜對真空浸漬的響應(theresponseofsomevegetablestovacuumimpregnation)”,創新食品科學和新興技術(innovativefoodscience&emergingtechnologies)3.3(2002):263-269(將其特此通過引用結合在此)中更詳細地進行描述。富含碳水化合物的薄壁組織經常含有最高達20%(按質量計)的碳水化合物。薄壁細胞壁為薄壁細胞提供了強度,并且細胞膜保持細胞內容物不會從細胞中泄漏出來。細胞壁可滲透蔗糖和其他簡單糖。細胞膜可以通過加熱(通常高于70℃)變性,這增加了簡單糖通過細胞膜的擴散系數。這是通常用于從甜菜提取蔗糖的技術-細胞膜通過加熱變性,并且然后蔗糖從甜菜中擴散出來進入熱水中。蔗糖通過變性的甜菜組織的擴散系數是比通過非變性的甜菜組織高約5倍,這在bessadok-jemaiet等人的“基于電導率測量模擬從甜菜顆粒的溶質擴散動力學(modelingthekineticofsolutediffusionfromsugarbeetparticlesbasedonelectricconductivitymeasurements)”,國際物理科學雜志(internationaljournalofphysicalsciences)6.28(2011):6464-6468(將其特此通過引用結合在此)中更詳細地描述。薄壁細胞可通過或者熱量或酶浸軟(彼此分離)。當薄壁細胞被浸軟時,細胞膜也被破壞,從機械作用和從細胞壁釋放的酶二者。這導致液泡的內容物從薄壁細胞中泄漏出,并導致酶更容易擴散到液泡中。這也提供了一種浸解作用,其中薄壁細胞中的水可以通過擠壓或蒸發更容易地去除。果膠裂解酶、果膠酸裂解酶和多聚半乳糖醛酸酶(polygalacturanase)的任何組合浸軟雙子葉植物中的薄壁細胞,而果膠裂解酶和木聚糖酶浸軟單子葉植物中的薄壁細胞。這在ishii的“用于分離原生質體的酶(enzymesfortheisolationofprotoplasts)”,植物原生質體和基因工程i(plantprotoplastsandgeneticengineeringi),施普林格柏林海德爾堡(springerberlinheidelberg),1989,23-33(將其特此通過引用結合在此)中進行描述。當果膠酸裂解酶和多聚半乳糖醛酸酶降解果膠時,它們也產生甲醇,當生產乙醇時,甲醇經常是不希望的產物。果膠裂解酶降解果膠而不產生甲醇作為副產物,并且木聚糖酶不產生任何醇。存在可供使用的果膠裂解酶,這些果膠裂解酶在與酵母相同的ph和溫度范圍內起作用,特別是來自黑曲霉的果膠裂解酶,其中最適ph為5.5并且最適溫度為35℃。這在yadavet等人的“果膠裂解酶:綜述(pectinlyase:areview)”,加工生物化學(processbiochemistry)44.1(2009):1-10(將其特此通過引用結合在此)中進行描述。在酵母的相同ph和溫度范圍內起作用的果膠裂解酶的一個實例是“ultracolor”酶配制品,其可從丹麥諾維信公司獲得。當發酵時,酵母產生大量的二氧化碳(co2)。通過將co2溶解在水中形成碳酸。當發酵時,co2的分壓為100kpa(1atm),并且此溶液的ph為約3.92。酵母在此ph下良好發酵,來自黑曲霉的果膠裂解酶酶(例如pectinexultracolor)在此ph下具有顯著的活性,顆粒淀粉水解酶(例如stargen)在此ph下具有顯著的活性,并且菊粉酶酶(例如果糖酶l)在此ph下具有顯著的活性。類似地,所有這些酶在酵母的溫度范圍內(25℃至40℃)具有顯著的活性。甜菜的收獲溫度可能相當冷,經常低于10℃,并且甘蔗、甜高粱和熱帶玉米雜交種的收獲溫度可以低于20℃。然而,通過富含碳水化合物的薄壁組織的質外體中的簡單糖發酵釋放的熱量將迅速將該組織的溫度升高到其中酶具有顯著活性的溫度范圍。發酵速率嚴重地受到酵母細胞濃度的影響。在巴西,典型工廠的甘蔗發酵可能耗費6至10之間個小時,但這需要高濃度(10%w/w)的酵母和酵母細胞回收。這在basso的“巴西的乙醇生產:工業過程及其對酵母發酵的影響(ethanolproductioninbrazil:theindustrialprocessanditsimpactonyeastfermentation)”,銀特開架閱覽出版社(intechopenaccesspublisher),2011(將其特此通過引用結合在此)中更詳細地描述。葡萄酒或啤酒發酵(用較低的酵母濃度)可能需要一周時間。目前用于將糖發酵成乙醇的技術的一個重要問題是細菌污染,特別是乳酸桿菌的污染。不希望受任何特定理論的束縛,據信湍流混合在整個發酵培養基中傳播細菌,并且由于污染細菌可能超過酵母,因此存在顯著的污染。沒有混合下,并且沒有糖濃度梯度(由富含碳水化合物的薄壁組織中均勻分布酵母引起)下,任何可能的細菌污染仍然是局部的,并且不能遍及整個生物質體積超過酵母。這在kundiyana等人的“溫度、ph以及酵母對從未殺菌的甜高粱汁現場生產乙醇的影響(influenceoftemperature,phandyeastonin-fieldproductionofethanolfromunsterilizedsweetsorghumjuice)”,生物質與生物能源(biomassandbioenergy)34.10(2010):1481-1486(將其特此通過引用結合在此)中進行描述。因為薄壁細胞如此小,所以耗費大量的能量粉碎它們,或用熱水從它們中提取糖。從秸稈生產糖的資本和運營成本的幾乎35%是由于粉碎的成本。類似地,由甜菜生產糖的大部分成本是由于熱水提取的成本。粉碎甘蔗的經濟學在gbaboa的“切蔗機/榨汁機和輥型甘蔗汁提取系統的比較研究(comparativestudyoncanecutter/juiceexpellerandrollermodelsugarcanejuiceextractionsystems)”,國際當前科學雜志(intjcurrsci)2013,7:e55-60(將其特此通過引用結合在此)中更詳細地描述。如果可以消除對粉碎或熱水提取的需要,則可以降低提取糖的成本。甜菜的本體密度為約769kg/m3,并且甘蔗、甜高粱和熱帶玉米雜交種(即秸稈)的坯料(切片)的本體密度為約350kg/m3。如果糖含量為約18%,則這導致每立方米甜萊138kg糖的糖密度,并且每立方米甘蔗、甜高粱和熱帶玉米雜交種為63kg糖的糖密度。由于運輸成本主要是體積(并且不是重量)的函數,并且由于作物經常距離其被加工的地方顯著距離收割,所以以如此低的密度運輸糖是相當昂貴的,因為只有5%至10%的卡車體積被糖占據。希望的是通過在(或接近)這些作物的收割地點制造乙醇(降低運輸成本)來降低從富含碳水化合物的作物制造乙醇的成本。富含碳水化合物的薄壁組織中的薄壁細胞是活組織,并且因此在收割后呼吸(respire)(呼吸(breathe))。呼吸涉及將薄壁細胞中的氧和糖轉化為二氧化碳和能量以維持細胞。在收割甜菜后,通過呼吸消耗約200克糖/天/公噸甜菜,并且收割后的前5天中,通過呼吸消耗約600克至1500克糖/天/公噸甜菜。如果甜菜是按重量計約18%糖,則一公噸甜菜中存在約180kg糖,導致在前5天中的每天0.3%至0.8%之間的糖損失和在隨后的日子里的每天0.1%的糖的損失。鑒于甜菜可以在加工前儲存100天,它們可能由于呼吸而損失其糖含量的最高10%。甘蔗、甜高粱和熱帶玉米在被儲存時失去相似量的糖。本領域對通過比目前的方法更快速地將碳水化合物轉化成乙醇來減少呼吸中的糖損失存在需求。一旦將作物中的碳水化合物轉化為乙醇,它們可以長時間儲存,允許全年連續去除乙醇。希望的是通過全年,而不僅在收割季節期間使用這種設備,更有效地利用投資于輥提取、乙醇汽提和蒸餾的資本。如果將甜菜在無氧(沒有氧)條件下儲存,微生物會定殖甜菜,并且21天后將使這些甜菜中的所有糖完全發酵,主要發酵成乳酸和乙酸。由于甜菜的外層經常通過收割而磨損和損壞,所以微生物可以更容易地滲透甜菜的外層,導致由于發酵成乳酸和乙酸的糖損失。類似地,甘蔗、甜高粱和熱帶玉米雜交種更容易受到穿透髓的微生物影響,因為在收割期間甘蔗已經被切開成坯料。從富含碳水化合物的作物生產乙醇的大部分資本成本和運營成本是加熱原料的成本。通過使用自發酵釋放的能量的自身加熱可以降低(或消除)這些成本。用于從富含碳水化合物的作物生產乙醇的一些技術需要在壓力容器內進行預處理或發酵。因為壓力容器具有爆炸的危險并且比非加壓容器需要更大的強度,因此不需要壓力容器將是有益的。從富含碳水化合物的作物生產乙醇的另一個重大資本成本和運營成本是冷卻發酵反應器的成本。將希望的是使用低成本的被動冷卻,例如在金屬壁罐上吹送空氣或將冷二氧化碳氣體循環通過作物。發明概述本發明提供了一種用于從富含碳水化合物的植物薄壁組織生產發酵產物的方法,該方法包括以下步驟:(a)提供在作物溫度下的富含碳水化合物的植物薄壁組織;(b)將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織與在試劑溫度下的含有發酵微生物的水性試劑溶液組合;(c)或者在步驟(b)之前或步驟(b)之后將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織暴露于氣相制備壓力持續制備時間,其中所述氣相制備壓力小于大氣壓;(d)將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織暴露于氣相灌注壓力持續灌注時間,其中所述氣相灌注壓力大于所述氣相制備壓力;并且(e)保持氣相發酵壓力持續發酵時間以在所述富含碳水化合物的植物薄壁組織內產生發酵產物,其中所述氣相發酵壓力大于所述氣相制備壓力,并且其中至少25%所述發酵產物的質量是乙醇。在優選的實施例中,所述富含碳水化合物的植物薄壁組織選自下組,該組由以下各項組成:甘蔗秸稈、甜高粱秸稈、熱帶玉米雜交種秸稈、甜菜塊莖、蘋果、葡萄和橙子。在一些實施例中,所述富含碳水化合物的植物薄壁組織選自下組,該組由以下各項組成:馬鈴薯塊莖、甘薯塊莖、木薯塊莖、山藥塊莖和洋姜塊莖。在一些實施例中,所述水性試劑溶液含有果膠酶。在一些實施例中,所述該水性試劑溶液含有木聚糖酶。在一些實施例中,所述水性試劑溶液含有淀粉酶。在一些實施例中,所述水性試劑溶液含有菊粉酶。在優選的實施例中,所述作物溫度為從約5℃至約40℃。在優選的實施例中,所述氣相制備壓力為在作物溫度和試劑溫度更高者下的水平衡壓力的從約105%至約200%。在優選的實施例中,所述制備時間為從約1分鐘至約1小時。在優選的實施例中,所述發酵微生物是釀酒酵母。在優選的實施例中,所述試劑溫度為從約20℃至約40℃。在優選的實施例中,將所述水性試劑溶液均化。在一些實施例中,該方法還包括使用在約0.15w/kg至約50w/kg范圍內的湍流能量混合所述水性試劑溶液。在優選的實施例中,所述灌注時間為從約1分鐘至約1小時。在優選的實施例中,所述發酵時間為從約6小時至約7天。在優選實施例中,所述發酵壓力為大氣壓。在一些實施例中,該方法還包括將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織保持在無氧環境中持續發酵時間完成后的作物保存時間。在優選的實施例中,該方法還包括通過真空汽提回收所述發酵產物。在一些實施例中,該方法還包括通過粉碎回收所述發酵產物。在一些實施例中,該方法進一步包括或者在步驟(e)之前或步驟(e)之后排出該水性試劑溶液。附圖簡要說明圖1是在本發明的實施例和實例中使用的實驗裝置的示意圖。本發明實施方式的詳細說明本發明的方法、過程和系統將通過參考不同非限制性的實施例和一個或多個附圖進行詳細說明。本說明將使得本領域的技術人員能夠制造和使用本發明,并且本說明描述了本發明的若干實施例、修改、變體、替代方案、以及用途。在結合附圖參考本發明的以下詳細描述時,本發明的這些和其他實施例、特征和優點對于本領域的技術人員而言將變得更清楚。如在本說明書和所附的權利要求書中所使用的,除非上下文另外清楚地指明,否則單數形式“一個/一種(a/an)”以及“該(the)”包括復數指示物。除非另外定義,否則在此使用的所有技術和科學術語具有本發明所屬領域的普通技術人員通常所理解的相同的含義。除非另外指明,本說明書和權利要求書中使用的表達參數、條件、結果等等的所有數值應被理解為在所有情況中被術語“約”修飾。因此,除非相反地指明,在以下說明書和所附權利要求書中闡述的數值是近似值,這些近似值可以根據具體算法和計算而不同。與“包括(including)”、“含有(containing)”、或“特征為”同義的術語“包含(comprising)”是包容性的或開放性的并且不排除附加的、未列舉的要素或方法步驟。“包含”是在權利要求語言中使用的專門術語,它是指指定的權利要求要素是必需的,但是其他權利要求要素可以添加并且仍構成在該權利要求范圍內的概念。如在此所使用,短語“由……組成”不包括未在權利要求書中指明的任何要素、步驟或成分。當短語“由……組成”(或其變型)出現在一個權利要求的主體的條款中,而不是立即跟在前言之后時,它只限制該條款中闡述的要素;其他要素作為整體未被排除在該權利要求之外。如在此所使用,短語“主要由……組成”將權利要求的范圍限制于指定的要素或方法步驟,加上不實質地影響所要求保護的主題的基礎和一個或多個新穎特征的那些。關于術語“包含”、“由……組成”以及“主要由……組成”,當在此使用這三個術語之一時,目前披露的且要求保護的主題可以包括使用其他兩個術語中的任何一個。因而,在一些未另外明確陳述的實施例中,“包含”的任何實例可以替換成“由……組成”,或可替代地替換成“主要由……組成”。在此所述的實施例均不應受到關于反應機理、傳質機理的任何理論或推測或原料或產品說明的限制。本發明的前提是以下問題的技術解決方案:由于有效地粉碎或以擴散到熱水中提取所需的大量的能量和資本,從富含碳水化合物的植物薄壁組織生產發酵產物是昂貴的。本發明使用在真空下將發酵試劑灌注入富含碳水化合物的植物薄壁組織的質外體的替代方法,允許發酵并且然后使用低成本技術如真空汽提來分離所得的乙醇溶液。在此的實例中證明了本發明的原理。本發明的前提還是以下問題的技術解決方案:在收割后并且在加工或消耗之前的富含淀粉和富含菊粉的作物的降解。本發明使用在真空下將發酵微生物灌注入薄壁組織的質外體的方法來將簡單糖發酵成乙醇,從而剝奪定植和消耗淀粉或菊粉所需的其他微生物的簡單糖。這導致典型的0.1%的富含碳水化合物的組織的質量損失和保護淀粉或菊粉免于降解的益處。一旦簡單糖被發酵,可以降解這些薄壁組織的唯一微生物是在果膠上生長的真菌,在乙醇上生長的微生物和在淀粉或菊粉上生長的微生物。在果膠上生長的大多數真菌是需氧的,因此保持環境無氧防止這些真菌定殖于薄壁組織。在果膠上生長的厭氧真菌、尤其是米根霉也需要葡萄糖在果膠上生長,因此保持環境不含葡萄糖以及無氧防止這些真菌定殖于薄壁組織。在乙醇上生長的微生物、尤其是醋桿菌也是需氧的,因此保持環境無氧防止這些微生物將乙醇轉化為乙酸。在淀粉上生長的微生物、尤其是枯草芽孢桿菌需要進入薄壁組織內的淀粉顆粒。不希望受任何特定理論的束縛,據信去除質外體中和薄壁細胞內的葡萄糖引起微生物像枯草芽孢桿菌不具有在薄壁組織內運動的足夠的能量。酵母在發酵時產生大量的二氧化碳,并將酵母灌注入富含碳水化合物的植物薄壁組織中在發酵期間在該組織的外部上形成泡沫并通過該組織內的氣泡形成的作用從該組織排出液體。出人意料地,酵母不會被這些氣泡排出,并且酵母可以繼續發酵直到所有簡單糖被發酵。不希望受任何特定理論的束縛,據信在葡萄糖存在下,酵母細胞對薄壁細胞的粘附性比用于將酵母從薄壁組織中排出的二氧化碳氣泡的力更強。本發明的前提還在于以下事實:簡單糖通過富含碳水化合物的作物的薄壁細胞的細胞膜的擴散速率足以使得質外體內的發酵微生物以高速率發酵在這些薄壁細胞內的簡單糖。然后乙醇擴散到薄壁細胞中。在一些變體中,薄壁細胞壁不降解,保持作物的結構強度,這使得能夠使用低成本真空汽提。在其他變體中,果膠酶降解薄壁細胞壁,提高發酵速率,并減少去除乙醇后對組織脫水所需的能量。在一些變體中,本發明提供了一種用于從富含碳水化合物的植物薄壁組織生產發酵產物的方法,該方法包括以下步驟:(a)提供在作物溫度下的富含碳水化合物的植物薄壁組織;(b)將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織與在試劑溫度下的含有發酵微生物的水性試劑溶液組合;(c)或者在步驟(b)之前或步驟(b)之后將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織暴露于氣相制備壓力持續制備時間,其中所述氣相制備壓力小于大氣壓;(d)將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織暴露于氣相灌注壓力持續灌注時間,其中所述氣相灌注壓力大于所述氣相制備壓力;并且(e)保持氣相發酵壓力持續發酵時間以在所述富含碳水化合物的植物薄壁組織內產生發酵產物,其中所述氣相發酵壓力大于所述氣相制備壓力,并且其中至少25%所述發酵產物的質量是乙醇。本領域技術人員將認識到,可以在將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織與水性試劑溶液組合之前亦或之后施加所述氣相制備壓力。gras描述了在施加真空之前進行組合,并且下面的實例描述了在施加真空之后組合。如gras所描述的,在施加真空之前進行組合具有更快的抽空時間的優點,因為較少的體積需要被抽空。然而,它具有在較大的容器的底部具有更高的靜水壓的缺點。對于只有1米深的容器,這個缺點并不重要,但是對于更深的容器,這個缺點可能是重要的。本領域技術人員將認識到存在生產乙醇的各種發酵微生物,并且這些發酵微生物在葡萄糖存在下粘附于表面。真空灌注可以用適度強度的容器完成,該容器被用塊莖或秸稈填充到頂部并且在頂部具有橡膠囊-當施加真空時,作物本身的強度支持該容器外部上的100kpa的大氣壓。這導致非常低成本的真空灌注容器,并且將空氣抽出該真空灌注容器的能量成本也相當低。在一些實施例中,該真空灌注容器可以是例如從田地帶來作物的卡車,具有頂部上插入的橡膠囊。一旦灌注了水性試劑溶液,可將作物轉移到甚至更低成本的發酵容器中。這種更低成本的發酵容器不需要是氣密的,剛緊密到足以保持通過發酵產生的二氧化碳以保持發酵無氧,從而防止醋酸桿菌細菌對乙醇的降解。在優選的實施例中,所述富含碳水化合物的植物薄壁組織選自下組,該組由以下各項組成:甘蔗秸稈、甜高粱秸稈,熱帶玉米雜交種秸稈、甜菜塊莖、蘋果、葡萄和橙子。這些都主要在薄壁組織中含有簡單糖,并且可以用酵母發酵,而不需要灌注果膠酶。任選地,果膠酶加速發酵,盡管以復雜性和酶的額外成本為代價。在一些實施例中,所述富含碳水化合物的植物薄壁組織選自下組,該組由以下各項組成:馬鈴薯塊莖、甘薯塊莖、木薯塊莖、山藥塊莖和洋姜塊莖。這些作物含有按重量計在0.01%至2%之間的少量的簡單糖,并且剩余的碳水化合物作為多糖。為了保存這些作物,灌注酵母會將少量的簡單糖轉化成乙醇。為了將這些作物中的多糖轉化為乙醇,需要另外灌注果膠酶和淀粉酶或菊粉酶。在一些實施例中,所述水性試劑溶液含有果膠酶。在一些實施例中,所述水性試劑溶液含有木聚糖酶。在一些實施例中,所述水性試劑溶液含有淀粉酶。在一些實施例中,所述水性試劑溶液含有菊粉酶。優選的果膠酶是在需要最少生產甲醇作為副產物的實施例中的果膠裂解酶。需要果膠酶和木聚糖酶的組合以便分解雙子葉植物中的薄壁細胞壁。在優選的實施例中,作物溫度為從約5℃至約40℃。需要這個溫度范圍,因為發酵微生物在這個范圍內是活性的。在優選的實施例中,所述氣相制備壓力為在所述作物溫度和所述試劑溫度更高者下的水平衡壓力的從約105%至約200%。壓力需要盡可能低,同時還防止作物或試劑沸騰。在優選的實施例中,所述制備時間為從約1分鐘至約1小時。有些作物耗費比其他作物更長的時間來從質外體排空氣體,特別是甘蔗和甜高粱。在優選的實施例中,所述發酵微生物是釀酒酵母。所述微生物具有任何發酵微生物的最高的乙醇耐受性,并且許多雜交種可供使用。在優選的實施例中,所述試劑溫度為從約20℃至約40℃。發酵微生物在這個溫度范圍內蓬勃發展。試劑溫度應足夠低,這樣水性試劑溶液中的水不會在制備壓力下沸騰,其中沸騰引起以大氣泡快速釋放蒸氣。由于水通常是水性試劑溶液的主要成分,因此可以使用水平衡數據來確定在給定制備壓力下的試劑溫度,反之亦然。例如,如果試劑溫度為約38℃,則制備壓力應大于約7kpa。在優選的實施例中,將所述水性試劑溶液均化。在一些實施例中,該方法還包括使用在約0.15w/kg至約50w/kg范圍內的湍流能量混合該水性試劑溶液。使用足夠的湍流能量,這樣使得kolmogorov長度尺度在小于質外體自由長度(例如約10微米)的等級上。使用kolmogorov長度尺度,并且知道20℃水的運動粘度為約10-6m2/s,將試劑混合和加工水至10微米尺度所需的能量為約50w/kg。類似地,混合至20微米尺度需要約5w/kg,并且混合至50微米尺度需要約0.15w/kg。本領域普通技術人員將認識到,存在可以用這類能量混合的許多簡單的混合裝置。一種這樣的簡單的混合裝置是25-mm直徑的塑料管,該塑料管長度為8米、具有0.0014的管粗糙度,從大氣壓(100kpa)到20kpa的真空度灌注,在灌注過程中用2.8升/秒(6cfm)真空泵保持該真空度。由于壓降在該管中消耗的功率為226.4w。管中的液體總量為4.05kg,因此每kg消耗的功率為約56w/kg,這足以以10微米尺度混合(該示例性流量足以在1.8小時內灌注18m3)。在優選的實施例中,所述灌注時間為從約1分鐘至約1小時。實驗已經示出,糖的轉化效率對灌注時間相對不敏感。在優選的實施例中,所述發酵時間為從約6小時至約7天。實驗已經示出,取決于富含碳水化合物的植物薄壁組織的類型,用每個薄壁細胞約2個細胞的酵母濃度的發酵時間導致約6小時至20小時的發酵時間。在優選實施例中,所述發酵壓力為大氣壓。由于持續生產co2,并且由于壓力容器是昂貴和危險的,所以在大氣壓下排放co2是較便宜的。在一些實施例中,該方法還包括將所述富含碳水化合物的植物薄壁組織保持在無氧環境中持續發酵時間完成后的作物保存時間。當環境是無氧的并且在質外體或薄壁細胞中不存在簡單糖時,真菌和細菌不能在果膠或乙醇上生長。在優選的實施例中,該方法還包括通過真空汽提回收發酵產物。在一些實施例中,該方法還包括通過粉碎回收發酵產物。在一些實施例中,該方法進一步包括或者在步驟(e)之前或步驟(e)之后排出所述水性試劑溶液。真空汽提是優選的,因為它是用于回收發酵產物的有效并且成本有效的技術。乙醇的真空汽提可以用類似的容器進行,如真空灌注,但具有增加的加熱作物的能力。排出水性試劑溶液導致汽提蒸氣中較高百分比的乙醇。本領域普通技術人員將認識到,用各種低成本技術可以將發酵期間的溫升限制到約38℃,尤其是如果發酵在大約20小時內發生。本領域普通技術人員將認識到,已知的裝置可用于在此披露的過程、系統和方法。在此的過程可以是分批的、連續的、半連續的或準連續的。在此對“容器”或“反應器”的任何提及應被解釋為指一種或多種這樣的裝置(例如串聯或并聯)。可能希望或觀察到各種流動模式。在化學反應和同時的傳質過程涉及多個相的情況下,流體動力學可能是相當復雜的。取決于具體設計,流動模式可以接近塞式流動或充分混合的流動。生產量或加工能力可能從小型實驗室規模單元到完全商業規模的生物精煉廠,包括任何試點、示范或半商業規模,廣泛地變化。在不同實施例中,加工能力為至少約1kg/天、10kg/天、100kg/天,1噸/天(所有噸為公噸)、10噸/天、100噸/天、500噸/天、1000噸/天,2000噸/天、或更高。整個系統可以在固定的位置,或者它可以被制成便攜式的。可以使用對于實際按比例放大可以簡單地復制的模塊來構造該系統。不同的探針可以允許跨越過程的不同階段進行精確的過程監測和控制,直到并潛在地包括過程的所有階段。當可以利用操作歷史來調整工藝條件(包括壓力循環程序)時,將預期精確的過程監測導致產量和效率的提高,在動態以及在一段時間內兩種情況下。在一些實施例中,將反應探針布置成與處理區域可操作地連通。這樣的反應探針可用于提取液體樣品并分析它們,以便確定水解程度或糖輪廓等。過程調整可以基于,如果認為是必要的或希望的,使用公知的過程控制原理(反饋,前饋,比例-積分-導數邏輯等)的測量。在過程中產生或存在的固體、液體和氣體流可以獨立地循環,傳遞到后續步驟,或者在任何點從該過程中去除/清除。實例以下實例證明了本發明的原理。通過實驗證據已經示出上述酵母和酶的真空灌注可用于發酵富含碳水化合物的作物。圖1的實驗裝置被設計為就工業單元的溫度、壓力和流量控制而言再現工業過程功能。它與工業單元的不同在于裝載和卸載作物(樣品)。該實驗裝置用于以下所有實例。參考圖1,實驗裝置100由主灌注容器102組成,該容器在操作中保持幾乎完全浸入恒溫槽101內,該恒溫槽可在寬溫度范圍內操作并且其精確的溫度控制通過溫度控制器114確保。灌注容器102用可移除且密封的蓋118封閉。灌注容器102和密封的蓋118被設計成能夠保持并且維持如工藝條件所要求的真空條件。所希望量的樣品材料117可以放置在灌注容器102的內部。灌注容器102可以經co2鋼瓶106和co2管線107供應co2。在co2管線107上,使用流量/壓力調節器108來設定將co2輸送到灌注容器102的壓力。真空泵103用于抽空并保持灌注容器102內的真空。壓力指示器116和溫度指示器119安裝在灌注容器102上。灌注容器102通過閘閥109與具有制備的水性試劑溶液的容器105連接。真空泵103通過其中安裝壓力調節器110的管線連接到灌注容器102。壓力調節器110允許灌注容器102壓力在寬范圍的真空水平上被調節,同時真空泵103以恒定的速度運行。壓力調節器110上的通風孔112連接到氣體計數器。在灌注容器102的氣體出口上的四通閥104允許從樣品端口111去除樣品,隔離灌注容器102,使壓力116循環,并將樣品的一部分再循環回到灌注容器102中而不改變其內部的壓力和氣帽組成。以下實例的實驗程序如下。根據實驗的具體需要分別制備預混合的水性試劑溶液;任選地,水性試劑溶液可以預熱到感興趣的溫度。將作物樣品放置在灌注容器102內。灌注容器102中不存在液體。將灌注容器102放置在恒溫槽101中,該恒溫槽在為實驗設定的溫度下運行。一旦將蓋118放置在灌注容器102的頂部上,使用真空泵103和來自管線107的co2,沖洗任何空氣并在樣品的頂部上形成co2氣氛。一旦確保了任何殘留空氣的沖洗,通過在流量控制器115上操作來中斷來自管線107的新鮮co2的流動。通過經由壓力調節器110控制它,允許灌注容器102中的壓力下降到實驗中限定的水平。一旦壓力和溫度穩定在所希望的水平,當壓力下降時從作物中排出的游離液體任選地使用樣品端口111從容器中排出并被保存用于進一步的分析。然后打開閘閥109,并允許預混合的水性試劑溶液進入進行其中發生灌注的灌注容器102。樣品材料的量被按以下的方式設定,即,使得取決于材料的本體密度,一旦液體的進料被中斷,樣品就被完全浸沒。通過準確地選擇的溫度和壓力,可以避免液體的沸騰(沸騰引起氣泡的大量釋放)。在完成灌注并且關閉閘閥109之后,通過打開和調節流量和壓力控制器108建立1.0atm的co2分壓。一旦液體以1.0atm的壓力灌注到作物中持續所希望的時間,使用樣品端口111任選地將游離液體從容器中排出。然后,實驗可以進行持續所希望的持續時間。如果在實驗期間需要液體樣品,則可以將注射器連接到四通閥104樣品端口111,其被設置為允許注射器充滿液體。一旦將注射器移除并且樣品端口111關閉,任何殘留的液體通過四通閥歧管流回到容器中。發酵的進程通過在通風孔112產生的氣體用來自德國波鴻的dr.-ing.ritterapparatebaugmbh&co.kg公司的mgc-1型的milligascounter來測量。在發酵期間內以毫升分辨率測量產生的氣體量。3.35g糖(通常是蔗糖)的發酵產生1l的氣體(co2),因此發酵糖的量、發酵速率和發酵糖的總量可以通過隨時間推移產生的氣體圖來推斷。以下實例使用北部的明尼蘇達州的甜菜,來自佛羅里達州的甘蔗和來自田納西州的甜高粱。榨出來自每一種的汁并且用數字折射計測量以白利糖度計的糖含量。每一種的樣品完全干燥以確定干固體百分比。將這些合并以計算出這些作物中糖的百分比(w/w)。注意,甜高粱汁的白利糖度測量通過乘以約0.8調整以得到總糖的重量百分比。這是因為甜高粱汁具有比甜菜或甘蔗汁更多的葡萄糖和果糖,并且葡萄糖和果糖的折射率與蔗糖的折射率不同。這在liu等人的“通過固定的酵母發酵從甜高粱的秸稈汁精煉生物乙醇(refiningbioethanolfromstalkjuiceofsweetsorghumbyimmobilizedyeastfermentation)”,再生能源(renewableenergy)33.5(2008):1130-1135(將其特此通過引用結合在此)中進行了描述。甜菜計算為具有按重量計18%的糖,甘蔗為按重量計14%的糖,并且甜高粱為按重量計10%的糖。實例1:將水灌注入甜菜薄壁組織中將甜菜切片徑向切成三種不同的厚度,6mm、12mm和18mm。然后將這些切片切成25mm正方形切片,并將三個厚度中的每一個的所有25mm正方形切片稱重,并放入上述三個裝置(圖1)中。這個實例的氣帽是空氣。在階段1中,施加13kpa的真空持續30分鐘,除去游離水,壓力恢復至100kpa,并稱重每個立方體。在階段2中,施加13kpa的真空持續30分鐘,在真空下灌注水直到立方體被覆蓋,壓力恢復到100kpa,水灌注入薄壁組織持續30分鐘,除去游離水,并且然后稱重每個立方體。在階段3中,施加13kpa的真空持續30分鐘,除去游離水,壓力恢復至100kpa,并稱重每個立方體。該測試的結果示于下表1中,并且該結果示出當施加真空持續30分鐘時,薄壁組織的質量的約10%從該組織滲出。它還示出薄壁組織的質量的約6%可以在真空下灌注有水,并且當再次施加真空時,其中約一半從該組織滲出。更重要的是,該實例示出在6mm厚的組織和18mm組織中,灌注幾乎相同。表1:甜菜切片的質量厚度初始質量階段1質量階段2質量階段3質量6mm5.985g5.389g5.695g5.604g12mm8.987g8.358g8.761g8.312g18mm14.782g13.194g14.32g13.557g實例2:甘蔗的發酵用富含富氮營養素(來自bsg公司的fermax)的微酸性酵母溶液灌注切碎的甘蔗。兩種不同的溶液一式兩份地進行測試,一份使用thermosacc酵母,并且一份使用distillamax酵母。兩種酵母均可從lallemandbiofuels&distilledspirits公司商購,并且細胞體的平均尺寸不同。thermosacc酵母具有5微米的平均細胞直徑并且distillamax具有10微米的平均細胞直徑。灌注完成后,通過氣體計數器監測二氧化碳生成量,以估計發酵進程。使用以下程序:1.開始加熱恒溫槽至38℃。2.稱量大約50g的甘蔗,然后切碎成大約一英寸的塊,在切碎之后再次稱量甘蔗的總量。3.制備兩種酵母溶液,一種具有5g/ldistillamax酵母、1g/lfermax營養素并且一種具有5g/lthermosacc(c6)酵母,1g/lfermax營養物,用磷酸緩沖二者至3.5的ph。4.將密封燒杯中的甘蔗放在恒溫槽中,并施加真空持續30分鐘,以確保從生物質中完全排出氣體。5.向每個燒杯灌注大約200g的溶液。6.緩慢恢復大氣壓力,在燒杯內容物頂部產生惰性氣帽。7.打開排氣閥,以便使氣體流過氣體流量計。8.使發酵試驗到完成,同時記錄氣體流量。具有thermosacc酵母和distillamax酵母的樣品一式兩份地試驗,并且具有最高氣體產率的結果呈現于表2中。兩種發酵都耗費稍小于8個小時才能完成。在這兩種情況下,灌注允許發酵在甘蔗的主體內發生,具有對基材進行最少的預處理(除了粗破碎之外)。出人意料地,較小的酵母細胞似乎更有效,確保了較大的糖轉化率,如通過較大的氣體產量所證明的。這個結果與較小的酵母能夠更深地擴散到甘蔗質外體內部是一致的。在這兩種情況下,真空灌注允許活性原位發酵,如表2中所示。表2:甘蔗發酵的效率實例3:甜菜的發酵用由lallemandbiofuels&distilledspirits公司的distillamax酵母制成的微酸性酵母溶液灌注粗切碎的甜菜塊。每個樣品使用不同的灌注時間。灌注完成后,通過氣體計數器監測二氧化碳生成量,以估計發酵進程。使用以下程序:1.確保恒溫槽在38℃。2.稱量約100g甜菜,然后切碎成大約一英寸立方體的塊,切碎后再次稱量總甜菜。3.制備具有5g/ldistillamax酵母的酵母溶液,用磷酸緩沖至3.5的ph。4.在樣品2和4的溶液中,以約5g/kg干燥生物質的荷載加入具有果膠酶活性的酶。5.將密封燒杯中的甜菜樣品放入恒溫槽中,并施加真空持續30分鐘。6.灌注足夠的溶液以淹沒所有甜菜塊。7.樣品1和2立即釋放壓力,并且樣品3和4緩慢釋放壓力(約5分鐘)。8.連接氣體計數器。9.使發酵試驗到完成。樣本量和通過發酵這4個甜菜樣品的每個產生的氣體量呈現于表3中。所有發酵耗費13與15之間個小時才能完成。灌注時間對整體糖轉化產率沒有顯著影響,因為對于快速灌注情況(樣品1和2),該產量高于約90%。慢灌注似乎稍微不利。添加分解細胞壁的果膠酶似乎改善發酵,并進一步闡明在沒有機械混合和最少預處理生物質的情況下給予原位酶和微生物活性的真空灌注能力。表3:甜菜發酵的效率實例4:甜高粱的發酵使用與以上實例2一樣的用于發酵甜高粱的相同程序。代替改變酵母的類型,將thermosacc酵母用于兩個樣品。一個樣品在灌注后從秸稈中排出液體,并且另一個沒有排出液體。這些發酵的結果呈現于表4中。兩種發酵都耗費稍小于20個小時才能完成。出人意料地,其中從秸稈排出液體的發酵效率高于將液體留在秸稈周圍的效率。然而,在兩種情況下,真空灌注都允許活性原位發酵。表4:甜高粱發酵的效率實例5:馬鈴薯發酵用由lallemandbiofuels&distilledspirits公司的thermosacc酵母制成的微酸性酵母溶液灌注粗切碎的馬鈴薯塊。一個樣品用來自美國明尼蘇達州的shakopee的bsghandcraft公司的α-淀粉酶另外灌注。該α-淀粉酶在66℃具有最大活性,并且在38℃下具有約20%的活性。灌注完成后,通過氣體計數器監測二氧化碳生成量,以估計發酵進程。使用以下程序:1.確保恒溫槽在38℃。2.稱量約70g馬鈴薯,然后切碎成大約一英寸立方體的塊,切碎后稱量總馬鈴薯。3.制備具有5g/lthermosacc酵母的酵母溶液,用磷酸緩沖至3.5的ph。4.在樣品2的溶液中,以5g/kg干物質的荷載加入具有α-淀粉酶活性的酶。5.將密封燒杯中的馬鈴薯樣品放入恒溫槽中,并施加真空持續30分鐘。6.灌注足夠的溶液以淹沒所有馬鈴薯塊。7.立即釋放壓力。8.連接氣體計數器。9.使發酵試驗持續約120小時。樣本量和通過發酵這2個馬鈴薯樣品的每個產生的氣體量呈現于表5中。本領域技術人員將認識到,在薄壁細胞中存在約0.5%至2%的簡單糖(蔗糖+葡萄糖),并且馬鈴薯中存在約18%的淀粉,其中該淀粉的約80%可以通過α-淀粉酶分解成葡萄糖、麥芽糖和麥芽三糖。兩種樣品的發酵在產生可測量的氣體前耗費14.5小時。不希望受任何特定理論的束縛,據信此長的誘導時間部分是由馬鈴薯中的水中吸收初始的co2產生而引起的,并且當馬鈴薯中的水被co2飽和時,氣體產生開始。本領域技術人員將認識到,在38℃下,co2在水中的溶解度為約1.6g/l,0.076l馬鈴薯組織含有約0.608l的水,并且第一個氣泡將出現之前約0.042l的co2將溶解在0.076l的馬鈴薯。發酵120小時后,樣品1產生0.155l氣體,并且樣品2產生1.27l氣體。樣品1在72小時與120小時之間不產生可測量的氣體,顯示出質外體和薄壁細胞中的所有簡單糖都被發酵,并且沒有另外的簡單糖從淀粉顆粒中釋放出來。這示出灌注酵母將保留富含淀粉的薄壁組織。樣品2中顯著更高的氣體產量示出α-淀粉酶擴散到薄壁細胞中,并將約40%的淀粉顆粒水解成酵母可以發酵的糖。氣體生產在整個120小時發酵是連續的,其中緩慢下降。該實例證明這種技術可以通過簡單地灌注酵母和淀粉酶而不灌注果膠酶來發酵薄壁細胞內的淀粉顆粒。它還示出薄壁細胞膜對淀粉酶是可滲透的。表5:馬鈴薯發酵的效率在本詳細說明中,已參考多個實施例和附圖,在附圖中通過圖示方式示出了本發明的具體示例性實施例。對這些實施例進行了說明以使本領域的技術人員能夠實踐本發明,并且應理解,可以由熟練的技術人員對所披露的不同實施例作出修改。當上述方法和步驟表明某些事件以某種順序發生時,本領域普通技術人員將認識到可以修改某些步驟的順序并且此類修改是根據本發明的變體。另外,在可能時可以在并行過程中同時執行某些步驟,也可順序執行某些步驟。本說明書中所引用的所有出版物、專利和專利申請通過引用以其全部內容結合在此,就如同每個出版物、專利或專利申請已經在此明確地且單獨地闡述。上述實施例、變型和附圖應當提供本發明的實用性和通用性的指示。在不脫離本發明的精神和范圍的情況下,還可以利用未提供在此闡明的所有特征和優點的其他實施例。這類修改和變體被認為在由權利要求書限定的本發明的范圍內。在本披露內容與詞典或其他參考文獻之間的定義中有沖突的情況下,將以本披露內容為準。當前第1頁12當前第1頁12
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