具有針對CD79和CD22的特異性的分子的制作方法

本公開涉及至少對抗原CD22和CD79是雙特異性的分子，包含所述分子的制劑，以及其中任一種在治療中用途。本公開還擴展至制備所述分子和所述制劑的方法。在獨立的方面，本公開還擴展至本文所描述的新的抗體序列和片段。發明背景體內生物學機制是極其復雜的信號級聯，其難以解卷積和理解。此類信號傳導的一個實例是激活B細胞所需的信號傳導。B細胞抗原受體(BCR)由膜免疫球蛋白(mIg)分子和締合的Igα/Igβ(CD79a/CD79b)異二聚體(α/β)組成。mIg亞單位結合抗原，導致受體聚集，而α/β亞單位將信號轉導到細胞內部。BCR聚集快速激活Src家族激酶Lyn、Blk和Fyn以及Syk和Btk酪氨酸激酶。這啟動由BCR、上述酪氨酸激酶、銜接體蛋白質(諸如CD19和BLNK)以及信號傳導酶(諸如PLCγ2、PI3K和Vav)組成的“信號體”的形成。從信號體發出的信號激活涉及激酶、GTP酶和轉錄因子的多個信號級聯。這導致細胞代謝、基因表達和細胞骨架組構的變化。BCR信號傳導的復雜性允許許多不同的結果，包括存活、耐受性(無反應性)或凋亡、增殖和分化為抗體產生細胞或記憶B細胞。應答的結果由細胞的成熟狀態、抗原的性質、BCR信號傳導的幅度和持續時間以及來自其它受體(諸如CD40、IL-21受體和BAFF-R)的信號確定。許多其它跨膜蛋白質(其中一些是受體)調節BCR信號傳導的特定元件。其中一些，包括CD45、CD19、CD22、PIR-B和FcγRIIB1(CD32)。BCR信號傳導的幅度和持續時間受包括涉及Lyn/CD22/SHP-1途徑、Cbp/Csk途徑、SHIP、Cbl、Dok-1、Dok-3、FcγRIIB1、PIR-B的負反饋環和BCR的內化限制。在體內，B細胞通常由捕獲抗原并在其細胞表面上展示它們的抗原呈遞細胞激活。通過此類膜相關抗原激活B細胞需要BCR誘導的細胞骨架重構。自身反應性B細胞負責產生可直接或間接引起或加重自身免疫病癥的致病性自身抗體。CD20陽性B細胞的耗盡已經用于成功治療許多自身免疫病癥，并因此結論性地確定B細胞在引起或維持許多自身免疫性疾病中起重要作用。盡管B細胞耗盡已經是成功的治療選擇，但也存在控制B細胞生長和激活狀態也可以是調節B細胞功能的有效方式的證據。因此，需要不耗盡B細胞并提供控制B細胞而沒有已被證明與一些副作用相關的長期抑制B細胞免疫性的靈活性的替代策略。此外，并非所有B細胞應答或活性都是有害的，并且證據表明維持調節性B細胞群可能是保護性的。這樣的方法應該在由不適當或過量的BcR信號傳導引起的具有異常B細胞功能的疾病中有效。實例包括但不限于炎癥、自身免疫和癌癥。特別感興趣的是對BcR信號傳導具有直接需求或需要抑制或刺激體液免疫應答的疾病。雙特異性抗體被廣泛預期在下一代生物治療劑中起主要作用(D.Holmes,NatureRevDrugDiscNov2011:10；798)。它們具有在更大比例的患者中提供優異的、長期的、廣泛的功效的潛力。這可以通過在共同疾病途徑中同時共同接合不同的抗原從而減少冗余來實現；或通過靶向來自獨立途徑的抗原以提供累加或協同效應來實現。迄今為止，抑制B細胞功能而不缺失B細胞的策略已經集中在利用CD32b(FcgRIIB)的天然調節機制。這些包括針對CD79b/CD32b(Veri等人，Arthritis&Rheumatism2010621933-1943)、CD19/CD32b(Karnell等人，J.Immunol20141921480-1490)的雙特異性抗體和具有增強的CD32b結合的具有Fc的CD19抗體(Chu等人，Arthritis&Rheumatology2014661153-1164)。發生Fcγ受體IIb(CD32b)與B細胞受體的共連接以天然地調節信號傳導，特別是當抗原與小的免疫復合物中的抗體結合時。然后CD32b募集拮抗BcR激活的磷酸酶SHP-1和SHIP-1。盡管這種天然調節機制可以控制B細胞功能，但是由CD32b的蛋白質序列變異引起的CD32b功能的破壞可以導致自身免疫疾病，并且該受體可以在自身免疫疾病中下調，例如在SLE的情況下。因此，阻斷B細胞活性的替代方式是優選的，因為它們提供調節BcR功能的替代的、非天然的方式。當天然機制在給定疾病中失去功能時，這些替代機制可能是特別重要的。雙特異性抗體有助于獲得新型生物學，諸如：1)如果合適的話，細胞上的交聯受體，2)誘導細胞介導的效應，3)將細胞因子定位于細胞以調節信號傳導或局部阻斷細胞因子功能，4)同時接合多個表位以產生“新活性”、增加功能或特異性，其可能不會由單一單克隆抗體表現或實際上是未連接的抗體的混合物(“聚-單克隆”)，包括涉及不同抗原的混合物。本發明人已經出乎意料地發現，通過使用雙特異性抗體將BcR(CD79)偶聯到陰性調節分子CD22(在正常生理條件下CD22將被從復合物中排除)上可以抑制BcR信號傳導。CD22負責在不存在抗原結合的情況下通過BcR調節補充性(tonic)信號傳導。然而，一旦抗原結合，CD22通常被從BcR復合物中排除。通過使用雙特異性抗體物理連接BcR與CD22信號傳導，本發明人已發現可抑制B細胞中的激活。因此，本發明人已經鑒定了至少針對CD22和CD79是雙特異性的分子的協同功能。當以雙特異性(多特異性)形式提供具有特異性組合的結合區而不是簡單地作為例如單克隆抗體或其結合片段的混合物提供時，這種功能似乎是初始可檢測的。因此，本發明的多特異性分子可用于控制與某些疾病諸如自身免疫和癌癥相關的異常B細胞功能。本公開內容的概述因此提供了包含特異性針對抗原CD22的結合結構域和特異性針對抗原CD79的結合結構域的多特異性分子。根據本公開的雙特異性形式的組合在功能性體外測定中顯示出令人感興趣的生物活性，例如抑制B細胞信號傳導，如通過以下任一測量而得：除了在B細胞上抑制CD86、CD71和/或CD40的表達外，抑制AktS473的磷酸化、抑制P38和PLCγ2Y759的磷酸化、抑制IkB。單獨的組分或混合物中提供的組分的相同水平的活性不明顯。然而，當提供具有針對CD22和CD79b的特異性的雙特異性構建體時，活性明顯。在這些測定中觀察到的抑制表明包含特異性針對CD22的結合結構域和特異性針對CD79的結合結構域的本發明的多特異性分子可用于改變B細胞功能并提供B細胞耗盡的治療性替代物。B細胞受體信號傳導是B細胞的關鍵功能并且是B細胞的抗原特異性激活所必需的。BcR信號傳導從B細胞發展的早期到記憶B細胞應答的激活和發展是關鍵的。B細胞受體由與CD79a和CD79b的異二聚體復合物締合的表面免疫球蛋白(Ig)分子組成。當表面Ig識別抗原時，據認為這導致CD79a/b復合物的聚集，其導致包括Src家族激酶以及Syk和Btk酪氨酸激酶的即時信號級聯的下游激活。然后，該信號傳導復合物可以募集銜接體蛋白質諸如CD19和BLNK，并導致PLCγ2和PI3K的激活，其繼而可以激活進一步的下游途徑，諸如控制B細胞生長、存活和分化的那些途徑。該信號傳導復合物可以通過經由BAFF-R、IL-21R和CD40的信號傳導的其它第二信號進一步調節，并且還可以通過其他信號傳導分子諸如CD19、CD21、CD83、CD22、CD32b和CD45等調節。在通過BcR識別抗原時，激活的第一應答之一是表面受體諸如共刺激分子CD80和CD86的上調。這些分子結合T細胞上的相應受體，其提供進一步的存活和激活信號，所述信號允許在MHCII類的背景中識別抗原的T細胞的存活和擴增。通過B細胞在II類MHC的背景下將抗原呈遞回釋放諸如IL-2和IL-21的因子的T細胞的能力，該應答得到進一步放大。這些細胞因子又大大擴增了B細胞的數量。因此，CD86在細胞表面上的下調可以指示B細胞信號傳導的抑制。此外，B細胞受體信號傳導的抑制可導致下游功能的抑制。一個這樣的結果是抑制共刺激分子諸如CD86(或其表達降低)，這將導致T細胞功能、存活和分化的抑制。因此，B細胞受體信號傳導的抑制可有益于控制與自身免疫和癌癥相關的異常B細胞功能。B細胞受體信號傳導是自身免疫疾病中B細胞增殖、分化、抗原呈遞和細胞因子釋放所必需的。因此，抑制BcR活性可以調節B細胞功能，諸如免疫球蛋白分泌、T細胞激活和控制與例如自身免疫病癥相關的不適當的B細胞活性。此外，還有一些B細胞白血病和淋巴瘤需要B細胞受體信號傳導來存活和生長，這可以通過B細胞受體激活的抑制劑來控制。在一個實施方案中，本發明的多特異性分子的結合結構域各自獨立地包含特異性針對相關抗原(諸如CD22或CD79或如果是三特異性則為另外的抗原分子)的一個或兩個(諸如兩個)抗體可變結構域。本文所用的CD79是指由CD79a和CD79b組成的復合物。因此，結合CD79的抗體或結合結構域可以結合CD79a和/或CD79b。本文所用的結合CD79a和/或CD79b是指特異性針對CD79a、特異性針對CD79b和既特異性針對CD79a又特異性針對CD79b(即識別CD79a上的表位并且相同的抗體或結合結構域也識別CD79b上的表位，即泛(pan)特異性)或特異性針對CD79a和CD79b的復合物(即識別以復合物形式的CD79a和CD79b的相互作用形成的表位，并且這能夠區分復合物與個體成分)。在一個實施方案中，在本公開的分子中使用的抗體或其結合片段特異性針對CD79a。在一個實施方案中，在本公開的分子中使用的抗體或其結合片段特異性針對CD79b。在一個實施方案中，在本公開的分子中使用的抗體或其結合片段特異性針對CD79復合物，即它識別存在于復合物中并且特異性針對例如包含CD79a和CD79b之間相互作用的表位。在一個實施方案中，甚至在結合結構域特異性針對CD79a或CD79b的情況下，應當理解，當處于復合物形式時，結合結構域優選仍結合CD79a或CD79b，因為兩種蛋白質在細胞表面上天然共表達。當在一個結合結構域和/或在每個結合結構域中存在兩個可變區時，則兩個可變區通常協同工作以提供對相關抗原的特異性，例如它們是同源對或親和力成熟以提供足夠的親和力，使得所述結構域特異性針對特定抗原。通常它們是重鏈和輕鏈可變區對(VH/VL對)。在一個實施方案中，本公開的分子是雙特異性的。在一個實施方案中，本公開的分子是三特異性的。在一個實施方案中，本公開的分子對CD79是單特異性的，對CD22是單特異性的，即該分子僅包含一個結合CD79的結合結構域和一個結合CD22的結合結構域。在一個實施方案中，本公開的多特異性分子是單鏈。在一個實施方案中，本公開的多特異性分子包含重鏈以及輕鏈。在一個實例中，本文所用的重鏈和輕鏈對不被稱為二聚體，特別是在一個實施方案中本公開的分子不包含多聚體，諸如抗體、單位/片段或成分的二聚體。在一個方面，提供了多特異性抗體分子，其包含或由以下組成：a)式(I)的多肽鏈：VH-CH1-X-(V1)p；b)式(II)的多肽鏈：VL-CL-Y-(V2)q；其中：VH表示重鏈可變結構域；CH1表示重鏈恒定區的結構域，例如其結構域1；X表示鍵或接頭，例如氨基酸接頭；Y表示鍵或接頭，例如氨基酸接頭；V1表示dab、scFv、dsscFv或dsFv；VL表示可變結構域，例如輕鏈可變結構域；CL表示來自恒定區的結構域，例如輕鏈恒定區結構域，諸如Cκ；V2表示dab、scFv、dsscFv或dsFv；p是0或1；q是0或1；以及當p是1時q是0或1并且當q是1時p是0或1，即p和q不同時為0。在一個實施方案中，所述分子包含針對CD22的不超過一個結合結構域和針對CD79的不超過一個結合結構域。上述形式對于篩選可變區的組合特別有用，例如在長期測定中和用于治療用途。在一個實施方案中，q是0并且p是1。在一個實施方案中，q是1并且p是1。在一個實施方案中，V1是dab并且V2是dab，并且它們一起形成可操作的可變區對、諸如同源VH/VL對的單一結合結構域。在一個實施方案中，VH和VL特異性針對CD79，例如CD79a或CD79b。在一個實施方案中，V1特異性針對CD79，例如CD79a或CD79b。在一個實施方案中，V2特異性針對CD79，例如CD79a或CD79b。在一個實施方案中，V1和V2一起(例如作為一個結合結構域)特異性針對CD79，例如CD79a或CD79b。在一個實施方案中，VH和VL特異性針對CD22。在一個實施方案中，V1特異性針對CD22。在一個實施方案中，V2特異性針對CD22。在一個實施方案中，V1和V2一起(例如作為一個結合結構域)特異性針對CD22。在一個實施方案中，本公開的分子是或包含融合蛋白。在一個實施方案中，提供了根據本公開的多特異性分子，其是具有式A-X:Y-B的雙特異性蛋白質復合物，其中：A-X是第一融合蛋白；Y-B是第二融合蛋白；X:Y是異二聚體系鏈；A包含特異性針對CD22或CD79的第一結合結構域；B包含特異性針對CD22或CD79的第二結合結構域；X是結合對的第一結合伴侶；Y是該結合對的第二結合伴侶；以及:是X和Y之間的相互作用(諸如結合相互作用)，以及其中A或B中的至少一個特異性針對CD22而另一個特異性針對CD79。上述形式是方便的形式，因為其提供了組裝雙特異性形式的快速和有效的方式，例如可以在功能測定中進行體外測試。這可以促進優選的可變區對的選擇，其隨后可以并入替代的、治療性多特異性抗體形式中。雖然不希望受理論束縛，但是特異性針對CD22的可變區的不同排列與一系列特異性針對CD79的可變區組合可以獲得生物功能中的不同細微差別。本發明還提供了用于本發明的多特異性分子或摻入任何其它合適的抗體形式的新型CD22抗體。本發明還提供了用于本發明的多特異性分子或摻入任何其它合適的抗體形式的新型CD79抗體。附圖說明圖1是具有針對CD22和CD79b的特異性的抗體的雙特異性和二價組合抑制磷酸化Akt的相對效力的條形圖。圖2是具有針對CD22和CD79b的特異性的抗體的雙特異性和二價組合抑制磷酸化PLCγ2的相對效力的條形圖。圖3是具有針對CD22和CD79b的特異性的抗體的雙特異性和二價組合抑制CD86表達的相對效力的條形圖。圖4是具有針對CD22和CD79b的特異性的雙特異性抗體、二價抗體或抗體混合物抑制磷酸化Akt的相對效力的條形圖。圖5是具有針對CD22和CD79b的特異性的雙特異性抗體、二價抗體或抗體混合物抑制磷酸化PLCγ2的相對效力的條形圖。圖6是顯示CD22和CD79b的雙特異性組合對抗IgM刺激的B細胞中的總IkB水平的影響的滴定的圖。圖7是顯示CD22和CD79b的雙特異性組合對抗IgM刺激的B細胞上CD86表達的作用的滴定的圖。圖8是具有針對具有不同V區的CD22和CD79b的特異性的雙特異性蛋白抑制磷酸化PLCγ2的圖。圖9是提取自Chan和Carter,NatureReviewsImmunologyvol10,May2010,301的圖，其顯示某些抗體形式。圖10是顯示抗原網格交叉特異性的數據的表。抗原2＝CD79b，抗原3＝CD22。值是Syk的磷酸化的抑制百分數(激活則為負值)并且代表所評估的多個V區組合的平均值。圖11是顯示抗原網格交叉特異性的數據的表。抗原2＝CD79b，抗原3＝CD22。值是PLCγ2的磷酸化的抑制百分數(激活則為負值)并且代表所評估的多個V區組合的平均值。圖12是顯示抗原網格交叉特異性的數據的表。抗原2＝CD79b，抗原3＝CD22。值是AKT的磷酸化的抑制百分數(激活則為負值)并且代表所評估的多個V區組合的平均值。圖13是顯示與Fab-Y中CD22特異性的組合的Fab-X中CD79b特異性的每個V區組合的Syk、PLCγ2和AKT的磷酸化的抑制百分數的圖圖14是顯示與Fab-Y中CD79b特異性的組合的Fab-X中CD22特異性的每個V區組合的Syk、PLCγ2和AKT的磷酸化的抑制百分數的圖。圖15顯示了通過CD79b和CD22特異性Fab-Kd-Fab或BYbe對B細胞中抗IgM誘導的磷酸化PLCγ2的抑制百分數的數據。圖16顯示了通過CD79b和CD22特異性Fab-Kd-Fab或BYbe對B細胞中抗IgM誘導的磷酸化P38的抑制百分數的數據。圖17顯示了CD79b和CD22特異性Fab-Kd-Fab或BYbe對B細胞中抗IgM誘導的磷酸化Akt的抑制百分數的數據。圖18顯示了CD79b和CD22特異性Fab-Kd-Fab或BYbe對B細胞上抗IgM誘導的CD71表達的抑制百分數的數據。圖19顯示了CD79b和CD22特異性Fab-Kd-Fab或BYbe對B細胞上抗IgM誘導的CD40表達的抑制百分數的數據。圖20顯示了CD79b和CD22特異性Fab-Kd-Fab或BYbe對B細胞上抗IgM誘導的CD86表達的抑制百分數的數據。圖21顯示CD79b和CD22特異性VR4447/VR4126BYbe和VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白對B細胞上的CD27表達的抑制。圖22顯示CD79b和CD22特異性VR4447/VR4126BYbe和VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白對B細胞上的CD71表達的抑制。圖23顯示CD79b和CD22特異性VR4447/VR4126BYbe和VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白對B細胞上的CD86表達的抑制。圖24顯示CD79b和CD22特異性VR4447/VR4130Bybe和VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白對B細胞上的CD27表達的抑制。圖25顯示CD79b和CD22特異性VR4447/VR4130Bybe和VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白對B細胞上的CD71表達的抑制。圖26顯示CD79b和CD22特異性VR4447/VR4130Bybe和VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白對B細胞上的CD86表達的抑制。圖27顯示來自用VR4447/VR4126BYbe、VR4447/VR4127BYbe和VR4447/VR4130BYbe培養的PBMC的破傷風類毒素IgG產生的抑制。數據表示來自3個供體的合并數據。圖28顯示來自用VR4447/VR4126BYbe、VR4447/VR4127BYbe和VR4447/VR4130BYbe培養的純化B細胞的破傷風類毒素IgG產生的抑制。數據表示來自2個供體的合并數據。圖29顯示來自用VR4447/VR4126BYbe、VR4447/VR4127BYbe、VR4447/VR4130BYbe、VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白和VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白培養的PBMC或純化B細胞的破傷風類毒素IgG產生的抑制。數據來自單個供體。圖30顯示來自12個健康者和12個SLE患者樣品的未刺激的B細胞中磷酸化的基線水平。圖31顯示CD79b+CD22特異性VR4447/VR4130BYbe對抗IgM誘導的B細胞的NFkB磷酸化的作用，來自12個健康志愿者(HV)和12個SLE供體。圖32顯示CD79b+CD22特異性VR4447/VR4130BYbe對抗IgM誘導的B細胞的Akt磷酸化的作用，來自12個健康志愿者(HV)和12個SLE供體。圖33顯示CD79b+CD22特異性VR4447/VR4130BYbe對抗IgM誘導的B細胞的Syk磷酸化的作用，來自12個健康志愿者(HV)和12個SLE供體。圖34顯示CD79b+CD22特異性VR4447/VR4130BYbe對抗IgM誘導的B細胞的Erk1&2磷酸化的作用，來自12個健康志愿者(HV)和12個SLE供體。本公開內容的詳述本文所用的“多特異性分子”是指具有特異性結合至少兩種獨特抗原(例如不同抗原)的能力的分子。在一個實施方案中，多特異性分子是雙特異性、三特異性或四特異性分子，特別是雙特異性或三特異性分子。在一個方面，本公開擴展至對至少CD22和CD79a特異的合適形式的分子，以及在多特異性分子(諸如雙特異性或三特異性形式)中對CD22和CD79a特異的抗體/片段或其組合的用途。在一個方面，本公開擴展至對至少CD22和CD79b特異的合適形式的分子，以及在多特異性分子(諸如雙特異性或三特異性形式)中針對CD22和CD79b的特異性的抗體/片段或其組合的用途。在一個方面，本公開擴展至對至少CD22和CD79a/b復合物特異的合適形式的分子，以及在多特異性分子(諸如雙特異性或三特異性形式)中對CD22和CD79a/b復合物特異性的抗體/片段或其組合的用途。在一個實施方案中，本公開的分子是三特異性的，例如其中第三結合結構域能夠延長分子的半衰期，例如通過結合血清載體蛋白。血漿中存在各種蛋白質，包括甲狀腺素結合蛋白，甲狀腺素視黃質運載蛋白，α1-酸性糖蛋白，轉鐵蛋白，血纖蛋白原和白蛋白，或其任何片段(Bartalena&Robbins,1993,ClinicsinLab.Med.13:583-598；Bree等人,1986,Clin.Pharmacokin.11:336-342；Gitlin等人.1964,J.Clin.Invest.10:1938-1951；Peters,1985,AdvProteinChem.37:161-245；Waldeman&Strober,1969,Progr.Allergy,13:1-110)。在一個實例中，第三結合結構域對血清白蛋白、例如人血清白蛋白是特異性的。多特異性分子形式合適的多特異性分子的實例是本領域已知的，例如在以下綜述中公開的：“ThecomingofAgeofEngineeredMultivalentAntibodies,Nunez-Prado等人DrugDiscoveryTodayVol20Number5Mar2015,page588-594，D.Holmes,NatureRevDrugDiscNov2011:10；798，Chan和Carter,NatureReviewsImmunologyvol10,May2010,301”，通過引用并入本文。在一個實施方案中，多特異性形式包括本領域已知的那些和本文所述的那些，諸如其中分子形式選自包含或由以下組成的組：·串聯sdAb、串聯sdAb-sdAb(三個sdAb)；·(scFv)2(也稱為串聯scFv)、scFv-dsFv、dsscFv-dsFv(dsFv)2；·雙抗體(diabody)、ds雙抗體、dids雙抗體；·sc雙抗體、dssc雙抗體、didssc雙抗體；·Dart抗體，即VL1接頭VH2接頭和VH1接頭VL2，其中VH1和VH2的C末端通過二硫鍵連接；·dsBiTE,didsBiTE；·di雙抗體(參見Nunez-Prado等人，特別是其中的圖1里的第25號分子)、dsdi雙抗體、didsdi雙抗體；·三抗體、ds三抗體、dids三抗體、trids三抗體；·；·四抗體、ds四抗體、dids四抗體、trids四抗體、tetrads四抗體；·tandab(參見Nunez-Prado等人，特別是其中的圖1里的第22號分子)、dstandab、didstandab、tridstandab、tetradstandab；·[sc(Fv)2]2(參見Nunez-Prado等人，特別是其中的圖1里的第22號分子)、ds[sc(Fv)2]2、dids[sc(Fv)2]2、trids[sc(Fv)2]2、tetrads[sc(Fv)2]2；·五抗體(參見Nunez-Prado等人，特別是其中的圖1里的第27號分子)；·Fab-scFv(也稱為雙靶向抗體(bibody))、Fab’scFv、FabdsscFv(或BYbe)、Fab’dsscFv；·三體(tribody)、ds三體、dids三體(也稱為FabdidsscFv或TrYbe或Fab-(dsscFv)2)、Fab’didsscFv；·Fabdab、FabFv、Fab’dab、Fab’Fv；·Fab單接頭Fv(本文中也稱為如WO2014/096390中所公開的FabdsFv)、Fab’單接頭Fv(本文中也稱為Fab’dsFv)；·FabscFv單接頭Fv、Fab’scFv單接頭Fv；·FabdsscFv單接頭Fv、Fab’dsscFv單接頭Fv；·FvFabFv、FvFab’Fv、dsFvFabFv、dsFvFab’Fv、FvFabdsFv、FvFab’dsFv、dsFvFabdsFv、dsFvFab’dsFv，·FabFvFv、Fab’FvFv、FabdsFvFv、Fab’dsFvFv、FabFvdsFv、Fab’FvdsFv、FabdsFvdsFv、Fab’dsFvdsFv，·diFab、diFab’包括化學綴合的diFab’，·(FabscFv)2、(Fab)2scFvdsFv、(Fab)2dsscFvdsFv、(FabdscFv)2，·(Fab’scFv)2、(Fab’)2scFvdsFv、(Fab’)2dsscFvdsFv、(Fab’dscFv)2，·VHHCK(參見Nunez-Prado等人，特別是其中的圖1里的第6號分子)；·微型抗體(minibody)、ds微型抗體、dids微型抗體，·微抗體(miniantibody)(ZIP)[參見Nunez-Prado等人，特別是其中的圖1里的第7號分子]、ds微抗體(ZIP)和dids微抗體(ZIP)；·tribi微型抗體[參見Nunez-Prado等人，特別是其中的圖1里的第15號分子]、dstribi微型抗體、didstribi微型抗體、tridstribi微型抗體；·雙抗體-CH3、ds雙抗體-CH3、dids雙抗體-CH3、sc雙抗體-CH3、dssc雙抗體-CH3、didssc雙抗體-CH3，·串聯scFv-CH3、串聯dsscFv-CH3、串聯didsscFv-CH3、串聯tridsscFv-CH3、串聯tetradsscFv-CH3，·scFv-Fc(本文中也稱為如WO2008/012543中所述的(scFvCH2CH3)2)及其單鏈形式、dsscFvscFv-Fc、dsscFv-Fc(本文中也稱為(dsscFvCH2CH3)2)、scFv-dsFv-Fc、dsscFv-dsFv-Fc、dsFv-Fc(本文中也稱為(dsFvCH2CH3)2)，·蝎型分子(Trubion)即結合結構域、接頭-CH2CH3結合結構域，如US8,409,577中所述；·SMIP(Trubion)即(scFv-CH2CH3)2；·(dsFvCH2CH3)2、串聯scFv-Fc、串聯dsscFvscFv-Fc、串聯dsscFv-Fc，·scFv-Fc-scFv、dsscFv-Fc-scFv、scFv-Fc-dsscFv，·雙抗體-Fc、ds雙抗體-Fc、dids雙抗體-Fc、三抗體-Fc、ds三抗體-Fc、dids三抗體-Fc、trids三抗體-Fc、四抗體-Fc、ds四抗體-Fc、dids四抗體-Fc、trids四抗體-Fc、tetrads四抗體-Fc、ds四抗體-Fc、dids四抗體-Fc、trids四抗體-Fc、tetrads四抗體-Fc、sc雙抗體-Fc、dssc雙抗體、didssc雙抗體；·雙功能或三功能抗體，例如具有不同重鏈可變區和共同的輕鏈例如Merus雙特異性抗體形式其具有固定序列的共同輕鏈和不同重鏈(包括不同CDR)和改造的CH3結構域以驅動不同重鏈的二聚化，·Duobody(即其中抗體中的一條全長鏈相對于抗體中另一條全長鏈具有不同的特異性)；·全長抗體，其中已經使用Fab臂交換來產生雙特異性形式；·雙功能或三功能抗體，其中全長抗體具有共同的重鏈和不同的輕鏈，也稱為κ/λ體，參見WO2012/023053；·從重鏈或輕鏈的C末端的一、二、三或四個Ig-scFv、從重鏈或輕鏈的N末端的一、二、三或四個scFv-Ig、單接頭Ig-Fv、從重鏈或輕鏈的C末端的一、二、三或四個Ig-dsscFv(具有一、二、三或四個二硫鍵)；·從重鏈或輕鏈的N末端的一、二、三或四個Ig-dsscFv(具有一、二、三或四個二硫鍵)，·Ig單接頭Fv(參見PCT/EP2015/064450)，·Ig-dab、dab-Ig、scFv-Ig、V-Ig、Ig-V，·scFabFvFc、scFabdsFvFc(單接頭形式的scFavFv)、(FabFvFc)2、(FabdsFvFc)2、scFab’FvFc、scFab’dsFvFc、(Fab’FvFc)2、(Fab’dsFvFc)2和·DVDIg，這些將在下面進行更詳細地討論。在一個實施方案中，多特異性分子形式包括本領域已知的那些和本文所述的那些，諸如其中分子形式選自包含以下或者由以下組成的組：雙抗體、sc雙抗體、三抗體、四抗體、串聯scFv、FabFv、Fab’Fv、FabdsFv、Fab-scFv、Fab-dsscFv、Fab-(dsscFv)2、diFab、diFab’、串聯scFv-Fc、scFv-Fc-scFv、sc雙抗體-Fc、sc雙抗體-CH3、Ig-scFv、scFv-Ig、V-Ig、Ig-V、Duobody和DVDIg，這些將在下面進行更詳細地討論。在一個實施方案中，本公開的多特異性抗體分子不包含Fc結構域，即不包含CH2和CH3結構域，例如分子選自：串聯scFv、scFv-dsFv、dsscFv-dsFvdidsFv、雙抗體、ds雙抗體、dids雙抗體、sc雙抗體(也稱為(scFv)2)、dssc雙抗體、三抗體、ds三抗體、dids三抗體、trids三抗體、四抗體、ds四抗體、dids四抗體、trids四抗體、tetrads四抗體、三體、ds三體、dids三體、Fabdab、FabFv、Fab’dab、Fab’Fv、Fab單接頭Fv(如WO2014/096390中所公開的)、Fab’單接頭Fv、FabdsFv、Fab’dsFv、Fab-scFv(也稱為雙靶向抗體)、Fab’scFv、FabdsscFv、Fab’dsscFv、FabdidsscFv、Fab’didsscFv、FabscFv單接頭Fv、Fab’scFv單接頭Fv、FabdsscFvs單接頭Fv、Fab’dsscFv單接頭Fv、FvFabFv、FvFab’Fv、dsFvFabFv、dsFvFab’Fv、FvFabdsFv、FvFab’dsFv、dsFvFabdsFv、dsFvFab’dsFv、FabFvFv、Fab’FvFv、FabdsFvFv、Fab’dsFvFv、FabFvdsFv、Fab’FvdsFv、FabdsFvdsFv、Fab’dsFvdsFv、diFab、diFab’，包括化學綴合的diFab’、(FabscFv)2、(Fab)2scFvdsFv、(Fab)2dsscFvdsFv、(FabdscFv)2、微型抗體、ds微型抗體、dids微型抗體、雙抗體-CH3、ds雙抗體-CH3、dids雙抗體-CH3、sc雙抗體-CH3、dssc雙抗體-CH3、didssc雙抗體-CH3、串聯scFv-CH3、串聯dsscFv-CH3、串聯didsscFv-CH3、串聯tridsscFv-CH3和串聯tetradsscFv-CH3。在一個實施方案中，本公開的分子不包含Fc結構域。在一個實施方案中，本公開的分子包含如下文所述的改變的Fc結構域。除非上下文明確指明，否則本文中所使用的Fc結構域一般是指–(CH2CH3)2。在一個實施方案中，本公開的分子不包含-CH2CH3片段。在一個實施方案中，本公開的分子不包含CH2結構域。在一個實施方案中，本公開的分子不包含CH3結構域。如本文以生物化學意義使用的分子，是指形成有機、特別是蛋白質物質的一組原子，其包括適合在合適的條件下一旦形成復合物就作為單一實體處理的復合物，例如由兩條或多條多肽鏈形成的復合物。除非上下文另有說明，否則分子和構建體在本文中可互換使用。雖然，構建體可以更經常地用于指多核苷酸分子，而分子可以更經常地用于指主要包含氨基酸序列的實體。本文使用的特異性(或特異性的)是指其中相互作用中的伴侶僅相互識別或相對于非伴侶彼此具有顯著更高的親和力，例如是例如背景結合水平或結合另一種無關蛋白的親和力的至少2、3、4、5、6、7、8、9、10倍。本文使用的“結合結構域”是指能夠結合靶抗原的結合區，通常是多肽，例如具有足夠的親和力以表征對抗原特異的結構域。任何合適的結合結構域可以用于本發明的多特異性分子中。這些可以源自任何合適的來源。在一個實施方案中，生物相容性框架結構用于本公開的分子的結合結構域中，并且這樣的結構基于除免疫球蛋白結構域之外的蛋白質支架或骨架。例如，可以使用基于纖連蛋白、錨蛋白、脂質運載蛋白、新制癌菌素(neocarzinostain)、細胞色素b、CP1鋅指、PST1、卷曲螺旋、LACI-D1、Z結構域和tendramisat的那些(參見例如Nygren和Uhlen,1997,CurrentOpinioninStructuralBiology,7,463-469)。本文使用的術語“多特異性分子”還可以包括基于生物支架的結合劑，包括Adnectins、Affibodies、Darpins、Phylomers、Avimers、適體、Anticalins、Tetranectins、微體、Affilins和Kunitz結構域。本發明的多特異性分子通常是多特異性抗體分子，即所述多特異性分子的至少一個或多個結合結構域衍生自抗體或其片段。當結合結構域衍生自抗體時，本文所用的“結合結構域或位點”是與抗原接觸的抗體部分。在一個實施方案中，結合結構域含有至少一個可變結構域或其衍生物，例如可變結構域對或其衍生物，諸如可變結構域的同源對或其衍生物。通常這是VH/VL對。可變區(本文中也稱為可變結構域)通常包含3個CDR和合適的框架。在一個實施方案中，結合結構域包含兩個可變區，一個輕鏈可變區和一個重鏈可變區，并且這些元件一起有助于抗體或結合片段的結合相互作用的特異性。本文使用的“同源對”是指作為預先形成的對的從宿主分離的可變結構域的重鏈和輕鏈對(或其衍生物，諸如其人源化形式)。該定義不包括從文庫中分離的可變結構域，其中不保留來自宿主的原始配對。同源對可能是有利的，因為它們通常在宿主中親和成熟，并且因此可以比選自文庫諸如噬菌體文庫的可變結構域對的組合對它們特異性針對的抗原具有更高的親和力。本文所用的“天然存在結構域的衍生物”意指其中天然存在序列中的一個、兩個、三個、四個或五個氨基酸已經被替換或缺失，例如以優化結構域的性質，諸如通過消除不期望的性質但是其中保留了結構域的表征特征。修飾的實例是去除糖基化位點、GPI錨或溶劑暴露的賴氨酸的那些。這些修飾可以通過用保守氨基酸取代替換相關的氨基酸殘基來實現。CDR中的修飾可以例如包括用例如絲氨酸殘基取代一個或多個半胱氨酸。Asn可以是用于脫氨的基質，并且可以通過用替代氨基酸(諸如保守取代)替換Asn和/或相鄰氨基酸來降低這種傾向。CDR中的氨基酸Asp可以進行異構化。可以通過用替代氨基酸(例如保守取代)替換Asp或相鄰氨基酸來最小化后者。在本說明書的上下文中，可變區的人源化形式也是其衍生物。人源化可包括非人構架替換為人框架和任選地一個或多個殘基的回復突變為“供體殘基”。本文使用的供體殘基是指在從宿主分離的原始可變區中發現的殘基，特別是用供體框架中相應位置中的氨基酸替換人框架中的給定氨基酸。在一個實施方案中，結合結構域或每個結合結構域是抗體或抗體片段的一部分(被包括或摻入于抗體或抗體片段中)。在一個實施方案中，本公開的分子中的結合結構域在免疫球蛋白/抗體分子中。本文所用的“抗體分子”包括抗體及其結合片段。在一個實施方案中，本文所用的術語“抗體”是指能夠通過位于免疫球蛋白分子的可變區中的至少一個抗原識別位點(本文中也稱為結合位點或結合結構域)特異性結合靶抗原(諸如碳水化合物、多核苷酸、脂質、多肽、肽等)的免疫球蛋白分子。本文使用的“抗體片段”是指抗體結合片段，包括但不限于Fab、修飾的Fab、Fab'、修飾的Fab'、F(ab')2、Fv、單結構域抗體、scFv、Fv、二價、三價或四價抗體、Bis-scFv、雙抗體、三抗體、四抗體和上述任何的表位結合片段(參見例如Holliger和Hudson,2005,NatureBiotech.23(9):1126-1136；Adair和Lawson,2005,DrugDesignReviews-Online2(3),209-217)。本文所用的“結合片段”是指能夠以足夠親和力結合靶肽或抗原以表征對肽或抗原具有特異性的片段的片段。用于產生和制造這些抗體片段的方法是本領域熟知的(參見例如Verma等人,1998,JournalofImmunologicalMethods,216:165-181)。用于本公開的其它抗體片段包括WO05/003169、WO05/003170和WO05/003171中所述的Fab和Fab’片段。多價抗體可以包含多種特異性，例如雙特異性或可以是單特異性的(參見例如WO92/22853、WO05/113605、WO2009/040562和WO2010/035012)。本文所用的術語“Fab片段”是指包含輕鏈的VL(輕鏈可變)結構域和恒定結構域(CL)的輕鏈片段和重鏈的VH(重鏈可變)結構域和第一恒定結構域(CH1)的抗體片段。Fv是指兩個可變結構域，例如協作的可變結構域，諸如同源對或親和成熟的可變結構域，即VH和VL對。本文所使用的協作的可變結構域是彼此互補和/或兩者有助于抗原結合以使得Fv(VH/VL對)特異性針對所述抗原的可變結構域。本文所用的“單結構域抗體”(本文中也稱為dab和sdAb)是指由單個單體可變抗體結構域組成的抗體片段。單結構域抗體的實例包括VH或VL或VHH。本文所用的串聯sdAb是指通過接頭(例如肽接頭)連接的兩個結構域抗體，特別是其中結構域抗體對不同抗原具有特異性。本文所用的串聯sdAb-sdAb是指通過兩個接頭(例如肽接頭)串聯連接的三個結構域抗體，特別是其中結構域抗體對不同抗原具有特異性。本文所用的dsFv是指具有可變區內二硫鍵的Fv。dsFv可以是較大分子的成分，例如可變結構域之一可以例如通過氨基酸接頭連接到另一抗體片段/成分。本文所用的(dsFv)2是指具有一個結構域的dsFv，例如通過肽接頭或二硫鍵(例如，兩個VH的C末端之間)與第二dsFv中的結構域連接，形式類似于下述的(scFv)2，但每對可變區包含可變區內二硫鍵。本文所用的成分是指本公開的多特異性分子的構建單元或部分，特別是其中該成分是抗體片段，諸如scFv、Fab或其他片段，特別是如本文所述的。本文所用的單鏈Fv或縮寫為“scFv”是指包含被連接(例如通過肽接頭)以形成單個多肽鏈的VH和VL抗體結構域的抗體片段。在該形式中省略了重鏈和輕鏈的恒定區。本文所用的dsscFv是指具有可變區內二硫鍵的scFv。本文所用的串聯scFv(本文中也稱為discFv或(scFv)2)是指經由單接頭連接的兩個scFv，使得存在單個Fv間接頭，例如圖9b所示。本文所用的串聯dsscFv(本文中也稱為scFvdsscFv或dsscFvscFv)是指經由單接頭連接的兩個scFv，使得存在單個Fv間接頭，例如圖9b所示，并且其中scFv之一具有可變區內二硫鍵。本文所用的串聯didsscFv(本文中也稱為didsscFv)是指通過單接頭連接的兩個scFv，使得存在單個Fv間接頭，例如圖9b所示，并且其中每個scFv包含可變區內二硫鍵。本文所用的scFv-dsFv是例如通過肽接頭連接到Fv結構域的scFv，所述Fv結構域由通過二硫鍵連接以形成dsFv的兩個可變結構域組成。在該形式中，scFv的VH或VL可以連接到dsFv的VH或VL。本文所用的dsscFv-dsFv是例如通過肽接頭連接到Fv結構域的dsscFv，所述Fv結構域由通過二硫鍵連接以形成dsFv的兩個可變結構域組成。在該形式中，dsscFv的VH或VL可以連接到dsFv的VH或VL。本文所用的雙抗體指具有兩個Fv間接頭的兩個Fv對VH/VL，使得第一Fv的VH連接到第二Fv的VL，并且第一Fv的VL連接到第二Fv的VH。本文所用的ds雙抗體是指包含可變區內二硫鍵的雙抗體。本文所用的dids雙抗體是指包含兩個可變區內二硫鍵的雙抗體，即每對可變區之間的一個ds。本文所用的sc雙抗體是指包含Fv內接頭的雙抗體，使得所述分子包含三個接頭并形成兩個正常scFv，例如VH1接頭VL1接頭VH2接頭VL2。本文所用的dssc雙抗體是指具有可變區內二硫鍵的sc雙抗體。本文所用的didssc雙抗體是指在每對可變區之間具有可變區內二硫鍵的sc雙抗體。本文所用的Dart是指VL1接頭VH2接頭和VH1接頭VL2，其中VH1和VH2的C末端通過二硫鍵連接，PaulA.Moore等人，Blood,2011；117(17):4542-4551。本文所用的是指包含以下形式的兩對可變結構域的分子：來自對1的結構域(例如VH1)經由接頭連接至來自對2的結構域(例如VH2或VL2)，所述第二結構域經由接頭連接至來自對1的其它結構域(例如VL1)進而連接至來自對2的剩余結構域(即VL2或VH2)。di雙抗體，參見Nunez-Prado等人，特別是其中的圖1里的第25號分子。本文所用的dsdi雙抗體是具有可變區內二硫鍵的di雙抗體。本文所用的didsdi雙抗體是在每對可變區之間具有可變區內二硫鍵的di雙抗體。本文所用的三抗體是指與雙抗體類似包含三個Fv和三個Fv間接頭的形式。本文所用的ds三抗體是指在可變結構域對中之一之間包含可變區內二硫鍵的三抗體。本文所用的dids三抗體是指包含兩個變區內二硫鍵的三抗體，即在兩個可變結構域對中的每一個之間一個ds。本文所用的trids三抗體是指包含三個變區內二硫鍵的三抗體，即在每對可變區之間一個ds。本文所用的四抗體是指與雙抗體類似包含四個Fv和四個Fv間接頭的形式。本文所用的ds四抗體是指在可變結構域對中之一之間包含可變區內二硫鍵的四抗體。本文所用的dids四抗體是指包含兩個變區內二硫鍵的四抗體，即在兩個可變結構域對的每一個之間一個ds。本文所用的trids四抗體是指包含三個變區內二硫鍵的四抗體，即在三對可變區的每一對之間一個ds。本文所用的tetrads四抗體是指包含四個變區內二硫鍵的四抗體，即在每個可變結構域之間一個ds。本文所用的三體(也稱為Fab(scFv)2)是指具有附加到輕鏈的C端的第一scFv和附加到重鏈的C端的第二scFv的Fab片段。本文所用的ds三體是指在兩個位置中之一包含dsscFv的三體。本文所用的dids三體或TrYbe是指包含兩個dsscFv的三體。本文所用的dsFab是指具有可變區內二硫鍵的Fab。本文所用的dsFab’是指具有可變區內二硫鍵的Fab’。scFab是單鏈Fab片段。scFab’是單鏈Fab’片段。dsscFab是為單鏈的dsFab。dsscFab’是為單鏈的dsFab’。本文所用的Fabdab是指具有任選地經由接頭附加至其重鏈或輕鏈的結構域抗體的Fab片段。本文所用的Fab’dab是指具有任選地經由接頭附加至其重鏈或輕鏈的結構域抗體的Fab’片段。本文所用的FabFv是指具有附加至以下中每一個的C末端的另外的可變區的Fab片段：重鏈的CH1和輕鏈的CL，參見例如WO2009/040562。該形式可以提供為其聚乙二醇化的形式，參見例如WO2011/061492。本文所用的Fab’Fv與FabFv類似，其中Fab部分被Fab’替換。該形式可以提供為其聚乙二醇化的形式。本文所用的FabdsFv是指FabFv，其中Fv內二硫鍵穩定化所附加的C末端可變區，參見例如WO2010/035012。該形式可以提供為其聚乙二醇化的形式。本文所用的Fab單接頭Fv和Fab’單接頭是指連接至可變結構域的Fab或Fab’(例如通過肽接頭)，并且所述可變結構域經由可變結構域內二硫鍵連接至第二可變區從而形成dsFv，參見例如WO2014/096390。本文所用的Fab-scFv(也稱為雙靶向抗體)是具有任選地經由接頭附加至輕鏈或重鏈的C末端上的scFv的Fab分子。本文所用的Fab’-scFv是具有任選地經由接頭附加至輕鏈或重鏈的C末端上的scFv的Fab’分子。本文所用的FabdsscFv或BYbe是在單鏈Fv的可變區之間具有二硫鍵的Fab-scFv。本文所用的Fab’dsscFv是在單鏈Fv的可變區之間具有二硫鍵的Fab’scFv。本文所用的FabscFv-dab是指具有附加至一條鏈的C末端的scFv和附加至另一條鏈的C末端的結構域抗體的Fab。本文所用的Fab’scFv-dab是指具有附加至一條鏈的C末端的scFv和附加至另一條鏈的C末端的結構域抗體的Fab’。本文所用的FabdsscFv-dab是指具有附加至一條鏈的C末端的dsscFv和附加至另一條鏈的C末端的結構域抗體的Fab。本文所用的Fab’dsscFv-dab是指具有附加至一條鏈的C末端的dsscFv和附加至另一條鏈的C末端的結構域抗體的Fab’。本文所用的FabscFv單接頭Fv是指一種Fab單接頭Fv，其中Fv的結構域連接至Fab的重鏈或輕鏈并且scFv連接至其它Fab鏈并且Fv的結構域通過可變區內二硫鍵連接。本文所用的FabdsscFv單接頭Fv是指一種FabscFv單接頭Fv，其中scFv包含可變區內二硫鍵連接。本文所用的Fab’scFv單接頭Fv是指一種Fab’單接頭Fv，其中Fv的結構域連接至Fab的重鏈或輕鏈并且scFv連接至其它Fab鏈并且Fv的結構域通過可變區內二硫鍵連接。本文所用的Fab’dsscFv單接頭Fv是指一種Fab’scFv單接頭Fv，其中scFv包含可變區內二硫鍵連接。本文所用的FvFabFv是指具有附加至Fab的重鏈和輕鏈的N末端的第一Fv的結構域和附加至重鏈和輕鏈的C末端的第二Fv的結構域的Fab。本文所用的FvFab’Fv是指具有附加至Fab’的重鏈和輕鏈的N末端的第一Fv的結構域和附加至重鏈和輕鏈的C末端的第二Fv的結構域的Fab’。本文所用的dsFvFabFv是指具有附加至Fab的重鏈和輕鏈的N末端的第一Fv的結構域和附加至重鏈和輕鏈的C末端的第二Fv的結構域的Fab，其中第一Fv包含可變區內二硫鍵。本文所用的FvFabdsFv是指具有附加至Fab的重鏈和輕鏈的N末端的第一Fv的結構域和附加至重鏈和輕鏈的C末端的第二Fv的結構域的Fab，其中第二Fv包含可變區內二硫鍵。本文所用的dsFvFab’Fv是指具有附加至Fab’的重鏈和輕鏈的N末端的第一Fv的結構域和附加至重鏈和輕鏈的C末端的第二Fv的結構域的Fab’，其中第一Fv包含可變區內二硫鍵。本文所用的FvFab’dsFv是指具有附加至Fab’的重鏈和輕鏈的N末端的第一Fv的結構域和附加至重鏈和輕鏈的C末端的第二Fv的結構域的Fab’，其中第二Fv包含可變區內二硫鍵。本文所用的dsFvFabdsFv是指具有附加至Fab的重鏈和輕鏈的N末端的第一Fv的結構域和附加至重鏈和輕鏈的C末端的第二Fv的結構域的Fab，其中第一Fv包含可變區內二硫鍵，其中第二Fv也包含可變區內二硫鍵。本文所用的dsFvFab’dsFv是指具有附加至Fab’的重鏈和輕鏈的N末端的第一Fv的結構域和附加至重鏈和輕鏈的C末端的第二Fv的結構域的Fab’，其中第一Fv包含可變區內二硫鍵，其中第二Fv也包含可變區內二硫鍵。本文所用的FabFvFv是指具有串聯附加至重鏈和輕鏈的C末端的兩對Fv的Fab片段，參見例如WO2011/086091。本文所用的Fab’FvFv是指具有串聯附加至重鏈和輕鏈的C末端的兩對Fv的Fab’片段，參見例如WO2011/086091。本文所用的FabdsFvFv是指具有串聯附加至重鏈和輕鏈的C末端的兩對Fv的Fab片段，參見例如WO2011/086091，其中直接附接至C末端的第一Fv對包含可變區內二硫鍵。本文所用的Fab’dsFvFv是指具有串聯附加至重鏈和輕鏈的C末端的兩對Fv的Fab’片段，參見例如WO2011/086091，其中直接附接至C末端的第一Fv對包含可變區內二硫鍵。本文所用的FabFvdsFv是指具有串聯附加至重鏈和輕鏈的C末端的兩對Fv的Fab片段，其中分子“C”末端的第二Fv對包含可變區內二硫鍵。本文所用的Fab’FvdsFv是指具有串聯附加至重鏈和輕鏈的C末端的兩對Fv的Fab’片段，其中分子“C”末端的第二Fv對包含可變區內二硫鍵。本文所用的FabdsFvdsFv是指具有串聯附加至重鏈和輕鏈的C末端的兩對Fv的Fab片段，其中第一和第二Fv對包含可變區內二硫鍵。本文所用的Fab’dsFvdsFv是指具有串聯附加至重鏈和輕鏈的C末端的兩對Fv的Fab’片段，其中第一和第二Fv對包含可變區內二硫鍵。本文所用的diFab是指經由它們的重鏈C末端連接的兩個Fab分子。本文所用的diFab’是指經由其鉸鏈區的一個或多個二硫鍵連接的兩個Fab’分子。diFab和diFab’分子包括其化學綴合形式。本文所用的(FabscFv)2是指具有附加至其的兩個scFv的diFab分子，例如附加至重鏈或輕鏈(諸如重鏈)的C末端。本文所用的(Fab’scFv)2是指具有附加至其的兩個scFv的diFab’分子，例如附加至重鏈或輕鏈(諸如重鏈)的C末端。本文所用的(Fab)2scFvdsFv是指具有附加的scFv和dsFv的diFab，例如來自重鏈C末端中每一個的一個的。本文所用的(Fab’)2scFvdsFv是指具有附加的scFv和dsFv的diFab’，例如來自重鏈C末端中每一個的一個的。本文所用的(Fab)2dsscFvdsFv是指具有附加的dsscFv和dsFv的diFab，例如來自重鏈C末端的。本文所用的(Fab’)2dsscFvdsFv是指具有附加的dsscFv和dsFv的diFab’，例如來自重鏈C末端的。本文所用的微型抗體是指(VL/VH-CH3)2。本文所用的ds微型抗體是指(VL/VH-CH3)2，其中一個VL/VH包含可變區內二硫鍵。本文所用的dids微型抗體是指(dsFv-CH3)2。κ/λ體是具有兩條重鏈和兩條輕鏈的正常IgG形式，其中兩條輕鏈彼此不同，一條是λ輕鏈(VL-CL)而另一條是κ輕鏈(VK-CK)。如WO2012/023053中所述，重鏈(即使在CDR)是相同的。本文所用的scFv-Fc是指例如經由鉸鏈附加至恒定區片段–(CH2CH3)的CH2結構域的N末端的scFv，使得該分子具有2個結合結構域。本文所用的dsscFv-Fc是指例如經由鉸鏈附加至恒定區片段–(CH2CH3)2的CH2結構域的N末端的dsscFv和附加至恒定區片段–(CH2CH3)2的第二CH2結構域的N末端的scFv，使得該分子具有2個結合結構域。本文所用的didsscFv-Fc是指例如經由鉸鏈附加至恒定區片段–(CH2CH3)2的CH2結構域的N末端的scFv，使得該分子具有2個結合結構域。本文所用的串聯scFv-Fc是指兩個串聯的scFv，其中每一個例如經由鉸鏈串聯附加至恒定區片段–(CH2CH3)的CH2結構域的N末端，使得該分子具有4個結合結構域。本文所用的sc雙抗體-Fc是兩個sc雙抗體，其中每一個例如經由鉸鏈串聯附加至恒定區片段–CH2CH3的CH2結構域的N末端。本文所用的scFv-Fc-scFv是指四個scFv，其中每個之一附加至CH2CH3片段的重鏈和輕鏈二者的N末端和C末端。本文所用的sc雙抗體-CH3是指各自例如經由鉸鏈連接至CH3結構域的兩個sc雙抗體分子。本文所用的IgG-scFv是在重鏈中每一條或輕鏈中每一條的C末端上具有scFv的全長抗體。本文所用的scFv-IgG是在重鏈中每一條或輕鏈中每一條的N末端上具有scFv的全長抗體。本文所用的V-IgG是在重鏈中每一條或輕鏈中每一條的N末端上具有可變結構域的全長抗體。本文所用的IgG-V是在重鏈中每一條或輕鏈中每一條的C末端上具有可變結構域的全長抗體。DVD-Ig(也稱為雙V結構域IgG)是具有4個另外的可變結構域的全長抗體，每個可變結構域在每條重鏈和每條輕鏈的N末端上。本文所用的Duobody或‘Fab臂交換’是雙特異性IgG形式抗體，其中在混合后兩種不同單克隆抗體的恒定結構域(通常為CH3)中的匹配的和互補的經改造的氨基酸改變導致異二聚體的形成。作為殘基改造的結果，來自第一抗體的重鏈:輕鏈對將優選與第二抗體的重鏈:輕鏈對締合。參見例如WO2008/119353、WO2011/131746和WO2013/060867。當多特異性抗體分子中的一對或多對可變區包含VH和VL之間的二硫鍵時，其可以在任何合適的位置，諸如在下面列出的兩個殘基之間(除非上下文另有說明，在下面列表中使用Kabat編號)。無論在任何提到Kabat編號的情況下，相關參考文獻是Kabat等人,1987,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,USDepartmentofHealthandHumanServices,NIH,USA。在一個實施方案中，二硫鍵在選自以下的位置：·VH37+VL95C，參見例如ProteinScience6,781-788Zhu等人(1997)；·VH44+VL100，參見例如Biochemistry335451-5459Reiter等人(1994)；或者JournalofBiologicalChemistryVol.269No.28pp.18327-18331Reiter等人(1994)；或者ProteinEngineering,vol.10no.12pp.1453-1459Rajagopal等人(1997)；·VH44+VL105，參見例如JBiochem.118,825-831Luo等人(1995)；·VH45+VL87，參見例如ProteinScience6,781-788Zhu等人(1997)；·VH55+VL101，參見例如FEBSLetters377135-139Young等人(1995)；·VH100+VL50，參見例如Biochemistry291362-1367Glockshuber等人(1990)；·VH100b+VL49；·VH98+VL46，參見例如ProteinScience6,781-788Zhu等人(1997)；·VH101+VL46；·VH105+VL43，參見例如Proc.Natl.Acad.Sci.USAVol.90pp.7538-7542Brinkmann等人(1993)；或者Proteins19,35-47Jung等人(1994)，·VH106+VL57，參見例如FEBSLetters377135-139Young等人(1995)以及對應于其在分子中位于可變區對中的位置。在一個實施方案中，二硫鍵在位置VH44和VL100之間形成。本文所用的“單特異性”是指僅結合靶抗原一次的能力。因此，在一個實施方案中，本發明的多特異性分子對于每種抗原是單特異性的。因此，在一個實施方案中，根據本公開的多特異性分子的結合結構域是單特異性的。這在一些治療應用中是有利的，因為本公開的分子不能通過結合靶抗原多于一次來交聯抗原。因此，在一個實施方案中，本公開的雙特異性或多特異性分子不能通過在兩個不同位置、例如在相同細胞或兩個不同細胞上結合相同靶標兩次而交聯。交聯、特別是與相同細胞或不同細胞上的CD79b相關的交聯，可以在體內產生信號，例如其刺激靶抗原的活性。在一個實例中，本發明的多特異性分子含有不超過一個CD22的結合結構域和不超過一個CD79的結合結構域。每個結合結構域是單特異性的。因此，在一個實施例中，多特異性分子對于CD22是單價的并且對于CD79是單價的。在一個實施方案中，本公開的多特異性分子中采用的每個抗體或抗體片段是單價的。因此，在一個實施方案中，本公開的多特異性分子的結合結構域是單價的。因此，在一個實施方案中，本公開的多特異性分子的結合結構域是單價和單特異性的。在一個實施方案中，本公開的多特異性分子由兩個或更多個單特異性單價結合結構域組成，諸如Fab、Fab'、scFv、VH、VL、VHH、Fv、dsFv，以任何合適的方式組合或連接以構建多特異性分子，例如如本文上述。在另一個實施方案中，例如其中本公開的分子包含至少三個結合結構域，則兩個或三個結合結構域(例如抗體、片段或抗體和片段的組合)可以具有不同的抗原特異性，例如結合三種不同的靶抗原。恒定區如果存在本發明的多特異性分子的抗體恒定區結構域，則可考慮所提出的多特異性抗體分子的功能，并且特別是可能需要的效應子功能來選擇本發明的多特異性分子的抗體恒定區結構域。例如，恒定區結構域可以是人IgA、IgD、IgE、IgG或IgM的結構域。特別地，當抗體分子意欲用于治療用途并且需要抗體效應子功能時，可以使用人IgG恒定區結構域，特別是IgG1和IgG3同種型的恒定區結構域。或者，當抗體分子意欲用于治療目的并且不需要抗體效應子功能時，可使用IgG2和IgG4同種型。應當理解，也可以使用這些恒定區結構域的序列變體。例如，可使用如Angal等人，1993,MolecularImmunology,1993,30:105-108中所述的其中241位的絲氨酸已經改變為脯氨酸的IgG4分子。因此，在其中抗體是IgG4抗體的實施方案中，抗體可包括突變S241P。在一個實施方案中，抗體重鏈包含CH1結構域，抗體輕鏈包含κ或λ的CL結構域。在一個實施方案中，抗體重鏈包含CH1結構域、CH2結構域和CH3結構域，并且抗體輕鏈包含κ或λ的CL結構域。四種人IgG同種型以不同的親和力結合激活的Fcγ受體(FcγRI，FcγRIIa，FcγRIIIa)，抑制性FcγRIIb受體和補體的第一成分(C1q)，產生非常不同的效應子功能(BruhnsP.等人,2009.SpecificityandaffinityofhumanFcgammareceptorsandtheirpolymorphicvariantsforhumanIgGsubclasses.Blood.113(16):3716-25)，還參見JeffreyB.Stavenhagen,等人，CancerResearch2007Sep15；67(18):8882-90。IgG與FcγR或C1q的結合取決于位于鉸鏈區和CH2結構域中的殘基。CH2結構域的兩個區域對于FcγR和C1q結合是關鍵的，并且在IgG2和IgG4中具有獨特的序列。已經顯示，在位置233-236處的IgG2殘基和在位置327、330和331處的IgG4殘基對人IgG1的取代大大降低了ADCC和CDC(ArmourKL.等人,1999.RecombinanthumanIgGmoleculeslackingFcgammareceptorIbindingandmonocytetriggeringactivities.EurJImmunol.29(8):2613-24和ShieldsRL.等人,2001.HighresolutionmappingofthebindingsiteonhumanIgG1forFcgammaRI,FcgammaRII,FcgammaRIII,andFcRnanddesignofIgG1variantswithimprovedbindingtotheFcgammaR.JBiolChem.276(9):6591-604)。此外，Idusogie等人證明在不同位置(包括K322)的丙氨酸取代顯著降低補體激活(IdusogieEE.等人,2000.MappingoftheC1qbindingsiteonrituxan,achimericantibodywithahumanIgG1Fc.JImmunol.164(8):4178-84)。類似地，鼠IgG2A的CH2結構域中的突變顯示降低與FcγRI和C1q的結合(SteurerW.等人,1995.ExvivocoatingofisletcellallograftswithmurineCTLA4/Fcpromotesgrafttolerance.JImmunol.155(3):1165-74)。在一個實施方案中，所采用的Fc區是突變的，特別是本文所述的突變。在一個實施方案中，突變是去除結合和/或效應子功能。在一個實施方案中，Fc突變選自：去除Fc區結合的突變，增加或去除效應子功能的突變，增加半衰期的突變及其組合。在pH6.0、但不是pH7.4選擇性結合FcRn的一些抗體在各種動物模型中表現出較高的半衰期。位于CH2和CH3結構域之間的界面的幾個突變，諸如T250Q/M428L(HintonPR.等人,2004.EngineeredhumanIgGantibodieswithlongerserumhalf-livesinprimates.JBiolChem.279(8):6213-6)和M252Y/S254T/T256E+H433K/N434F(VaccaroC.等人,2005.EngineeringtheFcregionofimmunoglobulinGtomodulateinvivoantibodylevels.NatBiotechnol.23(10):1283-8)，已經顯示在體內增加對FcRn的結合親和力和IgG1的半衰期。然而，在增加的FcRn結合和改善的半衰期之間并不總是有直接的關系(Datta-MannanA.等人,2007.HumanizedIgG1VariantswithDifferentialBindingPropertiestotheNeonatalFcReceptor:RelationshiptoPharmacokineticsinMiceandPrimates.DrugMetab.Dispos.35:86–94)。IgG4亞類顯示降低的Fc受體(FcγRIIIa)結合，其他IgG亞類的抗體通常顯示強結合。這些其它IgG亞型中降低的受體結合可以通過改變而實現，例如替換選自Pro238、Asp265、Asp270、Asn270(Fc碳水化合物缺失)、Pro329、Leu234、Leu235、Gly236、Gly237、Ile253、Ser254、Lys288、Thr307、Gln311、Asn434和His435的一個或多個氨基酸。在一個實施方案中，根據本公開的分子具有IgG亞類(例如IgG1、IgG2或IgG3)的Fc，其中Fc在一個、兩個或所有以下位置S228、L234和/或D265中突變。在一個實施方案中，Fc區中的突變獨立選自S228P、L234A、L235A、L235A、L235E及其組合。可能需要減少或增加Fc區的效應子功能。需要靶向細胞表面分子、特別是免疫細胞上的那些并消除效應子功能的抗體。在一些實施方案中，例如為了治療自身免疫，通過增加陰性Fc受體(FcgRIIb或CD32b)結合增強免疫細胞上的Fc結合可能是需要的，參見StavenhagenJB,等人，AdvancesinEnzymeRegulation2007December3和VeriMC等人，ArthritisRheum,2010Mar30；62(7):1933-43。相反，對于預期用于腫瘤學使用的抗體，增加效應子功能可以改善治療活性。已經在人IgG1的CH2結構域中產生了許多突變，并且在體外測試了它們對ADCC和CDC的影響(IdusogieEE.等人,2001.Engineeredantibodieswithincreasedactivitytorecruitcomplement.JImmunol.166(4):2571-5)。值得注意的是，據報道在位置333處的丙氨酸取代增加ADCC和CDC二者。Lazar等人描述了對FcγRIIIa具有更高親和力和對FcγRIIb具有更低親和力從而導致增強的ADCC的三重突變體(S239D/I332E/A330L)(LazarGA.等人,2006.EngineeredantibodyFcvariantswithenhancedeffectorfunction.PNAS103(11):4005–4010)。使用相同的突變產生具有增加的ADCC的抗體(RyanMC.等人,2007.AntibodytargetingofB-cellmaturationantigenonmalignantplasmacells.Mol.CancerTher.,6:3009–3018)。Richards等人研究了具有改善的FcγRIIIa親和力和介導巨噬細胞增強的靶細胞吞噬作用的FcγRIIa/FcγRIIb比率的略微不同的三重突變體(S239D/I332E/G236A)(RichardsJO等人，2008.OptimizationofantibodybindingtoFcgammaRIIaenhancesmacrophagephagocytosisoftumorcells.MolCancerTher.7(8):2517-27)。由于缺乏效應子功能，IgG4抗體代表合適的用于受體阻斷而沒有細胞耗盡的IgG亞類。IgG4分子可在稱為Fab臂交換的動態過程中交換半分子。這種現象可以在治療性抗體和內源性IgG4之間發生。已經顯示S228P突變防止這種重組過程，允許設計不太不可預測的治療性IgG4抗體(LabrijnAF等人，2009.TherapeuticIgG4antibodiesengageinFab-armexchangewithendogenoushumanIgG4invivo.NatBiotechnol.27(8):767-71)。該技術可用于產生雙特異性抗體分子。本領域技術人員還將理解，抗體可經歷各種翻譯后修飾。這些修飾的類型和程度常常取決于用于表達抗體的宿主細胞系以及培養條件。此類修飾可以包括糖基化、甲硫氨酸氧化、二酮哌嗪形成、天冬氨酸異構化和天冬酰胺脫酰胺中的變化。頻繁的修飾是由于羧肽酶的作用(如Harris,RJ.JournalofChromatography705:129-134,1995中所述的)而導致的羧基末端堿性殘基(諸如賴氨酸或精氨酸)的丟失。因此，抗體重鏈的C末端賴氨酸可以不存在。親和力本發明的多特異性分子包含特異性針對抗原CD22的結合結構域和特異性針對抗原CD79a和/或CD79b的結合結構域。在一個實施方案中，本公開的分子中使用的結合結構域特異性針對CD22。在一個實施方案中，本公開的分子中使用的結合結構域特異性針對CD79a。在一個實施方案中，本公開的分子中使用的結合結構域特異性針對CD79b。在一個實施方案中，本公開的分子中使用的結合結構域特異性針對CD79復合物，即其識別存在于復合物中且對其具有特異性的表位，例如包含CD79a和CD79b之間相互作用的表位。CD22(也稱為分化群-22)是已知的蛋白質。CD22是B細胞受體(BCR)的抑制性共受體，并且在建立B細胞激活的信號傳導閾值中起關鍵作用。人序列可在UniProt條目號P20273(SEQIDNO：161和沒有信號肽的SEQIDNO：161的氨基酸20-847)中獲得。鼠形式可在UniProt條目號P35329中獲得。本公開涉及來自任何物種、特別是人和其天然變體的所有形式的CD22。在一個實施方案中，CD22指該蛋白質的人形式。在一個實施方案中，本公開的分子中結合結構域對CD22的親和力為約100nM或更強，諸如約50nM、20nM、10nM、1nM、500pM、250pM、200pM、100pM或更強、特別是50pM或更強的結合親和力。CD79的結合結構域可以結合CD79a和/或CD79b。CD79a(也稱為免疫球蛋白α和B細胞抗原受體復合物相關蛋白α鏈)是已知的蛋白質。CD79a的表達限于B淋巴細胞。人序列在UniProt條目號P11912(SEQIDNO：162和沒有信號序列的SEQIDNO：162的氨基酸33-226)下可獲得。鼠形式在UniProt條目號11911下可獲得。本公開涉及來自任何物種、特別是人和其任何天然變體的所有形式的CD79a。在一個實施方案中，CD79a指該蛋白質的人形式。CD79b(也稱為免疫球蛋白相關β和分化群79B)是已知的蛋白質。CD79b的表達限于B淋巴細胞。人序列在UniProt條目號P40259(SEQIDNO：163和沒有信號序列的SEQIDNO：163的氨基酸29-229)下可獲得。鼠形式在UniProt條目號P15530下可獲得。本公開涉及來自任何物種、特別是人和其任何天然變體的所有形式的CD79b。在一個實施方案中，CD79b指該蛋白質的人形式。在一個實施方案中，特異性針對CD79的結合結構域結合CD79a。在一個實施方案中，特異性針對CD79的結合結構域結合CD79b。在一個實施方案中，特異性針對CD79的結合結構域結合CD79a和CD79b的復合物。在一個實施方案中，本公開的分子中結合結構域對CD79的親和力為約100nM或更強，諸如約50nM、20nM、10nM、1nM、500pM、250pM、200pM、100pM或更強、特別是50pM或更強的結合親和力。在一個實施方案中，本公開的分子中結合結構域對CD79a的親和力為約100nM或更強，諸如約50nM、20nM、10nM、1nM、500pM、250pM、200pM、100pM或更強、特別是50pM或更強的結合親和力。在一個實施方案中，本公開的分子中結合結構域對CD79b的親和力為約100nM或更強，諸如約50nM、20nM、10nM、1nM、500pM、250pM、200pM、100pM或更強、特別是50pM或更強的結合親和力。應當理解，結合結構域對CD22的親和力可以與結合結構域對CD79的親和力相同或不同。在一個實施方案中，加工本公開的多特異性抗體分子或其抗體/片段成分以提供改善的對靶抗原的親和力。這樣的變體可以通過許多親和力成熟操作方案獲得，包括突變CDR(Yang等人,J.Mol.Biol.,254,392-403,1995)，鏈混編(Marks等人,Bio/Technology,10,779-783,1992)，使用大腸桿菌的突變菌株(Low等人，J.Mol.Biol.,250,359-368,1996)，DNA混編(Patten等人，Curr.Opin.Biotechnol.,8,724-733,1997)，噬菌體展示(Thompson等人，J.Mol.Biol.,256,77-88,1996)和有性PCR(Crameri等人，Nature,391,288-291,1998)。Vaughan等人(同上)討論了這些親和成熟方法。抗體及其產生用于本發明的結合結構域可以通過本領域已知的任何合適的方法產生，例如CDR可以取自非人抗體(包括市售的抗體)并且移植到人框架中，或者可以用非人可變區和人恒定區制備嵌合抗體等。通常，用于本發明的結合結構域是來源于結合所選抗原的抗體的結合結構域，諸如結合CD22、CD79a和/或CD79b的抗體。CD22和CD79抗體的實例是本領域已知的，并且這些可以直接用于本發明的分子中，或者使用本文所述的方法篩選適合性，并且隨后如果需要則使用本文所述的方法進行修飾，例如進行人源化。臨床中CD22抗體的實例包括依帕珠單抗和奧英妥珠單抗。本領域已經描述了其他治療性抗體，例如US2003202975和WO14011520中公開的抗CD22抗體，WO14011521和WO15021089中公開的抗CD79b抗體。非人抗CD22抗體包括來自克隆SP104的兔單克隆抗體LS-C2210357(LSBio)，來自克隆4C3的小鼠單克隆LS-C174778，小鼠單克隆LS-C4802，來自克隆1B1的小鼠單克隆LS-B9996，來自克隆2E6的小鼠單克隆LS-C340404，小鼠單克隆LS-C312263，小鼠單克隆LS-C152867，小鼠單克隆LS-C87523，來自克隆FRB4的小鼠單克隆LS-C134333，小鼠單克隆LS-C134336，來自克隆HIB22的小鼠單克隆LS-C40961，小鼠單克隆LS-C134332，來自SantaCruzBiotechnology的以下抗體：sc-271579，sc-377304，sc-7032，sc-18909，sc-7932，sc-7323，sc-7307，sc-7031，sc-20053，sc-189000，sc-136440，sc-136507，sc-53031，sc-73363，sc-53032，Abcam兔單克隆Ab33859(EP498Y)，小鼠單克隆抗體AA1-687目錄號ABIN1999423，來自克隆HIB22的來自Biolegend車間號VCD22.14的小鼠單克隆。市售的抗CD79a抗體包括來自克隆HM57的小鼠單克隆抗體LS-B4504(LSBio)，小鼠單克隆抗體LS-B8330，小鼠單克隆抗體LS-C44954，兔單克隆抗體LS-B9093，來自克隆JCB117的小鼠單克隆抗體LS-B8513，來自克隆SP18的兔單克隆抗體LS-C210607，來自克隆5E2的小鼠單克隆抗體LS-C175441，來自克隆3D3的小鼠單克隆抗體LS-C338670，來自克隆HM47/A9的小鼠單克隆抗體LS-C88120，小鼠單克隆抗體LS-C191714，小鼠單克隆抗體LS-C87592，小鼠單克隆抗體LS-C44955，小鼠單克隆抗體LS-C95934，小鼠單克隆抗體LS-C121584，小鼠單克隆抗體LS-C121585，小鼠單克隆抗體LS-C204347，小鼠單克隆抗體LS-C88122，Abcam小鼠單克隆抗體ab3121[HM47/A9]，兔單克隆抗體ab79414和兔單克隆抗體ab133483。市售的CD79b抗體包括小鼠單克隆Abcam抗體ab33295，大鼠單克隆抗體ab23826，小鼠單克隆抗體ab103422，兔單克隆抗體ab134103，兔單克隆抗體ab134147和兔單克隆抗體ab183343。此類市售的抗體可能是發現其他治療性抗體的有用工具。技術人員可以使用本領域已知的任何合適的方法產生用于本發明的多特異性分子的抗體。用于產生例如用于免疫宿主或用于淘選諸如用于噬菌體展示的抗體的抗原多肽可以通過本領域熟知的方法從包含表達系統的遺傳工程改造的宿主細胞制備，或者它們可以是從天然生物來源回收。在本申請中，術語“多肽”包括肽、多肽和蛋白質。除非另有說明，否則這些可互換使用。在一些情況下，抗原多肽可以是較大蛋白質的一部分，諸如融合蛋白，例如與親和標簽或類似物融合。在一個實施方案中，可用轉染了相關蛋白或多肽(例如用CD79a和CD79b共轉染)的細胞(諸如成纖維細胞)免疫宿主。可以獲得針對抗原多肽產生的抗體，其中動物的免疫是必需的，通過使用眾所周知的常規操作方案將多肽施用于動物，優選非人動物，參見例如HandbookofExperimentalImmunology,D.M.Weir(編輯)，Vol4,BlackwellScientificPublishers,Oxford,England,1986)。可以免疫許多溫血動物，諸如兔、小鼠、大鼠、羊、牛、駱駝或豬。然而，小鼠、兔、豬和大鼠通常是最合適的。單克隆抗體可以通過本領域已知的任何方法制備，諸如雜交瘤技術(Kohler&Milstein,1975,Nature,256:495-497)，三源雜交瘤技術，人B細胞雜交瘤技術(Kozbor等人，1983,ImmunologyToday,4:72)和EBV-雜交瘤技術(Cole等人，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy,pp77-96,AlanRLiss,Inc.,1985)。還可以使用單淋巴細胞抗體方法通過克隆和表達由選擇用于產生特異性抗體的單個淋巴細胞產生的免疫球蛋白可變區cDNA來產生抗體，例如由Babcook,J.等人，1996,Proc.Natl.Acad.Sci.USA93(15):7843-7848l；WO92/02551；WO2004/051268和WO2004/106377所述的方法。還可以使用本領域已知的各種噬菌體展示方法產生用于本公開內容的抗體，包括以下公開的那些：Brinkman等人(于J.Immunol.Methods,1995,182:41-50),Ames等人(J.Immunol.Methods,1995,184:177-186),Kettleborough等人(Eur.J.Immunol.1994,24:952-958),Persic等人(Gene,19971879-18),Burton等人(AdvancesinImmunology,1994,57:191-280)和WO90/02809；WO91/10737；WO92/01047；WO92/18619；WO93/11236；WO95/15982；WO95/20401；和US5,698,426；5,223,409；5,403,484；5,580,717；5,427,908；5,750,753；5,821,047；5,571,698；5,427,908；5,516,637；5,780,225；5,658,727；5,733,743；5,969,108,和WO20011/30305。在一個實例中，本公開的多特異性分子是完全人的，特別是一個或多個可變結構域是完全人的。完全人分子是其中重鏈和輕鏈的可變區和恒定區(如果存在)都是人源的，或基本上與人源的序列相同，而不必來自相同抗體的那些。完全人抗體的實例可以包括例如通過上述噬菌體展示方法產生的抗體和由小鼠產生的抗體，其中鼠免疫球蛋白可變區和任選地恒定區基因已被其對應物例如如EP0546073、US5,545,806、US5,569,825、US5,625,126、US5,633,425、US5,661,016、US5,770,429、EP0438474和EP0463151中一般術語中所述。在一個實例中，根據本公開的多特異性分子的結合結構域是人源化的。本文使用的人源化(其包括CDR移植抗體)是指具有來自非人物種的一個或多個互補決定區(CDR)和來自人免疫球蛋白分子的框架區的分子(參見例如US5,585,089；WO91/09967)。應當理解，可能僅需要轉移CDR的特異性決定殘基而不是整個CDR(參見例如，Kashmiri等人,2005,Methods,36,25-34)。人源化抗體可任選地進一步包含一個或多個來源于CDR所來源的非人物種的構架殘基。本文所用的術語“人源化抗體分子”是指其中重鏈和/或輕鏈含有來自供體抗體(例如鼠單克隆抗體抗體)移植到受體抗體(例如人抗體)的重鏈和/或輕鏈可變區框架中的一個或多個CDR(包括，如果需要的話，一個或多個修飾的CDR)的抗體分子。有關綜述，請參閱Vaughan等人,NatureBiotechnology,16,535-539,1998。在一個實施方案中，不是轉移整個CDR，而是只有一個或多個來自本文上述任何一個CDR的特異性決定殘基被轉移到人抗體框架(參見例如，Kashmiri等人，2005，Methods，36，25-34)。在一個實施方案中，僅將來自一個或多個本文上述CDR的特異性決定殘基轉移到人抗體框架。在另一個實施方案中，僅將來自上文描述的每個CDR的特異性決定殘基轉移至人抗體框架。當CDR或特異性決定殘基被移植時，考慮到CDR來源的供體抗體的類型/類型，包括小鼠、靈長類動物和人框架區，可以使用任何合適的受體可變區框架序列。合適地，根據本發明的人源化抗體具有包含人受體構架區以及本文提供的一個或多個CDR的可變結構域。可用于本公開的人類框架的實例是KOL、NEWM、REI、EU、TUR、TEI、LAY和POM(Kabat等人，同上)。例如，KOL和NEWM可以用于重鏈，REI可以用于輕鏈和EU、LAY和POM可以用于重鏈和輕鏈二者。或者，可以使用人種系序列；這些可在以下網址獲得：http://www2.mrc-lmb.cam.ac.uk/vbase/list2.php。在本公開的人源化抗體分子中，受體重鏈和輕鏈不一定需要衍生自相同的抗體，并且如果需要，可以包含具有衍生自不同鏈的框架區的復合鏈。框架區不需要具有與受體抗體完全相同的序列。例如，稀有殘基可以改變為該受體鏈類或類型的更頻繁存在的殘基。或者，可以改變受體構架區中的選定殘基，使得它們對應于在供體抗體中相同位置處發現的殘基(參見Reichmann等人，1998,Nature,332,323-324)。這樣的變化應保持在恢復供體抗體親和力所需的最小值。用于在受體構架區中選擇可能需要改變的殘基的操作方案在WO91/09967中闡述。框架的衍生物可具有用替代氨基酸替換的1、2、3或4個氨基酸，例如用供體殘基替換。供體殘基是來自供體抗體的殘基，即，從其最初衍生CDR的抗體，特別是來自供體序列所采用的相應位置的殘基。供體殘基可以被衍生自人受體框架的合適殘基(受體殘基)替換。抗體可變結構域中的殘基通常根據Kabat等人設計的系統進行編號。該系統在Kabat等人，1987，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，USDepartmentofHealthandHumanServices，NIH，USA(下文稱為“Kabat等人(同上)”)中闡述。該編號系統用于本說明書中，除非另有說明。Kabat殘基命名并不總是直接對應于氨基酸殘基的線性編號。實際的線性氨基酸序列可以含有比嚴格Kabat編號更少或額外的氨基酸，其對應于基本可變結構域結構的構架或互補決定區(CDR)的結構成分的縮短或插入。可以通過抗體序列與“標準”Kabat編號序列中同源性殘基的比對來確定給定抗體的正確Kabat編號殘基。根據Kabat編號系統，重鏈可變結構域的CDR位于殘基31-35(CDR-H1)，殘基50-65(CDR-H2)和殘基95-102(CDR-H3)。然而，根據Chothia(Chothia,C.和Lesk,A.M.J.Mol.Biol.,196,901-917(1987))，等同于CDR-H1的環擴展為從殘基26至殘基32。因此，除非另有說明，本文所用的‘CDR-H1’旨在指殘基26至35，如Kabat編號系統和Chothia的拓撲環定義的組合所述。根據Kabat編號系統，輕鏈可變結構域的CDR位于殘基24-34(CDR-L1)，殘基50-56(CDR-L2)和殘基89-97(CDR-L3)。在一個實例中，提供了包含特異性針對CD79的包含三個CDR的重鏈可變區(例如VH)的結合結構域，其中CDRH1具有SEQIDNO：78中給出的序列，CDRH2具有給定的序列在SEQIDNO：79中給出，CDRH3具有在SEQIDNO：80中給出的序列。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD79的包含3個重鏈CDR的重鏈可變區(例如VH)的結合結構域，CDRH1為SEQIDNO：88，CDRH2為SEQIDNO：89，CDRH3為SEQIDNO：90。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD79的包含3個輕鏈CDR的輕鏈可變區(例如VL)的結合結構域，CDRL1為SEQIDNO：75，CDRL2為SEQIDNO：76，CDRL3為SEQIDNO：77。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD79的包含3個輕鏈CDR的輕鏈可變區(例如VL)的結合結構域，CDRL1為SEQIDNO：85，CDRL2為SEQIDNO：86，CDRL3為SEQIDNO：87。在一個實例中，提供了包含特異性針對CD79的包含三個CDR的重鏈可變區(VH)和包含三個CDR的輕鏈可變區(VL)的結合結構域，其中CDRH1具有SEQIDNO：78中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：79中給出的序列，CDRH3具有SEQIDNO：80中給出的序列，其中CDRL1具有SEQIDNO：75中給出的序列，CDRL2具有SEQIDNO：76中給出的序列，并且CDRL3具有SEQIDNO：77中給出的序列。在一個實例中，提供了包含特異性針對CD79的包含三個CDR的重鏈可變區(VH)和包含三個CDR的輕鏈可變區(VL)的結合結構域，其中CDRH1具有SEQIDNO：88中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：89中給出的序列，CDRH3具有SEQIDNO：90中給出的序列，其中CDRL1具有SEQIDNO：85中給出的序列，CDRL2具有SEQIDNO：86中給出的序列，并且CDRL3具有SEQIDNO：87中給出的序列。在一個實施方案中，根據本公開的多特異性分子包含特異性針對CD22的結合結構域，其包含3個選自SEQIDNO：98、99、100、108、109、110、118、119、120、128、129、130、138、139、140、148、149和150的重鏈CDR。在一個實施方案中，根據本公開的多特異性分子包含特異性針對CD22的結合結構域，其包含3個選自SEQIDNO：95、96、97、105、106、107、115、116、117、125、126、127、136、137、138、145、146和147的輕鏈CDR。在一個實施方案中，根據本公開的多特異性分子包含特異性針對CD22的結合結構域，其包含3個選自SEQIDNO：98、99、100、108、109、110、118、119、120、128、129、130、138、139、140、148、149和150的重鏈CDR和選自SEQIDNO：95、96、97、105、106、107、115、116、117、125、126、127、136、137、138、145、146和147的3個輕鏈CDR。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個重鏈CDR的重鏈可變區(VH)的結合結構域，CDRH1為SEQIDNO：98，CDRH2為SEQIDNO：99和CDRH3為SEQIDNO：100。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個重鏈CDR的重鏈可變區(VH)的結合結構域，CDRH1為SEQIDNO：108，CDRH2為SEQIDNO：109和CDRH3為SEQIDNO：110。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個重鏈CDR的重鏈可變區(VH)的結合結構域，CDRH1為SEQIDNO：118，CDRH2為SEQIDNO：119和CDRH3為SEQIDNO：120。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個重鏈CDR的重鏈可變區(VH)的結合結構域，CDRH1為SEQIDNO：128，CDRH2為SEQIDNO：129和CDRH3為SEQIDNO：130。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個重鏈CDR的重鏈可變區(VH)的結合結構域，CDRH1為SEQIDNO：138，CDRH2為SEQIDNO：139和CDRH3為SEQIDNO：140。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個重鏈CDR的重鏈可變區(VH)的結合結構域，CDRH1為SEQIDNO：148，CDRH2為SEQIDNO：149和CDRH3為SEQIDNO：150。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個輕鏈CDR的輕鏈可變區的結合結構域，CDRL1為SEQIDNO：95，CDRL2為SEQIDNO：96和CDRL3的SEQIDNO：97。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個輕鏈CDR的輕鏈可變區的結合結構域，CDRL1為SEQIDNO：105，CDRL2為SEQIDNO：106和CDRL3的SEQIDNO：107。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個輕鏈CDR的輕鏈可變區的結合結構域，CDRL1為SEQIDNO：115，CDRL2為SEQIDNO：116和CDRL3的SEQIDNO：117。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個輕鏈CDR的輕鏈可變區的結合結構域，CDRL1為SEQIDNO：125，CDRL2為SEQIDNO：126和CDRL3的SEQIDNO：127。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個輕鏈CDR的輕鏈可變區的結合結構域，CDRL1為SEQIDNO：135，CDRL2為SEQIDNO：136和CDRL3的SEQIDNO：137。在一個實施方案中，提供了包含特異性針對CD22的包含3個輕鏈CDR的輕鏈可變區的結合結構域，CDRL1為SEQIDNO：145，CDRL2為SEQIDNO：146和CDRL3的SEQIDNO：147。在一個實例中，提供了特異性針對CD22的結合結構域，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，所述重鏈可變區包含三個CDR，其中CDRH1具有SEQIDNO：98中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：99中給出的序列，并且CDRH3具有SEQIDNO：100中給出的序列，所述輕鏈可變區包含三個CDR，其中CDRL1具有SEQIDNO：95中給出的序列，CDRL2具有序列SEQIDNO：96中給出的序列并且CDRL3具有SEQIDNO：97中給出的序列。在一個實例中，提供了特異性針對CD22的結合結構域，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，所述重鏈可變區包含三個CDR，其中CDRH1具有SEQIDNO：108中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：109中給出的序列，并且CDRH3具有SEQIDNO：110中給出的序列，所述輕鏈可變區包含三個CDR，其中CDRL1具有SEQIDNO：105中給出的序列，CDRL2具有序列SEQIDNO：106中給出的序列并且CDRL3具有SEQIDNO：107中給出的序列。在一個實例中，提供了特異性針對CD22的結合結構域，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，所述重鏈可變區包含三個CDR，其中CDRH1具有SEQIDNO：118中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：119中給出的序列，并且CDRH3具有SEQIDNO：120中給出的序列，所述輕鏈可變區包含三個CDR，其中CDRL1具有SEQIDNO：115中給出的序列，CDRL2具有序列SEQIDNO：116中給出的序列并且CDRL3具有SEQIDNO：117中給出的序列。在一個實例中，提供了特異性針對CD22的結合結構域，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，所述重鏈可變區包含三個CDR，其中CDRH1具有SEQIDNO：128中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：129中給出的序列，并且CDRH3具有SEQIDNO：130中給出的序列，所述輕鏈可變區包含三個CDR，其中CDRL1具有SEQIDNO：125中給出的序列，CDRL2具有序列SEQIDNO：126中給出的序列并且CDRL3具有SEQIDNO：127中給出的序列。在一個實例中，提供了特異性針對CD22的結合結構域，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，所述重鏈可變區包含三個CDR，其中CDRH1具有SEQIDNO：138中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：139中給出的序列，并且CDRH3具有SEQIDNO：140中給出的序列，所述輕鏈可變區包含三個CDR，其中CDRL1具有SEQIDNO：135中給出的序列，CDRL2具有序列SEQIDNO：136中給出的序列并且CDRL3具有SEQIDNO：137中給出的序列。在一個實例中，提供了特異性針對CD22的結合結構域，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，所述重鏈可變區包含三個CDR，其中CDRH1具有SEQIDNO：148中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：149中給出的序列，并且CDRH3具有SEQIDNO：150中給出的序列，所述輕鏈可變區包含三個CDR，其中CDRL1具有SEQIDNO：145中給出的序列，CDRL2具有序列SEQIDNO：146中給出的序列并且CDRL3具有SEQIDNO：147中給出的序列。在一個實例中，本發明提供了包含特異性針對抗原CD79的結合結構域和特異性針對抗原CD22的結合結構域的多特異性分子，其中這對結合結構域包含來自CD79和CD22抗體對的6個CDR，所述抗體對選自以下CD79和CD22抗體對的列表：4447和4120、4447和4126、4447和4127、4447和4128、4447和4130、4447和4132、4450和4120、4450和4126、4450和4127、4450和4128、4450和4130以及4450和4132。下文提供了這些CD79抗體(抗體4447和抗體4450)的序列，包括VH、VL和CDR序列。下文提供了這些CD22抗體(抗體4120、4126、4127、4128、4130、4132)的序列，包括VH、VL和CDR序列，并且可以組合作為本發明分子中的結合結構域。在一個實施方案中，本公開擴展至本文公開的抗體序列。在一個實例中，提供了特異性針對白蛋白的結合結構域，其包含重鏈可變區(VH)和輕鏈可變區(VL)，所述重鏈可變區包含三個CDR，其中CDRH1具有SEQIDNO：151中給出的序列，CDRH2具有SEQIDNO：152中給出的序列，并且CDRH3具有SEQIDNO：153中給出的序列，所述輕鏈可變區包含三個CDR，其中CDRL1具有SEQIDNO：154中給出的序列，CDRL2具有序列SEQIDNO：155中給出的序列并且CDRL3具有SEQIDNO：156中給出的序列。在一個實例中，提供了特異性針對白蛋白的結合結構域，其包含具有SEQIDNO：157中給出的序列的重鏈可變區(VH)和具有SEQIDNO：159中給出的序列的輕鏈可變區(VL)。在一個實例中，提供了特異性針對白蛋白的結合結構域，其包含具有SEQIDNO：158中給出的序列的重鏈可變區(VH)和具有SEQIDNO：160中給出的序列的輕鏈可變區(VL)。在一個實例中，結合結構域是人源化的。在一個實例中，本文提供的一個或多個CDR可以被修飾以去除不需要的殘基或位點，諸如半胱氨酸殘基或天冬氨酸(D)異構化位點或天冬酰胺(N)脫酰胺位點。例如，任何一個CDR中的一個或多個半胱氨酸殘基可以被另一個氨基酸取代，諸如絲氨酸。在一個實例中，可通過將天冬酰胺殘基(N)和/或相鄰殘基突變為任何其它合適的氨基酸，從一個或多個CDR中除去天冬酰胺脫酰胺位點。在一個實例中，天冬酰胺脫酰胺位點諸如NG或NS可以突變為例如NA或NT。在一個實例中，可通過將天冬氨酸殘基(D)和/或相鄰殘基突變為任何其它合適的氨基酸，從一個或多個CDR中除去天冬氨酸異構化位點。在一個實例中，天冬氨酸異構化位點諸如DG或DS可以被突變為例如EG、DA或DT。在一個實例中，可以通過將天冬酰胺殘基(N)突變為任何其它合適的氨基酸，例如SLS或QLS，來除去N-糖基化位點諸如NLS。在一個實例中，可以通過將絲氨酸殘基(S)突變為除蘇氨酸(T)以外的任何其它殘基來除去N-糖基化位點諸如NLS。本領域技術人員能夠在任何合適的測定(諸如本文所述的那些)中測試CDR的變體或人源化序列以確認活性得到維持。可以使用任何合適的測定來測試與抗原的特異性結合，所述測定包括例如ELISA或表面等離子體共振方法，諸如BIAcore，其中可以測量與抗原(CD22或CD79)的結合。這樣的測定可以使用分離的天然或重組CD22或CD79(a和/或b)或合適的融合蛋白/多肽。在一個實例中，使用重組CD22(諸如SEQIDNO：161中提供的序列或SEQIDNO：161的氨基酸20-847)或CD79(諸如SEQIDNO：162和SEQIDNO：163中提供的序列和SEQIDNO：162的氨基酸33-226和SEQIDNO：163的氨基酸29-229)通過例如表面等離子體共振(諸如BIAcore)測量結合。或者，蛋白質可以在細胞上表達，諸如HEK細胞，并且使用基于流式細胞術的親和力測定來測量親和力。本發明提供的抗體序列可用于鑒定適合用于本發明的多特異性分子中的其它抗體和因此的結合結構域。交叉阻斷根據本發明的抗體分子與CD79特異性結合的抗體，特別是包含SEQIDNO：73中給出的重鏈序列和SEQIDNO：71中給出的輕鏈序列的抗體分子或包含SEQIDNO：83中給出的重鏈序列和SEQIDNO：81中給出的輕鏈序列的抗體分子可以類似地用于結合CD79，因此類似地可用于本發明的多特異性分子。因此，本發明還提供了包含特異性針對抗原CD22的結合結構域和對抗原CD79b特異性的結合結構域的多特異性分子，其中CD79b的結合結構域交叉阻斷本文上述CD79的任何一種抗體分子的結合和/或通過這些抗體中的任一種而被交叉阻斷與CD79結合。在一個實施方案中，這樣的抗體與本文上述的抗體結合相同的表位。在另一個實施方案中，交叉阻斷抗體結合與由本文上述的抗體結合的表位相鄰和/或重疊的表位。類似地，交叉阻斷根據本發明的抗體分子與CD22的結合的抗體，特別是包含SEQIDNO：93中給出的重鏈序列和SEQIDNO：91中給出的輕鏈序列的抗體分子或包含SEQIDNO：103中給出的重鏈序列和SEQIDNO：101中給出的輕鏈序列的抗體分子或包含SEQIDNO：113中給出的重鏈序列和SEQIDNO：111中給出的輕鏈序列的抗體分子，或包含SEQIDNO：123中給出的重鏈序列和SEQIDNO：121中給出的輕鏈序列的抗體分子，或包含SEQIDNO：133中給出的重鏈序列和SEQIDNO：131中給出的輕鏈序列的抗體分子或包含SEQIDNO：143中給出的重鏈序列和SEQIDNO：141中給出的輕鏈序列的抗體分子可以類似地用于結合CD22并且因此類似地可用于本發明的多特異性分子。因此，本發明還提供了包含特異性針對抗原CD22的結合結構域和特異性針對抗原CD79的結合結構域的多特異性分子，其中CD22的結合結構域交叉阻斷本文上述的任何一種抗體分子與CD22的結合并且/或者通過這些抗體中的任一種而被交叉阻斷與CD22結合。在一個實施方案中，這樣的抗體與本文上述的抗體結合相同的表位。在另一個實施方案中，交叉阻斷抗體結合與由本文上述的抗體結合的表位相鄰和/或重疊的表位。交叉阻斷抗體可以使用本領域任何合適的方法鑒定，例如通過使用競爭ELISA或BIAcore測定，其中交叉阻斷抗體與抗原(CD22和/或CD79)的結合阻止本發明的抗體的結合或反之亦然。這樣的交叉阻斷測定可以使用細胞表達的、分離的天然或重組CD22或CD79(a和/或b)或合適的融合蛋白/多肽。在一個實例中，使用重組CD22或其合適的片段或其天然變體(諸如SEQIDNO：161中提供的序列或SEQIDNO：161的氨基酸20-847中提供的序列)測量結合和交叉阻斷，或CD79，諸如SEQIDNO：162中提供的序列或SEQIDNO：162的氨基酸33-226中提供的序列(CD79a)和/或SEQIDNO：163中提供的序列或氨基SEQIDNO：163的氨基酸29-229中提供的序列。或者或另外，根據本發明這一方面的抗體可以通過本文公開的以下結合結構域而被交叉阻斷與抗原(CD22或CD79)的結合，例如包含衍生自以下中給出的重鏈可變序列和輕鏈序列的CDR：SEQIDNO：71和73、81和83、91和93、101和103、111和113、121和123、131和133以及141和143。因此還提供了多特異性分子，其包含特異性針對抗原CD22的結合結構域和特異性針對抗原CD79b的結合結構域，其中CD79b的結合結構域交叉阻斷本文上述的任一抗體分子與CD79b的結合和/或通過這些抗體中的任一種而被交叉阻斷了例如大于80％，例如大于85％，例如大于90％，特別是大于95％的與CD79b結合，并且任選地其中CD22的結合結構域交叉阻斷本文上述的任何一種抗體分子與CD22的結合和/或通過這些抗體中的任一種而被交叉阻斷了大于80％，例如大于85％，例如大于90％，特別是大于95％的與CD22結合。在一個方面，提供了多特異性抗體分子，其包含或由以下組成：a)式(I)的多肽鏈：VH-CH1-X-(V1)p；b)式(II)的多肽鏈：VL-CL-Y-(V2)q；其中VH表示重鏈可變結構域；CH1表示重鏈恒定區的結構域，例如其結構域1；X表示鍵或接頭，例如氨基酸接頭；Y表示鍵或接頭，例如氨基酸接頭；V1表示dab、scFv、dsscFv或dsFv；VL表示可變結構域，例如輕鏈可變結構域；CL表示來自恒定區的結構域，例如輕鏈恒定區結構域，諸如Cκ；V2表示dab、scFv、dsscFv或dsFv；p是0或1；q是0或1；以及當p是1時q是0或1并且當q是1時p是0或1，即p和q不同時表示0。在一個實施方案中，所述多特異性抗體分子包含不超過一個針對CD22的結合結構域和不超過一個針對CD79的結合結構域。在一個實施方案中，q是0且p是1。在一個實施方案中，q是1且p是1。在一個實施方案中，V1是dab并且V2是dab，并且它們一起形成可操作的可變區對、諸如同源VH/VL對的單一結合結構域，所述可變區對任選地由二硫鍵連接。在一個實施方案中，VH和VL特異性針對CD79，例如CD79a或CD79b。在一個實施方案中，V1特異性針對CD79，例如CD79a或CD79b。在一個實施方案中，V2特異性針對CD79，例如CD79a或CD79b。在一個實施方案中，V1和V2一起(例如作為結合結構域)特異性針對CD79，例如CD79a或CD79b并且VH和VL特異性針對CD22。在一個實施方案中，V1特異性針對CD22。在一個實施方案中，V2特異性針對CD22。在一個實施方案中，V1和V2一起(例如作為一個結合結構域)特異性針對CD22并且VH和VL特異性針對CD79。在一個實施方案中，V1特異性針對CD22，V2特異性針對白蛋白并且VH和VL特異性針對CD79。在一個實施方案中，V1特異性針對白蛋白，V2特異性針對CD22并且VH和VL特異性針對CD79。在一個實施方案中，V1特異性針對CD79，V2特異性針對白蛋白并且VH和VL特異性針對CD22。在一個實施方案中，V1特異性針對白蛋白，V2特異性針對CD79并且VH和VL特異性針對CD22。在一個實施方案中，V1是特異性針對CD22的dsscFv，V2是特異性針對白蛋白的dsscFv并且VH和VL特異性針對CD79。在一個實施方案中，V1是特異性針對白蛋白的dsscFv，V2是特異性針對CD22的dsscFv并且VH和VL特異性針對CD79。在一個實施方案中，V1是特異性針對CD79的dsscFv，V2是特異性針對白蛋白的dsscFv并且VH和VL特異性針對CD22。在一個實施方案中，V1是特異性針對白蛋白的dsscFv，V2是特異性針對CD79的dsscFv并且VH和VL特異性針對CD22。上述構建體中的V1、V2、VH和VL可各自表示結合結構域并摻入本文提供的任何序列。X和Y表示任意合適的接頭，例如X和Y可以是SGGGGSGGGGS(SEQIDNO:17)。在一個實施方案中，當V1和/或V2是dab、dsFv或dsscFv時，V1和/或V2的可變結構域VH和VL之間的二硫鍵形成于位置VH44和VL100之間。本公開還擴展至本文公開的新的多肽序列和與其至少80％相似或相同的序列，例如85％或更大，例如90％或更大，特別是95％或更大的相似性或同一性。本文所用的“同一性”表示在比對序列中的任何特定位置，氨基酸殘基在序列之間是相同的。本文所用的“相似性”表示在比對序列中的任何特定位置，氨基酸殘基在序列之間具有相似類型。例如，亮氨酸可以替代異亮氨酸或纈氨酸。通常可以彼此取代的其他氨基酸包括但不限于：-苯丙氨酸、酪氨酸和色氨酸(具有芳香族側鏈的氨基酸)；-賴氨酸、精氨酸和組氨酸(具有堿性側鏈的氨基酸)；-天冬氨酸和谷氨酸(具有酸性側鏈的氨基酸)；-天冬酰胺和谷氨酰胺(具有酰胺側鏈的氨基酸)；和-半胱氨酸和甲硫氨酸(具有含硫側鏈的氨基酸)。可以容易地計算同一性和相似性的程度(ComputationalMolecularBiology,Lesk,A.M.編輯,OxfordUniversityPress,NewYork,1988；Biocomputing.InformaticsandGenomeProjects,Smith,D.W.編輯,AcademicPress,NewYork,1993；ComputerAnalysisofSequenceData,Part1,Griffin,A.M.和Griffin,H.G.編輯,HumanaPress,NewJersey,1994；SequenceAnalysisinMolecularBiology,vonHeinje,G.,AcademicPress,1987,SequenceAnalysisPrimer,Gribskov,M.和Devereux,J.編輯,MStocktonPress,NewYork,1991)，可獲取自NCBI的BLASTTM軟件(Altschul,S.F.等人,1990,J.Mol.Biol.215:403-410；Gish,W.&States,D.J.1993,NatureGenet.3:266-272.Madden,T.L.等人,1996,Meth.Enzymol.266:131-141；Altschul,S.F.等人,1997,NucleicAcidsRes.25:3389-3402；Zhang,J.&Madden,T.L.1997,GenomeRes.7:649-656)。特別地，在一個方面，本發明提供了任何合適的抗體形式的本文所述的CD22和CD79抗體。因此，在一個方面，本發明提供了抗CD22抗體或其片段，其含有一個或多個本文上述的結合結構域，其包含本文提供的CDR并于SEQIDNO：95、96、97、98、99和100(抗體4120)或105、106、107、108、109和110(抗體4126)或115、116、117、118、119和120(抗體4127)或125、126、127、128、129和130(抗體4128)或135、136、137、138、139和140(抗體4130)或145、146、147、148、149和150(抗體4132)中。還提供了抗CD79抗體或其片段，其含有一個或多個本文上述的結合結構域，其包含本文提供的CDR并于SEQIDNO：75、76、77、78、79和80(抗體4447)或SEQIDNO：85、86、87、88、89和90(抗體4450)中。所述CDR可以摻入任何合適的抗體構架和任何合適的抗體形式。這樣的抗體包括完整抗體及其功能活性片段或衍生物，其可以是但不限于單克隆抗體、人源化抗體、完全人抗體或嵌合抗體。因此，這樣的抗體可以包含具有全長重鏈和輕鏈或其片段的完整抗體分子，并且可以是但不限于Fab、修飾的Fab、Fab'、F(ab')2、Fv、單結構域抗體、scFv、二價、三價或四價抗體、Bis-scFv、雙抗體、三抗體、四抗體和上述任何的表位結合片段(參見例如Holliger和Hudson，2005，NatureBiotech.23(9)：1126-1136；Adair和Lawson，2005，DrugDesignReviews-Online2(3)，209-217)。用于產生和制備這些抗體片段的方法是本領域公知的(參見例如Verma等人，1998，JournalofImmunologicalMethods，216,165-181)。多價抗體可以包含多種特異性或可以是單特異性的(參見例如WO92/22853和WO05/113605)。應當理解，如本文上文所述的，本發明的這個方面還擴展到這些抗CD22和CD79抗體的變體，包括人源化形式和修飾形式，包括其中在CDR中氨基酸已被突變以去除一個或多個異構化、脫酰胺、糖基化位點或半胱氨酸殘基。接頭本文中在一種環境中對接頭的教導同樣可以應用于使用接頭的不同環境(諸如本發明的任何多特異性分子)中的接頭。在一個實施方案中，在本公開的分子中使用的接頭是長度為50個殘基或更少的氨基酸接頭，例如選自序列5至70所示的序列。表1.鉸鏈接頭序列表2.柔性接頭序列(S)在序列17至20中是任選的。剛性接頭的實例包括肽序列GAPAPAAPAPA(SEQIDNO:69)、PPPP(SEQIDNO:70)和PPP。其它接頭示于表3中：SEQIDNO:序列55DLCLRDWGCLW56DICLPRWGCLW57MEDICLPRWGCLWGD58QRLMEDICLPRWGCLWEDDE59QGLIGDICLPRWGCLWGRSV60QGLIGDICLPRWGCLWGRSVK61EDICLPRWGCLWEDD62RLMEDICLPRWGCLWEDD63MEDICLPRWGCLWEDD64MEDICLPRWGCLWED65RLMEDICLARWGCLWEDD66EVRSFCTRWPAEKSCKPLRG67RAPESFVCYWETICFERSEQ68EMCYFPGICWM效應子分子如果需要，用于本發明的多特異性分子可以與一個或多個效應子分子綴合。應當理解，效應子分子可以包含單個效應子分子或兩個或更多個這樣的分子，所述兩個或更多個這樣的分子經連接以形成可以附接到本發明的多特異性分子上的單個部分。當期望獲得連接至效應子分子的根據本公開的抗體或多特異性分子時，可以通過標準化學或重組DNA方法制備，其中抗體片段直接或通過偶聯劑連接到效應子分子。將這些效應子分子與抗體綴合的技術是本領域熟知的(參見，Hellstrom等人,ControlledDrugDelivery,第二版,Robinson等人編輯,1987,pp.623-53；Thorpe等人,1982,Immunol.Rev.,62:119-58和Dubowchik等人,1999,PharmacologyandTherapeutics,83,67-123)。具體的化學方法包括，例如在WO93/06231、WO92/22583、WO89/00195、WO89/01476和WO03/031581中所述的那些。或者，當效應子分子是蛋白質或多肽時，可以使用重組DNA方法實現連接，例如在WO86/01533和EP0392745中所述的。在一個實施方案中，本公開的多特異性分子可以包含效應子分子。本文所用的術語效應子分子包括例如抗腫瘤劑、藥物、毒素、生物活性蛋白，例如酶、其他抗體或抗體片段、合成或天然存在的聚合物、核酸及其片段，例如DNA、RNA及其片段、放射性核素，特別是放射性碘、放射性同位素、螯合金屬、納米顆粒和報告基團，諸如熒光化合物或可通過NMR或ESR光譜法檢測的化合物。效應子分子的實例可包括細胞毒素或細胞毒性劑，包括對細胞有害(例如殺死細胞)的任何試劑。實例包括combrestatin，尾海兔素，埃博霉素，星形孢菌素，美登木素生物堿，海綿抑制素，rhizoxin，軟海綿素，桿孢菌素，hemiasterlins，紫杉醇，松胞菌素B，短桿菌肽D，溴化乙錠，依米丁，絲裂霉素，依托泊苷，tenoposide，長春花新堿，長春花堿，秋水仙堿，阿霉素，柔紅霉素，二羥基炭疽菌素二酮，米托蒽醌，光神霉素，放線菌素D，1-脫氫睪酮，糖皮質激素，普魯卡因，丁卡因，利多卡因，心得安和嘌呤霉素及其類似物或同系物。效應子分子還包括但不限于抗代謝物(例如氨甲蝶呤，6-巰基嘌呤，6-硫鳥嘌呤，阿糖胞苷，5-氟尿嘧啶decarbazine)，烷化劑(例如氮芥，三胺硫磷苯丁酸氮芥(thioepachlorambucil)，美法侖，卡莫司汀(BSNU)和洛莫司汀(CCNU)，環磷酰胺，白消安，二溴甘露醇，鏈脲佐菌素，絲裂霉素C和順式二氯二胺鉑(II)(DDP)順鉑)，蒽環類抗生素(例如柔紅霉素(以前稱為道諾霉素)和阿霉素)，抗生素(例如更生霉素(以前稱為放線菌素)，博來霉素，光神霉素，氨曲霉素(AMC)，加利車霉素或倍癌霉素)和抗有絲分裂劑(例如長春花新堿和長春花堿)。其它效應子分子可包括螯合放射性核素諸如111In和90Y、Lu177、鉍213、锎252、銥192和鎢188/錸188；或藥物諸如但不限于烷基磷酸膽堿、拓撲異構酶I抑制劑、紫杉烷類和蘇拉明。其他效應子分子包括蛋白質、肽和酶。感興趣的酶包括但不限于蛋白水解酶，水解酶，裂合酶，異構酶，轉移酶。感興趣的蛋白質、多肽和肽包括但不限于免疫球蛋白，毒素諸如相思豆毒蛋白，蓖麻毒蛋白A，假單胞菌外毒素或白喉毒素，蛋白質諸如胰島素，腫瘤壞死因子，α-干擾素，β-干擾素，神經生長因子，血小板衍生生長因子或組織纖溶酶原激活劑，血栓形成劑或抗血管生成劑，例如血管抑素或內皮抑制蛋白，或，生物應答調節劑諸如淋巴因子，白細胞介素-1(IL-1)，白細胞介素-2(IL-2)，粒細胞巨噬細胞集落刺激因子(GM-CSF)，粒細胞集落刺激因子(G-CSF)，神經生長因子(NGF)或其它生長因子和免疫球蛋白。其他效應子分子可以包括可用于例如診斷的可檢測物質。可檢測物質的實例包括各種酶、輔基、熒光材料、發光材料、生物發光材料、放射性核素、正電子發射金屬(用于正電子發射斷層成像)和非放射性順磁金屬離子。一般參見美國專利號4,741,900中關于可與抗體綴合用作診斷劑的金屬離子。合適的酶包括辣根過氧化物酶、堿性磷酸酶、β半乳糖苷酶或乙酰膽堿酯酶；合適的輔基包括鏈霉抗生物素蛋白、抗生物素蛋白和生物素；合適的熒光材料包括傘形酮、熒光素、異硫氰酸熒光素、羅丹明、二氯三嗪基胺熒光素、丹磺酰氯和藻紅蛋白；合適的發光材料包括魯米諾；合適的生物發光材料包括螢光素酶、螢光素和水母發光蛋白；和合適的放射性核素包括125I、131I、111In和99Tc。在另一個實例中，效應子分子可以增加體內抗體的半衰期和/或降低抗體的免疫原性和/或增強抗體跨上皮屏障至免疫系統的遞送。這種類型的合適效應子分子的實例包括聚合物、白蛋白、白蛋白結合蛋白或白蛋白結合化合物諸如在WO05/117984中所述的那些。當效應子分子是聚合物時，其通常可以是合成或天然存在的聚合物，例如任選取代的直鏈或支鏈聚亞烷基、聚亞烯基或聚氧化烯聚合物或支鏈或非支鏈多糖，例如同多糖或異多糖。可存在于上述合成聚合物上的特定任選取代基包括一個或多個羥基、甲基或甲氧基。合成聚合物的具體實例包括任選取代的直鏈或支鏈聚(乙二醇)、聚(丙二醇)聚(乙烯醇)或其衍生物，特別是任選取代的聚(乙二醇)諸如甲氧基聚(乙二醇)或其衍生物。功能測定和篩選形式用于本發明的典型合適的結合結構域可以通過在功能測定中測試一個或多個結合結構域對來鑒定。例如，可以在一種或多種功能測定中測試包含特異性針對抗原CD22的結合結構域和特異性針對抗原CD79a和/或CD79b的結合結構域的多特異性分子。本文所用的“功能測定”是可用于確定經受測定條件的蛋白質復合物、抗體復合物或抗體混合物的一種或多種所需性質或活性的測定。合適的功能測定可以是結合測定，細胞凋亡測定，抗體依賴性細胞毒性(ADCC)測定，補體依賴性細胞毒性(CDC)測定，細胞生長或增殖抑制(細胞抑制作用)測定，細胞殺傷(細胞毒性效應)測定，細胞信號傳導測定，細胞因子產生測定，抗體生產和同種型轉換，和細胞分化測定。根據本公開的多特異性抗體的功效可以通過本領域普通技術人員通常已知的方法與這些模型中的個體抗體或抗體(或片段)的混合物進行比較。功能測定可以根據需要重復多次以增強結果的可靠性。可以采用本領域技術人員已知的各種統計學檢驗來鑒定統計學顯著的結果，從而鑒定具有生物功能的多特異性分子。合適的功能測定的實例描述于本文的實施例中，并且包括測量本發明的多特異性分子在用抗IgM刺激后抑制B細胞激活的能力，如通過檢測B細胞激活的標志物諸如磷酸化Akt表達、磷酸化P38表達、PLCγ信號傳導、CD40表達、CD71表達和/或CD86表達。當建立用于篩選的功能測定時，本領域技術人員可以設定合適的閾值，其中超過該閾值的所鑒定的活性被認為是“命中”。在使用多于一種功能測定的情況下，可以將每種測定的閾值設定在合適的水平以建立可控的命中率。在一個實例中，命中率可以是3-5％。在一個實例中，當在B細胞激活測定中搜索抑制B細胞功能的結合結構域對時所設定的標準可以是至少兩個磷酸讀出數據(phospho-readout)的至少30％抑制，如上文和本文實施例所述。在一個實例中，本發明的多特異性分子對于抗IgM刺激的B細胞中磷酸化P38的抑制具有小于1nM的IC50，優選小于0.5nM的IC50。在一個實例中，多特異性分子在該測定中的IC50小于0.05nM。在一個實例中，本發明的多特異性分子對于抗IgM刺激的B細胞中磷酸化Akt的抑制具有小于1nM的IC50，優選小于0.1nM的IC50。在一個實施例中，多特異性分子在該測定中的IC50小于0.05nM。在一個實例中，本發明的多特異性分子對于抗IgM刺激的B細胞中磷酸化的PLCγ2的抑制具有小于1nM的IC50，優選小于0.8nM的IC50。在一個實施例中，多特異性分子在該測定中的IC50小于0.05nM。在一個實例中，本發明的多特異性分子對于抑制抗IgM刺激的B細胞中的CD71表達具有小于5nM的IC50，優選小于3nM的IC50。在一個實施例中，多特異性分子在該測定中的IC50小于0.5nM。在一個實例中，本發明的多特異性分子對于抑制抗IgM刺激的B細胞中的CD40表達具有小于5nM的IC50。在一個實施例中，多特異性分子在該測定中的IC50小于0.5nM。在一個實例中，本發明的多特異性分子對于抑制抗IgM刺激的B細胞中的CD86表達具有小于5nM的IC50，優選小于2nM的IC50。在一個實施例中，多特異性分子在該測定中的IC50小于0.5nM。在一個實例中，本發明的多特異性分子對于抑制抗IgM刺激的B細胞中的CD71、CD40和CD86表達具有小于5nM的IC50和/或對于抑制抗IgM刺激的B細胞中的磷酸化的PLCγ2、P38和AKT的表達具有小于1nM的IC50。在一個實施方案中，可以使用體內測定，諸如動物模型，包括小鼠腫瘤模型、自身免疫疾病模型、病毒感染或細菌感染的嚙齒動物或靈長類動物模型等，來測試本公開的分子。下文描述了用于篩選和發現結合結構域的合適形式的實例。篩選以鑒定用于本發明的結合結構域可以使用雙特異性蛋白質復合物。本文所用的“雙特異性蛋白質復合物”是指包含通過異二聚體系鏈保持在一起的兩種蛋白質(本文稱為雙特異性成分的A和B)的分子。在一個實施方案中，蛋白質中的一種或兩種具有結合結構域，例如蛋白質中的一種或兩種是抗體或其片段。通常，雙特異性蛋白質復合物具有式A-X:Y-B，其中：A-X是第一融合蛋白；Y-B是第二融合蛋白；X:Y是異二聚體系鏈；A包含第一結合結構域；B包含第二結合結構域；X是結合對的第一個結合伴侶；Y是所述結合對的第二結合伴侶；和:是X和Y之間的相互作用(例如結合相互作用)，和本文所用的“融合蛋白”包含與另一個實體例如結合伴侶X或Y(視情況而定)融合的蛋白質成分，例如A或B。在實施方案中，融合蛋白是通過重組技術從遺傳構建體表達的翻譯蛋白，例如在宿主中表達自DNA構建體。系鏈X:Y的功能是保持蛋白A和B彼此接近，從而可以實現A和B的協同功能。本文所用的“異二聚體系鏈”是指包含兩個不同的結合伴侶X和Y的系鏈，所述結合伴侶形成彼此之間的相互作用(例如結合)，其具有足以將兩個結合伴侶保持在一起的總親和力。在一個實施方案中，X和/或Y不適合形成同二聚體。異二聚體系鏈束縛和異二聚體系鏈在本文中可互換使用。在一個實施方案中，“不適于形成同二聚體”是指一旦形成，則X-Y的異二聚體的形成是更優選的，例如穩定的，諸如熱力學穩定的和/或物理上穩定的(例如由缺乏聚集所證明的)。在一個實施方案中，X-Y相互作用比X-X或Y-Y相互作用更有利。當融合蛋白A-X和B-Y混合時，這減少了同二聚體X-X或Y-Y的形成。這也使得同二聚體的去除相對簡單，例如一個純化步驟(諸如柱層析)提供基本上純的根據本公開的融合蛋白和/或雙特異性蛋白質復合物。在一個實施方案中，在融合蛋白表達后提供純化步驟。因此，在一個實施方案中，在體外混合之前，以基本上純的形式提供融合蛋白。本文所用的基本上純的形式是指其中融合蛋白在85至100％范圍內的，例如90、91、92、93、94、95、96、97、98、99或100％的單體。在一個實施方案中，在雙特異性蛋白質復合物形成之后不需要純化。在一個實施方案中，本發明方法的體外混合步驟中使用的融合蛋白的比例為A-X對B-Y是0.8:1至3:1，例如1.5:1或2:1。在一個實施方案中，本發明方法的體外混合步驟中使用的融合蛋白的比例為B-Y對A-X是0.8:1至3:1，例如1.5:1或2:1。在一個實施方案中，該比例為1:1。在一個實施方案中，結合伴侶中的一個(或至少一個)不能形成同二聚體，例如，結合伴侶的氨基酸序列被突變以消除或最小化同二聚體的形成。在一個實施方案中，兩個結合伴侶不能形成同二聚體，例如結合伴侶之一是肽，而另一個結合伴侶是特異性針對所述肽的VHH。在一個實施方案中，本公開的分子中使用的scFv不能形成同二聚體。本文所使用的不能形成同二聚體，是指形成同二聚體的傾向低或為零。本文所用的低是指5％或更少，諸如4、3、2、1、0.5％或更少的聚集。融合蛋白中的少量聚集或異二聚體系鏈束縛的雙特異性蛋白質復合物中殘余物通常對本公開的方法具有最小的影響。在一個實施方案中，:是結合相互作用，例如基于吸引力諸如范德華力，諸如氫鍵和靜電相互作用，例如基于對抗原(諸如肽)的抗體特異性。在一個實施方案中，:是由特定化學相互作用(諸如點擊化學)形成的共價鍵。在一個實施方案中，:不是共價鍵。本文所用的“形成復合物”是指當融合蛋白成分A-X和B-Y在復合物組裝和融合蛋白保持在一起的適當條件下接觸時充分特異和強的相互作用(包括結合相互作用或化學反應)。本文所用的“保持在一起”是指將成分(融合蛋白)保持在彼此附近，使得在結合后，復合物可以被處理為好像它是一個分子，并且在許多情況下表現和行為類似單個分子。在一個實施方案中，保持使得復合物適合用于本文公開的方法，即適合用于至少一種功能篩選。在一個實施方案中，結合相互作用是可逆的。當涉及本文使用的X和Y時，特異性是指相互作用中的結合伴侶X和Y僅相互識別，或相對于非伴侶而言彼此具有顯著更高的親和力，例如至少2、3、4、5、6、7、8、9、10倍的親和力。在一個實施方案中，X和Y之間的結合相互作用具有低解離常數。低解離常數的實例包括1-9x10-2s-1或更低，例如1-9x10-3s-1、1-9x10-4s-1、1-9x10-5s-1、1-9x10-6s-1或1-9x10-7s-1。特別合適的解離常數包括1x10-4s-1或更低，例如1x10-5s-1、1x10-6s-1或1x10-7s-1。盡管不希望受理論束縛，但據信低解離常數(也稱為解離速率)允許分子足夠穩定以使雙特異性蛋白質復合物有用，特別是在功能篩選測定中。在一個實施方案中，X和Y彼此的親和力為5nM或更強，例如4nM、3nM、2nM、1nM或更強。在一個實施方案中，X和Y彼此的親和力為900pM或更強，例如800、700、600、500、400、300、200、100或50pM或更強。在另一個實施方案中，X和Y彼此的親和力為10pM或更強，例如9、8、7、6或5pM。親和度是從相互作用的結合速率和解離速率所計算的值。本文所用的術語“親和力”是指分子(例如抗體)的單個結合位點與其結合伴侶(例如肽)之間的非共價相互作用的總和的強度。分子對其結合伴侶的親和力通常可以由平衡解離常數(KD)表示。親和力可以通過本領域已知的常規方法測量，包括本文所述的那些，諸如表面等離子體共振方法，特別是BIAcore。在一個實施方案中，平行或基本同時測試根據本公開的多個雙特異性蛋白質復合物。本文所用的同時是指在相同的分析中、例如在相同的“運行”中分析樣品/分子/復合物。在一個實施方案中，同時是指由儀器伴隨分析在基本上相同的時間分析信號輸出。該信號可能需要解卷積以解釋所獲得的結果。有利地，測試多個雙特異性蛋白質復合物允許更有效地篩選大量的雙特異性蛋白質復合物和鑒定新的和有趣的關系。顯然，針對有趣的CD22和CD79的靶抗原不同的可變區可以獲得生物功能中的細微差別。在一個實施方案中，通過使用如上所定義的多重測試法測試多個雙特異性蛋白質復合物，并對其進行一種或多種功能測定。本文使用的術語“生物功能”是指被測試的生物實體的天然活性或目的，例如細胞、蛋白質或類似物的天然活性。理想地，可以使用體外功能測定法來測試功能的存在，包括使用活哺乳動物細胞的測定。本文所用的天然功能包括異常功能，諸如與癌癥相關的功能。本文使用的相關“生物比較物”是指在針對雙特異性蛋白質復合物所采用的相同測定中用于評估活性以確定是否存在任何變化或新的活性或功能的合適實體。適用于A-X:Y-B的比較物可包括天然形式或以與雙特異性相同的形式存在的純化蛋白質(包括重組蛋白質)，即其中A和B是相同的實體，諸如A-X:Y-A或B-X:Y-B。或者，可以使用未復合形式的融合蛋白A-X或B-Y作為比較物。或者，可以采用不同形式(特別是如本文所述)的多個比較物。本領域技術人員能夠基于文獻中發現的公知常識或信息來識別和包括合適的對照/比較物。本文使用的術語“協同功能”是指未觀察到或高于當本公開的雙特異性蛋白質復合物的第一和第二蛋白沒有一起使用時所觀察到的生物活性，例如僅在雙特異性形式中觀察到的活性。因此，“協同”包括新的生物功能。本公開提供了至少特異性針對具有新的生物功能的CD22和CD79的分子。本文所用的新的生物功能是指直到兩種或更多種協同實體[蛋白A和蛋白B]結合在一起(作為雙特異性或其它方式)時才是明顯或不存在的功能或以前未鑒定的功能。本文所用的更高是指活性增加，包括從零增加，即雙特異性中的一些活性，其中個別未復合的雙特異性成分在相關功能測定中沒有活性，本文也稱為新活性或新生物功能。本文所用的更高還包括相比于個別未復合的雙特異性成分或二價結合結構域，在相關功能測定中雙特異性中的更多附加功能，例如相關活性中10％、20％、30％、40％、50％、60％、70％、80％、90％、100％、200％、300％或更高的增加。在一個實施方案中，新的協同功能是更高的抑制活性。在一個實施方案中，本發明的多特異性抗體分子具有比單獨或混合提供的針對CD22的二價結合結構域和針對CD79a的二價結合結構域的活性的總和更高的抑制活性。在一個實施方案中，結合對的第一結合伴侶X和第二結合伴侶Y中的至少一個獨立地選自肽和蛋白質；例如第一結合伴侶或第二結合伴侶是肽。合適的肽包括包含以下的組：GCN4，Fos/Jun(人和鼠Fos分別具有Uniprot編號P01100和P01101，人和鼠jun分別具有Uniprot編號P05412和P05627)，人流感血凝素(HA)，多組氨酸(His)，綠色熒光蛋白(GFP)和FLAG。也考慮了適用于本公開內容的其它肽，并且特別合適的肽是用于蛋白質純化的親和標簽，因為這樣的肽具有以高親和力結合其各自的結合伴侶的趨勢。本文所用的術語“肽”是指通過肽鍵連接的氨基酸的短聚合物，其中所述肽含有2至100個氨基酸，例如5至99，諸如6至98、7至97或8至96。在一個實施方案中，本公開中使用的肽是具有50個氨基酸殘基或更少，例如40、30、10個氨基酸殘基或更少的氨基酸序列。本公開中使用的肽具有足夠長度以適合目的，例如如果肽是接頭，則其需要適當長以允許其連接的片段發揮其生物功能；或者如果肽是結合伴侶，則其必須能夠特異性結合另一個實體，諸如抗體。在一個實施方案中，結合對的另一個結合伴侶(備選的第一或第二結合伴侶)是蛋白質。本文所用的蛋白質是指具有100個氨基酸或更多的氨基酸序列。在一個實施方案中，本文所用的“蛋白質”是指具有二級或三級結構的氨基酸序列。在一個實施方案中，雙特異性蛋白質復合物的第一蛋白A和/或第二蛋白B是抗體或抗體片段。這樣的雙特異性蛋白質復合物可以稱為雙特異性抗體復合物。在一個實施方案中，本公開的雙特異性抗體復合物中采用的每個抗體或片段包含一個結合位點。在融合蛋白(A-X或B-Y)中使用的全長抗體或抗體片段可以是單特異性的、多價的或雙特異性的。有利地，使用兩個雙特異性抗體或抗體片段允許本公開的分子、諸如本文所述的雙特異性抗體復合物潛在地對多達4種不同抗原具有特異性(即復合物可以是四特異性的)。這允許研究親合力類型效應。在一個實施方案中，本公開的分子或其成分(諸如第一融合蛋白A-X)中使用的抗體或抗體片段是單特異性抗體或抗體片段，例如Fab，Fab'，scFv或類似物，并且在特別是特異性針對CD22的。在一個實施方案中，本公開的分子或其成分(諸如第二融合蛋白B-Y)中使用的抗體或抗體片段是單特異性抗體或抗體片段，例如Fab，Fab'，scFv或類似物，特別是特異性針對CD79a和/或CD79b的。在一個實施方案中，本公開的分子或其成分(諸如第二融合蛋白B-Y)中使用的抗體或抗體片段是多價的，即具有兩個或更多個結合結構域。在一個實施方案中，本公開的分子或其成分(諸如第一融合蛋白A-X)中使用的抗體或抗體片段是單價的，并且在本公開的分子或其成分(諸如第二融合蛋白B-X)中使用的抗體或抗體片段是單價的。因此，在一個實施方案中，本公開的多特異性分子的結合結構域是單價的。因此，在一個實施方案中，本公開的多特異性分子的結合結構域是單價和單特異性的。在一個實施方案中，本公開的分子或其成分(諸如第一融合蛋白A-X)中使用的抗體或抗體片段是單價的，并且本公開的分子或其成分(諸如第二融合蛋白B-Y)中使用的抗體或抗體片段是多價的。在一個實施方案中，本公開的分子或其成分(諸如第一融合蛋白A-X)中使用的抗體或抗體片段是多價的，并且本公開的分子或其成分(諸如第二融合蛋白B-Y)中使用的抗體或抗體片段是單價的。在一個實施方案中，本公開的分子或其成分(諸如第一融合蛋白A-X)中使用的抗體或抗體片段是多價的，并且本公開的分子或其成分(諸如第二融合蛋白B-Y)中使用的抗體或抗體片段是多價的。在一個實施方案中，本公開分子或其成分(例如雙特異性抗體復合物)的第一抗體、第二抗體或第一和第二抗體二者可以是IgG形式，例如抗CD22和/或抗CD79抗體可以以IgG形式提供。在一個實施方案中，抗體片段選自：在第一融合蛋白(A-X)或第二融合蛋白(B-Y)中使用的片段抗原(Fab)片段，單鏈可變片段(scFv)和單結構域抗體(sdAb)，諸如scFv。有利地，小尺寸的scFv可以促進雙特異性抗體復合物的正確折疊。在一個實施方案中，本公開的雙特異性抗體復合物的第一抗體/片段(A)、第二抗體/片段(B)或第一和第二抗體/片段兩者可以是Fab。在一個實施方案中，本公開的雙特異性抗體復合物的第一、第二抗體/片段或第一和第二抗體/片段兩者都是VHH。在本公開的雙特異性復合物的上下文中使用的“融合蛋白”是指蛋白質，例如附接于結合伴侶的抗體或抗體片段。為了方便，本公開的雙特異性蛋白質復合物在本文中稱為A-X:Y-B。然而，該命名法并不旨在限制融合蛋白A-X和B-Y如何設計，因為我們的實驗表明，結合伴侶X和Y可以顛倒(即A-Y和B-X)而不會不利地影響該方法。因此，A和B以及X和Y是被稱為用于輔助本技術的解釋的標稱標簽。本文所用的“附接”是指通過接頭直接或間接連接(connected或joined)，諸如肽接頭，其實例在下文討論。直接連接包括融合在一起(例如肽鍵)或化學綴合。本文所用的“結合伴侶”是指結合對的一個組成部分。在一個實施方案中，結合伴侶的親和力高為5nM或更強，諸如900、800、700、600、500、400、300pM或更強。本文所用的“結合對”是指彼此特異性結合的兩個結合伴侶。結合對的實例包括肽和特異性針對其的抗體或結合片段，或酶和配體，或酶和該酶的抑制劑。在一個實施方案中，第一結合伴侶(X)選自：全長抗體，Fab，Fab'，scFv，肽和sdAb，其中sdAb的實例包括VH或VL或VHH。在一個實施方案中，第二伴侶(Y)選自全長抗體，Fab，Fab'，scFv，肽和sdAb，其中sdAb的實例包括VH或VL或VHH。在一個實施方案中，在A是抗體或其片段的情況下，第一結合伴侶(X)附接到第一抗體或抗體片段的重鏈或輕鏈的C末端，例如，第一結合伴侶附接到第一抗體或抗體片段的重鏈的C末端。在另一個實施方案中，在B是抗體或其片段的情況下，第二結合伴侶(Y)附接到第二抗體或抗體片段的重鏈或輕鏈的C末端，例如第二結合伴侶附接到第二抗體或抗體片段的重鏈的C末端。在一個實施方案中，X附接到抗體或片段(蛋白A)的重鏈的C末端，Y附接到抗體或片段(蛋白B)的C末端。在一個實施方案中，X通過接頭(諸如ASGGGG或ASGGGGSG)附接到抗體或片段(蛋白A)的重鏈的C末端，并且Y通過接頭(諸如ASGGGG或ASGGGGSG)附接到抗體或片段(蛋白B)的C末端。在一個實施方案中，第一或第二結合伴侶(X或Y)是肽。合適的結合對的實例可以包括GCN4(SEQIDNO：1)或其變體和52SR4(SEQIDNO：3)或其變體，其是特異性針對GCN4的scFv。在一個實施方案中，第一結合伴侶(標稱X)是GCN4(例如如SEQIDNO：1所示)或其變體(例如沒有His標簽)，第二結合伴侶(標稱Y)是特異性針對GCN4的scFv(例如如SEQIDNO：3所示)或其變體。在一個實施方案中，第一結合伴侶(標稱X)是特異性針對GCN4的sFv(例如如SEQIDNO：3所示)或其變體，并且第二結合伴侶(標稱Y)是GCN4(例如SEQIDNO：1所示)或其變體。GCN4變體包括與SEQIDNO：1具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％或98％、或99％同一性的氨基酸序列。GCN4變體還包括與由核苷酸序列SEQIDNO：2或在嚴格條件下與SEQIDNO：2雜交的核苷酸序列編碼的序列具有至少80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、或99％同一性的氨基酸。特異性針對GCN4的合適的scFv是52SR4(SEQIDNO：3)或其變體。52SR4的變體包括與SEQIDNO：3具有至少80％、或85％、或90％、或95％、或98％、或99％同一性的氨基酸序列。52SR4變體還包括與由核苷酸序列SEQIDNO：4或在嚴格條件下與SEQIDNO：2雜交的核苷酸序列編碼的序列具有至少80％、或85％、或90％、或95％、或98％、或99％同一性的氨基酸序列。本發明人已經發現單鏈抗體52SR4和肽GCN4是適合用于本公開的雙特異性蛋白質復合物的結合對。或者，可以將任何合適的抗體/片段和抗原(諸如肽)用作X和Y.在一個實施方案中，第一結合伴侶(X)和第二結合伴侶(Y)是蛋白質。在一個實施方案中，第一結合伴侶(X)是酶或其活性片段，第二結合伴侶(Y)是配體，或反之亦然。在一個實施方案中，第一結合伴侶(X)是酶或其活性片段，第二結合伴侶(Y)是該酶的抑制劑，或反之亦然。本文使用的“活性片段”是指氨基酸片段，其小于實體的整個氨基酸序列，并保持基本上相同的生物活性或相關生物活性，例如大于50％活性，諸如60％、70％、80％、85％、90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％。在另一個實施方案中，第一結合伴侶X是谷胱甘肽(GSH)，第二結合伴侶Y是谷胱甘肽-S-轉移酶(GST)，反之亦然。在另一個實施方案中，X是Fos，Y是Jun，或反之亦然。在另一個實施方案中，X是His，Y是抗His，或反之亦然。在另一個實施方案中，結合對是鈣調蛋白結合肽，Y是鈣調蛋白，或反之亦然。在另一個實施方案中，X是麥芽糖結合蛋白，Y是抗麥芽糖結合蛋白或其片段，或反之亦然。也考慮了其它酶-配體組合用于結合伴侶。還合適的是本領域已知的用于蛋白質純化的親和標簽，因為它們具有以高親和力結合其各自的結合伴侶的趨勢。在一個實施方案中，第一或第二結合伴侶(X或Y)是蛋白質或肽。在一個實施方案中，第一和第二融合蛋白包含一個或多個肽接頭。接頭可以并入融合蛋白中的各個位置。例如，可以在結合伴侶和與其附接的蛋白質之間引入接頭。在一個實施方案中，接頭是肽接頭。本文所用的術語“肽接頭”是指具有氨基酸序列的肽。一系列合適的肽接頭是本領域技術人員已知的。在一個實施方案中，肽接頭可以是合成來源的，即通過合成化學技術制備。在一個實施方案中，雙特異性蛋白質復合物的結合伴侶通過肽接頭與其各自的蛋白質連接。在一個實施方案中，融合蛋白是翻譯融合物，其是在包含由其表達融合蛋白的遺傳構建體的宿主細胞中表達的融合蛋白。在一個實施方案中，融合蛋白通過任選地經由肽接頭將A綴合至X或將B綴合至Y來制備。在一個實施方案中，肽接頭的長度為50個氨基酸或更少，例如20個氨基酸或更少。通常重組表達融合蛋白將更有效，因此可由宿主細胞表達的直接肽鍵或肽接頭可能是有利的。在一個方面，提供了產生本公開的雙特異性蛋白質復合物的方法，包括以下步驟：(a)產生附接于結合對的第一結合伴侶(X)的包含特異性針對CD22或CD79a和/或CD79b(A)的結合結構域的第一融合蛋白(A-X)；(b)產生附接于結合對的第二結合伴侶(Y)的包含特異性針對CD22或CD79a和/或CD79b(B)的結合結構域的第二融合蛋白(B-Y)；其中至少第一融合蛋白或第二融合蛋白包含特異性針對CD22的結合結構域，剩下的另一融合蛋白包含特異性針對CD79a和/或CD79b的結合結構域，和(c)將步驟a)和b)中制備的第一融合蛋白(A-X)和第二融合蛋白(B-Y)混合在一起。特別地，通過在體外混合A-X和B-Y來制備異二聚體系鏈束縛的雙特異性蛋白質復合物。因此，在一個實施方案中，該方法包括使A-X和B-Y接觸的體外混合步驟。因此，通常融合蛋白A-X和B-Y不共表達于相同的細胞中。這是有利的，因為其允許例如100種A-X融合蛋白和100種A-Y融合蛋白分開表達并任選地純化，并且通過隨后以各種排列混合這200種融合蛋白，可以提供10,000種異二聚體系鏈束縛的雙特異性蛋白質復合物。相比之下，現有技術方法需要雙特異性的共表達，因此對于10,000種復合物，需要10,000個轉染、表達和純化。結合伴侶X和Y彼此具有親和力，并且作為或棒和磁體的生物等價物，并將復合物保持在一起。有利地，這意味著融合蛋白A-X和Y-B可以容易地通過簡單地將融合蛋白混合在一起而組裝成雙特異性蛋白質復合物。因此，本公開的雙特異性蛋白質復合物具有模塊化結構，其允許容易地組裝兩種不同的蛋白，以便以例如網格樣方式產生具有不同抗原特異性組合的雙特異性蛋白質復合物的大組排列。這允許有效和系統篩選大量的雙特異性蛋白質復合物，以便檢測累加的、協同的或新的生物功能。給定X和Y對彼此是特異性的，這顯著降低了形成同二聚體的能力。X和Y在本文中統稱為結合對或結合伴侶。在一個實施方案中，X對其它X不具有高親和力。在一個實施方案中，Y對其它Y不具有高親和力。有利地，當X和Y不形成同二聚體時，這防止了不期望的單特異性蛋白質復合物的形成，增加了所需雙特異性蛋白質復合物的產量，并且消除了繁重的純化步驟以除去單特異性蛋白質復合物的需要。雙特異性蛋白質復合物的這種快速組裝、產率和/或純度的水平不能通過現有技術方法有效獲得，特別是現有技術的方法通常需要大量的純化步驟。有利地，X和Y成分允許包含由不同排列的融合蛋白組成的雙特異性蛋白質復合物的多元體以快速且容易地組裝。在一個實施方案中，蛋白A和B是抗體或抗體片段。當抗體或抗體片段作為復合物通過X和Y保持在一起時，這形成雙特異性抗體復合物。混合通常在X和Y可以相互作用的條件下進行。在一個實施方案中，將融合蛋白在細胞培養條件下在細胞培養基中孵育，例如將融合蛋白在37℃/5％CO2環境中孵育90分鐘。在一個實施方案中，本公開的融合蛋白在水性環境中混合，例如一種融合蛋白可以結合到固體表面諸如珠或板，而另一種融合蛋白可以被以水溶液/懸液的形式引入其中。固相允許容易地洗掉多余的成分和試劑。在一個實施方案中，兩種融合都不與固相附接而是簡單地混合在液體/溶液/培養基中。有利地，本公開的方法可用于制備異源對之間(即在第一融合蛋白[A-X]和第二融合蛋白[B-Y]之間)形成的復合物，其中同源對之間的相互作用(即兩個第一融合蛋白[A-X]之間或兩個第二融合蛋白[B-Y]之間)被最小化。因此，本發明的方法允許制備大量的雙特異性蛋白質復合物，同時具有最小或沒有同二聚體復合物的污染。使用現有技術的方法，這種純度和產率水平是不可能的。在一個實施方案中，形成的復合物不需要進一步的純化步驟。在一個實施方案中，形成的復合物需要一個純化步驟，例如柱層析。在一個實施方案中，所述方法還包括至少一個純化步驟，例如在表達根據本公開的融合蛋白之后。本文所用的“功能測定”是可用于確定經受測定條件的蛋白質復合物、抗體復合物或抗體混合物的一種或多種所需性質或活性的測定。合適的功能測定可以是結合測定，細胞凋亡測定，抗體依賴性細胞毒性(ADCC)測定，補體依賴性細胞毒性(CDC)測定，細胞生長或增殖抑制(細胞抑制作用)測定，細胞殺傷(細胞毒性效應)測定，細胞信號傳導測定，細胞因子產生測定，抗體生產和同種型轉換，和細胞分化測定。在一個實施方案中，可以使用體內測定，諸如動物模型，包括小鼠腫瘤模型、自身免疫疾病模型、病毒感染或細菌感染的嚙齒動物或靈長類動物模型等，來測試本公開的分子。在雙特異性抗體復合物的上下文中，根據本公開的雙特異性抗體復合物的功效可以通過本領域普通技術人員通常已知的方法與這些模型中的個體抗體或抗體(或片段)的混合物進行比較。功能測定可以根據需要重復多次，具有或不具有特定雙特異性抗體復合物的不同樣品，以增強結果的可靠性。可以采用本領域技術人員已知的各種統計學檢驗來鑒定統計學顯著的結果，從而鑒定具有生物功能的雙特異性抗體復合物，特別是鑒定用于本發明的多特異性分子的最佳可變區對。組合物和醫療用途在一個方面，提供了根據本公開的分子或成分，諸如融合蛋白，異二聚體系鏈束縛的雙特異性蛋白質復合物，包含本發明的分子的組合物，包括融合蛋白或所述雙特異性蛋白質復合物，如本文定義的多元體、陣列、文庫。在一個實施方案中，本公開的分子，例如本文所述的抗體，多特異性分子和雙特異性蛋白質復合物適合于治療應用，并且可以提供用于治療疾病的新療法。因此，在另一方面，提供了本發明的分子，例如上述的雙特異性蛋白質復合物，其用于治療。包括本文所述的雙特異性蛋白質復合物的本公開的分子適合于治療一系列疾病，諸如癌癥。本公開的分子，包括本文所述的多特異性分子和雙特異性蛋白質復合物，也特別適合于抑制B細胞功能，以便控制各種自身免疫疾病中的免疫和自身免疫反應。因此，本公開擴展到治療患者疾病的方法，包括施用治療有效量的本公開的分子，例如本公開的多特異性分子或雙特異性蛋白質復合物。在一個方面，提供了包含一種或多種本公開分子、例如本公開的多特異性分子的藥物組合物。組合物中可包括各種不同的組分，包括藥學上可接受的載體、賦形劑和/或稀釋劑。組合物可以任選地包含能夠改變本發明的多特異性分子群體的特征從而例如降低、穩定、延遲、調節和/或激活抗體功能的其它分子。組合物可以是固體或液體形式，并且尤其可以是粉末、片劑、溶液或氣霧劑的形式。本發明還提供了藥物或診斷組合物，其包含與一種或多種藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體組合的本發明的抗體分子或多特異性分子。因此，提供了本發明的多特異性分子用于治療和制造用于治療病理性病況或病癥的藥物的用途。病理學病況病理學病況或病癥可以例如選自感染(病毒、細菌、真菌和寄生蟲)，與感染相關的內毒素性休克，關節炎諸如類風濕性關節炎，哮喘諸如重癥哮喘，慢性阻塞性肺病(COPD)，骨盆炎性疾病，阿爾茨海默氏病，炎性腸病，克羅恩病，潰瘍性結腸炎，佩羅尼氏病，乳糜瀉，膽囊疾病，藏毛病，腹膜炎，銀屑病，血管炎，手術粘連，中風，I型糖尿病，萊姆病，腦膜腦炎，自身免疫性葡萄膜炎，中樞和周圍神經系統的免疫介導的炎性病癥，諸如多發性硬化，狼瘡(諸如系統性紅斑狼瘡)和吉蘭-巴雷綜合征，特應性皮炎，自身免疫性肝炎，纖維性肺泡炎，格雷夫斯病，IgA腎病，特發性血小板減少性紫癜，梅尼埃病，天皰瘡，原發性膽汁性肝硬化，結節病，硬皮病，韋氏肉芽腫病，其它自身免疫性疾病，胰腺炎，創傷(手術)，移植物抗宿主病，移植排斥，心臟病包括缺血性疾病諸如心肌梗塞以及動脈粥樣硬化，血管內凝血，骨吸收，骨質疏松，骨關節炎，牙周炎，胃酸過少癥和癌癥，包括乳腺癌，肺癌，胃癌，卵巢癌，肝細胞癌，結腸癌，胰腺癌，食管癌，頭頸癌，腎臟癌癥，特別是腎細胞癌，前列腺癌，肝癌，黑素瘤，肉瘤，骨髓瘤，成神經細胞瘤，胎盤絨毛膜癌，子宮頸癌和甲狀腺癌及其轉移形式。在一個實施方案中，所述病癥是癌癥，例如白血病，包括淋巴細胞白血病，諸如急性淋巴細胞白血病或慢性淋巴細胞白血病；或骨髓性白血病，諸如急性骨髓性白血病或慢性骨髓性白血病。在一個實施方案中，自身免疫性疾病包括：-急性播散性腦脊髓炎(adem)，急性壞死性出血性白質腦炎，艾迪生病，腎上腺皮質功能不全，皮質醇減少癥，斑禿，淀粉樣變性，強直性脊柱炎，脊柱關節炎，Strumpell-marie疾病，抗GBM/抗TBM腎炎，抗磷脂綜合征(aps)，自身免疫性血管性水腫，自身免疫性再生障礙性貧血，自身免疫性自主神經障礙，自身免疫性肝炎，自身免疫性高脂血癥，自身免疫性免疫缺陷，自身免疫性內耳疾病(AIED)，自身免疫性淋巴細胞增生性綜合征(ALPS)，Canale-Smith綜合征，自身免疫性心肌炎，自身免疫性卵巢炎，自身免疫性胰腺炎(AIP)，自身免疫性多內分泌腺綜合征(I、II&III型)，自身免疫性視網膜病變(AR)，自身免疫性血小板減少性紫癜(ATP)，自身免疫性甲狀腺疾病，自身免疫性蕁麻疹，軸突/神經元神經病變，巴洛病，白塞氏綜合征疾病，大皰性類天皰瘡，心肌病，卡斯特爾曼氏疾病，乳糜瀉，美洲錐蟲病(chagasdisease)，慢性炎性脫髓鞘性多發性神經病(CIDP)，慢性復發性多灶性骨髓炎(CRMO)，Churg-Strauss綜合征，瘢痕性類天皰瘡/良性粘膜類天皰瘡(CP)，克羅恩病，炎癥性腸病，結腸炎，腸炎，回腸炎，Cogans綜合征，冷凝集病，先天性心臟傳導阻滯，柯薩奇心肌炎，crest病，冷球蛋白血癥，脫髓鞘性神經病變，皰疹樣皮炎，杜氏病，皮肌炎，糖尿病，I型，盤狀紅斑狼瘡(DLE)，心肌梗死后綜合征，子宮內膜異位癥，大皰性表皮松解癥(EB)和耳聾(EBA)，嗜酸性胃腸炎，食管炎，嗜酸性筋膜炎，舒曼綜合征，結節性紅斑，實驗性變應性腦脊髓炎，伊文思綜合征，纖維性肺泡炎，巨細胞動脈炎(顳動脈炎)，巨細胞性心肌炎，腎小球性腎炎(非增殖性：局灶性節段性腎小球硬化和膜性腎小球腎炎。增殖性：IgA腎病)，肺出血-腎炎綜合征，具有多發性血管炎的肉芽腫病(GPA)(以前稱為韋氏肉芽腫病)，格雷夫斯病，吉蘭-巴雷綜合征，米勒費希爾綜合征，急性運動性軸突性神經病，急性運動感覺軸突性神經病，急性泛自主神經病，Bickerstaff的腦干腦炎，橋本氏腦炎，橋本甲狀腺炎，溶血性貧血，過敏性紫癜，妊娠皰疹，低丙種球蛋白血癥，特發性肺纖維化，特發性血小板減少性紫癜(ITP)，IgA腎病(IGAN)，berger綜合征，咽炎性腎小球腎炎，IgA天皰瘡，IgG4相關性硬化疾病，免疫調節不育，包涵體肌炎，胰島素依賴型糖尿病，間質性膀胱炎，艾薩克綜合征，神經性肌強直，幼年型關節炎，幼年型肌炎，川崎綜合征，蘭伯特伊頓綜合征，白細胞分裂性血管炎，扁平苔蘚，硬化萎縮性苔蘚，木質性結膜炎，線性IgA皮膚病(LAD)，類天皰瘡，紅斑狼瘡(SLE)，萊姆病，梅尼埃病，顯微多血管炎(MPA)，混合性結締組織病(MCTD)，單克隆γ病變，蠶食性角膜潰瘍，Mucha-Habermann疾病，多發性硬化癥，重癥肌無力，肌炎，發作性睡病，視神經脊髓炎(Devic病)，神經性肌強直，艾薩克綜合征(獲得性，副腫瘤性，遺傳性)，中性粒細胞減少癥，眼瘢痕性類天皰瘡，視神經炎，卵巢炎，視性眼陣攣-肌陣攣綜合征，睪丸炎，復發性風濕病，pandas(與鏈球菌相關的兒科自身免疫性神經精神障礙)，副腫瘤性自身免疫多器官綜合征(PAMS)，副腫瘤性小腦變性，副腫瘤性天皰瘡(PNP)，陣發性夜間血紅蛋白尿(PNH)，帕里龍貝格綜合征，Parsonnage-Turner綜合征，parsplanitis(周圍葡萄膜炎)，妊娠性類天皰瘡(PG)，尋常型天皰瘡(PV)，葉狀皰疹(PF)，周圍神經病，靜脈周圍腦脊髓炎，惡性貧血，Poems綜合征，結節性多動脈炎(PAN)，風濕性多肌痛，多發性肌炎，心肌梗塞后綜合征，心包切開術后綜合征，孕激素皮炎原發性膽汁性肝硬化，漢諾氏綜合征，原發性硬化性膽管炎(PSC)，硬化性膽管炎，銀屑病，銀屑病關節炎，壞疽性膿皮病，純紅細胞再生障礙，拉斯馬森腦炎，慢性局灶性腦炎(CFE)，雷諾現象，反應性關節炎，萊特爾綜合征，康復相關性視網膜病(RAR)，反射性交感神經營養不良，萊特爾綜合征，復發性多軟骨炎，不寧腿綜合征，腹膜后纖維化，風濕熱，類風濕性關節炎，結節病，施密特綜合征，鞏膜炎，硬皮病，系統性硬化病，舍格倫綜合征，精子&睪丸自身免疫，僵人綜合征，亞急性細菌性心內膜炎(SBE)，Susac綜合征，交感性眼炎，大動脈炎，顳動脈炎/巨細胞動脈炎，血栓閉塞性脈管炎，伯格氏病，血小板減少性紫癜(TTP)，托洛薩-亨特綜合征，橫貫性脊髓炎，潰瘍性結腸炎，未分化結締組織病(UCTD)，葡萄膜炎，風濕性多肌痛，大動脈炎，顳動脈炎，伯格氏病，皮膚血管炎，川崎病，結節性多動脈炎，白塞氏綜合征，變應性肉芽腫性血管炎，皮膚血管炎，過敏性紫癜，顯微多血管炎，韋氏肉芽腫病，高爾夫球性血管炎，水泡性皮膚病，Vitiligowegener肉芽腫病(現在稱為具有多發性血管炎的肉芽腫病(GPA))。在一個實施方案中，自身免疫性疾病選自包含以下的組或由以下組成的組：ANCA血管炎，IgA腎病(Berger's)，尋常型天皰瘡/大皰性類天皰瘡，ITP，原發性膽汁性肝硬化，自身免疫性甲狀腺炎(格雷夫斯病)，橋本氏病，狼瘡性腎炎，膜性腎小球腎炎(或膜性腎病)，APS，重癥肌無力，視神經脊髓炎，原發性舍格倫綜合征，自身免疫性中性粒細胞減少癥，自身免疫性胰腺炎，皮膚肌炎，自身免疫性葡萄膜炎，自身免疫性視網膜病，白塞氏病，IPF，系統性硬化病，肝纖維化，自身免疫性肝炎，原發性硬化性膽管炎，白癜風，肺出血-腎炎綜合征，肺泡蛋白沉著癥，慢性自身免疫性蕁麻疹，銀屑病，類風濕性關節炎，銀屑病關節炎，軸向脊椎關節炎，移植術(包括GvHD)，哮喘，COPD，巨細胞動脈炎，難治性自身免疫性血細胞減少癥，伊文思綜合征(自身免疫性溶血性疾病)，I型糖尿病，結節病，多發性肌炎，潰瘍性結腸炎，克羅恩病，乳糜瀉，原發性巨球蛋白血癥，局灶性節段性腎小球硬化癥，慢性萊姆病(萊姆疏螺旋體病)，扁平苔蘚，僵人綜合征，擴張型心肌病，自身免疫性(淋巴細胞性)卵巢炎，獲得性大皰性表皮松解癥，自身免疫性萎縮性胃炎，惡性貧血，特應性皮炎，動脈粥樣硬化，多發性硬化，拉斯馬森腦炎，吉蘭-巴雷綜合征，獲得性神經性肌強直，中風在一個實施方案中，所述病癥是癌癥，例如白血病，例如淋巴細胞白血病，例如急性淋巴細胞白血病或慢性淋巴細胞白血病；或骨髓性白血病，諸如急性骨髓性白血病或慢性骨髓性白血病；或淋巴瘤，諸如彌漫性大B細胞淋巴瘤或霍奇金淋巴瘤或非霍奇金淋巴瘤。本發明還提供了包含本公開的分子(諸如本文所述的多特異性分子)與一種或多種藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體組合的藥物或診斷組合物。因此，提供了本公開的分子(諸如本文所述的多特異性分子)用于治療和制造藥物的用途。組合物通常作為通常包括藥學上可接受的載體的無菌藥物組合物的一部分提供。本發明的藥物組合物可另外包含藥學上可接受的佐劑。本發明還提供了制備藥物或診斷組合物的方法，包括將本發明的多特異性分子與一種或多種藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體一起加入和混合。本文所用的術語“藥學上可接受的賦形劑”是指藥學上可接受的制劑載體、溶液或添加劑，以增強本公開的組合物的期望特征。賦形劑是本領域眾所周知的并且包括緩沖液(例如檸檬酸鹽緩沖液，磷酸鹽緩沖液，乙酸鹽緩沖液和碳酸氫鹽緩沖液)，氨基酸，尿素，醇，抗壞血酸，磷脂，蛋白質(例如血清白蛋白)，EDTA，氯化鈉，脂質體，甘露醇，山梨醇和甘油。溶液或懸浮液可以包封在脂質體或可生物降解的微球中。通常使用無菌制造方法以基本上無菌的形式提供制劑。這可包括通過過濾用于制劑的緩沖溶劑溶液，抗體在無菌緩沖溶劑溶液中的無菌懸浮液的生產和滅菌，以及通過本領域普通技術人員熟悉的方法將制劑分配到無菌容器中。藥學上可接受的載體本身不應誘導對接受組合物的個體有害的抗體的產生，并且不應是有毒的。合適的載體可以是大的、緩慢代謝的大分子，諸如蛋白質，多肽，脂質體，多糖，聚乳酸，聚乙醇酸，聚合氨基酸，氨基酸共聚物和無活性病毒顆粒。可以使用藥學上可接受的鹽，例如無機酸鹽，諸如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，磷酸鹽和硫酸鹽，或有機酸鹽，諸如乙酸鹽，丙酸鹽，丙二酸鹽和苯甲酸鹽。治療組合物中的藥學上可接受的載體可另外含有液體，諸如水、鹽水、甘油和乙醇。這樣的載體使得藥物組合物能夠配制成片劑，丸劑，糖錠，膠囊，液體，凝膠，糖漿，漿液和懸浮液，以供患者攝取。本公開的分子(諸如本文所述的多特異性分子)可以分散在溶劑中遞送，例如以溶液或懸浮液的形式。它可以懸浮在適當的生理溶液中，例如生理鹽水，藥理學上可接受的溶劑或緩沖溶液中。本領域已知的緩沖溶液可以每1ml水含有0.05mg至0.15mg乙二胺四乙酸二鈉，8.0mg至9.0mgNaCl，0.15mg至0.25mg聚山梨酯，0.25mg至0.30mg無水檸檬酸和0.45mg至0.55mg檸檬酸鈉，以達到約4.0至5.0的pH。如上所述，懸浮液可以例如由凍干抗體制備。藥學上可接受的載體的詳盡討論可在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPublishingCompany，N.J.1991)中獲得。本文所用的術語“治療有效量”是指治療、改善或預防靶向疾病或病況或顯示可檢測的治療或預防效果所需的治療劑的量。對于任何抗體，可以在細胞培養測定或動物模型中，通常在嚙齒動物、兔、狗、豬或靈長類動物中初始估計治療有效量。動物模型也可用于確定施用的合適的濃度范圍和途徑。這樣的信息然后可以用于確定用于在人中施用的有用劑量和途徑。對于人受試者，精確的治療有效量將取決于疾病狀態的嚴重性、受試者的一般健康狀況、受試者的年齡、體重和性別、飲食、給藥的時間和頻率、藥物組合、反應敏感性和對治療的耐受性/應答。該量可以通過常規實驗確定并且在臨床醫生的判斷范圍內。通常，治療有效量為0.01mg/kg至50mg/kg，諸如0.1mg/kg至20mg/kg。或者，劑量可以是每天1至500mg，諸如每天10至100、200、300或400mg。藥物組合物可以方便地以含有預定量的本發明活性劑的單位劑量形式提供。組合物可以單獨地施用給患者，或者可以與其他藥劑、藥物或激素組合(例如同時、順序或分開)施用。施用本公開的多特異性分子的劑量取決于待治療的病況的性質、存在的炎癥的程度以及抗體分子是被預防性使用還是治療現有病況。劑量的頻率將取決于多特異性分子的半衰期和其作用的持續時間。如果多特異性分子具有短的半衰期(例如2至10小時)，則可能有必要每天給予一個或多個劑量。或者，如果多特異性分子具有長的半衰期(例如2至15天)，則可能僅需要每天一次、每周一次或甚至每1或2個月一次給予劑量。在本公開中，最終制劑的pH與多特異性分子的等電點值不相似，因為如果制劑的pH為7，則8-9或更高的pI可能是合適的。盡管不希望受理論束縛，但據認為這可能最終提供具有改善的穩定性的最終制劑，例如抗體或片段保留在溶液中。本發明的藥物組合物可以通過任何數目的途徑施用，包括但不限于口服，靜脈內，肌內，動脈內，髓內，鞘內，心室內，透皮，經皮(例如參見WO98/20734)，皮下，腹膜內，鼻內，腸內，局部，舌下，陰道內或直腸途徑。無痛皮下注射器也可以用于施用本發明的藥物組合物。組合物的直接遞送通常通過皮下、腹膜內、靜脈內或肌內注射，或遞送到組織的間隙空間來完成。組合物也可以施用到感興趣的特定組織中。劑量治療可以是單劑量方案或多劑量方案。當產品用于注射或輸注時，其可以采取在油性或水性載體中的懸浮液、溶液或乳液的形式，并且其可以含有配制劑，諸如懸浮劑、防腐劑、穩定劑和/或分散劑。或者，多特異性分子可以是干燥形式，用于在使用前用合適的無菌液體重構。如果組合物通過使用胃腸道的途徑施用，組合物將需要含有保護抗體免于降解但是一旦其從胃腸道被吸收就釋放雙特異性蛋白質復合物的試劑。根據本公開的可霧化制劑可以例如作為包裝在箔包封中的單劑量單位(例如，密封塑料容器或小瓶)提供。每個小瓶含有一定體積、例如2ml的溶劑/溶液緩沖液的單位劑量。本文所用的術語“變體”是指與相應的野生型肽或蛋白質的氨基酸或核苷酸序列相比，含有至少一個氨基酸序列或核苷酸序列改變的肽或蛋白質。變體可以包含與相應的野生型肽或蛋白質至少80％、或85％、或90％、或95％、或98％或99％的序列同一性。然而，變體可以包含小于80％的序列同一性，條件是所述變體表現出與其相應的野生型肽或蛋白質基本相似的功能。在一個實施方案中，本公開的構建體是至少三特異性的。在這種情況下，進一步的特異性可以針對任何目標抗原，例如延長半衰期的抗原，諸如白蛋白或Fc新生兒受體(FcRn)；用于效應子功能(諸如激活或抑制Fc受體或共刺激分子)的抗原；組織或細胞靶向抗原；或幫助血液/腦屏障(BBB)轉移的抗原，諸如轉鐵蛋白受體或LRP1。本公開還擴展至組合物，諸如包含具有特定抗原特異性的所述新形式的藥物組合物。在另一方面，本公開包括所述形式和組合物在治療中的用途。本發明還提供了制備藥物或診斷組合物的方法，包括將本發明的抗體分子或多特異性分子與一種或多種藥學上可接受的賦形劑、稀釋劑或載體一起添加并混合。抗體分子或多特異性分子可以是藥物或診斷組合物中的唯一活性成分，或者可以伴有其它活性成分，包括其他抗體成分或非抗體成分諸如類固醇或其他藥物分子。藥物組合物適當地包含治療有效量的本發明的抗體。本文所用的術語“治療有效量”是指治療、改善或預防靶向疾病或病癥或顯示可檢測的治療或預防效果所需的治療劑的量。對于任何抗體，可以在細胞培養測定或動物模型中，通常在嚙齒動物、兔、狗、豬或靈長類動物中初始估計治療有效量。動物模型也可用于確定施用的適當的濃度范圍和途徑。這樣的信息然后可以用于確定用于在人中施用的有用劑量和途徑。對于人受試者，精確的治療有效量將取決于疾病狀態的嚴重性、受試者的一般健康狀況、受試者的年齡、體重和性別、飲食、施用的時間和頻率、藥物組合、反應敏感性和對治療的耐受性/應答。該量可以通過常規實驗確定并且在臨床醫生的判斷范圍內。通常，治療有效量為0.01mg/kg至500mg/kg，例如0.1mg/kg至200mg/kg，諸如100mg/Kg。藥物組合物可以方便地以每劑含有預定量的本發明活性劑的單位劑量形式提供。組合物可以單獨地施用給患者，或者可以與其他藥劑、藥物或激素組合(例如同時、順序或分開)施用。本文所用的藥劑是指當施用時具有生理作用的實體。本文所用的藥物是指在治療劑量下具有適當的生理作用的化學實體。在一個實施方案中，根據本公開的抗體或片段與免疫抑制劑治療(諸如類固醇，特別是潑尼松)一起使用。在一個實施方案中，根據本公開的抗體或片段與利妥昔單抗或其它B細胞療法一起使用。在一個實施方案中，根據本公開的抗體或片段與任何B細胞或T細胞調節劑或免疫調節劑一起使用。實例包括氨甲蝶呤、微苯酚鹽和硫唑嘌呤。施用本發明的抗體分子的劑量取決于待治療的病況的性質、存在的炎癥的程度以及抗體分子是被預防性使用還是治療現有病況。劑量的頻率將取決于抗體分子的半衰期和其作用的持續時間。如果抗體分子具有短的半衰期(例如2至10小時)，則可能有必要每天給予一個或多個劑量。或者，如果抗體分子具有長的半衰期(例如2至15天)和/或長期的藥效學(PD)譜(profile)，則可能僅需要每天一次、每周一次或甚至每1或2個月一次給予劑量。在一個實施方案中，劑量每兩周遞送一次，即每月兩次。在一個實施方案中，劑量被間隔開以允許在施用更遠劑量之前waine抗藥物(在這種情況下是抗抗體)應答。本文使用的半衰期意在指循環中分子的持續時間，例如在血清/血漿中。本文所用的藥效學是指根據本公開的分子的生物作用的譜，特別是持續時間。藥學上可接受的載體本身不應誘導對接受組合物的個體有害的抗體的產生，并且不應是有毒的。合適的載體可以是大的、緩慢代謝的大分子，諸如蛋白質，多肽，脂質體，多糖，聚乳酸，聚乙醇酸，聚合氨基酸，氨基酸共聚物和無活性病毒顆粒。可以使用藥學上可接受的鹽，例如無機酸鹽，例如鹽酸鹽，氫溴酸鹽，磷酸鹽和硫酸鹽，或有機酸鹽，諸如乙酸鹽，丙酸鹽，丙二酸鹽和苯甲酸鹽。治療組合物中的藥學上可接受的載體可另外含有液體，諸如水、鹽水、甘油和乙醇。另外，輔助物質，諸如潤濕劑或乳化劑或pH緩沖物質，可以存在于這樣的組合物中。這樣的載體使得藥物組合物能夠配制成片劑，丸劑，糖衣丸，膠囊，液體，凝膠，糖漿，漿液和懸浮液，以供患者攝取。適合的給藥形式包括適于腸胃外給藥的形式，通過注射或輸注，例如通過團注或連續輸注。當產品用于注射或輸注時，其可以采取在油性或水性載體中的懸浮液、溶液或乳液的形式，并且其可以含有配制劑，諸如懸浮劑、防腐劑、穩定劑和/或分散劑。或者，抗體分子可以是干燥形式，用于在使用前用合適的無菌液體重構。一旦配制，本發明的組合物可以直接施用于受試者。待治療的受試者可以是動物。然而，在一個或多個實施方案中，所述組合物適于施用于人類受試者。適當地，在根據本公開的制劑中，最終制劑的pH不類似于抗體或片段的等電點的值，例如如果蛋白質的pI在8-9或以上的范圍內，則制劑pH為7可能是合適的。盡管不希望受理論束縛，但據認為這可能最終提供具有改善的穩定性的最終制劑，例如抗體或片段保留在溶液中。在一個實例中，pH在4.0至7.0范圍內的藥物制劑包含：1至200mg/mL根據本公開的抗體分子，1至100mM緩沖液，0.001至1％表面活性劑，a)10至500mM的穩定劑，b)10至500mM的穩定劑和5至500mM的張度劑，或c)5至500mM的張度劑。本發明的藥物組合物可以通過任何數目的途徑施用，包括但不限于口服，靜脈內，肌內，動脈內，髓內，鞘內，心室內，透皮，經皮(例如參見WO98/20734)，皮下，腹膜內，鼻內，腸內，局部，舌下，陰道內或直腸途徑。無痛皮下注射器也可以用于施用本發明的藥物組合物。通常，治療組合物可以制備為注射劑，作為液體溶液或懸浮液。也可以制備適于在注射前溶解或懸浮在液體載體中的固體形式。組合物的直接遞送通常通過皮下、腹膜內、靜脈內或肌內注射，或遞送到組織的間隙空間來完成。組合物也可以施用到損傷中。劑量治療可以是單劑量方案或多劑量方案。應當理解，組合物中的活性成分將是抗體分子。因此，其將易于在胃腸道中降解。因此，如果組合物通過使用胃腸道的途徑施用，組合物將需要含有保護抗體免于降解但一旦其已經從胃腸道吸收就釋放抗體的試劑。藥學上可接受的載體的詳盡討論可在Remington'sPharmaceuticalSciences(MackPublishingCompany，N.J.1991)中獲得。在一個實施方案中，制劑作為用于局部施用(包括吸入)的制劑提供。合適的可吸入制劑包括可吸入粉末、含推進劑氣體的計量氣溶膠或不含推進劑氣體的可吸入溶液。根據本發明的含有活性物質的可吸入粉末可以僅由上述活性物質或上述活性物質與生理上可接受的賦形劑的混合物組成。這些可吸入粉末可以包括單糖(例如葡萄糖或阿拉伯糖)，二糖(例如乳糖，蔗糖，麥芽糖)，寡糖和多糖(例如葡聚糖)，多元醇(例如山梨醇，甘露醇，木糖醇)，鹽(例如氯化鈉，碳酸鈣)或這些彼此的混合物。適合使用單糖或二糖，使用乳糖或葡萄糖，特別是但不限于以其水合物的形式。用于在肺中沉積的顆粒需要小于10微米的顆粒尺寸，諸如1-9微米，例如1-5μm。活性成分(諸如抗體或片段)的粒度是最重要的。可用于制備可吸入氣溶膠的推進氣體是本領域已知的。合適的推進劑氣體選自烴諸如正丙烷、正丁烷或異丁烷和鹵代烴諸如甲烷、乙烷、丙烷、丁烷、環丙烷或環丁烷的氯化和/或氟化衍生物。上述推進氣體可以單獨使用或以其混合物使用。特別合適的推進氣體是選自TG11、TG12、TG134a和TG227的鹵代烷烴衍生物。在上述鹵代烴中，TG134a(1,1,1,2-四氟乙烷)和TG227(1,1,1,2,3,3,3-七氟丙烷)及其混合物是特別合適的。含推進劑氣體的可吸入氣溶膠還可含有其它成分，諸如助溶劑、穩定劑、表面活性劑(表面活性劑)、抗氧化劑、潤滑劑和調節pH的工具。所有這些成分在本領域中是已知的。根據本發明的含推進劑氣體的可吸入氣溶膠可含有至多5重量％的活性物質。本發明的氣溶膠含有例如0.002至5重量％，0.01至3重量％，0.015至2重量％，0.1至2重量％，0.5至2重量％或0.5至1重量％重量的活性成分。或者，對肺的局部給藥還可以是通過給予液體溶液或懸浮液制劑，例如使用裝置諸如噴霧器，例如連接到壓縮機的噴霧器(例如，連接到由PariRespiratoryEquipment，Inc.，Richmond，Va.制造的PariMaster(R)壓縮機的PariLC-JetPlus(R)霧化器)。本發明的抗體或多特異性分子可以分散在溶劑中遞送，例如以溶液或懸浮液的形式。其可以懸浮在合適的生理溶液中，例如鹽水或其它藥理學上可接受的溶劑或緩沖溶液中。本領域已知的緩沖溶液可以每1ml水含有0.05mg至0.15mg乙二胺四乙酸二鈉，8.0mg至9.0mgNaCl，0.15mg至0.25mg聚山梨酯，0.25mg至0.30mg無水檸檬酸和0.45mg至0.55mg檸檬酸鈉，以達到約4.0至5.0的pH。懸浮液可以使用例如凍干抗體。治療性懸浮液或溶液制劑還可以含有一種或多種賦形劑。賦形劑是本領域眾所周知的，包括緩沖液(例如檸檬酸鹽緩沖液，磷酸鹽緩沖液，乙酸鹽緩沖液和碳酸氫鹽緩沖液)，氨基酸，尿素，醇，抗壞血酸，磷脂，蛋白質(例如血清白蛋白)，EDTA，氯化鈉，脂質體，甘露醇，山梨醇和甘油。溶液或懸浮液可以包封在脂質體或可生物降解的微球中。通常使用無菌制造方法以基本上無菌的形式提供制劑。這可包括通過過濾用于制劑的緩沖溶劑/溶液，抗體在無菌緩沖溶劑溶液中的無菌懸浮液的生產和滅菌，以及通過本領域普通技術人員熟悉的方法將制劑分配到無菌容器中。根據本公開的可霧化制劑可以例如作為包裝在箔包封中的單劑量單位(例如，密封塑料容器或小瓶)提供。每個小瓶含有一定體積、例如2ml的溶劑/溶液緩沖液的單位劑量。本文公開的抗體可適于通過霧化遞送。還設想本發明的抗體可以通過使用基因治療來施用。為了實現這一點，將在適當的DNA成分控制下編碼抗體分子的重鏈和輕鏈的DNA序列引入患者，使得抗體鏈從DNA序列表達并原位組裝。在一個實施方案中，本公開的分子，諸如本文所述的雙特異性蛋白質復合物可用于功能改變目的抗原的活性。例如，雙特異性蛋白質復合物可以直接或間接中和、拮抗或激動所述一種或多種抗原的活性。本公開還擴展至包含本公開的分子或其成分的試劑盒。在一個實施方案中，試劑盒包含：a)包含與結合對(X)的第一結合伴侶附接的特異性針對CD22或CD79a和/或CD79b的第一抗體或抗體片段(A)的一個或多個融合蛋白(A-X)；和b)包含與結合對(Y)的第二結合伴侶附接的特異性針對CD22或CD79a和/或CD79b的第二抗體或抗體片段(B)的一種或多種融合蛋白(B-Y)，其中第二結合伴侶特異性針對第一結合伴侶；例如其中第一結合伴侶(X)是肽或多肽，并且第二結合伴侶(Y)是特異性針對其的抗體或抗體片段；其中所述第二結合伴侶Y特異性針對所述第一結合伴侶X，所述第二結合伴侶是例如特異性針對其的抗體或抗體片段；并且兩個結合伴侶的特異性相互作用(例如結合相互作用)形成異二聚體-系鏈，其將來自a)和b)的兩種融合蛋白物理地結合在一起以形成雙特異性蛋白質復合物；和其中A或B中的至少一個特異性針對CD22，另一個特異性針對CD79a和/或CD79b，和所述融合蛋白是復合的或非復合的形式。有利地，試劑盒可以包含本公開的雙特異性蛋白質復合物，或可以包含復合或非復合形式的融合蛋白。在前一種情況下，雙特異性蛋白質復合物準備好“開箱即用”，這提供了方便和易于使用，而在后一種情況下，可以根據使用者的要求通過使用組合不同的融合蛋白來組裝雙特異性蛋白質復合物。在另一個實施方案中，試劑盒還包含使用說明書。在另一個實施方案中，試劑盒還包含一種或多種用于進行一種或多種功能測定的試劑。在一個實施方案中，提供本公開的分子，包括融合蛋白、雙特異性蛋白質復合物或包含其的組合物用作實驗室試劑。其它方面在其它方面，提供了核苷酸序列，例如編碼如本文所述的構建體的DNA序列，包括如上定義的多特異性分子或融合蛋白。在一個實施方案中，提供了核苷酸序列，例如編碼本文所述構建體的DNA序列，包括根據本公開的多特異性分子或雙特異性蛋白質復合物或抗體。本文的公開內容還擴展至包含如上定義的核苷酸序列的載體。本文所用的術語“載體”是指能夠轉運與其連接的另一核酸的核酸分子。載體的實例是“質粒”，其是另外的DNA區段可以連接的環狀雙鏈DNA環。另一種類型的載體是病毒載體，其中額外的DNA區段可以連接到病毒基因組中。某些載體能夠在導入它們的宿主細胞(例如，具有細菌復制起點的細菌載體和附加型哺乳動物載體)中自主復制。其他載體(例如非附加型哺乳動物載體)可以整合到宿主細胞的基因組中，其中它們隨后與宿主基因組一起復制。在本說明書中，術語“質粒”和“載體”可以互換使用，因為質粒是載體最常用的形式。可以構建載體的一般方法、轉染方法和培養方法是本領域技術人員眾所周知的。在這方面，參考“CurrentProtocolsinMolecularBiology”，1999，F.M.Ausubel(ed)，WileyInterscience，NewYork和ColdSpringHarborPublishing生產的ManiatisManual。本文使用的術語“選擇性標記”是指其表達允許鑒定已經用含有標記基因的載體轉化或轉染的細胞的蛋白質。多種選擇性標記是本領域已知的。例如，通常選擇性標記基因賦予載體已經導入的宿主細胞對藥物諸如如G418、潮霉素或氨甲蝶呤的抗性。選擇性標記也可以是視覺上可識別的標記，諸如熒光標記。熒光標記的實例包括羅丹明，FITC，TRITC，AlexaFluors及其各種綴合物。還提供了包含一個或多個克隆或表達載體的宿主細胞，所述載體包含編碼本公開的抗體的一個或多個DNA序列。任何合適的宿主細胞/載體系統可以用于表達編碼本公開的抗體分子的DNA序列。可以使用細菌、例如大腸桿菌和其他微生物系統，或者也可以使用真核生物的、例如哺乳動物的宿主細胞表達系統。合適的哺乳動物宿主細胞包括CHO、骨髓瘤或雜交瘤細胞。本公開內容還提供了用于生產根據本公開的分子或其成分的方法，其包括在適于導致從編碼本公開的分子的DNA表達蛋白的條件下培養含有本公開的載體的宿主細胞，并分離該分子。包括本文所述的雙特異性蛋白質復合物的本公開的分子可用于診斷/檢測試劑盒。試劑盒可以例如包含對兩種抗原特異的雙特異性抗體復合物，兩種抗原均存在于相同的細胞類型上，并且其中只有在成功檢測到兩種抗原時才可進行陽性診斷。通過使用本公開的分子諸如本文所述的雙特異性抗體復合物而不是非復合形式的兩種分開的抗體或抗體片段，可以極大地增強檢測的特異性。在一個實施方案中，本公開的分子諸如雙特異性抗體復合物固定在固體表面上。固體表面可以例如是芯片或ELISA板。還提供了根據本發明的分子、例如本文所述的雙特異性蛋白質復合物用于在樣品中檢測第一和第二肽的存在的用途，其中所述分子用作檢測劑。本公開的分子諸如本文所述的雙特異性抗體復合物可以例如與熒光標記偶聯，所述熒光標記有助于檢測結合的抗體-抗原復合物。這種雙特異性抗體復合物可用于免疫熒光顯微鏡術。或者，雙特異性抗體復合物也可用于蛋白質印跡或ELISA。在一個實施方案中，提供了用于純化根據本公開的分子或其成分的方法在一個實施方案中，提供了用于純化根據本公開的分子或其成分的方法，其包括以下步驟：以非結合模式進行陰離子交換層析，使得雜質保留在柱上，并且抗體保持在未結合中。該步驟可以例如在約6-8的pH下進行。該方法可以進一步包括使用陽離子交換層析的初始捕獲步驟，例如在約4至5的pH下進行。該方法可以進一步包括另外的層析步驟，以確保產物和方法相關的雜質從產物流中適當地分離。純化方法還可以包括一個或多個超濾步驟，諸如濃縮和滲濾步驟。如上所用的“純化形式”意指至少90％的純度，例如91、92、93、94、95、96、97、98、99％w/w或更純。下文提供了本公開的序列。序列GCN4(7P14P)序列ASGGGRMKQLEPKVEELLPKNYHLENEVARLKKLVGERHHHHHHSEQIDNO:1其中粗體形式的氨基酸是任選的GCTAGCGGAGGCGGAAGAATGAAACAACTTGAACCCAAGGTTGAAGAATTGCTTCCGAAAAATTATCACTTGGAAAATGAGGTTGCCAGATTAAAGAAATTAGTTGGCGAACGCCATCACCATCACCATCACSEQIDNO:252SR4dsscFv序列DAVVTQESALTSSPGETVTLTCRSSTGAVTTSNYASWVQEKPDHLFTGLIGGTNNRAPGVPARFSGSLIGDKAALTITGAQTEDEAIYFCVLWYSDHWVFGCGTKLTVLGGGGGSGGGGSGGGGSGGGGSDVQLQQSGPGLVAPSQSLSITCTVSGFLLTDYGVNWVRQSPGKCLEWLGVIWGDGITDYNSALKSRLSVTKDNSKSQVFLKMNSLQSGDSARYYCVTGLFDYWGQGTTLTVSSAAAHHHHHHEQKLISEEDL—SEQIDNO:3GATGCGGTGGTGACCCAGGAAAGCGCGCTGACCAGCAGCCCGGGCGAAACCGTGACCCTGACCTGCCGCAGCAGCACCGGCGCGGTGACCACCAGCAACTATGCGAGCTGGGTGCAGGAAAAACCGGATCATCTGTTTACCGGCCTGATTGGCGGCACCAACAACCGCGCGCCGGGCGTGCCGGCGCGCTTTAGCGGCAGCCTGATTGGCGATAAAGCGGCGCTGACCATTACCGGCGCGCAGACCGAAGATGAAGCGATTTATTTTTGCGTGCTGTGGTATAGCGACCATTGGGTGTTTGGCTGCGGCACCAAACTGACCGTGCTGGGTGGAGGCGGTGGCTCAGGCGGAGGTGGCTCAGGCGGTGGCGGGTCTGGCGGCGGCGGCAGCGATGTGCAGCTGCAGCAGAGCGGCCCGGGCCTGGTGGCGCCGAGCCAGAGCCTGAGCATTACCTGCACCGTGAGCGGCTTTCTCCTGACCGATTATGGCGTGAACTGGGTGCGCCAGAGCCCGGGCAAATGCCTGGAATGGCTGGGCGTGATTTGGGGCGATGGCATTACCGATTATAACAGCGCGCTGAAAAGCCGCCTGAGCGTGACCAAAGATAACAGCAAAAGCCAGGTGTTTCTGAAAATGAACAGCCTGCAGAGCGGCGATAGCGCGCGCTATTATTGCGTGACCGGCCTGTTTGATTATTGGGGCCAGGGCACCACCCTGACCGTGAGCAGCGCGGCCGCCCATCACCATCACCATCACGAACAGAAACTGATTAGCGAAGAAGATCTGTAATAGSEQIDNO:4CD79b抗體Ab4447兔Ab4447VL區SEQIDNO:71兔Ab4447VL區SEQIDNO:72兔Ab4447VH區SEQIDNO:73兔Ab4447VH區SEQIDNO:74本公開內容還擴展至SEQIDNO：77的衍生物，其中一個或兩個半胱氨酸殘基被另一個氨基酸取代，例如絲氨酸，特別是其中第一個半胱氨酸被絲氨酸取代，而第二個半胱氨酸保持不變，或第一個半胱氨酸保持不變，而第二半胱氨酸被絲氨酸取代，或其中兩個半胱氨酸被絲氨酸取代。Ab4450兔Ab4450VL區SEQIDNO:81兔Ab4450VL區SEQIDNO:82兔Ab4450VH區SEQIDNO:83兔Ab4450VH區SEQIDNO:84本公開還擴展至SEQIDNO：87的衍生物，其中基序DG中的至少一個氨基酸被另一個氨基酸取代，例如基序突變為EG、DA或DS。CD22抗體Ab4120兔Ab4120VL區SEQIDNO:91兔Ab4120VL區SEQIDNO:92兔Ab4120VH區SEQIDNO:93兔Ab4120VH區SEQIDNO:94本公開還擴展至SEQIDNO：98的衍生物，其中半胱氨酸殘基被另一個氨基酸、例如絲氨酸取代。本公開還擴展至SEQIDNO：99的衍生物，其中半胱氨酸殘基被另一種氨基酸、例如絲氨酸取代。Ab4126兔Ab4126VL區SEQIDNO:101兔Ab4126VL區SEQIDNO:102兔Ab4126VH區SEQIDNO:103兔Ab4126VH區SEQIDNO:104本公開內容還擴展至SEQIDNO：108的衍生物，其中半胱氨酸被另一個氨基酸、例如絲氨酸取代。本公開內容還擴展至SEQIDNO：109的衍生物，其中半胱氨酸被另一個氨基酸、例如絲氨酸取代。本公開內容還擴展至SEQIDNO：110的衍生物，其中半胱氨酸被另一個氨基酸、例如絲氨酸取代。Ab4127兔Ab4127VL區SEQIDNO:111兔Ab4127VL區SEQIDNO:112兔Ab4127VH區SEQIDNO:113兔Ab4127VH區SEQIDNO:114本公開內容還擴展至SEQIDNO：117的衍生物，其中獨立地進行以下突變，例如DS是修飾的EA、DA或DT，并且DG被修飾為EG、DA或DS。在一個實施方案中，DS：DG序列是DS，EG；DS，DA；DS，DS；EA，DG；EA，EG；EA，DA；EA，DS；DA，DG；DA，EG；DA，DA；DA，DS；DT，DG；DT，EG；DT，DA；和DT，DS。本公開內容還擴展至SEQIDNO：118的衍生物，其中半胱氨酸被另一個氨基酸、例如絲氨酸取代。本公開內容還擴展至SEQIDNO：119的衍生物，其中半胱氨酸被另一個氨基酸、例如絲氨酸取代。Ab4128兔Ab4128VL區SEQIDNO:121兔Ab4128VL區SEQIDNO:122兔Ab4128VH區SEQIDNO:123兔Ab4128VH區SEQIDNO:124本公開內容還擴展至SEQIDNO：128的衍生物，其中半胱氨酸被另一個氨基酸、例如絲氨酸取代。本公開內容還擴展至SEQIDNO：129的衍生物，其中半胱氨酸被另一個氨基酸、例如絲氨酸取代。Ab4130兔Ab4130VL區SEQIDNO:131兔Ab4130VL區SEQIDNO:132兔Ab4130VH區SEQIDNO:133兔Ab4130VH區SEQIDNO:134本公開內容還擴展至SEQIDNO：139的衍生物，其中半胱氨酸被另一種氨基酸、諸如絲氨酸取代。本公開內容還擴展至SEQIDNO：139的衍生物，其中基序NS修飾為例如NA或NT。本公開內容還擴展至SEQIDNO：140的衍生物，其中基序NS修飾為例如NA或NT。Ab4132兔Ab4132VL區SEQIDNO:141兔Ab4132VL區SEQIDNO:142兔Ab4132VH區SEQIDNO:143兔Ab4132VH區SEQIDNO:144本公開內容還擴展至SEQIDNO：148的衍生物，其中半胱氨酸被另一種氨基酸、諸如絲氨酸取代。本公開內容還擴展至SEQIDNO：149的衍生物，其中半胱氨酸被另一種氨基酸、諸如絲氨酸取代。本公開內容還擴展至SEQIDNO：149的衍生物，其中基序NS修飾為例如NA或NT。血清白蛋白結合抗體抗白蛋白抗體的重鏈可變結構域(無ds)SEQIDNO：157抗白蛋白抗體的重鏈可變結構域(ds)SEQIDNO：158抗白蛋白抗體的輕鏈可變結構域(無ds)SEQIDNO：159抗白蛋白抗體的輕鏈可變結構域(ds)SEQIDNO：160人CD22SEQIDNO:161人CD79aSEQIDNO:162人CD79bSEQIDNO:163在本說明書的上下文中，“包含”被解釋為“包括”。包括某些元件的本公開的方面也旨在擴展到相關元件的“由......組成”或“基本上由......組成”的替代實施方案。在此可以采用積極引述的實施方案作為免責聲明的基礎。本文引用的所有參考文獻通過引用具體并入。參考文獻1.Ribosomedisplayefficientlyselectsandevolveshigh-affinityantibodiesinvitrofromimmunelibraries.HanesJ,JermutusL,Weber-BornhauserS,BosshardHR,PlückthunA.(1998)Proc.Natl.Acad.Sci.U.S.A.95,14130-141352.DirectedinVitroEvolutionandCrystallographicAnalysisofaPeptide-bindingSingleChainAntibodyFragment(scFv)withLowPicomolarAffinity.ZhandC,SpinelliS,LuginbuhlB,AmstutzP,CambillauC,PluckthunA.(2004)J.Biol.Chem.279,18870-188773.Antigenrecognitionbyconformationalselection.BergerC,Weber-BornhauserS,EggenbergerY,HanesJ,PluckthunA,BosshardH.R.(1999)F.E.B.S.Letters450,149-153實施例實施例中所用的術語Fab-Kd-Fab描述了具有式A-X:Y-B的雙特異性蛋白質復合物，其中：A-X是第一融合蛋白；Y-B是第二融合蛋白；X:Y是異二聚體系鏈；A包含特異性針對抗原(諸如CD22或CD79)的Fab片段；B包含特異性針對抗原(諸如CD22或CD79)的Fab片段；X是結合對的第一結合伴侶，諸如scFv；Y是結合對的第二結合伴侶，諸如肽；和:是X和Y之間的相互作用(諸如結合相互作用)。實施例1-產生Fab’-A(Fab-scFv[A-X])和Fab’-B(Fab-肽[B-Y)用于功能測定克隆策略通過PCR或基因合成產生側接限制性酶切位點DNA序列的抗體可變區DNA。這些位點是用于可變重鏈的HindIII和XhoI以及用于可變輕鏈的HindIII和BsiWI。這使得重鏈可變區適于連接到兩個重鏈載體(與FabB-Y連接的pNAFH和與FabA-Xds[二硫鍵穩定的]連接的pNAFH)，因為它們具有互補的限制性位點。這將可變區上游(或5')與鼠恒定區和肽Y(GCN4)或scFvX(52SR4)連接，產生整個閱讀框。將輕鏈克隆到標準的內部鼠類恒定κ載體(pMmCK或pMmCKS171C)中，其再次使用相同的互補的限制性位點。如果可變區分離自兔，則使用pMmCKS171C載體。通過使用位于整個開放閱讀框側翼的引物進行測序來確認克隆事件。培養CHO-S將懸浮CHOS細胞預先適應于補充有2mM(100x)glutamx的CDCHO培養基(Invitrogen)。在搖床培養箱(KunerAG，Birsfelden，Switzerland)上以140rpm搖動將細胞維持在對數生長期，并在補充有8％CO2的37℃下培養。電穿孔轉染在轉染前，使用CEDEX細胞計數器(InnovatisAG，Bielefeld，Germany)測定細胞數和存活率，將所需量的細胞(2x108個細胞/ml)轉移到離心錐形管中，并以1400rpm旋轉10分鐘。將沉淀的細胞重懸于無菌Earls平衡鹽溶液中，并以1400rpm再旋轉10分鐘。棄去上清液，將沉淀重懸浮至所需的細胞密度。載體DNA的最終濃度為400ug用于2x108細胞/ml的混合物并將800μl用移液管移至比色杯(Biorad)中并使用內部電穿孔系統電穿孔。將轉染的細胞直接轉移到含有富含2mMglutamx和抗生素抗有絲分裂(100X)溶液(1比500)的ProCHO5培養基的1X3L錐形瓶中。將細胞在設定為37℃，5％CO2和140rpm搖動的Kuhner搖床培養箱中培養。在轉染后24小時加入進料補充劑2g/LASF(AJINOMOTO)，溫度降至37℃進一步培養13天。在第4天，向培養物中加入3mM的丙酮酸鈉(n-BUTRICACID鈉鹽，SigmaB-5887)。在第14天，將培養物轉移到管中，并在4000rpm離心30分鐘后從細胞中分離上清液。將保留的上清液進一步通過0.22μmSARTOBRANPMillipore，隨后通過0.22μmγ金過濾器過濾。通過蛋白G-HPLC測定最終表達水平。大規模(1.0L)純化通過使用AKTAXpress系統和HisTrapExcel預包裝的鎳柱(GEHealthcare)的親和捕獲來純化Fab-A和Fab-B。將培養物上清液0.22μm無菌過濾，并且如果需要，在加載到柱上之前用弱酸或堿將pH調節至中性。使用含有15-25mM咪唑的二次洗滌步驟從鎳樹脂中置換任何弱結合的宿主細胞蛋白/非特異性His結合物。用10mM磷酸鈉，pH7.4+1MNaCl+250mM咪唑進行洗脫，收集2ml級分。將一個柱體積加入洗脫液中，將體系暫停10分鐘以收緊洗脫峰，并因此降低總洗脫體積。合并最干凈的級分并將緩沖液交換到PBS(Sigma)，pH7.4中并且0.22μm過濾。通過A280Scan，SE-HPLC(G3000方法)、SDS-PAGE(還原和非還原)和使用PTSEndosafe系統(針對內毒素)測定最終匯集物。實施例2-使用異二聚體系鏈雙特異性蛋白復合體形式的Fab’-A(Fab-scFv[A-X])和Fab’-b(Fab-肽[B-Y])來證實是CD79/CD22雙特異性而不是二價組合抑制Akt信號傳導將源自血小板血漿置換圓錐的人PBMC作為冷凍等分試樣存儲。在進行測定之前，將細胞解凍，在DMEM(LifeTechnologies)中洗滌并使其適應37℃/5％CO2環境。在此期間，通過在含有10％小牛血清和2mM谷氨酰胺的DMEM中稀釋等摩爾(200nM)量的對于細胞表面蛋白CD22和CD79b具有抗原特異性的Fab'-A(Fab-scFv)和Fab'-B(Fab-肽)產生雙特異性或二價抗體的網格。該網格如表4所示。表4：具有針對CD22和CD79b的特異性的抗體的雙特異性和二價組合的可能網格。其中X是scFv(52SR4)而Y是肽(GCN4)將Fab'A-X和Fab'B-Y一起孵育90分鐘(在37℃/5％CO2環境中)，然后與2.5×105個PBMC在V底96孔板中混合。然后將PBMC加雙特異性或二價組合一起孵育另外90分鐘。此后，通過在37℃下加入200nM的山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)8分鐘來激活B細胞。然后通過加入等體積的Cytofix緩沖液(BDBiosciences)停止信號傳導反應。然后將板在室溫下放置15分鐘，然后以500g離心5分鐘。從細胞沉淀中棄去過量的上清液，將細胞沉淀重新懸浮在流式緩沖液(PBS+1％BSA+0.01％NaN3)中并再次洗滌。然后將細胞在冰冷的PermBufferIII(BDBiosciences)中重懸浮30分鐘，然后在流式緩沖液中洗滌兩次。然后用熒光標記的抗CD20抗體(BDBiosciences)和熒光標記的抗磷酸Akt抗體染色細胞，所述熒光標記的抗磷酸Akt抗體識別蛋白質上473位的修飾的絲氨酸殘基。然后將板重懸浮并在室溫下在黑暗中孵育1小時。此后，將板再洗滌兩次并重懸于25μl流式緩沖液中。使用IntellicytHTFCTM流式細胞儀測量CD20和Akt的細胞表達。使用數據分析軟件包ForecytTM(Intellicyt)B細胞被鑒定為不同于其他細胞群體，并且計算每個孔的Akt水平的幾何平均值。然后將所有數據表示為最大反應(僅抗IgM)減去背景(僅細胞)的抑制百分數。CD22和CD79b的組合的相對效果顯示在表5中(↓＝抑制，↑＝刺激而)。表5：具有針對CD22和CD79b的特異性的抗體的雙特異性和二價組合抑制磷酸化Akt的相對效力的表。其中X是scFv(52SR4)而Y是肽(GCN4)該數據也以條形圖(圖1)的形式顯示：數據表示平均值，誤差條是95％置信區間。數據顯示，CD22與CD79b的組合可以抑制用抗IgM刺激的B細胞中的磷酸化Akt表達。相比之下，CD22與CD22的組合表現出升高的磷酸Akt表達水平。實施例3-使用異二聚體系鏈雙特異性蛋白復合體形式的Fab’-A(Fab-scFv[A-X])和Fab’-b(Fab-肽[B-Y])來證實是CD79/CD22雙特異性而不是二價組合抑制PLCγ2信號傳導。將源自血小板血漿置換圓錐的人PBMC作為冷凍等分試樣存儲。在進行測定之前，將細胞解凍，在DMEM(LifeTechnologies)中洗滌，并使其適應37℃/5％CO2環境。在此期間，通過在含有10％小牛血清和2mM谷氨酰胺的DMEM中稀釋等摩爾(200nM)量的對于細胞表面蛋白CD22和CD79b具有抗原特異性的Fab'-a(Fab-scFv[A-X])和Fab'-B(Fab-肽[B-Y])產生雙特異性或二價抗體的網格。該網格如表4所示。將Fab'A-X和Fab'B-Y一起孵育90分鐘(在37℃/5％CO2環境中)，然后與2.5×105個PBMC在V底96孔板中混合。然后將PBMC加雙特異性或二價組合一起孵育另外90分鐘。此后，通過在37℃下加入200nM的山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)8分鐘來激活B細胞。然后通過加入等體積的Cytofix緩沖液(BDBiosciences)停止信號傳導反應。然后將板在室溫下放置15分鐘，然后以500g離心5分鐘。從細胞沉淀中棄去過量的上清液，將細胞沉淀重新懸浮在流式緩沖液中并再次洗滌。然后將細胞在冰冷的PermBufferIII(BDBiosciences)中重懸浮30分鐘，然后在流式緩沖液中洗滌兩次。然后用熒光標記的抗CD20抗體(BDBiosciences)和熒光標記的抗磷酸PLCγ2抗體染色細胞，所述熒光標記的抗磷酸PLCγ2抗體識別蛋白質上759位的修飾的酪氨酸殘基。然后將板重懸浮并在室溫下在黑暗中孵育1小時。此后，將板再洗滌兩次并重懸于25μl流式緩沖液中。使用IntellicytHTFCTM流式細胞儀測量CD20和PLCγ2的細胞表達。使用數據分析軟件包ForecytTM(Intellicyt)B細胞被鑒定為不同于其他細胞群體，并且計算每個孔的PLCγ2水平的幾何平均值。然后將所有數據表示為最大反應(僅抗IgM)減去背景(僅細胞)的抑制百分數。CD22和CD79b的組合的相對效果顯示在表6中(↓＝抑制，↑＝刺激而)。表6：具有針對CD22和CD79b的特異性的抗體的雙特異性和二價組合抑制磷酸化的PLCγ2的相對效力的表。其中X是scFv而Y是肽該數據還可以表示為條形圖(圖2)，數據表示平均值，誤差條為95％置信區間。數據顯示，CD22與CD79b和CD79b與CD79b的組合均可抑制用抗IgM刺激的B細胞中的磷酸PLCγ2表達。相比之下，CD22與CD22的組合表現出升高的磷酸PLCγ2表達水平。實施例4-使用異二聚體系鏈雙特異性蛋白復合體形式的Fab’-A(Fab-scFv[A-X])和Fab’-b(Fab-肽[B-Y])來證實是CD79/CD22雙特異性組合抑制CD86表達。將源自血小板血漿置換圓錐的人PBMC作為冷凍等分試樣存儲。在進行測定之前，將細胞解凍，在DMEM(LifeTechnologies)中洗滌，并使其適應37℃/5％CO2環境。在此期間，通過在含有10％小牛血清和2mM谷氨酰胺的DMEM中稀釋等摩爾(200nM)量的對于細胞表面蛋白CD22和CD79b具有抗原特異性的Fab'-X(Fab-scFv)和Fab'-Y(Fab-肽)產生雙特異性或二價抗體的網格。該網格如表4所示。將Fab'A-X和Fab'B-Y一起孵育90分鐘(在37℃/5％CO2環境中)，然后與2.5×105個PBMC在V底96孔板中混合。然后將PBMC加雙特異性或二價組合一起孵育另外90分鐘。此后，通過在37℃下加入200nM的山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)24小時來激活B細胞。此后，將板置于冰上，并在冰冷的流式緩沖液(PBS+1％BSA+0.01％NaN3)中洗滌一次。然后用熒光標記的抗CD19抗體(BDBiosciences)和熒光標記的抗CD86抗體染色細胞，并在冰上在黑暗中孵育1小時。此后，將板再洗滌兩次并重懸于25μl流式緩沖液中。使用IntellicytHTFCTM流式細胞儀測量CD19和CD86的細胞表達。使用數據分析軟件包ForecytTM(Intellicyt)B細胞被鑒定為不同于其他細胞群體，并且計算每個孔的CD86水平的幾何平均值。然后將所有數據表示為最大反應(僅抗IgM)減去背景(僅細胞)的抑制百分數。CD22和CD79b的組合的相對效果顯示在表7中(↓＝抑制，↑＝刺激而)。表7：具有針對CD22和CD79b的特異性的抗體的雙特異性和二價組合抑制B細胞的CD86表達的相對效力的表。其中X是scFv(52SR4)而Y是肽(GCN4)該數據也以條形圖的形式顯示(圖3)，數據表示平均值，誤差條為95％置信區間。數據顯示，CD22與CD79b和CD79b與CD79b的組合都能抑制用抗IgM刺激的B細胞上的CD86表達。相比之下，CD22與CD22的組合表現出升高的CD86表達水平。實施例5-CD22和CD79b的抑制作用只有當抗體以雙特異性取向排列時才能再現將源自血小板血漿置換圓錐的人PBMC作為冷凍等分試樣存儲。在進行測定之前，將細胞解凍，在DMEM(LifeTechnologies)中洗滌，并使其適應37℃/5％CO2環境。在此期間，通過在含有10％小牛血清和2mM谷氨酰胺的DMEM中稀釋等摩爾(200nM)量的對于細胞表面蛋白CD22和CD79b具有抗原特異性的Fab'-X(Fab-scFv)和/或Fab'-Y(Fab-肽)產生雙特異性、二價或抗體混合物的組合。這些組合顯示在表8中。然后，對于滴定曲線實驗，將這些組合以1比2.5的稀釋度逐步稀釋8次，以產生用于該組合的劑量滴定。表8：對CD22和CD79b具有特異性的雙特異性、二價或混合物的網格。其中X是scFv(52SR4)而Y是肽(GCN4)將Fab'A-X和/或Fab'B-Y一起孵育90分鐘(在37℃/5％CO2環境中)，然后與2.5×105個PBMC在V底96孔板中混合。然后將PBMC加上Fab'A-X和/或Fab'B-Y組合一起孵育另外90分鐘。此后，通過在37℃下加入200nM的山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)8分鐘來激活B細胞。然后通過加入等體積的Cytofix緩沖液(BDBiosciences)停止信號傳導反應。然后將板在室溫下放置15分鐘，然后以500g離心5分鐘。從細胞沉淀中棄去過量的上清液，將細胞沉淀重新懸浮在流式緩沖液(PBS+1％BSA+0.01％NaN3)中并再次洗滌。然后將細胞在冰冷的PermBufferIII(BDBiosciences)中重懸浮30分鐘，然后在流式緩沖液中洗滌兩次。然后用熒光標記的抗CD20抗體(BDBiosciences)、識別473位的修飾的絲氨酸殘基的抗磷酸Akt抗體和識別759位的修飾的酪氨酸殘基的抗磷酸PLCγ2抗體染色細胞。然后將板重懸浮并在室溫下在黑暗中孵育1小時。此后，將板再洗滌兩次并重懸于25μl流式緩沖液中。使用IntellicytHTFCTM流式細胞儀測量CD20、Akt和PLCγ2的細胞表達。使用數據分析軟件包ForecytTM(Intellicyt)B細胞被鑒定為不同于其他細胞群體，并且計算每個孔的Akt和PLCγ2水平的幾何平均值。然后將所有數據表示為最大反應(僅抗IgM)減去背景(僅細胞)的抑制百分數。圖4和5顯示只有CD22和CD79b的雙特異性組合而不是CD22和CD79b抗體的混合物抑制磷酸化Akt和PLCγ2表達(數據表示平均值，誤差條是95％置信區間)。為了驗證用CD22和CD79b的雙特異性組合觀察到的抑制，滴定該組合以及CD22和CD79b抗體的混合物，并測量B細胞中總細胞內IkB(信號傳導讀出數據)和CD86(24小時后的激活標記)的抑制。從圖6中可以看出，如通過總IkB蛋白所測量的，CD22-X/CD79b-Y的組合而不是CD22-X/CD79b-X的組合能夠抑制抗IgM刺激后NF-κB信號激活。使用GraphpadPrism6使用4參數對數曲線擬合外推的IC50為7.5nM(數據表示平均值，誤差條是標準偏差)。另外，在24小時后，滴定CD22-X/CD79b-Y的組合而不是CD22-X/CD79b-X的組合能夠抑制抗IgM誘導的CD86在B細胞上的表達(參見圖7)。將源自血小板血漿置換圓錐的人PBMC作為冷凍等分試樣存儲。在進行測定之前，將細胞解凍，在DMEM(LifeTechnologies)中洗滌，并使其適應37℃/5％CO2環境。在此期間，通過在含有10％小牛血清和2mM谷氨酰胺的DMEM中稀釋等摩爾(500nM)量的Fab'-X(Fab-scFv)和Fab'-Y(Fab-肽)，產生對細胞表面蛋白CD22和CD79b具有抗原特異性的雙特異性組合。然后將這些組合以1比2.5的稀釋度逐步稀釋8次，以產生用于該組合的劑量滴定。將Fab'-X和Fab'-Y一起孵育90分鐘(在37℃/5％CO2環境中)，然后向V底96孔板中加入2.5×105個PBMC。然后將PBMC加入Fab'-X和Fab'-Y組合中并一起孵育另外90分鐘。此后，通過在37℃下加入200nM的山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)激活B細胞24小時。為了能夠檢測細胞表面激活標記物，將板置于冰上，在冰冷的流式緩沖液(PBS+1％BSA+0.01％NaN3)中洗滌一次。然后用熒光標記的抗CD19抗體(BDBiosciences)和熒光標記的抗CD86抗體染色細胞，并在冰上在黑暗中孵育1小時。此后，將板再洗滌兩次并重懸于25ul流式緩沖液中。使用IntellicytHTFCTM流式細胞儀測量CD19和CD86的細胞表達。使用數據分析軟件包ForecytTM(Intellicyt)B細胞被鑒定為不同于其他細胞群體，并且計算每個孔的CD86水平的幾何平均值。然后將所有數據表示為最大反應(僅抗IgM)減去背景(僅細胞)的抑制百分數。從圖7中可以看出，CD22-X/CD79b-Y的組合的滴定能夠在24小時后抑制抗IgM誘導的B細胞上CD86表達。使用GraphpadPrism6使用4參數對數曲線擬合外推的IC50為10.3nM(數據表示平均值，誤差棒為標準偏差)。實施例6-可用不同抗體V區再現CD22和CD79b雙特異性蛋白的抑制作用免疫：通過基因合成或商業來源獲得編碼所選抗原的DNA，并克隆到具有強組成型啟動子的表達載體中。然后使用內部電穿孔系統將質粒DNA轉染到Rab-9兔成纖維細胞(CRL-1414TM)中。二十四小時后，通過流式細胞術檢查細胞的抗原表達，并在液氮中以等分試樣冷凍直至使用。通過在相同細胞上共表達或制備單一或多個轉染細胞的混合物，每只兔免疫多達6種抗原。用3劑量的細胞免疫兔。抗體發現：使用與Zubler等人(1985)描述的方法類似的方法制備B細胞培養物。簡言之，將來自免疫兔的脾或PBMC衍生的B細胞以約2000-5000個細胞/孔的密度在具有200μl/孔RPMI1640培養基(GibcoBRL)的條形碼96孔組織培養板中在37℃下、在5％CO2氣氛中培養7天，所述RPMI1640培養基補充有10％FCS(PAAlaboratoriesltd)，2％HEPES(SigmaAldrich)，1％L-谷氨酰胺(GibcoBRL)，1％青霉素/鏈霉素溶液(GibcoBRL)，0.1％β-巰基乙醇(GibcoBRL)，3％激活的脾細胞培養物上清液和γ照射的突變體EL4鼠胸腺瘤細胞(5×104個/孔)。使用HEK293細胞并使用基于均勻熒光的結合測定來測定B細胞培養物上清液中抗原特異性抗體的存在，所述HEK293細胞使用免疫兔用的抗原共轉染。篩選涉及使用MatrixPlatemate液體處理器將10ul來自條形碼96孔組織培養板的上清液轉移到含有用靶抗原轉染的HEK293細胞(約3000個細胞/孔)的條形碼384孔黑壁測定板中。用山羊抗兔IgGFcγ特異性Cy-5綴合物(Jackson)顯示結合。在AppliedBiosystems8200細胞檢測系統上讀板。初次篩選后，使用AvisoOnyx命中挑取機器人將陽性上清液固定在96孔條形碼母板上，并將細胞培養板中的B細胞在-80℃冷凍。然后在基于均勻熒光的結合測定中，在分別用抗原轉染的HEK293細胞和用重組蛋白作為抗原來源的SuperavidinTM珠(BangsLaboratories)上篩選母板。這是為了確定每個孔的抗原特異性。為了允許從感興趣的孔的選擇中回收抗體可變區基因，進行解卷積步驟以使得能夠鑒定含有B細胞的異質群體的給定孔中的抗原特異性B細胞。這是使用熒光聚焦方法(Clargo等人，2014.Mabs2014Jan1:6(1)143-159；EP1570267B1)實現的。簡言之，將來自陽性孔的分泌免疫球蛋白的B細胞與用靶抗原轉染的HEK293細胞或用生物素化的靶抗原包被的鏈霉抗生物素蛋白珠(NewEnglandBiolabs)和1:1200最終稀釋度的山羊抗兔Fcγ片段特異性FITC綴合物(Jackson)混合。在37℃下靜態孵育1小時后，由于圍繞B細胞的熒光暈的存在，可以鑒定抗原特異性B細胞。然后使用奧林巴斯顯微鏡鑒定的多個這些個體B細胞克隆用Eppendorf微操作器挑取并沉積到PCR管中。熒光聚焦方法也用于從直接來自免疫兔的骨髓的B細胞的異質群體中鑒定抗原特異性B細胞。通過使用重鏈和輕鏈可變區特異性引物的逆轉錄(RT)-PCR從單細胞中回收抗體可變區基因。進行兩輪PCR、巢式二級PCR在3'和5'末端引入限制性位點，允許將可變區克隆到小鼠Fab-X和Fab-Y(VH)或小鼠κ(VL)哺乳動物表達載體中。將Fab-X和Fab-Y表達載體的重鏈和輕鏈構建體使用Fectin293(LifeTechnologies)共轉染到HEK-293細胞中或使用Expifectamine(LifeTechnologies)Expi293細胞中，并在6孔組織中表達重組抗體培養板的體積為5ml。在5-7天表達后，收獲上清液。在對用抗原轉染的HEK293細胞和包被有重組蛋白或抗原轉染的HEK細胞的SuperavidinTM珠(BangsLaboratories)的基于均勻熒光的結合測定中測試上清液。這是為了確認克隆的抗體的特異性。生產小規模FabA-X和FabB-Y(小規模(50mL)Expi293轉染)將Expi293細胞在Expi293TM表達培養基中常規地繼代培養至終濃度為0.5×106個活細胞/mL，并在軌道搖床培養箱(Multitron，InforsHT)中以120rpm，8％CO2和37℃培養。在轉染當天，使用自動化細胞計數器(Vi-CELL，BeckmanCoulter)測量細胞活力和濃度。為了達到2.5×106個活細胞/mL的最終細胞濃度，將適當體積的細胞懸浮液加入到無菌的250mL錐形瓶中，通過加入新鮮的、預熱的Expi293TM表達培養基來達到42.5mL的體積每50mL轉染。為了為每次轉染制備脂質-DNA復合物，將總共50μg的重鏈和輕鏈質粒DNA在I培養基(LifeTechnologies)中稀釋至總體積為2.5mL，并將135μL的ExpiFectamineTM293試劑(LifeTechnologies)在I培養基中稀釋至總體積為2.5mL。將所有稀釋液輕輕混合并在室溫下孵育不超過5分鐘，然后將每種DNA溶液加入各自稀釋的ExpiFectamineTM293試劑中，以獲得5mL的總體積。輕輕混合DNA-ExpiFectamineTM293試劑混合物，并在室溫下孵育20-30分鐘，以形成DNA-ExpiFectamineTM293試劑復合物。在DNA-ExpiFectamineTM293試劑復合物孵育完成后，將5mLDNA-ExpiFectamineTM293試劑復合物加入每個搖瓶中。將搖瓶在軌道搖床培養箱(Multitron，InforsHT)中以120rpm，8％CO2和37℃培養。轉染后約16-18小時，向每個搖瓶中加入250μL的ExpiFectamineTM293轉染增強子1(LifeTechnologies)和2.5mL的ExpiFectamineTM293轉染增強子2(LifeTechnologies)。轉染后7天收獲細胞培養物。將細胞轉移到50mL旋轉管(Falcon)中并以4000rpm離心30分鐘，然后通過0.22μmStericup(MerckMillipore)無菌過濾。將澄清和無菌過濾的上清液儲存在4℃。通過蛋白G-HPLC測定最終表達水平。小規模(50ml)純化：使用小規模基于真空的純化系統通過親和捕獲分別純化Fab-X和Fab-Y二者。簡言之，將50ml培養物上清液0.22μm無菌過濾，然后加入500μLNiSepharose珠(GEHealthcare)。然后將上清液珠混合物翻滾約1小時，然后通過施加真空除去上清液。然后用洗滌液1(50mM磷酸鈉、1MNaCl，pH6.2)和洗滌液2(0.5MNaCl)洗滌珠。用50mM乙酸鈉，pH4.0+1MNaCl進行洗脫。將洗脫的級分緩沖液交換到PBS(Sigma)，pH7.4中和0.22μm過濾。通過A280掃描，SE-UPLC(BEH200方法)、SDS-PAGE(還原和未還原)和使用PTSEndosafe系統(對于內毒素)測定最終匯集物。將源自血小板血漿置換圓錐的人PBMC作為冷凍等分試樣存儲。在進行測定之前，將細胞解凍，在RPMI1640(LifeTechnologies)中洗滌，并使其適應37℃/5％CO2環境。在此期間，通過在含有10％胎牛血清、50單位/mL青霉素、50μg/ml鏈霉素和2mM谷氨酰胺的RPMI1640中稀釋等摩爾(200nM)量的對細胞表面蛋白質CD22和CD79b具有抗原特異性的Fab'-X(Fab-scFv)和/或Fab'-Y(Fab-肽)產生雙特異性、二價或抗體混合物的組合。3種不同的CD79bFab-Y和3種不同的CD22Fab-X的這些組合顯示在表9中。表9：具有針對CD22和CD79b的特異性的雙特異性蛋白的網格。其中X是scFv(52SR4)而Y是肽(GCN4)將Fab'A-X和Fab'B-Y一起孵育60分鐘(在37℃/5％CO2環境中)，然后與2.5×105個PBMC在V底96孔板中混合。然后將PBMC加上Fab'A-X和/或Fab'B-Y組合一起孵育另外90分鐘。此后，通過在37℃下加入12.5μg/ml的山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)10分鐘來激活B細胞。然后通過加入等體積的Cytofix緩沖液(BDBiosciences)停止信號傳導反應。然后將板在室溫下放置15分鐘，然后以500g離心5分鐘。從細胞沉淀中棄去過量的上清液，將細胞沉淀重新懸浮在流式緩沖液(PBS+1％BSA+0.1％NaN3+2mMEDTA)中并再次洗滌。然后將細胞在冰冷的PermBufferIII(BDBiosciences)中重懸浮30分鐘，然后在流式緩沖液中洗滌兩次。然后用熒光標記的抗CD20抗體(BDBiosciences)和識別759位上修飾的酪氨酸殘基的抗磷酸PLCγ2抗體染色細胞。然后將平板重懸浮并在室溫下在黑暗中孵育1小時。此后，將板再洗滌兩次并重懸于40μl流式緩沖液中。使用IntellicytHTFCTM流式細胞儀測量CD20和PLCγ2的細胞表達。使用數據分析軟件包ForecytTM(Intellicyt)B細胞被鑒定為不同于其他細胞群體，并且計算每個孔的PLCγ2水平的幾何平均值。然后將所有數據表示為最大反應(僅抗IgM)減去背景(僅細胞)的抑制百分數。從圖8中可以看出，數據顯示使用所有不同的抗體V區的CD22與CD79b的組合可以抑制用抗IgM刺激的B細胞中的磷酸化PLCγ2表達。實施例7：網格篩選大組異二聚體系鏈束縛的蛋白質復合物來鑒定新的雙特異性抗體靶簡介：在較早實施例中雙特異性形式和篩選方法的成功驗證之后，篩選擴展到更大數量的抗原對。產生針對在B細胞上表達的23種不同抗原的一組抗體可變(V)區。使用Fab-Kd-Fab[即A-X:Y-B，其中A和B是Fab片段]形式，形成異二聚體系鏈束縛的蛋白質復合物的網格，代表315種不同抗原對組合中的每一種的多種V區組合。在高通量流式細胞術測定中篩選這些組合調節BCR(B細胞受體)信號傳導的能力，以選擇用于用雙特異性抗體干預的新靶對。如實施例6中所述分離抗體。篩選測定使用設定為37℃的水浴將供體PBMC快速解凍，并小心地轉移到50mlFalcon管中。然后將它們在測定培養基中逐滴稀釋至5ml，以使滲透性休克最小化。然后將細胞小心稀釋至20ml，然后加入最終的培養基稀釋劑以使體積為50ml。然后將細胞以500g離心5分鐘，然后除去上清液并將細胞重懸于1ml培養基中。然后計數細胞并稀釋至1.66×106個細胞/ml，然后將每孔30μl分配到V-底TC板中，得到5.0×104個細胞/孔的最終測定濃度。然后將細胞板覆蓋存儲于37℃，5％CO2培養箱中，直到需要它們，給予它們至少1小時休息。將Fab-X和Fab-Y試劑在測定培養基中以最終測定濃度的5倍等摩爾比混合，并在37℃，5％CO2下孵育90分鐘。在96孔U形底聚丙烯板中制備樣品，并在孵育期間覆蓋。將10μl的5xFab-KD-Fab混合物加入到含有細胞的合適的測試孔中，并通過以1000rpm搖動混合30秒，然后在37℃，5％CO2下孵育90分鐘。然后用10μl抗人IgM刺激細胞。刺激的最終測定濃度根據測定面板讀出數據而變化，以三種抗體混合物A、B和C(下文中詳述)以50μg/ml(混合物A&C)或25μg/ml(混合物B)的最終測定濃度刺激。然后將測定板在1000rpm下溫和混合30秒，然后在37℃，5％CO2孵育5分鐘(抗體混合物A和C)或2分鐘(抗體混合物B)。通過向所有孔中加入150μl冰冷的BDCytoFix來終止測定，并在室溫下孵育15分鐘。然后將固定的細胞以500g離心5分鐘以沉淀細胞，并使用BioTekELx405板洗滌器除去上清液。通過以2400rpm渦旋平板30秒來重懸沉淀。然后通過加入100μl冰冷的BD細胞透化緩沖液III在4℃下使細胞透化30分鐘。然后將細胞在100μlFACS緩沖液中洗滌，并在500g離心5分鐘。通過ELx405再次去除上清液，然后使用ELx405快速分配200μlFACS緩沖液以洗去任何殘余的透化緩沖液。再次將細胞以500g旋轉，通過倒置除去上清液。在前述旋轉步驟期間，在FACS緩沖液中制備抗體混合物并保持屏蔽光。然后通過渦旋(2400RPM，30秒)將細胞重懸浮，然后向所有孔中加入20μl抗體混合物，并將板在1000rpm下搖動30秒。然后將細胞在室溫下在黑暗中孵育60分鐘。然后將細胞在200μlFACS緩沖液中用500g旋轉洗滌兩次，并在每個步驟后除去上清液。最后，通過在2400rpm渦旋30秒來重懸細胞，然后加入最終20μlFACS緩沖液。然后在IntellicytHTFC/iQue儀器上讀板。FACS緩沖液＝PBS+1％BSA+0.05％NaN3+2mMEDTA抗體混合液A＝1:2CD20PerCp-Cy5.5(BDBiosciences)+1:5PLCγ2AF88+1:10AktAF647+1:50ERK1/2PE(稀釋于FACS緩沖液中)。抗體混合液B＝1:2CD20PerCp-Cy5.5(BDBiosciences)+1:5SykPE+1:5BLNKAF647(稀釋于FACS緩沖液中)抗體混合液C＝1:5CD20PerCp-Cy5.5(Biolegend)+1:5PLCγ2AF488+1:10AktAF647+1:5SykPE(稀釋于FACS緩沖液中)試劑供應商目錄號抗人IgMSouthernBiotech2022-14CytoFixBDBiosciences554655PermBufferIIIBDBiosciences558050抗Akt(pS473)AF647BDBiosciences561670抗SYK(pY348)PEBDBiosciences558529抗PLCγ2(pY759)AF488BDBiosciences558507抗BLNK(pY84)AF647BDBiosciences558443抗ERK1/2(pT202/pY204)PEBDBiosciences561991抗人CD20PerCp-Cy5.5BDBiosciences558021抗人CD20AF488BDBiosciences558056抗人CD20PerCp-Cy5.5Biolegend340508磷酸鹽緩沖液(PBS)FisherScientific10562765RPMI1640LifeTechnologies31870胎牛血清(FCS)LifeTechnologies16140GlutamaxLifeTechnologies35050青霉素/鏈霉素(P/S)LifeTechnologies15070EDTASigma03690疊氮化鈉(NaN3)SigmaS2002牛血清白蛋白(BSA)SigmaA1470用抗體混合物A和B或單獨的C篩選Fab-X+Fab-Y組合。所有篩選在來自2個不同血液供體的錐細胞上進行。使用市售的軟件工具捕獲和評價數據。將總共2500個Fab-X+Fab-Y組合篩選至315種不同的抗原組合。結果計算了每個Fab-Kd-Fab[即A-X:Y-B，其中A和B是Fab片段]組合對BCR信號傳導級聯蛋白的磷酸化的誘導的抑制百分數，在本實施例中尋找抑制B細胞功能的抗原的新組合，陽性組合的標準被設定為V區的至少一個組合對至少兩種磷酸讀出數據的至少30％的抑制。根據該閾值，在315個檢查的組合中有11個新抗原對組合滿足所需標準。這代表3.5％的命中率，證明了篩選大量組合以找到具有所需活性的組合的重要性以及CD79b和CD22的組合的活性有多么的稀有。圖10-12顯示了抗原網格交叉特異性的數據。值分別為Syk、PLCγ2和AKT的磷酸化的抑制百分數(激活則為負值)，并且代表所評估的多個V區組合的平均值。測試了315種不同的抗原組合，并且可以看出，不同抗體組合對BCR信號傳導的影響變化顯著，從強抑制例如Fab-X上的抗原2(CD79b)與Fab-Y上的抗原3(CD22)(對磷酸Syk的69.66％抑制)和Fab-Y上的抗原2(CD79b)與Fab-X上的抗原3(CD22)的組合(對磷酸Syk的52.32％抑制，示于圖11中)至激活例如X上的抗原6和Y上的抗原11(磷酸Syk的負的118.10％，圖11)。代表圖10-12中所示的平均％值的每個數據點被針對Fab-X上的抗原2(CD79b)和Fab-Y上的抗原3(CD22)顯示于圖13中。在這種情況下，評估了不同抗體V區的23種不同組合。替代取向形式(即Fab-Y上的抗原2(CD79b)和Fab-X上的抗原3(CD22))的相同抗原組合被顯示于圖14中。在這種情況下，評估了不同抗體V區的9種不同組合。所有V區顯示抑制，但有利地該方法也可用于選擇最佳V區組合。實施例8：比較Fab-Kd-Fab篩選形式與分子連接的雙特異性BYbe形式的抗原CD79b加上抗原CD22共靶向活性。簡介：為了檢查在Fab-Kd-Fab異二聚體系鏈束縛的篩選復合物中鑒定的CD79b/CD22靶對活性可以在替代的治療性分子連接形式中轉化為類似的所需活性，抗原CD79b特異性(VR4447)和抗原CD22特異性(VR4130)以BYbe格式生成。該BYbe形式由作為二硫鍵穩定的(ds)單鏈(sc)-Fv的抗抗原CD22V區(VR4130)經由接頭SGGGGSGGGGS(SEQIDNO：17)與抗抗原CD79bFab(VR4447)的重鏈融合。方法:如下進行用于功能篩選的BYbes的純化：如下純化功能篩選BYbe(Fab-dsscFv[Fab重鏈的C末端解離(off)的scFv])形式。來自標準expiHEK或CHO表達的澄清的細胞培養上清液進行0.22μm無菌過濾。將過濾的上清液以2ml/min上樣到在PBSpH7.4(SigmaAldrichChemicals)中平衡的50mlGammabindPlusSepharoseXK26柱(GEHealthcare)上。上樣后，用PBSpH7.4洗滌柱，然后用0.1M甘氨酸/HCl、pH2.7洗脫。洗脫后在280nm處進行吸光度檢測，收集洗脫峰，然后用1/25體積的2MTris/HCl、pH8.5中和。使用具有10kDa(BYbes)截留分子量膜的AmiconUltra-15濃縮器并在水平轉頭中以4000xg離心來濃縮中和的樣品。將濃縮的樣品施加于在PBS，pH7.4中平衡的XK16/60或XK26/60Superdex200柱(GEHealthcare)上。用等度梯度的PBS、pH7.4以1ml/min或2.6ml/min展開(develop)。收集級分并通過在TSK凝膠G3000SWXL上的尺寸排阻色譜法分析；5μm，7.8×300mm柱，用等度梯度的0.2M磷酸鹽、pH7.0以1ml/min展開，通過在280nm處進行吸光度檢測。合并選擇的單體級分，使用具有10kDa截留分子量膜的AmiconUltra-15濃縮器并在水平轉頭中以4000xg離心濃縮至>1mg/ml。測定最終樣品；通過A280掃描紫外可見分光光度計(Cary50Bio)測量濃度；通過在TSK凝膠G3000SWXL上的尺寸排阻色譜測量單體％；5μm，7.8×300mm柱，用等濃度梯度的0.2M磷酸鹽，pH7.0以1ml/min展開，通過在280nm處進行吸光度檢測；通過在4-20％Tris-甘氨酸1.5mm凝膠(Novex)上以50mA(每凝膠)進行還原和非還原SDS-PAGE53分鐘；以及通過具有LimulusAmebocyteLysate(LAL)測試盒的CharlesRiver的便攜式測試系統測量內毒素。功能測定激活標志物測定：抗原CD79b特異性Fab'-Y和抗原CD22特異性Fab'-X以等摩爾濃度一起孵育60分鐘(在37℃和5％CO2環境中)。從100nM的起始摩爾濃度以1:4連續稀釋液滴定組合。抗原CD79b和CD22特異性BYbe也從100nM的起始摩爾濃度以1:4連續稀釋液滴定。在V-底96孔板中，將1.5×105個PBMC加入孔中，向其中加入滴定的Fab'-X和Fab'-Y組合或滴定的BYbe。將Fab'-X和Fab'-Y組合或BYbe與細胞一起孵育90分鐘。此后，通過在37℃和5％CO2下加入25μg/ml的山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)24小時來激活B細胞。向孔中加入100μL冰冷的FACS緩沖液(PBS+1％BSA+0.1％NaN3+2mMEDTA)中，將板密封并用濕冰覆蓋約15分鐘，然后在4℃下以500×g離心5分鐘。從細胞沉淀中棄去過量的上清液，并將板在2000rpm下搖動30秒。然后用熒光標記的抗CD19、抗CD20和抗CD71、抗CD40和抗CD86抗體(BDBiosciences)的混合物將細胞染色。稍稍搖動平板并在黑暗中于濕冰上孵育1小時。此后，將板洗滌兩次并重懸于20μlFACS緩沖液中。使用IntellicytScreener流式細胞儀測量CD19、CD20和CD71、CD40和CD86的細胞表達。使用數據分析軟件包ForecytTM(Intellicyt)將B細胞鑒定為不同于其他細胞群，并且計算每個孔的CD71、CD40和CD86水平的幾何平均值。然后將所有數據表示為相對于最大應答(僅抗IgM)減去背景(僅細胞)的抑制百分數。PhosFlow測定：抗原CD79b特異性Fab'-Y和抗原CD22特異性Fab'-X以等摩爾濃度一起孵育60分鐘(在37℃和5％CO2環境中)。從100nM的起始摩爾濃度以1:4連續稀釋液滴定組合。還從100nM的起始摩爾濃度以1:4連續稀釋滴定抗原CD79b和抗原CD22特異性BYbe。在V形底96孔板中，將5.0×104個PBMC添加至向其中添加了滴定的Fab'-X和Fab'-Y組合或滴定的BYbe的孔中。將Fab'-X和Fab'-Y組合或BYbe與細胞一起孵育另外的90分鐘。此后，通過在37℃和5％CO2下添加25μg/ml山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)持續15分鐘來激活B細胞。然后通過添加等體積的Cytofix緩沖液(BDBiosciences)來停止信號傳導反應。然后將板在室溫下放置15分鐘，然后以500×g離心5分鐘。從細胞沉淀中棄去過量上清液，將其重懸于FACS緩沖液(PBS+1％BSA+0.01％NaN3+2mMEDTA)中并再次洗滌。然后將細胞在冰冷的Perm緩沖液III(BDBiosciences)中重懸30分鐘，然后在流式緩沖液中洗滌兩次。然后用熒光標記的抗CD20抗體(BDBiosciences)和抗磷酸化的PLCγ2、抗磷酸化的Akt和抗磷酸化的p38抗體(BDBiosciences)將細胞染色。然后將板重懸并在室溫下于黑暗中孵育1小時。此后，將板再洗滌兩次并重懸于20μlFACS緩沖液中。使用Intellicyt流式細胞儀測量CD20和磷酸PLCγ2、磷酸Akt和磷酸p38的細胞表達。使用數據分析軟件包ForecytTM(Intellicyt)將B細胞鑒定為不同于其他細胞群體，并且計算每個孔的PLCγ2、Akt和p38水平的幾何平均值。然后將所有數據表示為相對于最大應答(僅抗IgM)減去背景(僅細胞)的抑制百分數。結果PhosFlow測定：圖15中的數據顯示，以Fab-Kd-Fab或BYbe形式靶向抗原CD79b和抗原CD22可以抑制用抗IgM刺激的B細胞中磷酸化的PLCγ2。圖16中的數據顯示，以Fab-Kd-Fab或BYbe形式靶向抗原CD79b和抗原CD22可以抑制用抗IgM刺激的B細胞中磷酸化的P38。圖17中的數據顯示，以Fab-Kd-Fab或BYbe形式的靶向抗原CD79b和抗原CD22可以抑制用抗IgM刺激的B細胞中磷酸化的Akt。激活標志物測定：如可從圖18看到的，數據顯示，以Fab-Kd-Fab或BYbe形式靶向抗原CD79b和抗原CD22可以抑制用抗IgM刺激的B細胞上CD71的表達。圖19中的數據顯示，以Fab-Kd-Fab或BYbe形式靶向抗原CD79b和抗原CD22可以抑制用抗IgM刺激的B細胞上CD40的表達。圖20中的數據顯示，以Fab-Kd-Fab或BYbe形式靶向抗原CD79b和抗原CD22可以抑制用抗IgM刺激的B細胞上CD86的表達。實施例9—比較分子連接的雙特異性Bybe形式的抗原CD79b加上抗原CD22與進一步加上抗白蛋白結合結構域以延長體內半壽期的共靶向活性。簡介：為了檢查在Fab-Kd-Fab異二聚體系鏈束縛的篩選復合體中鑒定的CD79b/CD22靶標對的活性是否可以轉化成具有抗白蛋白靶向的體內半壽期延長的潛在治療性分子連接的形式的相似的所需活性，將抗白蛋白抗體片段經具有序列SGGGGSGGGGS(SEQIDNO:17)的接頭與實施例8中所述的BYbe形式的抗原CD22Fab的輕鏈融合。在添加和不添加抗白蛋白片段(VR0645)的情況下以Bybe形式產生抗原CD79b特異性(VR4447)和抗原CD22特異性(VR4130和VR4126)。在本實驗中使用的構建體的描述。構建體名稱Fab特異性重鏈scFv輕鏈scFvVR4447/VR4126BYbe抗原CD79b抗原CD22無VR4447/VR4126/VR645)BYbe/白蛋白抗原CD79b抗原CD22白蛋白VR4447/VR4130BYbe抗原CD79b抗原CD22無VR4447/VR4130/VR645)BYbe/白蛋白抗原CD79b抗原CD22白蛋白方法有/無抗白蛋白附加特異性的BYbe的純化:如下純化BYbe(Fab-dsscFv[Fab重鏈的C末端解離的scFv])和具有抗白蛋白的BYbe(Fab-2xdsscFv[Fab重鏈和輕鏈的C末端解離的scFv])形式。將來自標準expiHEK或CHO表達的澄清的細胞培養上清液進行0.22μm無菌過濾。以2ml/min將過濾的上清液上樣至于PBSpH7.4(SigmaAldrichChemicals)中平衡的50mlGammabindPlusSepharoseXK26柱(GEHealthcare)上。上樣后，用PBSpH7.4洗滌柱，然后用0.1M甘氨酸/HCl、pH2.7洗脫。洗脫后在280nm處進行吸光度檢測，收集洗脫峰，然后用1/25體積的2MTris/HCl、pH8.5中和。使用具有10kDa或30kDa截留分子量膜的AmiconUltra-15濃縮器并在水平轉頭中以4000xg離心來濃縮中和的樣品。將濃縮的樣品施加于在PBS、pH7.4中平衡的XK16/60或XK26/60Superdex200柱(GEHealthcare)上。用等度梯度的PBS、pH7.4分別以1ml/min或2.6ml/min展開柱子。收集級分并在TSKgelG3000SWXL上通過尺寸排阻層析法進行分析；5μm、7.8X300mm柱子，用等度梯度的0.2M磷酸鹽、pH7.0以1ml/min展開，通過在280nm處進行吸光度檢測。合并選擇的單體級分，使用具有10kDa或30kDa截留分子量膜的AmiconUltra-15濃縮器并在水平轉頭中以4000xg離心來濃縮至>1mg/ml。測定最終樣品；通過A280掃描紫外-可見分光光度計(Cary50Bio)測量濃度；通過在TSKgelG3000SWXL上的尺寸排阻層析測量單體％；5μm、7.8x300mm柱子，用等度梯度的0.2M磷酸鹽、pH7.0以1ml/min展開，通過在280nm處進行吸光度檢測；通過在4-20％Tris-甘氨酸1.5mm凝膠(Novex)上以50mA(每凝膠)進行還原和非還原SDS-PAGE53分鐘；以及通過具有LimulusAmebocyteLysate(LAL)測試盒的CharlesRiver’s便攜式測試系統測量內毒素。將100nM的每種構建體純化的蛋白質與來自5個分開的供體的人PBMC在37℃/5％CO2下于RMPI1640培養基(加上10％胎牛血清和2mMGlutamax(R10培養基))中預孵育60分鐘。60分鐘后，用25ug/ml被設計來僅刺激B細胞的山羊抗IgM抗體刺激細胞。24小時后，將板置于冰上以停止任何進一步的細胞激活，然后用冰冷的流式細胞術緩沖液(PBS+1％BSA+0.01％NaN3)洗滌一次。除去所有上清液，并重懸細胞沉淀。將細胞置于冰上，添加抗CD19、抗CD20、抗CD27、抗CD71和抗CD86抗體的混合物。將細胞孵育60分鐘，然后在流式細胞術緩沖液中洗滌兩次。使用iQUE高通量流式細胞儀產生抗CD27、抗CD71和CD86與CD19/CD20陽性B細胞的結合的數據。使用Forecyt軟件產生直方圖并得到抗CD27、抗CD71和CD86抗體與B細胞的結合的幾何平均強度讀數。將該數據輸入至Excel中并為每個組合產生抑制百分數的值。然后將數據輸入至GraphpadPrism中，并為每個組合產生盒和須圖表，其中平均值由“+”表示。圖21顯示由VR4447/VR4126BYbe和VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白誘導的B細胞上CD27表達的抑制。在所測試的5個供體中，兩者均顯示出始終相似的抗IgM誘導的CD27的抑制水平。圖22顯示由VR4447/VR4126BYbe和VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白誘導的B細胞上CD71表達的抑制。在5個供體當中，兩者顯示出始終相似的抗IgM誘導的CD71的抑制水平。圖23顯示由VR4447/VR4126BYbe和VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白誘導的B細胞上CD86表達的抑制。在5個供體當中，兩者顯示出始終相似的抑制抗IgM誘導的CD86的水平。圖24顯示由VR4447/VR4130BYbe和VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白誘導的B細胞上的CD27表達的抑制。在所測試的5個供體中，兩者均顯示出始終相似的抗IgM誘導的CD27的抑制水平。圖25顯示由VR4447/VR4130BYbe和VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白誘導的B細胞上的CD71表達的抑制。在5個供體當中，兩者顯示出始終相似的抗IgM誘導的CD71的抑制水平。圖26顯示由VR4447/VR4130BYbe和VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白誘導的B細胞上CD86表達的抑制。在5個供體當中，兩者顯示出始終相似的抑制抗IgM誘導的CD86的水平。實施例10—使用分子連接的雙特異性BYbe在進一步加入抗白蛋白或者不加入抗白蛋白的情況下抗原CD79b加上抗原CD22對記憶B細胞功能的共靶向作用。簡介：為了評估靶向CD79b/CD22是否對長期培養中的B細胞具有功能效應，測量了分離或在混合的PBMC培養物中培養的B細胞的IgG產生。記憶抗原破傷風類毒素的特異性抗體的測量提供了記憶B細胞功能的讀出數據。在加入或不加入抗白蛋白片段(VR0645)的情況下以BYbe形式產生抗原CD79b特異性(VR4447)和抗原CD22特異性(VR4126、VR4127和VR4130)。將抗白蛋白抗體片段通過具有序列SGGGGSGGGGS(SEQIDNO：17)的接頭與如實施例8所述的BYbe形式的抗原CD22Fab的輕鏈融合。在本實驗中使用的構建體的描述。構建體名稱Fab特異性重鏈scFv輕鏈scFvVR4447/VR4126BYbe抗原CD79b抗原CD22無VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白抗原CD79b抗原CD22白蛋白VR4447/VR4127BYbe抗原CD79b抗原CD22無VR4447/VR4130BYbe抗原CD79b抗原CD22無VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白抗原CD79b抗原CD22白蛋白方法有/無抗白蛋白附加特異性的BYbe的純化如實施例9所述純化BYbe(Fab-dsscFv[Fab重鏈的C末端解離的scFv])和具有抗白蛋白的BYbe(Fab-2xdsscFv[Fab重鏈和輕鏈的C末端解離的scFv])形式。B細胞的激活和破傷風類毒素特異性IgG的測量用在含有10％胎牛血清和2mMGlutamax(R10培養基)的1640培養基中的500ng/mlCD40L，1μg/mlCpG和50ng/mlIL-21刺激來源于至多3個分開的供體的人PBMC或純化B細胞6天。在第0天以100nM的終濃度加入純化蛋白的構建體，并在測定期間保留在培養基中。6天后收集上清液，通過ELISA檢測破傷風類毒素特異性IgG的量。簡言之，將Maxisorp半孔ELISA板(Nunc)在4℃下用10ug/ml破傷風類毒素的PBS溶液包被過夜。然后將平板在含有0.05％Tween20的5％牛奶的PBS溶液中封閉2小時。將上清液稀釋，然后加入在室溫下2小時。用PBS-0.05％Tween20洗滌平板，使用在5％牛奶-PBS-0.05％Tween20中稀釋至1ug/ml的過氧化物酶-山羊抗人IgG(H+L)檢測破傷風結合的抗體。使用TMB底物溶液(KPL)顯影板，使用Synergy2微量酶標儀(Biotek)測量450nM的吸光度。將數據導出到Excel中，并相對于沒有測試抗體培養的細胞計算抑制百分數。然后將數據導入Graphpad并繪制為條形圖。圖27顯示來自用VR4447/VR4126Bybe、VR4447/VR4127BYbe和VR4447/VR4130BYbe培養的PBMC的破傷風類毒素IgG產生的抑制。數據表示來自3個供體的合并數據。圖28顯示來自用VR4447/VR4126BYbe、VR4447/VR4127BYbe和VR4447/VR4130BYbe培養的純化B細胞的破傷風類毒素IgG產生的抑制。數據表示來自2個供體的合并數據。圖29顯示來自用VR4447/VR4126BYbe、VR4447/VR4127BYbe、VR4447/VR4130BYbe、VR4447/VR4126/VR645BYbe/白蛋白和VR4447/VR4130/VR645BYbe/白蛋白培養的PBMC或純化B細胞的破傷風類毒素IgG產生的抑制。從單個供體顯示的數據。實施例11—SLE患者B細胞中BCR信號傳導的失調和共靶向抗原CD79b加抗原CD22對SLEB細胞功能的影響。簡介：為了評估CD79b/CD22的組合是否可以用于治療患有自身免疫性疾病的人，我們使用來自患有系統性紅斑狼瘡(SLE)的患者的B細胞作為模型系統。測試CD79b/CD22組合(VR4447/VR4130)對已知參與B細胞功能但在SLE患者中與健康志愿者相比失調的信號蛋白的激活狀態的影響。在該實驗中，比較來自12個SLE患者和12個健康志愿者的B細胞的共靶向CD79b和CD22對其激活狀態的影響。方法:PhosFlow測定:所有測定使用2x105個PBMC/孔進行。在處理的樣品中，以100nM的濃度測試抗原CD79b和抗原CD22特異性BYbe。來自健康志愿者和SLE患者的PBMC在37℃下與BYbe預孵育90分鐘。在未處理的樣品中，在該孵育期間簡單地省略BYbe。此后，細胞用25μg/ml的山羊F(ab')2抗人IgM(SouthernBiotechnology)在37℃和5％CO2下激活10分鐘，并通過加入固定劑(Cytofix-BDBiosciences)停止反應。在未刺激的樣品中，在該孵育期間簡單地省略抗人IgM。在室溫下15分鐘后，將細胞沉淀(500×g5分鐘)，然后在冰冷的permbufferIII(BDBiosciences)中重懸浮，然后在流式緩沖液(PBS+1％BSA+0.01％NaN3+2mMEDTA)洗滌兩次。然后用抗CD20、抗磷酸化(p)NF-κB、抗pSyk、抗pAtk和抗pErk1&2染色細胞，并在室溫下在黑暗中孵育1小時。最后，板在流式緩沖液中洗滌兩次，然后在iQUE流式細胞儀(Intellicyt)上測量。然后計算B細胞中pNF-κB、pSyk、pAkt和pErk1&2表達的幾何平均值(平均熒光強度，MFI)，并以圖形形式表示。結果：圖30顯示與來自健康志愿者的那些相比，SLE患者B細胞中NF-κB、Syk、Akt和Erk1&2(未刺激的和未治療的)的基線磷酸化升高。圖31至34顯示在健康志愿者和SLE患者中，CD79/CD22Bybe可以同等地抑制pNF-κB、pSyk、pAkt和pErk1&2。結論：該數據顯示，與健康志愿者相比，來自SLE患者的B細胞在任何體外刺激之前都被激活。在通過B細胞受體刺激細胞時，與背景信號相比，健康志愿者和SLE患者都顯示出增強的激活水平。在健康志愿者和SLE患者中，該信號基本上被CD79b/CD22組合阻斷。該數據表明CD79b/CD22組合可以抑制來自健康志愿者以及具有潛在自身免疫疾病的人的B細胞，表明該途徑對B細胞激活具有根本重要性。序列表<110>UCBPharma<120>具有針對CD79和CD22的特異性的分子<130>G0224_WO<150>GB1412658.5<151>2014-07-16<160>163<170>PatentInversion3.5<210>1<211>44<212>PRT<213>人工序列<220><223>GCN4(7P14P)序列<400>1AlaSerGlyGlyGlyArgMetLysGlnLeuGluProLysValGluGlu151015LeuLeuProLysAsnTyrHisLeuGluAsnGluValAlaArgLeuLys202530LysLeuValGlyGluArgHisHisHisHisHisHis3540<210>2<211>132<212>DNA<213>人工序列<220><223>GCN4(7P14P)序列<400>2gctagcggaggcggaagaatgaaacaacttgaacccaaggttgaagaattgcttccgaaa60aattatcacttggaaaatgaggttgccagattaaagaaattagttggcgaacgccatcac120catcaccatcac132<210>3<211>262<212>PRT<213>人工序列<220><223>52SR4dsscFv序列<400>3AspAlaValValThrGlnGluSerAlaLeuThrSerSerProGlyGlu151015ThrValThrLeuThrCysArgSerSerThrGlyAlaValThrThrSer202530AsnTyrAlaSerTrpValGlnGluLysProAspHisLeuPheThrGly354045LeuIleGlyGlyThrAsnAsnArgAlaProGlyValProAlaArgPhe505560SerGlySerLeuIleGlyAspLysAlaAlaLeuThrIleThrGlyAla65707580GlnThrGluAspGluAlaIleTyrPheCysValLeuTrpTyrSerAsp859095HisTrpValPheGlyCysGlyThrLysLeuThrValLeuGlyGlyGly100105110GlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGlyGlySerGlyGlyGly115120125GlySerAspValGlnLeuGlnGlnSerGlyProGlyLeuValAlaPro130135140SerGlnSerLeuSerIleThrCysThrValSerGlyPheLeuLeuThr145150155160AspTyrGlyValAsnTrpValArgGlnSerPro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lu210215220HisProGlyGlnGlu225當前第1頁1 2 3