本發(fā)明涉及能夠選擇性結(jié)合并抑制鉀通道Kv1.3活性的化合物。本發(fā)明還涉及包括該化合物的藥物組合物，和所述化合物及所述藥物組合物在治療或預防自身免疫性疾病、肥胖癥、牙周炎和/或組織移植排斥中的用途。
背景技術：
：：自身免疫性疾病是當宿主的免疫應答無法區(qū)分外來抗原與自身分子(自身抗原)時引起異常免疫應答而出現(xiàn)的一組超過80種的不同疾病。自身免疫性疾病的原因仍然不明，但是認為它們是由遺傳和環(huán)境因素綜合引起的。免疫炎癥性疾病如多發(fā)性硬化、銀屑病和類風濕性關節(jié)炎具有共同的致病原理。它們的發(fā)病機制是以自身反應性記憶T細胞在刺激后調(diào)節(jié)慢性炎癥過程為特征。特別地，通常發(fā)生在自身免疫性疾病中的重復的抗原攻擊，引起長壽命的中樞記憶細胞(TCM)(如初始細胞)返回到淋巴結(jié)抵抗它們的同源抗原，分化成了短壽命的效應器記憶細胞(TEM)，其不需要返回到淋巴結(jié)用于抗原誘導的活化?；罨腡EM細胞變成TEM效應器，其迅速遷移到炎癥部位，在那里產(chǎn)生大量的促炎細胞因子。CD8+TEM細胞進一步產(chǎn)生大量穿孔素，因此是高度破壞性的。目前對于自身免疫性疾病的治療包括全身使用抗炎藥和高效免疫抑制劑和免疫調(diào)節(jié)劑。然而，這些藥物引起了許多不良副作用，包括例如抑制整個免疫系統(tǒng)，并具有感染和形成腫瘤的風險。此外，在臨床上，所述藥物在一些患者中不能誘導顯著的緩解。電壓門控Kv1.3K+通道是人類基因組中的76個鉀通道之一，并且已發(fā)現(xiàn)存在于人類的T淋巴細胞中。人類的所有T細胞表達共同提供對于T細胞活化和增殖所需的鈣內(nèi)流的平衡鉀外流的Kv1.3通道以及鈣激活KCa3.1通道。由給定細胞表達的通道數(shù)目取決于其活化和分化的狀態(tài)?？乖蚪z裂原刺激的CD4+和CD4+TEM細胞表現(xiàn)出表達增加大約4至5倍的Kv1.3表達，而人類初始或TCM細胞上調(diào)了鈣激活的KCa3.1通道以調(diào)節(jié)活化狀態(tài)中的膜電位和Ca2+信號。考慮到TEM細胞中的這種差異性過表達，Kv1.3通道構(gòu)成了用于治療其發(fā)病機制涉及自身反應性TEM細胞的自身免疫性疾病，例如多發(fā)性硬化、類風濕性關節(jié)炎、銀屑病和1型糖尿病，還可用于其它慢性炎性疾病如牙周炎的具有前景的TEM細胞特異性治療新靶點。此外，有跡象表明，Kv1.3通道在體重調(diào)節(jié)中也起到了作用。因此，Kv1.3通道也構(gòu)成了對于治療肥胖癥的具有前景的靶點。因此，對于Kv1.3通道特異性治療化合物有持續(xù)需求，該化合物顯示出與Kv1.3通道間強烈和特異性相互作用，并且能夠阻斷或降低其活性。發(fā)明目的和內(nèi)容本發(fā)明的一個目的是提供能夠特異性結(jié)合并抑制或降低鉀通道Kv1.3活性的化合物。本發(fā)明的另一個目的是提供用于這類抑制性化合物和包括該抑制性化合物的藥物組合物，其用于治療自身免疫性疾病如多發(fā)性硬化、類風濕性關節(jié)炎、銀屑病和/或1型糖尿病、肥胖癥和/或牙周炎。通過，在隨后描述和權利要求中將變得明顯的這些和其它目的由獨立權利要求的主題來實現(xiàn)。由從屬權利要求來限定一些優(yōu)選實施方案。在第一方面，本發(fā)明涉及包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成的化合物：X1-X2-X3-N-V-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-C-X10-X11-X12-C-X13-X14-X15-T-G-C-P-X16-X17-K-C-M-N-R-K-C-X18-C-X19-X20-C(SEQIDNo.：23)，其中X1＝T,Q,S,Y,N；X2＝I,F,V,A,L,W；X3＝I,T,Y,S,V,A,L；X4＝K,S,T,Y,R；X5＝R,T,K,S,Y；X6＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X7＝P,S,T；X8＝R,K,P；X9＝D,Q,N,E；X10＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X11＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X12＝P,H,V,I,L,A；X13＝R,K,Q,N；X14＝K,D,A,R,E,V,L,I；X15＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X16＝Y(jié),N,S,T,Q；X17＝A,G,V,I,L；X18＝K,R；X19＝Y(jié),N,Q,T,S和X20＝G,R,K。在第一方面的變體中，本發(fā)明涉及包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成的化合物：X1-X2-X3-N-V-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-C-X10-X11-X12-C-X13-X14-X15-T-G-C-P-X16-X17-K-C-M-N-R-K-C-X18-C-X19-X20-C(SEQIDNo.：23)，其中X1＝T,Q,S,Y,N；X2＝I,F,V,A,L,W；X3＝I,T,Y,S,V,A,L；X4＝K,S,T,Y,R；X5＝R,T,K,S,Y；X6＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X7＝P,S,T；X8＝R,K,P；X9＝D,Q,N,E；X10＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X11＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X12＝P,H,V,I,L,A；X13＝R,K,Q,N；X14＝K,D,A,R,E,V,L,I；X15＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X16＝Y(jié),N,S,T,Q；X17＝A,G,V,I,L；X18＝K,R；X19＝Y(jié),N,Q,T,S和X20＝G,R,K；并且其中，該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面，本發(fā)明涉及包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo：1)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K。在第二方面的變體中，本發(fā)明涉及包括根據(jù)SEQIDNo：1的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：1的氨基酸序列組成的化合物：其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K；并且其中，該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第三方面，本發(fā)明涉及包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成的化合物：G-V-X1-I-N-V-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo.：27)；其中X1＝P,I,F,V,A,L,W；X2＝K,S,T,Y,R；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K。在第三方面的變體中，本發(fā)明涉及包括根據(jù)SEQIDNo：27的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：27的氨基酸序列組成的化合物：其中X1＝P,I,F,V,A,L,W；X2＝K,S,T,Y,R；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K；并且其中，該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在另一方面，本發(fā)明涉及編碼根據(jù)本發(fā)明的氨基酸序列的核酸序列。在另一方面，本發(fā)明還提供了包括根據(jù)本發(fā)明的核酸序列的載體。在另一方面，本發(fā)明還提供了包括根據(jù)本發(fā)明的核酸序列或載體的宿主細胞。在另一方面，本發(fā)明涉及包括根據(jù)本發(fā)明的化合物的藥物組合物。在另一方面，還涉及本發(fā)明根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物，其用于治療或預防自身免疫性疾病、肥胖癥、牙周炎和/或組織移植排斥。在另一方面，本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物在制備用于治療或預防自身免疫疾病、肥胖癥、牙周炎和/或組織移植排斥的藥物中的用途。在另一方面，本發(fā)明涉及通過將根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物給藥至需要其的哺乳動物以治療或預防哺乳動物體內(nèi)自身免疫疾病、肥胖癥、牙痛炎和/或組織移植排斥的方法。在另一方面，本發(fā)明還提供了制備根據(jù)本發(fā)明的化合物、核酸序列、載體或藥物組合物的方法。附圖說明圖1通過膜片鉗測量Kv1.3、Kv1.5和Kv1.1的通道抑制。圖2序列表cgtx538-548。圖3化合物1-8(C1-8)的效果?；衔?：cgtx538化合物2：cgtx539化合物3：cgtx540化合物4：cgtx541化合物5：cgtx542化合物6：cgtx543化合物7：cgtx-544化合物8：cgtx547左側(cè)，在施用外來溶液(黑色)、施用化合物(藍色)和奎尼丁(灰色)后的hERG電流痕示例性蹤跡。右圖顯示了峰值電流幅值隨時間的變化。虛線表示施用化合物。通過10或20次掃描來評價每種化合物濃度的效應。所有化合物似乎對hERG沒有影響或只有很小的影響。相反，奎尼丁完全阻斷了電流。注意到，從施用化合物的開始到記錄掃描結(jié)束，發(fā)生了衰減(run-down)。圖4在Sf21細胞(A)中表達的和在TEM細胞(B)中內(nèi)源表達的Kv1.3通道的代表性電壓依賴性活化。(C)電壓依賴的Kv1.3活化的脈沖方案。圖5在Sf21(中線和上線)和TEM細胞(下線)中表達的Kv1.3通道的特征型歸一化的電壓-電流相關性；n＝41、n＝12和n＝29。使用Sf21桿狀病毒群表達系統(tǒng)，可以表達大量的Kv1.3鉀通道。圖6TEM細胞和Sf21細胞的對比。cgtx-544阻斷在Sf21(A)和TEM(B)細胞中由表達的Kv1.3通道。顯示了在Kv1.3拮抗肽濃度增加的情況下，代表性原始電流蹤跡和時間劑量響應。圖7大鼠膝關節(jié)炎的局部誘導的示意圖.圖8誘導局部關節(jié)炎后的膝關節(jié)腫脹。圖9基于外周血中WBC計數(shù)的實驗動物的免疫狀態(tài)；AI：關節(jié)炎誘導，初始動物＝NaCl“免疫動物”，免疫動物＝用包括mBSA的弗氏佐劑處理的動物。圖10cgtx-544處理的和未處理的對照動物(每組：n＝14；菱形實線：未處理的對照動物；方形虛線：cgtx-544處理的動物)之間膝關節(jié)腫脹的差異。圖11時間進程中甲氨蝶呤(MTX)標準治療對關節(jié)炎大鼠的絕對膝關節(jié)腫脹增加的改變。在第-21天和第-14天的兩次免疫后，在第0天通過關節(jié)內(nèi)注射甲基化BSA誘導抗原誘導的關節(jié)炎(AIA)。高劑量MTX治療組從第-21天開始直到第0天，以皮下注射的方式按1mg/kg體重接受每周一次的MTX施用。低劑量MTX治療組從第-3天開始至第6天，以靜脈注射的方式按照100μg/kg體重接受每日一次的MTX施用；而溶劑對照組從第0天開始直到第6天，以靜脈注射的方式接受每日一次的0.9％NaCl施用。腫脹膝的絕對增加是每組各自的非誘導膝值與關節(jié)炎誘導膝值之間的差異。數(shù)值為平均值±SD。實心圓虛線：每周一次皮下注射MTX組(組J，n＝7)；三角形長虛線-點線：每日一次靜脈注射MTX組(組L，n＝7)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝14)。圖12時間進程中甲氨蝶呤(MTX)標準治療與cgtx-544肽治療相比，對關節(jié)炎大鼠的絕對膝關節(jié)腫脹增加的改變。在第-21天和第-14天的兩次免疫后，在第0天通過關節(jié)內(nèi)注射甲基化BSA誘導抗原誘導的關節(jié)炎(AIA)。低劑量MTX治療組從第-3天開始直到第6天，以靜脈注射的方式按照100μg/kg體重接受每日一次的MTX施用。相比之下，cgtx-544治療組從第-3天開始直到第6天，以靜脈注射的方式按照1mg/kg體重接受每日一次的cgtx-544施用；而溶劑對照組從第0天開始，以靜脈注射的方式也接受每日一次的0.9％NaCl施用。腫脹膝的絕對增加是每組各自的非誘導膝值與關節(jié)炎誘導膝值之間的差異。數(shù)值為平均值±SD。三角形長虛線-點線：每日一次MTX靜脈注射組(L組，n＝7)；方形虛線：cgtx-544治療組(I組，n＝14)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝14)。圖13時間進程中甲氨蝶呤(MTX)標準治療對關節(jié)炎大鼠的相對腫脹膝增加的改變。在第-21天和第-14天的兩次免疫后，在第0天通過關節(jié)內(nèi)注射甲基化BSA誘導抗原誘導的關節(jié)炎(AIA)。高劑量MTX治療組從第-21天開始直到第0天，以皮下注射的方式按照1mg/kg體重接受每周一次的MTX施用。低劑量MTX治療組從第-3天開始直到第6天，以靜脈注射的方式按照100μg/kg體重接受每日一次的的MTX施用；且從第0天開始直到第6天，溶劑對照組以靜脈注射的方式也接受每日一次的0.9％NaCl施用。腫脹膝的相對增加是每組各自的歸一化后的非誘導膝值和歸一化后的關節(jié)炎誘導膝值之間的差異。歸一化值(第-21天＝1)是平均值±SD。實心圓虛線：每周一次皮下注射MTX組(組J，n＝7)；三角形長虛線-點線：每日一次靜脈注射MTX組(組L，n＝7)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝14)。圖14時間進程中甲氨蝶呤(MTX)標準治療與cgtx-544治療相比，對關節(jié)炎大鼠的相對膝關節(jié)腫脹增加的改變在第-21天和第-14天的兩次免疫后，在第0天通過關節(jié)內(nèi)注射甲基化BSA誘導抗原誘導的關節(jié)炎(AIA)。低劑量MTX治療組從第-3天開始直到第6天，以靜脈注射的方式按照100μg/kg體重接受每日一次的MTX施用。相比之下，cgtx-544治療組從第-3天開始直到第6天，以靜脈注射的方式按照1mg/kg體重接受每日一次的cgtx-544施用；而溶劑對照組從第0天開始，以靜脈注射的方式也接受每日一次的0.9％NaCl施用。腫脹膝的相對增加是每組各自的歸一化后的非誘導膝值和歸一化后后關節(jié)炎誘導膝值之間的差異。歸一化值(第-21天＝1)是平均值±SD。三角形長虛線-點線：每日一次靜脈注射MTX組(組L，n＝7)；方形虛線：cgtx-544肽治療組(組I，n＝14)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝14)。圖15甲氨蝶呤(MTX)標準治療與cgtx-544治療相比，對關節(jié)炎大鼠的免疫狀態(tài)影響。白細胞(WBC)計數(shù)絕對值；值為平均值±SD(n＝7)。實心圓虛線：每周一次皮下注射MTX組(組J，n＝7)；三角形長虛線-點線：每日一次靜脈注射MTX組(組L，n＝7)；方形虛線：每日一次靜脈注射的cgtx-544肽治療組(I組，n＝7)；菱形實線：每日一次靜脈注射溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝7)。黑色箭頭：用結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(750μg)和mBSA的免疫時間。用SysmexXT-2000iV測定EDTA全血。圖16甲氨蝶呤(MTX)標準治療與cgtx-544治療相比，對關節(jié)炎大鼠中的嗜中性粒細胞的影響。A.絕對值為平均值±SD(n＝7)。實心圓虛線：每周一次皮下注射MTX組(組J，n＝7)；三角形長虛線-點線：每日一次靜脈注射MTX組(組L，n＝7)；方形虛線：每日一次靜脈注射cgtx-544治療組(I組，n＝7)；菱形實線：每日一次靜脈注射溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝7)。黑色箭頭：用結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(750μg)和mBSA的免疫時間。B.相對嗜中性粒細胞(％)是指相對于WBC的總量。值為平均值±SD(n＝7)。實心圓虛線：每周一次皮下注射MTX組(組J，n＝7)；三角形長虛線-點線：每日一次靜脈注射MTX組(組L，n＝7)；方形虛線：每日一次靜脈注射cgtx-544治療組(I組，n＝7)；菱形實線：每日一次靜脈注射溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝7)。黑色箭頭(應為第-21天和-14天)：用結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(750μg)和mBSA的免疫時間。用SysmexXT-2000iV測定EDTA全血。圖17時間進程中甲氨蝶呤(MTX)標準治療與cgtx-544治療相比，對關節(jié)炎大鼠中淋巴細胞的影響。A.絕對值為平均值±SD(n＝7)。實心圓虛線：每周一次皮下注射MTX組(組J，n＝7)；三角形長虛線-點線：每日一次靜脈注射MTX組(組L，n＝7)；方形虛線：每日一次靜脈注射cgtx-544-肽治療組(I組，n＝7)；菱形實線：每日一次靜脈注射溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝7)。黑色箭頭：用結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(750μg)和mBSA的免疫時間。B.甲氨蝶呤(MTX)標準治療與cgtx-544治療相比，對節(jié)炎大鼠中的淋巴細胞的百分比(相對淋巴細胞(％)是指相對于WBC的總量)的影響。值為平均值±SD(n＝7)。實心圓虛線：每周一次皮下注射MTX組(組J，n＝7)；三角形長虛線-點線：每日一次靜脈注射MTX組(組L，n＝7)；方形虛線：每日一次靜脈注射cgtx-544治療組(I組，n＝7)；菱形實線：每日一次靜脈注射溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝7)。黑色箭頭：用結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(750μg)和mBSA的免疫時間。用SysmexXT-2000iV測定EDTA全血。圖18預防治療和劑量依賴性-時間進程中膝關節(jié)直徑的相對增加(高/中/低劑量)。數(shù)值為平均值±SD。三角形長虛線-點線：5mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(N組，n＝5)；黑色方形虛線：按照1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(I組，n＝14)；實心圓虛線：按照0.1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(M組，n＝5)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H#15-19，n＝5)。白色方形實線：未誘導的膝直徑?jīng)]有增加(I、N、M和H組；左側(cè)未誘導的膝關節(jié))。圖19cgtx-544療效結(jié)果的統(tǒng)計分析：關節(jié)炎誘導之后第1天(A)和第3天(B)采用和不采用cgtx-544肽治療(高/中/低劑量)的相對膝腫脹的改變。所有箱線圖顯示了中位數(shù)范圍、四分位數(shù)范圍、樣品最小和最大值。為了分析顯著性，將溶劑對照組與治療組進行比較。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。圖20祛病治療(在d＝0或d＝1時開始治療)時間進程中采用和不采用cgtx-544肽治療對關節(jié)炎大鼠中膝關節(jié)直徑(個體內(nèi)，減除個體間/非個體)的改變(治療開始于d0和d1)。數(shù)值為平均值±SD。三角形長虛線-點線–在d1開始治療：按照1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(Q組，n＝7)；實心圓虛線-在d0開始治療：按照1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(組P，n＝6)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H)。白色方形實線：未誘導的膝直徑無增加(Q、P、和H組；左側(cè)未誘導膝)。圖21關節(jié)炎誘導之后第1天(A)、第2天(B)和第3天(C)cgtx-544療效結(jié)果的統(tǒng)計分析：采用和不采用cgtx-544肽治療對相對膝腫脹的改變-祛病治療(開始于d0和d1)。所有箱線圖顯示了中位數(shù)范圍、四分位數(shù)范圍、樣品最小和最大值。為了分析顯著性，將溶劑對照組與治療組比較。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001。圖22祛病治療(從d＝0或d＝1時開始治療)時間進程中采用和不采用cgtx-544肽治療對關節(jié)炎大鼠中的WBC計數(shù)的影響(治療開始于d0和d1)。白細胞(WBC)計數(shù)絕對值；值為平均值±SD。三角形長虛線-點線-從d1開始治療：按照1mg/kg體重的cgtx-544(混合)肽治療組(組Q，n＝7)；實心圓虛線-從d0開始治療：按照1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(組P，n＝6)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝5)。黑色箭頭：用結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(750μg)和mBSA的免疫時間。圖23祛病治療(從d＝0或d＝1時開始治療)時間進程中采用和不采用cgtx-544肽治療對關節(jié)炎大鼠中的嗜中性粒細胞占WBC的百分比的影響(治療開始于d0和d1)。嗜中性粒細胞(以％表示)相對于WBC的總量。數(shù)值為平均值±SD。三角形長虛線-點線-從d1開始治療：按照1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(Q組，n＝7)；實心圓虛線-從d0開始治療：按照1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(組P，n＝6)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝5)。黑色箭頭：用結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(750μg)和mBSA的免疫時間。圖24祛病治療(從d＝0或d＝1時開始治療)時間進程中采用和不采用cgtx-544肽治療對關節(jié)炎大鼠中的淋巴細胞相對于WBC的百分比的影響(治療開始于d0和d1)。淋巴細胞(以％表示)相對于WBC的總量。數(shù)值為平均值±SD。三角形長虛線-點線：(從d1開始治療)按照1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(組Q，n＝7)；實心圓虛線-(從d0開始治療)按照1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(組P，n＝6)；菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝5)。黑色箭頭：用結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)(750μg)和mBSA的免疫時間。圖25祛病治療(每周一次或每周兩次)-時間進程中對膝關節(jié)直徑的相對增加的影響。數(shù)值為平均值±SD。三角形長虛線-點線-d1單次治療：1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(R6-10組，n＝5)；實心圓虛線-在d1和d4單次治療：1mg/kg體重的cgtx-544肽治療組(組R1-5，n＝5)；以上兩組的曲線直到第4天都是重合的。菱形實線：溶劑(NaCl)對照組(組H，n＝5)。圖26祛病治療(每周一次或每周兩次)-cgtx-544功效的統(tǒng)計分析：關節(jié)炎誘導之后第2天(A)和第5天(B)采用和不采用cgtx-544肽治療對相對膝腫脹的改變。所有箱線圖顯示了中位數(shù)范圍、四分位數(shù)范圍、樣品最小和最大值。為了分析顯著性，將溶劑對照組與治療組比較。*p<0.05，**p<0.01，***p<0.001。圖27mBSA特異性抗體的分析。在實驗組H和I中，所有動物在免疫和AIA誘導期期間都產(chǎn)生了針對抗原mBSA的抗體。在對照組F中(初始動物)檢測不到特異性mBSA抗體。圖28MTX療效結(jié)果的統(tǒng)計分析：關節(jié)炎誘導之后第1天(A)和第3天(B)采用和不采用MTX治療(高/低劑量)對相對膝腫脹的改變。所有箱線圖顯示了中位數(shù)范圍、四分位數(shù)范圍、樣品最小和最大值。為了分析顯著性，將溶劑對照組與治療組比較。*P<0.05，**P<0.01，***P<0.001，n.s.不顯著。圖29肽合成方案。圖30折疊后cgtx-544肽的UPLC圖圖31cgtx-544(單個)的IC50。A.將結(jié)果擬合到Hill曲線時，cgtx-544(單個)顯示出6.9nM的IC50值。B.隨著cgtx-544(單個)濃度的增加，電流逐步降低。C.在不同的cgtx-544(單個)濃度下測量的電流痕量。圖32cgtx-544(單個)的選擇性。A.將結(jié)果擬合到Hill曲線時，cgtx-544(單個)顯示出Kv1.1的IC50值為約6μM。B.隨著cgtx-544(單個)濃度的增加，Kv1.1電流逐步降低。C.不同的cgtx-544(單個)濃度下測量過程中Kv1.1的電流蹤跡。D.10μM的cgtx-544(單個)溶液沒有誘導Kv1.5電流的顯著降低，而該電流對奎尼丁敏感。E.100nM的cgtx-544(單個)溶液沒有改變經(jīng)過穩(wěn)定感染的CHO細胞中的Kv1.2電流。濃度>1μM僅導致電流的略微降低。在2.5μM處確定IC50。圖3337℃下的人血清中cgtx-544(單個)的衰減。將已知量的cgtx-544(單個)加入來自3個供血者的人血清中，并在37℃下孵育57天的時間。在此期間，在測量肽對Kv1.3通道的阻斷活性。肽保持穩(wěn)定16小時，且在45天后仍然可以檢測到。在第57天，阻斷效應不再可見。衰減描述為通過下式確定的cgtx-544(單個)的濃度的降低C(t)＝IC50(t0)/IC50(t).C0。通過簡單的衰減曲線擬合衰變：C(t)＝C0.2(-t/t1/2)，其中C0是溶液中肽的初始濃度，t0是在37℃點孵育0分鐘，t1/2是半衰期。圖34靜脈注射后，所治療的大鼠的血清中，cgtx-544(單個)的降低?；跇藴是€計算出未結(jié)合的循環(huán)cgtx-544(單個)的濃度。以誤差柱描述平均值的標準誤差(n＝6)。圖35A.延長孵育cgtx-544導致了皮摩爾的IC50值。通過非特異性鉀通道阻斷劑奎尼丁將Kv1.3電流歸一化為初始峰電流和完全阻斷(數(shù)據(jù)未顯示)。當在控制條件(上曲線，n＝11)電流穩(wěn)定至少10分鐘的情況下，單次施用(箭頭)cgtx-544(下曲線，n＝13)導致了隨時間增加的阻斷。B.延長孵育時間下cgtx-544的劑量響應曲線。在黑色虛線中，顯示了短孵育時間下的cgtx-544劑量響應曲線。當延長cgtx-544與Kv1.3通道孵育時間(即15分鐘)，得到了黑色實線。與長孵育時間的60％的阻斷(黑點)相比，觀察到的短孵育時間下20％的阻斷(白點)導致了劑量-響應曲線的左移，并隨之導致IC50(水平虛線)降低。C.長孵育時間和短孵育時間下cgtx-544對Kv1.3和Kv1.1的IC50值。具體實施方式在下面詳細描述本發(fā)明之前，應當理解的是本發(fā)明不限于本文描述的特定方法、方案和試劑，因為它們都可以變化。還應當理解的是，本文所使用的術語僅用于描述特定實施方案的目的，并不旨在限制本發(fā)明的范圍，本發(fā)明的范圍將僅由所附的權利要求所限制。除非另有定義，本文使用的所有技術和科學術語具有與本領域普通技術人員通常理解的相同的含義。本文中使用一個和三個字母的氨基酸縮寫，其對應于IUPAC命名法(參見例如EuropeanJournalofBiochemistry，138：9-37，1984)。引入以下定義：除非上下文另有明確說明，如本說明書和所要求保護的權利要求中所使用的，單數(shù)形式的“一”和“一個”也包括它們各自的復數(shù)。應當理解的是，術語“包括”以及諸如“包含”和“含有”的變化形式不是限制性的。為了本發(fā)明的目的，術語“由...組成”被認為是術語“包括”的優(yōu)選實施方案。如果在下文中將組定義為包括至少一定數(shù)量的實施方案，則這意味著也包括優(yōu)選地僅由這些實施方案組成的組。在本發(fā)明的上下文中，術語“大約”和“近似”表示本領域技術人員會理解的確保所討論的特征技術效果的精度區(qū)間。該術語通常包括所示數(shù)值的±10％、優(yōu)選±5％的偏差。本文所用的術語“肽”是指氨基酸類的分子鏈，并且不是指產(chǎn)物的特定長度；因此，在肽的定義內(nèi)包括了多肽類、寡肽類和蛋白質(zhì)類。根據(jù)定義，肽類可以是天然存在的肽類和合成肽類，其可以包括天然或非天然存在的氨基酸類。定義中還包括肽的功能性衍生物，即被例如通過修飾天然或非天然存在的氨基酸的側(cè)鏈、游離氨基和/或羧基端基，優(yōu)選該修飾不改變相應氨基酸的身份的化學修飾的肽，例如，肽的氨基酸的側(cè)鏈或游離氨基或羧基端基可以通過例如糖基化、酰胺化、磷酸化、泛素化、羧化等修飾。在優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的肽可以通過PEG化、HES化或PAS化進行修飾。本發(fā)明人驚訝地發(fā)現(xiàn)，本文公開的化合物能夠選擇性結(jié)合Kv1.3鉀通道而非其它鉀通道，如Kv1.1、Kv1.2、Kv1.5、Kv1.6、IKCa1、hERG或大電導率的Ca2+活化的K+通道(BK通道)。鑒于在TEM細胞中Kv1.3的普遍性，因此根據(jù)本發(fā)明的化合物構(gòu)成了用于TEM細胞介導疾病(如自身免疫性疾病)的有力的治療劑。此外，所公開的化合物具有降低的副作用的優(yōu)點，因為它們基本上不調(diào)節(jié)分布在其它類型的細胞或組織上的其它鉀通道的活性。因此，本發(fā)明一般涉及能夠選擇性結(jié)合Kv1.3鉀通道而非其它鉀通道如Kv1.1的化合物。設想將此類化合物用于治療或預防自身免疫性疾病。此類化合物可以選自由肽、抗體或小分子組成的組。在特別優(yōu)選的實施方案中，所述化合物是如本發(fā)明的第一、第二和第三方面和其變體中所述的肽。能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3的抗體可以是單克隆或多克隆抗體。在一些實施方案中，抗體還可以選自抗體變體或片段，例如單鏈抗體、雙抗體、微抗體、單鏈Fv片段(sc(Fv))、sc(Fv)2抗體、Fab片段或F(ab')2片段，條件是所述抗體變體或片段能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。本文所用的術語“小分子”是指具有低分子量的小分子有機化合物。小分子可以是自然界中不存在的合成化合物或從天然來源中分離或一直存在于天然來源的天然存在的化合物，如細胞、植物、真菌、動物等等。在本發(fā)明的上下文中，小分子優(yōu)選具有低于5000道爾頓、更優(yōu)選低于4000道爾頓、更優(yōu)選低于3000道爾頓、更優(yōu)選低于2000道爾頓或甚至更優(yōu)選低于1000道爾頓的分子量。在特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明上下文中的小分子具有低于800道爾頓的分子量。在另一個優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明上下文中的小分子具有50至3000道爾頓、優(yōu)選100至2000道爾頓、更優(yōu)選100至1500道爾頓且甚至更優(yōu)選100至1000道爾頓的分子量。最優(yōu)選地，在本發(fā)明的上下文中的小分子具有100至800道爾頓的分子量。能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3的小分子可以例如通過篩選小化合物數(shù)據(jù)庫來識別。因此，本發(fā)明在第一、第二和第三方面及其變體中涉及能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3的肽化合物。優(yōu)選地，所述化合物能夠選擇性地結(jié)合鉀通道Kv1.3而不是其它鉀通道，例如Kv1.1、Kv1.2、Kv1.5、Kv1.6、IKCa1、hERG或大電導率的Ca2+活化的K+通道(BK通道)。在特別優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物能夠選擇性地結(jié)合鉀通道Kv1.3而不是鉀通道Kv1.1。在第一方面，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-X3-N-V-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-C-X10-X11-X12-C-X13-X14-X15-T-G-C-P-X16-X17-K-C-M-N-R-K-C-X18-C-X19-X20-C(SEQIDNo.：23),其中X1＝T,Q,S,Y,N；X2＝I,F,V,A,L,W；X3＝I,T,Y,S,V,A,L；X4＝K,S,T,Y,R；X5＝R,T,K,S,Y；X6＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X7＝P,S,T；X8＝R,K,P；X9＝D,Q,N,E；X10＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X11＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X12＝P,H,V,I,L,A；X13＝R,K,Q,N；X14＝K,D,A,R,E,V,L,I；X15＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X16＝Y(jié),N,S,T,Q；X17＝A,G,V,I,L；X18＝K,R；X19＝Y(jié),N,Q,T,S和X20＝G,R,K。在第一方面的變體中，本發(fā)明還涉及包括以下根據(jù)SEQIDNo：23的氨基酸序列或由以下根據(jù)SEQIDNo：23的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝T,Q,S,Y,N；X2＝I,F,V,A,L,W；X3＝I,T,Y,S,V,A,L；X4＝K,S,T,Y,R；X5＝R,T,K,S,Y；X6＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X7＝P,S,T；X8＝R,K,P；X9＝D,Q,N,E；X10＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X11＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X12＝P,H,V,I,L,A；X13＝R,K,Q,N；X14＝K,D,A,R,E,V,L,I；X15＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X16＝Y(jié),N,S,T,Q；X17＝A,G,V,I,L；X18＝K,R；X19＝Y(jié),N,Q,T,S和X20＝G,R,K；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第一方面的優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-X3-N-V-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-C-X10-X11-X12-C-X13-X14-X15-T-G-C-P-X16-X17-K-C-M-N-R-K-C-X18-C-X19-X20-C(SEQIDNo.：24)；其中X1＝T,Q；X2＝I,F；X3＝I,T；X4＝K,S；X5＝R,T,K；X6＝T,G,S,N,I；X7＝P,S；X8＝R,K,P；X9＝D,Q,N,E；X10＝A,Y,I,L,W；X11＝D,R,P,K,E,S；X12＝P,H,V；X13＝R,K,Q；X14＝K,D,A,R；X15＝E,Q,A,L；X16＝Y(jié),N；X17＝A,G；X18＝K,R；X19＝Y(jié),N和X20＝G,R。在第一方面的變體的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：24的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：24的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝T,Q；X2＝I,F；X3＝I,T；X4＝K,S；X5＝R,T,K；X6＝T,G,S,N,I；X7＝P,S；X8＝R,K,P；X9＝D,Q,N,E；X10＝A,Y,I,L,W；X11＝D,R,P,K,E,S；X12＝P,H,V；X13＝R,K,Q；X14＝K,D,A,R；X15＝E,Q,A,L；X16＝Y(jié),N；X17＝A,G；X18＝K,R；X19＝Y(jié),N和X20＝G,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第一方面和其變體的更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括SEQIDNo.25(cgtx-544)或SEQIDNo.26(cgtx547)的氨基酸序列或由SEQIDNo.25(cgtx-544)或SEQIDNo.26(cgtx547)的氨基酸序列組成。在本文上下文的第一方面和其變體的另一個更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括與SEQIDNo.25(cgtx-544)具有至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、至少約95％、至少約96％、約97％、至少約98％或至少約99％的百分同一性的氨基酸序列或由與SEQIDNo.25(cgtx-544)具有至少約50％、至少約60％、至少約70％、至少約80％、至少約90％、至少約95％、至少約96％、約97％、至少約98％或至少約99％的百分同一性的氨基酸序列組成。兩個序列之間的百分同一性的確定優(yōu)選使用Karlin和Altschul(1993)Proc.Natl.Acad.SciUSA90:5873-5877的數(shù)學算法完成。該算法并入了例如在NCBI可得的Altschul等人(1990)J.MoI.Biol.215:403-410的BLASTn和BLASTp程序中(http://www.ncbi.nlm.nih.gov/blast/Blast.cge)。百分同一性的測定優(yōu)選用BLASTn和BLASTp程序的標準參數(shù)進行。BLAST多核苷酸檢索優(yōu)選采用BLASTn程序進行。對于一般參數(shù)，“最大目標序列(MaxTargetSequence)”框可以被設置為100，可以勾選“短查詢(shortqueries)”框，可以將“期望閾值(Expectthrethhold)”框設置為10，并且可以將“字大小(WordSize)”框設置為28。對于評分參數(shù)，“匹配/錯配得分(Match/mismatchScores)”可以被設置為1、-2并且“間隙成本(GapCosts)”框可以被設置為線性的。對于過濾和掩蔽參數(shù)，可以不勾選“低復雜度區(qū)域(Lowcomplexityregions)”框，可以不勾選“物種特定重復(Species-specificrepeats)”框，可以勾選“僅用于查找表的掩碼(Maskforlookuptableonly)”框，可以不勾選“掩蔽小寫字母(Masklowercaseletters)”框。BLAST蛋白質(zhì)檢索優(yōu)選用BLASTp程序進行。對于一般參數(shù)，“最大目標序列(MaxTargetSequence)”框可以被設置為100，可以勾選“短查詢(shortqueries)”框，可以將“期望閾值(Expectthrethhold)”框設置為10，且可以將“字大小(WordSize)”框設置為“3”。對于評分參數(shù)，“矩陣(Matrix)”框可以被設置為“BLOSUM62”，“間隙成本(GapCosts)”框可以被設置為“存在：11延伸：1(Existence:11Extension:1)”，“組成調(diào)整(Compositionaladjustments)”框可以被設置為“條件成分得分矩陣調(diào)整(Conditionalcompositionalscorematrixadjustment)”。對于過濾和掩蔽參數(shù)，可以不勾選“低復雜度區(qū)域(Lowcomplexityregions)”框，可以不勾選“僅用于查找表的掩碼(Maskforlookuptableonly)”框，且可以不勾選“掩蔽小寫字母(Masklowercaseletters)”框。在第一方面和其變體的更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括SEQIDNo.25(cgtx-544)的氨基酸序列或由SEQIDNo.25的氨基酸序列(cgtx-544)組成。下文所述的實施方案優(yōu)選是指本發(fā)明第一方面和其變體的化合物。然而，需要理解的是，這些實施方案，例如如下所述的肽類的長度，對Kv1.3相對于Kv1.1的選擇性等，也適用于本發(fā)明的第二和第三方面和它們的變體的化合物以及其如下文所述的優(yōu)選實施方案。在另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物是肽。如果根據(jù)本發(fā)明的化合物是肽，則根據(jù)本發(fā)明的化合物優(yōu)選具有低于1000個氨基酸、低于500個氨基酸、低于200個氨基酸、優(yōu)選低于150個氨基酸、低于100個氨基酸、低于90個氨基酸、低于80個氨基酸、低于70個氨基酸、低于60個氨基酸、低于50個氨基酸或低于40個氨基酸的長度。在另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物具有至少20至1000個氨基酸之間、優(yōu)選至少25至500個氨基酸之間、更優(yōu)選至少30至200個氨基酸之間，更優(yōu)選至少34和150個氨基酸之間、更優(yōu)選至少34至100個氨基酸之間、更優(yōu)選至少34至90個氨基酸之間、甚至更優(yōu)選至少34至80個氨基酸之間、至少34至70個氨基酸之間、34至60個氨基酸之間、34至50個氨基酸之間或34至40個氨基酸之間的長度。在更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物基本上由所示的氨基酸序列組成。包括在根據(jù)本發(fā)明的化合物中的氨基酸可以是L-或D-氨基酸。優(yōu)選地，包括在根據(jù)本發(fā)明的化合物的氨基酸是L-氨基酸。在一些實施方案中，特別是在需要對蛋白水解高抗性的情況下，可以優(yōu)選D-氨基酸。由于不同鉀通道差異性分布在不同類型細胞上，如果將抑制不同鉀通道活性的化合物應用于活生物體，同時會產(chǎn)生顯著的副作用。因此，本發(fā)明提供了相比其它鉀通道、特別是相比鉀通道Kv1.1，能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3的化合物。本文所用的術語“選擇性結(jié)合”是指根據(jù)本發(fā)明的化合物優(yōu)選結(jié)合Kv1.3通道，而不是其它離子通道，特別不是其它鉀通道如Kv1.1、Kv1.2、Kv1.5、Kv1.6、IKCa1、hERG或大電導率Ca2+活化的K+通道(BK通道)。優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的化合物能夠選擇性地結(jié)合鉀通道Kv1.3而不是鉀通道Kv1.1。在這種情況下，根據(jù)本發(fā)明的化合物以明顯高于與Kv1.1通道的親和力結(jié)合Kv1.3通道。在本發(fā)明的上下文中，毒素HsTx1被認為不是能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3的化合物，因為它還結(jié)合并有效抑制Kv1.1通道。在優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明選擇性結(jié)合Kv1.3的化合物，以比所述化合物結(jié)合Kv1.1通道的Kd值低至少1/2、1/5、1/10、1/100、1/1000、1/2000、優(yōu)選地至少1/3000、1/4000、1/5000、1/6000、1/7000、1/8000、1/9000或1/10000倍的Kd值結(jié)合鉀通道Kv1.3。在另一個優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明選擇性結(jié)合Kv1.3的化合物以比所述化合物結(jié)合其它鉀通道，例如Kv1.1、Kv1.2、Kv1.5、Kv1.6、IKCa1、hERG或大電導率Ca2+活化的K+通道(BK通道)的Kd值低至少1/4000、1/5000或1/10000的Kd值結(jié)合鉀通道Kv1.3。在特別優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明選擇性結(jié)合Kv1.3的化合物以比所述化合物結(jié)合Kv1.1通道的Kd值低至少1/4000、1/5000或1/10000的Kd值結(jié)合鉀通道Kv1.3。在優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的化合物結(jié)合鉀通道Kv1.3的Kd值通常為約0.1nM至約250nM之間、約0.5nM至約250nM之間、約1nM至約225nM之間、約1nM至約200nM之間，甚至更優(yōu)選約1nM至約100nM之間，最優(yōu)選約1nM至約50nM之間。根據(jù)本發(fā)明的化合物結(jié)合其它鉀通道，例如Kv1.1、Kv1.2、Kv1.5、Kv1.6、IKCa1、hERG或大電導率Ca2+活化的K+通道(BK通道)的Kd值優(yōu)選高于0.1mM、高于0.2mM、高于0.3mM、高于0.4mM或高于0.5mM。在特別優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物以高于0.1mM、高于0.2mM、高于0.3mM、高于0.4mM或高于0.5mM的Kd值結(jié)合Kv1.1通道。因此，根據(jù)本發(fā)明的化合物優(yōu)選以約0.5至約200nM之間，如約1或2nM至約200nM的Kd值結(jié)合鉀通道Kv1.3，而以高于0.1mM、高于0.2mM、高于0.3mM、高于0.4mM或高于0.5mM的Kd值結(jié)合Kv1.1通道。更優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的化合物以約0.5至約100nM之間，如約1或2nM至約100nM的Kd值結(jié)合鉀通道Kv1.3，而以約高于0.1mM、高于0.2mM、高于0.3mM、高于0.4mM或高于0.5mM的Kd值結(jié)合Kv1.1通道。甚至更優(yōu)選地，根據(jù)本發(fā)明的化合物以約0.5至約50nM之間，如約1或2nM至約50nM的Kd值結(jié)合鉀通道Kv1.3，而以約高于0.5mM的Kd值結(jié)合Kv1.1通道。根據(jù)本發(fā)明的化合物優(yōu)選能夠選擇性結(jié)合并阻斷或降低鉀通道Kv1.3的活性。與對照組相比，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以將鉀通道Kv1.3的活性降低至少10％、至少20％、至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％，更優(yōu)選至少80％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％或至少99％。在一些優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以阻斷100％的鉀通道Kv1.3的活性。根據(jù)本發(fā)明的化合物選擇性結(jié)合并阻斷或降低Kv1.3通道活性的能力可以通過本領域已知的測定方法來測試。例如，在一種方法中，可以將表達Kv1.3或另一種鉀通道如Kv1.1、Kv1.2、Kv1.5、Kv1.6、IKCa1、hERG或大電導率Ca2+活化的K+通道(BK通道)的哺乳動物細胞系與本發(fā)明的化合物接觸，且通道電流可以通過如描述于Grissmer等人(MolPharmacol45；1227-34(1994))或下文示例部分中所述的膜片鉗法來測量。每種化合物可以例如在不同濃度下進行測試。根據(jù)本發(fā)明的化合物的Kd值可以例如通過用所測量的峰值電流的降低對Hill方程進行擬合來確定。應當理解的是，如例如示例2中所述的用于測定Kd的方法不考慮所測量的通道的數(shù)目，這是為什么本公開中Kd對應于IC50值，使得術語Kd和IC50在本文中同義使用的目的。應當理解的是，當完全折疊和純化的肽類與包括不完全折疊的肽類共同使用時，可以觀察到較低的Kd值(參見示例2)。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物可以已經(jīng)連接到能夠識別和靶向TEM細胞的抗體或其它分子的N-末端氨基基團或其C-末端羧基基團。本發(fā)明的化合物可以使用本領域已知的技術制備。例如，肽可以采用固相Fmoc化學，例如根據(jù)由Merrifield(J.Am.Chem.Soc.85；7129(1963))最初描述并由Meienhofer等人(J.PeptideProt.Res.13；35(1979))和Fields等人PeptideRes.4；95(1991))之后修改的原理來合成。該合成可以例如在自動肽合成儀上進行。合成后，可以使用自動肽測序儀驗證序列。在本發(fā)明的上下文中提到的鉀通道，如鉀通道Kv1.1、Kv1.2、Kv1.3、Kv1.5、Kv1.6、IKCa1、hERG或大電導率Ca2+活化的K+通道(BK通道)在本領域是公知的。因此，普通技術人員可以容易地從任何合適的公共數(shù)據(jù)庫如NCBI數(shù)據(jù)庫(例如http://www.ncbi.nlm.nih.gov/pubmed/)中檢索到這些通道的多核苷酸和氨基酸序列和其直系同源物和剪接異構(gòu)體。在第二方面，本發(fā)明涉及包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo：1)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K。在優(yōu)選的實施方案中，所述化合物不是HsTx1(SEQIDNO：32)。在第二方面的變體中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：1的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：1的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在優(yōu)選的實施方案中，所述化合物不是HsTx1。在第二方面優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo：2)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N和X18＝G,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在優(yōu)選的實施方案中，所述化合物不是HsTx1。在第二方面的變體的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：2的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：2的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N和X18＝G,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在優(yōu)選的實施方案中，所述化合物不是HsTx1。在第二方面的優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-N-A-K-C-M-N-R-K-C-X14-C-X15-X16-C(SEQIDNo.：3)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝K,R；X15＝Y(jié),N,Q,T,S和X16＝G,R,K。在第二方面的變體的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：3的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：3的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝K,R；X15＝Y(jié),N,Q,T,S和X16＝G,R,K；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-N-A-K-C-M-N-R-K-C-X14-C-X15-X16-C(SEQIDNo.：4)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝K,R；X15＝Y(jié),N和X16＝G,R。在第二方面的變體的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：4的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：4的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝K,R；X15＝Y(jié),N和X16＝G,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的另一個優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-Y-G-C(SEQIDNo.：5)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L和X16＝K,R。在第二方面的變體的另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：5的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：5的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L和X16＝K,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-Y-G-C(SEQIDNo.：6)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G和X16＝K,R。在第二方面的變體的更優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：6的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：6的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G和X16＝K,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的另一個優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-N-A-K-C-M-N-R-K-C-X14-C-Y-G-C(SEQIDNo.：7)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I和X14＝K,R。在第二方面的變體的另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：7的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：7的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I和X14＝K,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-N-A-K-C-M-N-R-K-C-X14-C-Y-G-C(SEQIDNo.：8)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L和X14＝K,R。在第二方面的變體的更優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：8的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：8的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L和X14＝K,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的甚至更優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：9(cgtx538)的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：9(cgtx538)的氨基酸序列組成的化合物。在第二方面的另一個更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-Q-C-X7-R-X8-C-X9-X10-Q-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：10)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N和X10＝K,D,A,R,E,V,L,I。在第二方面的變體的另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：10的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：10的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N和X10＝K,D,A,R,E,V,L,I；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的另一個更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-Q-C-X7-R-X8-C-X9-X10-Q-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：11)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝A,Y,I,L,W；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N和X10＝K,D,A,R,E,V,L,I。在第二方面的變體的更優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：11的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：11的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝A,Y,I,L,W；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N和X10＝K,D,A,R,E,V,L,I；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的甚至更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括根據(jù)SEQIDNo：12(cgtx539)的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：12(cgtx539)的氨基酸序列組成。在第二方面另一個優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-R-X3-X4-X5-Q-C-Y-P-H-C-X6-X7-X8-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo：13)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X4＝P,S,T；X5＝R,K,P；X6＝R,K,Q,N；X7＝K,D,A,R,E,V,L,I和X8＝E,Q,A,L,D,N,V,I。在第二方面的變體的另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：13的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：13的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X4＝P,S,T；X5＝R,K,P；X6＝R,K,Q,N；X7＝K,D,A,R,E,V,L,I和X8＝E,Q,A,L,D,N,V,I；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-R-X3-X4-X5-Q-C-Y-P-H-C-X6-X7-X8-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：14)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝T,G,S,N,I；X4＝P,S,T；X5＝R,K,P；X6＝R,K,Q；X7＝K,D,A,R和X8＝E,Q,A,L；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的變體的更優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：14的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：14的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝T,G,S,N,I；X4＝P,S,T；X5＝R,K,P；X6＝R,K,Q；X7＝K,D,A,R和X8＝E,Q,A,L；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的甚至更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括根據(jù)SEQIDNo：15(cgtx540)的氨基酸序列。在第二方面的另一優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-R-C-X14-X15-C(SEQIDNo.：16)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,Q,T,S和X15＝G,R,K。在第二方面的變體的另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：16的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：16的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,Q,T,S和X15＝G,R,K；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-R-C-X14-X15-C(SEQIDNo.：17)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N和X15＝G,R。在第二方面的變體的更優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：17的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：17的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N和X15＝G,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的甚至更特別優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括根據(jù)SEQIDNo：18(cgtx541)或SEQIDNo：19(cgtx542)的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：18(cgtx541)或SEQIDNo：19(cgtx542)的氨基酸序列組成。在第二方面另一個優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：I-S-C-X1-X2-X3-X4-X5-C-X6-X7-X8-C-X9-X10-X11-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：20)；其中X1＝R,T,K,S,Y；X2＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X3＝P,S,T；X4＝R,K,P；X5＝D,Q,N,E；X6＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X7＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N；X10＝K,D,A,R,E,V,L,I和X11＝E,Q,A,L,D,N,V,I。在第二方面的變體的另一個優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括以下SEQIDNo：20的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：20的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝R,T,K,S,Y；X2＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X3＝P,S,T；X4＝R,K,P；X5＝D,Q,N,E；X6＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X7＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N；X10＝K,D,A,R,E,V,L,I和X11＝E,Q,A,L,D,N,V,I；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的更優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：I-S-C-X1-X2-X3-X4-X5-C-X6-X7-X8-C-X9-X10-X11-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：21)；其中X1＝R,T,K；X2＝T,G,S,N,I；X3＝P,S；X4＝R,K,P；X5＝D,Q,N,E；X6＝A,Y,I,L,W；X7＝D,R,P,K,E,S；X8＝P,H,V；X9＝R,K,Q；X10＝K,D,A,R和X11＝E,Q,A,L。在第二方面的變體的更優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：21的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：21的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝R,T,K；X2＝T,G,S,N,I；X3＝P,S；X4＝R,K,P；X5＝D,Q,N,E；X6＝A,Y,I,L,W；X7＝D,R,P,K,E,S；X8＝P,H,V；X9＝R,K,Q；X10＝K,D,A,R和X11＝E,Q,A,L；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第二方面的甚至更優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括根據(jù)SEQIDNo：22(cgtx545)的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：22(cgtx545)的氨基酸序列組成。在第三方面，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：G-V-X1-I-N-V-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo.：27)；其中X1＝P,I,F,V,A,L,W；X2＝K,S,T,Y,R；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R，X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K。在第三方面的變體中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：27的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：27的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝P,I,F,V,A,L,W；X2＝K,S,T,Y,R；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第三方面的優(yōu)選實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括以下氨基酸序列或由以下氨基酸序列組成：G-V-X1-I-N-V-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo.：28)；其中X1＝P,I,F；X2＝K,S；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N和X18＝G,R。在第三方面的變體的優(yōu)選實施方案中，本發(fā)明還涉及包括根據(jù)SEQIDNo：28的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：28的氨基酸序列組成的化合物，其中X1＝P,I,F；X2＝K,S；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N和X18＝G,R；且其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。在第三方面的特別優(yōu)選的實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的化合物包括根據(jù)SEQIDNo：29(cgtx543)、SEQIDNo.30(cgtx546)或SEQIDNo.31(cgtx548)的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNo：29(cgtx543)、SEQIDNo.30(cgtx546)或SEQIDNo.31(cgtx548)的氨基酸序列組成。因此，特別優(yōu)選的是根據(jù)本發(fā)明的化合物包括根據(jù)SEQIDNO.9、12、15、18、19、22、25、26、29、30或31的氨基酸序列或由根據(jù)SEQIDNO.9、12、15、18、19、22、25、26、29、30或31的氨基酸序列組成，且包括根據(jù)SEQIDNO.25的氨基酸序列的化合物或由根據(jù)SEQIDNO.25的氨基酸序列組成的化合物是最優(yōu)選的。在一些實施方案中，包括根據(jù)SEQIDNO.9、12、15、18、19、22、25、26、29、30或31的氨基酸序列的上述化合物或由根據(jù)SEQIDNO.9、12、15、18、19、22、25、26、29、30或31的氨基酸序列組成的上述化合物可以包括0至5個，即0、1、2、3、4、5個氨基酸的取代、缺失或插入，條件是該化合物仍然能夠選擇性結(jié)合和/或阻斷或降低Kv1.3鉀通道的活性。具有這種氨基酸突變的化合物稱為變體，并且其也形成本發(fā)明的一部分。取代可以是保守性取代或非保守性取代，優(yōu)選地取代是保守性取代。保守性取代包括用具有與被取代的氨基酸相似的化學性質(zhì)的另一氨基酸來取代氨基酸。在一些實施方案中，取代還可以是天然存在的氨基酸與非天然氨基酸的替換。術語“氨基酸缺失”和“氨基酸插入”在本文中根據(jù)它們在本領域中常規(guī)和公知含義使用。本發(fā)明在另一方面還提供了編碼根據(jù)本發(fā)明氨基酸序列的核酸。在本發(fā)明的上下文中，術語“核酸”或“核酸序列”是指能夠編碼給定氨基酸序列的單鏈或雙鏈形式的天然存在或合成的脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物。該術語還包括給定脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物的衍生物，其可以不同于原始脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物，原始脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物中原始序列的一個以上核苷酸被其它核苷酸取代和/或被通過本領域技術人員已知的方法(化學)修飾，條件是脫氧核糖核苷酸或核糖核苷酸聚合物仍然能夠編碼其各自的氨基酸序列。對于本領域技術人員顯而易見的是，由于遺傳密碼的簡并性，根據(jù)本發(fā)明的給定氨基酸序列可以由不同的核苷酸序列編碼。本發(fā)明在另一方面還提供了包括根據(jù)本發(fā)明的核酸序列的載體。載體可以是任何分子媒介，如質(zhì)粒載體、病毒載體、噬菌體載體或任何其它媒介，其含有一個以上根據(jù)本發(fā)明的核苷酸序列，并且優(yōu)選設計為用于在不同宿主細胞之間轉(zhuǎn)移。在優(yōu)選的實施方案中，載體是原核或真核表達載體。如本文所用的術語“表達載體”是指含有操作性連接的編碼序列的表達所需的期望的編碼序列和合適DNA序列并且能夠在特定宿主生物體(例如細菌、酵母、植物、昆蟲或哺乳動物)中或在體外表達系統(tǒng)中誘導蛋白質(zhì)表達的載體。表達載體可以包括功能性元件如可操作地連接到待轉(zhuǎn)錄的核酸序列的啟動子、使轉(zhuǎn)錄正確終止的終止序列和可選擇標記。本領域技術人員可意識到，啟動子的性質(zhì)將取決于載體是否將被用于原核或真核宿主細胞中。為了在延長的時間段內(nèi)獲得穩(wěn)定的表達，表達載體可以進一步包括復制起點(ORI)。合適的表達載體是本領域技術人員已知的。根據(jù)表達是否在原核或真核宿主細胞中或在體外表達系統(tǒng)中實現(xiàn)，載體可以是原核和/或真核表達載體如質(zhì)粒、粘粒、微染色體、細菌噬菌體、逆轉(zhuǎn)錄病毒載體等。如何根據(jù)具體需要選擇合適的載體是技術人員熟悉的。本發(fā)明在另一方面是指包括根據(jù)本發(fā)明的核酸序列或載體的宿主細胞。根據(jù)應用領域，宿主細胞可以是原核或真核宿主細胞。典型的原核宿主細胞包括細菌細胞，例如大腸桿菌(E.coli)。典型的真核宿主細胞包括酵母細胞如釀酒酵母(Saccharomycescerevisiae)、昆蟲細胞如Sf9/Sf21細胞、植物細胞和哺乳動物細胞如COS、CHO和HeLa細胞。本發(fā)明在另一方面還涉及包括根據(jù)本發(fā)明的化合物的藥物組合物。在一些實施方案中，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以包括超過一種根據(jù)本發(fā)明的化合物。例如，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以包括2、3、4、5、6、7、8、9、10或多于10種根據(jù)本發(fā)明的化合物。在一些優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明的藥物組合物可以包括一種以上根據(jù)本發(fā)明的化合物，其中所述化合物選自包括SEQIDNO.9、12、15、18、19、22、25、26、29、30或31的氨基酸序列的化合物組或選自由SEQIDNO.9、12、15、18、19、22、25、26、29、30或31的氨基酸序列組成的化合物組。貫穿本公開始終被認為特別優(yōu)選的用于治療使用的肽是SEQIDNo.：25(cgtx-544)、SEQIDNo.：29(cgtx543)和SEQIDNo.：9(cgtx538)的肽。應注意的是，下文描述的大多數(shù)實驗是采用SEQIDNo.：25(cgtx-544)的肽來進行的。然而，也已經(jīng)測試了SEQIDNo.：29(cgtx543)和SEQIDNo.:9(cgtx538)的肽相對于hERG的選擇性，并且基于它們的序列相似性，似乎可以合理地得出對于這些肽也可以觀察到如ctgx544觀察到的相似效果。這些肽以及本文所述的其它肽可以通過本領域已知的方法制備，例如固相合成。應注意的是，這些肽包括半胱氨酸殘基，因此可能需要主動折疊成天然狀態(tài)以實現(xiàn)最佳的活性。通過純化已經(jīng)完全折疊的肽可以進一步增強活性?？梢酝ㄟ^使被合成的肽進行氧化而形成半胱氨酸殘基之間的二硫橋來實現(xiàn)折疊。這可以通過如示例8所述，將肽在例如PH約為8的磷酸酯緩沖液中，在大氣氧存在下孵育來實現(xiàn)。折疊后可以進行質(zhì)譜分析，因為經(jīng)過折疊的肽將顯示出的輕微的質(zhì)量降低，對應于在二硫橋形成過程中氫原子損失。在ctgx544的情況下，質(zhì)量差將是4212對4220.2Da。經(jīng)過完全折疊的肽的純化可以通過本領域已知的方法如HPLC純化來實現(xiàn)。在示例8中描述了合適的方法。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物可以口服給藥，例如以可吸入粉末丸劑、片劑、漆片劑、糖衣片劑、顆粒劑、硬質(zhì)和軟質(zhì)的明膠膠囊、水性、醇性或油性溶液劑、糖漿劑、乳劑或懸浮液給藥，或直腸給藥，例如以栓劑的形式給藥。給藥也可以在鼻內(nèi)或舌下進行。給藥可以進一步以注射或輸注溶液的形式在腸胃外，例如皮下、肌肉內(nèi)或靜脈內(nèi)進行。其它合適的給藥形式是例如經(jīng)皮或局部給藥，例如以軟膏、酊劑、噴霧劑或經(jīng)皮治療系統(tǒng)的形式，或以鼻噴霧劑或氣霧劑混合物的形式吸入給藥。貫穿本公開始終被認為是特別優(yōu)選的給藥形式是靜脈內(nèi)、肌內(nèi)或皮下給藥。對于丸劑、片劑、糖衣片和硬明膠膠囊的生產(chǎn)，可以使用例如乳糖、淀粉例如玉米淀粉或淀粉衍生物、滑石、硬脂酸或其鹽等。用于軟質(zhì)明膠膠囊和栓劑的載體是例如脂肪、石蠟、半固體和液體多元醇類、天然或硬化油類等。用于制備溶液(例如注射溶液或乳液或糖漿)的合適載體是例如水、生理氯化鈉溶液、如乙醇、甘油、多元醇的醇類、蔗糖、轉(zhuǎn)化糖、葡萄糖、甘露醇、植物油等。藥物組合物還可包含添加劑，例如填充劑、崩解劑、粘合劑、潤滑劑、濕潤劑、穩(wěn)定劑、乳化劑、分散劑、防腐劑、甜味劑、著色劑、調(diào)味劑、芳香劑、增稠劑、稀釋劑、緩沖物質(zhì)，溶劑、增溶劑、實現(xiàn)儲存效果的試劑、用于改變滲透壓的鹽類、包衣劑或抗氧化劑。用于本文所述的各種不同形式的藥物組合物的合適賦形劑的實例可以在AWade和PJWeller編輯的“HandbookofPharmaceuticalExcipients”，第2版，(1994)中找到。在一些實施方案中，藥物組合物可以是持續(xù)釋放制劑。在一些實施方案中，除了至少一種根據(jù)本發(fā)明的化合物之外，根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物還可以包括適于治療自身免疫疾病的其它免疫抑制劑。此類免疫抑制劑的實例包括例如皮質(zhì)醇、氫化皮質(zhì)醇、地塞米松、環(huán)磷酰胺、亞硝基脲、甲氨蝶呤、巰嘌呤、絲裂霉素C、博來霉素、光輝霉素、環(huán)孢菌素、雷帕霉素、硫唑嘌呤、潑尼松和脫氧精胍菌素和干擾素。在其它優(yōu)選實施方案中，可將包括上述其它免疫抑制劑的組合物各自與包括一種以上根據(jù)本發(fā)明化合物的藥物組合物聯(lián)合來給藥至需要其的哺乳動物。在另一方面，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物用于治療或預防涉及效應器記憶細胞(TEM細胞)的疾病。本發(fā)明優(yōu)選涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物用于治療選自由自身免疫性疾病、肥胖癥、牙周炎和/或組織移植排斥組成的組的疾病。為了本公開的目的，術語“治療”是指疾病的治愈性緩解，而術語“預防”是指預防性預防。應當理解的是，這兩個術語并不意味著各個疾病的完全緩解或預防，而是在沒有以治療性或預防性目的而給藥藥物活性劑的情況相比有所改善。在一個特別優(yōu)選的實施方案中，本發(fā)明涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物用于治療或預防自身免疫性疾病的用途。在本發(fā)明的上下文中，術語“自身免疫性疾病”或“自身免疫性類疾病”是指由針對自編碼實體(即自身抗原)的不適當免疫應答引起的疾病狀態(tài)。包含在本定義之內(nèi)的這類疾病是由使得機體去攻擊自身的組織的免疫系統(tǒng)缺陷引起的許多疾病中的任何一種疾病。在優(yōu)選的實施方案中，自身免疫疾病是T細胞介導的自身免疫疾病?？梢酝ㄟ^本發(fā)明的化合物和藥物組合物治療或預防的自身免疫性疾病的示例包括例如，多發(fā)性硬化、類風濕性關節(jié)炎、銀屑病、I型糖尿病、血管炎、橋本氏病、哮喘、特應性皮炎、自身免疫性眼病、干燥綜合征、急性播散性腦脊髓炎(ADEM)、艾迪生病、強直性脊柱炎、抗磷脂抗體綜合征(APS)、再生障礙性貧血、自身免疫性肝炎、自身免疫性卵巢炎、腹腔疾病、克羅恩病、妊娠性類天皰瘡、古德帕斯徹氏綜合征、格雷夫斯病、格林-巴利綜合征、特發(fā)性血小板減少性紫癜、川崎病、紅斑狼瘡、重癥肌無力癥、斜視性眼陣攣-肌陣孿綜合征、視神經(jīng)炎、Ord's甲狀腺炎、天皰瘡、惡性貧血、多發(fā)性關節(jié)炎(狗)、原發(fā)性膽汁性肝硬化、賴特綜合征、高安動脈炎、顳動脈炎、溫抗體型自身免疫性溶血性貧血、韋格納肉芽腫病、ANCA相關性系統(tǒng)性血管炎、Churg-Strauss綜合征、顯微鏡下多血管炎、結(jié)腸炎、炎癥性腸病、葡萄膜炎和銀屑病性關節(jié)炎。這些自身免疫類疾病中的某些與TEM細胞有關，例如ANCA相關性系統(tǒng)性血管炎(Abdulahad,Nephrology,2009，第14卷，第26頁)、Churg-Strauss綜合征、韋格納肉芽腫病、顯微鏡下多血管炎(Berden,Arthritis&Rheumatism,2009,第60卷,第1578頁)、強直性脊柱炎，白賽病、結(jié)腸炎、克羅恩病、炎癥性腸病、多發(fā)性硬化、銀屑病、類風濕性關節(jié)炎、干燥綜合征、I型糖尿病(Ulivieri,ExpertRev.Vaccines,2013，第12卷，第297頁)、系統(tǒng)性紅斑狼瘡(Devarajan,Immunol.Res,2013,第57卷,第12頁)、葡萄膜炎(Amadi-Obi,Nephrology,2009,第14卷，第26頁)和銀屑病性關節(jié)炎(DeVlam,ActaDerm.Venereol,2014,第94卷,第627頁)。這也適用于肥胖癥(Xu,HumanMolecularGenetics,2003,第12卷,第551頁)。鑒于ctgx544已經(jīng)顯示出選擇性地作用于TEM細胞并對類風濕性關節(jié)炎具有效果，假設可將cgtx544和本文公開的其它肽類用于治療或預防此類疾病似乎是合理的。在優(yōu)選的實施方案中，通過本發(fā)明的化合物和藥物組合物治療或預防的自身免疫疾病選自由多發(fā)性硬化、類風濕性關節(jié)炎、銀屑病、I型糖尿病和血管炎組成的組。由于針對新器官或組織(例如心臟、肝臟、腎臟、胰腺或皮膚)的T細胞介導的免疫應答，器官或組織移植到新的宿主中時常常可能導致被移植器官或組織的排斥。因此，本發(fā)明還涉及根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物用于治療或預防器官或組織移植排斥。器官移植排斥也已經(jīng)顯示出涉及了TEM細胞(參見例如Macedo,Transplantation,2012，第93卷，第813頁)。鑒于cgtx544和本文公開的其它肽類的高選擇性，假設cgtx544和本文公開的其它肽類可用于治療或預防此類疾病似乎是合理的。在另一方面，本發(fā)明涉及通過將根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物給藥至需要其的哺乳動物，來治療或預防哺乳動物體內(nèi)自身免疫疾病、肥胖癥、牙周炎和/或組織移植排斥的方法。優(yōu)選地，自身免疫疾病選自由多發(fā)性硬化、類風濕性關節(jié)炎、銀屑病、I型糖尿病和血管炎組成的組。本文所用的術語“哺乳動物”包括例如人類、非人靈長類動物、小鼠、大鼠、兔、豚鼠、狗、貓、牛、馬、綿羊、豬、山羊等。優(yōu)選的哺乳動物是人類。根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的單位劑量可以含有任何合適有效量的以待采用的預期的每日劑量范圍的根據(jù)本發(fā)明的化合物。需要給藥根據(jù)本發(fā)明的化合物或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的哺乳動物是例如患有或有風險形成T細胞介導的疾病、優(yōu)選T細胞介導的自身免疫疾病的哺乳動物。在優(yōu)選的實施方案中，所述自身免疫疾病選自由多發(fā)性硬化、類風濕性關節(jié)炎、銀屑病、I型糖尿病和血管炎組成的組。本發(fā)明的其它方面還涉及制備根據(jù)本發(fā)明的化合物、根據(jù)本發(fā)明的核酸序列、根據(jù)本發(fā)明的載體或根據(jù)本發(fā)明的藥物組合物的方法。本發(fā)明還涉及：(1)包括以下氨基酸序列的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo.：1)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K。在優(yōu)選的實施方案中，所述化合物不是HsTx1(SEQIDNo.：32)。(2)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(1)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo.：2)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N和X18＝G,R。在優(yōu)選的實施方案中，所述化合物不是HsTx1。(3)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(1)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-N-A-K-C-M-N-R-K-C-X14-C-X15-X16-C(SEQIDNo.：3)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝K,R，X15＝Y(jié),N,Q,T,S和X16＝G,R,K。(4)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(3)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-N-A-K-C-M-N-R-K-C-X14-C-X15-X16-C(SEQIDNo.：4)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝K,R；X15＝Y(jié),N和X16＝G,R。(5)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(1)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-Y-G-C(SEQIDNo.：5)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L和X16＝K,R。(6)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(5)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-Y-G-C(SEQIDNo.：6)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G和X16＝K,R。(7)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(1)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-N-A-K-C-M-N-R-K-C-X14-C-Y-G-C(SEQIDNo.：7)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I和X14＝K,R。(8)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(7)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-N-A-K-C-M-N-R-K-C-X14-C-Y-G-C(SEQIDNo.：8)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L和X14＝K,R。(9)包括氨基酸序列SEQIDNo.9的根據(jù)(8)的化合物。(10)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(1)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-Q-C-X7-R-X8-C-X9-X10-Q-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：10)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N和X10＝K,D,A,R,E,V,L,I。(11)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(10)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-Q-C-X7-R-X8-C-X9-X10-Q-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：11)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝A,Y,I,L,W；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N和X10＝K,D,A,R,E,V,L,I。(12)包括氨基酸序列SEQIDNo.12的根據(jù)(11)的化合物。(13)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(1)的化合物：X1-X2-C-R-X3-X4-X5-Q-C-Y-P-H-C-X6-X7-X8-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：13)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X4＝P,S,T；X5＝R,K,P；X6＝R,K,Q,N；X7＝K,D,A,R,E,V,L,I和X8＝E,Q,A,L,D,N,V,I。(14)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(13)的化合物：X1-X2-C-R-X3-X4-X5-Q-C-Y-P-H-C-X6-X7-X8-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：14)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝T,G,S,N,I；X4＝P,S,T；X5＝R,K,P；X6＝R,K,Q；X7＝K,D,A,R和X8＝E,Q,A,L。(15)包括氨基酸序列SEQIDNo.15的根據(jù)(14)的化合物。(16)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(1)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-R-C-X14-X15-C(SEQIDNo.：16)；其中X1＝A,V,I,L；X2＝S,R,K,T,Y；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,Q,T,S和X15＝G,R,K。(17)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(16)的化合物：X1-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-R-C-X14-X15-C(SEQIDNo.：17)；其中X1＝A,V,I；X2＝S,R,K；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N和X15＝G,R。(18)包括SEQIDNo.18或SEQIDNo.19的氨基酸序列的根據(jù)(17)的化合物。(19)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(1)的化合物：I-S-C-X1-X2-X3-X4-X5-C-X6-X7-X8-C-X9-X10-X11-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：20)；其中X1＝R,T,K,S,Y；X2＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X3＝P,S,T；X4＝R,K,P；X5＝D,Q,N,E；X6＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X7＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X8＝P,H,V,I,L,A；X9＝R,K,Q,N；X10＝K,D,A,R,E,V,L,I和X11＝E,Q,A,L,D,N,V,I。(20)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(19)的化合物：I-S-C-X1-X2-X3-X4-X5-C-X6-X7-X8-C-X9-X10-X11-T-G-C-P-Y-G-K-C-M-N-R-K-C-K-C-N-R-C(SEQIDNo.：21)；其中X1＝R,T,K；X2＝T,G,S,N,I；X3＝P,S；X4＝R,K,P；X5＝D,Q,N,E；X6＝A,Y,I,L,W；X7＝D,R,P,K,E,S；X8＝P,H,V；X9＝R,K,Q；X10＝K,D,A,R和X11＝E,Q,A,L。(21)包括SEQIDNo.22的氨基酸序列的根據(jù)(20)的化合物。(22)包括以下氨基酸序列的化合物：X1-X2-X3-N-V-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-C-X10-X11-X12-C-X13-X14-X15-T-G-C-P-X16-X17-K-C-M-N-R-K-C-X18-C-X19-X20-C(SEQIDNo.：23)，其中X1＝T,Q,S,Y,N；X2＝I,F,V,A,L,W；X3＝I,T,Y,S,V,A,L；X4＝K,S,T,Y,R；X5＝R,T,K,S,Y；X6＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X7＝P,S,T；X8＝R,K,P；X9＝D,Q,N,E；X10＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X11＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X12＝P,H,V,I,L,A；X13＝R,K,Q,N；X14＝K,D,A,R,E,V,L,I；X15＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X16＝Y(jié),N,S,T,Q；X17＝A,G,V,I,L；X18＝K,R；X19＝Y(jié),N,Q,T,S和X20＝G,R,K。(23)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(22)的化合物：X1-X2-X3-N-V-X4-C-X5-X6-X7-X8-X9-C-X10-X11-X12-C-X13-X14-X15-T-G-C-P-X16-X17-K-C-M-N-R-K-C-X18-C-X19-X20-C(SEQIDNo.：24)；其中X1＝T,Q；X2＝I,F；X3＝I,T；X4＝K,S；X5＝R,T,K；X6＝T,G,S,N,I；X7＝P,S；X8＝R,K,P；X9＝D,Q,N,E；X10＝A,Y,I,L,W；X11＝D,R,P,K,E,S；X12＝P,H,V；X13＝R,K,Q；X14＝K,D,A,R；X15＝E,Q,A,L；X16＝Y(jié),N；X17＝A,G；X18＝K,R；X19＝Y(jié),N和X20＝G,R。(24)包括SEQIDNo.25或SEQIDNo.26的氨基酸序列的根據(jù)(23)的化合物。(25)包括以下氨基酸序列的化合物：G-V-X1-I-N-V-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo.：27)；其中X1＝P,I,F,V,A,L,W；X2＝K,S,T,Y,R；X3＝R,T,K,S,Y；X4＝T,G,S,N,I,K,Q,A,V,L,Y；X5＝P,S,T；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W,S,T,V,L,F；X9＝D,R,P,K,E,S,T,Y；X10＝P,H,V,I,L,A；X11＝R,K,Q,N；X12＝K,D,A,R,E,V,L,I；X13＝E,Q,A,L,D,N,V,I；X14＝Y(jié),N,S,T,Q；X15＝A,G,V,I,L；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N,Q,T,S和X18＝G,R,K。(26)包括以下氨基酸序列的根據(jù)(25)的化合物：G-V-X1-I-N-V-X2-C-X3-X4-X5-X6-X7-C-X8-X9-X10-C-X11-X12-X13-T-G-C-P-X14-X15-K-C-M-N-R-K-C-X16-C-X17-X18-C(SEQIDNo.：28)；其中X1＝P,I,F；X2＝K,S；X3＝R,T,K；X4＝T,G,S,N,I；X5＝P,S；X6＝R,K,P；X7＝D,Q,N,E；X8＝A,Y,I,L,W；X9＝D,R,P,K,E,S；X10＝P,H,V；X11＝R,K,Q；X12＝K,D,A,R；X13＝E,Q,A,L；X14＝Y(jié),N；X15＝A,G；X16＝K,R；X17＝Y(jié),N和X18＝G,R。(27)包括SEQIDNo.：29、SEQIDNo.：30或SEQIDNo.：31的氨基酸序列的根據(jù)(26)的化合物。(28)根據(jù)(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(13)、(14)、(17)、(19)、(20)、(22)、(23)、(25)或(26)中任一化合物，其中該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。(29)根據(jù)(1)、(2)、(3)、(4)、(5)、(6)、(7)、(8)、(9)、(10)、(11)、(13)、(14)、(17)、(19)、(20)、(22)、(23)、(25)或(26)中任一化合物，其中相比于鉀通道Kv1.1，該化合物能夠選擇性結(jié)合鉀通道Kv1.3。(30)編碼(1)至(27)中任一項所述的氨基酸序列的核酸序列。(31)包括根據(jù)(30)的核酸序列的載體。(32)包括根據(jù)(30)的核酸序列或根據(jù)(31)的載體的宿主細胞。(33)包括根據(jù)(1)至(29)中任一項的化合物的藥物組合物。(34)根據(jù)(1)至(29)中任一項所述的化合物或根據(jù)(33)的藥物組合物，用于治療自身免疫性疾病、肥胖癥、牙周炎和/或組織移植排斥。(35)根據(jù)(1)至(29)中任一項的化合物或根據(jù)(33)的藥物組合物在制備用于治療或預防自身免疫疾病、肥胖癥、牙周炎和/或組織移植排斥的藥物中的用途。(36)通過將根據(jù)(1)至(29)中任一項的化合物或根據(jù)(33)的藥物組合物給藥至需要其的哺乳動物來治療或預防哺乳動物體內(nèi)的自身免疫疾病、肥胖癥、牙周炎和/或組織移植排斥的方法。(37)采用根據(jù)(30)的核酸序列、根據(jù)(31)的載體或根據(jù)(32)的宿主細胞制備根據(jù)(1)至(29)任一項的化合物的方法。示例示例1-電生理學測量通過采用表達人Kv1.3(hKv1.3)通道的草地貪夜蛾(Spodopterafrugiperda)(Sf21)細胞來測量鉀電流。在膜去極化時通道活性被活化至比-40mV更正向的電壓?；罨瘎恿W是快速且強電壓依賴性的，而失活卻慢得多，并沒有顯示出顯著的電壓依賴性。在Sf21細胞中，hKv1.3在+40mV下具有250pA-5nA之間的平均電流幅度。感染1-3天后，次用平面膜片鉗技術，利用Port-A-Patch(NanionTechnologiesGmbH)記錄鉀電流。通過電壓階躍將離子電流激活至+40mV的去極化電位并持續(xù)200ms。將Sf21細胞在補充有10％FBS(胎牛血清)、2mM谷氨酰胺、1×酵母自溶液(Yeastolate)(來自50×儲備溶液)和0.1％F68(BASF)的Grace's昆蟲細胞培養(yǎng)基中培養(yǎng)至細胞密度為2–3×106個細胞/ml。電生理學緩沖液如下：外緩沖液：160mMNaCl4.5mMKCl1mMMgCl22mMCaCl25mMD-葡萄糖一水合物10mMHEPES/NaoHpH7.4內(nèi)緩沖液：75mMKCl10mMNaCl70mMK-氟化物2mMMgCl210mMEGTA10mMHEPES/KOHpH7.2為了證明本文所述的肽類(SEQIDNO：1至31，特別是cgtx-544(SEQIDNo：25))的選擇性，測定結(jié)合cgtx-544與Kv1.3、Kv1.1和Kv1.5的IC50。以HsTx1(SEQIDNo：32)作為對照。將肽類以1μg/μl溶解于20mMpH為8.2的NaPO4緩沖液中(1mg每1ml折疊緩沖液)，并在室溫下，在相同的緩沖液3×1L中，用截止500Da的Float-a-Lyzer(Spectrapor)透析。測試例如100pM、1nM、10nM、50nM、100nM、500nM和1μM的不同濃度下的HsTx1結(jié)合性，該結(jié)合性取決于測試的通道。Kv1.1、Kv1.3和Kv1.5的代表性測量被分別如圖1a)、圖1b)和圖1c)所示。HsTx1與Kv1.3結(jié)合的IC50為25±2.1nM。HsTx1與Kv1.1結(jié)合的IC50為11.3μM。Kv1.5中沒有檢測到結(jié)合。因此，與Kv1.1相比，HsTx1對Kv1.3具有約450倍的更高的選擇性。測試不同濃度下例如1nM、10nM、50nM、100nM、1μM和5μM的cgtx-544結(jié)合性，該結(jié)合性取決于測試的通道。Kv1.1、Kv1.3和Kv1.5的代表性測量如圖1d)、圖1e)和圖1f)所示。cgtx-544與Kv1.3的結(jié)合的IC50為6.9nM。高達10μM的濃度下都檢測不到與Kv1.5的結(jié)合。Kv1.1在10μM下被阻斷約22％。因此，與HsTx1相比，cgtx-544對Kv1.3比Kv1.1具有更高的選擇性。示例2：比較與Kv1.3和hERG的結(jié)合性在下面的示例中，通過電生理學測量比較所選的肽類與Kv1.3和hERG的結(jié)合性。細胞系統(tǒng)為了測定與Kv1.3的結(jié)合性，采用內(nèi)源表達Kv1.3的Jurkat細胞。為了與hERG結(jié)合，采用穩(wěn)定表達hERG的HEK細胞。細胞培養(yǎng)采用標準細胞培養(yǎng)技術進行細胞培養(yǎng)。簡言之，使細胞在基于DMEM的培養(yǎng)基中，在10cm培養(yǎng)皿或T75培養(yǎng)瓶中生長。當達到60-80％的融合度時，每2-3天將細胞分開。將Jurkat細胞重新懸浮，然后在離心機中旋轉(zhuǎn)以在Patchliner(Nanion)上記錄。在旋轉(zhuǎn)之前，用胰蛋白酶處理HEK細胞，將其從培養(yǎng)皿表面分離。旋轉(zhuǎn)后，將細胞重新懸浮于外記錄緩沖液中直至密度為約1-2百萬個細胞/ml。內(nèi)記錄溶液：50mMKCl10mMNaCl60mMKF20mMEGTA10mMHEPES/KOH，pH7.2,(Osm:約290mOsm)將新鮮的5mMMg-ATP和0.3mMNa-GTP加入內(nèi)溶液中，并將pH調(diào)節(jié)至7.2。外記錄緩沖液：140mMNaCl4mMKCl1mMMgCl22mMCaCl25mMD-葡萄糖一水合物10mMHEPES/NaOHpH7.4，(Osm:約298mOsm)化合物測試下列化合物電生理學測量用Patchliner進行電生理學記錄，同時記錄多達8個通道。Patchliner是利用硼硅酸鹽玻璃芯片(NPC-16)作平面膜片鉗并通過PatchControlHT軟件操作的自動膜片鉗系統(tǒng)。使用具有對于Jurkat細胞為3-5MΩ的電阻的和對于HEK細胞為2-3MΩ的電阻的NPC-16芯片進行記錄。在記錄過程中，將細胞保存在“細胞旅館(cellhotel)”中，并在其中定期用移液器上下移動以保持其活力。細胞存活約2-3小時。PatchControlHT軟件在計算機上同時運行兩個程序來操作Patchliner-Nanion的PatchControlHT和HEKA的PatchMaster。PatchMaster控制HEKAEPC10放大器并執(zhí)行記錄。脈沖方案和在線分析可以在此程序內(nèi)生成。PatchControlHT用于定義從捕獲和封接該細胞至進入(going)全細胞并獲得所需記錄的完整實驗程序。PatchControlHT和PatchMaster之間的雙向通信使得PatchControlHT根據(jù)細胞狀態(tài)(高阻封接，全細胞模式)來調(diào)整其動作。該程序完全指導包括用于進行溶液交換的移液管的Patchliner的機器人功能。同時，PatchControlHT還控制放大器，并從PatchMaster讀出所有重要的patch參數(shù)。PatchControlHT是圖形用戶界面，其中定義了實驗中的所有參數(shù)和成功標準。如果記錄沒有很好地達到成功標準，則可使用使PatchControlHT停止特別好的記錄的選項。實驗路線為了建立適當?shù)挠涗洍l件，通過Patchliner的標準程序功能完成芯片填充、細胞捕獲、封接和破碎成全細胞模式。在該程序結(jié)束時，對于期望的記錄適當?shù)卦O置放大器(例如保持電位、慢容量補償和增益)，然后開始記錄。在每個實驗中，細胞用外溶液洗滌三次以確保穩(wěn)定的記錄。進一步在表達hERG細胞上測試化合物1-8。每種化合物的暴露時間為4分鐘，每個實驗總共運行24分鐘。電壓方案對于hERG：使用電壓階躍方案使hERG電流從保持電位的-80mV變?yōu)?40mV并保持500ms，隨后階躍至+40mV保持500ms，進行500ms的-40mV測試脈沖，得到尾電流，然后返回到保持電位。每10秒重復該階躍。連續(xù)運行該方案，并連續(xù)讀取在線結(jié)果。這樣做可以監(jiān)測由于洗滌和/或施加化合物引起的變化，并達到評價的穩(wěn)態(tài)。數(shù)據(jù)分析使用2×EPC10Quadro放大器、PatchMaster軟件包(HEKAElectronics，Lambrecht/Pfalz，Germany)、Excel和Igor(WaveMetrics，USA)進行數(shù)據(jù)記錄和分析。對于hERG的藥理學，使用PatchMaster中的在線分析功能計算第二次-40mV步驟(尾電流)的峰值振幅。從該峰中減去泄漏(從第一步計算至-40mV)以計算出真實峰，并可將這些繪制為時間的函數(shù)。將數(shù)值導出到Excel中以計算Igor中的濃度響應曲線。利用Igor(WaveMetrics，USA)繪制和導出附圖。在Igor中構(gòu)建濃度響應曲線。擬合Hill方程，估算每種化合物的IC50，并且計算出相對于最大阻斷的IC50。如果可能，數(shù)值表示為平均值±S.E.M。結(jié)果在hERG電流上測試化合物1-8在Kv1.3電流上化合物1-8的電生理學測量表明這些肽類是活性的。因此，在表達hERG的HEK細胞上測試化合物1-8。為了研究這些化合物的作用，進行兩點篩選程序。通常，測試3至5個細胞以確保準確性。每個實驗開始時，進行三次洗滌以確保電流穩(wěn)定。hERG電流略微增加，但在第二次洗滌后變得穩(wěn)定?；衔?、2、4、5、7和8似乎對hERG電流僅具有較低的影響。通常，化合物1-8的作用也可以通過hERG電流的衰減效應來解釋。結(jié)果示于圖3中。所有化合物的平均電流阻斷值±SEM的概述示于表1中。表1表1：化合物1-8的效果的總結(jié)。每種化合物的測試濃度不同。從每種化合物施加結(jié)束時的從穩(wěn)態(tài)電流計算歸一化后的阻斷值。所有化合物似乎對較低濃度的hERG電流沒有或只有很小的影響。在更高的濃度，化合物似乎影響了hERG，然而，這些影響可能是由于hERG電流的衰減造成的。進一步分析在使各個肽經(jīng)歷如示例8所述的折疊方案，而不對經(jīng)過完全折疊的肽進行純化后，進行了上述分析。此外，如上所述將cgtx-544折疊和純化。然后對該cgtx-544(單個)進行重復分析。此外，隨后通過更長的時間的孵育(即約20分鐘(與肽長結(jié)合(on-rate)相關性更好的時間))測試cgtx-544(單個)對Kv1.3的作用。在這些條件下，與6.9nM未純化的cgtx-544(參見示例1)相比，經(jīng)過折疊和純化后的cgtx-544(單個)顯示出約900pM的IC50。結(jié)果示于圖35中。示例3-在人和大鼠血漿中cgtx-544(SEQIDNo：25)的穩(wěn)定性1、測定人和大鼠血清樣品中的離體穩(wěn)定性目的是在室溫(RT)和37℃下，在不同孵育時間后測試哺乳動物血漿中cgtx-544肽的穩(wěn)定性。穩(wěn)定性定義為在RT和37℃下，在不同孵育時間后cgtx-544的IC50值。用來自健康大鼠或人的新鮮血液樣品制備血漿。將肝素添加到新鮮血液樣品中以防止結(jié)塊。通過在RT下以2000xg離心2分鐘制備血漿。在實驗開始之前定義cgtx-544的IC50-電生理學測定產(chǎn)生46.1nM±3.9nM的IC50值(對于n＝5個細胞)。由于在這些實驗中采用的cgtx-544肽不完全折疊，因此測定出的IC50比正常更高。制備的人和大鼠血漿的陰性對照顯示出沒有血漿成分與Sf21昆蟲細胞中表達的Kv1.3通道進行非特異性結(jié)合。為了研究血漿中的穩(wěn)定性和活性，將肽加至新制備的人和大鼠血漿中，最終濃度為20μM。將樣品分成兩等份并在37℃和室溫(RT，20℃)下孵育。制備樣品的連續(xù)的稀釋液用于電生理學分析。時間點0h：將肽添加入血漿后，直接分析樣品并顯示出對Kv1.3通道的強親和力。人血漿中的cgtx-544的IC50值被提高至20.9nM和大鼠血漿中IC50值被提高至15.0nM(數(shù)據(jù)未顯示)。時間點24h：在隨后的24小時中，沒有檢測在37℃和RT下儲存的肽探針的活性的顯著變化。時間點48h:48小時后，在37℃孵育的肽的活性降低，并且在人血漿或大鼠血漿中孵育的cgtx-544的IC50值是t＝0h時的兩倍(分別為37.3nM和57.8nM)。在RT保存的cgtx-544的活性保持不變。時間點14天：在37℃孵育14天后，未檢測到活性。在室溫孵育的cgtx-544探針顯示活性不變。示例4-cgtx-544(SEQIDNo.：25)對分離出的人TEM細胞的療效1、在分離出的人TEM中Kv1.3電流的分析聯(lián)合利用昆蟲細胞系草地貪夜蛾(Spodopterafrugiperda)(Sf21)與桿狀病毒感染系統(tǒng)，以用于異源表達重組離子通道。Sf21細胞提供高度特異性的蛋白表達和正確的翻譯后修飾，導致形成與提出的體內(nèi)離子通道的電生理參數(shù)具有可比性的功能性通道。因此，有必要比較在Sf21細胞中表達的鉀選擇性離子通道Kv1.3和在TEM細胞中內(nèi)源表達的Kv1.3通道的電生理學性質(zhì)。為了比較特征電壓依賴性Kv1.3通道活化，采用以20mV階躍(激活脈沖200ms)從-60mV至+60mV的典型電壓方案。在保持電位-100mV下夾持細胞。圖4顯示了兩個單獨的Sf21和TEM細胞(分別為圖4A和4B)的電流響應和電壓依賴性Kv1.3活化的脈沖方案(圖4C)。圖5顯示了相應的歸一化的電壓-電流關系。在膜從保持電位(-100mV)至-20mV的去極化時，Kv1.3開始打開，并在+60mV時達到其最大打開狀態(tài)。即使Kv1.3的表達在Sf21細胞中高得多，特性電壓依賴性活化保持不變。明顯源自Kv1.3活性的最大觀察電流和施加的電壓能夠評估所有Kv1.3通道的總電導率。因此，可以使用已知的單個Kv1.3通道的電導率來計算出通道的數(shù)量。最大K+外向電流被定義為在前20％電流蹤跡中活化的未阻斷電流和最大阻斷(完全阻斷)電流之間的差。通過改變感染條件，可以根據(jù)研究的需要控制Sf21細胞中Kv1.3的表達水平。在我們的標準條件下，可以估算出每個細胞具有的最大電流為2-5nA，電導為33-50nS和存在2500-3800個通道。Sf21細胞中的異源表達系統(tǒng)顯示用于體外藥理學感興趣的離子通道的電生理學分析的合適方法?；谶@些觀察，可以假定Kv1.3離子通道在Sf21細胞的質(zhì)膜中的折疊和插入是可以與TEM細胞中的天然Kv1.3蛋白相當?shù)??？梢郧宄刈C明，異源表達的Kv1.3通道可以作為通過評估電生理參數(shù)來研究藥物靶向的模型系統(tǒng)。用肽化合物cgtx-544進行特異性Kv1.3阻斷。如前所示，肽對Kv1.3通道顯示高親和力，也將其在分離出的人的TEM細胞上進行測試(圖6)。注意的是，在這些實驗中采用的cgtx-544是不完全折疊的，并且顯示出的IC50比正常更高。然而，該化合物在Kv1.3轉(zhuǎn)染的Sf21細胞上顯示出與在人的TEM細胞上相同的值(圖6)。示例5-用肽cgtx-544(SEQIDNo.：25)治療抗原誘導的關節(jié)炎1、實驗模型1、AIA-抗原誘導的關節(jié)炎大鼠中抗原誘導的關節(jié)炎(AIA)的疾病模型代表了T細胞依賴性的自身免疫性關節(jié)炎，其與人類中的類風濕性關節(jié)炎的許多特征類似。因此，該系統(tǒng)可以作為評估本文公開的T細胞抑制肽的治療成功的疾病模型。相對于目前治療(例如使用一般性細胞抑制劑)，這種治療方法的一個主要優(yōu)點是，只有在疾病產(chǎn)生中臨時涉及的免疫系統(tǒng)的小亞群被抑制，而免疫防御的其它重要部分，例如先天免疫系統(tǒng)仍然完好無損的事實。此外，該疾病模型能夠測試cgtx肽在體內(nèi)的療效和耐受性。2、誘導關節(jié)炎在4周的時間段內(nèi)進行整個實驗。通過皮下注射不完全弗氏佐劑(IFA)中的mBSA和結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)的混合物，在第-21天(實驗開始)和第-14天進行預免疫。在第0天，通過在右膝關節(jié)內(nèi)單次注射抗原mBSA而在一個膝關節(jié)中誘導了局部誘導炎癥。在該實驗設置中，第二(左)未治療的膝關節(jié)用作個體內(nèi)對照。誘導后的第一個小時期間，經(jīng)過處理的膝關節(jié)發(fā)展出嚴重的腫脹反應，通常在誘導后第1天和第2天腫脹達到最大。該表型在額外的2至3天內(nèi)是穩(wěn)定的，之后腫脹再次消退。該方案能夠在>95％的實驗動物中誘導出局部的、可再現(xiàn)的關節(jié)炎。在陰性對照實驗中，在對照動物的膝部內(nèi)給予相同體積(針對mBSA誘導溶液)的0.9％NaCl(參見圖7和8)。2、材料和方法2.1動物Lewis大鼠，雌性，體重(BW)180-200g，年齡約8周，Janvier，法國將動物保持在常規(guī)房舍條件下-每個IV型Makrolon籠中5只動物，在12小時日/夜節(jié)律中自由采食食物和水，室溫為22+/-2℃，空氣濕度在55+/-5％。2.2.制備用于免疫的乳劑、動物免疫和誘導局部關節(jié)炎2.2.1.免疫乳劑和免疫過程2.2.1.1.材料：結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)H37Ra(BD231141)不完全弗氏佐劑(SigmaF5506)mBSA(SigmaA1009-1G)0.9％NaCl(Braun)異氟醚(Abbott)2.2.1.2.預免疫乳劑溶液A：mBSA儲備溶液(50mg/ml)：無菌條件下添加20ml水溶性注射液至1小瓶mBSA(1g)中。該無菌溶液可以在4℃下儲存幾個月。溶液B：完全弗氏佐劑(CFA)儲備溶液(10mg/ml)：向1小瓶含有100mg細菌的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacteriumtuberculosis)中加入10ml(1小瓶)不完全弗氏佐劑。該溶液可以在4℃下儲存1個月。制備混合物兩種組分以相等的體積混合，得到乳液(在超凈臺中在無菌條件下混合)。如下所述，將組分移液至15ml或50mlFalcon管中：1.溶液A-mBSA儲備溶液2.溶液B-結(jié)核分枝桿菌(M.tuberculosis)溶液在加入組分后，直接將管渦旋20秒。在制備的最后步驟中，將溶液用超聲處理器(0.5個循環(huán)，振幅為60％)乳化，直到形成稠的乳液。2.2.1.3.預免疫在最后的關節(jié)炎誘導前將動物預免疫兩次。預免疫在第-21天和第-14天進行。在這些時間點，皮下注射免疫溶液。用5％異氟醚誘導麻醉后，用2％的異氟醚維持麻醉。通過使用25G套管施用總共500μl的乳化溶液。在尾基部的兩側(cè)(右和左)以及左右肩胛骨上方的兩側(cè)皮下分別注射125μl的預免疫乳劑。2.2.1.4.局部關節(jié)炎的誘導在第0天，通過在右膝關節(jié)中關節(jié)內(nèi)給予抗原(500μgmBSA/50μl0.9％NaCl溶液)誘導關節(jié)炎。左膝作為個體內(nèi)對照保持不變。麻醉動物，并對注射部位進行消毒。這種施用采用短而細的套管(30G，1/2)以盡量減少組織損傷完成。在給予抗原并撤出導管后，使關節(jié)緩慢彎曲并伸展數(shù)次。2.2.2.膝關節(jié)腫脹測量用測徑器測定膝關節(jié)的矢狀徑。將實驗動物麻醉短暫的時間并將背部定位。將腿調(diào)節(jié)到90度角，并測量三次膝部的矢狀徑。2.2.3.取血為了取血，將動物簡單麻醉，尾部消毒，并用套管刺穿尾靜脈，用肝素涂覆的移液管抽出50μl血液，并與5μl穩(wěn)定劑(CPD)和1μl肝素(1.5U/μl以1:4稀釋在0.9％NaCl中)混合。2.2.3.血液學用庫爾特計數(shù)器以自動模式計數(shù)白細胞(WBC)。2.2.4.體重測量在上午8:00和9:00之間，每天測量一次實驗動物的體重。2.2.5.臨床檢查和膝關節(jié)腫脹的測量在誘導局部關節(jié)炎后，每天檢查實驗動物。測量膝關節(jié)的腫脹，并對總體健康狀態(tài)進行評分。2.3.實驗動物的治療動物的治療從第-3天開始，施用肽cgtx-544(SEQIDNo.25)以1mg/kg體重(BW)的體積為0.6ml的0.9％NaCl的劑量，或可選地對于對照對物施以相同體積的0.9％NaCl(賦形劑)。在麻醉動物的尾靜脈以靜脈注射的方式分別給予肽或賦形劑。治療后約1小時，觀察治療的動物。3.結(jié)果在預免疫階段，密集地監(jiān)測實驗動物，并在第-21、-14、-7、0和7天抽取血液樣品用于監(jiān)測動物的免疫狀態(tài)。在相應的分析時間點，在外周血中，炎癥的發(fā)展和白細胞(WBC，白細胞)計數(shù)之間存在非常好的相關性。與未處理的動物相比，最近免疫的動物(第-21天和第-14天)的外周血中的WBC數(shù)顯著增加(參見圖9)。WBC的數(shù)量在天-14和天-7之間達到最大值，然后下降。WBC的增加與免疫誘導炎癥的嚴重性相關。在誘導局部關節(jié)炎后，短時間內(nèi)立即顯示出WBC的增加(參見圖9)。然而，這種短時間的增加較小，因為炎癥反應是局部的。用0.9％NaCl免疫的對照動物在WBC計數(shù)中沒有顯示出任何的差異。預免疫的動物僅在通過mBSA注射誘導局部關節(jié)炎后幾個小時就發(fā)生右膝關節(jié)的嚴重溶脹反應(參見圖8)。相反，用作個體內(nèi)對照膝的未處理的左膝沒有顯示任何腫脹反應的跡象。用cgtx-544肽治療的動物與未治療(賦形劑)的動物對照的比較揭示出，與未治療的對照動物相比，cgtx-544治療導致膝關節(jié)腫脹的明顯減少(參見圖10)。可以得出結(jié)論，與未治療的對照動物相比，用cgtx-544治療的動物顯示出膝關節(jié)腫脹的明顯減輕和更快的腫脹消退。示例5a-在RA的AIA大鼠模型中cgtx-544肽的預防療效1.材料和方法在第-21天和第-14天用在完全弗氏佐劑和750μg熱滅活的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium(M.)tuberculosis)的抗原mBSA的乳劑進行兩次免疫后，第0天以膝關節(jié)內(nèi)注射的方式通過在右膝部注射甲基化BSA來誘導AIA，如示例5所示。對于cgtx-544肽療效的研究，大鼠從第-3天開始持續(xù)10天(第-3天至第6天)每日一次接受0.1、1或5mg/kg的cgtx-544肽(低、中和高劑量水平)或溶劑(0.9％NaCl)的靜脈注射。通過使用測徑器測量三次膝關節(jié)直徑，監(jiān)測關節(jié)炎嚴重性。將數(shù)值歸一化至第-21天。通過從右膝(誘導的)直徑減去左膝(未誘導的)直徑，計算膝腫脹值的差異。定期取血樣用于監(jiān)測血液參數(shù)。在誘導前、誘導日和誘導后10天(第-21、-14、-7、0和10天)對所有動物每周評價血液學參數(shù)。未治療的動物的血液學數(shù)據(jù)(第-21天)與文獻中報道的相當(Waynforth和Flecknell，1992)。分析了白細胞(WBC)、嗜中性粒細胞和淋巴細胞的絕對計數(shù)，最后兩個也以總WBC的百分比表示。用SysmexXT-2000i測量溶劑組和cgtx-544肽治療組的七個個體的EDTA全血。2.結(jié)果對治療動物的膝腫脹，所有測試的劑量水平(0.1、1和5mg/kgBW)的cgtx-544顯示出明顯的降低、劑量依賴性和統(tǒng)計學的顯著效果(圖18)。對于結(jié)果的統(tǒng)計分析，使用威爾士兩樣本t檢驗。在下文中，顯示了第1天和第3天測試的所有劑量水平(0.1、1和5mg/kgBW)的cgtx-544的統(tǒng)計分析。與載體對照組相比，在膝腫脹中所有測試的劑量水平顯示出統(tǒng)計上明顯的降低(圖19)?？傊?，在AIA模型中，cgtx-544肽治療對炎性關節(jié)炎癥狀具有強烈的作用，特別是對于膝腫脹，最大減少70％。在治療7天后，治療組中的膝直徑進一步降低到幾乎與非誘導的個體內(nèi)對照膝相當?shù)闹睆?。此外，cgtx-544肽治療個體的WBC、嗜中性粒細胞和淋巴細胞(數(shù)據(jù)未顯示)顯示出與溶劑處理的個體相當?shù)慕^對和相對細胞計數(shù)。示例5B-在RA的AIA大鼠模型中cgtx-544肽的治療功效1.材料和方法在第-21天和第-14天用在完全弗氏佐劑和750μg熱滅活的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium(M.)tuberculosis)的抗原mBSA的乳劑進行兩次免疫后，第0天以膝關節(jié)內(nèi)注射的方式通過在右膝部注射甲基化BSA來誘導AIA，如示例5所示。對于cgtx-544肽療效的研究，大鼠從關節(jié)炎誘導后立即從第0天開始或從第1天開始每日一次接受1mg/kgcgtx-544肽的靜脈內(nèi)注射。對照動物每日一次接受溶劑(0.9％NaCl)注射。通過使用測徑器測量三次膝關節(jié)直徑，監(jiān)測關節(jié)炎嚴重性。將數(shù)值歸一化至第-21天。通過從右膝(誘導的)直徑減去左膝(未誘導的)直徑，計算膝腫脹值的差異。2.結(jié)果以cgtx-544(混合)(1mg/kgBW)開始的兩個測試時間點的治療都顯示出對治療動物的膝腫脹有明顯的減輕和統(tǒng)計學上顯著的效果(圖20)。對于結(jié)果的統(tǒng)計分析，使用威爾士兩樣本t檢驗。在下文中，顯示了第1、2和3天的cgtx-544(第0天和第1天)治療方案的統(tǒng)計分析。與溶劑對照組相比，兩個治療方案都在膝腫脹中顯示出統(tǒng)計上顯著的降低(圖21)。圖22中示出了時間進程中的白細胞(WBC)計數(shù)。圖23中示出了時間進程中的嗜中性粒細胞。圖24中示出了時間進程中的淋巴細胞。cgtx-544(混合)治療顯示出膝關節(jié)腫脹的顯著減輕。治療動物中的剩余腫脹被認為是由于抗體/抗原反應而造成的。因此，測試了免疫以及初始動物的mBSA特異性抗體的存在。在關節(jié)炎誘導7天后，在組H和I的所有免疫動物中都可以檢測到抗mBSA的抗體(圖27)。初始動物(實驗組F)對mBSA并沒有顯示任何反應性。cgtx-544治療似乎并不抑制B淋巴細胞和抗體形成。此外，在cgtx-544肽治療10天后的免疫動物沒有顯示出對cgtx-544(混合)的反應性(用trx-標簽的融合蛋白L544-2a，數(shù)據(jù)未顯示)。總之，AIA模型中，cgtx-544肽治療對炎性關節(jié)炎癥狀、特別是對于膝腫脹具有強烈的作用，如果在關節(jié)炎誘導后立即從第0天開始治療，則最大減少40％，或者如果治療從第1天開始，則為最大減少58％。在治療7天后，治療組中的膝直徑進一步降低至幾乎與非誘導的個體內(nèi)對照膝相當?shù)闹睆?。此外，cgtx-544肽處理的個體的WBC、嗜中性粒細胞和淋巴細胞顯示出與溶劑處理的個體相當?shù)慕^對和相對細胞計數(shù)。示例5C-在RA的AIA大鼠模型中cgtx-544(混合)的持續(xù)療效先前的實驗(參見示例5A和5B)已經(jīng)證明，在每天施藥的情況下，在AIA大鼠模型中，cgtx-544在不同治療方案(治療性和預防性)下都具有極好的療效。我們試圖說明在AIA模型中cgtx-544的活性維持的時長，以便得到cgtx-544的治療間隔時長的暗示。因此，建立了每周一次的施藥的治療性治療方案。1.材料和方法在第-21天和第-14天用在完全弗氏佐劑和750μg熱滅活的結(jié)核分枝桿菌(Mycobacterium(M.)tuberculosis)的抗原mBSA的乳劑進行兩次免疫后，第0天以膝關節(jié)內(nèi)注射的方式通過在膝部注射甲基化BSA來誘導AIA，如示例5所示。對于cgtx-544肽療效和持續(xù)療效研究，大鼠(10個個體)在關節(jié)炎誘導后第1天(d1)接受1mg/kgcgtx-544肽的單次靜脈內(nèi)注射。在第4天(d4)，將cgtx-544治療組分成兩個亞組，每組5個個體。第一亞組接受cgtx-544的第二次注射，以評估第二次注射是否會導致腫脹進一步減輕。第二亞組沒有接受額外的給藥。對照動物在第1天接受單次注射溶劑(0.9％NaCl)。通過使用測徑器測量三次膝關節(jié)直徑，監(jiān)測關節(jié)炎嚴重性。將數(shù)值歸一化至第-21天。通過從右膝(誘導的)直徑減去左膝(未誘導的)直徑，計算膝腫脹值的差異。2.結(jié)果使用cgtx-544(1mg/kgBW)的單次注射(1×d1)后顯示出，在施藥后24小時后，治療的動物的膝部腫脹明顯減輕且在統(tǒng)計學上明顯減輕(圖25)。在第4天第二次單次注射后(1×d1和1×d4)，腫脹可以再次降低至明顯的數(shù)值。膝部腫脹保持在相同水平，并且在第一次和第二次注射后都沒有增加。對于結(jié)果的統(tǒng)計分析，使用威爾士兩樣本t檢驗。在下文中，顯示了對于第2天(分組前)和第5天(分組)的cgtx-544(1×d1或1×d1和1×d4)兩種治療方案的統(tǒng)計分析。與溶劑對照相比，兩種治療方案在每次注射后24小時都顯示出膝部腫脹的統(tǒng)計學意義上明顯減輕(圖26)?？傊贏IA模型中，cgtx-544肽治療對炎癥性關節(jié)炎癥狀，特別是在單次注射24小時后發(fā)生腫脹減輕的膝腫脹具有強烈和持續(xù)的作用。即使在單次注射后三天，cgtx-544肽顯示出了持續(xù)的活性和臨床效果，其中膝腫脹水平保持恒定。因此，無需每日一次給予肽以達到AIA大鼠模型中的持續(xù)治療效果。因此可以實現(xiàn)靜脈注射給藥的治療間隔為3-4天(或?qū)τ跐撛诘钠は伦⑸浣o藥途徑，間隔更長)。示例6-在AIA大鼠模型中甲氨蝶呤(MTX)治療與cgtx-544肽(SEQIDNO：25)治療的比較1.在AIA大鼠模型中甲氨蝶呤(MTX)治療與cgtx-544肽(SEQIDNO：25)治療的比較根據(jù)疾病的形式和嚴重程度，采用甲氨蝶呤(MTX)的治療在劑量和方案上有所不同。與標準治療相似，我們檢查了在AIA大鼠模型中高劑量MTX治療(每周1次皮下注射1mg/kg體重(J組，n＝7))和低劑量MTX治療(每天1次靜脈注射100μg/kg體重(組L，n＝7))。高劑量MTX治療在實驗的第一天開始(第-21天)，并額外三次(第-14、-7、0天)給藥。低劑量MTX治療在關節(jié)炎誘導前三天(第-3天)開始，并且在關節(jié)炎誘導后持續(xù)額外7天。將結(jié)果與cgtx-544治療組I(1mg/kg體重cgtx-544，與組L相同的方案)和溶劑對照組H(從誘導開始日，即第0天開始每天1次靜脈注射0.9％NaCl)對比。通過使用測徑器測量三次膝關節(jié)直徑，監(jiān)測關節(jié)炎嚴重性。定期采集EDTA全血樣品以監(jiān)測免疫狀態(tài)。1.1與cgtx-544治療相比，使用MTX治療以較低程度減少膝部腫脹的程度首先，將高劑量(J)和低劑量(L)MTX治療組的膝參數(shù)與溶劑對照組(H)進行比較，以顯示出可能的療效差異，其取決于劑量和方案。第二，比較同一方案的三組(每日一次靜脈注射施用)：低劑量(L)MTX治療組、cgtx-544治療組(I)和溶劑對照組(H)。通過從右膝(誘導的)直徑減去左膝(未誘導的)直徑，計算腫脹絕對增長的差異。計算出MTX高劑量和低劑量治療組在實驗開始時的差異接近于零(分別為0.01±0.06mm和0.0±0.03mm)，因為兩個膝部在尺寸方面都是可比的。關節(jié)炎誘導后的第一天，差異分別升高至3.17±1.26mm和3.45±0.87mm(圖11)。與cgtx-544治療組相比，與具有絕對差3.79±1.10mm的溶劑對照組相比，腫脹的減輕不是非?？?圖12)。為了在0和1之間的范圍內(nèi)歸一化數(shù)值，在實驗開始時(第-21天)將腫脹的相對增加設置為0，并如前所述計算腫脹相對增加的差異。MTX高劑量和低劑量治療組的相對差分別為0.39±0.16和0.43±0.11(圖13)。相比之下，溶劑對照組和cgtx-544治療組分別為0.46±0.14和0.18±0.05(圖14)?？傊?，相對于溶劑對照組，我們觀察到MTX高劑量治療中的大鼠膝部腫脹平均減輕15％，而MTX低劑量治療中的大鼠膝部腫脹減輕7％，而cgtx-544治療的大鼠在關節(jié)炎誘導24h后減輕60％。1.2MTX對增殖細胞的細胞抑制作用為了篩選所有個體的健康狀態(tài)，再次使用完整的血象。MTX高劑量和低劑量治療組的7個個體的EDTA全血在誘導前每周、誘導當天、誘導后第4天和第7天用SysmexXT-2000i.V進行測量(第-21、-7、0、4和7天；MTX低劑量治療組額外地在第-3天、當靜脈注射施用開始時)。未治療動物的血液學數(shù)據(jù)(第-21天)與文獻中提供的數(shù)據(jù)相當。1.2.1白細胞在實驗開始(第-21天)時，MTX高劑量和低劑量治療組的白細胞計數(shù)分別為9.41±1.42×103/μl和11.66±2.81×103/μl。由于免疫系統(tǒng)的炎癥反應，第一次和第二次免疫后，WBC計數(shù)分別升高至20.79±5.96×103/μl和24.01±3.81×103/μl(第-7天)。溶劑對照組和cgtx-544治療組的數(shù)值相當。7天內(nèi)，白細胞計數(shù)略有下降。關節(jié)炎誘導四天后，MTX高劑量治療組的WBC計數(shù)再次增加，可能是由于與誘導相關的急性炎癥過程。這不能說明在cgtx-544治療組和溶劑對照組中是否也發(fā)生了這種效應，因為對于這兩組，在這一天沒有分析EDTA全血。此外，對于MTX低劑量治療組，可能不能將WBC計數(shù)作為適當?shù)谋容^，因為MTX的細胞毒性效應可能在關節(jié)炎誘導四天后影響血液的組成。在關節(jié)炎誘導后額外7天，MTX高劑量和低劑量治療組的WBC計數(shù)進一步降低至14.68±2.15×103/μl和6.63±1.37×103/μl(第7天)(圖15)，從而顯示出MTX低劑量治療的細胞抑制作用。與實驗開始時相比，WBC計數(shù)減少了近50％。相比之下，MTX高劑量治療組的WBC計數(shù)與cgtx-544治療組和溶劑對照組的WBC計數(shù)相當。1.2.2嗜中性粒細胞在實驗開始(第-21天)，MTX高劑量和低劑量治療組的絕對嗜中性粒細胞計數(shù)分別為1.55±0.52×103/μl和1.93±0.6×103/μl(圖16A)(分別等于相對總WBC計數(shù)的嗜中性粒細胞為16.39±4.85％和相對總WBC計數(shù)的嗜中性粒細胞為16.64±4.07％)(圖16B)。對于WBC計數(shù)，在第一次和第二次免疫后，嗜中性粒細胞計數(shù)也分別升高至7.54±3.19×103/μl和10.77±2.7×103/μl(第-7天，分別等于WBC的35.46±7.08％和WBC的44.33±5.4％)。在7天內(nèi)，嗜中性粒細胞計數(shù)減少，MTX高劑量治療組的誘導計數(shù)7天后與實驗開始時相當(1.94±1.1×103/μl，等于WBC的12.63±6.1％)。在cgtx-544治療組和溶劑對照組中也觀察到該效果。MTX低劑量治療組顯示出比0.33±0.36×103/μl的嗜中性粒細胞更明顯的下降(第7天，等于WBC的4.41±4.63％)。1.2.3淋巴細胞在實驗開始(第-21天)，MTX高劑量和低劑量治療組的絕對淋巴細胞計數(shù)分別為7.39±1.05×103/μl和9.21±2.4×103/μl(圖17A)(分別等于WBC的78.77±4.76％和WBC的78.97±3.94％(圖17B))。在MTX高劑量和低劑量治療組中，與WBC和嗜中性粒細胞計數(shù)不同，淋巴細胞計數(shù)在第一次和第二次免疫后沒有顯著升高，計數(shù)為11.68±2.8×103/μl和11.83±1.35×103/μl(第-7天)。這分別等于WBC的57.01±6.45％和WBC的49.83±5.45％(第-7天)，隨著總WBC計數(shù)劇烈增加，其百分比降低。在7天內(nèi)，WBC的淋巴細胞百分比再次增加，且誘導7天后，在MTX高劑量治療組中，其與實驗開始時的百分比相當(WBC的78.16±7.20％，第7天)，而不同于MTX低劑量治療組，其甚至會變得更高(WBC的93.13±4.66％，第7天)。與實驗開始時相比，MTX高劑量治療組的絕對計數(shù)增加，MTX低劑量治療組的絕對計數(shù)減少：分別為11.38±1.15×103/μl和6.14±1.11×103/μl(第7天)。盡管與實驗開始時相比，關節(jié)炎誘導后7天，MTX低劑量治療組的絕對淋巴細胞計數(shù)減少，但仍占所有白細胞約93％。這使得提出假設：白細胞的其它亞群比淋巴細胞群更受細胞毒性作用的影響。用MTX治療導致抑制了二氫葉酸還原酶，并導致對增殖細胞的細胞抑制作用。與不顯示廣義免疫抑制的cgtx-544治療下的個體不同，與溶劑對照組相比，MTX治療的個體對血象顯示出不同的影響。關節(jié)炎誘導7天后，低劑量治療的個體的WBC計數(shù)、嗜中性粒細胞計數(shù)和淋巴細胞計數(shù)減少。此外，這導致所有白細胞百分比的組成不同。此外，我們觀察到在用兩種MTX方案(7％和15％)關節(jié)炎誘導24小時后，與在cgtx-544治療大鼠中的60％相比，膝腫脹的減輕更輕微。對于MTX療效結(jié)果的統(tǒng)計分析，使用威爾士兩樣本t檢驗。在下文中，顯示了第1天和第3天所有測試的MTX劑量水平的統(tǒng)計分析(靜脈注射0.1mg/kgBW和皮下注射1mg/kgBW)(圖28)?？傊肕TX處理導致抑制了二氫葉酸還原酶，并導致了對增殖細胞的細胞抑制作用。與cgtx-544肽治療的個體不同，與溶劑對照組相比，MTX治療的個體顯示出對血象的不同效果。關節(jié)炎誘導7天后，低劑量治療的個體的WBC計數(shù)、嗜中性粒細胞計數(shù)和淋巴細胞計數(shù)減少。此外，這導致所有白細胞百分比的組成不同。此外，我們觀察到，在兩種MTX方案(7％和15％)關節(jié)炎誘導24小時后，與在cgtx-544治療大鼠中最大70％相比，膝腫脹的減輕更輕微。示例7-cgtx-55的進一步表征cgtx-544肽由38個沒有修飾的天然氨基酸組成，分子量約為4220Da。它與蝎型肽的α-KTx6亞家族具有特定功能域的相似性。cgtx-544受到4個二硫橋的限制，并且其3D結(jié)構(gòu)包括α-螺旋/β-折疊構(gòu)象。制備cgtx-544圖29提供了cgtx-544肽的制備步驟的示意圖。利用F-moc策略，在不溶性聚苯乙烯樹脂上合成肽。將固相附著肽的游離N-末端胺偶聯(lián)至單個N-保護的氨基酸單元。然后將該單元脫保護(F-moc基團在堿性pH下通過哌啶裂解)，出現(xiàn)新的N-末端胺，可以將其它氨基酸連接到該新的N-末端胺。將叔丁氧基羰基(Boc)基團作為永久的側(cè)鏈保護基團，并且通過采用TFA(三氟乙酸)處理完成肽的合成后將其裂解。肽合成完成后，將肽脫保護并從聚苯乙烯樹脂上裂解下來。此時，粗肽產(chǎn)物顯示出約50％的純度，然后進行分析級UPLC和LC-MS。在隨后的步驟中，通過制備型HPLC純化粗肽，得到純度≥90％的線性肽產(chǎn)物。cgtx-544肽的折疊該肽溶液通過氧化(形成二硫鍵)而被折疊。折疊方法基于在大氣氧存在下在pH8.3的磷酸酯緩沖液中鍵的形成。根據(jù)該方案，折疊的cgtx-544的HPLC分析顯示，肽是以折疊和部分折疊變體的混合物存在的。該中間折疊產(chǎn)物被稱為cgtx-544(混合)?；谟貌煌姆蛛x出的UPLC峰的材料產(chǎn)生的電生理學數(shù)據(jù)，結(jié)論是，折疊混合物中的一個峰(保留時間12.77min)對應了天然活性肽，而所有其它峰都與電生理學活性無關(圖30)。因此，在折疊反應后，通過制備型HPLC，從折疊和部分折疊的肽的cgtx-544混合物來純化活性肽(保留時間12.77min)。在該純化步驟后，活性肽(被稱為cgtx-544(單個))通常具有預計大于95％的純度。在室溫和4℃下，經(jīng)過純化的cgtx-544(單個)肽在0.9％NaCl溶液中高度可溶并穩(wěn)定長達數(shù)周。由于方法的發(fā)展，僅以小規(guī)模形式制備經(jīng)過純化的肽cgtx-544(單個)。因此，材料是有限的，并將其用于鑒定cgtx-544(單個)在Kv1.3、Kv1.1、Kv1.2和Kv1.5中的IC50值的實驗(參見示例8)。除非用術語cgtx-544(單個)來表示，在本文所述的所有其它實驗(示例1至6)都使用cgtx-544(cgtx-544(混合))的未純化的折疊混合物。混合物中的活性材料的含量被計算為15％?？傊琧gtx-544肽顯示出對于生物化學分析很重要的以下生物化學性質(zhì)：·cgtx-544是高度堿性的肽，包含6個賴氨酸和2個精氨酸氨基酸，能夠以低濃度(<100ng/ml)粘在玻璃小瓶的表面?！て浜?個通過4個二硫橋連接的半胱氨酸氨基酸?！さ入婞c：9.29。·當二硫鍵結(jié)合時，MW：4212Da，還原形式中MW：4220.2Da?！び捎?個二硫鍵的存在，cgtx-544的結(jié)構(gòu)是緊湊的。示例8-基于電生理學分析的cgtx-544(單個)的離子通道選擇性的進一步表征1.材料和方法如示例1、2和4中所述，通過桿狀病毒(Kv1.1、Kv1.3-和Kv1.5構(gòu)建體)感染的Sf21細胞或穩(wěn)定轉(zhuǎn)染的CHO細胞(Kv1.2)來表達離子通道。電生理學分析在自動膜片鉗裝置“Patchliner”(NanionTechnologies，Munich，Germany)上進行。Patchliner基于平面膜片鉗方法采用硼硅酸酯玻璃芯片(NPC-16)，而不是玻璃移液管。Patchliner能夠同時記錄四個細胞。所有通道記錄在全細胞模式下進行。使用PatchMaster軟件(HEKAElectronics，Lambrecht/Pfalz，Germany)進行數(shù)據(jù)記錄。用IGOR軟件(Wavemetrics，USA)實現(xiàn)實驗結(jié)果的可視化。平均數(shù)據(jù)表示為平均值±平均值的標準誤差(SEM)。測試化合物被用作濃縮的儲備溶液(大多為1.5μg/μl)。將儲備溶液在緩沖液中稀釋至所需的最終濃度。2.結(jié)果2.1目標通道Kv1.3的IC50分析在化學合成后(參見示例7)，通過用大氣氧氧化來折疊肽，并通過制備型HPLC純化正確折疊的(生物活性)肽級分。對于單數(shù)峰，該純化的cgtx-544肽被命名為cgtx-544(單個)。cgtx-544(單個)的電生理學分析產(chǎn)生了6.9nM的優(yōu)異IC50值(圖31)。2.2在Kv1.1、Kv1.2和Kv1.5上的cgtx-544(單個)電生理學分析在Kv1.1、Kv1.2和Kv1.5上的cgtx-544(單個)電生理學分析證明，cgtx-544是高選擇性的。在Kv1.1、Kv1.2和Kv1.5上的cgtx-544(單個)電生理學表征的結(jié)果總結(jié)在圖32中。示例9-cgtx-544(單個)的蛋白酶抗性進一步進行示例3中所述的實驗，在體外條件下，在血清樣品中測試cgtx-544肽的穩(wěn)定性。因此，通過向人血清中加入已知量的cgtx-544(單個)并隨后在37℃下孵育來測定人血清中cgtx-544(單個)的穩(wěn)定性。在57天的時間段內(nèi)，在Kv1.3通道上測量ctx-544的阻斷活性(單個)。cgtx-544(單個)在人血清中極其穩(wěn)定。其活性保持恒定至少16小時，并緩慢衰減，到57天后不再能檢測到肽阻斷效應。這表明，cgtx-544對血液蛋白酶的作用非常耐受(圖33)。在不存在血清的情況下IC50保持在7nM范圍內(nèi)進行的測量，觀察到阻斷效應并沒有降低。無肽的血清對照樣品中沒有顯示出Kv1.3的非特異性阻斷。因此，可以得出結(jié)論，所觀察到的阻斷效應僅僅是由于cgtx-544(單個)的影響。代表在57天內(nèi)在孵育溶液中測量的cgtx-544(單個)的濃度，在37℃下在人血清中cgtx-544(單個)的50％活性保持期為5天?？傊?，cgtx-544在37℃的人血清中的持久性非常高。cgtx-544不與血清成分結(jié)合(如果只有非常低的親和力)，并且對人血清中存在的蛋白酶的降解極其耐受。示例10–cgtx-544(單個)的體內(nèi)半衰期本研究的目的是，實施生物測定以評估大鼠中cgtx-544(單個)的體內(nèi)半衰期。先前的實驗(示例3)表明，當摻入血清并在37℃下孵育時，cgtx-544不會快速降解。1.材料和方法大鼠接受靜脈注射cgtx-544(單個)(750μg/kgBW)。在時間點0、1、10和60分鐘抽取血液。隨后，從血液樣品制備血清。通過測量在CHO細胞中表達的Kv1.3通道的阻斷效應，通過電生理學分析在這些樣品中cgtx-544含量。沒有肽的血清對照樣品(0分鐘)沒有顯示出Kv1.3的非特異性阻斷，1分鐘樣品的cgtx-544(單個)活性被視為100％。在第三個時間點(60分鐘)收集的樣品顯示出10％的初始阻斷活性。為了研究大鼠中未結(jié)合的cgtx-544(單個)的量，通過校準曲線計算出在上述時間點存在于循環(huán)血液中的cgtx-544(單個)的量。通過將已知量的cgtx-544(單個)加入血清并隨后在Kv1.3通道上進行電生理學測量來獲得該校準曲線。這些加標樣品的Kv1.3電流阻斷與沒有血清的cgtx-544(單個)獲得的結(jié)果相似(數(shù)據(jù)未顯示)。2.結(jié)果治療的大鼠血液中cgtx-544(單個)的衰變遵循典型的衰減曲線，在循環(huán)血液中cgtx-544(單個)的大約濃度為62nM的情況下，得到大約t1/2＝26分鐘的半衰期(圖34)。該濃度足以實現(xiàn)Kv1.3通道的完全阻斷。該半衰期在其它肽通道阻斷劑的范圍內(nèi)-ShK毒素的變體顯示其半衰期在20至50分鐘之間?？傊?，靜脈注射施用后，在大鼠中cgtx-544的體內(nèi)半衰期在競爭性肽ShK的范圍內(nèi)。體內(nèi)半衰期為約26分鐘。由于cgtx-544的小尺寸和緊湊的結(jié)構(gòu)，假定肽最可能通過腎臟過濾從血液中清除?？梢院侠淼丶僭Ocgtx-544在人類中的半衰期比大鼠中的長，因為大鼠比人類的代謝速率快得多。體內(nèi)半衰期與藥物效應的持續(xù)時間不是對應的，因為肽緊密結(jié)合離子通道并長時間阻斷離子通道。示例11-臨床數(shù)據(jù)迄今為止還沒有進行過臨床研究。首次人體試驗1期研究可以是在健康受試者中的隨機、雙盲、安慰劑對照、單中心試驗。本研究的第一部分可以是在較低劑量組的4名受試者(3+1)和較高劑量組的8名受試者(2+6)的隊列中的單劑量、劑量遞增研究。起始劑量將根據(jù)FDA的“估計成年健康志愿者療法的初始臨床試驗中的最大安全起始劑量”工業(yè)指南中所規(guī)定的毒性研究中的NOAEL進行估計。1a期的第二部分可以設計為多劑量研究。將8名受試者(6+2)的一個隊列暴露于低于MTD的一個劑量水平，連續(xù)7次每日給藥一次。該標準1a期研究的主要目的可以是評價cgtx-544在健康受試者中的安全性、耐受性和藥代動力學。概念驗證研究該2a期研究可以是在中度至重度斑塊狀銀屑病患者中的隨機、雙盲、安慰劑對照、多中心、概念驗證和劑量確定研究。計劃的概念研究2a期將包括80名成人患者(20+60)和3種劑量水平。每種劑量水平將在20名患者中測試12周的時間。主要終點：在第12周達到PASI75(從PASI基準而改善至少70％的患者)的受試者的比例。次要終點：通過評估不良事件、生命體征、實驗室參數(shù)、健康檢查和腦電圖來評價長達12周的cgtx-544的安全性。在第一次治療后12周的不同時間點的cgtx-544的藥代動力學。在第12周達到IGA評分“清除”或“幾乎清除”的受試者的比例。在第12周達到PASI50(從PASI基準而改善至少50％的患者)的受試者的比例。在第12周達到PASI90(從PASI基準而改善至少90％的患者)的受試者的比例。可以對血管炎進行類似的研究。終點必須相應地進行評估。當前第1頁1 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