抗GPC3抗體和免疫偶聯物的制作方法

本發明涉及抗GPC3抗體和免疫偶聯物及其使用方法。
背景技術：
：磷脂酰肌醇蛋白聚糖-3(GPC3)是磷脂酰肌醇蛋白聚糖家族成員，它是通過糖基磷脂酰肌醇錨連接至細胞表面的硫酸肝素蛋白聚糖。GPC3已顯示出在超過70％的肝細胞癌活組織檢查切片中高表達，但在鄰近的非腫瘤組織中不表達。GPC3陽性HCC患者的無病存活率顯著低于GPC3陰性HCC患者。本領域需要靶向GPC3以診斷和治療GPC3相關病癥諸如癌癥的安全且有效的藥劑。本發明滿足了該需要且提供了其他益處。技術實現要素：本發明提供抗GPC3抗體和免疫偶聯物及其使用方法。在一些實施方案中，提供了結合至GPC3的分離的抗體。在一些實施方案中，該抗體結合至GPC3并且具有一種或多種以下特性：a)結合至重組人GPC3；b)結合至重組食蟹猴GPC3；c)結合至HepG2細胞表面上的內源性GPC3；d)結合至293細胞表面上表達的食蟹猴GPC3；e)結合至癌細胞表面上的內源性GPC3；f)結合至肝細胞癌細胞表面上的內源性GPC3；g)結合至選自HepG2、Hep3B、Huh7和JHH-7的細胞系的細胞表面上的內源性GPC3；h)結合至人GPC3的氨基酸25至137內的表位；i)結合至跨越人GPC3的氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位；j)結合至全長成熟人GPC3(例如，SEQIDNO:1的氨基酸25至560或氨基酸25至580)，但不結合至人GPC3的N-末端片段(SEQIDNO:1的氨基酸25至358)或不結合至人GPC3的C-末端片段(SEQIDNO:1的氨基酸359至560或氨基酸359至580)；k)結合至人GPC3的氨基酸420至470內的表位；l)結合至人GPC3的氨基酸470至509內的表位；m)與抗體7H1競爭結合至人GPC3；n)與抗體4G7競爭結合至人GPC3；o)與抗體15G1競爭結合至人GPC3；和/或p)與抗體4A11競爭結合至人GPC3。在一些實施方案中，人GPC3包含SEQIDNO:1的序列(全長GPC3前體)或包含SEQIDNOP:1的氨基酸25至580(全長成熟GPC3)。在一些實施方案中，提供了結合人GPC3的分離的抗體，其中該抗體結合至選自以下的表位：a)人GPC3的氨基酸25至137內的表位；b)跨越人GPC3的氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位；c)人GPC3的氨基酸420至470內的表位；和d)人GPC3的氨基酸470至509內的表位。在一些實施方案中，提供了結合人GPC3的分離的抗體，其中該抗體結合至人GPC3的氨基酸25至137內的表位。在一些實施方案中，該抗體結合至來自至少一個物種的GPC3，所述至少一個物種選自食蟹猴、小鼠和大鼠。在一些實施方案中，該抗體結合至來自食蟹猴、小鼠和大鼠的GPC3。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:4的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:7的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQIDNO:8的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在一些實施方案中，該抗體包含(a)與SEQIDNO:2的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)與SEQIDNO:3的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些實施方案中，該抗體包含(a)具有SEQIDNO:2的氨基酸序列的VH序列；(b)具有SEQIDNO:3的氨基酸序列的VL序列；(c)基于SEQIDNO:2的氨基酸序列的人源化VH；(d)基于SEQIDNO:3的氨基酸序列的人源化VL序列；或(e)如(a)或(c)中的VH和如(b)或(d)中的VL。在一些實施方案中，提供了結合人GPC3的分離的抗體，其中該抗體結合至跨越人GPC3的氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位。在一些實施方案中，提供了結合人GPC3的分離的抗體，其中該抗體結合至全長成熟人GPC3，但不結合至由SEQIDNO:1的氨基酸25至358組成的人GPC3的N-末端片段，并且不結合至由SEQIDNO:1的氨基酸359至560或氨基酸359至580組成的人GPC3的C-末端片段。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:28的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:31的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQIDNO:32的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)與SEQIDNO:26的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)與SEQIDNO:27的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)具有SEQIDNO:26的氨基酸序列的VH序列；(b)具有SEQIDNO:27的氨基酸序列的VL序列；(c)基于SEQIDNO:26的氨基酸序列的人源化VH；(d)基于SEQIDNO:27的氨基酸序列的人源化VL序列；或(e)如(a)或(c)中的VH和如(b)或(d)中的VL。在一些實施方案中，提供了結合人GPC3的分離的抗體，其中該抗體結合至人GPC3的氨基酸420至470內的表位。在一些實施方案中，該抗體結合至來自至少一個物種的GPC3，所述至少一個物種選自食蟹猴、恒河猴、小鼠和大鼠。在一些實施方案中，該抗體結合至來自食蟹猴、恒河猴、小鼠和大鼠的GPC3。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)與SEQIDNO:18的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)與SEQIDNO:19的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)具有SEQIDNO:18的氨基酸序列的VH序列；(b)具有SEQIDNO:19的氨基酸序列的VL序列；(c)基于SEQIDNO:18的氨基酸序列的人源化VH；(d)基于SEQIDNO:19的氨基酸序列的人源化VL序列；或(e)如(a)或(c)中的VH和如(b)或(d)中的VL。在一些實施方案中，提供了結合人GPC3的分離的抗體，其中該抗體結合至人GPC3的氨基酸470至509內的表位。在一些實施方案中，該抗體結合至食蟹猴GPC3。在一些實施方案中，該抗體不結合至大鼠GPC3。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-H1、含有SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2和含有SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3。在一些實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-L1、含有SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-L2和含有SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)與SEQIDNO:10的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VH序列；(b)與SEQIDNO:11的氨基酸序列具有至少95％序列同一性的VL序列；或(c)如(a)中的VH和如(b)中的VL。在一些實施方案中，該抗體包含：(a)具有SEQIDNO:10的氨基酸序列的VH序列；(b)具有SEQIDNO:11的氨基酸序列的VL序列；(c)基于SEQIDNO:10的氨基酸序列的人源化VH；(d)基于SEQIDNO:11的氨基酸序列的人源化VL序列；或(e)如(a)或(c)中的VH和如(b)或(d)中的VL。在一些實施方案中，提供了結合至GPC3的分離的抗體，其中該抗體包含(a)含有SEQIDNO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQIDNO:7的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQIDNO:8的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在一些實施方案中，提供了結合至GPC3的分離的抗體，其中該抗體包含(a)含有SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在一些實施方案中，提供了結合至GPC3的分離的抗體，其中該抗體包含(a)含有SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在一些實施方案中，提供了結合至GPC3的分離的抗體，其中該抗體包含(a)含有SEQIDNO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQIDNO:31的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQIDNO:32的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在本文所述的任何實施方案中，該抗體可以是單克隆抗體。在本文所述的任何實施方案中，該抗體可以是人、人源化或嵌合抗體。在本文所述的任何實施方案中，該抗體可以是結合GPC3的抗體片段。在本文所述的任何實施方案中，該抗體可以是IgG1、IgG2a或IgG2b抗體。在本文所述的任何實施方案中，GPC3可以是包含SEQIDNO:1的氨基酸25至580的人GPC3。在一些實施方案中，提供了編碼本文所述的抗體的分離的核酸。在一些實施方案中，提供了包含編碼本文所述的抗體的核酸的宿主細胞。在一些實施方案中，提供了制備抗體的方法，其包括培養包含編碼本文所述的抗體的核酸的宿主細胞，以制備抗體。在一些實施方案中，提供了免疫偶聯物，其包含本文所述的抗體和細胞毒性劑。在一些實施方案中，該免疫偶聯物具有下式Ab-(L-D)p，其中：(a)Ab是根據權利要求1至41中任一項所述的抗體；(b)L是接頭；(c)D是細胞毒性劑；并且(d)p在1-8的范圍內。在一些實施方案中，p在2-5的范圍內。在一些實施方案中，該細胞毒性劑選自類美登素(maytansinoid)、卡里奇霉素、吡咯并苯二氮雜卓(pyrrolobenzodiazepine)和奈莫柔比星衍生物。在一些實施方案中，D是式A的吡咯并苯二氮雜卓：其中虛線表示C1和C2或C2和C3之間任選存在雙鍵；R2獨立地選自H、OH、＝O、＝CH2、CN、R、OR、＝CH-RD、＝C(RD)2、O-SO2-R、CO2R和COR，并且任選地還選自鹵代或二鹵代，其中RD獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H和鹵代；R6和R9獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和鹵代；R7獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和鹵代；Q獨立地選自O、S和NH；R11為H或R或，其中Q為O、SO3M，其中M為金屬陽離子；R和R’各自獨立地選自任選地取代的C1-8烷基、C3-8雜環基和C5-20芳基基團，并且任選地就基團NRR’而言，R和R’連同與其連接的氮原子一起形成任選地取代的4-、5-、6-或7-元雜環；R12、R16、R19和R17分別如對于R2、R6、R9和R7所定義；R″是C3-12亞烷基基團，其鏈可被一個或多個任選地被取代的雜原子和/或芳環打斷；并且X和X’獨立地選自O、S和N(H)。在一些實施方案中，D具有以下結構：其中n為0或1。在一些實施方案中，D為奈莫柔比星衍生物。在一些實施方案中，D具有以下結構：在一些實施方案中，提供了包含本文所述的抗體的免疫偶聯物，其中該接頭可被蛋白酶裂解。在一些實施方案中，該接頭是酸不穩定的。在一些實施方案中，該接頭包括腙。在一些實施方案中，提供了包含本文所述的抗體的免疫偶聯物，其中該免疫偶聯物具有選自以下的式：在一些實施方案中，提供了藥物制劑，其包含本文所述的免疫偶聯物和藥學上可接受的載體。在一些實施方案中，提供了藥物制劑，其包含本文所述的抗體和藥學上可接受的載體。在一些實施方案中，該藥物制劑還包含另外的治療劑。在一些實施方案中，提供了治療患有GPC3陽性癌癥的個體的方法。在一些實施方案中，方法包括將有效量本文所述的抗體、本文所述的免疫偶聯物或本文所述的藥物制劑施用于個體。在一些實施方案中，該GPC3陽性癌癥是肝癌。在一些實施方案中，方法還包括將另外的治療劑施用于個體。在一些實施方案中，提供了抑制GPC3陽性細胞增殖的方法。在一些實施方案中，方法包括在允許抗體或免疫偶聯物與細胞表面上的GPC3結合的條件下，將有效量的本文所述的抗體或本文所述的免疫偶聯物施用于個體，從而抑制細胞的增殖。在一些實施方案中，該細胞是肝癌細胞。在一些實施方案中，本文所述的抗體偶聯至標記。在一些實施方案中，該標記是正電子發射體。在一些實施方案中，該正電子發射體是89Zr。在一些實施方案中，提供了檢測生物樣本中的人GPC3的方法。在一些實施方案中，方法包括在允許抗GPC3抗體與天然存在的人GPC3結合的條件下，使生物樣本與本文所述的抗GPC3抗體接觸，并檢測生物樣本中抗GPC3抗體和天然存在的人GPC3之間是否形成復合物。在一些實施方案中，該生物樣本是肝癌樣本。在一些實施方案中，提供了檢測GPC3陽性癌癥的方法。在一些實施方案中，方法包括(i)將標記的抗GPC3抗體施用于患有或疑似患有GPC3陽性癌癥的受試者，其中該標記的抗GPC3抗體包括本文所述的抗GPC3抗體，以及(ii)檢測受試者中的該標記的抗GPC3抗體，其中檢測出該標記的抗GPC3抗體指示受試者的GPC3陽性癌癥。在一些實施方案中，該標記的抗GPC3抗體包括偶聯至正電子發射體的抗GPC3抗體。在一些實施方案中，該正電子發射體是89Zr。附圖簡述圖1示出了正常和患病以及腫瘤組織中GPC3的表達，如實施例1所述。圖2示出了正常肝臟、肝癌和患病肝臟中GPC3的表達，如實施例1所述。圖3示出了肝細胞癌的各個分期和其他肝臟疾病中GPC3的表達，如實施例1所述。圖4A-B示出了抗GPC3抗體7H1、4A11、15G1和4G7的(A)輕鏈可變區序列和(B)重鏈可變區序列的比對。圖5示出了FACS測定的抗體7H1與293S細胞、HepG2X1細胞和表達GPC3的293S細胞(293S_GPC3FL)的結合，如實施例2所述。圖6示出了人GPC3蛋白序列的某些特征、人GPC3的三個片段以及Western印跡的示意圖，其示出了抗體7H1與GPC3片段的結合，如實施例2所述。圖7示出了FACS測定的抗體7H1和4G7以及對照抗體1G12(SantaCruzBiotechnology)與293S細胞、表達GPC3的C-末端片段(Ct_GPC3)的293S細胞和表達GPC3的N-末端片段(Nt_GPC3)的293S細胞的結合，如實施例2所述。圖8示出了人GPC3蛋白序列的某些特征和人GPC3的四個片段的示意圖，如實施例2所述。圖9示出了FACS測定的抗體4A11和15G1與全長FPC3以及在293S細胞中表達的圖8中三個片段的結合，如實施例2所述。圖10示出了抗體15G1和4A11與來自各個物種的GPC3的結合，如實施例2所述。圖11示出了來自人、食蟹猴、恒河猴、小鼠和大鼠的GPC3的比對，如實施例2所述。圖12示出了(A)馬來酰亞胺乙縮醛PNU-159682抗體-藥物偶聯物的結構和(B)單甲基二硫化物N10-連接的PBD抗體-藥物偶聯物的結構，如實施例5所討論。圖13A-B示出了通過FACS使用抗體4G7、7H1和4A11檢測的(A)HepG2X1細胞和(B)分離的HepG2X1異種移植瘤細胞表面上的GPC3的表達，如實施例6所述。圖14示出了在使用各種抗體-藥物偶聯物治療時HepG2X1異種移植模型中腫瘤體積(mm3)隨時間推移的變化，如實施例6所述。圖15A-B示出了通過FACS使用抗體4G7、7H1和4A11檢測的(A)JHH7細胞和(B)分離的JHH7X1異種移植瘤細胞表面上的GPC3的表達，如實施例7所述。圖16示出了在使用各種抗體-藥物偶聯物治療時JHH7異種移植模型中腫瘤體積(mm3)隨時間推移的變化，如實施例7所述。具體實施方式I.定義就本文的目的而言，“受體人框架”是包括來源于人免疫球蛋白框架或人共有序列框架的輕鏈可變結構域(VL)框架或重鏈可變結構域(VH)框架的氨基酸序列的框架，如下文所定義。“來源于”人免疫球蛋白框架或人共有序列框架的受體人框架可包含它們的相同氨基酸序列，或可包含氨基酸序列變化。在一些實施方案中，氨基酸變化的數量為10或更少、9或更少、8或更少、7或更少、6或更少、5或更少、4或更少、3或更少或2或更少。在一些實施方案中，VL受體人框架的序列與VL人免疫球蛋白框架序列或人共有序列框架序列相同。“親和力”是指分子(例如，抗體)及其結合配偶體(例如，抗原)的單個結合位點之間的非共價相互作用的合計強度。除非另外指明，如本文所用，“結合親和力”是指固有結合親和力，它反映了結合對成員(例如，抗體和抗原)之間的1:1相互作用。分子X對其配偶體Y的親和力通常可以解離常數(Kd)表示。親和力可通過本領域已知的常見方法，包括本文所述的那些方法測定。測量結合親和力的特定說明性和示例性實施方案如下文所述。“親和力成熟的”抗體是指，一個或多個高變區(HVR)具有一個或多個改變的抗體，而親本抗體則不具有此類改變，此類改變引起抗體對抗原的親和力的提高。術語“抗GPC3抗體”和“結合至GPC3的抗體”是指這樣的抗體，它能夠以足夠的親和力結合GPC3，使得該抗體能夠用作診斷和/或治療劑來靶向GPC3。在一個實施方案中，抗GPC3抗體與不相關的非GPC3蛋白結合的程度小于抗體與GPC3的結合約10％，如例如通過放射性免疫分析(RIA)所測定。在某些實施方案中，結合至GPC3的抗體具有≤1μM、≤100nM、≤10nM、≤5nm、≤4nM、≤3nM、≤2nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM(例如，10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如，10-9M至10-13M)的解離常數(Kd)。在某些實施方案中，抗GPC3抗體結合至在來自不同物種的GPC3中保守的GPC3的表位。術語“抗體”在本文中以廣泛的意義使用，并且涵蓋各種抗體結構，包括但不限于單克隆抗體、多克隆抗體、多特異性抗體(例如，雙特異性抗體)和抗體片段，只要它們表現出所需的抗原結合活性即可。“抗體片段”是指除完整抗體之外的分子，它包含完整抗體的一部分，并且結合完整抗體所結合的抗原。抗體片段的例子包括但不限于Fv、Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2；雙抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；以及從抗體片段形成的多特異性抗體。“結合至”蛋白質的限定區內的“表位的抗體”是需要用于結合至蛋白質的該區域內存在一個或多個氨基酸的抗體。在某些實施方案中，“結合至”蛋白質的限定區內的“表位的抗體”通過缺失或突變分析鑒定，在所述缺失或突變分析中，該蛋白質的氨基酸被缺失的或突變，并且抗體與所得的改變的蛋白質(例如，包含該表位的改變的蛋白質)的結合測定為與未改變的蛋白質的結合的至少20％。在一些實施方案中，“結合至”蛋白質的限定區內的“表位的抗體”通過缺失或突變分析鑒定，在所述缺失或突變分析中，該蛋白質的氨基酸被缺失的或突變，并且抗體與所得的改變的蛋白質(例如，包含該表位的改變的蛋白質)的結合測定為與未改變的蛋白質的結合的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。示例性缺失(截短)分析如實施例2所述。在某些實施方案中，抗體的結合通過如實施例2所述的FACS，或通過合適的結合分析諸如ELISA或表面等離振子共振分析測定。“與參考抗體競爭結合至多肽例如GPC3的抗體”是指在競爭分析中阻斷參考抗體與多肽的結合50％或更多的抗體，相反，參考抗體在競爭分析中阻斷抗體與多肽的結合50％或更多。示例性競爭分析是本文實施例2提供的表位重新分級分析(epitopebinningassay)。在一些實施方案中，競爭可使用表面等離振子共振分析評估。“跨越氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位”是指包含N-末端至S359的一個或多個GPC3氨基酸殘基和C-末端至R358的一個或多個氨基酸殘基的表位。在某些實施方案中，抗體與此類表位的結合可通過缺失或突變分析測定，在所述缺失或突變分析中，N-末端至S359的一個或多個GPC3氨基酸殘基和/或C-末端至R358的一個或多個氨基酸殘基被缺失或突變，并且抗體與所得的改變的蛋白質(例如，包含該表位的改變的蛋白質)的結合測定為與未改變的蛋白質的結合的至少20％。在某些實施方案中，抗體與此類表位的結合可通過缺失或突變分析測定，在所述缺失或突變分析中，N-末端至S359的一個或多個GPC3氨基酸殘基和/或C-末端至R358的一個或多個氨基酸殘基被缺失或突變，并且抗體與所得的改變的蛋白質(例如，包含該表位的改變的蛋白質)的結合測定為與未改變的蛋白質的結合的至少30％、至少40％、至少50％、至少60％、至少70％、至少80％或至少90％。在一些實施方案中，結合至跨越氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位的抗體結合至全長GPC3，但不結合至以氨基酸殘基R358結束的GPC3的N-末端片段(例如，人GPC3的氨基酸25至358)，并且不結合至以氨基酸殘基S359開始的GPC3的C-末端片段(例如，人GPC3的氨基酸359至560或359至580)。術語“癌癥”和“癌性的”是指或描述了通常特征為細胞生長/增殖不受調控的哺乳動物的生理病癥。癌癥的例子包括但不限于惡性腫瘤、肝癌、肝細胞癌、胰腺癌、肺癌、結腸癌、乳腺癌、前列腺癌、淋巴瘤(例如，霍奇金淋巴瘤和非霍奇金淋巴瘤)、胚細胞瘤、惡性毒瘤和白血病。術語“嵌合”抗體是指這樣的抗體，其中重鏈和/或輕鏈的一部分來源于特定的來源或物種，而重鏈和/或輕鏈的其余部分來源于不同的來源或物種。抗體的“種類”是指其重鏈具有的恒定結構域或恒定區的類型。抗體有五種主要種類：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，并且這些種類中的多種還可分為子類(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。對應于不同種類免疫球蛋白的重鏈恒定結構域分別稱為α、δ、ε、γ和μ。如本文所用，術語“細胞毒性劑”是指抑制或妨礙細胞功能和/或導致細胞死亡或破壞的物質。細胞毒性劑包括但不限于放射性同位素(例如，At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和Lu的放射性同位素)；化療劑或藥物(例如，甲氨蝶呤、阿霉素、長春花生物堿(長春新堿、長春堿、依托泊苷)、多柔比星、美法侖、絲裂霉素C、苯丁酸氮芥、柔紅霉素或其他插入劑)；生長抑制劑；酶及其片段諸如溶核酶；抗生素；毒素諸如細菌、真菌、植物或動物來源的小分子毒素或酶活性毒素，包括其片段和/或變體；以及下文公開的各種抗腫瘤或抗癌劑。“效應功能”是指歸因于抗體Fc區的那些生物活性，其根據抗體同種型而變化。抗體效應功能的例子包括：C1q結合和補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體)的下調；以及B細胞活化。藥劑例如藥物制劑的“有效量”是指在劑量和必要的時間段內能夠實現所需的治療或預防結果的量。術語“表位”是指抗體結合的抗原分子上的特定位點。在本文中，術語“Fc區”用于定義包含至少一部分恒定區的免疫球蛋白重鏈的C-末端區。該術語包括天然序列Fc區和變體Fc區。在一個實施方案中，人IgG重鏈Fc區從Cys226或從Pro230延伸至重鏈的羧基末端。然而，Fc區的C-末端賴氨酸(Lys447)可以存在或可以不存在。除非另外指明，Fc區或恒定區中氨基酸殘基的編號根據EU編號系統(也稱為EU索引)進行，如Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD,1991所述。“框架”或“FR”是指除高變區(HVR)殘基之外的可變結構域殘基。可變結構域的FR通常由四個FR結構域構成：FR1、FR2、FR3和FR4。因此，HVR和FR序列通常出現在VH(或VL)的以下序列中：FR1-H1(L1)-FR2-H2(L2)-FR3-H3(L3)-FR4。術語“全長抗體”、“完整抗體”和“全抗體”在本文中可互換使用，是指結構基本上類似于天然抗體結構或重鏈包含如本文定義的Fc區的抗體。術語“宿主細胞”、“宿主細胞系”和“宿主細胞培養物”可互換使用，是指外源性核酸引入的細胞，包括此類細胞的子代。宿主細胞包括“轉化子”和“轉化細胞”，其包括初代轉化細胞和及由其起源的子代，不論傳代次數多少。子代的核酸含量不一定與親代細胞完全相同，但可包含突變。本文包括這樣的突變子代，其具有的功能或生物活性與在初始轉化細胞中篩選或選擇的相同。“人抗體”是這樣的抗體，其具有的氨基酸序列對應于由人或人細胞產生的或來源于非人來源的抗體的氨基酸序列，所述非人來源利用人抗體譜或其他人抗體編碼序列。人抗體的該定義特別排除了包含非人抗原結合殘基的人源化抗體。“人共有序列框架”是人免疫球蛋白VL或VH框架序列的選擇中代表最常見氨基酸殘基的框架。一般來講，人免疫球蛋白VL或VH序列的選擇來自可變結構域序列亞組。一般來講，該序列亞組是如Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第五版,NIHPublication91-3242,BethesdaMD(1991),第1-3卷中所述的亞組。在一個實施方案中，對于VL，該亞組是如Kabat等(同上)所述的亞組κI。在一個實施方案中，對于VH，該亞組是如Kabat等(同上)所述的亞組III。“人源化”抗體是指包含來自非人HVR的氨基酸殘基和來自人FR的氨基酸殘基的嵌合抗體。在某些實施方案中，人源化抗體將包含至少一個、通常兩個可變結構域的基本上全部，其中HVR的全部或基本上全部(例如，CDR)對應于非人抗體的那些HVR，并且FR的全部或基本上全部對應于人抗體的那些FR。人源化抗體任選地可包含來源于人抗體的抗體恒定區的至少一部分。抗體例如非人抗體的“人源化形式”是指已經歷人源化的抗體。如本文所用，術語“高變區”或“HVR”是指序列高變的和/或形成結構確定的環(“高變環”)的抗體可變結構域的每個區。一般來講，天然四鏈抗體包含六個HVR；VH中三個(H1、H2、H3)，和VL中三個(L1、L2、L3)。HVR通常包含來自高變環和/或來自“互補決定區”(CDR)的氨基酸殘基，后者的序列變異性最高和/或涉及抗原識別。示例性高變環出現在氨基酸殘基26-32(L1)、50-52(L2)、91-96(L3)、26-32(H1)、53-55(H2)和96-101(H3)處。(Chothia和Lesk,J.Mol.Biol.196:901-917(1987))。示例性CDR(CDR-L1、CDR-L2、CDR-L3、CDR-H1、CDR-H2和CDR-H3)出現在L1的氨基酸殘基24-34、L2的氨基酸殘基50-56、L3的氨基酸殘基89-97、H1的氨基酸殘基31-35B、H2的氨基酸殘基50-65和H3的氨基酸殘基95-102。(Kabat等,SequencesofProteinsofImmunologicalInterest,第5版PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,MD(1991))。除VH中的CDR1之外，CDR通常包含形成高變環的氨基酸殘基。CDR還包含“特異性決定殘基”或“SDR”，它是接觸抗原的殘基。SDR包含在CDR的區域內，稱為簡短CDR或a-CDR。示例性a-CDR(a-CDR-L1、a-CDR-L2、a-CDR-L3、a-CDR-H1、a-CDR-H2和a-CDR-H3)出現在L1的氨基酸殘基31-34、L2的氨基酸殘基50-55、L3的氨基酸殘基89-96、H1的氨基酸殘基31-35B、H2的氨基酸殘基50-58和H3的氨基酸殘基95-102。(參見Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))。除非另外指明，可變結構域中的HVR殘基和其他殘基(例如，FR殘基)在本文中根據Kabat等(同上)編號。“免疫偶聯物”是偶聯至一個或多個異源分子(包括但不限于細胞毒性劑)的抗體。“個體”或“受試者”是哺乳動物。哺乳動物包括但不限于馴養的動物(例如，奶牛、綿羊、貓、狗和馬)、靈長類(例如，人和非人靈長類諸如猴子)、兔和嚙齒類(例如，小鼠和大鼠)。在某些實施方案中，該個體或受試者是人。“分離的抗體”是與其天然環境的組分分離的抗體。在一些實施方案中，抗體純化至大于95％或99％的純度，所述純度如通過例如電泳(例如，SDS-PAGE、等電點聚焦(IEF)、毛細管電泳)或色譜(例如，離子交換或反相HPLC)所測定。關于抗體純度評估方法的評述，參見例如Flatman等,J.Chromatogr.B848:79-87(2007)。“分離的核酸”是指與其天然環境的組分分離的核酸分子。分離的核酸包括包含于細胞中的核酸分子，該細胞通常包含核酸分子，但該核酸分子存在于染色體外或不同于天然染色體位置的染色體位置。“編碼抗GPC3抗體的分離的核酸”是指編碼抗體重鏈和輕鏈(或其片段)的一種或多種核酸分子，包括單個載體或單獨的載體中的此類核酸分子，以及存在于宿主細胞中的一個或多個位置的此類核酸分子。如本文所用，術語“GPC3”是指GPC3前體蛋白在細胞中加工產生的任何天然、成熟的GPC3。該術語包括來自任何脊椎動物來源的GPC3，包括哺乳動物諸如靈長類(例如人和食蟹猴)和嚙齒類(例如，小鼠和大鼠)，除非另外指明。該術語還包括天然存在的GPC3變體，例如剪接變體或等位基因變體。具有信號序列(信號序列，氨基酸1-24)的示例性人GPC3前體蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示。示例性成熟人GPC3的氨基酸序列為SEQIDNO:1的氨基酸25-580。具有信號序列的非限制示例性食蟹猴、恒河猴、小鼠和大鼠GPC3前體蛋白的氨基酸序列分別如SEQIDNO:37至41所示。術語“GPC3陽性癌癥”是指包括在表面上表達GPC3的細胞的癌癥。在一些實施方案中，GPC3在細胞表面上的表達例如使用GPC3的抗體在諸如免疫組織化學、FACS等的方法中測定。或者，GPC3mRNA表達被視為與細胞表面上的GPC3表達相關，并且可通過選自原位雜交和RT-PCR(包括定量RT-PCR)的方法測定。術語“GPC3陽性細胞”是指在其表面上表達GPC3的細胞。如本文所用，術語“單克隆抗體”是指從基本上均一的抗體群體獲得的抗體，即組成該群體的單個抗體是相同的和/或結合相同的表位，但可能的變體抗體除外，例如包含天然存在的突變或在單克隆抗體制劑的制備期間產生，此類變體通常以微量存在。與多克隆抗體制劑(通常包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體)相比，單克隆抗體制劑的每個單克隆抗體針對抗原上的單個決定簇。因此，修飾語“單克隆”表示從基本上均一的抗體群獲得的抗體的特征，并且不應解釋為需要通過任何特定方法制備抗體。例如，根據本發明使用的單克隆抗體可通過多種技術制備，包括但不限于雜交瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法以及利用包含人免疫球蛋白基因座的全部或一部分的轉基因動物的方法，此類方法和其他制備單克隆抗體的示例性方法如本文所述。“裸抗體”是指未偶聯至異源部分(例如，細胞毒性部分)或放射性標記的抗體。裸抗體可存在于藥物制劑中。“天然抗體”是指具有不同結構的天然存在的免疫球蛋白分子。例如，天然IgG抗體是約150,000道爾頓的異源四聚體糖蛋白，由通過二硫鍵連接的兩個相同的輕鏈和兩個相同的重鏈構成。從N-末端至C-末端，每個重鏈具有可變區(VH)，也稱為可變重鏈結構域或重鏈可變結構域，然后是三個恒定結構域(CH1、CH2和CH3)。相似地，從N-末端至C-末端，每個輕鏈具有可變區(VL)，也稱為可變輕鏈結構域或輕鏈可變結構域，然后是恒定輕鏈(CL)結構域。可根據恒定結構域的氨基酸序列將抗體的輕鏈指定為兩種類型之一，稱為kappa(κ)和lambda(λ)。術語“包裝說明書”用于指治療劑產品的商業包裝中通常包括的說明，其包含關于適應癥、用法、劑量、施用、聯合治療、禁忌癥和/或涉及此類治療劑產品使用的警告的信息。相對于參考多肽序列的“氨基酸序列同一性百分比(％)”定義為在對齊序列并引入空位(如果需要的話)，實現最大序列同一性百分比，并且不考慮作為序列同一性的一部分的任何保守取代之后，與參考多肽序列中的氨基酸殘基相同的候選序列中的氨基酸殘基的百分比。可通過本領域技術范圍內的多種方式實現比對以確定氨基酸序列同一性百分比的目的，例如使用公開可用的計算機軟件，諸如BLAST、BLAST-2、ALIGN或Megalign(DNASTAR)軟件。本領域的技術人員可確定用于比對序列的適當參數，包括在待比較序列的全長上實現最大比對所需的任何算法。然而，就本文的目的而言，％氨基酸序列同一性值使用序列比較計算機程序ALIGN-2生成。ALIGN-2序列比較計算機程序由Genentech,Inc.編寫，其源代碼和用戶文件說明已提交至美國版權局(U.S.CopyrightOffice,WashingtonD.C.,20559)，并以美國版權注冊No.TXU510087進行注冊。ALIGN-2程序可Genentech,Inc.,SouthSanFrancisco,California公開獲得，或可從源代碼編譯。ALIGN-2程序應在UNIX操作系統，包括數字UNIXV4.0D上編譯使用。所有序列比較參數均由ALIGN-2程序設定，并且不能改變。在其中使用ALIGN-2進行氨基酸序列比較的情況下，給定氨基酸序列A與、和或對給定氨基酸序列B的％氨基酸序列同一性(或者可稱為給定氨基酸序列A與、和或對給定氨基酸序列B具有或包含某一％氨基酸序列同一性)如下進行計算：100乘以分數X/Y其中X為序列比對程序ALIGN-2進行A和B的比對時記為相同匹配的氨基酸殘基數，并且其中Y為B中的氨基酸殘基總數。應當理解，在氨基酸序列A的長度不等于氨基酸序列B的長度時，A與B的％氨基酸序列同一性不等于B與A的％氨基酸序列同一性。除非另外特別指明，本文所用的所有％氨基酸序列同一性值如上文段落所述使用ALIGN-2計算機程序獲得。術語“藥物制劑”是指這樣的制劑，其呈允許其中包含的有效活性成分發揮生物活性的形式，并且其不包含對施用該制劑的受試者具有無法接受的毒性的另外的組分。“藥學上可接受的載體”是指藥物制劑中除活性成分之外的成分，它對受試者無毒。藥學上可接受的載體包括但不限于緩沖劑、賦形劑、穩定劑或防腐劑。如本文所用，“治療”(及其語法變型，諸如“治療”或“治療”)是指嘗試改變待治療個體的自然進程的臨床干預，并且可出于預防目的或在臨床病理的過程中進行。治療的期望效果包括但不限于預防疾病的發生或復發、減輕癥狀、減少疾病的任何直接或間接病理后果、防止轉移、降低疾病進展的速率、改善或緩和疾病狀態以及緩解或改善預后。在一些實施方案中，本發明的抗體用于延緩疾病的發展或減緩疾病的進展。術語“可變區”或“可變結構域”是指涉及抗體與抗原結合的抗體重鏈或輕鏈的結構域。天然抗體的重鏈和輕鏈的可變結構域(分別為VH和VL)通常具有類似的結構，每個結構域包含四個保守框架區(FR)和三個高變區(HVR)。(參見例如Kindt等KubyImmunology,第6版,W.H.FreemanandCo.,第91頁(2007))。單個VH或VL結構域可足以賦予抗原結合特異性。此外，結合特定抗原的抗體可通過以下方法分離：分別使用結合抗原的抗體的VH或VL結構域篩選互補VL或VH結構域的文庫。參見例如Portolano等,J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等,Nature352:624-628(1991)。如本文所用，術語“載體”是指能夠使與其所連接的另一種核酸增殖(propagate)的核酸分子。該術語包括作為自我復制核酸結構的載體，以及并入到其所引入的宿主細胞的基因組的載體。某些載體能夠指導與其可操作地連接的核酸的表達。此類載體在本文中稱為“表達載體”。“烷基”是包含正、仲、叔或環狀碳原子的C1-C18烴。例子為甲基(Me，-CH3)、乙基(Et，-CH2CH3)、1-丙基(n-Pr，正丙基，-CH2CH2CH3)、2-丙基(i-Pr，異丙基，-CH(CH3)2)、1-丁基(n-Bu，正丁基，-CH2CH2CH2CH3)、2-甲基-1-丙基(i-Bu，異丁基，-CH2CH(CH3)2)、2-丁基(s-Bu，仲丁基，-CH(CH3)CH2CH3)、2-甲基-2-丙基(t-Bu，叔丁基，-C(CH3)3)、1-戊基(正戊基，-CH2CH2CH2CH2CH3)、2-戊基(-CH(CH3)CH2CH2CH3)、3-戊基(-CH(CH2CH3)2)、2-甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH2CH3)、3-甲基-2-丁基(-CH(CH3)CH(CH3)2)、3-甲基-1-丁基(-CH2CH2CH(CH3)2)、2-甲基-1-丁基(-CH2CH(CH3)CH2CH3)、1-己基(-CH2CH2CH2CH2CH2CH3)、2-己基(-CH(CH3)CH2CH2CH2CH3)、3-己基(-CH(CH2CH3)(CH2CH2CH3))、2-甲基-2-戊基(-C(CH3)2CH2CH2CH3)、3-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH(CH3)CH2CH3)、4-甲基-2-戊基(-CH(CH3)CH2CH(CH3)2)、3-甲基-3-戊基(-C(CH3)(CH2CH3)2)、2-甲基-3-戊基(-CH(CH2CH3)CH(CH3)2)、2,3-二甲基-2-丁基(-C(CH3)2CH(CH3)2)、3,3-二甲基-2-丁基(-CH(CH3)C(CH3)3。如本文所用，術語“C1-C8烷基”是指具有1至8個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴。代表性“C1-C8烷基”基團包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基、-正己基、-正庚基、-正辛基、-正壬基和-正癸基；而支鏈C1-C8烷基包括但不限于-異丙基、-仲丁基、-異丁基、-叔丁基、-異戊基、2-甲基丁基；不飽和C1-C8烷基包括但不限于-乙烯基、-丙烯基、-1-丁烯基、-2-丁烯基、-異丁基烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基、3-己基、-乙炔基、-丙炔基、-1-丁炔基、-2-丁炔基、-1-戊炔基-、2-戊炔基-、3-甲基-1-丁炔基。C1-C8烷基基團可以是未取代的或被一個或多個基團取代，所述基團包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每個R’獨立地選自H、-C1-C8烷基和芳基。如本文所用，術語“C1-C12烷基”是指具有1至12個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴。C1-C12烷基基團可以是未取代的或被一個或多個基團取代，所述基團包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-SO3R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每個R’獨立地選自H、-C1-C8烷基和芳基。如本文所用，術語“C1-C6烷基”是指具有1至6個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴。代表性“C1-C6烷基”基團包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基、-正戊基和-正己基；而支鏈C1-C6烷基包括但不限于-異丙基、-仲丁基、-異丁基、-叔丁基、-異戊基和2-甲基丁基；不飽和C1-C6烷基包括但不限于-乙烯基、-丙烯基、-1-丁烯基、-2-丁烯基和-異丁基烯基、-1-戊烯基、-2-戊烯基、-3-甲基-1-丁烯基、-2-甲基-2-丁烯基、-2,3-二甲基-2-丁烯基、1-己基、2-己基和3-己基。C1-C6烷基基團可以是未取代的或被一個或多個基團取代，如上文C1-C8烷基基團所述。如本文所用，術語“C1-C4烷基”是指具有1至4個碳原子的直鏈或支鏈、飽和或不飽和烴。代表性“C1-C4烷基”基團包括但不限于-甲基、-乙基、-正丙基、-正丁基；而支鏈C1-C4烷基包括但不限于-異丙基、-仲丁基、-異丁基、-叔丁基；不飽和C1-C4烷基包括但不限于-乙烯基、-丙烯基、-1-丁烯基、-2-丁烯基和-異丁基烯基。C1-C4烷基基團可以是未取代的或被一個或多個基團取代，如上文C1-C8烷基基團所述。“烷氧基”是單獨鍵合到氧的烷基基團。示例性烷氧基基團包括但不限于甲氧基(-OCH3)和乙氧基(-OCH2CH3)。“C1-C5烷氧基”是具有1至5個碳原子的烷氧基基團。烷氧基基團可以是未取代的或被一個或多個基團取代，如上文對于烷基基團所述。“烯基”是包含正、仲、叔或環狀碳原子的C2-C18烴，其具有至少一個不飽和位點，即碳-碳sp2雙鍵。例子包括但不限于：乙烯或乙烯基(-CH＝CH2)、丙烯基(-CH2CH＝CH2)、環戊烯基(-C5H7)和5-己烯基(-CH2CH2CH2CH2CH＝CH2)。“C2-C8烯基”是包含2至8個正、仲、叔或環狀碳原子的烴，其具有至少一個不飽和位點，即碳-碳sp2雙鍵。“炔基”是包含正、仲、叔或環狀碳原子的C2-C18烴，其具有至少一個不飽和位點，即碳-碳sp三鍵。例子包括但不限于：乙炔基(-C≡CH)和丙炔基(-CH2C≡CH)。“C2-C8炔基”是包含2至8個正、仲、叔或環狀碳原子的烴，其具有至少一個不飽和位點，即碳-碳sp三鍵。“亞烷基”是指具有1-18個碳原子，并且具有兩個單價基團中心的飽和、支鏈或直鏈或環狀烴基，其通過從母體烷烴的相同或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而產生。典型的亞烷基包括但不限于：亞甲基(-CH2-)1,2-乙基(-CH2CH2-)、1,3-丙基(-CH2CH2CH2-)、1,4-丁基(-CH2CH2CH2CH2-)等等。“C1-C10亞烷基”是具有式-(CH2)1-10-的直鏈、飽和烴基。C1-C10亞烷基的例子包括亞甲基、乙烯、丙烯、丁烯、戊烯、己烯、庚烯、辛烯、壬烯和癸烯。“亞烯基”是指具有2-18個碳原子，并且具有兩個單價基團中心的不飽和、支鏈或直鏈或環狀烴基，其通過從母體烯烴的相同或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而產生。典型的亞烯基包括但不限于：1,2-乙烯(-CH＝CH-)。“亞炔基”是指具有2-18個碳原子，并且具有兩個單價基團中心的不飽和、支鏈或直鏈或環狀烴基，其通過從母體炔烴的相同或兩個不同碳原子移除兩個氫原子而產生。典型的亞炔基包括但不限于：乙炔(-C≡C-)、丙炔基(-CH2C≡C-)和4-戊炔基(-CH2CH2CH2C≡C-)。“芳基”是指碳環芳族基團。芳基基團的例子包括但不限于苯基、萘基和蒽基。碳環芳族基團或雜環芳族基團可以是未取代的或被一個或多個基團取代，所述基團包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每個R’獨立地選自H、-C1-C8烷基和芳基。“C5-C20芳基”是碳環芳環中具有5至20個碳原子的芳基基團。C5-C20芳基基團的例子包括但不限于苯基、萘基和蒽基。C5-C20芳基基團可以是取代的或未取代的，如上文對于芳基基團所述。“C5-C14芳基”是碳環芳環中具有5至14個碳原子的芳基基團。C5-C14芳基基團的例子包括但不限于苯基、萘基和蒽基。C5-C14芳基基團可以是取代的或未取代的，如上文關于芳基基團所述。“亞芳基”是具有兩個共價鍵，并且可呈鄰位、間位或對位構型的芳基基團，如以下結構所示：其中苯基基團可以是未取代的或被最多四個基團取代，所述基團包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每個R’獨立地選自H、-C1-C8烷基和芳基。“芳烷基”是指這樣的無環烷基：其中鍵合到碳原子(通常末端或sp3碳原子)的氫原子中的一個被芳基取代。典型的芳烷基基團包括但不限于芐基、2-苯基乙-1-基、2-苯基乙烯-1-基、萘基甲基、2-萘基乙-1-基、2-萘基乙烯-1-基、萘并芐基、2-萘并苯基乙-1-基等等。芳烷基基團包含6至20個碳原子，例如芳烷基基團的烷基部分(包括烷基(alkanyl)、烯基或炔基基團)為1至6個碳原子，并且芳基部分為5至14個碳原子。“雜芳烷基”是指這樣的無環烷基：其中鍵合到碳原子(通常末端或sp3碳原子)的氫原子中的一者被雜芳基取代。典型的雜芳烷基基團包括但不限于2-苯并咪唑基甲基、2-呋喃基乙基等等。雜芳烷基基團包含6至20個碳原子，例如雜芳烷基基團的烷基部分(包括烷基、烯基或炔基基團)為1至6個碳原子，而雜芳基部分為5至14個碳原子，并且1至3個雜原子選自N、O、P和S。雜芳烷基基團的雜芳基部分可以是具有3至7個環成員(2至6個碳原子的單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子和1至3個選自N、O、P和S的雜原子)的雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。“取代的烷基”、“取代的芳基”和“取代的芳烷基”分別指其中一個或多個氫原子各自獨立地被取代基替換的烷基、芳基和芳烷基。典型的取代基包括但不限于-X、-R、-O-、-OR、-SR、-S-、-NR2、-NR3、＝NR、-CX3、-CN、-OCN、-SCN、-N＝C＝O、-NCS、-NO、-NO2、＝N2、-N3、NC(＝O)R、-C(＝O)R、-C(＝O)NR2、-SO3-、-SO3H、-S(＝O)2R、-OS(＝O)2OR、-S(＝O)2NR、-S(＝O)R、-OP(＝O)(OR)2、-P(＝O)(OR)2、-PO-3、-PO3H2、-C(＝O)R、-C(＝O)X、-C(＝S)R、-CO2R、-CO2-、-C(＝S)OR、-C(＝O)SR、-C(＝S)SR、-C(＝O)NR2、-C(＝S)NR2、-C(＝NR)NR2，其中每個X獨立地為鹵素：F、Cl、Br或I；并且每個R獨立地為-H、C2-C18烷基、C6-C20芳基、C3-C14雜環、保護基團或前藥部分。如上所述亞烷基、亞烯基和亞炔基基團也可被相似地取代。“雜芳基”和“雜環”是指其中一個或多個環原子為雜原子，例如氮、氧和硫的環系。雜環基包含3至20個碳原子和1至3個選自N、O、P和S的雜原子。雜環可以是具有3至7個環成員(2至6個碳原子和1至3個選自N、O、P和S的雜原子)的單環或具有7至10個環成員(4至9個碳原子和1至3個選自N、O、P和S的雜原子)的雙環，例如：雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統。示例性雜環描述于例如Paquette,LeoA.,“PrinciplesofModernHeterocyclicChemistry”(W.A.Benjamin,NewYork,1968)，特別是第1、3、4、6、7和9章；“TheChemistryofHeterocyclicCompounds,AseriesofMonographs”(JohnWiley&Sons，NewYork，1950至今)，特別是第13、14、16、19和28卷；以及J.Am.Chem.Soc.(1960)82:5566。雜環的例子包括例如但不限于吡啶基、二氫吡啶基、四氫吡啶基(哌啶基)、噻唑基、四氫硫代苯基、硫氧化四氫硫代苯基、嘧啶基、呋喃基、噻吩基、吡咯基、吡唑基、咪唑基、四唑基、苯并呋喃基、噻萘基(thianaphthalenyl)、吲哚基、吲哚烯基、喹啉基、異喹啉基、苯并咪唑基、哌啶基、4-哌啶酮基、吡咯烷基、2-吡咯酮基、吡咯啉基、四氫呋喃基、雙四氫呋喃基、四氫吡喃基、雙四氫吡喃基、四氫喹啉基、四氫異喹啉基、十氫喹啉基、八氫異喹啉基、吖辛因基、三嗪基、6H-1,2,5-噻二嗪基、2H,6H-1,5,2-二噻嗪基、噻吩基、噻蒽基、哌喃基、異苯并呋喃基、苯并吡喃基、噸基、酚噁噻基、2H-吡咯基、異噻唑基、異噁唑基、吡嗪基、噠嗪基、吲嗪基、異吲哚基、3H-吲哚基、1H-吲唑基、嘌呤基、4H-喹嗪基、酞嗪基、萘啶基、喹喔啉基、喹唑啉基、噌啉基、蝶啶基、4aH-咔唑基、咔唑基、β-咔啉基、啡啶基、吖啶基、嘧啶基、菲咯啉基、吩嗪基、酚噻嗪基、呋吖基、酚噁嗪基、異色滿基、色滿基、咪唑烷基、咪唑啉基、吡唑烷基、吡唑啉基、哌嗪基、吲哚啉基、異吲哚啉基、奎寧環基、嗎啉基、噁唑烷基、苯并三唑基、苯并異噁唑基、羥吲哚基、苯并噁唑啉基和靛紅酰基。例如但不限于，碳鍵合的雜環鍵合至吡啶的2、3、4、5或6位，噠嗪的3、4、5或6位，嘧啶的2、4、5或6位，吡嗪的2、3、5或6位，呋喃、四氫呋喃、硫代呋喃、噻吩、吡咯或四氫吡咯的2、3、4或5位，噁唑、咪唑或噻唑的2、4或5位，異噁唑、吡唑或異噻唑的3、4或5位，氮丙啶的2或3位，吖丁啶的2、3或4位，喹啉的2、3、4、5、6、7或8位或異喹啉的1、3、4、5、6、7或8位。更通常地，碳鍵合的雜環包括2-吡啶基、3-吡啶基、4-吡啶基、5-吡啶基、6-吡啶基、3-噠嗪基、4-噠嗪基、5-噠嗪基、6-噠嗪基、2-嘧啶基、4-嘧啶基、5-嘧啶基、6-嘧啶基、2-吡嗪基、3-吡嗪基、5-吡嗪基、6-吡嗪基、2-噻唑基、4-噻唑基或5-噻唑基。例如但不限于，氮鍵合的雜環鍵合至氮丙啶、吖丁啶、吡咯、吡咯烷、2-吡咯啉、3-吡咯啉、咪唑、咪唑啉、2-咪唑啉、3-咪唑啉、吡唑、吡唑啉、2-吡唑啉、3-吡唑啉、哌啶、哌嗪、吲哚、吲哚啉、1H-吲唑的1位，異吲哚或異吲哚啉的2位，嗎啉的4位以及咔唑或β-咔啉的9位。更通常地，氮鍵合的雜環包括1-吖啶基、1-氮雜環丁二烯基、1-吡咯基、1-咪唑基、1-吡唑基和1-哌啶基。“C3-C8雜環”是指其中一至四個環碳原子被選自O、S和N的雜原子獨立地替換的芳族或非芳族C3-C8碳環。C3-C8雜環的代表性例子包括但不限于苯并呋喃基、苯并噻吩、吲哚基、苯并吡唑基、香豆素基、異喹啉基、吡咯基、苯硫基、呋喃基、噻唑基、咪唑基、吡唑基、三唑基、喹啉基、嘧啶基、吡啶基、吡啶酮基、吡嗪基、噠嗪基、異噻唑基、異噁唑基和四唑基。C3-C8雜環可以是未取代的或被最多七個基團取代，所述基團包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每個R’獨立地選自H、-C1-C8烷基和芳基。“C3-C8雜環”是指上述定義的C3-C8雜環基團，其中一個雜環基團的氫原子被鍵替換。C3-C8雜環可以是未取代的或被最多六個基團取代，所述基團包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每個R’獨立地選自H、-C1-C8烷基和芳基。“C3-C20雜環”是指其中一至四個環碳原子被選自O、S和N的雜原子獨立地替換的芳族或非芳族C3-C8碳環。C3-C20雜環可以是未取代的或被最多七個基團取代，所述基團包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2、-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每個R’獨立地選自H、-C1-C8烷基和芳基。“C3-C20雜環”是指上述定義的C3-C20雜環基團，其中一個雜環基團的氫原子被鍵替換。“碳環”意指具有3至7個碳原子(單環)或7至12個碳原子(雙環)的飽和的或不飽和的環。單環碳環具有3至6個環原子，更通常地5或6個環原子。雙環碳環具有7至12個環原子(例如排列為雙環[4,5]、[5,5]、[5,6]或[6,6]系統)或9或10個環原子(排列為雙環[5,6]或[6,6]系統)。單環碳環的例子包括環丙基、環丁基、環戊基、1-環戊-1-烯基、1-環戊-2-烯基、1-環戊-3-烯基、環己基、1-環己-1-烯基、1-環己-2-烯基、1-環己-3-烯基、環庚基和環辛基。“C3-C8碳環”是3、4、5、6、7或8元飽和或不飽和非芳族碳環。代表性C3-C8碳環包括但不限于-環丙基、-環丁基、-環戊基、-環戊二烯基、-環己基、-環己烯基、-1,3-環己二烯基、-1,4-環己二烯基、-環庚基、-1,3-環庚二烯基-、-1,3,5-環庚三烯基、-環辛基和-環辛二烯基。C3-C8碳環基團可以是未取代的或被一個或多個基團取代，所述基團包括但不限于-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、-芳基、-C(O)R’、-OC(O)R’、-C(O)OR’、-C(O)NH2、-C(O)NHR’、-C(O)N(R’)2-NHC(O)R’、-S(O)2R’、-S(O)R’、-OH、-鹵素、-N3、-NH2、-NH(R’)、-N(R’)2和-CN；其中每個R’獨立地選自H、-C1-C8烷基和芳基。“C3-C8碳環”是指上述定義的C3-C8碳環基團，其中一個碳環基團的氫原子被鍵替換。“接頭”是指包含將抗體共價連接至藥物部分的共價鍵或原子鏈的化學部分。在各個實施方案中，接頭包括二價基團，諸如烷基二基、芳基二基、雜芳基二基，諸如以下的部分：-(CR2)nO(CR2)n-、烷氧基的重復單元(例如聚氧乙烯、PEG、聚亞甲基氧基)和烷基氨基的重復單元(例如聚亞乙基氨基、JeffamineTM)；以及二酸酯和酰胺，包括琥珀酸酯、琥珀酰胺、二乙醇酸酯、丙二酸酯和己酰胺。在各個實施方案中，接頭可包含一個或多個氨基酸殘基，諸如纈氨酸、苯丙氨酸、賴氨酸和高賴氨酸。術語“手性”是指具有鏡像配偶體的不可重疊性質的分子，而術語“非手性”是指可與其鏡像配偶體重疊的分子。術語“立體異構體”是指具有相同的化學組成，但就原子或基團的空間排列而言不同的化合物。“非對映體”是指具有兩個或更多個手性中心，且分子彼此不互為鏡像的立體異構體。非對映體具有不同的物理性質，例如熔點、沸點、光譜性質和反應性。非對映體的混合物可以高拆分分析程序，諸如電泳和色譜分析。“對映體”是指彼此互為不可重疊的鏡像的化合物的兩個立體異構體。本文所用的立體化學定義和慣例一般符合S.P.Parker編,McGraw-HillDictionaryofChemicalTerms(1984)McGraw-HillBookCompany,NewYork；和Eliel,E.和Wilen,S.,StereochemistryofOrganicCompounds(1994)JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork。多種有機化合物以光學活性形式存在，即它們能夠旋轉平面偏振光的平面。在描述光學活性化合物時，前綴D和L或R和S用于表示分子關于其手性中心的絕對構型。采用前綴d和l或(+)和(-)表示平面偏振光被化合物旋轉的符號，其中(-)或1意指該化合物是左旋的。具有前綴(+)或d的化合物是右旋的。對于給定化學結構，這些立體異構體是相同的，不同的是它們彼此互為鏡像。特定的立體異構體也可稱為對映體，并且此類異構體的混合物通常稱為對映體混合物。對映體的50:50混合物稱為外消旋的混合物或外消旋物，它們可出現于化學反應或過程中無立體選擇性或立體特異性的情況下。術語“外消旋的混合物”和“外消旋物”是指兩種無光學活性的對映體物質的等摩爾混合物。“離去基團”是指能夠被另一個官能團取代的官能團。某些離去基團是本領域熟知的，并且例子包括但不限于鹵化物(例如氯化物、溴化物、碘化物)、甲基磺酰基(甲磺酰基)、對甲苯磺酰基(甲苯磺酰基)、三氟甲基磺酰基(三氟甲磺酸酯)和三氟甲基磺酸酯。術語“保護基團”是指通常用于與化合物上的其他官能團反應、阻斷或保護特定官能團的取代基。例如，“氨基保護基團”是連接至氨基基團、阻斷或保護化合物中的氨基官能團的取代基。合適的氨基保護基團包括但不限于乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、芐氧羰基(CBZ)和9-芴基亞甲基氧基羰基(Fmoc)。對于保護基團及其用途的一般說明，參見T.W.Greene,ProtectiveGroupsinOrganicSynthesis,JohnWiley&Sons,NewYork,1991或后續版本。II.組合物和方法在一個方面，本發明部分基于結合至GPC3的抗體和包含此類抗體的免疫偶聯物。本發明的抗體和免疫偶聯物用于例如GPC3陽性癌癥的診斷或治療。A.示例性抗GPC3抗體本文提供了結合至GPC3的分離的抗體。示例性天然存在的具有信號序列(氨基酸1-24)的人GPC3前體蛋白序列提供于SEQIDNO:1，并且對應的成熟GPC3蛋白序列對應于SEQIDNO:1的氨基酸25-580。在某些實施方案中，抗GPC3抗體具有以下特性中的至少一種或多種的任何組合：a)結合至重組人GPC3；b)結合至重組食蟹猴GPC3；c)結合至HepG2細胞表面上的內源性GPC3；d)結合至293細胞表面上表達的食蟹猴GPC3；e)結合至癌細胞表面上的內源性GPC3；f)結合至肝細胞癌細胞表面上的內源性GPC3；g)結合至選自HepG2、Hep3B、Huh7和JHH-7的細胞系的細胞表面上的內源性GPC3；h)結合至人GPC3的氨基酸25至137內的表位；i)結合至跨越人GPC3的氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位；j)結合至全長成熟人GPC3(例如，SEQIDNO:1的氨基酸25至560或氨基酸25至580)，但不結合至人GPC3的N-末端片段(SEQIDNO:1的氨基酸25至358)或不結合至人GPC3的C-末端片段(SEQIDNO:1的氨基酸359至560(不含GPI連接)或氨基酸359至580(含GPI連接))k)結合至人GPC3的氨基酸420至470內的表位；l)結合至人GPC3的氨基酸470至509內的表位；m)與抗體7H1競爭結合人GPC3；n)與抗體4G7競爭結合人GPC3；o)與抗體15G1競爭結合人GPC3；和/或p)與抗體4A11競爭結合人GPC3。在一些實施方案中，抗體的特性如本文所述，例如下文實例測定。在一些實施方案中，表位結合使用例如如實例2所述的缺失(截短)分析測定。在一些實施方案中，表位結合通過例如如實例2所述的FACS，或通過合適的結合分析諸如ELISA或表面等離振子共振分析測定。作為非限制性例子，在一些實施方案中，全長GPC3或GPC3片段在細胞(諸如293細胞)的表面上表達，并且通過FACS檢測結合至細胞表面上的GPC3的抗體。抗體7H1和其他實施方案本文提供的某些實施方案部分基于抗體7H1的開發，該抗體結合至人GPC3的氨基酸25至137內的表位。在一些實施方案中，本文提供的抗體結合至人GPC3的氨基酸25至137內的表位。在一些此類實施方案中，本文提供的抗體包含抗體7H1的一個或多個HVR序列。在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR的抗GPC3抗體，所述HVR選自(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在一個方面，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VHHVR序列的抗體，所述VHHVR選自(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3。在一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3和含有SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2。在另一個實施方案中，該抗體包含(a)含有SEQIDNO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)含有SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個方面，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VLHVR序列的抗體，所述VLHVR選自(a)包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在一個實施方案中，該抗體包含(a)含有SEQIDNO:7的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有SEQIDNO:8的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，本發明的抗體包含(a)含有至少一個、至少兩個或全部三個VHHVR序列的VH結構域，所述VHHVR選自(i)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含選自SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)包含至少一個、至少兩個或全部三個VLHVR序列的VL結構域，所述VLHVR選自(i)包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，本發明提供這樣的抗體，其包含(a)含有SEQIDNO:4的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQIDNO:7的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQIDNO:8的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在任何上述實施方案中，抗GPC3抗體是人源化的。在一個實施方案中，抗GPC3抗體包含如任何上述實施方案所述的HVR，還包含人受體框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有序列框架。在某些實施方案中，該人受體框架是人VLκI共有序列(VLKI)框架和/或VH框架VH1。在某些實施方案中，該人受體框架是人VLκI共有序列(VLKI)框架和/或包含以下突變中的任一者的VH框架VH1。在另一個方面，抗GPC3抗體包含與SEQIDNO:2的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQIDNO:2的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列包含相對于參考序列的取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列的抗GPC3抗體保持結合至GPC3的能力。在某些實施方案中，在SEQIDNO:2中取代、插入和/或缺失總共1至10個氨基酸。在某些實施方案中，在SEQIDNO:2中取代、插入和/或缺失總共1至5個氨基酸。在某些實施方案中，取代、插入或缺失出現在HVR外部的區域(即，FR)。任選地，抗GPC3抗體包含SEQIDNO:2的VH序列，包括該序列的翻譯后修飾。在具體實施方案中，VH包含一個、兩個或三個HVR，所述HVR選自：(a)包含SEQIDNO:4的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQIDNO:5的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQIDNO:6的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個方面，提供了抗GPC3抗體，其中該抗體包含與SEQIDNO:3的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施方案中，與SEQIDNO:3的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列包含相對于參考序列的取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列的抗GPC3抗體保持結合至GPC3的能力。在某些實施方案中，在SEQIDNO:3中取代、插入和/或缺失總共1至10個氨基酸。在某些實施方案中，在SEQIDNO:3中取代、插入和/或缺失總共1至5個氨基酸。在某些實施方案中，取代、插入或缺失出現在HVR外部的區域(即，在FR中)。任選地，抗GPC3抗體包含SEQIDNO:3的VL序列，包括該序列的翻譯后修飾。在具體實施方案中，該VL包含一個、兩個或三個HVR，所述HVR選自(a)包含SEQIDNO:7的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQIDNO:8的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQIDNO:9的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，提供了抗GPC3抗體，其中該抗體包含如上文提供的任何實施方案所述的VH，和如上文提供的任何實施方案所述的VL。在一個實施方案中，該抗體包含分別SEQIDNO:2和SEQIDNO:3中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。在另一個實施方案中，抗GPC3抗體包括人源化形式的抗體，所述抗體包含分別SEQIDNO:2和SEQIDNO:3中的VH和VL序列。在另一個方面，本文提供了結合至與本文提供的抗GPC3抗體相同的表位的抗體。例如，在某些實施方案中，提供了這樣的抗體，其結合至與包含分別SEQIDNO:2的VH序列和SEQIDNO:3的VL序列的抗GPC3抗體相同的表位。本文提供了包含輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域的抗體，所述輕鏈可變結構域包含如圖4B所述根據Kabat編號的HVR1-LC、HVR2-LC和HVR3-LC序列，所述重鏈可變結構域包含如圖4A所述根據Kabat編號的HVR1-HC、HVR2-HC和HVR3-HC序列。在一些實施方案中，該抗體包含含有HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列，和如圖4B所述的FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列的輕鏈可變結構域。在一些實施方案中，該抗體包含含有HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列，和如圖4A所述的FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列的重鏈可變結構域。在本發明的另一個方面，根據任何上述實施方案的抗GPC3抗體是單克隆抗體，包括人抗體。在一個實施方案中，抗GPC3抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體或F(ab’)2片段。在另一個實施方案中，該抗體為基本上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或本文定義的其他抗體種類或同種型。在另一個方面，根據任何上述實施方案的抗GPC3抗體可包括如下文所述的任何單獨或組合特征。抗體4A11和其他實施方案本文提供的某些實施方案部分基于抗體4A11的開發，該抗體結合至人GPC3的氨基酸470至509內的表位。在一些實施方案中，本文提供的抗體結合至人GPC3的氨基酸470至509內的表位。在一些此類實施方案中，本文提供的抗體包含抗體4A11的一個或多個HVR序列。在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR的抗GPC3抗體，所述HVR選自(a)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在一個方面，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VHHVR序列的抗體，所述VHHVR選自(a)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3。在一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3和含有SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2。在另一個實施方案中，該抗體包含(a)含有SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)含有SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個方面，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VLHVR序列的抗體，所述VLHVR選自(a)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在一個實施方案中，該抗體包含(a)含有SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，本發明的抗體包含(a)含有至少一個、至少兩個或全部三個VHHVR序列的VH結構域，所述VHHVR選自(i)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含選自SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)含有至少一個、至少兩個或全部三個VLHVR序列的VL結構域，所述VLHVR選自(i)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，本發明提供這樣的抗體，其包含(a)含有SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在任何上述實施方案中，抗GPC3抗體是人源化的。在一個實施方案中，抗GPC3抗體包含如任何上述實施方案所述的HVR，并且還包含人受體框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有序列框架。在某些實施方案中，該人受體框架是人VLκI共有序列(VLKI)框架和/或VH框架VH1。在某些實施方案中，該人受體框架是人VLκI共有序列(VLKI)框架和/或包含以下突變中的任一者的VH框架VH1。在另一個方面，抗GPC3抗體包含與SEQIDNO:10的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQIDNO:10的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列包含相對于參考序列的取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列的抗GPC3抗體保持結合至GPC3的能力。在某些實施方案中，在SEQIDNO:10中取代、插入和/或缺失總共1至10個氨基酸。在某些實施方案中，在SEQIDNO:10中取代、插入和/或缺失總共1至5個氨基酸。在某些實施方案中，取代、插入或缺失出現在HVR外部的區域(即，FR)。任選地，抗GPC3抗體包含SEQIDNO:10的VH序列，包括該序列的翻譯后修飾。在具體實施方案中，VH包含一個、兩個或三個HVR，所述HVR選自：(a)包含SEQIDNO:12的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQIDNO:13的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQIDNO:14的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個方面，提供了抗GPC3抗體，其中該抗體包含與SEQIDNO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施方案中，與SEQIDNO:11的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列包含相對于參考序列的取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列的抗GPC3抗體保持結合至GPC3的能力。在某些實施方案中，在SEQIDNO:11中取代、插入和/或缺失總共1至10個氨基酸。在某些實施方案中，在SEQIDNO:11中取代、插入和/或缺失總共1至5個氨基酸。在某些實施方案中，取代、插入或缺失出現在HVR外部的區域(即，FR)。任選地，抗GPC3抗體包含SEQIDNO:11的VL序列，包括該序列的翻譯后修飾。在具體實施方案中，該VL包含一個、兩個或三個HVR，所述HVR選自(a)包含SEQIDNO:15的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQIDNO:16的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQIDNO:17的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，提供了抗GPC3抗體，其中該抗體包含如上文提供的任何實施方案所述的VH，和如上文提供的任何實施方案所述的VL。在一個實施方案中，該抗體包含分別SEQIDNO:10和SEQIDNO:11中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。在另一個實施方案中，抗GPC3抗體包括人源化形式的抗體，所述抗體包含分別SEQIDNO:10和SEQIDNO:11中的VH和VL序列。在另一個方面，本文提供了結合至與本文提供的抗GPC3抗體相同的表位的抗體。例如，在某些實施方案中，提供了這樣的抗體，其結合至與包含分別SEQIDNO:10的VH序列和SEQIDNO:11的VL序列的抗GPC3抗體相同的表位。本文提供了包括輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域的抗體，所述輕鏈可變結構域包含如圖4B所述根據Kabat編號的HVR1-LC、HVR2-LC和HVR3-LC序列，所述重鏈可變結構域包含如圖4A所述根據Kabat編號的HVR1-HC、HVR2-HC和HVR3-HC序列。在一些實施方案中，該抗體包含含有HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列，和如圖4B所述的FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列的輕鏈可變結構域。在一些實施方案中，該抗體包含含有HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列，和如圖4A所述的FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列的重鏈可變結構域。在本發明的另一個方面，根據任何上述實施方案的抗GPC3抗體是單克隆抗體，包括人抗體。在一個實施方案中，抗GPC3抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體或F(ab’)2片段。在另一個實施方案中，該抗體為基本上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或本文定義的其他抗體種類或同種型。在另一個方面，根據任何上述實施方案的抗GPC3抗體可包括下文所述的任何單獨或組合特征。抗體15G1和其他實施方案本文提供的某些實施方案部分基于抗體15G1的開發，該抗體結合至人GPC3的氨基酸420至470內的表位。在一些實施方案中，本文提供的抗體結合至人GPC3的氨基酸420至470內的表位。在一些此類實施方案中，本文提供的抗體包含抗體15G1的一個或多個HVR序列。在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR的抗GPC3抗體，所述HVR選自(a)包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在一個方面，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VHHVR序列的抗體，所述VHHVR選自(a)包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3。在一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3和含有SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2。在另一個實施方案中，該抗體包含(a)含有SEQIDNO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)含有SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個方面，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VLHVR序列的抗體，所述VLHVR選自(a)包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在一個實施方案中，該抗體包含(a)含有SEQIDNO:31的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有SEQIDNO:32的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，本發明的抗體包含(a)含有至少一個、至少兩個或全部三個VHHVR序列的VH結構域，所述VHHVR選自(i)包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含選自SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)含有至少一個、至少兩個或全部三個VLHVR序列的VL結構域，所述VLHVR選自(i)包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，本發明提供這樣的抗體，其包含(a)含有SEQIDNO:28的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQIDNO:31的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQIDNO:32的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在任何上述實施方案中，抗GPC3抗體是人源化的。在一個實施方案中，抗GPC3抗體包含如任何上述實施方案所述的HVR，還包含人受體框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有序列框架。在某些實施方案中，該人受體框架是人VLκI共有序列(VLKI)框架和/或VH框架VH1。在某些實施方案中，該人受體框架是人VLκI共有序列(VLKI)框架和/或包含以下突變中的任一者的VH框架VH1。在另一個方面，抗GPC3抗體包含與SEQIDNO:26的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQIDNO:26的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列包含相對于參考序列的取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列的抗GPC3抗體保持結合至GPC3的能力。在某些實施方案中，在SEQIDNO:26中取代、插入和/或缺失總共1至10個氨基酸。在某些實施方案中，在SEQIDNO:26中取代、插入和/或缺失總共1至5個氨基酸。在某些實施方案中，取代、插入或缺失出現在HVR外部的區域(即，FR)。任選地，抗GPC3抗體包含SEQIDNO:26的VH序列，包括該序列的翻譯后修飾。在具體實施方案中，VH包含一個、兩個或三個HVR，所述HVR選自：(a)包含SEQIDNO:28的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQIDNO:29的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQIDNO:30的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個方面，提供了抗GPC3抗體，其中該抗體包含與SEQIDNO:27的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施方案中，與SEQIDNO:27的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列包含相對于參考序列的取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列的抗GPC3抗體保持結合至GPC3的能力。在某些實施方案中，在SEQIDNO:27中取代、插入和/或缺失總共1至10個氨基酸。在某些實施方案中，在SEQIDNO:27中取代、插入和/或缺失總共1至5個氨基酸。在某些實施方案中，取代、插入或缺失出現在HVR外部的區域(即，FR)。任選地，抗GPC3抗體包含SEQIDNO:27的VL序列，包括該序列的翻譯后修飾。在具體實施方案中，該VL包含一個、兩個或三個HVR，所述HVR選自(a)包含SEQIDNO:31的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQIDNO:32的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQIDNO:33的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，提供了抗GPC3抗體，其中該抗體包含如上文提供的任何實施方案所述的VH，和如上文提供的任何實施方案所述的VL。在一個實施方案中，該抗體包含分別SEQIDNO:26和SEQIDNO:27中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。在另一個實施方案中，抗GPC3抗體包括包含分別SEQIDNO:26和SEQIDNO:27中的VH和VL序列的抗體的人源化形式。在另一個方面，本文提供了結合至與本文提供的抗GPC3抗體相同的表位的抗體。例如，在某些實施方案中，提供了這樣的抗體，其結合至與包含分別SEQIDNO:26的VH序列和SEQIDNO:27的VL序列的抗GPC3抗體相同的表位。本文提供了包含輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域的抗體，所述輕鏈可變結構域包含如圖4B所述根據Kabat編號的HVR1-LC、HVR2-LC和HVR3-LC序列，所述重鏈可變結構域包含如圖4A所述根據Kabat編號的HVR1-HC、HVR2-HC和HVR3-HC序列。在一些實施方案中，該抗體包含含有HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列，和如圖4B所述的FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列的輕鏈可變結構域。在一些實施方案中，該抗體包含含有HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列，和如圖4A所述的FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列的重鏈可變結構域。在本發明的另一個方面，根據任何上述實施方案的抗GPC3抗體是單克隆抗體，包括人抗體。在一個實施方案中，抗GPC3抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體或F(ab’)2片段。在另一個實施方案中，該抗體為基本上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或如本文定義的其他抗體種類或同種型。在另一個方面，根據任何上述實施方案的抗GPC3抗體可包括下文所述的任何單獨或組合特征。抗體4G7和其他實施方案本文提供的某些實施方案部分基于抗體4G7的開發，該抗體結合至全長人GPC3，但不結合至人GPC3的N-末端片段或C-末端片段，暗示其結合至跨越人GPC3的氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位。在一些實施方案中，本文提供的抗體結合至全長成熟人GPC3，但不結合至人GPC3的N-末端片段(SEQIDNO:1的氨基酸25至358)，并且不結合至人GPC3的C-末端片段(SEQIDNO:1的氨基酸359至560(不含GPI連接)或氨基酸359至580(含GPI連接))。在一些實施方案中，本文提供的抗體結合至跨越人GPC3的氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位。在一些此類實施方案中，本文提供的抗體包含抗體4G7的一個或多個HVR序列。在一些實施方案中，本發明提供包含至少一個、兩個、三個、四個、五個或六個HVR的抗GPC3抗體，所述HVR選自(a)包含SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2；(c)包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3；(d)包含SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-L1；(e)包含SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在一個方面，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VHHVR序列的抗體，所述VHHVR選自(a)包含SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3。在一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3和含有SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個實施方案中，該抗體包含含有SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3、含有SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3和含有SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2。在另一個實施方案中，該抗體包含(a)含有SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2；和(c)含有SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個方面，本發明提供包含至少一個、至少兩個或全部三個VLHVR序列的抗體，所述VLHVR選自(a)包含SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在一個實施方案中，該抗體包含(a)含有SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-L1；(b)含有SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)含有SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，本發明的抗體包含(a)含有至少一個、至少兩個或全部三個VHHVR序列的VH結構域，所述VHHVR選自(i)包含SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H1，(ii)包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2，和(iii)包含選自SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3；和(b)含有至少一個、至少兩個或全部三個VLHVR序列的VL結構域，所述VLHVR選自(i)包含SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-L1，(ii)包含SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-L2，和(c)包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，本發明提供這樣的抗體，其包含(a)含有SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H1；(b)含有SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2；(c)含有SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3；(d)含有SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-L1；(e)含有SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-L2；和(f)含有SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在任何上述實施方案中，抗GPC3抗體是人源化的。在一個實施方案中，抗GPC3抗體包含如任何上述實施方案所述的HVR，并且還包含人受體框架，例如人免疫球蛋白框架或人共有序列框架。在某些實施方案中，該人受體框架是人VLκI共有序列(VLKI)框架和/或VH框架VH1。在某些實施方案中，該人受體框架是人VLκI共有序列(VLKI)框架和/或包含以下突變中的任一者的VH框架VH1。在另一個方面，抗GPC3抗體包含與SEQIDNO:18的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的重鏈可變結構域(VH)序列。在某些實施方案中，與SEQIDNO:18的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VH序列包含相對于參考序列的取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列的抗GPC3抗體保持結合至GPC3的能力。在某些實施方案中，在SEQIDNO:18中取代、插入和/或缺失總共1至10個氨基酸。在某些實施方案中，在SEQIDNO:18中取代、插入和/或缺失總共1至5個氨基酸。在某些實施方案中，取代、插入或缺失出現在HVR外部的區域(即，FR)。任選地，抗GPC3抗體包含SEQIDNO:18的VH序列，包括該序列的翻譯后修飾。在具體實施方案中，VH包含一個、兩個或三個HVR，所述HVR選自：(a)包含SEQIDNO:20的氨基酸序列的HVR-H1，(b)包含SEQIDNO:21的氨基酸序列的HVR-H2，和(c)包含SEQIDNO:22的氨基酸序列的HVR-H3。在另一個方面，提供了抗GPC3抗體，其中該抗體包含與SEQIDNO:19的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％、99％或100％序列同一性的輕鏈可變結構域(VL)。在某些實施方案中，與SEQIDNO:19的氨基酸序列具有至少90％、91％、92％、93％、94％、95％、96％、97％、98％或99％同一性的VL序列包含相對于參考序列的取代(例如，保守取代)、插入或缺失，但包含該序列的抗GPC3抗體保持結合至GPC3的能力。在某些實施方案中，在SEQIDNO:19中取代、插入和/或缺失總共1至10個氨基酸。在某些實施方案中，在SEQIDNO:19中取代、插入和/或缺失總共1至5個氨基酸。在某些實施方案中，取代、插入或缺失出現在HVR外部的區域(即，FR)。任選地，抗GPC3抗體包含SEQIDNO:19的VL序列，包括該序列的翻譯后修飾。在具體實施方案中，該VL包含一個、兩個或三個HVR，所述HVR選自(a)包含SEQIDNO:23的氨基酸序列的HVR-L1；(b)包含SEQIDNO:24的氨基酸序列的HVR-L2；和(c)包含SEQIDNO:25的氨基酸序列的HVR-L3。在另一個方面，提供了抗GPC3抗體，其中該抗體包含如上文提供的任何實施方案所述的VH，和如上文提供的任何實施方案所述的VL。在一個實施方案中，該抗體包含分別SEQIDNO:18和SEQIDNO:19中的VH和VL序列，包括那些序列的翻譯后修飾。在另一個實施方案中，抗GPC3抗體包括人源化形式的抗體，所述抗體包含分別SEQIDNO:18和SEQIDNO:19中的VH和VL序列。在另一個方面，本文提供了結合至與本文提供的抗GPC3抗體相同的表位的抗體。例如，在某些實施方案中，提供了這樣的抗體，其結合至與包含分別SEQIDNO:18的VH序列和SEQIDNO:19的VL序列的抗GPC3抗體相同的表位。本文提供了包含輕鏈可變結構域和重鏈可變結構域的抗體，所述輕鏈可變結構域如圖4B所述包含根據Kabat編號的HVR1-LC、HVR2-LC和HVR3-LC序列，所述重鏈可變結構域包含如圖4A所述根據Kabat編號的HVR1-HC、HVR2-HC和HVR3-HC序列。在一些實施方案中，該抗體包含含有HVR1-LC、HVR2-LC和/或HVR3-LC序列，和如圖4B所述的FR1-LC、FR2-LC、FR3-LC和/或FR4-LC序列的輕鏈可變結構域。在一些實施方案中，該抗體包含含有HVR1-HC、HVR2-HC和/或HVR3-HC序列，和如圖4A所述的FR1-HC、FR2-HC、FR3-HC和/或FR4-HC序列的重鏈可變結構域。在本發明的另一個方面，根據任何上述實施方案的抗GPC3抗體是單克隆抗體，包括人抗體。在一個實施方案中，抗GPC3抗體是抗體片段，例如Fv、Fab、Fab’、scFv、雙抗體或F(ab’)2片段。在另一個實施方案中，該抗體為基本上全長抗體，例如IgG1抗體、IgG2a抗體或本文定義的其他抗體種類或同種型。在另一個方面，根據任何上述實施方案的抗GPC3抗體可包括下文所述的任何單獨或組合特征。1.抗體親和力在某些實施方案中，本文提供的抗體具有≤1μM、≤100nM、≤50nM、≤10nM、≤5nM、≤1nM、≤0.1nM、≤0.01nM或≤0.001nM的解離常數(Kd)，并且任選地≥10-13M。(例如10-8M或更小，例如10-8M至10-13M，例如10-9M至10-13M)。在一個實施方案中，Kd通過放射性標記抗原結合分析(RIA)測定，該分析使用所關注抗體的Fab型及其抗原進行，如以下分析所述。Fab對抗原的溶液結合親和力通過如下方法測定：在存在一個滴定系列的未標記的抗原的情況下，用最小濃度的(125I)標記抗原平衡Fab，然后用抗Fab抗體涂覆的平板捕獲結合的抗原(參見例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999))。為建立分析條件，用5μg/ml于50mM碳酸鈉(pH9.6)中的捕獲抗Fab抗體(CappelLabs)涂布多孔板(ThermoScientific)過夜，隨后用2％(w/v)于PBS中的牛血清白蛋白在室溫(大約23℃)下阻斷二至五小時。在非吸附板(Nunc#269620)中，將100pM或26pM[125I]-抗原與系列稀釋所關注的Fab混合(例如，與抗VEGF抗體Fab-12的評估一致，Presta等,CancerRes.57:4593-4599(1997))。然后溫育所關注的Fab過夜；然而，該溫育可繼續更長的時間段(例如，約65小時)以確保達到平衡。然后，將混合物轉移到捕獲板，在室溫下溫育(例如，一小時)。然后移除溶液，用0.1％于PBS中的聚山梨酸酯20洗滌板八次。當板干燥時，加入150μl/孔閃爍體(MICROSCINT-20TM；Packard)，將板于TOPCOUNTTMγ計數器(Packard)上計數十分鐘。選擇得到小于或等于最大結合的20％每個Fab濃度用于競爭性結合分析。根據另一個實施方案，使用-2000或-3000(BIAcore,Inc.,Piscataway,NJ)通過表面等離振子共振分析測定Kd，該測定以約10個響應單位(RU)使用固定化抗原CM5芯片在25℃下進行。簡而言之，根據供應商的說明使用N-乙基-N’-(3-二甲基氨丙基)-碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)活化羧甲基葡聚糖生物傳感器芯片(CM5,BIACORE,Inc.)。用10mM乙酸鈉pH4.8將抗原稀釋為5μg/ml(約0.2μM)，然后以5μl/分鐘的流速注射，以實現大約10個響應單位(RU)的結合蛋白質。在抗原注射后，注射1M乙醇胺以阻斷未反應的基團。對于動力學測定，將兩倍系列稀釋的Fab(0.78nM至500nM)與0.05％聚山梨酸酯20(TWEEN-20TM)表面活性劑(PBST)在25℃下以大約25μl/min的流速一起注入PBS。締合速率(kon)和解離速率(koff)使用簡單一對一Langmuir結合模型(評估軟件3.2版)，通過同時擬合締合和解離傳感圖來計算。平衡解離常數(Kd)以koff/kon的比率計算。參見例如Chen等,J.Mol.Biol.293:865-881(1999)。如果上述表面等離振子共振分析的結合速率超過106M-1s-1，則可使用熒光淬滅技術測定結合速率，該技術在抗原濃度增加的情況下，在25℃下測定20nM于PBS(pH7.2)中的抗抗原抗體(Fab形式)的熒光發射強度的增加或減少(激發＝295nm；發射＝340nm，16nm帶通)，如在分光儀，諸如配備截流的分光光度計(AvivInstruments)或具有攪拌比色皿的8000系列SLM-AMINCOTM分光光度計(ThermoSpectronic)中所測定。2.抗體片段在某些實施方案中，本文提供的抗體是抗體片段。抗體片段包括但不限于Fab、Fab’、Fab’-SH、F(ab’)2、Fv和scFv片段，以及下文所述的其他片段。對于某些抗體片段的評述，參見Hudson等Nat.Med.9:129-134(2003)。對于scFv片段的評述，參見例如Pluckthün,ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies,第113卷,Rosenburg和Moore編,(Springer-Verlag,NewYork),第269-315頁(1994)；還可參見WO93/16185；以及美國專利No.5,571,894和5,587,458。關于包含挽救受體(salvagereceptor)結合表位殘基并且體內半衰期增加的Fab和F(ab’)2片段的討論，參見美國專利No.5,869,046。雙抗體是具有兩個抗原結合位點的抗體片段，所述抗原結合位點可以是二價的或雙特異性的。參見例如EP404,097；WO1993/01161；Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)；和Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA90:6444-6448(1993)。三抗體和四抗體也在Hudson等,Nat.Med.9:129-134(2003)中有所描述。單結構域抗體是包含抗體的重鏈可變結構域的全部或一部分或輕鏈可變結構域的全部或一部分的抗體片段。在某些實施方案中，單結構域抗體是人單結構域抗體(Domantis,Inc.,Waltham,MA；參見例如美國專利No.6,248,516B1)。抗體片段可通過各種技術，包括但不限于完整抗體的蛋白水解消化，以及通過重組宿主細胞(例如大腸桿菌(E.coli)或噬菌體)產生，如本文所述。3.嵌合和人源化抗體在某些實施方案中，本文提供的抗體是嵌合抗體。某些嵌合抗體描述在例如美國專利No.4,816,567；和Morrison等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,81:6851-6855(1984)中。在一個例子中，嵌合抗體包含非人可變區(例如，來源于小鼠、大鼠、倉鼠、兔，或非人靈長類諸如猴子的可變區)和人恒定區。在另一個例子中，嵌合抗體是“類型轉換”抗體，其中所述類型或子類型從親本抗體的類型改變。嵌合抗體包括它們的抗原結合片段。在某些實施方案中，嵌合抗體是人源化抗體。通常，使非人抗體人源化以減少對人的免疫原性，同時保持親本非人抗體的特異性和親和力。一般來講，人源化抗體包含一個或多個可變結構域，其中HVR例如CDR(或它們的部分)來源于非人抗體，FR(或它們的部分)來源于人抗體序列。人源化抗體任選地還包含人恒定區的至少一部分。在一些實施方案中，人源化抗體中的一些FR殘基被來自非人抗體(例如，HVR殘基所來源的抗體)的對應殘基取代，例如以恢復或改善抗體特異性或親和力。人源化抗體及其制備方法在例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008)中評述，并且在例如Riechmann等,Nature332:323-329(1988)；Queen等,Proc.Nat’lAcad.Sci.USA86:10029-10033(1989)；美國專利No.5,821,337、7,527,791、6,982,321和7,087,409；Kashmiri等,Methods36:25-34(2005)(描述SDR(a-CDR)移植)；Padlan,Mol.Immunol.28:489-498(1991)(描述“表面重塑”)；Dall’Acqua等,Methods36:43-60(2005)(描述“FR改組”)；以及Osbourn等,Methods36:61-68(2005)和Klimka等,Br.J.Cancer,83:252-260(2000)(描述FR改組的“定向選擇”方法)中進一步描述。可用于人源化的人框架區包括但不限于：使用“最佳擬合”方法選擇的框架區(參見例如Sims等J.Immunol.151:2296(1993))；來源于輕鏈或重鏈可變區的特定亞組的人抗體的共有序列的框架區(參見例如Carter等Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:4285(1992)；和Presta等J.Immunol.,151:2623(1993))；人成熟(體細胞突變)框架區或人種系框架區(參見例如Almagro和Fransson,Front.Biosci.13:1619-1633(2008))；以及來源于FR文庫篩選的框架區(參見例如Baca等,J.Biol.Chem.272:10678-10684(1997)和Rosok等,J.Biol.Chem.271:22611-22618(1996))。4.人抗體在某些實施方案中，本文提供的抗體是人抗體。人抗體可使用本領域已知的各種技術制備。人抗體通常如vanDijk和vandeWinkel,Curr.Opin.Pharmacol.5:368-74(2001)以及Lonberg,Curr.Opin.Immunol.20:450-459(2008)中所述。人抗體可通過將免疫原施用于轉基因動物來制備，該轉基因動物被修飾為響應于抗原激發而產生完整人抗體或具有人可變區的完整抗體。此類動物通常包含人免疫球蛋白基因座的全部或一部分，其代替了內源性免疫球蛋白基因座，或存在于染色體外或隨機整合進動物的染色體。在此類轉基因小鼠中，內源性免疫球蛋白基因座通常是失活的。對于從轉基因動物獲取人抗體的方法的評述，參見Lonberg,Nat.Biotech.23:1117-1125(2005)。還可參見例如描述XENOMOUSETM技術的美國專利No.6,075,181和6,150,584；描述技術的美國專利No.5,770,429；描述K-M技術的美國專利No.7,041,870以及描述技術的美國專利申請公開No.US2007/0061900。來自由此類動物產生的完整抗體的人可變區還可例如通過與不同的人恒定區組合來修飾。人抗體還可通過基于雜交瘤的方法制備。用于產生人單克隆抗體的人骨髓瘤和小鼠-人雜合骨髓瘤(heteromyeloma)細胞系已有所描述(參見例如KozborJ.Immunol.,133:3001(1984)；Brodeur等,MonoclonalAntibodyProductionTechniquesandApplications,第51-63頁(MarcelDekker,Inc.,NewYork,1987)；和Boerner等,J.Immunol.,147:86(1991))。通過人B細胞雜交瘤技術制備的人抗體還在Li等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,103:3557-3562(2006)中有所描述。另外的方法包括例如美國專利No.7,189,826(描述從雜交瘤細胞系產生單克隆人IgM抗體)和Ni,XiandaiMianyixue,26(4):265-268(2006)(描述人-人雜交瘤)中描述的那些方法。人雜交瘤技術(三源雜交瘤(Trioma)技術)還在Vollmers和Brandlein,HistologyandHistopathology,20(3):927-937(2005)以及Vollmers和Brandlein,MethodsandFindingsinExperimentalandClinicalPharmacology,27(3):185-91(2005)中有所描述。人抗體也可通過分離從人來源噬菌體展示文庫選擇的Fv克隆可變結構域序列制備。然后，此類可變結構域序列可與所需的人恒定結構域組合。從抗體文庫選擇人抗體的技術在下文進行描述。5.文庫來源的抗體本發明的抗體可通過針對具有所需的一種或多種活性的抗體篩選組合文庫來分離。例如，用于制備噬菌體展示文庫，以及篩選此類文庫中具有所需結合特性的抗體的多種方法是本領域已知的。此類方法在例如Hoogenboom等,MethodsinMolecularBiology178:1-37(O’Brien等編,HumanPress,Totowa,NJ,2001)中評述，并且在例如McCafferty等,Nature348:552-554；Clackson等,Nature352:624-628(1991)；Marks等,J.Mol.Biol.222:581-597(1992)；Marks和Bradbury,MethodsinMolecularBiology248:161-175(Lo編,HumanPress,Totowa,NJ,2003)；Sidhu等,J.Mol.Biol.338(2):299-310(2004)；Lee等,J.Mol.Biol.340(5):1073-1093(2004)；Fellouse,Proc.Natl.Acad.Sci.USA101(34):12467-12472(2004)；和Lee等,J.Immunol.Methods284(1-2):119-132(2004)中進一步描述。在某些噬菌體展示方法中，通過聚合酶鏈式反應(PCR)單獨克隆VH和VL基因庫，并隨機重組于噬菌體文庫中，然后可從該文庫篩選抗原結合噬菌體，如Winter等,Ann.Rev.Immunol.,12:433-455(1994)中所述。噬菌體通常展示抗體片段，所述抗體片段為單鏈Fv(scFv)片段或Fab片段。來自免疫來源的文庫提供了對免疫原的高親和力抗體，而不需要構建雜交瘤。或者，可克隆天然庫(例如，從人克隆)，從而在無需任何免疫的情況下，得到一系列非自體以及自體抗原的單獨來源抗體，如Griffiths等,EMBOJ,12:725-734(1993)中所述。最終，天然文庫也可使用PCR引物通過從干細胞克隆未重排的V基因片段合成制備，所述PCR引物包含編碼高變CDR3區并且實現體外重排的隨機序列，如Hoogenboom和Winter,J.Mol.Biol.,227:381-388(1992)中所述。描述人抗體噬菌體文庫的專利公開包括例如：美國專利No.5,750,373以及美國專利公開No.2005/0079574、2005/0119455、2005/0266000、2007/0117126、2007/0160598、2007/0237764、2007/0292936和2009/0002360。從人抗體文庫分離的抗體或抗體片段在本文中被認為是人抗體或人抗體片段。6.多特異性抗體在某些實施方案中，本文提供的抗體是多特異性抗體，例如雙特異性抗體。多特異性抗體是具有對至少兩個不同位點的結合特異性的單克隆抗體。在某些實施方案中，一種結合特異性是對GPC3，另一種是對任何其他抗原。在某些實施方案中，一種結合特異性是對GPC3，另一種是對CD3。參見例如美國專利No.5,821,337。在某些實施方案中，雙特異性抗體可結合至GPC3的兩個不同表位。雙特異性抗體也可用于將細胞毒性劑定位至表達GPC3的細胞。雙特異性抗體可以全長抗體或抗體片段制備。用于制備多特異性抗體的技術包括但不限于：具有不同特異性的兩個免疫球蛋白重鏈-輕鏈對的重組共表達(參見Milstein和Cuello,Nature305:537(1983)、WO93/08829和Traunecker等,EMBOJ.10:3655(1991))，和“結-入-穴”(knob-in-hole)工程化(參見，例如美國專利No.5,731,168)。多特異性抗體也可通過以下方法制備：工程化靜電導向效應以制備抗體Fc-異二聚體分子(WO2009/089004A1)；使兩個或更多個抗體或片段交聯(參見例如美國專利No.4,676,980和Brennan等,Science,229:81(1985))；使用亮氨酸拉鏈制備雙特異性抗體(參見例如Kostelny等,J.Immunol.,148(5):1547-1553(1992))：使用“雙抗體”技術制備雙特異性抗體片段(參見例如Hollinger等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-6448(1993))；以及使用單鏈Fv(sFv)二聚體(參見例如Gruber等,J.Immunol.,152:5368(1994))；以及制備三特異性抗體，如例如Tutt等J.Immunol.147:60(1991)中所述。本文還包括具有三個或更多個功能性抗原結合位點的工程化抗體，包括“八臂(Octopus)抗體”(參見例如US2006/0025576A1)。本文的抗體或片段還包括包含結合至GPC3以及另一個不同的抗原的抗原結合位點的“雙作用FAb”或“DAF”(參見例如US2008/0069820)。7.抗體變體在某些實施方案中，設想了本文提供的抗體的氨基酸序列變體。例如，期望改善抗體的結合親和力和/或其他生物性質。抗體的氨基酸序列變體可通過將適當的修飾引入編碼抗體的核苷酸序列，或通過肽合成制備。此類修飾包括例如抗體的氨基酸序列內殘基的缺失和/或插入和/或取代。可對缺失、插入和取代進行任何組合，以獲得最終構建體，前提條件是最終構建體具有所需特性，例如抗原結合。a)取代、插入和缺失變體在某些實施方案中，提供了具有一個或多個氨基酸取代的抗體變體。所關注的取代誘變位點包括HVR和FR。保守取代如表1的標題“優選的取代”下所示。表1的標題“示例性取代”下提供了更多的基本變化，并且如下文結合氨基酸側鏈類型進一步描述。氨基酸取代可引入所關注的抗體，并篩選該產物的所需活性，例如保持/改善的抗原結合、減少的免疫原性或改善的ADCC或CDC。表1氨基酸可根據常見側鏈的性質分組：(1)疏水性：正亮氨酸、Met、Ala、Val、Leu、Ile；(2)中性親水性：Cys、Ser、Thr、Asn、Gln；(3)酸性：Asp、Glu；(4)堿性：His、Lys、Arg；(5)影響鏈取向的殘基：Gly、Pro；(6)芳族：Trp、Tyr、Phe。非保守取代需要將這些類型之一的成員交換為另一種類型。一種類型的取代變體涉及取代親本抗體的一個或多個高變區殘基(例如人源化或人抗體)。一般來講，所得的被選擇用于進一步研究的變體相對于親本抗體具有某些生物學性質的修改(例如，改善)(例如，親和力增加、免疫原性減少)和/或基本上保持親本抗體的某些生物學性質。示例性取代變體是親和力成熟抗體，它可以例如使用基于噬菌體展示的親和力成熟技術，諸如本文所述的那些技術便利地生成。簡而言之，使一個或多個HVR殘基突變，在噬菌體上展示變體抗體，并篩選特定的生物活性(例如，結合親和力)。可在HVR中作出改變(例如，取代)，例如以改善抗體親和力。此類改變可在HVR“熱點”，即在體細胞成熟過程期間經歷高頻突變的密碼子編碼的殘基(參見例如Chowdhury,MethodsMol.Biol.207:179-196(2008))，和/或SDR(a-CDR)中作出，并測試所得的變體VH或VL的結合親和力。通過從次級文庫構建和再選擇進行親和力成熟在例如Hoogenboom等,MethodsinMolecularBiology178:1-37(O’Brien等編,HumanPress,Totowa,NJ,(2001))中有所描述。在親和力成熟的一些實施方案中，通過多種方法(例如，易錯PCR、鏈改組或寡核苷酸定向誘變)中的任何一種將多樣性引入針對成熟選擇的可變基因。然后創建次級文庫。然后篩選文庫，以鑒定具有所需親和力的任何抗體變體。引入多樣性的另一種方法涉及HVR定向方法，其中隨機化多個HVR殘基(例如，每次4-6個殘基)。可以例如使用丙氨酸掃描誘變或建模特異性地鑒定涉及抗原結合的HVR殘基。具體地講，通常靶向CDR-H3和CDR-L3。在某些實施方案中，取代、插入或缺失可出現在一個或多個HVR內，只要此類改變不會基本上降低抗體結合抗原的能力。例如，可在HVR中作出不會基本上降低結合親和力的保守改變(如，本文提供的保守取代)。此類改變可在HVR“熱點”或SDR的外部。在上文提供的變體VH和VL序列的某些實施方案中，每個HVR是未改變的，或包含不超過一個、兩個或三個氨基酸取代。用于鑒定可靶向誘變的抗體的殘基或區的有用方法稱為“丙氨酸掃描誘變”，如Cunningham和Wells(1989)Science,244:1081-1085所述。在該方法中，鑒定殘基或靶標殘基組(例如，帶電荷的殘基，諸如arg、asp、his、lys和glu)，并用中性或帶負電荷的氨基酸(例如，丙氨酸或聚丙氨酸)替換，以確定是否影響抗體與抗原的相互作用。可在顯示出對初始取代的功能敏感性的氨基酸位置引入另外的取代。作為另外一種選擇或除此之外，使用抗原-抗體復合物的晶體結構鑒定抗體和抗原之間的接觸點。此類接觸殘基和相鄰殘基可作為取代的候選物靶向或消除。可篩選變體以確定其是否包含所需的性質。氨基酸序列插入包括長度在一個殘基至包含一百個或更多個殘基的多肽的范圍內氨基和/或羧基末端融合，以及單個或多個氨基酸殘基的序列內插入。末端插入的例子包括具有N-末端甲硫胺酰基殘基的抗體。抗體分子的其他插入變體包括抗體的N或C末端融合至酶(例如ADEPT)或多肽，所述酶或多肽延長了抗體的血清半衰期。b)糖基化變體在某些實施方案中，改變本文提供的抗體以增加或減少抗體糖基化的程度。抗體中糖基化位點的添加或缺失可通過改變氨基酸序列，以形成或移除一個或多個糖基化位點便利地實現。在抗體包含Fc區的情況下，可改變其連接的糖類。哺乳動物細胞產生的天然抗體通常包含通常N-末端連接至Fc區的CH2結構域的Asn297的支鏈、雙觸角寡糖。參見例如Wright等TIBTECH15:26-32(1997)。寡糖可包括各種糖類，例如甘露糖、N-乙酰基葡萄糖胺(GlcNAc)、半乳糖和唾液酸，以及在雙觸角寡糖結構的“桿”中連接至GlcNAc的鹽藻糖。在一些實施方案中，可對本發明的抗體中的寡糖作出修飾，以形成具有某些改善性質的抗體變體。在一個實施方案中，提供了具有缺乏連接(直接或間接)至Fc區的鹽藻糖的糖類結構的抗體變體。例如，此類抗體中鹽藻糖的量可為1％至80％、1％至65％、5％至65％或20％至40％。鹽藻糖的量通過相對于連接至Asn297的全部糖結構(例如復合物、雜合物和高甘露糖結構)的總和計算Asn297處糖鏈內鹽藻糖的平均量來測定，如MALDI-TOF質譜分析所測定，如例如WO2008/077546所述。Asn297是指位于Fc區中約297位(Fc區殘基的Eu編號)的天冬酰胺殘基；然而，由于抗體的微小序列變化，Asn297也可位于297位上游或下游約±3個氨基酸，即在294和300位之間。此類鹽藻糖基化變體可具有改善的ADCC功能。參見例如美國專利公開No.US2003/0157108(Presta,L.)、US2004/0093621(KyowaHakkoKogyoCo.,Ltd)。涉及“去鹽藻糖基化”或“鹽藻糖缺陷的”抗體變體的專利公開的例子包括：US2003/0157108；WO2000/61739；WO2001/29246；US2003/0115614；US2002/0164328；US2004/0093621；US2004/0132140；US2004/0110704；US2004/0110282；US2004/0109865；WO2003/085119；WO2003/084570；WO2005/035586；WO2005/035778；WO2005/053742；WO2002/031140；Okazaki等J.Mol.Biol.336:1239-1249(2004)；Yamane-Ohnuki等Biotech.Bioeng.87:614(2004)。能夠產生去鹽藻糖基化抗體的細胞系的例子包括蛋白質鹽藻糖基化缺陷Lec13CHO細胞(Ripka等Arch.Biochem.Biophys.249:533-545(1986)；美國專利申請NoUS2003/0157108A1,Presta,L；以及WO2004/056312A1，Adams等，尤其是實例11)，以及敲除細胞系，諸如α-1,6-巖藻糖基轉移酶基因FUT8敲除CHO細胞(參見例如Yamane-Ohnuki等Biotech.Bioeng.87:614(2004)；Kanda,Y.等,Biotechnol.Bioeng.,94(4):680-688(2006)；以及WO2003/085107)。抗體變體還具有等分寡糖，例如其中連接至抗體的Fc區的雙觸角寡糖被GlcNAc等分。此類抗體變體可具有低鹽藻糖基化程度和/或改善的ADCC功能。此類抗體變體的例子在例如WO2003/011878(Jean-Mairet等)；美國專利No.6,602,684(Umana等)；和US2005/0123546(Umana等)中有所描述。還提供了寡糖中的至少一個半乳糖殘基連接至Fc區的抗體變體。此類抗體變體可具有改善的CDC功能。此類抗體變體在例如WO1997/30087(Patel等)；WO1998/58964(Raju,S.)；和WO1999/22764(Raju,S.)中有所描述。c)Fc區變體在某些實施方案中，可將一個或多個氨基酸修飾引入本文提供的抗體的Fc區，從而生成Fc區變體。Fc區變體可包含在一個或多個氨基酸位置包含氨基酸修飾(例如取代)的人Fc區序列(例如，人IgG1、IgG2、IgG3或IgG4Fc區)。在某些實施方案中，本發明設想了具有一些但非全部效應功能的抗體變體，這些效應功能使該抗體成為某些應用的期望候選物，在這些應用中體內抗體的半衰期是重要的，但某些效應功能(諸如補體和ADCC)是不必要的或有毒的。可進行體外和/或體內細胞毒性分析，以確認CDC和/或ADCC活性減少/耗盡。例如，可進行Fc受體(FcR)結合分析，以確認抗體缺乏FcγR結合能力(從而可能缺乏ADCC活性)，但保持FcRn結合能力。介導ADCC的原代細胞即NK細胞表達Fc僅(RIII，而單核細胞表達Fc(RI、Fc(RII和Fc(RIII。造血細胞上的FcR表達匯總于Ravetch和Kinet,Annu.Rev.Immunol.9:457-492(1991)第464頁上的表3。評估所關注的分子的ADCC活性的體外分析的非限制性例子在美國專利No.5,500,362(參見例如Hellstrom,I.等Proc.Nat’lAcad.Sci.USA83:7059-7063(1986))和Hellstrom,I等,Proc.Nat’lAcad.Sci.USA82:1499-1502(1985)；5,821,337(參見Bruggemann,M.等,J.Exp.Med.166:1351-1361(1987))中有所描述。或者，可利用非放射性分析方法(參見例如，用于流式細胞術的ACTITM非放射性細胞毒性分析(CellTechnology,Inc.MountainView,CA)；和CytoTox非放射性細胞毒性分析(Promega,Madison,WI))。對于此類分析的效應細胞包括外周血單核細胞(PBMC)和自然殺傷(NK)細胞。作為另外一種選擇或除此之外，所關注的分子的ADCC活性可在體內例如動物模型中評估，諸如Clynes等Proc.Nat’lAcad.Sci.USA95:652-656(1998)中所公開。還可進行C1q結合分析，以確認抗體不能結合C1q，從而缺乏CDC活性。參見例如WO2006/029879和WO2005/100402中的C1q和C3c結合ELISA。為評估補體活化，可進行CDC分析(參見例如Gazzano-Santoro等,J.Immunol.Methods202:163(1996)；Cragg,M.S.等,Blood101:1045-1052(2003)；和Cragg,M.S.和M.J.Glennie,Blood103:2738-2743(2004))。FcRn結合和體內清除/半衰期測定也可使用本領域已知的方法進行(參見例如Petkova,S.B.等,Int’l.Immunol.18(12):1759-1769(2006))。效應功能降低的抗體包括具有一個或多個Fc區殘基238、265、269、270、297、327和329的取代的那些抗體(美國專利No.6,737,056)。此類Fc突變體包括具有在氨基酸位置265、269、270、297和327中的兩者或更多者處的取代的Fc突變體，包括殘基265和297取代為丙氨酸的所謂的“DANA”Fc突變體(美國專利No.7,332,581)。描述了與FcR結合改善或消除的某些抗體變體。(參見例如美國專利No.6,737,056；WO2004/056312和Shields等,J.Biol.Chem.9(2):6591-6604(2001))。在某些實施方案中，抗體變體包含具有一個或多個氨基酸取代的Fc區，該取代改善了ADCC，例如Fc區的位置298、333和/或334處(殘基的EU編號)的取代。在一些實施方案中，對Fc區作出改變，從而使C1q結合和/或補體依賴性細胞毒性(CDC)發生改變(即，改善或消除)，例如如美國專利No.6,194,551、WO99/51642和Idusogie等J.Immunol.164:4178-4184(2000)中所述。半衰期延長和與新生兒Fc受體(FcRn)結合改善的抗體，負責母體IgG至胎兒的轉移(Guyer等,J.Immunol.117:587(1976)和Kim等,J.Immunol.24:249(1994))，該抗體在US2005/0014934A1(Hinton等)中有所描述。這些抗體包含在其中具有一個或多個取代的Fc區，所述取代改善了Fc區與FcRn的結合。此類Fc變體包括在Fc區殘基：238、256、265、272、286、303、305、307、311、312、317、340、356、360、362、376、378、380、382、413、424或434中的一者或多者處具有取代的那些變體，例如Fc區殘基434的取代(美國專利No.7,371,826)。還可參見Duncan&Winter,Nature322:738-40(1988)；美國專利No.5,648,260；美國專利No.5,624,821；和WO94/29351關于Fc區變體的其他例子。d)半胱氨酸工程化抗體變體在某些實施方案中，期望形成半胱氨酸工程化抗體，例如“thioMAb”，其中抗體的一個或多個殘基被半胱氨酸殘基取代。在特定實施方案中，取代的殘基出現在抗體的可及位點。通過用半胱氨酸取代這些殘基，從而將反應性硫醇基團定位于抗體的可及位點，并且該活性硫醇基團可用于將抗體偶聯到其他部分，諸如藥物部分或接頭-藥物部分，以形成免疫偶聯物，如本文進一步描述。在某些實施方案中，以下殘基中的任一者或多者可被半胱氨酸取代：輕鏈的V205(Kabat編號)；重鏈的A118(EU編號)；和重鏈Fc區的S400(EU編號)。半胱氨酸工程化抗體可以如例如美國專利No.7,521,541所述生成。e)抗體衍生物在某些實施方案中，本文提供的抗體可進一步修飾為包含本領域已知的且易得的另外非蛋白質部分。適用于衍生化抗體的部分包括但不限于水溶性聚合物。水溶性聚合物非限制性例子包括但不限于：聚乙二醇(PEG)、乙二醇/丙二醇的共聚物、羧甲基纖維素、葡聚糖、聚乙烯醇、聚乙烯吡咯烷酮、聚-1,3-二氧戊環、聚-1,3,6-三噁烷、乙烯/馬來酸酐共聚物、聚氨基酸(均聚物或無規共聚物)以及葡聚糖或聚(n-乙烯基吡咯烷酮)聚乙二醇、丙二醇均聚物、聚環氧丙烷/環氧乙烷共聚物、聚氧乙烯多元醇(例如，甘油)、聚乙烯醇以及它們的混合物。聚乙二醇丙醛由于在水中的穩定性，在制備中可具有優勢。聚合物可具有任何分子量，并且可以是支鏈的或非支鏈的。連接至抗體的聚合物數量可變化，如果連接超過一個聚合物，則該聚合物可以是相同的或不同的分子。一般來講，用于衍生化的聚合物的數量和/或類型可根據考慮因素確定，所述考慮因素包括但不限于待改善的抗體的特定性質或功能，無論該抗體衍生物是否用于在確定條件下的治療等。在另一個實施方案中，提供了可通過暴露至輻射而選擇性加熱的抗體和非蛋白質部分的偶聯物。在一個實施方案中，該非蛋白質部分是碳納米管(Kam等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA102:11600-11605(2005))。輻射可具有任何波長，并且包括但不限于不傷害正常細胞，但加熱非蛋白質部分達到殺死鄰近抗體-非蛋白質部分的細胞的溫度的波長。B.重組方法和組合物抗體可使用例如美國專利No.4,816,567所述的重組方法和組合物制備。在一個實施方案中，提供了編碼本文所述的抗GPC3抗體的分離的核酸。此類核酸可編碼組成抗體的VL的氨基酸序列和/或組成抗體的VH的氨基酸序列(例如，抗體的輕鏈和/或重鏈)。在另外的實施方案中，提供了包含此類核酸的一個或多個載體(例如，表達載體)。在另外的實施方案中，提供了包含此類核酸的宿主細胞。在一個此類實施方案中，宿主細胞包含(例如，轉化有)：(1)包含如下核酸的載體，所述核酸編碼組成抗體的VL的氨基酸序列和組成抗體的VH的氨基酸序列，或(2)包含如下核酸的第一載體，所述核酸編碼組成抗體的VL的氨基酸序列；以及包含如下核酸的第二載體，所述核酸編碼組成抗體的VH的氨基酸序列。在一個實施方案中，宿主細胞是真核細胞，例如中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或淋巴樣細胞(例如，Y0、NS0、Sp20細胞)。在一個實施方案中，提供了抗GPC3抗體的制備方法，其中該方法包括在適于抗體表達的條件下，培養包含編碼上述抗體的核酸的宿主細胞，以及任選地從宿主細胞(或宿主細胞培養基)回收抗體。對于抗GPC3抗體的重組制備，分離編碼抗體，例如上述抗體的核酸，并插入一個或多個載體，用于在宿主細胞中進行進一步克隆和/或表達。此類核酸可易于使用常規工序分離和測序(例如，通過使用能夠特異性結合編碼抗體的重鏈和輕鏈的基因的寡核苷酸探針)。適用于抗體編碼載體的克隆或表達的宿主細胞包括本文所述的原核或真核細胞。例如，抗體可在細菌中制備，特別是不需要糖基化和Fc效應功能時。對于抗體片段和多肽在細菌中的表達，參見例如美國專利No.5,648,237、5,789,199和5,840,523。(還可參見Charlton,MethodsinMolecularBiology,第248卷(B.K.C.Lo,編,HumanaPress,Totowa,NJ,2003),第245-254頁，描述在大腸桿菌中表達抗體片段)在表達后，該抗體可從細菌細胞漿料(paste)中以可溶性級分分離，并且可進一步純化。除原核生物之外，真核微生物諸如絲狀真菌或酵母也是抗體編碼載體的合適克隆或表達宿主，包括糖基化途徑被“人源化”，導致產生部分或完全人糖基化型式的抗體的真菌和酵母菌株。參見Gerngross,Nat.Biotech.22:1409-1414(2004)和Li等,Nat.Biotech.24:210-215(2006)。對于糖基化抗體表達的合適宿主細胞還來源于多細胞生物體(無脊椎動物和脊椎動物)。無脊椎動物細胞的例子包括植物和昆蟲細胞。已鑒定多種棒狀病毒菌株，它們可與昆蟲細胞一起使用，特別是用于草地貪夜蛾(Spodopterafrugiperda)細胞的轉染。植物細胞培養物也可用作宿主。參見例如美國專利No.5,959,177、6,040,498、6,420,548、7,125,978和6,417,429(描述用于在轉基因植物中產生抗體的PLANTIBODIESTM技術)。脊椎動物細胞也可用作宿主。例如，可使用適于在懸浮液中生長的哺乳動物細胞系。可用的哺乳動物宿主細胞系的其他例子是由SV40(COS-7)轉化的猴腎CV1細胞系；人胚腎細胞系(例如Graham等,J.GenVirol.36:59(1977)描述的293或293細胞)；幼倉鼠腎細胞(BHK)；小鼠塞爾托利氏細胞(例如Mather,Biol.Reprod.23:243-251(1980)描述的TM4細胞)；猴腎細胞(CV1)；非洲綠猴腎細胞(VERO-76)；人宮頸癌細胞(HELA)；犬腎細胞(MDCK)；buffalo大鼠肝細胞(BRL3A)；人肺細胞(W138)；人肝細胞(HepG2)；小鼠乳腺瘤(MMT060562)；TRI細胞，如例如Mather等,AnnalsN.Y.Acad.Sci.383:44-68(1982)所述；MRC5細胞；以及FS4細胞。其他可用的哺乳動物宿主細胞系包括中國倉鼠卵巢(CHO)細胞，包括DHFR-CHO細胞(Urlaub等,Proc.Natl.Acad.Sci.USA77:4216(1980))；和骨髓瘤細胞系諸如Y0、NS0和Sp2/0。對于適用于抗體測試的某些哺乳動物宿主細胞系的評述，參見例如Yazaki和Wu,MethodsinMolecularBiology,第248卷(B.K.C.Lo編,HumanaPress,Totowa,NJ),第255-268頁(2003)。C.分析可通過本領域已知的各種分析鑒定、篩選或表征本文提供的抗GPC3抗體的物理/化學性質和/或生物活性。在一個方面，例如通過已知的方法諸如ELISA、FACS或Western印跡測試本發明的抗體的抗原結合活性。在另一個方面，可使用競爭分析鑒定與本文所述的任何抗體競爭結合至GPC3的抗體。在某些實施方案中，此類競爭抗體結合至與本文所述的抗體所結合相同的表位(例如，線性或構象性表位)。Morris(1996)“EpitopeMappingProtocols,”MethodsinMolecularBiology第66卷(HumanaPress,Totowa,NJ)提供了繪制抗體結合的表位的詳細示例性方法。在示例性競爭分析中，使固定化GPC3在包含結合至GPC3的第一標記抗體(例如，本文所述的任何抗體)和第二未標記抗體的溶液中溫育，測試第二未標記抗體與第一抗體競爭結合至GPC3的能力。第二抗體可存在于雜交瘤上清液中。作為對照，固定化GPC3在包含第一標記抗體，但不包含第二未標記抗體的溶液中溫育。在允許第一抗體結合GPC3的條件下溫育后，移除過量的未結合抗體，并測定與固定化GPC3締合的標記的量。如果測試樣本中與固定化GPC3締合的標記的量相對于對照樣本基本上減少，則表明第二抗體與第一抗體競爭結合至GPC3。參見Harlow和Lane(1988)Antibodies:ALaboratoryManual第14章(ColdSpringHarborLaboratory,ColdSpringHarbor,NY)。D.免疫偶聯物本發明還提供包含本文的偶聯至一種或多種細胞毒性劑的抗GPC3抗體的免疫偶聯物，所述細胞毒性劑諸如化療劑或藥物、生長抑制劑、毒素(例如，細菌、真菌、植物或動物來源的蛋白質毒素、酶活性毒素或其片段)或放射性同位素(即，放射性偶聯物)。免疫偶聯物允許藥物部分靶向遞送至腫瘤，并且在一些實施方案中積聚在細胞內，其中未偶聯藥物的全身施用可產生正常細胞不可接受的毒性水平(PolakisP.(2005)CurrentOpinioninPharmacology5:382-387)。抗體-藥物偶聯物(ADC)是靶向化療分子，其通過使有效的細胞毒性藥物靶向抗原表達腫瘤細胞來組合抗體和細胞毒性藥物二者的性質(Teicher,B.A.(2009)CurrentCancerDrugTargets9:982-1004)，從而通過功效最大化和脫靶毒性最小化來提高治療指數(Carter,P.J.和SenterP.D.(2008)TheCancerJour.14(3):154-169；Chari,R.V.(2008)Acc.Chem.Res.41:98-107)。本發明的ADC化合物包括具有抗癌活性的那些化合物。在一些實施方案中，該ADC化合物包括偶聯即共價連接至藥物部分的抗體。在一些實施方案中，該抗體通過接頭共價連接至藥物部分。本發明的抗體-藥物偶聯物(ADC)將有效劑量的藥物選擇性遞送至腫瘤組織，據此在提高治療指數(“治療窗”)的同時，可實現更大的選擇性，即更低的有效劑量。抗體-藥物偶聯物(ADC)的藥物部分(D)可包括具有細胞毒性或細胞抑制效應的任何化合物、部分或基團。藥物部分可通過各種機制賦予細胞毒性和細胞抑制效應，所述機制包括但不限于微管蛋白結合、DNA結合或嵌入以及RNA聚合酶、蛋白質合成和/或拓撲異構酶的抑制。示例性藥物部分包括但不限于類美登素、卡里奇霉素、吡咯并苯二氮雜卓(PBD)、奈莫柔比星及其衍生物、PNU-159682、蒽環、倍癌霉素、長春花生物堿、紫杉烷、單端孢霉烯、CC1065、喜樹堿、依利萘法德及其具有細胞毒性活性的立體異構體、同電子排列體、類似物和衍生物。此類免疫偶聯物的非限制性例子在下文進一步詳細討論。1.示例性抗體-藥物偶聯物抗體-藥物偶聯物(ADC)化合物的示例性實施方案包含靶向腫瘤細胞的抗體(Ab)、藥物部分(D)以及連接Ab和D的接頭部分(L)。在一些實施方案中，抗體通過一個或多個氨基酸殘基，諸如賴氨酸和/或半胱氨酸連接至接頭部分(L)。示例性ADC具有式I：Ab-(L-D)pI其中p為1至約20。在一些實施方案中，可偶聯至抗體的藥物部分的數量受到游離半胱氨酸殘基的數量的限制。在一些實施方案中，通過本文所述的方法將游離半胱氨酸殘基引入抗體氨基酸序列。式I的示例性ADC包括但不限于具有1、2、3或4個工程化半胱氨酸氨基酸的抗體(Lyon,R.等(2012)MethodsinEnzym.502:123-138)。在一些實施方案中，一個或多個游離半胱氨酸殘基已存在于抗體中，無需進行工程化，在這種情況下，現有的游離半胱氨酸殘基可用于將抗體偶聯至藥物。在一些實施方案中，將抗體暴露于還原條件，然后偶聯抗體，以生成一個或多個游離半胱氨酸殘基。a)示例性接頭“接頭”(L)是可用于將一個或多個藥物部分(D)連接至抗體(Ab)，形成式I的抗體-藥物偶聯物(ADC)的雙官能或多官能部分。在一些實施方案中，抗體-藥物偶聯物(ADC)可使用具有反應性官能團的接頭制備，所述反應性官能團用于共價連接至藥物和抗體。例如，在一些實施方案中，抗體(Ab)的半胱氨酸硫醇可與接頭的反應性官能團或藥物-接頭中間體形成化學鍵，以制備ADC。在一個方面，接頭具有的官能團能夠與抗體上存在的游離半胱氨酸反應形成共價鍵。非限制示例性的此類反應性官能團包括馬來酰亞胺、鹵代乙酰胺、α-鹵代乙酰基、活性酯諸如琥珀酰亞胺酯、4-硝基苯酯、五氟苯酯、四氟苯酯、酸酐、酰氯、磺酰氯、異氰酸酯和異硫氰酸酯。參見例如，Klussman等(2004),BioconjugateChemistry15(4):765-773的第766頁偶聯方法和本文的實例。在一些實施方案中，接頭具有能夠與抗體上存在的親電基團反應的官能團。示例性的此類親電基團包括但不限于醛和酮羰基基團。在一些實施方案中，接頭的反應性官能團的雜原子可與抗體上的親電基團反應，并且形成連接至抗體單元的共價鍵。非限制示例性的此類反應性官能團包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、縮氨基硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。接頭可包含一種或多種接頭組分。示例性接頭組分包括6-馬來酰亞胺己酰基(“MC”)、馬來酰亞胺丙酰基(“MP”)、對氨基芐氧羰基(“PAB”)、N-琥珀酰亞胺4-(2-吡啶基硫)戊酸酯(“SPP”)和4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸酯(“MCC”)。各種接頭組分是本領域已知的，它們中的一些在下文有所描述。接頭可以是有助于藥物釋放的“可裂解接頭”。非限制示例性可裂解接頭包括酸不穩定接頭(例如，包含腙)、蛋白酶敏感(例如，肽酶敏感)接頭、光不穩定接頭或含二硫鍵的接頭(Chari等,CancerResearch52:127-131(1992)；US5208020)。在一些實施方案中，接頭組分包括將抗體連接至另一個接頭組分或藥物部分的“拉伸單元(stretcherunit)”。非限制示例性拉伸單元如下所示(其中波浪線表示共價連接至抗體、藥物或另外的接頭組分的位點)：在一些實施方案中，接頭組分包括直接或通過拉伸單元和/或氨基酸單元將抗體連接至藥物部分的“間隔基”單元。間隔基單元可以是“自我犧牲的(self-immolative)”或“非自我犧牲的(non-self-immolative)”。“非自我犧牲的”間隔基單元是其中ADC裂解時部分或全部間隔基單元保持結合至藥物部分的間隔基單元。非自我犧牲的間隔基單元的例子包括但不限于甘氨酸間隔基單元和甘氨酸-甘氨酸間隔基單元。在一些實施方案中，通過腫瘤細胞相關蛋白酶對包含甘氨酸-甘氨酸間隔基單元的ADC進行酶裂解，使得從ADC的其余部分釋放甘氨酸-甘氨酸-藥物部分。在一些此類實施方案中，甘氨酸-甘氨酸-藥物部分在腫瘤細胞中經受水解步驟，從而從藥物部分裂解下甘氨酸-甘氨酸間隔基單元。“自我犧牲的”間隔基單元允許釋放藥物部分。在某些實施方案中，接頭的間隔基單元包括對氨基芐基單元。在一些此類實施方案中，對氨基芐醇通過酰胺鍵連接至氨基酸單元，并且在芐醇和藥物之間形成氨基甲酸酯、氨基甲酸甲酯或碳酸酯(Hamann等(2005)ExpertOpin.Ther.Patents(2005)15:1087-1103)。在一些實施方案中，該間隔基單元是對氨基芐氧羰基(PAB)。在一些實施方案中，包含自我犧牲的接頭的ADC具有以下結構：其中Q為-C1-C8烷基、-O-(C1-C8烷基)、鹵代、硝基或氰基；m為在0至4范圍內的整數；并且p在1至約20的范圍內。在一些實施方案中，p在1至10、1至7、1至5或1至4的范圍內。自我犧牲的間隔基的其他例子包括但不限于電子類似于PAB基團的芳族化合物，諸如2-氨基咪唑-5-甲醇衍生物(美國專利No.7,375,078；Hay等(1999)Bioorg.Med.Chem.Lett.9:2237)和鄰或對氨基芐基乙縮醛。在一些實施方案中，可使用在酰胺鍵水解時發生環化的間隔基，諸如取代的和未取代的4-氨基丁酸酰胺(Rodrigues等(1995)ChemistryBiology2:223)、適當取代的雙環[2.2.1]和雙環[2.2.2]環系(Storm等(1972)J.Amer.Chem.Soc.94:5815)和2-氨基苯基丙酸酰胺(Amsberry等(1990)J.Org.Chem.55:5867)。藥物與甘氨酸殘基的α-碳連接是可用于ADC的自我犧牲的間隔基的另一個例子(Kingsbury等(1984)J.Med.Chem.27:1447)。在一些實施方案中，接頭L可以是樹枝狀型接頭，用于通過支化、多官能接頭部分將超過一個藥物部分共價連接至抗體(Sun等(2002)Bioorganic&MedicinalChemistryLetters12:2213-2215；Sun等(2003)Bioorganic&MedicinalChemistry11:1761-1768)。樹枝狀接頭可提高藥物與抗體的摩爾比，即載量，這與ADC的效能相關。因此，在抗體僅具有一個反應性半胱氨酸硫醇基團的情況下，大量藥物部分可通過樹枝狀接頭連接。在一些實施方案中，接頭被調節溶解度和/或反應性的基團取代。作為非限制性例子，帶電荷的取代基諸如磺酸根(-SO3-)或銨可提高接頭試劑的水溶解度，并且促進接頭試劑與抗體和/或藥物部分的偶聯反應，或促進Ab-L(抗體-接頭中間體)與D，或D-L(藥物-接頭中間體)與Ab的偶聯反應，這取決于用于制備ADC的合成路線。在一些實施方案中，接頭的一部分連接至抗體，并且接頭的一部分連接至藥物，然后Ab-(接頭部分)a連接至藥物-(接頭部分)b，形成式I的ADC。在一些此類實施方案中，抗體包含超過一個(接頭部分)a取代基，使得超過一個藥物連接至式I的ADC中的抗體。本發明的化合物明確地設想了，但不限于使用以下接頭試劑制備的ADC：雙-馬來酰亞胺-三氧乙二醇(BMPEO)、N-(β-馬來酰亞胺丙氧基)-N-羥基琥珀酰亞胺酯(BMPS)、N-(ε-馬來酰亞胺己酰氧基)琥珀酰亞胺酯(EMCS)、N-[γ-馬來酰亞胺丁酰氧基]琥珀酰亞胺酯(GMBS)、1,6-己烷-雙-乙烯基砜(HBVS)、琥珀酰亞胺基4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧基-(6-胺基己酸酯)(LC-SMCC)、間馬來酰亞胺苯甲酰基-N-羥基琥珀酰亞胺酯(MBS)、4-(4-N-馬來酰亞胺苯基)丁酰肼(MPBH)、3-(溴乙酰胺基)丙酸琥珀酰亞胺酯(SBAP)、碘乙酸琥珀酰亞胺酯(SIA)、(4-碘乙酰基)氨基苯甲酸琥珀酰亞胺酯(SIAB)、N-琥珀酰亞胺基-3-(2-吡啶基二硫代)丙酸酯(SPDP)、N-琥珀酰亞胺基-4-(2-吡啶基硫代)戊酸酯(SPP)、4-(N-馬來酰亞胺甲基)環己烷-1-羧酸琥珀酰亞胺酯(SMCC)、4-(對馬來酰亞胺苯基)丁酸琥珀酰亞胺酯(SMPB)、琥珀酰亞胺基6-[(β-馬來酰亞胺丙酰胺基)己酸酯](SMPH)、亞氨基硫烷(IT)、磺基-EMCS、磺基-GMBS、磺基-KMUS、磺基-MBS、磺基-SIAB、磺基-SMCC和磺基-SMPB以及(4-乙烯基砜)苯甲酸琥珀酰亞胺酯(SVSB)，并且包括雙-馬來酰亞胺試劑：二硫代雙馬來酰亞胺乙烷(DTME)、1,4-雙馬來酰亞胺丁烷(BMB)、1,4-雙馬來酰亞胺基-2,3-二羥基丁烷(BMDB)、雙馬來酰亞胺己烷(BMH)、雙馬來酰亞胺乙烷(BMOE)、BM(PEG)2(如下所示)和BM(PEG)3(如下所示)；亞氨基酯的雙官能衍生物(諸如二亞胺代己二酸二甲酯鹽酸鹽)、活性酯(諸如辛二酸二琥珀酰亞胺酯)、醛(諸如戊二醛)、雙-疊氮化合物(諸如雙(對疊氮苯甲酰基)己二胺)、雙-重氮衍生物(諸如雙-(對重氮苯甲酰基)-乙二胺)、二異氰酸酯(諸如甲苯2,6-二異氰酸酯)和雙-活性氟化合物(諸如1,5-二氟-2,4-二硝基苯)。在一些實施方案中，雙馬來酰亞胺試劑允許抗體中半胱氨酸的硫醇基團連接至含硫醇藥物部分、接頭或接頭-藥物中間體。與硫醇基團反應的其他官能團包括但不限于碘乙酰胺、溴乙酰胺、乙烯基吡啶、二硫化物、吡啶基二硫化物、異氰酸酯和異硫氰酸酯。某些可用的接頭試劑可從各種商業來源獲得，諸如PierceBiotechnology,Inc.(Rockford,IL)、MolecularBiosciencesInc.(Boulder,CO)，或根據本領域描述的工序合成；例如Dubowchik等(1997)TetrahedronLetters,38:5257-60；Walker,M.A.(1995)J.Org.Chem.60:5352-5355；Frisch等(1996)BioconjugateChem.7:180-186；US6214345；WO02/088172；US2003130189；US2003096743；WO03/026577；WO03/043583；和WO04/032828。碳-14-標記的1-異硫氰芐基-3-甲基二乙烯三胺戊乙酸(MX-DTPA)是放射性核苷酸與抗體偶聯的示例性螯合劑。參見例如WO94/11026。b)示例性藥物部分(1)美登素和類美登素在一些實施方案中，免疫偶聯物包含偶聯至一個或多個類美登素分子的抗體。類美登素是美登素的衍生物，是有絲分裂抑制劑，通過抑制微管蛋白聚合發揮作用。美登素首先從非洲東部灌木齒葉美登木(Maytenusserrata)分離(美國專利No.3896111)。隨后發現，某些微生物也可產生類美登素，諸如美登醇和C-3美登醇酯(美國專利No.4,151,042)。合成類美登素例如在美國專利No.4,137,230、4,248,870、4,256,746、4,260,608、4,265,814、4,294,757、4,307,016、4,308,268、4,308,269、4,309,428、4,313,946、4,315,929、4,317,821、4,322,348、4,331,598、4,361,650、4,364,866、4,424,219、4,450,254、4,362,663和4,371,533中有所公開。在抗體-藥物偶聯物中，類美登素藥物部分是有吸引力的藥物部分，因為它們：(i)相對容易通過發酵或發酵產物的化學修飾或衍生化制備，(ii)適合利用官能團衍生化，所述官能團適用于通過非二硫鍵接頭偶聯至抗體，(iii)在血漿中穩定，并且(iv)對多種腫瘤細胞系有效。適于用作類美登素藥物部分的某些類美登素是本領域已知的，并且可根據已知的方法從天然來源分離，或使用基因工程技術制備(參見例如Yu等(2002)PNAS99:7968-7973)。類美登素也可根據已知的方法合成制備。示例性類美登素藥物部分包括但不限于具有修飾的芳環的那些類美登素，所述修飾的芳環諸如：C-19-脫氯(美國專利No.4256746)(例如，通過安絲菌素P2的氫化鋁鋰還原制備)；C-20-羥基(或C-20-脫甲基)+/-C-19-脫氯(美國專利No.4361650和4307016)(例如，通過使用鏈霉菌(Streptomyces)或放線菌(Actinomyces)脫甲基化或使用LAH脫氯制備)；和C-20-脫甲氧基、C-20-酰氧基(-OCOR)、+/-脫氯(美國專利No.4,294,757)(例如，通過使用酰基氯酰化制備)以及在芳環的其他位置具有修飾的那些。示例性類美登素藥物部分還包括具有修飾的那些類美登素，所述修飾諸如：C-9-SH(美國專利No.4424219)(例如，通過美登醇與H2S或P2S5的反應制備)；C-14-烷氧基甲基(脫甲氧基/CH2OR)(US4331598)；C-14-羥甲基或酰氧基甲基(CH2OH或CH2OAc)(美國專利No.4450254)(例如，從諾卡氏菌(Nocardia)制備)；C-15-羥基/酰氧基(US4364866)(例如，通過鏈霉菌轉化美登醇制備)；C-15-甲氧基(美國專利No.4313946和4315929)(例如，從滑桃樹(Trewianudlflora)分離)；C-18-N-脫甲基(美國專利No.4362663和4322348)(例如，通過鏈霉菌使美登醇脫甲基化制備)；和4,5-脫氧(US4371533)(例如，通過美登醇的三氯化鈦/LAH還原制備)。類美登素化合物上的多個位置可用作鍵合位置。例如，酯鍵可使用常規偶聯技術通過與羥基基團反應來形成。在一些實施方案中，該反應可發生在具有羥基基團的C-3位置、被羥甲基修飾的C-14位置、被羥基基團修飾的C-15位置以及具有羥基基團的C-20位置。在一些實施方案中，鍵合在美登醇或美登醇類似物的C-3位置形成。類美登素藥物部分包含具有以下結構的那些類美登素：其中波浪線表示類美登素藥物部分的硫原子與ADC的接頭的共價連接。每個R可獨立地為H或C1-C6烷基。將酰胺基團連接至硫原子的亞烷基鏈可以是甲基、乙基或丙基，即m為1、2或3(US633410；US5208020；Chari等(1992)CancerRes.52:127-131；Liu等(1996)Proc.Natl.Acad.SciUSA93:8618-8623)。設想了本發明的ADC的類美登素藥物部分的所有立體異構體，即手性碳的R和S構型的任何組合(US7276497；US6913748；US6441163；US633410(RE39151)；US5208020；Widdison等(2006)J.Med.Chem.49:4392-4408，這些文獻全文以引用方式并入)。在一些實施方案中，類美登素藥物部分具有以下立體化學結構：類美登素藥物部分的示例性實施方案包括但不限于具有以下結構的DM1、DM3和DM4：其中波浪線表示藥物的硫原子與抗體-藥物偶聯物的接頭(L)的共價連接。其他示例性類美登素抗體-藥物偶聯物具有以下結構和縮寫(其中Ab為抗體，p為1至約20。在一些實施方案中，p為1至10，p為1至7，p為1至5或p為1至4)：其中DM1通過BMPEO接頭連接至抗體的硫醇基團的示例性抗體-藥物偶聯物具有以下結構和縮寫：其中Ab為抗體；n為0、1或2；并且p為1至約20。在一些實施方案中，p為1至10，p為1至7，p為1至5或p為1至4。包含類美登素的免疫偶聯物、其制備方法及其治療用途在例如美國專利No.5,208,020和5,416,064、US2005/0276812A1和歐洲專利EP0425235B1中有所公開，這些專利的公開內容據此明確地以引用方式并入。還可參見Liu等Proc.Natl.Acad.Sci.USA93:8618-8623(1996)；和Chari等CancerResearch52:127-131(1992)。在一些實施方案中，抗體-類美登素偶聯物可通過將抗體化學連接至類美登素分子而無需顯著消除抗體或類美登素分子的生物活性來制備。參見例如美國專利No.5,208,020(該專利的公開內容據此明確地以引用方式并入)。在一些實施方案中，每個抗體分子具有平均3-4個偶聯的類美登素分子的ADC顯示出增加靶細胞的細胞毒性，但不會對抗體的功能或溶解度造成負面影響的功效。在一些情況下，預期即使一分子毒素/抗體相對于使用裸抗體也可增加細胞毒性。用于制備抗體-類美登素偶聯物的示例性連接基團包括例如本文所述的那些連接基團，以及美國專利No.5208020；歐洲專利EP0425235B1；Chari等CancerResearch52:127-131(1992)；US2005/0276812A1；和US2005/016993A1公開的那些連接基團，這些專利的公開內容據此明確地以引用方式并入。(2)卡里奇霉素在一些實施方案中，免疫偶聯物包含偶聯至一個或多個卡里奇霉素分子的抗體。亞皮摩爾濃度的卡里奇霉素家族抗生素及其類似物能夠使雙鏈DNA斷裂(Hinman等,(1993)CancerResearch53:3336-3342；Lode等,(1998)CancerResearch58:2925-2928)。卡里奇霉素具有細胞內作用位點，但在某些情況下，不容易跨過原生質膜。因此，這些試劑通過抗體介導的內化作用攝入細胞，在一些實施方案中，可大大增加其細胞毒性效應。使用卡里奇霉素藥物部分制備抗體-藥物偶聯物的非限制示例性方法在例如US5712374、US5714586、US5739116和US5767285中有所描述。(4)吡咯并苯二氮雜卓在一些實施方案中，ADC包含吡咯并苯二氮雜卓(PBD)。在一些實施方案中，PDB二聚體識別并結合特定的DNA序列。天然產物氨茴霉素PBD在1965年首次報道(Leimgruber等,(1965)J.Am.Chem.Soc.,87:5793-5795；Leimgruber等,(1965)J.Am.Chem.Soc.,87:5791-5793)。從那時起，報道了多種天然存在的PBD和類似物(Thurston等,(1994)Chem.Rev.1994,433-465)，包括三環PBD支架的二聚體(US6884799；US7049311；US7067511；US7265105；US7511032；US7528126；US7557099)。不打算受任何具體理論的束縛，據信二聚體結構賦予對于等螺旋性的適當三維形狀，具有B型DNA的小溝，導致在結合位點形成滑動配合(snugfit)(Kohn,InAntibioticsIII.Springer-Verlag,NewYork,第3-11頁(1975)；Hurley和Needham-VanDevanter,(1986)Acc.Chem.Res.,19:230-237)。具有C2芳基取代基的二聚體PBD化合物已顯示出可用作細胞毒性劑(Hartley等(2010)CancerRes.70(17):6849-6858；Antonow(2010)J.Med.Chem.53(7):2927-2941；Howard等(2009)BioorganicandMed.Chem.Letters19(22):6463-6466)。在一些實施方案中，通過用氮保護基團在N10位置保護PBD化合物，可將PBD化合物用作前藥，所述氮保護基團在體內是可移除的(WO00/12507、WO2005/023814)。PBD二聚體已偶聯至抗體，并且所得的ADC顯示出具有抗癌性質(US2010/0203007)。PBD二聚體上的非限制示例性鍵合位點包括五元吡咯并環，PBD單元之間的固定件以及N10-C11亞胺基團(WO2009/016516、US2009/304710、US2010/047257、US2009/036431、US2011/0256157、WO2011/130598)。ADC的非限制示例性PBD二聚體組分具有式A：及其鹽和溶劑化物，其中：波浪線表示與接頭的共價連接位點；虛線表示C1和C2或C2和C3之間任選存在的雙鍵；R2獨立地選自H、OH、＝O、＝CH2、CN、R、OR、＝CH-RD、＝C(RD)2、O-SO2-R、CO2R和COR，并且任選地還選自鹵代或二鹵代，其中RD獨立地選自R、CO2R、COR、CHO、CO2H和鹵代；R6和R9獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和鹵代；R7獨立地選自H、R、OH、OR、SH、SR、NH2、NHR、NRR’、NO2、Me3Sn和鹵代；Q獨立地選自O、S和NH；R11為H或R或，其中Q為O、SO3M，其中M為金屬陽離子；R和R’各自獨立地選自任選地取代的C1-8烷基、C1-12烷基、C3-8雜環基、C3-20雜環和C5-20芳基基團，并且任選地就基團NRR’而言，R和R’連同與其連接的氮原子一起形成任選地取代的4-、5-、6-或7-元雜環；R12、R16、R19和R17分別如R2、R6、R9和R7所定義；R″是C3-12亞烷基基團，該鏈被一個或多個雜原子(例如O、S、N(H)、NMe)和/或芳環(例如，苯或吡啶)打斷，所述環任選地被取代；并且X和X’獨立地選自O、S和N(H)。在一些實施方案中，R和R’各自獨立地選自任選地取代的C1-12烷基、C3-20雜環和C5-20芳基基團，并且任選地與基團NRR’相關，R和R’連同與其連接的氮原子一起形成任選地取代的4-、5-、6-或7-元雜環。在一些實施方案中，R9和R19為H。在一些實施方案中，R6和R16為H。在一些實施方案中，R7和R17均為OR7A，其中R7A為任選地取代的C1-4烷基。在一些實施方案中，R7A為Me。在一些實施方案中，R7A為Ch2Ph，其中Ph為苯基基團。在一些實施方案中，X為O。在一些實施方案中，R11為H。在一些實施方案中，在每個單體單元中在C2和C3之間存在雙鍵。在一些實施方案中，R2和R12獨立地選自H和R。在一些實施方案中，R2和R12獨立地為R。在一些實施方案中，R2和R12獨立地為任選取代的C5-20芳基或C5-7芳基或C8-10芳基。在一些實施方案中，R2和R12獨立地為任選取代的苯基、噻吩基、萘基、吡啶基、喹啉基或異喹啉基。在一些實施方案中，R2和R12獨立地選自＝O、＝CH2、＝CH-RD和＝C(RD)2。在一些實施方案中，R2和R12各自為＝CH2。在一些實施方案中，R2和R12各自為H。在一些實施方案中，R2和R12各自為＝O。在一些實施方案中，R2和R12各自為＝CF2。在一些實施方案中，R2和/或R12獨立地為＝C(RD)2。在一些實施方案中，R2和/或R12獨立地為＝CH-RD。在一些實施方案中，當R2和/或R12為＝CH-RD時，每個基團可獨立地具有下文所示的構型：在一些實施方案中，＝CH-RD呈構型(I)。在一些實施方案中，R″為C3亞烷基基團或C5亞烷基基團。在一些實施方案中，ADC的示例性PBD二聚體組分具有式A(I)的結構：其中n為0或1。在一些實施方案中，ADC的示例性PBD二聚體組分具有式A(II)的結構：其中n為0或1。在一些實施方案中，ADC的示例性PBD二聚體組分具有式A(III)的結構：其中RE和RE”各自獨立地選自H或RD，其中RD如上文所定義；并且其中n為0或1。在一些實施方案中，n為0。在一些實施方案中，n為1。在一些實施方案中，RE和/或RE”為H。在一些實施方案中，RE和RE”為H。在一些實施方案中，RE和/或RE”為RD，其中RD為任選地取代的C1-12烷基。在一些實施方案中，RE和/或RE”為RD，其中RD為甲基。在一些實施方案中，ADC的示例性PBD二聚體組分具有式A(IV)的結構：其中Ar1和Ar2各自獨立地為任選取代的C5-20芳基，其中Ar1和Ar2可以相同或不同；并且其中n為0或1。在一些實施方案中，ADC的示例性PBD二聚體組分具有式A(V)的結構：其中Ar1和Ar2各自獨立地為任選取代的C5-20芳基，其中Ar1和Ar2可以相同或不同；并且其中n為0或1。在一些實施方案中，Ar1和Ar2各自獨立地選自任選取代的苯基、呋喃基、苯硫基和吡啶基。在一些實施方案中，Ar1和Ar2各自獨立地為任選取代的苯基。在一些實施方案中，Ar1和Ar2各自獨立地為任選取代的噻吩-2-基和噻吩-3-基。在一些實施方案中，Ar1和Ar2各自獨立地為任選取代的喹啉基或異喹啉基。喹啉基或異喹啉基基團可通過任何可用的環位置鍵合到PBD核。例如，喹啉基可以為喹啉-2-基、喹啉-3-基、喹啉-4基、喹啉-5-基、喹啉-6-基、喹啉-7-基和喹啉-8-基。在一些實施方案中，喹啉基選自喹啉-3-基和喹啉-6-基。異喹啉基可以為異喹啉-1-基、異喹啉-3-基、異喹啉-4基、異喹啉-5-基、異喹啉-6-基、異喹啉-7-基和異喹啉-8-基。在一些實施方案中，異喹啉基選自異喹啉-3-基和異喹啉-6-基。ADC的另外的非限制示例性PBD二聚體組分具有式B：及其鹽和溶劑化物，其中：波浪線表示與接頭的共價連接位點；連接到OH的波浪線表示S或R構型；RV1和RV2獨立地選自H、甲基、乙基和苯基(所述苯基可任選地被氟代取代，尤其是在4位置)以及C5-6雜環基；其中RV1和RV2可以相同或不同；并且n為0或1。在一些實施方案中，RV1和RV2獨立地選自H、苯基和4-氟苯基。在一些實施方案中，接頭可連接在PBD二聚體藥物部分的各個位點之一，包括B環的N10亞胺、C環的C-2內/外位置或連接A環的栓系單元(參見以下結構C(I)和C(II))。ADC的非限制示例性PBD二聚體組分包括式C(I)和C(II)：式C(I)和C(II)以其N10-C11亞胺形式顯示。示例性PBD藥物部分還包括甲醇胺以及受保護的甲醇胺形式，如下表中所示：其中：X為CH2(n＝1至5)、N或O；Z和Z’獨立地選自OR和NR2，其中R為含有1至5個碳原子的伯、仲或叔烷基鏈；R1、R’1、R2和R’2各自獨立地選自H、C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-20芳基(包括取代的芳基)、C5-20雜芳基基團、–NH2、-NHMe、-OH和-SH，其中在一些實施方案中，烷基、烯基和炔基鏈包含最多5個碳原子；R3和R’3獨立地選自H、OR、NHR和NR2，其中R為含有1至5個碳原子的伯、仲或叔烷基鏈；R4和R’4獨立地選自H、Me和OMe；R5選自C1-C8烷基、C2-C8烯基、C2-C8炔基、C5-20芳基(包括被鹵代、硝基、氰基、烷氧基、烷基、雜環基取代的芳基)和C5-20雜芳基基團，其中在一些實施方案中，烷基、烯基和炔基鏈包含最多5個碳原子；R11為H、C1-C8烷基或保護基團(例如，乙酰基、三氟乙酰基、叔丁氧羰基(BOC)、芐氧羰基(CBZ)和9-芴基亞甲基氧基羰基(Fmoc)或包含自我犧牲單元的部分例如纈氨酸-瓜氨酸-PAB)；R12為H、C1-C8烷基或保護基團；其中R1、R’1、R2、R’2、R5或R12之一的氫或A環之間的–OCH2CH2(X)nCH2CH2O-間隔基的氫被連接到ADC的接頭的鍵取代。ADC的示例性PDB二聚體部分包括但不限于(波浪線表示與接頭的共價連接位點)：PBD二聚體；包含PBD二聚體的另外的非限制示例性ADC可通過將單甲基二硫化物N10-連接的PBD(下文所示)偶聯到以下抗體而制備：以產生單甲基二硫化物N10-連接的PBD抗體-藥物偶聯物：PBD二聚體-馬來酰亞胺-乙縮醛的接頭是酸不穩定的。PBD二聚體和包含PBD二聚體的ADC可根據本領域已知的方法制備。參見例如WO2009/016516、US2009/304710、US2010/047257、US2009/036431、US2011/0256157、WO2011/130598。(5)蒽環類在一些實施方案中，ADC包含蒽環。蒽環類是表現出細胞毒性活性的抗生素化合物。雖然不希望受任何特定理論的束縛，但是研究已表明蒽環類可通過許多不同的機理發揮作用來殺死細胞，這些機理包括：1)藥物分子插入細胞DNA，從而抑制DNA依賴性核酸合成；2)藥物產生自由基，其然后與細胞大分子反應而導致對細胞的損傷，和/或3)藥物分子與細胞膜的相互作用(參見例如C.Peterson等,“TransportAndStorageOfAnthracyclineInExperimentalSystemsAndHumanLeukemia”,AnthracyclineAntibioticsInCancerTherapy；N.R.Bachur,“FreeRadicalDamage”同上，第97-102頁)。由于它們的細胞毒性的潛力，蒽環類已用于治療許多癌癥，例如白血病、乳腺癌、肺癌、卵巢腺癌和肉瘤(參見例如P.H-Wiernik,Anthracycline:CurrentStatusAndNewDevelopments第11頁)。非限制示例性蒽環類包括多柔比星、表柔比星、伊達比星、正定霉素、奈莫柔比星及其衍生物。已制備了柔紅霉素和多柔比星的免疫偶聯物和前藥并進行了研究(Kratz等(2006)CurrentMed.Chem.13:477-523；Jeffrey等(2006)Bioorganic&Med.Chem.Letters16:358-362；Torgov等(2005)Bioconj.Chem.16:717-721；Nagy等(2000)Proc.Natl.Acad.Sci.USA97:829-834；Dubowchik等(2002)Bioorg.&Med.Chem.Letters12:1529-1532；King等(2002)J.Med.Chem.45:4336-4343；EP0328147；US6630579)。抗體-藥物偶聯物BR96-多柔比星與腫瘤相關抗原Lewis-Y特異性反應，并且已在I和II期研究中進行了評估(Saleh等(2000)J.Clin.Oncology18:2282-2292；Ajani等(2000)CancerJour.6:78-81；Tolcher等(1999)J.Clin.Oncology17:478-484)。PNU-159682是奈莫柔比星的強效代謝物(或衍生物)(Quintieri等(2005)ClinicalCancerResearch11(4):1608-1617)。奈莫柔比星是多柔比星的半合成類似物，在多柔比星的糖苷氨基上具有2-甲氧基嗎啉代基團，并且已進行了臨床評估(Grandi等(1990)CancerTreat.Rev.17:133；Ripamonti等(1992)Brit.J.Cancer65:703)，包括肝細胞癌II/III期試驗(Sun等(2003)ProceedingsoftheAmericanSocietyforClinicalOncology22,摘要1448；Quintieri(2003)ProceedingsoftheAmericanAssociationofCancerResearch,44:第1版,摘要4649；Pacciarini等(2006)Jour.Clin.Oncology24:14116)。包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物的非限制示例性ADC以式Ia示出：其中R1為氫原子、羥基或甲氧基基團并且R2為C1-C5烷氧基基團或其藥學上可接受的鹽；L1和Z一起為如本文所述的接頭(L)；T為如本文所述的抗體(Ab)；并且m為1至約20。在一些實施方案中，m為1至10、1至7、1至5或1至4。在一些實施方案中，R1和R2均為甲氧基(-OMe)。包含奈莫柔比星或奈莫柔比星衍生物的另一非限制示例性ADC以式Ib示出：其中R1為氫原子、羥基或甲氧基基團并且R2為C1-C5烷氧基基團或其藥學上可接受的鹽；L2和Z一起為如本文所述的接頭(L)；T為如本文所述的抗體(Ab)；并且m為1至約20。在一些實施方案中，m為1至10、1至7、1至5或1至4。在一些實施方案中，R1和R2均為甲氧基(-OMe)。在一些實施方案中，含奈莫柔比星的ADC的奈莫柔比星組分為PNU-159682。在一些此類實施方案中，ADC的藥物部分可具有以下結構之一：其中波浪線表示與接頭(L)的連接。包括PNU-159682的蒽環類可通過若干連接位點和多種接頭(US2011/0076287、WO2009/099741、US2010/0034837、WO2010/009124)(包括本文所述的接頭)偶聯至抗體。包含奈莫柔比星和接頭的示例性ADC包括但不限于：PNU-159682馬來酰亞胺乙縮醛-Ab；PNU-159682-馬來酰亞胺-Ab。PNU-159682馬來酰亞胺乙縮醛-Ab的接頭為酸不穩定的。(6)其他藥物部分藥物部分還包括格爾德霉素(Mandler等(2000)J.Nat.CancerInst.92(19):1573-1581；Mandler等(2000)Bioorganic&Med.Chem.Letters10:1025-1028；Mandler等(2002)BioconjugateChem.13:786-791)；以及酶活性毒素及其片段，包括但不限于白喉A鏈、白喉毒素的非結合活性片段、外毒素A鏈(來自銅綠假單孢菌(Pseudomonasaeruginosa))、蓖麻毒蛋白A鏈、相思豆毒蛋白A鏈、蒴蓮根毒素(modeccin)A鏈、α-帚曲毒素(sarcin)、油桐(Aleuritesfordii)蛋白、香石竹(dianthin)蛋白、美洲商陸(Phytolacaamericana)蛋白(PAPI、PAPII和PAP-S)、苦瓜(momordicacharantia)抑制劑、麻風樹毒蛋白(curcin)、巴豆毒蛋白(crotin)、肥阜草(sapaonariaofficinalis)抑制劑、白樹毒素(gelonin)、絲林霉素(mitogellin)、局限曲菌素(restrictocin)、酚霉素(phenomycin)、依諾霉素(enomycin)和單端孢菌毒烯(tricothecene)。參見例如WO93/21232。藥物部分還包括具有溶核活性的化合物(例如核糖核酸酶或DNA內切酶)。在某些實施方案中，免疫偶聯物可包含高放射性原子。多種放射性同位素可用于制備放射偶聯的抗體。例子包括At211、I131、I125、Y90、Re186、Re188、Sm153、Bi212、P32、Pb212和LU的放射性同位素。在一些實施方案中，當將免疫偶聯物用于檢測時，其可包含放射性原子以用于閃爍掃描研究(scintigraphicstudy)，例如Tc99或I123，或用于核磁共振(NMR)成像(也稱為磁共振成像，MRI)的自旋標記物，例如鋯-89、碘-123、碘-131、銦-111、氟-19、碳-13、氮-15、氧-17、釓、錳或鐵。鋯-89可與各種金屬螯合劑絡合并且偶聯于抗體例如以用于PET成像(WO2011/056983)。放射性標記或其他標記可以已知方式并入免疫偶聯物中。例如，肽可經生物合成或使用包含例如一個或多個氟-19原子來替代一個或多個氫的合適的氨基酸前體化學合成。在一些實施方案中，例如Tc99、I123、Re186、Re188和In111的標記可經由抗體中的半胱氨酸殘基來連接。在一些實施方案中，釔-90可經由抗體的賴氨酸殘基連接。在一些實施方案中，IODOGEN方法(Fraker等(1978)Biochem.Biophys.Res.Commun.80:49-57可用于將碘-123并入。"MonoclonalAntibodiesinImmunoscintigraphy"(Chatal,CRCPress1989)描述了某些其他方法。在某些實施方案中，免疫偶聯物可包含偶聯到前藥活化酶的抗體。在一些此類實施方案中，前藥活化酶將前藥(例如，肽基化療劑，參見WO81/01145)轉化成活性藥物，諸如抗癌藥物。此類免疫偶聯物在一些實施方案中可用于抗體依賴性酶介導前藥療法(“ADEPT”)。可偶聯于抗體的酶包括但不限于堿性磷酸酶，其適用于將含磷酸酯的前藥轉化成游離藥物；芳基硫酸酯酶，其適用于將含硫酸酯的前藥轉化成游離藥物；胞嘧啶脫氨酶，其適用于將無毒5-氟胞嘧啶轉化成抗癌藥物5-氟尿嘧啶；蛋白酶，例如沙雷氏菌(serratia)蛋白酶、嗜熱菌蛋白酶(thermolysin)、枯草桿菌蛋白酶(subtilisin)、羧基肽酶和組織蛋白酶(例如組織蛋白酶B和L)，其適用于將含肽前藥轉化成游離藥物；D-丙氨酰基羧基肽酶，其適用于轉化含有D-氨基酸取代基的前藥；碳水化合物裂解酶，例如β-半乳糖苷酶(galactosidase)和神經氨酸酶，其適用于將糖基化前藥轉化成游離藥物；β-內酰胺酶，其適用于將用β-內酰胺衍生化的藥物轉化成游離藥物；和青霉素酰胺酶，例如青霉素V酰胺酶和青霉素G酰胺酶，其適用于將在其胺氮處分別用苯氧乙酰基或苯基乙酰基衍生化的藥物轉化成游離藥物。在一些實施方案中，酶可通過本領域熟知的重組DNA技術共價鍵合到抗體。參見例如Neuberger等,Nature312:604-608(1984)。c)藥物負載量藥物負載量由p，即式I分子中每個抗體的藥物部分的平均數表示。藥物負載量可在每個抗體1至20個藥物部分(D)的范圍內。式I的ADC包括偶聯有一定范圍(1至20個)的藥物部分的抗體的集合。由偶聯反應獲得的ADC制劑中每個抗體的藥物部分的平均數可通過例如質譜法、ELISA分析和HPLC的常規手段表征。還可測定根據p的ADC定量分布。在一些情況下，可通過例如反相HPLC或電泳的手段從具有其他藥物負載量的ADC分離、純化和表征其中p為某一數值的均質ADC。對于一些抗體-藥物偶聯物，p可受限于抗體上連接位點的數目。例如，當連接為如以上某些示例性實施方案中的半胱氨酸硫醇時，抗體可僅具有一個或若干個半胱氨酸硫醇基團，或可僅具有一個或若干個可借以連接接頭的具有足夠反應性的硫醇基團。在某些實施方案中，較高藥物負載量(例如p>5)可導致某些抗體-藥物偶聯物的聚集、不溶、毒性或細胞滲透性損失。在某些實施方案中，ADC的平均藥物負載量在1至約8、約2至約6或約3至約5的范圍內。實際上，已顯示對于某些ADC，每個抗體的藥物部分的最佳比率可小于8，并且可為約2至約5(US7498298)。在某些實施方案中，使少于理論最大值的藥物部分在偶聯反應期間偶聯至抗體。抗體可含有例如不與如下論述的藥物-接頭中間體或接頭試劑反應的賴氨酸殘基。一般而言，抗體不含有許多可連接到藥物部分的游離和反應性半胱氨酸硫醇基團；實際上，抗體中的大多數半胱氨酸硫醇殘基以二硫橋形式存在。在某些實施方案中，抗體可用諸如二硫蘇糖醇(DTT)或三羰基乙基膦(TCEP)的還原劑在部分或完全還原條件下還原以產生反應性半胱氨酸硫醇基團。在某些實施方案中，使抗體經受變性條件以顯示反應性親核基團，例如賴氨酸或半胱氨酸。ADC的負載量(藥物/抗體比率)可以不同方式并且例如通過以下方面加以控制：(i)限制藥物-接頭中間體或接頭試劑相對于抗體的摩爾過量，(ii)限制偶聯反應時間或溫度，和(iii)部分或限制用于半胱氨酸硫醇改性的還原性條件。應當理解當多于一個親核基團與藥物-接頭中間體或接頭試劑反應時，則所得產物為分布有一個或多個連接至抗體的藥物部分的ADC化合物的混合物。每個抗體的藥物的平均數可通過對抗體具有特異性并且對藥物具有特異性的雙重ELISA抗體分析從混合物計算。可通過質譜法鑒別混合物中的個別ADC分子并且通過HPLC(例如疏水性相互作用色譜法)分離(參見例如McDonagh等(2006)Prot.Engr.Design&Selection19(7):299-307；Hamblett等(2004)Clin.CancerRes.10:7063-7070；Hamblett,K.J.等“Effectofdrugloadingonthepharmacology,pharmacokinetics,andtoxicityofananti-CD30antibody-drugconjugate,”文摘號624,AmericanAssociationforCancerResearch,2004年年度會議,2004年3月27-31日,ProceedingsoftheAACR,第45卷,2004年3月；Alley,S.C.等“Controllingthelocationofdrugattachmentinantibody-drugconjugates,”文摘號627,AmericanAssociationforCancerResearch,2004年年度會議,2004年3月27-31日,ProceedingsoftheAACR,第45卷,2004年3月)。在某些實施方案中，具有單一負載量值的均質ADC可通過電泳或色譜法從偶聯混合物分離。d)某些制備免疫偶聯物的方法式I的ADC可采用本領域技術人員已知的有機化學反應、條件和試劑，通過若干途徑制備，包括：(1)使抗體的親核基團與二價接頭試劑反應以經共價鍵形成Ab-L，隨后與藥物部分D反應；和(2)使藥物部分的親核基團與二價接頭試劑反應以經共價鍵形成D-L，隨后與抗體的親核基團反應。抗體上的親核基團包括但不限于：(i)N末端胺基團，(ii)側鏈胺基團，例如賴氨酸，(iii)側鏈硫醇基團，例如半胱氨酸，和(iv)糖羥基或氨基基團(在抗體經糖基化的情況下)。氨、硫醇和羥基基團具有親核性并且能夠與包括以下的接頭部分和接頭試劑上的親電子基團反應形成共價鍵：(i)活性酯，例如NHS酯、HOBt酯、鹵代甲酸酯和酸鹵化物；(ii)烷基和苯甲基鹵化物，例如鹵代乙酰胺；和(iii)醛、酮、羧基和馬來酰亞胺基團。某些抗體具有可還原性鏈間二硫化物，即半胱氨酸橋。可通過用例如DTT(二硫蘇糖醇)或三羰基乙基膦(TCEP)的還原劑處理以使抗體完全或部分還原來使抗體具有用于與接頭試劑偶聯的反應性。各半胱氨酸橋因此將在理論上形成兩個反應性硫醇親核體。另外的親核基團可通過修飾賴氨酸殘基，例如通過使賴氨酸殘基與2-亞氨基硫雜環戊烷(特勞特氏試劑(Traut'sreagent))反應，從而使得胺轉化成硫醇，而引入抗體中。反應性硫醇基團也可通過引入一個、兩個、三個、四個或更多個半胱氨酸殘基而引入抗體中(例如通過制備包含一個或多個非天然半胱氨酸氨基酸殘基的變體抗體來實現)。本發明的抗體-藥物偶聯物也可通過抗體上的親電子基團(諸如醛或酮羰基基團)與接頭試劑或藥物上的親核基團之間的反應來產生。接頭試劑上的適用親核基團包括但不限于酰肼、肟、氨基、肼、胺苯硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼。在一個實施方案中，修飾抗體以引入能夠與接頭試劑或藥物上的親核取代基反應的親電子部分。在另一個實施方案中，糖基化抗體的糖可例如用過碘酸鹽氧化試劑氧化以形成可與接頭試劑或藥物部分的胺基團反應的醛或酮基團。所得的亞胺希夫堿(Schiffbase)基團可形成穩定鍵，或可例如通過硼氫化物試劑還原以形成穩定胺鍵。在一個實施方案中，糖基化抗體的碳水化合物部分與半乳糖氧化酶或偏高碘酸鈉的反應可在抗體中產生可與藥物上的適當基團反應的羰基(醛和酮)基團(Hermanson,BioconjugateTechniques)。在另一個實施方案中，含有N末端絲氨酸或蘇氨酸殘基的抗體可與偏高碘酸鈉反應，從而產生醛來替代第一氨基酸(Geoghegan&Stroh,(1992)BioconjugateChem.3:138-146；US5362852)。可使這種醛與藥物部分或接頭親核體反應。藥物部分上的示例性親核基團包括但不限于：胺、硫醇、羥基、酰肼、肟、肼、胺苯硫脲、肼羧酸酯和芳基酰肼基團，其能夠與包括以下的接頭部分和接頭試劑上的親電子基團反應形成共價鍵：(i)活性酯，例如NHS酯、HOBt酯、鹵代甲酸酯和酸鹵化物；(ii)烷基和苯甲基鹵化物，例如鹵代乙酰胺；(iii)醛、酮、羧基和馬來酰亞胺基團。可用于制備ADC的非限制示例性交聯劑試劑在本文中描述于標題為“示例性接頭”的章節中。使用此類交聯劑試劑來連接兩個部分(包括蛋白質部分和化學部分)的方法在本領域是已知的。在一些實施方案中，可例如通過重組技術或肽合成來制備包含抗體和細胞毒性劑的融合蛋白。重組DNA分子可包含編碼偶聯物的抗體和細胞毒性部分的區域，所述區域彼此鄰近或由編碼不破壞偶聯物的所需特性的接頭肽的區域分開。在又一個實施方案中，抗體可偶聯至"受體"(諸如鏈霉親和素)以用于腫瘤預靶向中，其中向患者施用抗體-受體偶聯物，隨后使用清除劑從循環中移除未結合的偶聯物，接著施用偶聯于細胞毒性劑(例如藥物或放射性核苷酸)的"配體"(例如，抗生物素蛋白)。E.用于診斷和檢測的方法和組合物在某些實施方案中，本文提供的任何抗GPC3抗體都適用于檢測生物樣本中GPC3的存在。如本文所用的術語"檢測"涵蓋定量或定性檢測。"生物樣本"包括例如細胞或組織(例如，活檢材料，包括癌性或潛在癌性皮膚淋巴組織，例如淋巴細胞、淋巴母細胞、單核細胞、骨髓單核細胞以及它們的混合物)。在一個實施方案中，提供一種用于診斷或檢測方法的抗GPC3抗體。在另一個方面，提供一種檢測生物樣本中GPC3的存在的方法。在某些實施方案中，所述方法包括使生物樣本與如本文所述的抗GPC3抗體在允許所述抗GPC3抗體結合GPC3的條件下接觸，和檢測在所述抗GPC3抗體與所述生物樣本中的GPC3之間是否形成復合物。這樣的方法可以是體外或體內方法。在一個實施方案中，抗GPC3抗體用于選擇適于用抗GPC3抗體進行的療法的受試者，例如當GPC3為用于選擇患者的生物標記物時。在另一個實施方案中，生物樣本為細胞或組織。在另一個實施方案中，例如出于診斷、預測或分級癌癥，確定適當的療程，或監測癌癥對療法的反應的目的，在體內使用抗GPC3抗體例如通過體內成像來檢測受試者中的GPC3陽性癌癥。本領域已知的一種用于體內檢測的方法為免疫正電子發射斷層攝影術(免疫PET)，如例如在vanDongen等,TheOncologist12:1379-1389(2007)和Verel等,J.Nucl.Med.44:1271-1281(2003)中所述。在此類實施方案中，提供一種用于檢測受試者中的GPC3陽性癌癥的方法，所述方法包括向患有或疑似患有GPC3陽性癌癥的個體施用經標記的抗GPC3抗體，和檢測所述受試者中所述經標記的抗GPC3抗體，其中檢測出所述經標記的抗GPC3抗體指示所述受試者中的GPC3陽性癌癥。在某些此類實施方案中，經標記的抗GPC3抗體包括偶聯于例如68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr和124I的正電子發射體的抗GPC3抗體。在具體實施方案中，正電子發射體為89Zr。在另外的實施方案中，診斷或檢測方法包括使固定于基質的第一抗GPC3抗體與待測試GPC3的存在的生物樣本接觸，使所述基質暴露于第二抗GPC3抗體，和檢測所述第二抗GPC3是否結合至所述第一抗GPC3抗體與所述生物樣本中的GPC3之間的復合物。基質可以是任何支撐性介質，例如玻璃、金屬、陶瓷、聚合珠粒、載片、芯片和其他基質。在某些實施方案中，生物樣本包包括細胞或組織。在某些實施方案中，第一或第二抗GPC3抗體為本文所述的任何抗體。可根據上述實施方案中的任一個診斷或檢測的示例性病癥包括但不限于GPC3陽性癌癥，例如GPC3陽性肝癌、GPC3陽性肝細胞癌、GPC3陽性胰腺癌、GPC3陽性肺癌、GPC3陽性結腸癌、GPC3陽性乳腺癌、GPC3陽性前列腺癌、GPC3陽性白血病和GPC3陽性淋巴瘤。在一些實施方案中，GPC陽性癌癥為肝癌。在一些實施方案中，GPC陽性癌癥為肝細胞癌。在一些實施方案中，GPC3陽性癌癥為得到大于“0”的抗GPC3免疫組織化學(IHC)或原位雜交(ISH)評分的癌癥，其對應于>90％的腫瘤細胞中非常弱的染色或無染色。在另一個實施方案中，GPC3陽性癌癥在1+、2+或3+級下表達GPC3。在一些實施方案中，GPC3陽性癌癥為根據檢測GPC3mRNA的逆轉錄酶PCR(RT-PCR)分析，表達GPC3的癌癥。在一些實施方案中，RT-PCR為定量RT-PCR。在某些實施方案中，提供經標記的抗GPC3抗體。標記包括但不限于直接檢測的標記或部分(例如熒光標記、發色標記、電子密集標記、化學發光標記和放射性標記)以及例如通過酶促反應或分子相互作用間接檢測的部分，例如酶或配體。示例性標記包括但不限于放射性同位素32P、14C、125I、3H和131I、熒光團(例如稀土螯合物或熒光素及其衍生物)、若丹明及其衍生物、丹酰基、傘形酮、熒光素酶(例如螢火蟲熒光素酶和細菌熒光素酶(美國專利No.4,737,456))、熒光素、2,3-二氫呔嗪二酮、辣根過氧化酶(HRP)、堿性磷酸酶、β-半乳糖苷酶、葡糖淀粉酶、溶菌酶、糖氧化酶(例如葡萄糖氧化酶、半乳糖氧化酶和葡萄糖-6-磷酸脫氫酶)、與采用過氧化氫以氧化染料前體的酶(例如HRP、乳過氧化酶或微過氧化酶)偶合的雜環氧化酶(例如尿酸酶(uricase)和黃嘌呤氧化酶)、生物素/抗生物素蛋白、自旋標記、噬菌體標記、穩定自由基等。在另一個實施方案中，標記為正電子發射體。正電子發射體包括但不限于68Ga、18F、64Cu、86Y、76Br、89Zr和124I。在具體實施方案中，正電子發射體為89Zr。F.藥物制劑如本文所述的抗GPC3抗體或免疫偶聯物的藥物制劑是通過混合具有所需純度的此類抗體或免疫偶聯物與一種或多種任選的藥學上可接受的載體(Remington'sPharmaceuticalSciences第16版,Osol,A.編(1980))以凍干制劑或水溶液形式來制備。藥學上可接受的載體通常在所用劑量和濃度下對接受者無毒，并且包括但不限于：緩沖劑，例如磷酸鹽、檸檬酸鹽和其他有機酸；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(例如十八烷基二甲基苯甲基氯化銨；氯化六羥季銨；氯化苯甲烴銨；芐索氯銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，例如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和間甲酚)；低分子量(小于約10個殘基)多肽；蛋白質，例如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水性聚合物，例如聚乙烯吡咯烷酮；氨基酸，例如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其他碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑，例如EDTA；糖，例如蔗糖、甘露糖醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽反離子，例如鈉；金屬絡合物(例如Zn-蛋白質絡合物)；和/或非離子表面活性劑，例如聚乙二醇(PEG)。本文的示例性藥學上可接受的載體進一步包括間質藥物分散劑，例如可溶性中性-活性透明質酸酶糖蛋白(sHASEGP)，例如人可溶性PH-20透明質酸酶糖蛋白，例如rHuPH20(BaxterInternational,Inc.)。某些示例性sHASEGP(包括rHuPH20)和使用方法在美國專利公布No.2005/0260186和2006/0104968中有所描述。在一個方面，sHASEGP與一種或多種另外的葡糖胺聚糖酶諸如軟骨素酶組合。示例性凍干抗體或免疫偶聯物制劑在美國專利No.6,267,958中有所描述。水性抗體或免疫偶聯物制劑包括美國專利No.6,171,586和WO2006/044908中所述的那些，后述制劑包含組氨酸-乙酸鹽緩沖劑。本文的制劑也可含有多于一種為所治療的特定適應癥所必需的活性成分，優選為具有不會不利地影響彼此的互補活性的那些活性成分。活性成分可包埋在例如通過凝聚技術或通過界面聚合所制備的微囊中，例如分別于膠體藥物遞送系統(例如脂質體、白蛋白微球、微乳液、納米顆粒和納米囊)中或于巨乳液中的羥甲基纖維素或明膠-微囊和聚(甲基丙烯酸甲酯)微囊。此類技術公開于Remington'sPharmaceuticalSciences第16版,Osol,A.編(1980)。可制備持續釋放制劑。持續釋放制劑的適合例子包括含有抗體或免疫偶聯物的固體疏水性聚合物的半透性基質，所述基質呈成型物品例如薄膜或微囊的形式。欲用于體內施用的制劑通常是無菌的。無菌性可易于例如通過經無菌過濾膜過濾來實現。G.治療方法和組合物本文提供的任何抗GPC3抗體或免疫偶聯物可用在例如治療方法的方法中。在一方面，本文提供的抗GPC3抗體或免疫偶聯物用于抑制GPC3陽性細胞增殖的方法，所述方法包括在允許所述抗GPC3抗體或免疫偶聯物結合該細胞的表面上的GPC3的條件下使所述細胞暴露于所述抗GPC3抗體或免疫偶聯物，從而抑制所述細胞的增殖。在某些實施方案中，所述方法為體外或體內方法。在另外的實施方案中，所述細胞為淋巴細胞、淋巴母細胞、單核細胞或骨髓單核細胞。可使用可從Promega(Madison,WI)購得的CellTiter-GloTM發光細胞活力分析來分析體外細胞增殖的抑制。該分析基于對所存在的ATP的定量來測定培養物中的活細胞數，ATP為具有代謝活性的細胞的指示。參見Crouch等(1993)J.Immunol.Meth.160:81-88，美國專利No.6602677。分析可以96或384孔形式進行，從而使得可經受自動高通量篩選(HTS)。參見Cree等(1995)AntiCancerDrugs6:398-404。分析程序涉及向培養細胞中直接添加單一試劑(CellTiter-試劑)。這導致細胞溶解和生成通過熒光素酶反應所產生的發光信號。發光信號與存在的ATP的量成比例，存在的ATP的量與培養物中存在的活細胞數成正比。數據可由光度計或CCD相機成像裝置記錄。發光輸出表示為相對光單位(RLU)。在另一個方面，提供一種用作藥劑的抗GPC3抗體或免疫偶聯物。在另外的方面，提供一種用于治療方法的抗GPC3抗體或免疫偶聯物。在某些實施方案中，提供一種用于治療GPC3陽性癌癥的抗GPC3抗體或免疫偶聯物。在某些實施方案中，本發明提供一種用于治療患有GPC3陽性癌癥的個體的方法中的抗GPC3抗體或免疫偶聯物，所述方法包括向所述個體施用有效量的所述抗GPC3抗體或免疫偶聯物。在一個這樣的實施方案中，所述方法進一步包括向個體施用有效量的至少一種例如如下所述的另外治療劑。在另一個方面，本發明提供抗GPC3抗體或免疫偶聯物用于制造或制備藥劑的用途。在一個實施方案中，所述藥劑用于治療GPC3陽性癌癥。在另一個實施方案中，所述藥劑用于治療GPC3陽性癌癥的方法，所述方法包括向患有GPC3陽性癌癥的個體施用有效量的所述藥劑。在一個這樣的實施方案中，所述方法進一步包括向個體施用有效量的至少一種例如如下所述的另外治療劑。在另一個方面，本發明提供一種用于治療GPC3陽性癌癥的方法。在一個實施方案中，所述方法包括向患有此GPC3陽性癌癥的個體施用有效量的抗GPC3抗體或免疫偶聯物。在一個這樣的實施方案中，所述方法進一步包括向個體施用有效量的至少一種如下所述的另外治療劑。根據上述實施方案中任一個的GPC3陽性癌癥可以為例如GPC3陽性肝癌、GPC3陽性肝細胞癌、GPC陽性胰腺癌、GPC陽性肺癌、GPC陽性結腸癌、GPC陽性乳腺癌、GPC陽性前列腺癌、GPC陽性白血病或GPC陽性淋巴瘤。在一些實施方案中，GPC3陽性癌癥為得到大于“0”的抗GPC3免疫組織化學(IHC)或原位雜交(ISH)評分的癌癥，其對應于>90％的腫瘤細胞中非常弱的染色或無染色。在另一個實施方案中，GPC3陽性癌癥在1+、2+或3+級下表達GPC3。在一些實施方案中，GPC3陽性癌癥為根據檢測GPC3mRNA的逆轉錄酶PCR(RT-PCR)分析，表達GPC3的癌癥。在一些實施方案中，RT-PCR為定量RT-PCR。根據上述實施方案中任一個的“個體”可以是人。在另一個方面，本發明提供包含本文提供的任何抗GPC3抗體或免疫偶聯物的例如用于任何上述治療方法中的藥物制劑。在一個實施方案中，藥物制劑包含本文提供的任何抗GPC3抗體或免疫偶聯物和藥學上可接受的載體。在另一個實施方案中，藥物制劑包含本文提供的任何抗GPC3抗體或免疫偶聯物和至少一種例如如下所述的另外治療劑。本發明的抗體或免疫偶聯物可單獨或與其他藥劑聯合用于療法中。例如，本發明的抗體或免疫偶聯物可與至少一種另外治療劑共同施用。上述此類聯合療法涵蓋聯合施用(其中將兩種或更多種治療劑包含在相同或單獨的制劑中)和單獨施用，在此情況下，本發明的抗體或免疫偶聯物的施用可在另外的治療劑和/或佐劑的施用之前、同時和/或之后進行。本發明的抗體或免疫偶聯物也可以與放射療法聯合使用。本發明的抗體或免疫偶聯物(和任何另外的治療劑)可通過任何合適的手段施用，包括腸胃外、肺內和鼻內，以及在期望局部治療時，病灶內施用。腸胃外輸注包括肌內、靜脈內、動脈內、腹膜內或皮下施用。給藥可以通過任何合適的途徑進行，例如，通過注射，例如靜脈內或皮下注射，部分地取決于所述施用是短暫的還是長時的。本文考慮了包括但不限于在各種時間點的單次或多次施用、推注施用和脈沖輸注的各種給藥計劃。本發明的抗體或免疫偶聯物將以符合良好醫療實踐的方式配制、給藥和施用。在此情形下的考慮因素包括所治療的具體病癥、所治療的具體哺乳動物、各個患者的臨床病狀、病癥的原因、藥劑遞送部位、施用方法、施用計劃和醫學從業者已知的其他因素。抗體或免疫偶聯物無需但任選地與一種或多種目前用于預防或治療所述病癥的藥劑一起配制。此類其他藥劑的有效量取決于制劑中存在的抗體或免疫偶聯物的量、病癥或治療的類型以及上文論述的其他因素。這些藥劑通常以與如本文所述相同的劑量和用如本文所述的施用途徑，或以本文所述的劑量的約1％至99％，或以憑經驗/臨床上確定為適當的任何劑量并且通過憑經驗/臨床上確定為適當的任何途徑進行使用。對于預防或治療疾病，本發明的抗體或免疫偶聯物(當單獨或與一種或多種其他另外的治療劑聯合使用時)的適當劑量將取決于待治療疾病的類型、抗體或免疫偶聯物的類型、疾病的嚴重性和病程、施用抗體或免疫偶聯物是出于預防目的還是治療目的、先前療法、患者的臨床病史和對抗體或免疫偶聯物的反應、以及主治醫師的判斷。抗體或免疫偶聯物適合一次性或歷經一系列治療施用于患者。取決于疾病的類型和嚴重性，約1μg/kg至15mg/kg(例如0.1mg/kg-10mg/kg)的抗體或免疫偶聯物可為用于向患者施用的初始候選劑量，無論例如通過一次或多次單獨施用還是通過連續輸注。根據上文提及的因素，一種典型的每日劑量可能在約1μg/kg至100mg/kg或更多的范圍內。對于歷經數天或更長時間的重復施用，依據病狀，治療將通常持續直至出現所需的疾病癥狀抑制為止。抗體或免疫偶聯物的一種示例性劑量將在約0.05mg/kg至約10mg/kg的范圍內。因此，可向患者施用約0.5mg/kg、2.0mg/kg、4.0mg/kg或10mg/kg的一種或多種劑量(或其任何組合)。此類劑量可間歇施用，例如每周或每三周一次(例如以使患者接受約兩劑至約二十劑，或例如約六劑抗體)。最初可施用較高的負荷劑量，接著施用一種或多種較低劑量。然而，其他劑量方案可能適用。此療法的進展易于通過常規技術和分析加以監測。應理解任何以上制劑或治療方法都可使用本發明的免疫偶聯物和抗GPC3抗體兩者進行。H.制品在本發明的另一個方面，提供一種含有適用于治療、預防和/或診斷上述病癥的材料的制品。該制品包括容器和在該容器上或與該容器相伴的標簽或包裝說明書。適合的容器包括例如瓶、小瓶、注射器、靜脈內溶液袋等。容器可由諸如玻璃或塑料的多種材料形成。容器容納單獨的或與有效治療、預防和/或診斷病癥的另一組合物組合的組合物并且可具有無菌進入孔(例如容器可為具有可由皮下注射針刺穿的塞的靜脈內溶液袋或小瓶)。組合物中的至少一種活性劑為本發明的抗體或免疫偶聯物。標簽或包裝說明書指示組合物用于治療所選病狀。此外，制品可包括(a)其中含有組合物的第一容器，其中所述組合物包含本發明的抗體或免疫偶聯物；和(b)其中含有組合物的第二容器，其中所述組合物包含另一種細胞毒性劑或另外的治療劑。本發明的該實施方案中的制品可進一步包括指示組合物可用于治療特定病狀的包裝說明書。作為另外一種選擇或除此之外，制品可進一步包括第二(或第三)容器，其包含藥學上可接受的緩沖劑，諸如抑菌注射用水(BWFI)、磷酸鹽緩沖鹽水、林格氏溶液(Ringer'ssolution)或右旋糖溶液。其可進一步包括從商業和使用者觀點看來合乎需要的其他材料，包括其他緩沖劑、稀釋劑、過濾器、針和注射器。III.實施例以下是本發明的方法和組合物的實例。應當理解，鑒于上文提供的一般說明，可以實踐各種其他實施方案。實施例1：人GPC3表達使用包含基因表達信息的專利數據庫(GeneLogicInc.,Gaithersburg,MD)分析人GPC3基因表達。數據庫的圖形分析使用微陣列特征查看器進行。圖1是各種組織中人GPC3基因表達的圖示。y-軸的比例尺表示基于雜交信號強度的基因表達水平。點出現在從每個所列出的組織名稱延伸的線的左側和右側。出現在線左側的點表示正常組織中的基因表達，并且出現在線右側的點表示腫瘤和患病組織中的基因表達。圖1示出了某些腫瘤或患病組織相對于其正常對應物的GPC3基因表達增加。例如，GPC3在肝臟腫瘤和患病組織中基本上過表達。圖2示出，GPC3在肝細胞癌中基本上過表達，并且在肝硬化中稍微過表達。在正常肝臟或各種其他肝臟疾病中，GPC3均未過表達。GPC3的表達還通過來自不同分期的肝細胞癌的cDNA樣本和其他肝臟疾病的樣本的qPCR測定，所述其他肝臟疾病包括肝硬化、脂肪變性、肝炎、慢性肝炎和肝腺瘤(OriGene,Rockville,MD)。GPC3表達歸一化為RPL19。如圖3所示，GPC3在IV期肝細胞癌樣本中高表達。GPC3也在一種慢性肝炎樣本中高表達。使用該分析未在多種正常人組織中檢測到顯著的GPC3表達，所述正常人組織包括腎上腺、腦、子宮頸、結腸、附睪、食道、脂肪、心臟、小腸、顱內動脈、腎臟、肝臟、肺、淋巴結、淋巴細胞、乳腺、肌肉、鼻粘膜、視神經、卵巢、輸卵管、胰腺、心包膜、垂體、胎盤、前列腺、直腸、視網膜、精囊、皮膚、脊髓、脾、胃、睪丸、胸腺、甲狀腺、舌、扁桃體、氣管、輸尿管、膀胱、子宮、懸雍垂、陰道和腔靜脈。實施例2：單克隆抗體生成A.GPC3胞外結構域免疫和抗體表征針對人(hu)GPC3的單克隆抗體使用以下程序通過用融合至C-末端Flag(RADYKDDDDK)(在哺乳動物表達系統中表達)的重組huGPC3胞外結構域(ECD，1-547位氨基酸)免疫五只Balb/c小鼠來制備。擴大陽性克隆，并通過ELISA、FACS和免疫組織化學(IHC)再篩選與huGPC3、cynoGPC3和HepG2細胞的結合。選擇十三個抗體并純化，包括抗體7H1和4G7。抗體7H1的重鏈和輕鏈可變區序列分別如SEQIDNO:2和3所示。抗體4G7的重鏈和輕鏈可變區序列分別如SEQIDNO:26和27所示。參見圖4A-B。通過IHC發現，抗體7H1與肝癌組織微陣列、JHH細胞、HepG2細胞以及穩定轉染GPC3的細胞強烈反應，并且通過FACS發現，抗體7H1和4G7均與表達GPC3的HepG2X1細胞和293S細胞強烈反應。圖5示出了抗體7H1的示例性FACS數據。抗體7H1還通過Western印跡檢測了人、食蟹獼猴、大鼠和小鼠GPC3。使用競爭分析進行抗GPC3抗體的表位分倉(Epitopebinning)。使用OctetRED384儀器(ForteBio)以10μg/ml將生物素酰化的GPC3捕獲于鏈親和素生物傳感器上持續600秒。通過加入10μg/ml600秒使第一抗體的結合達到飽和。將相同的生物傳感器浸入5μg/ml的競爭抗體，并測定結合600秒。在存在飽和量的第一抗體的情況下，第二抗體結合失敗表明兩個抗體處于相同的表位倉；在存在飽和量的第一抗體的情況下，第二抗體結合成功表明兩個抗體處于不同的表位倉。使用抗體7H1作為第一飽和抗體。后續實驗使用抗體4G7作為第一飽和抗體進行。抗體7H1和4G7存在于不同的表位倉。制備人GPC3的C-末端截短構建體，以進一步精制抗體7H1和4G7的表位。制備三種不同的C-末端截短，包括人GPC3的氨基酸25至137、人GPC3的氨基酸25至247和人GPC3的氨基酸25至358。三種C-末端截短中的每種均包含GPCN-末端信號序列(SS)和C-末端糖磷脂酰肌醇錨(GPI連接)。參見圖6。通過FACS發現，抗體7H1結合至在293S細胞表面上瞬時表達的全部三個構建體，并且通過Western印跡發現，結合至全部三個構建體。參見圖6。通過FACS未顯示抗體4G7與人GPC3的N-末端(氨基酸25-358)或C-末端(氨基酸359-560)片段顯著結合，暗示4G7的表位可跨越人GPC3的氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點。參見圖7(SantaCruzBiotechnology抗體1G12產生為人GPC3的氨基酸511-580，用作C-末端片段結合的陽性對照)。抗體7H1轉型為具有人A118C半胱氨酸工程化的IgG1和Igκ恒定區的嵌合抗體(SEQIDNO:42和43)。B.GPC3截短的胞外結構域免疫和抗體表征針對人GPC3的胞外結構域的C-末端部分的單克隆抗體通過用編碼具有GPCN-末端信號序列(SS)和C-末端糖磷脂酰肌醇錨(GPI連接)的huGPC3氨基酸359至560的DNA免疫五只Balb/c小鼠來制備。小鼠通過每周一次水動力尾靜脈(HTV)注射50μgDNA和2.5μg小鼠GM-CSF持續7周來免疫。通過FACS從血漿篩選表達與免疫所用相同的huGPC(aa359-560)構建體的293細胞的結合。在融合后，通過ELISA篩選十種表達結合人GPC3胞外結構域(氨基酸1至560)的抗體的雜交瘤，并且通過FACS篩選表達結合huGPC(aa359-560)(在293細胞上表達)的抗體的雜交瘤。使用人IgG1A118C半胱氨酸工程化的重鏈和Igκ輕鏈恒定區克隆三種抗體，包括抗體4A11和15G1。抗體4A11的重鏈和輕鏈可變區序列分別如SEQIDNO:10和11所示。抗體15G1的重鏈和輕鏈可變區序列分別如SEQIDNO:18和19所示。參見圖4A-B。制備huGPC(aa359-589)的C-末端截短構建體，以進一步精制抗體4A11和15G1的表位。制備三種不同的N-末端截短，包括人GPC3的氨基酸359至420、人GPC3的氨基酸359至470和人GPC3的氨基酸359至509。三種C-末端截短中的每種均包含HSVN-末端信號序列(SS)和gD序列(SEQIDNO:41)和C-末端糖磷脂酰肌醇錨(GPI連接)。參見圖8。huGPC截短構建體在293細胞的表面上表達，并通過FACS測定抗體結合。使用抗gD作為陽性對照。使用載體轉染的293細胞作為陰性對照。抗體4A11結合huGPC(aa359-559)和huGPC(aa359-509)，但不結合huGPC(aa359-470)或huGPC(aa359-420)，表明其結合至人GPC的氨基酸470至509內的表位。參見圖9。抗體15G1結合huGPC(aa359-559)、huGPC(aa359-509)和huGPC(aa359-470)，但不結合huGPC(aa359-420)，表明其結合至人GPC的氨基酸420至470內的表位。參見圖9。通過FACS測試抗體15G1和4A11與293細胞表面上表達的全長N-末端gD標記的食蟹猴GPC3和全長N-末端gD標記的大鼠GPC3的結合。兩種抗體均結合至食蟹猴GPC3。15G1還結合至大鼠GPC3，而4A11則不結合。參見圖10。如圖11所示，15G1表位在人、食蟹猴、恒河猴、小鼠和大鼠GPC3之間是高度保守的，而4A11表位則包含一些序列變異，特別是靈長類和嚙齒類GPC3之間的序列變異。7H1表位在人、食蟹猴、恒河猴、小鼠和大鼠GPC3之間也是高度保守的，如上文所討論，通過Western印跡抗體7H1檢測人、食蟹猴、大鼠和小鼠GPC3。實施例3：單克隆抗體的內化作用分析抗體7H1、4G7、15G1和4A11在Hep3B.2.1-7、HepG2和JHH7細胞中的內化作用。在37℃下在2小時和20小時時，測定抗體內化作用。在37℃下使細胞與4μg/ml抗體溫育2或20小時，或在4℃下溫育一小時。然后用PBS洗滌細胞，用4％多聚甲醛固定，并在37℃下用0.05％皂草苷透化5分鐘。然后使細胞與抗LAMPI抗體(SigmaAldrich)(作為溶酶體標記物)在室溫下溫育一小時，洗滌，然后與抗人Cy3和抗兔Alexa488在室溫下溫育一小時。洗滌細胞，然后用封固劑封固。根據強度對染色進行目測定量。在2小時時間點，很少觀察到抗體的內化作用。在20小時時間點，在每個細胞系中抗體進入溶酶體的內化作用程度匯總于表2中。表2：抗體內化到溶酶體中細胞系7H14A1115G14G7HepG2+/-++++++JHH7++++++++/-Hep3B.2.1-7----在20小時，N-末端結合抗體7H1顯示出與C-末端結合抗體4A11和15G1不同的內化作用特征。預測抗體4G7結合至跨越氨基酸R358/S359處的弗林蛋白酶裂解位點的表位，該抗體顯示出與其他抗體不同的內化作用特征。實施例4：GPC3表達細胞系對游離的奈莫柔比星衍生物和游離的吡咯并苯二氮雜卓的靈敏度如下所述，測試各種GPC3表達細胞系對游離的奈莫柔比星衍生物PNU-159682(具有如下結構)：或游離的吡咯并苯二氮雜卓SG-2057(具有如下結構)：的靈敏度。在96孔透明底板(PerkinElmerLifeSciences)的50μl正常生長培養基中，在存在PNU-159682或SG-2057的情況下，使用細胞(以1000個細胞/孔接種)評估增殖。在二十四小時后，向一式三份的孔再加入50μl含系列稀釋藥物的培養基。在3或5天后，使用CellTiter-GloII(PromegaCorp.)和EnVision2101多標記讀數器(PerkinElmer)測定細胞數量。該實驗的結果匯總于表3中。表3：細胞系對PNU-159682和SG-2057的敏感性細胞系PNU-159682EC50SG-2057EC50293S22pM56pM293_GPC319pM34pMPC351pM122pMHep3B.2.1-742pM474pMHuh729pM147pMHepG229pM29pMJHH738pM135pMJHH531pM105pM如表3中所示，所測試的所有細胞系均對兩種藥物敏感。實施例5：抗GPC3抗體藥物偶聯物的產生對于較大規模的抗體產生，在CHO細胞中產生抗體。將編碼VL和VH的載體轉染至CHO細胞，并通過蛋白A親和色譜從細胞培養基純化IgG。通過將具有重鏈A118C突變(7H1硫代-HCA118C、4A11硫代-HCA118C、15G1硫代-HCA118C)的嵌合7H1、4A11或15G1(人IgG1/κ)偶聯至藥物接頭部分馬來酰亞胺乙縮醛PNU-159682(參見圖12A)或單甲基二硫醚N10連接的PBD(參見圖12B)，來產生抗GPC3抗體-藥物偶聯物(ADC)。在初始分離時，抗體中的工程化的半胱氨酸殘基以與細胞的硫醇(例如，谷胱甘肽)形成的混合二硫化物而存在，因此不可用于偶聯。這些抗體的部分還原(例如，使用DTT)、純化并使用脫氫抗壞血酸(DHAA)再氧化得到具有游離的半胱氨酸巰基基團的抗體，半胱氨酸巰基基團可用于偶聯，如上文例如Junutula等(2008)Nat.Biotechnol.26:925-932和US2011/0301334所述。簡而言之，使抗體與藥物接頭部分組合，以允許藥物接頭部分與抗體的游離的半胱氨酸殘基偶聯。在幾小時后，純化ADC。測定每個ADC的載藥量(每個抗體的藥物部分平均數)，并且對于PBD偶聯物，該載藥量在1.4-1.8之間，而對于PNU偶聯物，在1.4-1.8之間。實施例6：抗GPC3抗體藥物偶聯物在HepG2X1細胞系異種移植模型中的功效使用人HepG2X1移植移植模型研究抗GPC3ADC的功效。在每只雌性C.B-17SCID小鼠(CharlesRiverLaboratories；Hollister,CA)的側腹區域皮下接種一千萬個HepG2X1細胞。當異種移植瘤達到100-300mm3的平均腫瘤體積(稱為第0天)，將動物隨機分組，每組7-10只小鼠，并接受圖13所示劑量的單次靜脈注射ADC。在整個研究過程中每周測定小鼠的腫瘤和體重1-2次。當體重減少為初始體重的>20％時，立即對小鼠執行安樂死。在腫瘤達到3000mm3或顯示即將發生潰瘍的征兆出現之前，對所有動物執行安樂死。抗體的存在通過注射后1、7和14天的藥代動力學滲出確認。使用抗體4G7、7H1和4A11通過FACS確認HepG2X1細胞表面上和從移植小鼠分離的HepG2X1腫瘤的GPC3表達。參見圖13A-B。如圖14所示，顯著腫瘤生長抑制通過7H1-二硫化物-PBD(7.98mg/kg)和4A11-二硫化物-PBD(7.51mg/kg)二者實現。在該實驗中，PNU偶聯物(7H1-乙縮醛-PNU和4A11-乙縮醛-PNU)的效力較低。實施例7：抗GPC3抗體藥物偶聯物在JHH7細胞系移植模型中的功效使用人JHH7移植模型研究抗GPC3ADC的功效。在每只雌性NCR裸鼠(Taconic；CambridgeCity,IN)的側腹區域皮下接種三百萬個JHH7細胞。當移植瘤達到100-300mm3的平均腫瘤體積(稱為第0天)，將動物隨機分組，每組7-10只小鼠，并接受圖13所示劑量的單次靜脈注射ADC。在整個研究中每周測定小鼠的腫瘤和體重1-2次。當體重減少為初始體重的>20％時，立即對小鼠執行安樂死。在腫瘤達到3000mm3或顯示即將發生潰瘍的征兆出現之前，對所有動物執行安樂死。抗體的存在通過注射后1、4和14天的藥代動力學滲出確認。使用抗體4G7、7H1和4A11通過FACS確認JHH7細胞表面上和從異種移植小鼠分離的JHH7腫瘤的GPC3表達。參見圖15A-B。如圖16所示，顯著腫瘤生長抑制通過7H1-二硫化物-PBD(7.98mg/kg)和4A11-二硫化物-PBD(7.51mg/kg)二者實現。在該實驗中，PNU偶聯物(7H1-乙縮醛-PNU和4A11-乙縮醛-PNU)的效力較低。雖然為了清晰理解，上述發明通過以實例說明和舉例詳細進行了描述，但這些描述和例子不應理解為限制本發明的范圍。本文所有引入的專利和科學文獻的公開內容全文以引用方式明確地并入。序列表格序列表<110>基因泰克公司（GENENTECH,INC.）<120>抗GPC3抗體和免疫偶聯物發明領域<130>01146-0034-00PCT<150>US62/001,868<151>2014-05-22<160>48<170>PatentIn3.5版<210>1<211>580<212>PRT<213>智人<400>1MetAlaGlyThrValArgThrAlaCysLeuValValAlaMetLeuLeu151015SerLeuAspPheProGlyGlnAlaGlnProProProProProProAsp202530AlaThrCysHisGlnValArgSerPhePheGlnArgLeuGlnProGly354045LeuLysTrpValProGluThrProValProGlySerAspLeuGlnVal505560CysLeuProLysGlyProThrCysCysSerArgLysMetGluGluLys65707580TyrGlnLeuThrAlaArgLeuAsnMetGluGlnLeuLeuGlnSerAla859095SerMetGluLeuLysPheLeuIleIleGlnAsnAlaAlaValPheGln100105110GluAlaPheGluIleValValArgHisAlaLysAsnTyrThrAsnAla115120125MetPheLysAsnAsnTyrProSerLeuThrProGlnAlaPheGluPhe130135140ValGlyGluPhePheThrAspValSerLeuTyrIleLeuGlySerAsp145150155160IleAsnValAspAspMetValAsnGluLeuPheAspSerLeuPhePro165170175ValIleTyrThrGlnLeuMetAsnProGlyLeuProAspSerAlaLeu180185190AspIleAsnGluCysLeuArgGlyAlaArgArgAspLeuLysValPhe195200205GlyAsnPheProLysLeuIleMetThrGlnValSerLysSerLeuGln210215220ValThrArgIlePheLeuGlnAlaLeuAsnLeuGlyIleGluValIle225230235240AsnThrThrAspHisLeuLysPheSerLysAspCysGlyArgMetLeu245250255ThrArgMetTrpTyrCysSerTyrCysGlnGlyLeuMetMetValLys260265270ProCysGlyGlyTyrCysAsnValValMetGlnGlyCysMetAlaGly275280285ValValGluIleAspLysTyrTrpArgGluTyrIleLeuSerLeuGlu290295300GluLeuValAsnGlyMetTyrArgIleTyrAspMetGluAsnValLeu305310315320LeuGlyLeuPheSerThrIleHisAspSerIleGlnTyrValGlnLys325330335AsnAlaGlyLysLeuThrThrThrIleGlyLysLeuCysAlaHisSer340345350GlnGlnArgGlnTyrArgSerAlaTyrTyrProGluAspLeuPheIle355360365AspLysLysValLeuLysValAlaHisValGluHisGluGluThrLeu370375380SerSerArgArgArgGluLeuIleGlnLysLeuLysSerPheIleSer385390395400PheTyrSerAlaLeuProGlyTyrIleCysSerHisSerProValAla405410415GluAsnAspThrLeuCysTrpAsnGlyGlnGluLeuValGluArgTyr420425430SerGlnLysAlaAlaArgAsnGlyMetLysAsnGlnPheAsnLeuHis435440445GluLeuLysMetLysGlyProGluProVal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