可用于被動流感免疫的抗體及其組合物、組合和使用方法與流程

本申請作為PCT國際申請于2015年2月4日提交，并且要求保護(hù)2014年2月4日提交的美國臨時申請No.61/935,746和2014年9月17日提交的美國臨時申請No.62/051,630的優(yōu)先權(quán)的權(quán)益，所述美國臨時申請的每一個的完整內(nèi)容通過引用并入本文。通過EFS-WEB提交的序列表的引用通過USPTO-EFS-WEB服務(wù)器(如在MPEP1730II.B.2(a)(C)中授權(quán)和所示的)的以下序列表的電子提交的完整內(nèi)容為了所有目的通過引用整體并入文。如下在電子提交的文本文件上標(biāo)識序列表：文件名稱創(chuàng)建日期大小(字節(jié))9079004_1.txt2015年2月4日285.473
技術(shù)領(lǐng)域：
提供了用于治療和預(yù)防流感病毒的抗體、組合物和方法。提供了在HA0成熟裂解位點(diǎn)附近結(jié)合流感血凝素A的共有序列的抗體和抗原結(jié)合片段。還提供了用于跨甲型流感和乙型流感病毒株的有效被動免疫的抗體組合物、組合和方法。背景流感是死亡和疾病的主要原因，影響上和下呼吸道。存在三種類型的流感病毒，甲型、乙型和丙型流感病毒。人甲型流感和乙型流感病毒引發(fā)疾病的季節(jié)性流行。丙型流感感染引起輕微的呼吸道疾病，并且被認(rèn)為不會造成流行病?；诓《颈砻嫔系膬煞N蛋白：血凝素(H)和神經(jīng)氨酸酶(N)將甲型流感病毒分為亞型。存在17種不同的血凝素亞型和10種不同的神經(jīng)氨酸酶亞型。甲型流感病毒可被進(jìn)一步細(xì)分為不同的株。通常在人中發(fā)現(xiàn)的甲型流感病毒的目前亞型是甲型流感(H1N1)病毒和甲型流感(H3N2)病毒。乙型流感病毒不被分為亞型，而是被分為兩個不同的譜系：B/Victoria/2/87樣和B/Yamagata/16/88-樣。甲型流感病毒(例如H1N1)、甲型流感病毒(例如H3N2)和乙型流感病毒都被包含在每年的流感疫苗中。目前五種類型的臨床上相關(guān)的流感病毒(三種甲型流感以及還有兩種乙型流感)以變化的頻率在人群中流行，甲型流感病毒被分成兩個不同的系統(tǒng)發(fā)育組1和組2。組1包括血凝素亞型H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H13和H16。組2包括H3、H4、H7、H10、H15和H14。組1的目前相關(guān)的流行甲型流感病毒是H1亞型，其被進(jìn)一步分成人和豬來源的亞型，組2相關(guān)流行病毒目前是H3亞型。甲型流感病毒負(fù)責(zé)大部分季節(jié)性疾病，H3病毒主導(dǎo)美國過去12流感季節(jié)中的8個流感季節(jié)(CDC季節(jié)性流感；美國監(jiān)測數(shù)據(jù))。在1968年，H3病毒引發(fā)20世紀(jì)的3次大流感流行之一，并且自那時起H3病毒一直保持為人疾病的重要物質(zhì)。除了人以外，H3流感病毒通常還感染鳥類、豬和馬。乙型流感病毒已在人中循環(huán)100多年，目前的株被分為兩個譜系Yamagata譜系和Victoria譜系。最近三價流感疫苗已被擴(kuò)展至覆蓋乙型流感的兩個譜系以及H1病毒和H3病毒的四價含抗原疫苗。目前流感的預(yù)防和治療是不充分的，并且可以是無效的。盡管普遍接種疫苗，但對流感的易患性仍然存在。促成易感性的因素包括：(1)不完全的疫苗接種覆蓋，諸如對于2009年的H1N1流感大流行，當(dāng)時疫苗短缺非常普遍，(2)當(dāng)疫苗制劑不能很好地代表流行的株的年份，諸如2008年，(3)老年人中降低的接種疫苗的功效，如65歲時平均功效在40-50％的范圍內(nèi)，70歲以后僅為15-30％，和(4)在季節(jié)性疫苗中未被代表的大流行株的出現(xiàn)，H5N1病毒受到特別關(guān)注。此外，針對目前可用于治療流感的抗病毒療法的耐藥性已經(jīng)成為嚴(yán)重的問題。對金剛烷(金剛烷胺和金剛乙胺)(作用于M2蛋白并抑制病毒整合的藥物)的抗性，從2004年中的1.9％增加至2004-2005年流感季節(jié)的頭6個月間的14.5％，目前已超過90％(Sheu,T.G.等(2011)JInfectDis203:13-17)。對磷酸奧司他韋(抑制流感神經(jīng)氨酸酶蛋白的抗病毒藥物)的抗性，從2006-2007流感季節(jié)期間的1-2％的H1N1病毒急劇增加至2007-2008年的12％，并且在2009年超過99％的季節(jié)性H1N1病毒。幸運(yùn)的是，2009年的大流行H1N1株對Tamiflu敏感，其可能導(dǎo)致較少死亡。因此，存在對新的流感預(yù)防/治療方法的壓倒性需要。不幸的是，確定流感病毒株的診斷通常需要12-24小時的出報告時間，如果需要確定株來選擇適當(dāng)?shù)寞煼?，這導(dǎo)致不利的治療延遲。因此，仍然需要結(jié)合多個進(jìn)化枝并顯示增強(qiáng)的對其的親和力的抗體。特別地，包含有效地針對甲型流感和乙型流感的抗體并且具有與多個株的廣泛反應(yīng)性的被動疫苗是期望的，以避免對在施用抗體或抗體混合物之前詳盡地表征感染性病毒的需要。有效地針對甲型和乙型流感的所有株的廣泛反應(yīng)性抗體和組合物是期望的，特別地因?yàn)樵谙戎暝\斷在治療之前不是必需的。高效力是進(jìn)一步期望的，以有助于試劑的生產(chǎn)和施用。概述在一些實(shí)施方案中，提供了具有與主要乙型流感譜系-Yamagata和Victoria進(jìn)化枝的反應(yīng)性的重組人抗體或其抗原結(jié)合片段。在一些實(shí)施方案中，提供了以高親和力結(jié)合代表乙型流感的三聚體的單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了抗體，所述抗體，在發(fā)生例如由先前未鑒定的乙型流感病毒株或季節(jié)性疫苗(所述季節(jié)性疫苗未包括約每2-3年一次的循環(huán)中的實(shí)際株)未賦予針對其的保護(hù)的株引起的感染的情況下，能夠賦予被動免疫的抗體：Monto,A.A.，等，Vaccine(2009)27:5043–5053。在一些實(shí)施方案中，還提供了結(jié)合許多株(表明靶向必需部位)，因而可能結(jié)合甚至先前未遭遇的株的抗體。此類抗體也用于改善或預(yù)防受試者的感染或減輕其在受試者中的毒性，對于所述受試者接種疫苗不能產(chǎn)生完全保護(hù)性反應(yīng)或所述受試者因潛在受損的支氣管功能而處于高風(fēng)險中，如在慢性阻塞性肺疾病患者或弱免疫系統(tǒng)患者(例如，非常年幼的患者、老年患者、移植患者以及癌癥-或HIV-化學(xué)療法-治療的患者)中。在一些實(shí)施方案中，提供了包含賦予廣泛的被動免疫的mAb的混合物的組合物。在一些實(shí)施方案中，提供了包含如下部分的組合物：(1)一種或多種結(jié)合部分、單克隆抗體或其免疫反應(yīng)性片段，其具有與兩個主要乙型流感譜系的反應(yīng)性，和(2)一種或多種結(jié)合部分、單克隆抗體或其免疫反應(yīng)性片段，其具有與組1(包括H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H13、H16)和/或組2(包括H3和H7作為模式樣本)的甲型流感病毒的反應(yīng)性，包括顯示組交叉反應(yīng)性的那些結(jié)合部分、單克隆抗體或其免疫反應(yīng)性片段。在一些實(shí)施方案中，本文中提供的抗體特異性結(jié)合HA0蛋白中包含的表位，并且識別HA的天然三聚體形式，以及蛋白水解活化的形式。在另一個實(shí)施方案中，提供了選自能夠擴(kuò)大可被特異性結(jié)合的病毒類型和進(jìn)化枝的范圍的雙特異性和多特異性抗體及其片段的結(jié)合部分，以及含有與具有甲型流感和乙型流感的特征的多個株反應(yīng)的兩個或更多個部分的組合物。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其表現(xiàn)出與乙型流感Yamagata和乙型流感Victoria進(jìn)化枝的每一種的一個或多個株的10nM或更緊密或3nM或更緊密的結(jié)合親和力(KD)。在一些實(shí)施方案中，所述抗體或片段是重組抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段是工程化單特異性抗體或多特異性人單克隆抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了中和乙型流感Yamagata和乙型流感Victoria進(jìn)化枝的一個或多個株對細(xì)胞的感染的抗體或抗原結(jié)合片段。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含(a)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(HCDR1)、(b)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(HCDR2)和(c)重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(HCDR3)的氨基酸序列，HCDR1/HCDR2/HCDR3選自由以下組成的組：SEQIDNO:31/32/33；41/42/43；51/52/53；61/62/63；71/72/73；81/82/83；91/92/93；101/102/103；111/112/113；121/122/123；131/132/133；141/142/143；151/152/153；161/162/163；171/172/173；181/182/183；191/192/193；201/202/203；211/212/213；221/222/223；231/232/233；241/242/243；251/252/253；261/262/263；271/272/273和281/282/283，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含(a)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(LCDR1)、(b)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(LCDR2)和(c)輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(LCDR3)，LCDR1/LCDR2/LCDR3選自由以下組成的組：SEQIDNO:34/35/36；44/45/46；54/55/56；64/65/66；74/75/76；84/85/86；104/105/106；114/115/16；124/125/126；134/135/136；144/145/146；154/155/156；164/165/166；174/175/176；184/185/186；194/195/196；204/205/206；214/215/216；224/225/226；234/235/236；244/245/246；254/255/256；264/265/266；274/275/276和284/285/286，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含選自由以下組成的組的重鏈和輕鏈CDR序列HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3：SEQIDNO:31/32/33/34/35/36；41/42/43/44/45/46；51/52/53/54/55/56；61/62/63/64/65/66；71/72/73/74/75/76；81/82/83/84/85/86；91/92/93/94/95/96；101/102/103/104/105/106；111/112/113/114/115/116；121/122/123/124/125/126；131/132/133/134/135/136；141/142/143/144/145/146；151/152/153/154/155/156；161/162/163/164/165/166；171/172/173/174/175/176；181/182/183/184/185/186；191/192/193/194/195/196；201/202/203/204/205/206；211/212/213/214/215/216；221/222/223/224/225/226；231/232/233/234/235/236；241/242/243/244/245/246；251/252/253/254/255/256；261/262/263/264/265/266；271/272/273/274/275/276；和281/282/283/284/285/286；或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中具有1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供子分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其特異性結(jié)合乙型流感Yamagata和乙型流感Victoria進(jìn)化枝的每一種的一個或多個株，并且包含含有選自由以下組成的組的氨基酸序列的重鏈可變區(qū)(HCVR)：SEQIDNO:39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、229、239、249、259、269、279和289，或與所述HCVR具有至少80％序列同一性的其同源變體；所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含含有選自由以下組成的組的氨基酸序列的輕鏈可變序列(LCVR)：SEQIDNO:40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280和290，或與所述LCVR具有至少80％序列同一性的其同源變體，所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含選自由以下組成的組的HCVR/LCVR序列對：39/40、49/50、59/60、69/70、79/80、89/90、99/100、109/110、119/120、129/130、139/140、149/150、159/160、169/170、179/180、189/190、199/200、209/210、219/220、229/230、239/240、249/250、259/260、269/270、279/280和289/290，或與所述HCVR和/或LCVR具有至少80％序列同一性的其同源變體；所述變體和所述抗體具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含選自由以下組成的組的HCVR/LCVR對：SEQIDNO:79/80、129/130、219/220、229/230、239/240、249/250和269/270，或與所述HCVR和/或LCVR具有至少80％序列同一性的其同源變體；所述變體和所述抗體具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其結(jié)合選自由SEQIDNO:307、308、309、310、311、312和313組成的組的一個或多個表位，或其不連續(xù)表位。在一些實(shí)施方案中，提供了分離的人抗體或其抗原結(jié)合片段，其與如本公開的抗體或片段競爭對乙型流感Yamagata和乙型流感Victoria進(jìn)化枝的每一種的一個或多個株的結(jié)合，當(dāng)以低于100倍過量存在時，置換至少50％的后者。在一些實(shí)施方案中，提供了編碼本公開的抗體或片段的分離的密碼子優(yōu)化的核酸分子。在一些實(shí)施方案中，提供了包含編碼本公開的抗體或片段的核酸分子的表達(dá)載體。在一些實(shí)施方案中，提供了包含含有編碼本公開抗體或片段的核酸分子的表達(dá)載體的用于表達(dá)重組多肽的宿主細(xì)胞。在一些實(shí)施方案中，提供了產(chǎn)生抗乙型流感抗體或其抗原結(jié)合片段的方法，所述方法包括在允許抗體或其片段產(chǎn)生的條件下生長宿主細(xì)胞，和回收所產(chǎn)生的抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，提供了包含抗體或抗原結(jié)合片段和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，所述抗體或抗原結(jié)合片段表現(xiàn)出對乙型流感Yamagata和乙型流感Victoria進(jìn)化枝的每一種的一個或多個株的10nM或更緊密的或3nM或更緊密的結(jié)合親和力(KD)。在一些實(shí)施方案中，提供了包含抗體或抗原結(jié)合片段和藥學(xué)上可接受的載體的藥物組合物，所述抗體或抗原結(jié)合片段包含選自以下序列的HCDR1/HCDR2/HCDR3的氨基酸序列：SEQIDNO:31/32/33；41/42/43；51/52/53；61/62/63；71/72/73；81/82/83；91/92/93；101/102/103；111/112/113；121/122/123；131/132/133；141/142/143；151/152/153；161/162/163；171/172/173；181/182/183；191/192/193；201/202/203；211/212/213；221/222/223；231/232/233；241/242/243；251/252/253；261/262/263；271/272/273和281/282/283，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)，其中所述抗體或片段表現(xiàn)出如在PBS中測量的大于或等于55℃的第一解鏈溫度(Tm1)。在一些實(shí)施方案中，提供了包含一種或多種具有對甲型流感的至少一個株的結(jié)合特異性的人抗體或抗原結(jié)合片段的組合物。在一些方面，具有對甲型流感的特異性的抗體或抗原結(jié)合片段包括對對組1和組2的一個或多個株的特異性。在一些實(shí)施方案中，提供了藥物組合物，所述藥物組合物包含(a)第一抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:11、12、13的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)；和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:14、15、16的LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體能夠結(jié)合和/或抑制流感病毒；(b)第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:21、22、23的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:24、25、26的CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體能夠結(jié)合和/或抑制流感病毒；和(c)第三抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有輕鏈CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，所述HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3分別選自:(i)SEQIDNO:71、72、73，和SEQIDNO:74、75、76；(ii)SEQIDNO:91、92、93，和SEQIDNO:94、95、96；(iii)SEQIDNO:101、102、103，和SEQIDNO:104、105、106；(iv)SEQIDNO:121、122、123，和SEQIDNO:124、125、126；(v)SEQIDNO:181、182、183，和SEQIDNO:184、185、186；(vi)SEQIDNO:191、192、193，和SEQIDNO:194、195、196；(vii)SEQIDNO:201、202、203，和SEQIDNO:204、205、206；(viii)SEQIDNO:211、212、213，和SEQIDNO:214、215、216；(ix)SEQIDNO:221、222、223，和SEQIDNO:224、225、226；(x)SEQIDNO:231、232、233，和SEQIDNO:234、235、236；(xi)SEQIDNO:241、242、243，和SEQIDNO:244、245、246；(xii)SEQIDNO:261；262、263，和SEQIDNO:264、265、266；或(xiii)SEQIDNO:271、272、273，和SEQIDNO:274、275、276，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體或片段能夠結(jié)合和/或抑制流感病毒。在一些實(shí)施方案中，所述第一抗體或片段包含SEQIDNO:19/20的HCVR/LCVR對，或在HCVR或LCVR結(jié)構(gòu)域序列中的一個或兩個中包含至少80％序列同一性的其高度同源變體；所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，所述第二抗體或片段包含SEQIDNO:29/30的HCVR/LCVR對，或在HCVR或LCVR結(jié)構(gòu)域序列中的一個或兩個中包含至少80％序列同一性的其高度同源變體；所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，所述第三抗體或片段包含選自由以下組成的組的HCVR/LCVR對：SEQIDNO:79/80、99/100、109/110、129/130、189/190、199/200、209/210、219/220、229/230、239/240、249/250、269/270和279/280，或在HCVR或LCVR結(jié)構(gòu)域序列中的一個或兩個中包含至少80％序列同一性的其高度同源變體；所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，所述第三抗體或片段包含選自由以下組成的組的HCVR/LCVR對：SEQIDNO:79/80、129/130、219/220、229/230、239/240、249/250和269/270，或在HCVR或LCVR結(jié)構(gòu)域序列中的一個或兩個中包含至少80％序列同一性的其高度同源變體，并且所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了包含所述第一、第二和第三抗體或片段的組合物，所述抗體或片段表現(xiàn)出均在2pI點(diǎn)范圍內(nèi)的等電點(diǎn)(pI)。在具體實(shí)施方案中，提供了包含第一抗體、第二抗體和第三抗體的組合物，所述第一抗體為含有SEQIDNO:17/18的HC/LC氨基酸序列的TRL053/Mab53、所述第一抗體為包含SEQIDNO:27/28的HC/LC氨基酸序列的抗體TRL579/Mab579，所述第三抗體選自由以下組成的組：分別包含選自由227/228、207/208、247/248、237/238、217/218、267/268、77/78和127/128組成的組的HC/LC氨基酸序列的TRL847、TRL845、TRL849、TRL848、TRL846、TRL854、TRL809和TRL832，或在HC或LC結(jié)構(gòu)域序列中的一個或兩個中包含至少80％序列同一性的其高度同源變體；所述變體和所述抗體或片段具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在具體實(shí)施方案中，提供了包含本公開的所述第一、第二和第三抗體或片段的每一種的組合物，以對于治療或預(yù)防有此需要的受試者的甲型流感和乙型流感感染或疾病是有效的量將所述第一、第二和第三抗體或片段的每一種配制在單個劑量中。在具體實(shí)施方案中，提供了以每劑量100mg/kg或更少的所述第一、第二和第三抗體或片段的每一種的量；以每劑量10mg/kg或更少的所述第一、第二和第三抗體或片段的每一種的量；或以每劑量1mg/kg或或更少的所述第一、第二和第三抗體或片段的每一種的量包含本公開的第一、第二和第三抗體或片段的組合物。在一些實(shí)施方案中，所述第一、第二和第三抗體或片段的每一種各自以每劑量10mg/kg或更少的總的抗體或抗體片段的量存在于組合物中。在具體實(shí)施方案中，提供了用于經(jīng)鼻或肺部遞送的包含載體、稀釋劑和/或賦形劑的組合物。在一些實(shí)施方案中，提供了組合物，所述組合物包含本公開的抗體或片段并且還包含抗病毒治療劑、病毒復(fù)制抑制劑、蛋白酶抑制劑、聚合酶抑制劑、血凝素抑制劑、支氣管擴(kuò)張藥或吸入皮質(zhì)類固醇的一種或多種。在一些實(shí)施方案中，所述可免疫調(diào)節(jié)劑是干擾素β1a；所述抗病毒治療劑是選自由奧司他韋、扎那米韋、帕拉米韋和拉尼米韋組成的組的神經(jīng)氨酸酶抑制劑；所述抗病毒治療劑是選自由法維拉韋(T-705)和VX787組成的組的RNA聚合酶抑制劑；所述抗病毒治療劑是選自由流感酶(Das181)和AB-103(p2TA)組成的組的宿主細(xì)胞靶向治療劑；所述抗病毒治療劑是選自由金剛乙胺和金剛烷胺組成的組的離子通道抑制劑；以及所述支氣管擴(kuò)張藥選自沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇或法美特羅。在一些實(shí)施方案中，提供了組合物，所述組合物以對于治療或預(yù)防有此需要的受試者的甲型流感和乙型流感感染或疾病是有效的量包含本公開的所述第一、第二和第三抗體或片段的每一種的組合物，其中所述抗體或其抗原結(jié)合片段的一種或多種是選自Fab、Fab’和F(ab’)2、scFv、dAb或多特異性抗體的抗體片段，包含選自由以下組成的組的HCDR1/HCDR2/HCDR3氨基酸序列：11/12/13、21/22/23、71/72/73、74/75/76、91/92/93、101/102/103、121/122/123、181/182/183、191/192/193、201/202/203、211/212/213、221/222/223、231/232/233、241/242/243、261/262/263和271/272/273，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體具有結(jié)合和/或抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了用于治療或預(yù)防受試者的流感感染的方法，所述方法包括向受試者施用(a)第一抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:11、12、13的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:14、15、16的LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體或片段能夠結(jié)合和/或抑制流感病毒；(b)第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:21、22、23的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)的，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:24、25、26的CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體或片段能夠結(jié)合和/或抑制流感病毒；和(c)第三抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有輕鏈CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)，所述HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3分別選自由以下組成的組：(i)SEQIDNO:71、72、73，和SEQIDNO:74、75、76；(ii)SEQIDNO:91、92、93，和SEQIDNO:94、95、96；(iii)SEQIDNO:101、102、103，和SEQIDNO:104、105、106；(iv)SEQIDNO:121、122、123，和SEQIDNO:124、125、126；(v)SEQIDNO:181、182、183，和SEQIDNO:184、185、186；(vi)SEQIDNO:191、192、193，和SEQIDNO:194、195、196；(vii)SEQIDNO:201、202、203，和SEQIDNO:204、205、206；(viii)SEQIDNO:211、212、213，和SEQIDNO:214、215、216；(ix)SEQIDNO:221、222、223，和SEQIDNO:224、225、226；(x)SEQIDNO:231、232、233，和SEQIDNO:234、235、236；(xi)SEQIDNO:241、242、243，和SEQIDNO:244、245、246；(xii)SEQIDNO:261；262、263，和SEQIDNO:264、265、266或(xiii)SEQIDNO:271、272、273，和SEQIDNO:274、275、276，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體或片段能夠結(jié)合并抑制流感病毒。在一些實(shí)施方案中，同時或依序施用所述第一、第二和第三抗體或片段的每一種。在一些實(shí)施方案中，向受試者施用本公開的抗流感組合物，其中確定所述受試者的流感感染狀態(tài)而無需詳盡的病毒株確定。在一些實(shí)施方案中，向受試者施用本公開的抗流感組合物，其中保護(hù)受試者免受流感感染或疾病。如在本領(lǐng)域中是相當(dāng)清楚的，基于非免疫球蛋白的蛋白可具有與抗體相似的表位識別性質(zhì)，并且也可提供合適的實(shí)施方案，包括基于纖連蛋白、轉(zhuǎn)鐵蛋白和脂質(zhì)運(yùn)載蛋白的結(jié)合劑?；诤怂岬牟糠郑T如適體也具有這些結(jié)合性質(zhì)。在其它實(shí)施方案中，本發(fā)明涉及包含本發(fā)明的結(jié)合部分的藥物組合物和制劑，具體地涉及其中結(jié)合部分以促進(jìn)從血至肺內(nèi)分配的方式與紅細(xì)胞共價或非共價地締合的那些組合物和制劑，涉及使用本發(fā)明的結(jié)合部分被動抑制受試者的病毒感染(在正常群體中或在可能已暴露于病毒的受試者中作為預(yù)防劑，或在已被感染的受試者中作為治療劑)的方法。本發(fā)明還涉及產(chǎn)生抗體或片段的重組材料和方法，包括這些重組材料和方法用于在受試者中原位產(chǎn)生抗體或片段的用途。在一些實(shí)施方案中，提供了結(jié)合流感病毒并有效地針對流感病毒的結(jié)合分子(特別是人單克隆抗體或其片段)的組合，其中所述組合有效地針對組1甲型流感病毒、組2甲型流感病毒和乙型流感病毒?？贵w的組合在治療或預(yù)防甲型和乙型流感病毒中是有效的，從而在單個組合物或劑量中提供了針對所有相關(guān)和循環(huán)流感病毒的有效試劑。在一些實(shí)施方案中，提供了包含單克隆抗體的組合物，每一種單克隆抗體以低的nM或亞-nM親和力結(jié)合流感病毒。提供了組合組合物，其包含特別地針對組1甲型流感病毒的抗體或抗體片段、特別地針對組2甲型流感病毒的抗體或結(jié)合片段和特別地針對乙型流感病毒(包括Yamagata和VictoriaB譜系)的抗體或結(jié)合片段。在一些實(shí)施方案中，提供了抗體的組合，其包含針對組1甲型流感，在更具體的實(shí)施方案中特別地至少H1流感病毒的第一抗體，針對組2甲型流感，在更具體的實(shí)施方案中特別地針對至少H3流感病毒的第二抗體，以及針對乙型流感病毒，在更具體的實(shí)施方案中特別地針對Yamagata和Victoria譜系的第三抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了組合物，其包含流感單克隆抗體或其片段的組合或由所述組合組成，所述組合物在用于甲型流感和乙型流感的治療或預(yù)防的組合中是有效的。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包含含有選自由以下組成的組的重鏈可變區(qū)(HCVR)的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段：SEQIDNO:39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、229、239、249、259、269、279和289，或具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其同源序列。在另一個實(shí)施方案中，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含具有選自由SEQIDNO:79、99、109、129、189、199、209、219、229、239、249、269和279組成的組的氨基酸序列的HCVR。在另一個實(shí)施方案中，所述抗體或其片段包含含有SEQIDNO:209、229、239、249或269的HCVR。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包含含有選自由以下組成的組的輕鏈可變區(qū)(LCVR)抗體或抗體的抗原結(jié)合片段：SEQIDNO:40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280和290，或具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的基本上同源的序列。在另一個實(shí)施方案中，抗體或抗體的抗原結(jié)合部分包含具有選自由SEQIDNO:80、100、110、130、190、200、210、220、230、240、250、270或280組成的組的氨基酸序列的LCVR。在另一個實(shí)施方案中，所述抗體或其片段包含含有SEQIDNO:210、230、240、250或270的LCVR。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包含組合物，所述組合物包含含有選自由以下的一個或多個組成的組的重鏈可變區(qū)(HCVR)的抗體或抗原結(jié)合片段：SEQIDNO:39、49、59、69、79、89、99、109、119、129、139、149、159、169、179、189、199、209、219、229、239、249、259、269、279和289、或具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其同源序列。在另一個實(shí)施方案中，所述組合物包含抗體或其抗原結(jié)合片段，所述抗體或其抗原結(jié)合片段包含具有選自由SEQIDNO:79、99、109、129、189、199、209、219、229、239、249、269和279組成的組的氨基酸序列的HCVR。在另一個實(shí)施方案中，所述組合物包含抗體或其片段，所述抗體或其片段包含含有SEQIDNO:209、229、239、249或269的HCVR。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包含組合物，所述組合物包含含有選自由以下組成的組的輕鏈可變區(qū)(LCVR)的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段：SEQIDNO:40、50、60、70、80、90、100、110、120、130、140、150、160、170、180、190、200、210、220、230、240、250、260、270、280和290，或具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其同源序列。在另一個實(shí)施方案中，所述組合物包含抗體或抗體的抗原結(jié)合部分，所述抗體或抗體的抗原結(jié)合部分包含具有選自由SEQIDNO:80、100、110、130、190、200、210、220、230、240、250、270或280組成的組的氨基酸序列的LCVR。在另一個實(shí)施方案中，所述組合物包含抗體或其片段，所述抗體或其片段包含含有SEQIDNO:210、230、240、250或270的LCVR。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包含組合物，所述組合物包含如本文中提供的B抗體(抗B型)或片段和包含選自由SEQIDNO:19和29的一個或多個組成的組的重鏈可變區(qū)(HCVR)或具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其同源序列的抗體或抗原結(jié)合片段。在一個實(shí)施方案中，本發(fā)明包含組合物，所述組合物包含如本文中提供的B抗體或片段和包含選自由SEQIDNO:20和30組成的組的輕鏈可變區(qū)(LCVR)的抗體或抗體的抗原結(jié)合片段或具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的其同源序列。在更具體的實(shí)施方案中，組合物包含至少一種B抗體和至少一種或至少兩種A抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了包含HC和LC可變區(qū)氨基酸序列的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述HCVR包含選自如下序列的任一個的HCDR1/HCDR2/HCDR3氨基酸序列：SEQIDNO:31/32/33；41/42/43；51/52/53；61/62/63；71/72/73；81/82/83；91/92/93；101/102/103；111/112/113；121/122/123；131/132/133；141/142/143；151/152/153；161/162/163；171/172/173；181/182/183；191/192/193；201/202/203；211/212/213；221/222/223；231/232/233；241/242/243；251/252/253；261/262/263；271/272/273和281/282/283，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，并且所述LCVR包含選自如下序列的任一個的LCDR1/LCDR2/LCDR3氨基酸序列：SEQIDNO:34/35/36；44/45/46；54/55/56；64/65/66；74/75/76；84/85/86；104/105/106；114/115/16；124/125/126；134/135/136；144/145/146；154/155/156；164/165/166；174/175/176；184/185/186；194/195/196；204/205/206；214/215/216；224/225/226；234/235/236；244/245/246；254/255/256；264/265/266；274/275/276和284/285/286，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體。在一些實(shí)施方案中，提供了包含F(xiàn)c修飾以延長血清半衰期的抗體或抗原結(jié)合片段。此類修飾公開于XencorXtendTM抗體工程技術(shù)(Xencor,Melbourne,AU)中。在一些方面，包含F(xiàn)c修飾的抗體或片段顯示與SEQIDNO:297、17、2737、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277或287具有大于80％、大于90％、大于95％或大于99％的序列同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，不受理論束縛，因?yàn)樵谖胫苿┲袘?yīng)用模式Fab，所以提供了為scFv的抗原結(jié)合片段。此類工程化抗體不存在于自然界中。在一些實(shí)施方案中，提供了包含選自如下序列的任一個的HCDR1/HCDR2/HCDR3氨基酸序列的工程化抗體或結(jié)合片段：SEQIDNO:31/32/33；41/42/43；51/52/53；61/62/63；71/72/73；81/82/83；91/92/93；101/102/103；111/112/113；121/122/123；131/132/133；141/142/143；151/152/153；161/162/163；171/172/173；181/182/183；191/192/193；201/202/203；211/212/213；221/222/223；231/232/233；241/242/243；251/252/253；261/262/263；271/272/273和281/282/283，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體。在一些實(shí)施方案中，提供了用于表達(dá)本文提供的抗體和片段的密碼子優(yōu)化的核酸。在一些實(shí)施方案中，此類非天然存在的核酸被用于產(chǎn)生較高表達(dá)水平。在一些實(shí)施方案中，將密碼子優(yōu)化的核酸用于產(chǎn)生本文提供的重組抗體或片段。在一些實(shí)施方案中，提供了包含HC和LC可變區(qū)氨基酸序列的抗體或抗原結(jié)合片段，其中所述HCVR包含選自以下序列的任一序列的HCDR1/HCDR2/HCDR3氨基酸序列：SEQIDNO:31/32/33；41/42/43；51/52/53；61/62/63；71/72/73；81/82/83；91/92/93；101/102/103；111/112/113；121/122/123；131/132/133；141/142/143；151/152/153；161/162/163；171/172/173；181/182/183；191/192/193；201/202/203；211/212/213；221/222/223；231/232/233；241/242/243；251/252/253；261/262/263；271/272/273和281/282/283，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，并且所述LCVR包含選自以下序列的任一個的LCDR1/LCDR2/LCDR3氨基酸序列：SEQIDNO:34/35/36；44/45/46；54/55/56；64/65/66；74/75/76；84/85/86；104/105/106；114/115/16；124/125/126；134/135/136；144/145/146；154/155/156；164/165/166；174/175/176；184/185/186；194/195/196；204/205/206；214/215/216；224/225/226；234/235/236；244/245/246；254/255/256；264/265/266；274/275/276和284/285/286，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體。在一些實(shí)施方案中，提供了包含F(xiàn)c修飾以延長血清半衰期的抗體或抗原結(jié)合片段。此類修飾公開于XencorXtendTM抗體工程技術(shù)(Xencor,Melbourne,AU)中。在一些方面，包含F(xiàn)c修飾的抗體或片段顯示出與SEQIDNO:297、17、27、37、47、57、67、77、87、97、107、117、127、137、147、157、167、177、187、197、207、217、227、237、247、257、267、277或287具有大于80％、大于90％、大于95％或大于99％序列同一性的氨基酸序列。在一些實(shí)施方案中，提供了包含選自以下序列的任一個的HCDR1/HCDR2/HCDR3氨基酸序列的工程化抗體或結(jié)合片段：SEQIDNO:31/32/33；41/42/43；51/52/53；61/62/63；71/72/73；81/82/83；91/92/93；101/102/103；111/112/113；121/122/123；131/132/133；141/142/143；151/152/153；161/162/163；171/172/173；181/182/183；191/192/193；201/202/203；211/212/213；221/222/223；231/232/233；241/242/243；251/252/253；261/262/263；271/272/273和281/282/283，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體。在一些實(shí)施方案中，提供了用于表達(dá)本文中提供的抗體和片段的密碼子優(yōu)化的核酸。在一些實(shí)施方案中，將此類非天然存在的核酸用于產(chǎn)生較高表達(dá)水平。在一些實(shí)施方案中，將密碼子優(yōu)化的核酸分子用于產(chǎn)生本文中提供的重組抗體和片段。附圖簡述圖1顯示從Suzuki,Y.等，Mol.Biol.Evol.(2002)19:501–509改進(jìn)的本領(lǐng)域中已知的甲型和乙型流感病毒至重要進(jìn)化枝的組的分類。圖2顯示來自Dreyfus,C.等，Science(2012)337:1343–1348的兩個乙型流感進(jìn)化枝Yamagata和Victoria內(nèi)的代表性株。代表性Yamagata進(jìn)化枝包括Mississippi/04/2008；Florida/4/2006；Jilin/20/2003；Houston/B60/1997；Harbin/7/1994和Nashville/45/1991。代表性Victoria進(jìn)化枝包括Malaysia/2506/2004；Mississippi/07/2008；Brisbane/60/2008和Ohio/01/2005。圖3顯示具有舉例說明幾種抗乙型流感mAb和兩種抗甲型流感mAb與甲型和乙型流感病毒株的反應(yīng)性的重組HAELISA數(shù)據(jù)的表7。以一式三份重復(fù)進(jìn)行重組HAELISA，并且顯示了相對于背景的平均倍數(shù)反應(yīng)性(相對熒光單位)。圖3顯示了抗BmAbTRL809、TRL812、TRL813；TRL832、TRL841、TRL842、TRL845、TRL846、TRL847、TRL848、TRL849、TRL854和TRL856的每一種具有針對乙型流感病毒的兩個譜系(包括Yamagata進(jìn)化枝的B/Florida/06、B/Mass/12和B/Wisconsin/10和Victoria進(jìn)化枝的B/Brisbane/08、B/Malaysia/04和B/Victoria/87)的廣泛交叉反應(yīng)性。抗甲型流感mAbCF401(mAb53)和CF402(mAb579)具有與甲型流感H1(A/California/09)和H3(A/Sydney/97)亞型的成員但非與乙型流感病毒株的反應(yīng)性。圖4顯示具有針對代表性株B/Yamagata/16/1988和B/Victoria/2/1987的抗乙型流感抗體TRL845、TRL848、TRL849、TRL854、TRL832和TRL809的中和IC50數(shù)據(jù)的表8。圖5A顯示在于用10xLD50的B/Florida(Yamagata譜系)感染的小鼠中鼻內(nèi)(IN)對比腹膜內(nèi)(IP)施用5A7后，表示為百分比體重的抗乙型流感抗體5A7在小鼠中的體內(nèi)活性。通過IN或IP途徑用mAb在感染后24小時(24hpi)處理小鼠，每日記錄體重作為疾病嚴(yán)重度的指征，以PBS和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，并將相對于初始第0天的體重的百分比體重用于繪制曲線。對體重減輕>30％的小鼠施以無痛致死。1mg/kgIN提供免于體重減輕的完全保護(hù)，然而通過IP途徑的1mg/kg具有一定的體重減輕。顯示了IN施用途徑相對于IP施用途徑的增強(qiáng)的功效。圖5B顯示在5A7的IN對比IP施用后，表示為百分比體重的抗乙型流感抗體5A7在用10xLD50的B/Malaysia(Victoria譜系)感染的小鼠中的體內(nèi)活性。通過IN或IP途徑在24hpi用mAb處理小鼠，每日測量體重作為疾病嚴(yán)重度的指示。對體重減輕>30％的小鼠施以無痛致死。1mg/kgIN提供免于體重減輕的完全保護(hù)，然而通過IP途徑的1mg/kg具有一定的體重減輕。顯示了IN施用途徑相對于IP施用途徑的增強(qiáng)的功效。圖6A-D顯示在通過IN途徑施用1mg/kg后，在鼠模型中感染后1天本發(fā)明的抗乙型流感mAb針對10xLD50(引起50％致死率的劑量)病毒的體內(nèi)活性，評估小鼠體重直至感染后14天，以PBS和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，并將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。圖6A顯示通過IN途徑施用的1mg/kg的mAbTRL845、TRL847、TRL848、TRL849和5A7在用代表Victoria進(jìn)化枝的B/Malaysia/2506/04感染小鼠中提供了免患疾病的保護(hù)。圖6B顯示通過IN途徑施用的1mg/kg的mAbTRL845、TRL847、TRL848、TRL849和5A7在用代表Yamagata進(jìn)化枝的B/Florida/04/2006感染的小鼠中提供了免患疾病的保護(hù)。圖6C顯示通過IN途徑施用的1mg/kg的mAbTRL849、TRL846、TRL854、TRL856、TRL847和5A7在用代表Victoria進(jìn)化枝的B/Malaysia/2506/04感染的小鼠中提供免患疾病的保護(hù)。圖6D顯示通過IN途徑施用的1mg/kg的TRL849、TRL846、TRL854、TRL856、TRL847和5A7在用代表Yamagata進(jìn)化枝的B/Florida/04/2006感染的小鼠中提供免患疾病的保護(hù)。圖7A-7D顯示3種抗流感mAb的共施用不干擾抗BmAb效率。用10xLD50病毒感染小鼠，并在24hpi用3mg/kg由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理小鼠，以PBS和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，并將點(diǎn)初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。圖7A-7D一起顯示了所述混合物將提供預(yù)期水平的保護(hù)而不干擾混合物中的其它mab針對來自所有季節(jié)性流感亞型(H1N1、H3N2以及B的兩個譜系)的代表性株。圖7A顯示用10xLD50H1N1感染的并在24hpi用3mg/kg由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7B顯示用10xLD50H3N2感染的并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7C顯示用10xLD50B/Yamagata譜系感染的并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7D顯示用10xLD50B/Victoria譜系感染的并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖8顯示由PEPSCANInc.制造的B/Lee/1940/HA蛋白(SEQIDNO:291)的CLIPSTM肽陣列(上圖)。B/Lee/1940/HA蛋白的陰影區(qū)域?qū)?yīng)于用于從aa_15-65(SEQIDNO:292)、aa_300-359(SEQIDNO:293)和aa_362-481(SEQIDNO:294)產(chǎn)生肽陣列的殘基。表9(下圖)顯示mAb5A7表位1-aa_333-338(SEQIDNO:304)、表位2-aa_342-346(SEQIDNO:305)和表位3-aa_457-463(SEQIDNO:306)；mAbTRL845表位-aa_455-463(SEQIDNO:307)；TRL848表位1-aa_64-71(SEQIDNO:308)；表位2-aa_336-348(SEQIDNO:309)；表位3-aa_424-428(SEQIDNO:310)；mAb849表位1-aa_317-323(SEQIDNO:311)、表位2-aa_344-349312)、表位3-aa_378-383(SEQIDNO:313)；mAb854表位1-aa_457-463(SEQIDNO:314)。右下方的附圖顯示以深灰色顯示的解析至HA的莖上的區(qū)域。圖9舉例說明通過PEPSCANTM分析沿著HA蛋白的莖定位的表位。陰影區(qū)域描繪了每一種mAb所結(jié)合的表位。mAbTRL848、TRL845、TRL854和TRL849識別沿著HA的莖部分重疊的不表位。來源于公布的序列的對照mAb5A7產(chǎn)生的類似但唯一的表位。圖10A-10F顯示mAbTRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的解鏈曲線測定。每一種mAb表現(xiàn)出高的熱穩(wěn)定性。圖10A顯示TRL845的解鏈曲線，其分別顯示在58.3℃和68.7℃的兩個解鏈溫度(Tm1,Tm2)。圖10B顯示具有mAbTRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的解鏈溫度(Tm)的表10，如分別在圖10A和10C-10F中顯示的。圖10C顯示TRL847的解鏈曲線，其顯示70.3℃的解鏈溫度(Tm1)。圖10D顯示TRL848的解鏈曲線，其顯示70.1℃的解鏈溫度(Tm1)。圖10E顯示TRL849的解鏈曲線，其顯示分別在70℃和81.8℃的2個解鏈溫度(Tm1,Tm2)。圖10F顯示TRL854的解鏈曲線，其顯示分別在59.7℃和68.9℃的2個解鏈溫度(Tm1,Tm2)。圖11A顯示以可比較的劑量進(jìn)行的IN和IP施用，以及顯示MabIN的效力為通過IP施用的同一Mab的效力的10至100倍。用10XLD50和H1流感病毒(A/PuertoRico/8/1934)接種動物，并在24hpi通過IN或IP，用10mg/kg、1mg/kg和0.1mg/kg的中和CA6261Mab處理所述動物，以PBS和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。數(shù)據(jù)顯示中和抗體的IN遞送相較于全身性遞送顯著增強(qiáng)它們的治療功效。圖11B顯示抗體MAb53(TRL053)的IN和IP施用在針對H1病毒的治療功效上的評價。用10XLD50的H1甲型流感病毒/PuertoRico/8/1934(PR8)接種動物，并在24hpi利用10mg/kg、1mg/kg和0.1mg/kg的中和抗體TRL053(MAb53)(通過IN或IP施用的)處理動物，以PBS處理和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，并將點(diǎn)初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。IN施用的TRL053顯示比IP給藥更大的功效。TRL053僅在10mg/kg的IP劑量上在一定程度上有效。IN劑量在10mg/kg和1mg/kg上有效。圖12A顯示在IN與IP可比較的劑量上的比較，以及顯示MabCA8020IN的效力為通過IP施用的同一Mab的效力的10至100倍。用10XLD50的H3流感病毒接種動物，并在IN或IP24hpi通過IN或IP用10mg/kg、1mg/kg和0.1mg/kg的中和CA8020Mab處理動物，以PBS和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。圖12B顯示抗體MAb579(TRL579)的IN和IP施用在針對H3病毒的治療功效上的評價。用10XLD50的Vic/11H3病毒接種動物，并在24hpi利用10mg/kg、1mg/kg和0.1mg/kg的中和抗體TRL579(通過IN或IP施用的)處理動物。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天。TRL579對于IP或IN是有效的，然而IN施用的TRL579顯示比IP給藥更大的功效。TRL579僅在10mg/kg的IP劑量上在一定程度上有效。在本研究中IN劑量在10mg/kg和1mg/kg上是有效的。圖13顯示在用病毒感染之前3或4天進(jìn)行的預(yù)防性IN和IP施用。在用3XLD50的H1流感病毒A/PuertoRico/8/1934(表示為PR8)攻擊之前3或4天，通過IN或IP施用抗體CA6261。在感染之前3天(-3dpi)或在感染之前4天(-4dpi)，通過IN(0.1mg/kg)或IP(0.1mg/kg和1mg/kg)施用CA6261抗體，并用H1流感病毒進(jìn)行攻擊。對照是無病毒和無處理。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。圖13顯示在感染之前長達(dá)4天(-4dpi)的IN施用(在0.1mg/kg上評估的)保護(hù)小鼠免受病毒攻擊。以相同劑量(0.1mg/kg)在感染之前3或4天進(jìn)行的IP施用完全無效。感染前3或4天的IP施用在1mg/kg上是有效的。通過在-3dpi和-4dpi比較IN(0.1mg/kg)與IP(1mg/kg)施用，在兩個情況下，低為1/10的IN劑量比IP有效。圖14顯示在用病毒感染前5、6或7天進(jìn)行的預(yù)防性IN和IP施用。在用3XLD50的H1流感病毒PR8攻擊前5、6或7天通過IP(以1mg/kg)或IN(以1mg/kg)施用抗體CA6261。對照為Tamiflu(口服給予的10mg/kg，每日2次，持續(xù)5天)、無處理和無病毒。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。在所有情況下，抗體比Tamiflu更有效。圖15顯示在用病毒感染(以10XLD50的較高劑量進(jìn)行病毒攻擊)前5、6或7天進(jìn)行的預(yù)防性IN和IP施用。在用10XLD50的H1流感病毒PR8攻擊之前5、6或7天，通過IP(以1mg/kg)或IN(以1mg/kg)施用抗體CA6261。對照為Tamiflu(口服給予的10mg/kg，每日2次，持續(xù)5天)、無處理和無病毒。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。在本研究中，只有向氣道施用(通過鼻內(nèi)施用)抗體的動物才在病毒攻擊時完全存活下來。通過在病毒攻擊之前5、6或7天施用1mg/kg的抗體處理的小鼠未獲得完全保護(hù)，并且小鼠死于感染。Tamiflu在保護(hù)上完全無效。在病毒感染之前5或6天通過鼻內(nèi)施用0.1mg/kg抗體處理的小鼠在病毒攻擊時存活下來，幾乎與未被感染的對照動物一樣好。圖16顯示具有單克隆抗乙型流感抗體在血凝抑制、B/Victoria和B/Yamagata譜系體外中和、預(yù)測的結(jié)合部位(頭、莖)和體內(nèi)功效中的評估的表11。體內(nèi)結(jié)果被提供為在每一種情況下，評價用10xLD50的病毒接種并在24hpi被施用1mg/kg的指定的TRL抗體的動物的相對于初始體重的百分比的3個不同研究的概括。觀測動物體重，持續(xù)14天，標(biāo)明觀測到的最低體重。顯示了抗體TRL809、TRL832、TRL846、TRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的每一個的結(jié)果，所述抗體對于在整個體內(nèi)功效評價中維持至少95％的初始動物體重是有效的。TRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的每一種對于在整個體內(nèi)功效評價中維持至少96％的初始動物體重是有效的。雖然TRL846在常規(guī)體外測定中未表現(xiàn)出中和，但其確實(shí)表現(xiàn)出外出抑制，從而被認(rèn)為具有中和作用。圖17顯示具有B抗體的等電點(diǎn)以及B/Florida(Yamagata譜系)和B/Malaysia(Victoria譜系)流感病毒株的親和對力(以nM表示的KD)的表征的表12。評價B抗體對于流感病毒的親和力以用作相關(guān)功效的指標(biāo)方面。TRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的每一種對于B/Malaysia的親和力在每一種情況下(數(shù)據(jù)未顯示)是亞-nM(<1.0nM)的。圖18顯示利用B/Florida(Yamagata譜系)病毒，針對在24hpi施用的各種乙型流感抗體進(jìn)行的動物功效研究。對于10XLD50病毒在24hpi以1mg/kg通過IN施用所有抗體。所測試的抗體為TRL845、TRL847、TRL848、TRL849、5A7和CA8033。PBS和無病毒為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。IN施用的抗乙型流感抗體顯示針對利用10XLD50劑量的Yamagata譜系病毒的感染的功效，幾種抗體顯示抗體處理的被感染的動物保持100％的體重。圖19顯示利用B/Florida(Yamagata譜系)病毒，針對在24hpi施用的各種乙型流感抗體進(jìn)行的動物功效研究。對于10XLD50的病毒，在24hpi以1mg/kg通過IN施用所有抗體。所測試的抗體為TRL849、TRL846、TRL854、TRL856、TRL847、5A7、TRL809和TRL848。PBS和無病毒為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。IN施用的抗乙型流感抗體顯示針對利用10XLD50劑量的Yamagata譜系病毒的感染的功效，幾種抗體顯示抗體處理的被感染的動物保持100％的體重。圖20顯示利用B/Malaysia(Victoria譜系)病毒，針對在24hpi施用的各種乙型流感抗體進(jìn)行的動物功效研究。對于10XLD50的病毒，在24hpi以1mg/kg通過IN施用所有抗體。所測試的抗體為TRL845、TRL847、TRL848、TRL849、5A7和CA8033。PBS和無病毒為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。IN施用的抗乙型流感抗體顯示針對利用10XLD50劑量的YVictoria譜系病毒的感染的功效，幾種抗體顯示抗體處理的被感染的動物保持100％的體重。圖21顯示利用B/Malaysia(Victoria譜系)病毒，針對在24hpi施用的各種乙型流感抗體進(jìn)行的動物功效研究。對于10XLD50的病毒，在24hpi以1mg/kg通過IN施用所有抗體。所測試的抗體為TRL849、TRL846、TRL854、TRL856、TRL847、5A7、TRL809和TRL848。PBS和無病毒為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。IN施用的抗乙型流感抗體顯示針對利用10XLD50劑量的Victoria譜系病毒的感染的功效，幾種抗體顯示抗體處理的被感染的動物保持100％的體重。圖22A和22B顯示在利用(圖22A)Victoria譜系病毒B/Malaysia和(圖22B)Yamagata譜系病毒B/Florida的動物研究中進(jìn)行的抗乙型流感抗體的功效評估。用10xLD50的病毒感染小鼠，并在IN24hpi用1mg/kg劑量的抗體通過IN處理小鼠。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。所測試的抗體為如所指定的TRL809、TRL832、抗體5A7和TRL579。TRL579是抗H3抗體并用作陰性對照。TRL809和TRL832通過阻斷病毒結(jié)合來中和乙型流感。IN施用的抗乙型流感抗體TRL809、TRL832和5A7表現(xiàn)出針對利用10XLD50劑量的Victoria譜系病毒的感染的功效，從而顯示抗體處理的被感染的動物保持～100％的體重。圖23顯示使用抗體TRL053、TRL579和5A7的組合的IN施用評價針對甲型流感或乙型流感病毒的抗病毒功效的動物研究。利用H1病毒PR8、H3病毒Victoria/11、乙型流感病毒B/Malaysia或乙型流感病毒B/Florida感染動物，隨后不處理動物或用所述3種抗體的混合物處理動物。以1mg/kg的劑量包含每一種抗體，從而提供3mg/kg的總抗體劑量。對于混合物處理的動物，對于10XLD50的如所指定的病毒，在24hpi施用組合抗體。無病毒被描述為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。圖23提供了在利用10xLD50的病毒感染后24小時作為單一混合劑量施用的抗體混合物表現(xiàn)出針對利用H1病毒、H3病毒、B/Yamagata譜系病毒和B/Victoria譜系病毒的每一種或任一種的感染的功效。圖24顯示其中當(dāng)在感染后4天通過單次施用1mg/kg的CF-401時，100％的小鼠在來自致死劑量的H1N1攻擊時存活下來的動物研究。護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)Tamiflu的施用不具保護(hù)作用，此外CF-401mAb療法還提供額外的免受體重減輕的保護(hù)。在第4-8天每日二次口服施用10mg/kgTamiflu。數(shù)據(jù)顯示當(dāng)在晚期時間點(diǎn)施用時，護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)(Tamiflu)加上mAb療法是有效的。圖25提供了在針對H1病毒的治療功效上比較CA6261抗體的模式抗體片段Fab的IN對比IP施用的結(jié)果。用10XLD50的H1流感病毒接種動物，并在24hpi用10mg/kg、1mg/kg和0.1mg/kg的通過IN或IP施用的中和CA6261Fab處理動物，將PBS處理和無病毒用作對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。通過IN施用的所有劑量的FabCA6261抗體顯示比任何IP劑量更大的功效。中和FabIP的施用甚至在最高劑量10mg/kg上未顯示可檢測的功效。詳述危脅生命的季節(jié)性和大流行性流感的感染仍然是在美國單獨(dú)殺死40,000人的嚴(yán)重疾病。季節(jié)性疫苗的可用性未能消除作為重大臨床問題的流感。只存在一種在實(shí)踐中使用的用于流感的批準(zhǔn)的藥物然而，流感已表現(xiàn)出發(fā)展對和其它神經(jīng)氨酸酶抑制劑的抗性的強(qiáng)烈傾向。此外，已知如果在癥狀發(fā)作48小時后給予，基本上失去功效。靶向流感的抗體提供了針對疫苗的另一選擇方案，并且可在治療或預(yù)防感染中迅速見效，而疫苗通常需要數(shù)周時間來誘導(dǎo)有效的抗病毒活動。特別有吸引力的是與流感病毒表面上的主要蛋白血凝素在被稱為血凝素莖的區(qū)域中反應(yīng)的單克隆抗體，所述血凝素在遺傳上是穩(wěn)定的并且在季節(jié)間不會顯著變化或根本不會變化。眾多抗體已被表征并正被開發(fā)為用于流感的治療性抗體，包括基于病毒的保守表位。一些交叉反應(yīng)性抗體靶向血凝素(HA)糖蛋白，所述糖蛋白在接種或天然感染過程中誘發(fā)最強(qiáng)勁的中和抗體。HA包含在病毒感染中為至關(guān)重要的組分的兩個亞單位HA1和HA2。MAbCR6261是良好表征的抗體，其被認(rèn)為結(jié)合H1病毒和組1內(nèi)的其它亞型(H5)，并且在HA2亞單位上結(jié)合(ThrosbyM等(2008)PL0SONE3:e3942；EckertDC等(2009)Science324:246-251；FriesenRHE等(2010)PLoSONE5(2):e1906；美國專利8,192,927)。MAbCR8020被認(rèn)為結(jié)合H3和為組2病毒的另一種亞型(H7)病毒上的HA2的近膜區(qū)(EckertDC等(2011)Science333:843-850)。來自瑞士的研究者的抗體FI6v3被認(rèn)為具有結(jié)合至存在于組1(H1)和2(H3)病毒上的表位的能力，然而FI6在小鼠中已顯示有限的功效(CortiD等(2011)Science333:850-856)。Palese及同事已報道了利用不同血凝素在小鼠中進(jìn)行依序免疫產(chǎn)生的針對H3流感病毒的廣泛保護(hù)性單克隆抗體(WangTT等(2010)PLoSPathog6(2):e1000796；美國申請20110027270)。通過使用該方法，分離了被認(rèn)為具有廣泛反應(yīng)性的H1抗體(TanGS等(2012)JVirol86(11):6179-6188)。利用針對HA的單克隆抗體對流感的治療性治療是劑量依賴性，并且如果在感染后較晚時間施用也需要較高劑量。具有廣泛反應(yīng)性的HA特異性抗體的IP或IV給予的常見治療性劑量需要在2mg/kg至50mg/kg的范圍內(nèi)的劑量，以看到免受致死性攻擊的保護(hù)。在感染后較晚時間，相同的效應(yīng)需要在高于>10mg/kg的范圍內(nèi)的給藥。在北美平均成人為約80.7kg，如果以10mg/kg給予，將需要807mg的抗體。由CrucellHollandBV進(jìn)行的流感單克隆抗體CR6261和CR8020的兩個目前I期研究正在評估從1mg/kg逐步升高至50mg/kg的單個劑量的安全性和耐受性(分別為試驗(yàn)NCT01406418和NCT01756950；clinicaltrials.gov)。在小鼠中，這些抗體需要15mg/kg來保護(hù)小鼠免于死亡(Friesen,RHE等(2010)PLoSONE5(2):e1906)；EkiertDC等(2011)Science333:843-850)?；谶@些IP或IV給藥量，基于人體重(約70kg)將需要每患者接近克量或?yàn)榭肆康膯我豢贵w。這因在針對多個流感亞型的任何療法中需要不止一種抗體來治療存在于循環(huán)中的3個不同亞型的流感(甲型流感H3、甲型流感H1和乙型流感)而加碼，從而可能需要總共約3克抗體(假定每種抗體約1克)。該大量的抗體變得成本高昂，難以施用，并在用于流感的治療性抗體的開發(fā)中設(shè)置了主要障礙。我們已鑒定了使抗體的量顯著減少超過10倍同時顯著地保持，甚至提高功效的解決方案。我們已發(fā)現(xiàn)，抗體的鼻內(nèi)遞送或更常見地通過吸入的遞送提供了相較于IV或IP途徑的功效的顯著和明顯提高。流感單克隆抗體的有效氣道施用在USSN61/782,661和PCT/US2014/27939(通過引用并入本文)中進(jìn)行了描述。引人注目地的是，通過使用可公認(rèn)的和已知的流感小鼠模型，中和抗體的鼻內(nèi)(IN)遞送相較于腹膜內(nèi)(IP)或靜脈內(nèi)(IV)遞送途徑使治療功效大幅升高至超過10倍。當(dāng)通過IN途徑而霏通過IV或IP途徑給予時，可使用少于1/10的相同劑量來實(shí)現(xiàn)可比較的功效。用于治療流感的目前的治療設(shè)計(jì)利用靜脈內(nèi)遞送作為標(biāo)準(zhǔn)(ClinicalTrials.govIdentifier:NCT01390025、NCT01756950、NCT01406418)。該遞送方法是本領(lǐng)域中的標(biāo)準(zhǔn)，因?yàn)槔每贵w的中和特征的能力是未知的。絕大部分關(guān)于抗體治療劑的研究利用IV或IP遞送，并且未能意識到，針對流感的中和抗體的IN遞送相較于IV或IP遞送將提高功效。IN遞送的先前報道已評估了多克隆血清γ球蛋白IVIG或IgA種類的抗體(IgA抗體對于肺固有地是共同的)(AkerfeldtS等(1973)BiochemPharmacol22:2911-2917；RamisseF等(1998)ClinExpImmmunol111:583-587；YeJ等(2010)ClinVaccineImmunol17(9):1363)。一個研究小組通過IN途徑測試了抗體(C179)的腹水制劑，并且描述保護(hù)性IN遞送(攻擊前)可與IP相比較(SakabeS等(2010)AntiviralRes88(3):249-255)。C179表現(xiàn)出低的針對2009年大流行H1N1病毒的中和活性，但據(jù)報道保護(hù)小鼠免受感染。與此相反，本發(fā)明人已發(fā)現(xiàn)重要的是，增強(qiáng)的功效并非簡單地伴隨任何交叉反應(yīng)性針對流感抗體而無論施用模式如何。一般地，當(dāng)給定IN時不中和的抗體不表現(xiàn)出抗流感功效。據(jù)我們所知，較早期的研究未能認(rèn)識到，該效應(yīng)可被更廣泛地應(yīng)用于表現(xiàn)出體外中和活性的抗體而不論它們的病毒表位或蛋白質(zhì)靶。此外，抗體不必具有針對HA的交叉反應(yīng)性，因?yàn)楫?dāng)通過IN給予時，中和的株特異性抗體將表現(xiàn)增強(qiáng)的功效。我們已發(fā)現(xiàn)，中和抗體(而非簡單地交叉反應(yīng)性抗HA抗體)是取決于施用途徑，顯著減少實(shí)現(xiàn)可比較的功效所需的抗體的量所必需的。實(shí)際上，我們已經(jīng)發(fā)現(xiàn)，當(dāng)使用不具中和能力的交叉反應(yīng)性抗HA抗體時，發(fā)生相反的情況。當(dāng)鼻內(nèi)治療小鼠時，這些交叉反應(yīng)性非中抗HA抗體的治療性使用導(dǎo)致治療功效的顯著降低；然而，當(dāng)通過IP或IV途徑施用時，這些抗體表現(xiàn)出顯著的功效。不希望受理論束縛，該現(xiàn)象背后的可能機(jī)制存在于這樣的事實(shí)中：即鼻內(nèi)遞送在可利用抗體抗原組合部位的中和能力的氣道粘膜中獲得一定水平的IgG抗體，然而抗體的IV或IP遞送是Fc依賴性的。在氣道中，抑制性機(jī)制依賴于抗體的中和特征并且Fc依賴性效應(yīng)受到嚴(yán)重限制。當(dāng)通過IP或IV給予IgG抗體時，到達(dá)氣道中該空間的抗體的量太低以至于不能利用抗體的中和效應(yīng)。例如，當(dāng)通過IP或IV施用中和抗體時，主要觀測到的療效來自抗體效應(yīng)子功能。當(dāng)通過IP或IV而非通過IN給予時，我們已發(fā)現(xiàn)可比較的中和或非中和抗體的功效水平。為了進(jìn)一步說明該效應(yīng)取依賴于中和，針對M2蛋白的抗體不表現(xiàn)體外中和，并且只能夠表現(xiàn)Fc介導(dǎo)的效應(yīng)。使用針對M2離子通道(比HA更加遺傳保守的分子)的抗體的先前工作已在臨床前模型中顯示前景，并且已完成I期研究(TCN-032來自Theraclone；NCT01390025、NCT01719874；GrandeaAG等(2010)ProcNatlAcadSciUSA107(28):12658-12663)。針對M2蛋白的抗體不能中和病毒，但可具有通過效應(yīng)子功能介導(dǎo)的證據(jù)充分的治療功效(Wang,R.等(2008)Antiviralresearch80:168-177；Grandea,A.G.，第3版等(2010)ProcNatlAcadSciUSA107(28):12658-12663)。我們相信當(dāng)通過IP或IV給予時中和和非中和抗體主要通過與M2靶向抗體類似的效應(yīng)子功能起作用。所述M2蛋白遠(yuǎn)不如HA豐富，并且也不從表面突出。針對HA的抗體可中和病毒，從而提供了進(jìn)行進(jìn)一步提高功效的潛力。這樣，針對HA的抗體通常在治療上比抗M2抗體更有效。然而，不是中和劑但仍然靶向HA的抗體當(dāng)通過IP給予時表現(xiàn)出可與中和抗體相比較的功效水平，這表明該遞送途徑不能利用當(dāng)通過IN給予時可被利用的強(qiáng)效效應(yīng)。此外，通過IN但非IP的中和Fab的遞送導(dǎo)致治療功效。通過IN給予的非中和Fab未表現(xiàn)出治療功效?？傊挥型ㄟ^IN給出的中和抗體表現(xiàn)出該增強(qiáng)的功效。通過擴(kuò)展該觀察，對于靶向其它流感蛋白(例如，神經(jīng)氨酸酶)的中和抗體和針對其它呼吸道病原體的中和抗體(用于RSV的帕利珠單抗)，通過肺部遞送增強(qiáng)功效的該現(xiàn)象可發(fā)生。該增強(qiáng)的功效，或增強(qiáng)的功效的水平可取決于該亞組的呼吸道病原體的頂端復(fù)制生命周期，其中在頂端空間中，這些病毒易于遭受這些抗體的中和能力。由于通過IN和IP/IV途徑的抗體遞送可自身通過不同的方式實(shí)現(xiàn)有效性，因此兩種途徑的組合使用將利用中和抗體的最大治療潛能。該方法將通過利用增強(qiáng)的中和活性(通過IN途徑)和增強(qiáng)的Fc依賴性活性(通過IP/IV途徑)來允許產(chǎn)生最大功效。本實(shí)例表明中和抗體(包括已知抗體和新分離的抗體)在低劑量上的鼻內(nèi)功效。提供了許多不同的和已知的抗體(作為示例性抗體，包括CR6261、CR8020、CR9114、5A7、mAb53(TRL053)、mAb579(TRL579)、TRL845、TRL846、TRL847、TRL848、TRL849、TRL854、TRL809和TRL832)的鼻內(nèi)功效。此類活性和功效先前一直未被證明，這不論例如CR6261和CR8020的許多研究，包括臨床前試驗(yàn)。在本文中評估許多不同的抗體，包括已知的和新分離的抗體，所述抗體對于氣道施用是有效的。本發(fā)明涉及抗體的新型和獨(dú)特組合，所述組合有效地針對甲型和乙型流感病毒，并且可被一起生產(chǎn)和施用而無不利的相互作用和具有顯著的配制效率。根據(jù)本發(fā)明的組合的抗體針對不同的但均在臨床上相關(guān)的亞型，包括甲型流感病毒的亞型H1、H3、H5以及乙型流感Yamagata和Victoria譜系。因此，本發(fā)明提供了可普遍適用的抗體組合和混合物，其中抗體的獨(dú)特組合或混合物能夠中和相關(guān)循環(huán)流感病毒，可通過經(jīng)由氣道(諸如鼻內(nèi)或至肺或反氣管粘膜的遞送)施用本發(fā)明的抗體組合或混合物，用于氣道施用的方法和組合物以及治療或預(yù)防流感病毒、流感感染和/或傳播。由于本發(fā)明的抗體組合或混合物的獨(dú)特和有用的效應(yīng)，因此在施用或使用之前，流感病毒或亞型的臨床評價或特異性診斷不是必需的或不需要。設(shè)想了抗體片段、衍生物或變體。根據(jù)本公開，抗體片段，包括Fab在本文中被證明是有效的。在目前公開的實(shí)施方案的一個方面，抗體Fab片段，當(dāng)經(jīng)由氣道途徑(例如，鼻內(nèi)或經(jīng)由吸入)施用時，是有活性的并且有效的，當(dāng)通過IP或IV施用時是無效的。模式Fab在吸收制劑中在體內(nèi)是有效的，如圖25中所示的。在一些實(shí)施方案中，提供了為scFv的抗原結(jié)合片段。在一些實(shí)施方案中，提供了用于針對流感的被動免疫的抗體、抗原結(jié)合片段、組合物和方法。在一些實(shí)施方案中，提供了用于流感病毒的治療或預(yù)防的抗體組合、組合物和方法。在一些方面中，提供了包含針對甲型和乙型流感的單克隆抗體的組合物，其適合于全身性施用或至呼吸道的直接施用，包括通過氣道施用，諸如通過鼻內(nèi)或吸入施用。提供了用于經(jīng)由抗體的氣道施用或組合抗體的鼻內(nèi)或吸入施用與腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)施用來進(jìn)行治療或預(yù)防的組合物和方法。血凝素(HA)分子內(nèi)的保守表位最近已被發(fā)現(xiàn)。存在關(guān)于能夠識別并中和許多甲型流感病毒亞型的人單克隆抗體(MAb)的分離和表征的若干報道。這些抗體中的許多抗體靶向血凝素(HA)糖蛋白，所述糖蛋白可在接種或天然感染期間引發(fā)最強(qiáng)勁的中和抗體。HA包含在病毒感染中是至關(guān)重要的組分的兩個亞單位HA1和HA2。HA1參與至宿主細(xì)胞受體唾液酸的附著，HA2介導(dǎo)病毒與內(nèi)體膜的融合。目前的抗體療法劑量，基于迄今利用許多重組抗體，包括超過20種在美國已被批準(zhǔn)用于臨床的單克隆抗體(NewsomeBW和ErnstoffMS(2008)BrJClinPharmacol66(1):6-19)的研究和臨床經(jīng)驗(yàn)，被良好地確立為每劑量多個mg/kg。例如，每2周一次以6mg/kg在1-11/2小時內(nèi)靜脈內(nèi)施用帕木單抗，一種被批準(zhǔn)用于結(jié)直腸癌的抗EGFR完全人抗體。通過使用70kg的平均人體重，該量為每劑量420mg的抗體。迄今還沒有單克隆抗體在臨床上被批準(zhǔn)用于流感。在動物中利用流感抗體的研究的報道表明，當(dāng)通過靜脈內(nèi)或腹膜內(nèi)給予時用于治療或預(yù)防目的的這些抗體的有效劑量范圍為在1mg/kg直至100mg/kg的范圍內(nèi)。在美國進(jìn)行的利用這些抗體中的一些抗體(CR6261、CR8020、TCN-032)的I期臨床試驗(yàn)在安全性和耐受性研究中使用從2mg/kg直至50mg/kg的劑量遞增(clinicaltrials.gov；NCT01390025、NCT01406418、NCT01756950)。以最高的I期劑量(例如30mg/kg或50mg/kg)進(jìn)行利用這些抗體的隨后IIa期研究。該大量的材料在該新路線的治療劑的開發(fā)中設(shè)置了主要障礙。具體地，在該范圍內(nèi)的全身性劑量導(dǎo)致大量的材料成本，還帶來了與輸注相關(guān)的時間、空間和人員成本。因此，存在對增強(qiáng)功效和/或減少使針對流感的抗體治療或預(yù)防成為可行的替代方案所需的材料的量的迫切需要。雖然乙型流感稍不如甲型流感常見，但其仍然是個嚴(yán)重的健康問題。一般地，乙型流感病毒被分成兩個譜系：B/Victoria/2/87-樣和B/Yamagata/16/88-樣。乙型流感病毒與甲型流感病毒不同，因?yàn)樗鼈儾淮嬖诜Q為堿性1-F2(PB1-F2)的蛋白，但具有在甲型流感中不存在的另外的蛋白，諸如糖蛋白B(NB)。還存在另外的差異。然而，乙型流感病毒株的HA蛋白與一些甲型流感HA的同源性與它們彼此之間的同源性相同。流感病毒的血凝素蛋白(HA)具有球狀頭部分結(jié)構(gòu)域(其在流感病毒株之間高度異質(zhì))和含有進(jìn)入細(xì)胞所需的融合部位的莖區(qū)。HA在病毒包膜上呈三聚體。血凝素蛋白(HA0)的未裂解形式通過經(jīng)由胰蛋白酶裂解成HA1和HA2部分(以允許融合部位實(shí)現(xiàn)毒力)來激活。所述兩個裂解的部分使用二硫鍵來保持偶聯(lián)，但在宿主細(xì)胞的內(nèi)體區(qū)室的低pH環(huán)境中經(jīng)歷構(gòu)象變化，這導(dǎo)致病毒與宿主細(xì)胞膜的融合。所述裂解位點(diǎn)含有為甲型和乙型流感的不同株所共有的共有序列。未裂解的血凝素蛋白三聚體(HA0)被稱為無活性形式，然而當(dāng)裂解成HA1和HA2部分時，血凝素蛋白被稱為呈激活形式。Bianchi,E.等，J.Virol.(2005)79:7380-7388描述了基于該裂解位點(diǎn)的共有序列的“通用”乙型流感疫苗，其中包含該位點(diǎn)的肽，當(dāng)綴合于腦膜炎奈瑟球菌(Neisseriameningitidis)的外膜蛋白復(fù)合體時，能夠在小鼠中產(chǎn)生抗體。還描述了顯示結(jié)合所述共有序列的單克隆抗體(mAb)。另外，在小鼠中觀察到抗血清的成功被動轉(zhuǎn)移。其它現(xiàn)有技術(shù)疫苗，諸如WO2004/080403中描述的包含來源于流感的M2和/或HA蛋白的肽的那些疫苗，包括具有弱的功效或在株間無效的抗體。本領(lǐng)域中描述的結(jié)合HA莖區(qū)的抗體包括由Crucell開發(fā)的那些抗體，諸如在WO2008/028946(‘946)中；Throsby,M.等，PLoSOne(2008)3:e3942中；Ekiert,D.C.等，Science(2011)333:843-850中；和Sui,J.等，Nat.Struct.Mol.Biol.(2009)16:265-273中描述的CR6261和CR8020。根據(jù)上述PCT公開‘946，這些抗體不僅結(jié)合于H5N1而且還結(jié)合于H2、H6、H9和H1。還已開發(fā)了針對保守的M2E抗原的mAb，如由Grandea,A.G.等，PNASUSA(2010)107:12658-12663描述的。M2E是出現(xiàn)在感染細(xì)胞表面上并且也是金剛烷胺和金剛乙胺的靶的病毒編碼的蛋白。針對這些抗病毒劑，抗藥性已變得廣泛存在，這暗示著該靶不能行使基本功能。另外的現(xiàn)有技術(shù)抗體已由Lanzavecchia小組：Corti,D.等，Science(2011)333:850-856描述，所述抗體結(jié)合并中和甲型流感的組1和組2株，但效力不如本文中描述的那些抗體高。另外，具有針對甲型和乙型流感的莖區(qū)的免疫反應(yīng)性的mAb在Dreyfus,C.等，Science(2012)337:1343-1348中進(jìn)行了描述，但其不具有可檢測的中和效力。同一作者描述了結(jié)合HA的頭部基團(tuán)的兩種mAb，其中的一種mAb在對于來自乙型流感的兩個進(jìn)化枝的株的親和力和效力上具有高度可變性，其中的另一種具有～1nM的親和力。這些結(jié)果確認(rèn)了用于乙型流感的廣泛中和mAb難以獲得。PCT申請公開No.WO2011/160083(通過引用并入本文)描述了來源于人細(xì)胞并且用于被疫苗的單克隆抗體。所述抗體顯示對存在于組1中的流感病毒進(jìn)化枝H1的高結(jié)合親和力，所述抗體的一些抗體還顯示對也存在于組1中的H9和/或存在于組2中的H7和/或存在于組1中的H2的高親和力。所公開的抗體中的一些抗體只結(jié)合無活性三聚體形式(推測在共有裂解區(qū)上)，然而其它抗體能夠結(jié)合已被裂解的激活的血凝素蛋白。PCT公開No.WO2013/086052(通過引用并入本文)公開了一組抗體，包括雙特異性抗體，其在該共有區(qū)域中結(jié)合于表位并且結(jié)合于組1和組2的大量甲型流感病毒，包括組1中的H1、H2、H5、H6、H8、H9、H11、H13和H16以及組2中的H3和H7。另外，由Yasugi,M.等，PLoSPathogens(2013)9:以e1003150在線公布的，第1-12頁提供的最近公開，描述了中和乙型流感病毒的人mAb，具體地，被認(rèn)為甚至當(dāng)在感染后72小時施用其時仍具有治療功效的稱為5A7的mAb。5A7針對唯一測試的株的KD據(jù)報道為5nM，表位被鑒定為在高度保守的C末端莖區(qū)；所報道的效力在乙型流感的所有株中是可比較的。該結(jié)果確立了mAb針對乙型流感的高親和力(亞-nM)難以實(shí)現(xiàn)。在一些實(shí)施方案中，提供了用于預(yù)防和治療的抗體或類似的結(jié)合部分。因此，它們可用于保護(hù)受試者免受病毒感染以及用于治療已暴露于或感染了乙型流感的受試者。最終目標(biāo)受試者是人受試者，并且對于人受試者中的使用，作為常規(guī)天然抗體或其免疫反應(yīng)性片段的結(jié)合部分的人形式或人源化形式是優(yōu)選的。然而，含有如由互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)決定的適當(dāng)?shù)慕Y(jié)合特征的抗體，當(dāng)用于實(shí)驗(yàn)室動物的研究中時，可保留非人特征。下面實(shí)施例的研究中使用的抗體，盡管在小鼠中進(jìn)行所述研究，然而含有為人的可變和恒定區(qū)。定義根據(jù)本公開，可使用在本領(lǐng)域技術(shù)人員能力之內(nèi)的常規(guī)分子生物學(xué)、微生物學(xué)和重組DNA技術(shù)。此類技術(shù)在文獻(xiàn)中已作了詳盡解釋。參見，例如，Sambrook等，"MolecularCloning:ALaboratoryManual"(1989)；"CurrentProtocolsinMolecularBiology"第I-III卷[Ausubel,R.M.，編輯(1994)]；"CellBiology:ALaboratoryHandbook"第I-III卷[J.E.Celis，編輯(1994))]；"CurrentProtocolsinImmunology"第I-III卷[Coligan,J.E.，編輯(1994)]；"OligonucleotideSynthesis"(M.J.Gait編輯1984)；"NucleicAcidHybridization"[B.D.Hames&S.J.Higgins編輯(1985)]；"TranscriptionAndTranslation"[B.D.Hames&S.J.Higgins編輯(1984)]；"AnimalCellCulture"[R.I.Freshney，編輯(1986)]；"ImmobilizedCellsAndEnzymes"[IRLPress,(1986)]；B.Perbal,"APracticalGuideToMolecularCloning"(1984)。因此，如果在本文中出現(xiàn)，除非上下文另外明確地要求，否則以下術(shù)語將具有下文中給出的定義。如本文中所用，術(shù)語“抗體”或“結(jié)合部分”是指抗體、共免疫反應(yīng)性片段或抗原結(jié)合片段，以及單特異性單克隆抗體、多特異性抗體諸如雙特異性單克隆抗體或三特異性單克隆抗體、分離的單克隆抗體、重組單克隆抗體以及分離的人或人源化單克隆抗體，或其抗原結(jié)合片段。包含兩個免疫球蛋白重鏈和兩個免疫球蛋白輕鏈的分子，并且還包括常規(guī)抗體的免疫反應(yīng)性片段或或抗原結(jié)合片段，即使有時“片段”被冗余地提及。所述抗體，從而包括Fab片段、基本上只含有可變區(qū)的Fv單鏈抗體、雙特異或三特異性抗體和它們的各種仍然保留免疫原性的片段化形式，以及通常地通過包含接近更常規(guī)的天然存在的抗體的可變區(qū)的活性的氨基酸序列或經(jīng)修飾的氨基酸序列(即，假肽)來模擬“天然”抗體的活性的蛋白。因此，該術(shù)語涵蓋抗體的抗體片段、衍生物、功能等同物和同源物，包括包含免疫球蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何多肽，無論是天然的還是完全或部分合成的，諸如重組的或以其它方式工程化的。因此包括包含融合于另一種多肽的免疫球蛋白結(jié)合結(jié)構(gòu)域或等同物的嵌合分子。嵌合抗體的克隆和表達(dá)在EP-A-0120694和EP-A-0125023以及美國專利No.4,816,397和4,816,567進(jìn)行了描述。術(shù)語“抗體”還包括免疫球蛋白，無論是天然的還是部分或完全合成產(chǎn)生的。術(shù)語還涵蓋了具有為抗體結(jié)合結(jié)構(gòu)域或與其同源的結(jié)合結(jié)構(gòu)域的任何多肽或蛋白質(zhì)。該術(shù)語還包括CDR移植抗體?！翱贵w”是結(jié)合特定表位的任何免疫球蛋白，包括抗體及其片段。術(shù)語包括多克隆、單克隆和嵌合抗體，在美國專利No.4,816,397和4,816,567中描述了提及的最后一種抗體。術(shù)語“抗體”包括野生型免疫球蛋白(Ig)分子，其通常包含4條全長多肽鏈，兩條重(H)鏈和兩條輕(L)鏈，或其等效Ig同源物(例如，駱駝納米抗體，其只包含重鏈)；包括其全長功能性突變體、變體或衍生物，所述突變體、變體或衍生物保留Ig分子的基本表位結(jié)合特性，并且包括雙重特異性、雙特異性、多特異性和雙重可變結(jié)構(gòu)域抗體；免疫球蛋白分子可以是任何種類(例如，IgG、IgE、IgM、IgD、IgA和IgY)或亞類(例如，IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2)。優(yōu)選抗體是IgG種類?！翱贵w組合部位”是由特異性結(jié)合抗原的重鏈和輕鏈可變及高變區(qū)組成的抗體分子的結(jié)構(gòu)部分。如本文中所用，以其各種語法形式存在的短語“抗體分子”設(shè)想了完整免疫球蛋白分子和免疫球蛋白分子的免疫活性部分。如本文中所用，術(shù)語“單克隆抗體”是指獲自基本上同源的抗體的群體(即，包含單一抗體)的抗體，除可能的變異抗體(例如含有天然存在的突變或在單克隆抗體制備過程中產(chǎn)生的，此類變體通常以少量存在)外，所述群體是完全相同的和/或結(jié)合相同的表位(或多個表位)。單克隆抗體是具有一個種類的能夠與特定抗原免疫反應(yīng)的抗體組合部位的抗體。單克隆抗體從而通常表現(xiàn)出對于與其免疫反應(yīng)的任何抗原的單一結(jié)合親和力。與通常包括針對不同的決定簇(表位)的多種抗體的多克隆抗體制劑相反，單克隆抗體制劑的每一種單克隆抗體針對抗原上的單一決定簇。然而，如果單克隆抗體含有具有多個抗體組合部位(每一個部位對不同的抗原具有免疫特異性)的抗體分子，則其可以是多特異性的；例如，雙特異性(嵌合)單克隆抗體。修飾詞“單克隆”表示抗體獲自基本上均一的抗體群體的特征，而不應(yīng)被解釋為需要通過任何特定方法生產(chǎn)抗體。例如，根據(jù)本公開使用的單克隆抗體可通過多種技術(shù)來制造，所述技術(shù)包括但不限于雜交瘤方法、重組DNA方法、噬菌體展示方法和利用含有人免疫球蛋白基因座的全部或部分的轉(zhuǎn)基因動物的方法，本文是描述了用于制備單克隆抗體的此類方法和其它示例性方法。與“免疫反應(yīng)性片段”、“結(jié)合片段”和“抗體片段”同義地使用的術(shù)語“抗原結(jié)合片段”，是指特異性結(jié)合抗原以形成復(fù)合物的可酶促獲得的、合成的或重組的“工程化”多肽或糖蛋白?！翱贵w片段”是指除完整抗體外的分子，所述分子包含結(jié)合完整抗體所結(jié)合的抗原的完整抗體的部分。“工程化”抗體片段的實(shí)例包括但不限于Fv、Fab'、Fab'-SH、F(ab')2；雙鏈抗體；線性抗體；單鏈抗體分子(例如scFv)；和從抗體片段形成的多特異性抗體。另外，抗體片段包含具有VH結(jié)構(gòu)域的特征(即能夠與VL結(jié)構(gòu)域一起組裝成功能性抗原結(jié)合部位，從而提供全長抗體的抗原結(jié)合性質(zhì))或VL結(jié)構(gòu)域的特征(即能夠與VH結(jié)構(gòu)域一起組裝成功能性抗原結(jié)合部位，從而提供全長抗體的抗原結(jié)合性質(zhì))的單鏈多肽?！翱贵w片段”包括包含至少一個不為全長的多肽的分子，包括(i)Fab片段，其為由可變輕(VL)結(jié)構(gòu)域、可變重(VH)結(jié)構(gòu)域、恒定輕(CL)結(jié)構(gòu)域和恒定重1(CH1)結(jié)構(gòu)域組成的單價片段；(ii)F(ab')2片段，其為包含通過鉸鏈區(qū)中的二硫橋連接的兩個Fab片段的雙價片段；(iii)Fab(Fd)片段的重鏈部分，其由VH和CH1結(jié)構(gòu)域組成；(iv)可變片段(Fv)片段，其由抗體的單臂的VL和VH結(jié)構(gòu)域組成，(v)結(jié)構(gòu)域抗體(dAb)片段，其包含單個可變結(jié)構(gòu)域(Ward,E.S.等，Nature341,544-546(1989))；(vi)駱駝抗體；(vii)分離的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)；(viii)單鏈Fv片段，其中VH結(jié)構(gòu)域和VL結(jié)構(gòu)域通過肽接頭連接，所述接頭允許兩個結(jié)構(gòu)域締合以形成抗原結(jié)合部位(Bird等，Science,242,423-426,1988；Huston等，PNASUSA,85,5879-5883,1988)；(ix)雙鏈抗體，其為雙價雙特異性抗體，其中VH和VL結(jié)構(gòu)域在單一多肽鏈上表達(dá)，但使用太短以至于不允許同一鏈上的兩個結(jié)構(gòu)域之間配對，從而迫使所述結(jié)構(gòu)域與另一條鏈的互補(bǔ)結(jié)構(gòu)域配對并產(chǎn)生兩個抗原結(jié)合部位的接頭(WO94/13804；P.Holliger等Proc.Natl.Acad.Sci.USA906444-6448,(1993))；和(x)線性抗體，其包含一對串聯(lián)Fv區(qū)段(VH-CH1-VH-CH1)，所述區(qū)段與互補(bǔ)輕鏈多肽一起形成一對抗原結(jié)合區(qū)；(xi)多價抗體片段(scFv二聚體、三聚體和/或四聚體(Power和Hudson,JImmunol.Methods242:193-2049(2000))；(xii)微型抗體，其為由與恒定免疫球蛋白結(jié)構(gòu)域CH3或CH4融合的scFv組成的雙價分子，其中所述恒定CH3或CH4結(jié)構(gòu)域用作二聚化結(jié)構(gòu)域(OlafsenT等(2004)ProtEngDesSel17(4):315-323；HollingerP和HudsonPJ(2005)NatureBiotech23(9):1126-1136)；和(xiii)重和/或輕鏈的其它非全長部分、或其突變體、變體或衍生物(單獨(dú)的或以任何組合的)。單鏈Fab(scFAb)是已知的，并且在US20070274985中進(jìn)行了描述?？乖Y(jié)合片段包括Fab片段；F(ab')2片段；Fd片段；Fv片段；單鏈Fv(scFv)分子；dAb片段；和由氨基酸殘基組成的模擬抗體的高變區(qū)(CDR)的最小識別單元。其它工程化分子，諸如雙鏈抗體、三鏈抗體、四鏈抗體和微型抗體也包括在表達(dá)“抗原結(jié)合片段”內(nèi)，如本文中所用的。本文中組合使用和提及的抗體，除本文中最早描述的和構(gòu)成新的多肽實(shí)體的抗體外，可包括具有如所報道的和公眾已知的氨基酸序列的那些抗體，包括具有對已知的或公開的氨基酸序列的修飾并且保留或表現(xiàn)出基本上相等的活性(包括靶中和或識別和結(jié)合活性)的抗體、蛋白質(zhì)、多肽。因此，同樣地設(shè)想了表現(xiàn)出基本上等同的或改變的活性的蛋白質(zhì)。這些修飾可以是有意的，例如，諸如通過定點(diǎn)誘變獲得的修飾，或可以是意外的，諸如通過為所述復(fù)合物或其命名的亞單位的生產(chǎn)者的宿主中的突變獲得的那些修飾。所述抗體意欲在它們的范圍內(nèi)包括本文中明確引述的抗體以及所有基本上同源的類似物和等位變型，諸如與明確公開或公共報道的抗體具有至少80％、至少90％、至少95％、至少98％或至少99％序列同一性的序列。本文所述的氨基酸殘基優(yōu)選以“L”型異構(gòu)形式存在。然而“D”型異構(gòu)形式中的殘基可取代任何L-氨基酸殘基，只要免疫球蛋白結(jié)合的所需功能性質(zhì)被多肽保留。NH2是指存在于多肽的氨基末端的游離氨基。COOH是指存在于多肽的羧基末端的游離羧基。與標(biāo)準(zhǔn)多肽命名法(J.Biol.Chem.,243:355259(1969))一致，氨基酸殘基的縮寫示于對應(yīng)的下表1中：對應(yīng)氨基酸符號的表1應(yīng)當(dāng)指出的是，所有氨基酸殘基序列在本文中通過其左和右取向以氨基端至羧基端的常規(guī)方向顯示的式來表示。提供表1來使可在本文中交替出現(xiàn)的三字母與一字母符號相關(guān)聯(lián)。以下是氨基酸的各種分組的實(shí)例：具有非極性R基團(tuán)的氨基酸：丙氨酸、纈氨酸、亮氨酸、異亮氨酸、脯氨酸、苯丙氨酸、色氨酸、甲硫氨酸；具有不帶電荷的極性R基團(tuán)的氨基酸：甘氨酸、絲氨酸、蘇氨酸、半胱氨酸、酪氨酸、天冬酰胺、谷氨酰胺；具有帶電荷的極性R基團(tuán)(在pH6.0時帶負(fù)電荷)的氨基酸：天冬氨酸、谷氨酸；堿性氨基酸(正pH6.0時帶正電荷)：賴氨酸、精氨酸、組氨酸(在pH6.0時)；另一種分組可以是具有苯基的那些氨基酸：苯丙氨酸、色氨酸、酪氨酸。另一種分組可根據(jù)分子量(即，R基團(tuán)的大小):特別優(yōu)選的保守氨基酸取代是：-Lys對Arg的取代和反之亦然，以便可維持正電荷；-Glu對Asp的取代和反之亦然，以便可維持負(fù)電荷；-Ser對Thr的取代，以便可維持游離-OH；和-Gln對Asn的取代，以便可維持游離NH2。還可引入氨基酸取代來以取代具有特別優(yōu)選的性質(zhì)的氨基酸。例如，可將Cys引入用于與另一個Cys形成二硫橋的潛在位點(diǎn)?？蓪is作為特別地“催化的”位點(diǎn)引入(即，His可用作酸或堿并且是生物化學(xué)催化中最常用的氨基酸)。可因其特別平的結(jié)構(gòu)而引入Pro，其在蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)中誘導(dǎo)β轉(zhuǎn)角。當(dāng)至少約70％的氨基酸序列(優(yōu)選地至少約80％，在更優(yōu)選實(shí)施方案中，至少約90或95％，至少約98％或至少約99％序列同一性)是相同的，或代表保守取代，則兩個氨基酸序列是“基本上同源的”。在一些實(shí)施方案中，提供了具有一個或多個氨基酸取代的基本上同源的序列。編碼按照本公開使用的抗體的核酸可用于制備和/或產(chǎn)生用于目前公開的實(shí)施方案的抗體或其活性片段。包含此類核酸的載體可用于表達(dá)或分離如本文中提供或使用的抗體?！皬?fù)制子”是作為體內(nèi)DNA復(fù)制的自主單元(即能夠在它自身控制下復(fù)制)的任何遺傳元件(例如，質(zhì)粒、染色體、病毒)。“載體”是可將另一個DNA區(qū)段附接于其以使得所附接的區(qū)段能夠復(fù)制的復(fù)制子，諸如質(zhì)粒、噬菌體或粘粒。“DNA分子”是指以其單鏈形式或雙鏈螺旋形式存在的脫氧核糖核苷酸(腺嘌呤、鳥嘌呤、胸腺嘧啶或胞嘧啶)的聚合物形式。該術(shù)語僅指分子的一級和二級結(jié)構(gòu)，并且不將其限制于任何特定的三級形式。因此，該術(shù)語包括除其它以外在線性DNA分子(例如，限制性片段)、病毒、質(zhì)粒和染色體中發(fā)現(xiàn)的雙鏈DNA。在論述特定雙鏈DNA分子的結(jié)構(gòu)中，可根據(jù)僅以5'至3'方向沿DNA的非轉(zhuǎn)錄鏈(即具有與mRNA同源的序列的鏈)給出序列的正常慣例在本文中描述序列?！皬?fù)制起始點(diǎn)”是指參與DNA合成的那些DNA序列。DNA“編碼序列”是當(dāng)置于適當(dāng)?shù)恼{(diào)控序列的控制下時在體內(nèi)被轉(zhuǎn)錄并被翻譯成蛋白質(zhì)的雙鏈DNA序列。編碼序列的邊界通過5'(氨基)末端上的起始密碼子和3'(羧基)末端上的翻譯終止密碼子來確定。編碼序列可包括，但不限于，原核生物序列、來自真核生物mRNA的cDNA、來自真核生物(例如，哺乳動物)DNA的基因組DNA序列和甚至合成的DNA序列。多腺苷酸化信號和轉(zhuǎn)錄終止序列通常位于編碼序列的3'。轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列是在宿主細(xì)胞中提供編碼序列的表達(dá)的DNA調(diào)控序列，諸如啟動子、增強(qiáng)子、多腺苷酸化信號、終止子等?！皢幼有蛄小被颉皢幼印笔悄軌蛟诩?xì)胞中結(jié)合RNA聚合酶并起始下游(3'方向)編碼序列的轉(zhuǎn)錄的DNA調(diào)控區(qū)。為了定義目前公開的實(shí)施方案的目的，啟動子序列在其3'末端以轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)為界并向上游(5'方向)延伸以包括以高于本底的可檢測的水平起始轉(zhuǎn)錄所必需的最少數(shù)目的堿基或元件。在啟動子序列內(nèi)，發(fā)現(xiàn)轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)(通過利用核酸酶S1的定位方便地界定的)以及負(fù)責(zé)RNA聚合酶的結(jié)合的蛋白質(zhì)結(jié)合結(jié)構(gòu)域(共有序列)。真核生物啟動子通常，但非總是含有“TATA”框和“CAT”框。原核生物啟動子除了-10和-35共有序列以外還含有Shine-Dalgarno序列?！氨磉_(dá)控制序列”是調(diào)控序列的形式，并且是控制和調(diào)節(jié)另一個DNA序列的轉(zhuǎn)錄和翻譯的DNA序列。當(dāng)RNA聚合酶將編碼序列轉(zhuǎn)錄成mRNA(其隨后被翻譯成由所述編碼序列編碼的蛋白質(zhì))時，所述編碼序列在細(xì)胞中處于轉(zhuǎn)錄和翻譯控制序列的“控制之下”。當(dāng)已將此類DNA引入細(xì)胞內(nèi)時，細(xì)胞已被外源或異源DNA“轉(zhuǎn)化”。轉(zhuǎn)化DNA可被或可以不被整合(共價連接)進(jìn)染色體DNA，從而構(gòu)成細(xì)胞的基因組。在例如原核生物細(xì)胞、酵母細(xì)胞和哺乳動物細(xì)胞中，可將所述轉(zhuǎn)化DNA維持在附加型元件諸如質(zhì)粒上。關(guān)于真核生物細(xì)胞，穩(wěn)定轉(zhuǎn)化的細(xì)胞是其中轉(zhuǎn)化DNA已被整合進(jìn)染色體內(nèi)，以使得其能夠通過染色體復(fù)制由子細(xì)胞遺傳的轉(zhuǎn)化細(xì)胞。該穩(wěn)定性通過真核細(xì)胞建立由含有轉(zhuǎn)化DNA的子細(xì)胞的群體組成的細(xì)胞系或克隆的能力來證明?！翱寺　笔峭ㄟ^有絲分裂來源于單個細(xì)胞或共同祖先的細(xì)胞的群體。“細(xì)胞系”是能夠在體外穩(wěn)定生長許多代的原代細(xì)胞的克隆。當(dāng)至少約75％(優(yōu)選至少約80％，更優(yōu)選至少約90或95％)的核苷酸在DNA序列的確定長度上匹配時，則兩個DNA序列是“基本上同源的”?；旧贤吹男蛄锌赏ㄟ^使用可在序列數(shù)據(jù)庫中獲得的標(biāo)準(zhǔn)軟件比較序列來鑒定，或在Southern雜交實(shí)驗(yàn)中在例如嚴(yán)格條件(如針對該特定系統(tǒng)定義的)下鑒定。定義適當(dāng)?shù)碾s交條件在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力內(nèi)。參見，例如，Maniatis等，同上；DNACloning，第I和II卷，同上；NucleicAcidHybridization，同上。應(yīng)當(dāng)理解的是，也在本公開的范圍內(nèi)的是編碼本公開的抗體或用于本公開的抗體的DNA序列，其編碼具有相同氨基酸序列的抗體、多肽或其活性片段，但被簡并成原始或已知的編碼序列?！昂啿⒊伞币庵笇⒉煌娜帜该艽a子用于指定特定的氨基酸。本領(lǐng)域中公知的是，以下密碼子可互換地用于編碼每一個特定的氨基酸：應(yīng)理解的是，上述指定的密碼子是針對RNA序列的。針對DNA的對應(yīng)密碼子用T取代U。可在抗體或活性片段編碼序列中產(chǎn)生突變，以使得特定的密碼子被改變成編碼不同氨基酸的密碼子。這樣的突變通常通過盡可能產(chǎn)生最少的核苷酸變化來產(chǎn)生。這種類型的取代突變可被產(chǎn)生來以“非保守”的方式(即，通過將密碼子從屬于具有特定尺寸或特征的氨基酸的不同分組的氨基酸改變成屬于另一個分組的氨基酸)或以“保守的”方式(即，通過將密碼子從屬于具有特定尺寸或特征的氨基酸的分組的氨基酸改變成屬于同一分組的氨基酸)改變所得蛋白中的氨基酸。此類保守變化通常在所得蛋白的結(jié)構(gòu)和功能方面導(dǎo)致較小的變化。非保守變化更加可能改變所得蛋白的結(jié)構(gòu)、活性或功能。某些實(shí)施方案被認(rèn)為包括在氨基酸序列中在1、2、3、4、5、6或7個氨基酸殘基上含有保守變化或取代的序列，所述保守變化或取代不會顯著改變所得蛋白的活性或結(jié)合特征。如上文中提及的，可通過合成而非克隆來制備編碼抗體、多肽或其活性片段的DNA序列。可利用適當(dāng)?shù)拿艽a子來設(shè)計(jì)抗體或片段氨基酸序列的DNA序列。一般地，如果將序列用于表達(dá)，人們會選擇對于預(yù)期的宿主是優(yōu)選的密碼子。從通過標(biāo)準(zhǔn)方法制備的重疊寡核苷酸裝配完全序列，所述序列被裝配成完全編碼序列。參見，例如，Edge,Nature,292:756(1981)；Nambair等，Science,223:1299(1984)；Jay等，J.Biol.Chem.,259:6311(1984)。合成DNA序列允許方便地構(gòu)建將表達(dá)類似物或或“突變蛋白”的基因?；蛘?，可通過天然基因或cDNA的定點(diǎn)誘變來產(chǎn)生編碼突變蛋白的DNA，以及可使用常規(guī)多肽合成來直接產(chǎn)生突變蛋白。DNA構(gòu)建體的“異源”區(qū)是在自然界中未被發(fā)現(xiàn)與較大的分子連接的較大的DNA分子內(nèi)的DNA的可鑒定的區(qū)段。因此，當(dāng)異源區(qū)編碼哺乳動物基因時，所述基因通常側(cè)連有不側(cè)連來源生物的基因組中的哺乳動物基因組DNA的DNA。異源編碼序列的另一個實(shí)例是其中編碼序列本身在自然中不存在的構(gòu)建體(例如，其中基因組編碼序列含有內(nèi)含子的cDNA，或具有與天然基因不同的密碼子的合成序列)。等位變異或天然存在的突變事件不產(chǎn)生如本文中定義的DNA的異源區(qū)域。當(dāng)表達(dá)控制序列控制和調(diào)節(jié)DNA序列的轉(zhuǎn)錄和翻譯時，該DNA序列被“可操作地連接”至表達(dá)控制序列。術(shù)語“可操作地連接”包括在待表達(dá)的DNA序列之前具有適當(dāng)?shù)钠鹗夹盘?例如，ATG)和維持正確的閱讀框架以允許在表達(dá)控制序列的控制下表達(dá)所述DNA序列，和產(chǎn)生由所述DNA序列編碼的所需產(chǎn)生。如果期望插入重組DNA分子的基因不含適當(dāng)?shù)钠鹗夹盘?，則可在所述基因之前插入起始信號。術(shù)語“標(biāo)準(zhǔn)雜交條件”是指基本上等效于用于雜交和洗滌的5xSSC和65℃的鹽和溫度條件。然而，本領(lǐng)域技術(shù)人員將理解，此類“標(biāo)準(zhǔn)雜交條件”取決于特定條件，包括緩沖液中的鈉和鎂的濃度、核苷酸序列長度和濃度、百分比錯配、百分比甲酰胺等。在“標(biāo)準(zhǔn)雜交條件”的確定中也很重要的是兩個序列雜交是RNA-RNA、DNA-DNA還是RNA-DNA。此類標(biāo)準(zhǔn)雜交條件可由本領(lǐng)域技術(shù)人員根據(jù)熟知的公式來容易地確定，其中雜交通常比預(yù)測的或測定的Tm低10-20℃，如果需要，洗滌使用較高的嚴(yán)格度。術(shù)語對于抗體和片段的“結(jié)合親和力”在本文中被描述為KD(抗體與其抗原之間的平衡解離常數(shù))，其可通過本領(lǐng)域中已知的各種方法來測定。在一些實(shí)施方案中，抗體或抗原結(jié)合片段表現(xiàn)出以下對于甲型流感病毒、乙型流感病毒或來源于其的HA蛋白諸如重組HA蛋白的結(jié)合親和力。在一個實(shí)施方案中，所述結(jié)合親和力在約5x10-8M與約5x10-12M之間，在一些實(shí)施方案中，所述結(jié)合親和力在約5x10-9M與5x10-11M之間，在一些實(shí)施方案中，所述結(jié)合親和力在約3x10-9M與約5x10-11M之間，在一些實(shí)施方案中，所述結(jié)合親和力在約5x10-10M與約5x10-11M之間。在一些實(shí)施方案中，提供了表現(xiàn)出小于10nM、小于3nM或小于1nM或緊密的對于重組HA蛋白的KD的抗體和抗原結(jié)合片段。在一些實(shí)施方案中，提供了表現(xiàn)出在10nM與0.1pM之間的KD的抗體和片段。在一些實(shí)施方案中，提供了表現(xiàn)出在3nM與1pM之間的KD的抗體和片段。如本文中所用，術(shù)語“緊密的”表示提及的KD值或更小(較低的KD值)，因?yàn)橛H和力的強(qiáng)度或緊密程度越高，KD值越低。在一些實(shí)施方案中，KD通過測定斜入射反射率差(OI-RD)(例如通過使用微陣列或流體系統(tǒng)，例如利用(參見Landry等，2012,AssayandDrugDevTechnol10(3),250-259)，或利用(即，表面等離子體共振)或競爭性結(jié)合測定)來進(jìn)行測量?？贵w介導(dǎo)的病毒的中和在本文中如在領(lǐng)域中所定義或接受的那樣被定義，并且如在本文中提及和使用的，可在各種常規(guī)或公認(rèn)的中和測定中對其進(jìn)行測試。中和測定的實(shí)例包括基于對培養(yǎng)中的細(xì)胞的病毒致細(xì)胞病變效應(yīng)(CPE)的抑制的常規(guī)中和測定。例如，流感中和可通過在被流感感染的MDCK細(xì)胞中減少或阻斷CPE的形成來進(jìn)行測試?？蓪⒉《竞椭泻驮噭╊A(yù)先混合，隨后添加至細(xì)胞，然后測量病毒進(jìn)入的阻斷?？审w外測試血凝素抑制(HI)，并且所述血凝素抑制可檢測病毒結(jié)合紅細(xì)胞的能力的阻斷。在WHOManualonAnimalInfluenza(who/cds/csr/ncs/2002.5，第48-54頁)中提供了示例性已知的和接受的中和測定。阻斷唾液酸受體結(jié)合部位的抗體可中和病毒對細(xì)胞的結(jié)合，從而阻斷感染。反過來，中和測定可檢測病毒排出的阻斷，如在神經(jīng)氨酸酶抑制劑如的情況下。最近，已鑒定了通過阻止病毒排出以類似的方式起作用的中和抗體，該中和的實(shí)例包括乙型流感病毒上的CR9114抗體(Dreyfus等(2012)Science337:1343-1348)。同樣地，利用其中使用與ELISA組成的微量滴定板在感染的細(xì)胞中檢測到病毒核蛋白(NP)的微量中和測定。定量PCR測定已被描述來測量病毒蛋白質(zhì)(DreyfusC等(2012)EmergingInfDiseases19(10:1685-1687)。在一些實(shí)施方案中，提供了在另一個常規(guī)體外中和測定中不顯示為中和抗體，但確實(shí)表現(xiàn)出外出抑制中和，從而通過IN施用是有效的抗體或片段。因此，如本文中定義的“中和”抗體將指在常規(guī)體外中和測定中表現(xiàn)出中和的抗體，和/或抑制外出抑制的抗體。因此，在術(shù)語的一個意義上，排出抑制劑具有中和作用，因?yàn)槠湟种屏鞲懈腥镜膫鞑?。“?中和”抗體或非中和抗體可結(jié)合病毒但在識別中和測定中或常規(guī)評價性評估中不抑制病毒或病毒復(fù)制。對病毒的結(jié)合可通過阻止其與細(xì)胞、細(xì)胞受體或細(xì)胞靶的有效相互作用來抑制病毒。非中和抗體可結(jié)合于病毒中的保守蛋白或蛋白上的表位。例如，臨床試驗(yàn)中M2抗體TCN-032可結(jié)合廣泛的甲型流感病毒，但在常規(guī)中和測定并不表現(xiàn)出中和。類似地，可鑒定不中和但結(jié)合HA的抗體。如本文中所用，“Fab片段”是指這樣的抗體片段，其包含含有輕鏈(CL)的VL結(jié)構(gòu)域和恒定結(jié)構(gòu)域的輕鏈片段，和重鏈的VH結(jié)構(gòu)域和第一恒定結(jié)構(gòu)域(CH1)?？贵w分子的Fab和F(ab')2部分可通過利用公知的方法分別對基本上完整的抗體分子進(jìn)行木瓜蛋白酶和胃蛋白酶的蛋白水解反應(yīng)來制備，或可合成或重組地制備。Fab'抗體分子部分也是公知的，并且可通過如利用巰基乙醇還原連接兩個重鏈部分的二硫鍵，隨后用試劑諸如碘乙酰胺烷基化所得的蛋白質(zhì)硫醇來從F(ab')2部分產(chǎn)生。術(shù)語“Fc結(jié)構(gòu)域”在本文中用于定義含有恒定區(qū)的至少一部分的免疫球蛋白重鏈的C-末端區(qū)域。例如在天然抗體中，F(xiàn)c結(jié)構(gòu)域由來源于IgG、IgA和IgD同種型中的抗體的兩個重鏈的第二和第三恒定結(jié)構(gòu)域的兩個相同的蛋白質(zhì)片段組成；IgM和IgEFc結(jié)構(gòu)域在每一條多肽鏈中含有3個重鏈恒定結(jié)構(gòu)域(CH結(jié)構(gòu)域2-4)。示例性抗體分子是完整的免疫球蛋白分子、基本上完整的免疫球蛋白分子和含有互補(bǔ)位的免疫球蛋白分子的那些部分，包括本領(lǐng)域中已知的那些部分如Fab、Fab'、F(ab')2和F(v)，所述部分對于在本文所述的治療方法中的使用是優(yōu)選的。在某些情況下，如本公開中所教導(dǎo)的，對于使用，特別是對于鼻內(nèi)或吸入施用，需要一定水平或量的抗體的中和活性和必要特性。因此，用于根據(jù)本公開的鼻內(nèi)使用的任何片段、變體、衍生物、合成抗體或抗體部分需要保留針對靶病毒或病原體(在一個方面流感病毒)的中和能力及活性。另一方面，將經(jīng)由可選擇的全身性途徑(包括腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi))施用的抗體必須結(jié)合或識別靶病毒或病原體(在一個方面流感病毒)，然而，不需要中和。因此，作為實(shí)例，可鼻內(nèi)使用保留中和的抗體的Fab片段(多個片段)。經(jīng)由Fc介導(dǎo)的效應(yīng)子功能對于鼻內(nèi)功效和中和來說是不需要的。相反地，全身性遞送的抗體將明顯地通過效應(yīng)子功能來介導(dǎo)其功效。術(shù)語“抗原結(jié)合結(jié)構(gòu)域”是指包含特異性結(jié)合抗原的部分或全部并與其互補(bǔ)的區(qū)域的抗原結(jié)合分子的部分。當(dāng)抗原較大時，抗原結(jié)合分子可以只與抗原的特定部分結(jié)合，所述部分被稱為表位?？乖Y(jié)合結(jié)構(gòu)域可由例如一個或多個抗體可變結(jié)構(gòu)域(也稱為抗體可變區(qū))提供。優(yōu)選地，抗原結(jié)合域包含抗體輕鏈可變區(qū)(VL)和抗體重鏈可變區(qū)(VH)。術(shù)語“可變區(qū)”或“可變結(jié)構(gòu)域”是指參與將抗體與抗原結(jié)合的抗體重鏈或輕鏈的結(jié)構(gòu)域。天然抗體的重鏈和輕鏈的可變結(jié)構(gòu)域(分別為VH和VL)通常具有相似的結(jié)構(gòu)，每一個結(jié)構(gòu)域包含4個保守框架區(qū)(FR)和3個高變區(qū)(HVR)。(參見，例如，Kindt等KubyImmunology，第6版，W.H.FreemanandCo.，第91頁(2007))。單個VH或VL結(jié)構(gòu)域可足以賦予抗原結(jié)合特異性。此外，結(jié)合特定抗原的抗體可使用來自結(jié)合該抗原的抗體的VH或VL結(jié)構(gòu)域分別篩選互補(bǔ)VL或VH結(jié)構(gòu)域的文庫來進(jìn)行分離。參見，例如，Portolano等，J.Immunol.150:880-887(1993)；Clarkson等，Nature352:624-628(1991)。術(shù)語“抗體的抗原結(jié)合部分”，當(dāng)在本文中使用時，是指負(fù)責(zé)抗原結(jié)合的抗體的氨基酸殘基?？贵w的抗原結(jié)合部分包含來自“互補(bǔ)決定區(qū)”或“CDR”的氨基酸殘基?！翱蚣堋被颉癋R”區(qū)是除如本文中定義的高變區(qū)殘基外的那些可變結(jié)構(gòu)域區(qū)域。因此，抗體的輕鏈和重鏈可變結(jié)構(gòu)域從N末端至C末端包含結(jié)構(gòu)域FR1、CDR1、FR2、CDR2、FR3、CDR3和FR4。特別地，重鏈的CDR3是對抗原結(jié)合貢獻(xiàn)最大和決定抗體的性質(zhì)的區(qū)域?？贵w可根據(jù)它們的重鏈和輕鏈CDR在氨基酸序列上進(jìn)行充分定義，并且可特別地根據(jù)它們的重鏈可變區(qū)CDR1、CDR2和CDR3序列和它們的輕鏈可變區(qū)CDR1、CDR2和CDR3序列來進(jìn)行描述和表征?？贵w可被定義或表征為包含重鏈和輕鏈的抗體或片段，其中所述重鏈可變區(qū)包含特定的CDR1、CDR2和CDR3序列并且所述輕鏈可變區(qū)包含特定的CDR1、CDR2和CDR3序列?？筛鶕?jù)本領(lǐng)域技術(shù)人員可獲得的和已知的標(biāo)準(zhǔn)方法和分析確定抗體的CDR和FR。因此，可根據(jù)Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版，PublicHealthService,NationalInstitutesofHealth,Bethesda,Md.(1991)的標(biāo)準(zhǔn)定義或根據(jù)國際免疫遺傳學(xué)信息系統(tǒng)(IMGT)(imgt.org；LeFranc,M-P(1999)NuclAcidsRes27:209-212；LeFranc,M-P(2005)NuclAcidsRes33:D539-D579)確定CDR和FR區(qū)域。所謂“基本上如所列出的”，其意指本公開的抗體的可變區(qū)序列，和/或特別地CDR序列將與本文中所附的序列表中提供的指定的序列同一的或高度同源。其中Xaa出現(xiàn)在序列表中，其代表任何天然存在的氨基酸殘基。所謂“高度同源”，設(shè)想了可在可變區(qū)序列中和/或CDR序列中僅產(chǎn)生少數(shù)取代，優(yōu)選1至8個，優(yōu)選1至5個，優(yōu)選1至4個，或1至3個或1個或2個取代。術(shù)語基本上如所列出的包括不實(shí)質(zhì)上或顯著地影響本抗體的特異性和/或活性的特別保守的氨基酸取代。設(shè)想了保守氨基酸取代用于CDR區(qū)序列。在本文中設(shè)想和提供了示例性CDR取代和變體。在一些方面，可在CDR外的可變區(qū)序列中產(chǎn)生取代，以保留CDR序列。因此，可在可變區(qū)序列或可選擇的非同源或鑲嵌可變區(qū)序列中引入或利用變化，以使得CDR序列得以維持并且可變區(qū)的其余部分可被取代。術(shù)語“表位”包括能夠特異性結(jié)合抗體的任何多肽決定簇。在某些實(shí)施方案中，表位決定簇包括分子諸如氨基酸、糖側(cè)鏈、磷?；蚧酋；幕瘜W(xué)活性表面聚集，并且在某些實(shí)施方案中，可具有特定的三維結(jié)構(gòu)特征，和/或特定的電荷特征。表位是被抗體結(jié)合的抗原的區(qū)域。用于通過雜交瘤或其它方式和方法產(chǎn)生單克隆抗體的方法和方法學(xué)是公知的。可篩選針對病原體、病毒或流感肽產(chǎn)生的單克隆抗體的小組的各種性質(zhì)；即，中和、同種型、表位、親和力等。特別吸引人的是中和病毒或其亞單位的活性的單克隆抗體。可在中和活性測定中容易地鑒定此類單克隆。高親和力抗體也用于有效結(jié)合和/或中和，或當(dāng)期望免疫親和純化天然或重組病毒或?qū)λ黾兓信d趣時高親和力抗體也是有用的?？赏ㄟ^起始包含含有分泌具有適當(dāng)?shù)目乖禺愋缘目贵w分子的雜交瘤的營養(yǎng)培養(yǎng)基的單克隆雜交瘤培養(yǎng)物，來產(chǎn)生用于實(shí)踐目前公開的實(shí)施方案的單克隆抗體。在足以使雜交瘤將抗體分子分泌至培養(yǎng)基中的條件下維持培養(yǎng)物，持續(xù)一段足以使抗體分子分泌至培養(yǎng)基中的時間。隨后收集含抗體的培養(yǎng)基。隨后可通過公知的技術(shù)進(jìn)一步分離抗體分子。用于制備這些組合物的介質(zhì)在本領(lǐng)域中是公知的和商購可得的，包括合成培養(yǎng)基、近交系小鼠等。示例性合成培養(yǎng)基是補(bǔ)充有4.5gm/l葡萄糖、20mm谷氨酰胺和20％胎牛血清的達(dá)爾伯克最低必需培養(yǎng)基(DMEM；Dulbecco等，Virol.8:396(1959))。示例性近交系小鼠品系為Balb/c。用于產(chǎn)生單克隆抗病毒抗體的方法在本領(lǐng)域中也是公知的。參見Niman等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,80:4949-4953(1983)。通常地，單獨(dú)使用病毒、病毒蛋白或肽類似物，或?qū)⑵渚Y合于免疫原性載體，如用于產(chǎn)生單克隆抗體的免疫原。篩選雜交瘤的產(chǎn)生與所述病毒、蛋白或肽類似物免疫反應(yīng)的抗體的能力。抗體還可以是雙特異性或多特異性的，例如其中抗體的一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域是用于本發(fā)明的病毒中和抗體，并且另一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域具有不同的特異性，例如結(jié)合細(xì)胞的頂端表面或與其締合，結(jié)合氣道上皮細(xì)胞等。本發(fā)明的雙特異性抗體包括其中抗體的一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域是用于本發(fā)明的中和劑，包括其片段，并且另一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域是不同的抗體或其片段，包括不同的抗病毒特異性抗體(包括可選擇的中和抗體或非中和抗體)的片段。另一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域可以是識別或靶向特定細(xì)胞類型的抗體，如在肺上皮、肺泡巨噬細(xì)胞中，神經(jīng)或神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞特異性抗體。在本發(fā)明的雙特異性抗體中，可將本發(fā)明的抗體的一個結(jié)合結(jié)構(gòu)域與其它結(jié)合結(jié)構(gòu)域或分子組合，所述其它結(jié)合結(jié)構(gòu)域或分子識別特定細(xì)胞受體和/或以特定方式調(diào)節(jié)細(xì)胞，如例如免疫調(diào)節(jié)劑(例如，白細(xì)胞介素)、生長調(diào)節(jié)劑或細(xì)胞因子或毒素(例如，篦麻毒素)或抗有絲分裂或細(xì)胞凋亡試劑或因子。因此，本發(fā)明的抗體可用于將試劑、標(biāo)記導(dǎo)向或靶向適應(yīng)癥諸如感染、炎癥等中的其它分子或化合物或抗體。用于本發(fā)明的雙特性抗體可包含至少2個Fab片段，在一個實(shí)例中，其中交換第二Fab片段的重鏈和輕鏈的可變區(qū)或恒定區(qū)。由于可變或恒定區(qū)的交換，所述第二Fab片段也被稱為“交叉-Fab片段”或“xFab片段”或“交叉Fab片段”。此類雙特異性在US2013006011中進(jìn)行了描述。在具體的和進(jìn)一步的方面，通過IN進(jìn)行的中和抗體的組合或連續(xù)施用連同通過IP或IV進(jìn)行的抗體的施用一起提供了用于治療和/預(yù)防病毒感染的有效且增強(qiáng)的協(xié)同方法。全身性施用(包括IP或IV)的抗體可以是中和的或非中和的，從而可以是與通過IN施用的抗體相同的抗體，或可以是經(jīng)修飾的抗體或不同的抗體。因此，用于鼻內(nèi)遞送的抗體，中和抗體可以是與與其組合使用(用于通過另一種方法的遞送，特別地全身性遞送，包括IP或IV遞送)的抗體相異或不同的抗體。本公開表明，中和抗體的Fc功能和Fc部分，從而效應(yīng)子功能不是鼻內(nèi)增強(qiáng)的功效所需的。因此，抗體和片段諸如Fab片段，或不存在Fc或不存在效應(yīng)子功能的抗體在鼻內(nèi)施用中是有效的。相反地，抗體(中和或非中和的)的Fab片段或不存在Fc或不存在效應(yīng)子功能的抗體在IP或IV施用中是無效的。在一些實(shí)施方案中，提供了免疫綴合物或抗體融合蛋白，其中將用于本發(fā)明的抗體、抗體分子或其片段綴合或附接于其它分子或試劑，所述免疫綴合物或抗體融合蛋白還包括，但不限于綴合于化學(xué)消融劑、毒素、免疫調(diào)節(jié)劑、細(xì)胞因子、細(xì)胞毒性劑、化療劑、抗病毒劑、抗微生物劑或肽、細(xì)胞壁和/或細(xì)胞膜破裂劑或藥物的此類抗體、分子或片段。在一個方面，所述免疫調(diào)節(jié)劑或抗體融合物可包括綴合于抗病毒劑，特別地抗流感劑的抗體、分子或片段。抗流感劑可以是神經(jīng)氨酸酶抑制劑?？沽鞲袆┛蛇x自Tamiflu和Relenza?？沽鞲袆┛梢允荕2抑制劑，諸如金剛烷胺或金剛乙胺?？沽鞲袆┛梢允遣《緩?fù)制抑制劑?？贵w、其片段和組合物(包括本發(fā)明的抗體)用于治療和預(yù)防其的“多個受試者”或“受試者”，除了人以外，還包括對流感感染易感的任何受試者。因此，各種哺乳動物，諸如牛、豬、綿羊和其它哺乳動物受試者，包括馬和家庭寵物，以及海豹，將受益于這些結(jié)合部分的預(yù)防性和治療性使用。在一些情況下，使用適于受試者物種的抗體。另外，已知流感感染禽類物種，所述禽類物種也將受益于含有本發(fā)明的抗體的組合物，再次地可能適于受試者物種?？贵w或片段的“治療有效量”或“有效量”是以適用于任何醫(yī)學(xué)治療的合理的效益/風(fēng)險比賦予治療的受試者以療效的預(yù)定量。療效可以是客觀的(即，可通過一些測試或標(biāo)志物測量的)或主觀的(即，受試者給出效應(yīng)的指征或感染效應(yīng)，或醫(yī)生觀察變化)。組合物中每一種抗體的有效量可在約0.001mg/kg至約100mg/kg、約0.01mg/kg至約10mg/kg、約0.05mg/Kg至約1mg/kg的范圍內(nèi)。本文中設(shè)想的效應(yīng)，視情況而定，包括醫(yī)學(xué)治療性和/或預(yù)防性治療。根據(jù)本公開施用以獲得治療和/或預(yù)防效應(yīng)的抗體或片段的具體劑量將當(dāng)然地根據(jù)病例周圍的具體情況來確定，包括，例如，所施用的化合物、施用途徑、其它活性成分的共施用、待治療的病況、所使用的具體組合物、患者的年齡、體重、一般健康、性別和飲食；所使用的具體化合物的施用時間、施用途徑和排泄速率和治療的持續(xù)時間。施用的有效量可由醫(yī)生根據(jù)前述相關(guān)情況和合理的醫(yī)學(xué)判斷的運(yùn)用來確定?！委熡行Я俊庵笗鹩舍t(yī)學(xué)博士或其它臨床醫(yī)生正在尋求的受試者的生物或醫(yī)學(xué)反應(yīng)的藥物、化合物、抗微生物劑、抗體或藥物試劑的量。具體地，關(guān)于病毒感染和病毒增殖，術(shù)語“有效量”旨在包括將帶來受試者中病毒復(fù)制或發(fā)病機(jī)制的量或程度的生物學(xué)上有意義的減少，和/或疾病(發(fā)熱、關(guān)節(jié)疼痛、不適)的持續(xù)時間的減少，或被感染的個體的體重減輕的減少的化合物或試劑的有效量。短語“治療有效量”在本文中用于意指足以減少，優(yōu)選地阻止病毒載入、病毒復(fù)制、病毒傳播或病理學(xué)的其它特性諸如例如，發(fā)熱或增加的白細(xì)胞計(jì)數(shù)(這可伴隨其病毒的存在和活性)的量。在某些實(shí)施方案中，在向受試者施用療法的上下文中，“有效量”是指足以實(shí)現(xiàn)以下效應(yīng)的1個、2個、3個、4個或更多個效應(yīng)的療法的量：(i)流感病毒感染、流感病毒性疾病或與其相關(guān)的癥狀的嚴(yán)重度的減輕或改善；(ii)流感病毒感染、流感病毒性疾病或與其相關(guān)的癥狀的持續(xù)時間的減少；(iii)流感病毒感染、流感病毒性疾病或與其相關(guān)的癥狀的進(jìn)展的阻止；(iv)流感病毒感染、流感病毒性疾病或與其相關(guān)的癥狀的消退；(v)流感病毒感染、流感病毒性疾病或與其相關(guān)的癥狀的發(fā)展或發(fā)作的阻止；(vi)流感病毒感染、流感病毒性疾病或與其相關(guān)的癥狀的復(fù)發(fā)的阻止；(vii)流感病毒從一個細(xì)胞至另一個細(xì)胞、從一個組織至另一個組織或從一個器官至另一個器官的擴(kuò)散的減少或阻止；(viii)流感病毒從一個受試者至另一個受試者的擴(kuò)散/傳播的阻止或減少；(ix)與流感病毒感染或流感病毒性疾病相關(guān)器官衰竭的減少；(x)受試者的住院的減少；(xi)住院時間長度的減少；(xii)流感病毒感染或與其相關(guān)的疾病的受試者的存活率的增加；(xiii)流感病毒感染或與其相關(guān)的疾病的消除；(xiv)流感病毒復(fù)制的抑制或減少；(xv)流感病毒與宿主細(xì)胞的結(jié)合或融合的抑制或減少；(xvi)流感病毒進(jìn)入宿主細(xì)胞的抑制或減少；(xvii)流感病毒基因組的復(fù)制的抑制或減少；(xviii)流感病毒蛋白的合成的抑制或減少；(xix)流感病毒顆粒的裝配的抑制或減少；(xx)流感病毒顆粒從宿主細(xì)胞的釋放的抑制或減少；(xxi)流感病毒滴度的減少；(xxii)與流感病毒感染或流感病毒性疾病相關(guān)的癥狀的數(shù)目的減少；(xxiii)另一種療法的預(yù)防性或治療性效應(yīng)的增強(qiáng)、改善、補(bǔ)充或提高；(xxiv)與流感病毒感染相關(guān)的繼發(fā)感染的發(fā)作或進(jìn)展的阻止；(xxv)繼發(fā)于流感病毒感染的細(xì)菌性肺炎的發(fā)作的阻止或疾病嚴(yán)重度的降低；和/或(xxvi)對流感的免疫應(yīng)答包括細(xì)胞因子、趨化因子、補(bǔ)體、細(xì)胞反應(yīng)等的改變。在一些實(shí)施方案中，療法的“有效量”具有有益的效應(yīng)，但不治愈流感病毒感染或與其相關(guān)的疾病。在某些實(shí)施方案中，療法的“有效量”可包括以一定的頻率施用多個劑量的療法，以獲得一定量的具有預(yù)防性和/或治療性效應(yīng)的療法。在其它情況下，療法的“有效量”可包括以特定量施用單個劑量的療法。與病毒感染(包括具體地流感感染)、病毒性疾病或病毒暴露相關(guān)的“癥狀”或“多個癥狀”可包括，但不限于100℉或更高的發(fā)熱、感覺發(fā)熱、咳嗽和/或喉嚨痛、流鼻涕或鼻塞、頭痛和/或全身酸痛、畏寒、乏力、全身乏力、惡心、嘔吐和/或腹瀉、關(guān)節(jié)和肌肉中和/或眼周的痛和疼痛。術(shù)語‘預(yù)防’或‘防止’是指可被暴露于致病劑或在疾病發(fā)作之前對疾病易感的受試者中獲得或發(fā)展疾病或病癥的風(fēng)險的降低(即，使疾病的臨床癥狀的至少一個癥狀不發(fā)展)。術(shù)語“預(yù)防”涉及術(shù)語‘防止’并包含在其中，并且是指其目的是防止而非治療或治愈疾病的措施或方法。術(shù)語任何疾病或感染的‘治療(treating/treatment)’在一個實(shí)施方案中是指改善疾病或感染(即，阻止疾病或感染劑或病毒的增長或降低其臨床癥狀的至少一個的表現(xiàn)、程度或嚴(yán)重度)。在另一個實(shí)施方案中，‘治療’是指改善至少一個受試者可能不能辨別的身體參數(shù)。在另一個實(shí)施方案中，‘治療’是指物理地(例如，可辨別的癥狀的穩(wěn)定)、生理地(例如，身體參數(shù)的穩(wěn)定)或通過這兩種方式調(diào)節(jié)疾病或感染。在其它實(shí)施方案中，‘治療’涉及減緩疾病的進(jìn)展、疾病的傳播或減少感染。如本文中所用，“pg”意指皮克，“ng”意指納克，“ug”或“μg”意指微克，“mg”意指毫克，“ul”或“μl”意指微升，“ml”意指毫升，“l(fā)”意指升。用于預(yù)防和治療的方法是常規(guī)的并且通常是公知的。抗體或其它結(jié)合部分通常通過注射提供，但口服疫苗也已知是有效的。劑量水平和施用時間容易優(yōu)化，并在本領(lǐng)域技術(shù)人員的能力之內(nèi)。在一個替代方案中，可施用用于原位產(chǎn)生抗體的重組材料。技術(shù)現(xiàn)在可用于在動物受試者的細(xì)胞，包括例如淋巴細(xì)胞或肌細(xì)胞中表達(dá)抗體基因(參見，例如，Johnson,P.R.等，NatureMedicine(2009)15:901-907)。此類抗體的原位產(chǎn)生可減少制造藥劑的成本，并簡化了管理。通過此類方法進(jìn)行的本發(fā)明的抗體的施用是本發(fā)明的另一個方面。分泌有用抗體的人細(xì)胞(或來自任何指定物種的細(xì)胞)可使用特別地美國專利7,413,868(其內(nèi)容通過引用并入本文)中描述的CellSpotTM方法來鑒定。簡言之，該方法能夠在利用標(biāo)記(利用微粒標(biāo)記物)和顯微鏡觀察的高通量測定中篩選獲自人(或其它物種)受試者的單個細(xì)胞。在一個舉例說明性實(shí)施方案中，甚至可通過使分泌的抗體吸附在表面上或偶聯(lián)于表面，隨后用所需的試劑(其各自偶聯(lián)于獨(dú)特的微粒標(biāo)記物)處理所述表面，來分析單個細(xì)胞的其分泌的抗體。因此可借助于顯微鏡鑒定細(xì)胞的足跡。通過使用該技術(shù)，可篩選數(shù)百萬的細(xì)胞的所需的抗體分泌，甚至可回收稀有抗體，諸如本文中希望用來跨株被動流感免疫的那些抗體。由于人受試者具有針對至少一些流感株的現(xiàn)存抗體，以及由于通過本發(fā)明的方法獲得的抗體結(jié)合保守的序列，因此這些抗體用于尋址新株以及已與人群遭遇的株的目的。獲得合適的抗體的方法不限于CellSpotTM技術(shù)，它們也不限于人受試者。產(chǎn)生合適的抗體的細(xì)胞可通過各種方式來鑒定，并且細(xì)胞可以是實(shí)驗(yàn)室動物諸如小鼠或其它嚙齒類動物的細(xì)胞。可分離編碼這些抗體的核酸序列和產(chǎn)生的多種抗體形式，包括由非人細(xì)胞產(chǎn)生的抗體的嵌合和人源化形式。另外，重組產(chǎn)生的抗體或片段包括單鏈抗體或它們的Fab或Fab2區(qū)。還可使用宿主諸如具有人源化免疫系統(tǒng)的獲得人抗體。用于產(chǎn)生用于篩選合適的結(jié)合特征的抗體的方法在本領(lǐng)域中是公知的。類似地，用于構(gòu)建具有所需結(jié)合模式的RNA適體的方式在本領(lǐng)域中也是已知的。如上文中指出的，抗體或其它結(jié)合部分可結(jié)合血凝素蛋白的激活形式、無活性形式或這兩種形式。在某些情況下有利的是，所述表位存在于該蛋白的裂解位點(diǎn)，因?yàn)槠湓谥觊g相對保守，但優(yōu)選結(jié)合部分結(jié)合三聚體和激活形式。甲型流感和乙型流感的各種株的裂解位點(diǎn)是已知的。例如，上面引用的Bianchi等的論文在表2中顯示了幾個此類株的裂解位點(diǎn)周圍的序列：表2.甲型和乙型流感病毒成熟裂解位點(diǎn)的暴露于溶劑的區(qū)域的共有序列。aHA1與HA2之間的裂解的位置由箭頭標(biāo)示。b對于Victoria和Yamagata譜系共有序列是相同的。正如所指出的，嚴(yán)格的共有序列始于裂解位點(diǎn)上游的精氨酸殘基，因而本發(fā)明的測試肽中包含的優(yōu)選的共有序列具有序列RGI/L/FFGAIAGFLE(SEQIDNO:57)。有可能只在測試肽中僅使用此序列的一部分。如上所指出的，一旦已鑒定分泌所需抗體的細(xì)胞，就可直接檢索編碼它們的核苷酸序列，和大規(guī)模重組地產(chǎn)生所需抗體。這也使得能夠操作抗體，以使得它們可被產(chǎn)生例如為單鏈抗體或?yàn)閮H它們的可變區(qū)，或?yàn)殡p特異性抗體。所檢索的核酸可被物理存儲和被回收用于以后的重組生產(chǎn)，和/或可檢索關(guān)于抗體的編碼序列的序列信息并將其存儲，以允許隨后合成適當(dāng)?shù)暮怂?。編碼序列中包含的信息的可得性以及快速合成和克隆技術(shù)連同已知的重組生產(chǎn)方法，允許在發(fā)生大流行或其它緊急情況時迅速生產(chǎn)所需的抗體。以供參考，兩條重鏈和輕鏈的人恒定區(qū)的序列已進(jìn)行了描述并在本文示于SEQIDNO:33-35。在上文引用的WO2011/16008和WO2013/086052中，已回收了以不同程度的親和力與流感的各種株的HA蛋白結(jié)合的，具有確定的氨基酸序列和對應(yīng)的核苷酸編碼序列的可變區(qū)的各種單克隆抗體。這些抗體包括mAb53和mAb579。mAb53以特定的親和力結(jié)合H1；此外，mAb53緊密結(jié)合H5、H7和H9。mAb579結(jié)合H3和H7。親和力低至亞納摩爾范圍。使用在HEK293細(xì)胞表面上表達(dá)的HA驗(yàn)證與HA的天然三聚體的反應(yīng)性。通過流式細(xì)胞術(shù)測量抗體結(jié)合。編碼HA的質(zhì)粒由EmoryUniversity的S.Galloway和D.Steinhauer提供，并且，在各種進(jìn)化枝的細(xì)胞表面上展示的三聚體被本發(fā)明的單克隆抗體識別。目前存在用于產(chǎn)生整合來自兩個單獨(dú)的抗體的抗原特異性結(jié)構(gòu)域的單一抗體樣分子(雙特異性抗體)的多種技術(shù)。因此，具有非常廣泛的株反應(yīng)性的單一抗體可使用具有分別與組1和組2的廣泛反應(yīng)性的單一抗體，或與結(jié)合乙型流感組合的結(jié)合這些組之一的抗體的Fab結(jié)構(gòu)域來構(gòu)建。合適的技術(shù)已由Macrogenics(Rockville,MD)、Micromet(Bethesda,MD)和Merrimac(Cambridge,MA)描述。(參見，例如，Orcutt,K.D.等，“AmodularIgG-scFvbispecificantibodytopology,”ProteinEngDesSel.(2010)23:221-228；Fitzgerald,J.等，“Rationalengineeringofantibodytherapeuticstargetingmultipleoncogenepathways,”MAbs.(2011)1:3(3)；和Baeuerle,P.A.等，“BispecificT-cellengagingantibodiesforcancertherapy,”CancerRes.(2009)69:4941-4944.)因此，特別有用的是通過構(gòu)建雙特異性抗體來提供結(jié)合多個類型的血凝素蛋白的抗體或其它結(jié)合部分。特別有用的組合是組合mAb53(H1、H5和H9)與mAb579(H3和H7)的結(jié)合特異性的那些組合。雖然mAb53以高親和力與HA0結(jié)合，但其不結(jié)合HA1，這暗示著對互補(bǔ)HA2片段的結(jié)合，所述結(jié)合已被確認(rèn)。由于當(dāng)通過免疫印跡測試時mAb53不結(jié)合HA0，因此假定顯性表位是至少部分構(gòu)象的。表3和表4提供了由單抗53和579顯示的對于甲型流感的各種株的血凝素蛋白的KD和IC50。表3.mAb53和579對于各種流感病毒株單體和三聚體HA的KD值。表4.mAb53和579對于各種流感病毒株的IC50值在MDCK單層微量中和測定中獲得這些值。本發(fā)明提供了多種具有互補(bǔ)上面引用的那些mAb(例如，mAb53和mAb579)的特異性的新的mAb，其包括識別乙型流感的mAb。這些另外的mAb的可用性提供了制備被動疫苗的機(jī)會，所述被動疫苗在寬范圍的流感株中是有效，從而減緩治療前對感染劑株的準(zhǔn)確確定或診斷的需要。對于確實(shí)是mAb的本公開的那些結(jié)合部分，正如眾所周知的，特異性基本上由存在于輕鏈和重鏈的可變區(qū)中的互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)決定。重鏈CDR的影響被理解為更加重要，而輕鏈的身份更加靈活。因此，mAb或片段的整體特異性通常由重鏈的CDR的性質(zhì)決定，而存在于輕鏈中的CDR進(jìn)行更多的變異，同時使抗體的特異性基本上相同。除了雙特異性抗體本身以外，本公開設(shè)想了在用于中和病毒感染的構(gòu)建體中僅使用重鏈；此類抗體也可以是雙特異性的。因?yàn)樵诒绢I(lǐng)域中應(yīng)理解特異性主要由重鏈可變區(qū)賦予，在一些情況下，重鏈單獨(dú)地已成功地和在本文中成功地作為疫苗中的活性成分?；蛘?，可將具有適當(dāng)?shù)奶禺愋缘闹劓溑c各種輕鏈形式締合，以增強(qiáng)對病毒的親和力或中和病毒的能力。如上文中所指出的，本發(fā)明的結(jié)合部分的特異性結(jié)合由CDR，主要是重鏈的那些CDR決定，但也被輕鏈的那些CDR互補(bǔ)。因此，本發(fā)明的結(jié)合部分可含有重鏈的3個CDR和任選地匹配其的輕鏈的3個CDR。本發(fā)明還包括結(jié)合與實(shí)際上含有這些CDR的結(jié)合部分所結(jié)合的表位相同的表位的結(jié)合部分。因此，例如，還包括的是具有相同結(jié)合特異性─即結(jié)合與實(shí)際上含有所述CDR的結(jié)合部分所結(jié)合的表位相同的表位的適體。因?yàn)榻Y(jié)合親和力也由其中將CDR排列在框架上的方式?jīng)Q定，因此本發(fā)明的結(jié)合部分可含有包含3個相關(guān)的CDR的重鏈的完整可變區(qū)以及，任選地包含與互補(bǔ)所述重鏈的輕鏈相關(guān)的3個CDR的完整輕鏈可變區(qū)。對于對單個表位具有免疫特異性的結(jié)合部分以及對于能夠結(jié)合兩個單獨(dú)的表位的雙特異性抗體或結(jié)合實(shí)體，情況亦如此。因此，對于來源于具有合適的親和力的抗體的可變區(qū)的結(jié)合部分，重要的氨基酸序列是排列在框架上的CDR序列，所述框架可變化而無需影響特異性或使親和力減小至不可接受的水平。這些CDR的界定可通過本領(lǐng)域已知的方法來實(shí)現(xiàn)。具體地，用于鑒定相關(guān)CDR的最常用方法是如Wu,T.T.等，J.Exp.Med.(1970)132:211-250中和書(Kabat,E.A.,等(1983)SequenceofProteinsofImmunologicalInterest,BethesdaNationalInstituteofHealth，第323頁)中公開的Kabat的方法。另一個類似和常用的方法是在Chothia,C.等，J.Mol.Biol.(1987)196:901-917中和Chothia,C.等，Nature(1989)342:877-883中公開的Chothia的方法。另外的修飾已由Abhinandan,K.R.等，Mol.Immunol.(2008)45:3832-3839建議。本發(fā)明包括如通過這些系統(tǒng)的任一個系統(tǒng)界定的CDR。一些批評在兩個系統(tǒng)上已被不同工作人員平息；因此，應(yīng)當(dāng)理解的是，如本文中和權(quán)利要求中指定的CDR可能略有不同。只要所得的可變區(qū)保留它們的結(jié)合能力，CDR的精確位置是不重要的，并且權(quán)利要求中指定的那些區(qū)域被認(rèn)為包括由任何接受的系統(tǒng)鑒定的CDR?？墒褂脴?biāo)準(zhǔn)方法和制劑將本發(fā)明的本抗體的或其它結(jié)合部分作為被動疫苗施用。通常地，通過注射(通常是肌內(nèi)或皮下)施用此類疫苗，但其它施用模式?jīng)Q不排除，包括靜脈內(nèi)施用。通過適當(dāng)?shù)脑O(shè)計(jì)，還可口服施用疫苗。如上所指出的，正在開發(fā)的技術(shù)有望允許在人肌肉或淋巴細(xì)胞中原位生產(chǎn)mAb，例如，本發(fā)明的抗體也適于該生產(chǎn)方法。關(guān)于制劑，使用常用的被動抗體疫苗制劑賦形劑，或可載體諸如脂質(zhì)體、膠束、納米顆粒等中施用結(jié)合部分。包括在本發(fā)明的范圍內(nèi)的特別有趣的方法是通過從mAb制備的納米顆粒的吸附將結(jié)合部分附著于紅細(xì)胞，如Anselmo,A.C.等，在ACSNano.中描述的和在2013年作為10.1021/NN404853Z在線公布的。根據(jù)該技術(shù)，通過將載體顆?；蛩巹┗騼烧呶街良t血細(xì)胞上，獲得至肺的優(yōu)先遞送，從而防止通過肝和脾中的加工造成的縮短的半衰期，并在肺中提供較高的濃度。對于流感被動疫苗這是特別合適的，可使用將結(jié)合部分附著于紅細(xì)胞的各種方法。然而，根據(jù)該論文，所需的全部僅是吸附。用于增強(qiáng)單克隆抗體至肺的分配的其它方法也可用于增強(qiáng)被動疫苗的效力，諸如通過吸入遞送的霧化產(chǎn)品。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明提供了通過針對組1和組2甲型流感病毒和乙型流感病毒的抗體的同時施用或組合施用，有效地治療和預(yù)防流感病毒和流感病毒感染的方法和裝置。按照本發(fā)明，施用廣泛中和抗體的組合，其包含廣泛地針對組1甲型流感病毒的抗體或活性片段、廣泛地針對組2甲型流感病毒的抗體或活性片段，和廣泛地針對乙型流感病毒的抗體或活性片段。在一些實(shí)施方案中，提供了被動疫苗、抗體組合物或抗體組合，其包含有效地針對甲型流感和乙型流感的抗體，并具有與多個株的廣泛反應(yīng)性。這將提供在單一劑量中有效的抗流感劑，并且可在初始癥狀發(fā)展時，或在暴露于流感后施用。同樣地，這將繞過在施用抗體或抗體混合物之前詳盡地表征感染性病毒的需要。確定流感株的診斷需要臨床實(shí)驗(yàn)室設(shè)施，并且通常需要12-24小時的最短出報告時間，如果在選擇適當(dāng)?shù)亩ㄏ虔煼ㄖ靶枰_定流感病毒株時，則這導(dǎo)致治療的不利延遲。通過利用針對甲型和乙型流感病毒株的廣泛反應(yīng)性組合物，治療之前的事先株診斷不是必需的。在一些實(shí)施方案中，提供了通過直接向呼吸道或氣道施用(包括鼻內(nèi)或吸入施用)抗體的組合或組合抗體組合物，有效地治療和預(yù)防流感病毒的新型方法和方式。本發(fā)明表明中和抗體或抗體的組合至呼吸道的直接遞送，包括氣道遞送，諸如通過吸入(IH)和/或鼻內(nèi)(IN)遞送和施用在較低的劑量上比相同量的相同抗體或抗體的組合的全身性施用(IV或IP)優(yōu)越，更顯效和更有效的。在病毒暴露或感染之前或甚至之后利用IN或IH遞送的抗體進(jìn)行的治療或預(yù)防是有效的。在一些實(shí)施方案中，提供了對于哺乳動物的流感病毒感染的治療或預(yù)防是有效的用于氣道施用的組合物，特別是吸入或鼻內(nèi)組合物，特別是抗體聯(lián)合組合物，所述組合物包含廣泛地針對組1甲型流感病毒的抗體或活性片段、廣泛地針對組2甲型流感病毒的抗體或活性片段和廣泛地針對乙型流感病毒的抗體或活性片段。在第一方面，本發(fā)明提供提供了對于哺乳動物的流感病毒感染的治療或預(yù)防是有效的吸入或鼻內(nèi)組合物，其在單一單位劑量中包含病毒中和單克隆抗體的組合，其中以1mg/kg或更少的施用量將每一種抗體被包含劑量中。本發(fā)明提供了對于哺乳動物的流感病毒感染的治療或預(yù)防是有效的吸入或鼻內(nèi)組合物，其在單一單位劑量包含中和單克隆抗體的組合，其中以10mg/kg或更少的有效量施用每一種抗體。本發(fā)明提供了對于哺乳動物的流感病毒的治療或預(yù)防是有效的吸入或鼻內(nèi)組合物，其在單一單位劑量中包含流感中和單克隆抗體的組合(每一種抗體少于1mg/kg)。本發(fā)明提供了對于哺乳動物的流感病毒的治療或預(yù)防是有效的吸入或鼻內(nèi)組合物，其在單一單位劑量包含流感中和單克隆抗體的組合(每一種抗體少于0.5mg/kg)。本發(fā)明提供了對于哺乳動物的流感病毒的治療或預(yù)防是有效的吸入或鼻內(nèi)組合物，其包含抗體的組合，其中以少于0.1mg/kg的劑量施用每一種抗體。在其它方面，本發(fā)明提供對于哺乳動物的流感病毒的治療、預(yù)防或傳播的減少是有效的吸入或鼻內(nèi)組合物，其包含針對循環(huán)流感病毒株的流感中和抗體的組合。在一個方面，本發(fā)明提供了用于鼻內(nèi)施用的組合物，其由針對循環(huán)流感病毒株的流感中和抗體的組合組成，特別地由甲型流感抗H1抗體、甲型流感抗H3抗體和抗乙型流感抗體組成。在一個方面，所述組合物包括有效地針對或進(jìn)一步有效地針對其它流感株，包括但不限于H2、H5和H7株的甲型流感抗體。所述組合物是適合用于和適用于流感病毒的治療或預(yù)防。在具體的方面，所述組合物適用于減少的流感病毒傳播。在具體實(shí)施方案中，提供了包含抗體的組合的組合物，所述抗體的組合包含抗體Mab53(TRL053)、抗體Mab579(TRL579)、其抗體片段或基于其的雙特異性抗體以及選自TRL847、TRL845、TRL849、TRL848、TRL846、TRL854、TRL809和TRL832的一種或多種針對乙型流感病毒的流感抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了藥物組合物，其包含(a)第一抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:11、12、13的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:14、15、16的LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)；(b)第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:21、22、23的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:24、25、26的CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)；和(c)一種或多種針對乙型流感，特別地針對的Yamagata譜系和/或Victoria譜系的流感病毒中和抗體，其中所述抗體或其片段選自包含重鏈氨基酸序列和輕鏈氨基酸序列的抗體或其片段，所述輕鏈氨基酸序列包含重鏈互補(bǔ)決定區(qū)1(HCDR1)、重鏈互補(bǔ)決定區(qū)2(HCDR2)和重鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(HCDR3)(HCDR1/HCDR2/HCDR3)，所述HCDR1/HCDR2/HCDR3選自由以下組成的組：SEQIDNO:31/32/33；41/42/43；51/52/53；61/62/63；71/72/73；81/82/83；91/92/93；101/102/103；111/112/113；121/122/123；131/132/133；141/142/143；151/152/153；161/162/163；171/172/173；181/182/183；191/192/193；201/202/203；211/212/213；221/222/223；231/232/233；241/242/243；251/252/253；261/262/263；271/272/273和281/282/283，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體和所述抗體具有結(jié)合并抑制流感病毒的性質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，提供了藥物組合物，其包含(a)第一抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:11、12、13的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:14、15、16的LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)；(b)第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:21、22、23的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)的，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:24、25、26的CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)；和(c)一種或多種針對乙型流感，特別地針對Yamagata譜系和/或Victoria譜系的流感病毒中和抗體，其中所述抗體或其片段選自包含重鏈氨基酸序列和輕鏈氨基酸序列的抗體或其片段，所述輕鏈氨基酸序列包含輕鏈互補(bǔ)決定區(qū)3(LCDR3)(LCDR1/LCDR2/LCDR3)，所述LCDR1/LCDR2/LCDR3選自由以下組成的組：SEQIDNO:34/35/36；44/45/46；54/55/56；64/65/66；74/75/76；84/85/86；104/105/106；114/115/16；124/125/126；134/135/136；144/145/146；154/155/156；164/165/166；174/175/176；184/185/186；194/195/196；204/205/206；214/215/216；224/225/226；234/235/236；244/245/246；254/255/256；264/265/266；274/275/276和284/285/286，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體能夠結(jié)合并抑制流感病毒。在一些實(shí)施方案中，提供了組合物，其包含(a)第一抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:11、12、13的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:14、15、16的LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)；(b)第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:21、22、23的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:24、25、26的CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)；和(c)一種或多種針對乙型流感，特別地針對Yamagata譜系和/或Victoria譜系的流感病毒中和抗體或片段，其中所述抗體或其片段選自包含重鏈氨基酸序列和輕鏈氨基酸序列的抗體或其片段，所述輕鏈氨基酸序列包含重鏈和輕鏈CDR序列HCDR1/HCDR2/HCDR3/LCDR1/LCDR2/LCDR3，其選自由以下組成的組：SEQIDNO:31/32/33/34/35/36；41/42/43/44/45/46；51/52/53/54/55/56；61/62/63/64/65/66；71/72/73/74/75/76；81/82/83/84/85/86；91/92/93/94/95/96；101/102/103/104/105/106；111/112/113/114/115/116；121/122/123/124/125/126；131/132/133/134/135/136；141/142/143/144/145/146；151/152/153/154/155/156；161/162/163/164/165/166；171/172/173/174/175/176；181/182/183/184/185/186；191/192/193/194/195/196；201/202/203/204/205/206；211/212/213/214/215/216；221/222/223/224/225/226；231/232/233/234/235/236；241/242/243/244/245/246；251/252/253/254/255/256；261/262/263/264/265/266；271/272/273/274/275/276和281/282/283/284/285/286，或在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體能夠結(jié)合并抑制流感病毒。在一些實(shí)施方案中，提供了藥物組合物，其包含(a)第一抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:11、12、13的HCDR1/HCDR2/HCDR3的抗體或其片段的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:14、15、16的LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)；(b)第二抗體或其抗原結(jié)合片段，其包含重鏈氨基酸序列，所述重鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:21、22、23的HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈可變區(qū)(HCVR)，和輕鏈氨基酸序列，所述輕鏈氨基酸序列包含含有SEQIDNO:24、25、26的CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈可變區(qū)(LCVR)；和(c)一種或多種針對乙型流感，特別地針對Yamagata譜系和/或Victoria譜系的流感病毒中和抗體或片段，其中所述抗體或其片段選自包含重鏈氨基酸序列和輕鏈氨基酸序列的抗體或其片段，所述輕鏈氨基酸序列包含選自由以下組成的組的HCVR/LCVR序列對：39/40、49/50、59/60、69/70、79/80、89/90、99/100、109/110、119/120、129/130、139/140、149/150、159/160、169/170、179/180、189/190、199/200、209/210、219/220、229/230、239/240、249/250、259/260、269/270、279/280和289/290。在一些實(shí)施方案中，可將用于氣道(諸如IN遞送和施用)的中和抗體與非中和抗體組合。本申請表明，可將IN施用與其它可選擇的施用途徑(包括IP或IV施用)組合，以給予總體和組合增強(qiáng)的功效。如本文中所提供的，抗體的組合的IN和IP施用對比單獨(dú)的IN或IP施用給出了增強(qiáng)的協(xié)同活性和功效。除了提供替換或替代施用或治療方法以外，本發(fā)明還提供為抗體介導(dǎo)的療法和預(yù)防提供了增強(qiáng)的組合方法，其中將肺部施用與全身性施用組合以獲得最高功效。在一些實(shí)施方案中，抗體通過肺部施用的抗體給藥的替代方式允許較低的給藥、較低的劑量制劑，和有效的廣譜抗流感抗體聯(lián)合組合物。在一些實(shí)施方案中，中和流感病毒并且有效地針對流感病毒的結(jié)合分子，特別是人單克隆抗體或其片段的組合，其中所述組合有效地針對組1甲型流感病毒、組2甲型流感病毒和乙型流感病毒。抗體的組合在針對甲型和乙型流感病的治療或預(yù)防中是有效的，從而在單一組合物或劑量中提供了針對所有相關(guān)和循環(huán)流感病毒的有效試劑。本發(fā)明提供了組合物，其包含流感單克隆抗體或其片段的組合或由所述組合組成，所述組合物在組合地治療或預(yù)防甲型流感和乙型流感中是有效的。該聯(lián)合組合物可被施用來有效地針對未表征和未定義的流感感染。在本發(fā)明的具體方面，將所述聯(lián)合組合物直接施用于呼吸道，包括通過鼻內(nèi)或吸入施用。具體地，以單個劑量施用該抗體組合或混合物，或可在多輪給藥中，或在每一種抗體的依序施用中施用所述抗體組合或混合物。因此，所述抗體混合物與單一特別所定的抗體針對確定的目標(biāo)流感一樣有效地針對任何未知的或未確定的循環(huán)流感病毒。例如，混合物的施用與單一特異性抗H1病毒抗體一樣有效地抗任何給定的組1H1病毒。在一些實(shí)施方案中，組合的抗體具有使它們在組合中有效以及特別適用和有用的某些特性和方面。在具體的方面，本組合的抗體各自和全部顯示顯著的對流感病毒的結(jié)合和親和力。在一些實(shí)施方案中，可將組合的抗體與其它抗體共配制、混合，或施用依序施用，以治療范圍廣泛的流感樣疾病，包括病原體諸如RSV、PAIV或MPV。在一些實(shí)施方案中，有效組合中的每一種抗體顯示對多種流感株的納摩爾或亞納摩爾的親和力。這是對比其它已知或現(xiàn)有抗體為不同的和特別有用的以及適用的方面。例如Mab53和Mab579顯示分別對各種H1(還有H5)或H3(還有H7)株的納摩爾或亞納摩爾的親和力，顯示出相對于CR6261和CR8020顯著更大的結(jié)合親和力(WO2013/086052)。本組合的抗乙型流感抗體類似地顯示對Yamagata和Victoria進(jìn)化枝的乙型流感病毒株的納摩爾或亞納摩爾的結(jié)合親和力。在一些實(shí)施方案中，本公開的組合方面的抗體被設(shè)計(jì)和選擇來具有相似的生物物理性質(zhì)，包括等電點(diǎn)(pI)。在一些實(shí)施方案中，被選擇用于組合成組合物的抗體各自表現(xiàn)出在彼此的±2pI點(diǎn)內(nèi)、彼此的±1.5pI點(diǎn)內(nèi)、彼此的±1.0pI點(diǎn)內(nèi)或彼此的±0.5pI點(diǎn)內(nèi)的pI。在一些實(shí)施方案中，本公開的組合方面的抗體被設(shè)計(jì)和選擇來具有相似的生物物理性質(zhì)，諸如強(qiáng)勁的熱穩(wěn)定性。在一些方面，提供了當(dāng)在≥50℃、≥55℃、≥60℃、≥65℃或≥70℃的PBS中進(jìn)行時在解鏈曲線測定中顯示第一解鏈溫度(Tm1)的抗體。在一些實(shí)施方案中，優(yōu)選地設(shè)計(jì)和表達(dá)具有相似或可比較的恒定區(qū)序列的抗體，并且所述抗體優(yōu)選地為選自IgG1、IgG2、IgG2、IgG3或IgG4的相同IgG。在循環(huán)中提供較長的半衰期的經(jīng)修飾的Fc序列在本領(lǐng)域中也是已知的。在一些實(shí)施方案中，提供了包含人IgG1恒定區(qū)氨基酸序列的抗乙型流感抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了包含SEQIDNO:297的人IgG1恒定區(qū)氨基酸序列抗乙型流感抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了包含SEQIDNO:295的人輕鏈κ恒定區(qū)或SEQIDNO:296的人輕鏈λ恒定區(qū)的抗乙型流感抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了包含含有SEQIDNO:297的人IgG1恒定區(qū)的抗乙型流感抗體的抗體組合物。在一些實(shí)施方案中，提供了包含含有SEQIDNO:295的人輕鏈κ恒定區(qū)或SEQIDNO:296的人輕鏈λ恒定區(qū)的抗乙型流感抗體的抗體組合物。在一些實(shí)施方案中，提供了包含一種或多種抗甲型流感抗體和一種或多種抗乙型流感抗體的組合的組合物。在一些方面，組合中的抗體表現(xiàn)出選自低至無抗體聚集、不存在分子間締合和/或不存在競爭結(jié)合的一個或多個性質(zhì)。這些方面在本組合的抗體中得以證明和舉例說明。本發(fā)明涉及用于通過以下方式有效地治療和預(yù)防流感病毒感染的新型方法、方案和方式：向氣道或呼吸道施用本抗體混合物(諸如通過一種或多種中和抗體的鼻內(nèi)或吸入施用)。流感病毒中和抗體的鼻內(nèi)或吸入施用比可選擇的施用方式諸如IP施用更有效地治療性或預(yù)防性治療或阻斷病毒。吸入和/或鼻內(nèi)遞送和施用在較低的劑量上比以相同量的相同抗體或抗體的組合的全身性施用(IV或IP)優(yōu)越，更顯效和更有效。在病毒暴露或感染之前或甚至之后利用IN遞送的一種或多種抗體的治療或預(yù)防是有效的。將抗體的肺劑量與抗體的全身性劑量組合的方法或方案特別有效地治療性或預(yù)防性地針對流感病毒。此類方法或方案包括其中將一個或多個抗體的鼻內(nèi)或吸入劑量與一個或多個抗體的IP或IV劑量組合。可在IP或IV劑量之前、之后、與其同時或與其依序地施用鼻內(nèi)或吸入劑量。可施用一個或更多鼻內(nèi)、吸入、IP或IV劑量或多個劑量。鼻內(nèi)施用的抗體可以是不存在Fc或效應(yīng)子功能的抗體片段，諸如Fab，然而IP施用的抗體可具有效應(yīng)子功能或增強(qiáng)的效應(yīng)子功能。根據(jù)本公開，向氣道或呼吸道施用中和抗體以增強(qiáng)針對病毒(特別是流感病毒)的功效。向氣道或呼吸道的施用可以是通過任何公認(rèn)的或已知的方法，并且可包括吸入施用或鼻內(nèi)施用。為了增強(qiáng)功效，將抗體遞送至上呼吸道和下呼吸道的一個或多個，并且所述呼吸道可包括鼻腔、鼻、竇、喉嚨、咽、喉、氣管、支氣管和肺?！拔搿笔侵笖z取，特別是在攝取或施用/被施用試劑或化合物，包括抗體或其活性片段物，或包含此類抗體或其活性片段的組合物的上下文中，其中將試劑、化合物、抗體、片段(包括如組合物中包含的)遞送至呼吸道的全部或部分。呼吸道可包括上和/或下呼吸道。上呼吸道包括鼻、鼻腔、竇、喉、氣管。下呼吸道包括肺、氣道(支氣管和細(xì)支氣管)和氣囊(肺泡)。吸入可經(jīng)由鼻或口，或經(jīng)由至下呼吸道的直接遞送(如在氣管內(nèi)施用中)發(fā)生。因此，吸入可僅或主要包括鼻、鼻內(nèi)、經(jīng)由口的吸入、口腔吸入、氣管內(nèi)吸入、氣管內(nèi)滴注。因此吸入提供和設(shè)想了籍以使藥物、試劑、組合物、抗體、片段專門地、特異性地或優(yōu)先地到達(dá)或沉積在呼吸道(包括上和/或下呼吸道)上或其中的任何施用方式。如本文中所用，術(shù)語“鼻內(nèi)”包括，但不限于，在鼻或鼻結(jié)構(gòu)或氣道內(nèi)或經(jīng)由鼻或鼻結(jié)構(gòu)或氣道遞送(例如通過吸入)的給藥、施用或發(fā)生。如本文中所用的和如在實(shí)施例中作為實(shí)施方案舉例的術(shù)語鼻內(nèi)不旨在限于或暗示限于直接或?qū)ｉT地或僅僅經(jīng)由鼻或鼻腔的施用，特別地用來排除籍以將藥物、試劑、抗體、片段、組合物遞送至或另外地提供至呼吸道、沉積在呼吸道中或其上或以其它方式分配至呼吸道的其它施用方式。用于向呼吸道或氣道施用或遞送的裝置在本領(lǐng)域技術(shù)人員中以及臨床或醫(yī)學(xué)實(shí)踐中是已知的和被承認(rèn)的，并且可適用于本發(fā)明的方法、方案和組合物。裝置包括計(jì)量劑量吸入器、計(jì)量噴霧泵、手工燈泡霧化器、小或大體積噴霧器、超聲噴霧器和干粉吸入器。本文公開的實(shí)施方案例已應(yīng)用和用于特別地治療或預(yù)防靶向、感染或影響呼吸道的因子或病原體。這些病毒可表現(xiàn)出頂端復(fù)制，從而允許易感性被肺部遞送的mAb或其片段中和，這隨后可導(dǎo)致相較于全身性遞送提高的功效。因此，本實(shí)施方案已應(yīng)用和用于治療或預(yù)防呼吸道感染，特別是呼吸道病毒，和與呼吸系統(tǒng)疾病相關(guān)或與其因果相關(guān)的因子。常見病毒性呼吸道疾病是由多種具有相似性狀和影響上呼吸道的病毒引起的疾病。所涉及的病毒可以是流感病毒、呼吸道合胞病毒(RSV)、副流感病毒和呼吸道腺病毒。副流感病毒是幼兒的哮吼的主要原因，其可引起支氣管炎、肺炎和毛細(xì)支氣管炎。腺病毒主要侵入呼吸道和胃腸道以及眼睛的結(jié)膜。腺病毒可引起從咽炎至肺炎、結(jié)膜炎、腹瀉的多種疾病。癥狀可在暴露于病毒后1-10天出現(xiàn)。用于治療或緩解病況(癌癥、炎性病況、抗病毒、抗感染)的抗體的臨床施用已專門使用全身性施用，通常IV施用，這需要大量和昂貴的抗體，醫(yī)務(wù)人員的協(xié)助以及用于施用的大量時間(常用IV劑量持續(xù)2小時)。然而可提及其它施用方式，諸如鼻內(nèi)，特別是在涵蓋這些抗體的專利或申請，鼻內(nèi)施用充其量被視為等效替代方案，被完全忽略，或未被追尋，可能是因?yàn)槠洳惶焕斫?，被認(rèn)為缺乏吸引力或不太有效，并被認(rèn)為間接地或不如IP或IV施用途徑直接地激活免疫系統(tǒng)。然而，本文中提供的本發(fā)明和不尋常的研究表明，鼻內(nèi)施用確實(shí)是優(yōu)選的，更有效的替代方案，特別是對于中和抗體。具體地，可在初始病原體損傷或暴露的部位或位置上作用的中和抗體比替代施用模式更有效。因此，出當(dāng)通過肺途徑施用時相較于全身性途徑，靶向流感的中和抗體表現(xiàn)出部分地通過不同的作用機(jī)制帶來的功效的顯著差異。氣道施用為遞送有效的低劑量和低成本的療法提供了獨(dú)特的機(jī)會，所述療法從而不需要通過診斷測定來確認(rèn)。流感流行季節(jié)期間的癥狀表現(xiàn)將足以使醫(yī)生施用該低劑量的混合物，例如作為干粉吸入器或作為霧化器或經(jīng)由其它氣道遞送方法。該無診斷護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)是Tamiflu和Relenza的目前實(shí)踐，但不可能用于昂貴的靜脈抗體療法，所述療法是不實(shí)際的并且成本過高。在隨防診斷后，可通過全身性，諸如靜脈內(nèi)途徑或通過氣道施用高劑量抗體的施用，可將所述高劑量抗體的施用組成混合物或組成對于流感類型是特異的獨(dú)立的特異性抗體。因此，根據(jù)本發(fā)明，抗體的肺部遞送相較于全身性途徑諸如IV或IP途徑提供了驚人和顯著的功效提高。此外，增強(qiáng)的鼻內(nèi)功效通過具有中和作用的抗體來證明。非中和抗體，特別是通過使用接受的或已知的中和測定或病毒阻斷，不顯示對流感病毒的直接抑制或阻斷的抗體，當(dāng)被鼻內(nèi)對比全身性或IP施用時，表現(xiàn)出受損的功效。本研究表明，通過使用公認(rèn)的和已知的流感小鼠模型，中和抗體的鼻內(nèi)(IN)遞送可相較于腹膜內(nèi)(IP)或靜脈內(nèi)(IV)施用途徑使治療和預(yù)防功效增強(qiáng)至超過10倍。當(dāng)通過IN而非通過IV或IP途徑給予時，可使用少于1/10的相同劑量獲得可比較的功效。向氣道施用(諸如鼻內(nèi))的中和抗體可按數(shù)據(jù)級使治療功效增強(qiáng)10至100倍或至少10至100倍。相較在相似的條件下相同抗體的腹膜內(nèi)(IP)施用，鼻內(nèi)施用的中和抗體可使治療功效顯著增強(qiáng)至少10倍，至少50倍，超過10倍，超過50倍，超過100倍，高達(dá)100倍。中和抗體的鼻內(nèi)施用提供了預(yù)防和治療感染，特別地包括流感感染的新型和意料之外的方法。IN施用現(xiàn)可用其它施用形式來有效地補(bǔ)充和組合，以提供更有效的和成本更低的方法來進(jìn)行治療和預(yù)防。氣道施用，包括IN施用，使得單個劑量中的抗體的組合或混合物能夠具有針對任何預(yù)期的流感病毒的功效。組合物根據(jù)本公開，提供了具有針對流感的用途和有效性的抗體聯(lián)合組合物。當(dāng)直接向氣道施用(諸如鼻內(nèi))時，所述抗體聯(lián)合組合物在低劑量上是有效的。所述組合物特別地包含了抗體，特別是中和抗體，特別是單克隆抗體或其活性片段，特別是抗病毒抗體，特別是流感抗體的組合。將可中和不止一種類型或亞型的流感的一種或多種中和抗體與中和不同類型或組的流感的抗體組合。本發(fā)明的組合物特別地包含針對循環(huán)流感病毒株的流感中和抗體的組合。組合物特別地包含針對循環(huán)流感病毒株的流感中和抗體，特別是抗甲型流感和抗乙型流感抗體的組合。組合物特別地包含流感中和抗體的組合，所述組合共同針對適當(dāng)和相關(guān)的循環(huán)流感病毒株，特別地共同針對甲型流感H1和H3亞型和針對Yamagata和Victoria譜系的乙型流感。所述一種或多種組合物可包含3種或更多種中和抗體，只要甲型和乙型流感病毒被所述組合或抗體中和。組合物特別地可包含針對循環(huán)流感病毒株流感的中和抗體，特別是甲型流感抗H1抗體、甲型流感抗H3抗體和抗乙型流感抗體的組合。組合物可包含有效地針對或進(jìn)一步有效地針對流感H5和H7病毒株的甲型流感抗體。所述流感抗體可以是株特異性或非特異性的，并且可中和甲型流感，包括H1亞型和/或H3亞型和/或H5和/或H7或其它甲型流感病毒株或亞型，和/或可中和乙型流感，包括Yamagata和/或Victoria譜系。所述組合物可具有相同的組分或不同組分或添加劑組分作為抗體的替代施用組合物(諸如IV或IP)。在一些實(shí)施方案中，提供了包含中和抗體或其片段，包括Fab片段的組合物。本發(fā)明的組合物可包含流感病毒中和抗體，特別是組1抗體TRL053/Mab53、組2抗體TRL579/Mab579和選自TRL847、TRL845、TRL849、TRL848、TRL846、TRL854、TRL809和TRL832的B抗體、其片段、其合成或重組衍生物、其人源化或嵌合形式以及具有其重鏈和輕鏈CDR的抗體的組合。所述病毒中和抗體可以特別地是能夠中和的抗體片段。在一個方面，所述抗體片段不存在Fc和/或不存在或具有降低的效應(yīng)子功能。所述抗體片段可選自Fab、Fab'和F(ab’)2。所述病毒中和抗體或片段可來源于重組蛋白，可被重組表達(dá)(包括作為活性片段)，或可通過其它方式或方法衍生或產(chǎn)生，包括在氣道或呼吸道內(nèi)提供中和抗體或片段的方式或方法，包括通過遺傳物質(zhì)或DNA或DNA載體的表達(dá)，諸如通過遞送編碼其中和抗體或片段的DNA或RNA。本發(fā)明的組合物還可包含藥學(xué)上可接受的賦形劑、載體或稀釋劑。所述組合物可包含適于或適合用于鼻或肺部遞送和用于鼻內(nèi)或吸入施用的賦形劑、載體、稀釋劑或添加劑。所述組合物可包含適于或適合用于刺激或增強(qiáng)免疫應(yīng)答和/或抗體介導(dǎo)的細(xì)胞或全身性效應(yīng)的賦形劑、載體、稀釋劑或添加劑。所述組合物可包含免疫應(yīng)答的免疫學(xué)介質(zhì)或刺激劑。本發(fā)明提供了用于治療、預(yù)防或減少或抑制病毒尤其是流感病毒的傳播的方法。本發(fā)明提供了用于治療或預(yù)防暴露于流感病毒，已接觸流感病毒或遭受流感病毒的哺乳動物的病毒感染的方法，所述方法包括向哺乳動物的氣道施用(諸如鼻內(nèi)(IN)或經(jīng)由吸入至所述哺乳動物)如本發(fā)明中提供的抗體的組合。在特定的方面，所述組合包含組1抗體TRL053/Mab53、組2抗體TRL579/Mab579和選自TRL847、TRL845、TRL849、TRL848、TRL846、TRL854、TRL809和TRL832的B抗體、其片段、其合成或重組衍生物、其人源化或嵌合形式以及具有其重鏈和輕鏈CDR的抗體。在該方法的一個方面，組合物組合中的單克隆抗體都是相同的IgG亞型，并且具有相同或幾乎相同的恒定區(qū)序列。在具體的方面，組合中的所有抗體均為IgG1抗體。根據(jù)本方法，可在感染后或假定的感染、暴露后或臨床癥狀表現(xiàn)后施用所述抗體組合。在其一個方面，可在達(dá)感染后8小時的時期中施用所述抗體結(jié)組合?；蛘撸谶_(dá)感染后24小時的時期中施用所述抗體組合。在另外的替代方案中，在達(dá)感染后48小時的時期中施用所述抗體組合。在另外的替代方案中，在達(dá)感染后72小時的時期中施用所述抗體組合?？蓪⒖贵w組合，包括作為單個劑量，或在多個依序的劑量中，在達(dá)感染后8小時(8hpi)、12hpi、18hpi、24hpi、36hpi、48hpi、72hpi、感染后1天、感染后2天、感染后3天、感染后4天、感染后5天、感染后6天、感染后7天、感染后1周、感染后10天、感染后2周、感染后3周、感染后4周、感染后1個月、感染后數(shù)月進(jìn)行施用。以單個劑量施用或以3個單獨(dú)的劑量同時或幾乎同時施用所述抗體組合，以確保如所述組合中必需的任一種抗體在施用時是有效的。在一些實(shí)施方案中，提供了以任何比例包含2種、3種、4種、5種、6種、7種、8種、9種、10種或更多種抗體的組合的組合物。在一些實(shí)施方案中，提供了組合物，其以按重量計(jì)每組合物中的總抗體或片段重量約10-80wt％、20-50wt％、25-40wt％的每一種抗體或片段，包含2-10種或3-5種抗體或片段。在具體實(shí)施方案中，提供了組合物，其以每組合物中的抗體或片段的總重量約33wt％±3wt％的第一、第二和第三抗體或片段的每一種，包含基本上等劑量或比例的第一、第二和第三抗體或片段。在特別優(yōu)選方面，以基本上相等的劑量比，以相同的劑量量或以1:1:1的重量比或等比例施用組合中的抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了包含2-20種抗體的組合物，其中組合中的每一種抗體的單個劑量有效量可少于10mg/kg體重、少于5mg/kg體重、少于2mg/kg體重、少于1mg/kg體重或更少。組合中的每一種抗體的單個劑量量可少于1mg/kg體重、少于0.5mg/kg、少于0.1mg/kg、少于0.05mg/kg?？墒┯枚鄠€劑量或抗體組合。每一個組合可相同或劑量可不同，諸如初始較高的劑量，隨后較低的劑量，或初始較低的劑量，隨后較高的劑量。單個劑量或多個劑量或任何劑量可少于1mg/kg體重、少于0.5mg/kg、少于0.1mg/kg、少于0.05mg/kg。初始劑量可大于1mg/kg，并且進(jìn)一步或隨后的劑量可較低或可少于1mg/kg?？梢砸远鄠€劑量將抗體施用(諸如鼻內(nèi)或經(jīng)由吸入)至呼吸道，其中每一個單個組合劑量中的每一種抗體少于1mg/kg/劑量。在這樣的方面，可以以至少2小時的間隔和在假定的感染、暴露或臨床癥狀表現(xiàn)后達(dá)72時或更晚施用多個劑量。因此，可以以數(shù)分鐘或數(shù)小時或數(shù)天的間隔施用抗體劑量。可感染后或假定的感染或暴露后，以數(shù)小時或數(shù)天的間隔施用抗體劑量?？稍诟腥竞蠡蚣俣ǖ母腥净虮┞逗蠛瓦_(dá)2、4、6、8、12、24、36、48或72小時后施用抗體劑量。本發(fā)明的施用方案或方法可特別地包括與第二或一個或多個另外的施用(所述施用不通過吸入或鼻內(nèi)途徑，例如全身性施用，諸如IP或IV施用)組合的抗體至氣道或呼吸道的第一施用(特別地通過抗體的吸入或鼻內(nèi)施用)，或在所述第一施用之后進(jìn)行所述第二或一個或多個另外的施用。因此所述方法可包括病毒特異性單克隆抗體的另外的IP或IV施用，其中另外施用的所述抗體是中和或非中和抗體。在該情況下，可利用發(fā)明的抗體的組合作為初始劑量，隨后施用針對感染的病毒亞型(包括如通過臨床或診斷分析測定的)的單一抗體的劑量。因此，抗體的組合的第一次劑量是初步有效的，而不論流感病毒的類型。一旦病毒類型被確定，就可施用第二或另外劑量的組合、改變了比率的組合、單一定向抗體?？上驓獾朗┯?諸如IH或IN)所述第二或另外的劑量，或可全身性施用所述第二或另外的劑量。全身性(諸如IP或IV)另外施用的抗體可以是與通過IN或經(jīng)由吸入施用的抗體相同的或改變的抗體?？膳cIN或吸入施用的抗體同時地、依序地或在其之后施用附加施用(例如經(jīng)由IP或IV)的抗體。任何此類隨后施用可以是數(shù)小時后，可以是2小時、4小時、6小時、8小時、12小時或長達(dá)24小時后。隨后施用可是數(shù)天后，可以是1天、2天或3天后。隨后施用可以是數(shù)天后，可以是長達(dá)7天、1周后或數(shù)周后。隨后施用可以是以單個劑量或多個劑量在數(shù)小時和/或數(shù)天和/或數(shù)周后進(jìn)行。在其它方面，本發(fā)明提供了用于施用針對甲型流感和乙型流感病毒的抗體的組合的方案，其包括施用第一氣道劑量(諸如鼻內(nèi)或吸入劑量)的本發(fā)明中提供的抗體的組合，隨后或同時施用第二劑量，或一個或多個附加劑量的抗體(所述抗體不被施用至氣道或呼吸道，并且可通過腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)施用)，其中所述第二劑量或附加劑量的抗體是與所述第一劑量的組合中的抗體相同或不同的抗體。所述第二劑量或附加劑的抗體可以是被改變或修飾來成為更有效或更顯效的IV或IP的改變的或經(jīng)修飾的抗體。在一個方面，所述第一劑量抗體可以不存在效應(yīng)子功能，諸如Fab抗體，并且所述第二劑量的抗體可具有效應(yīng)子功能，具有Fc，或可被修飾來具有增強(qiáng)的效應(yīng)子功能。所述方案可包括經(jīng)由吸入或鼻內(nèi)途徑的多個劑量的本發(fā)明的抗體組合，并且可包括經(jīng)由IP或IV途徑的多個劑量的相同組合、所述組合的一種或多種抗體，或替代抗體。在方案的一個方面，可監(jiān)測被施用抗體的受試者或患者的諸如疾病或病毒感染的臨床表現(xiàn)，并且可根據(jù)患者或受試者以及感染或疾病的狀態(tài)，改變、減少或增加劑量或多個劑量，或以更密或更疏的間隔施用所述劑量。在所述方案的一個方面，所述流感病毒可以是甲型流感病毒或乙型流感病毒或未知的或未確定的流感病毒。不向呼吸道施用的所述第二劑量的抗體可以是中和或非中和抗體，并且可具有效應(yīng)子功能或增強(qiáng)的效應(yīng)子功能。在所述方案的一個方面，第一鼻內(nèi)或吸入劑量可包含各自少于1mg/kg、少于0.5mg/kg、少于0.1mg/kg的本發(fā)明的組合抗體。特別地以比所述第一鼻內(nèi)或吸入劑量高的劑量施用所述第二或另外的IP或IV劑量。特別地以為所述第一鼻內(nèi)或吸入劑量至少10倍的每一種或任一種抗體的量的劑量施用所述第二或另外的IP或IV劑量。所述第二或另外的IP或IV劑量可以是至少1mg/kg，至少5mg/kg，至少10mg/kg，至少15mg/kg，或大于10mg/kg，或大于20mg/kg或大于50mg/kg。在所述方案的其它方面，所述第一鼻內(nèi)或吸入劑量可少于1mg/kg的組合中的每一種抗體，并且所述第二IP或IV劑量按mg/kg計(jì)為所述第一鼻內(nèi)劑量的至少10倍。在所述方案的其它方面，所述第一鼻內(nèi)或吸入劑量可少于1mg/kg的組合中的每一種抗體，并且所述第二IP或IV劑量按mg/kg計(jì)為所述第一鼻內(nèi)劑量的至少50倍。在另外的方面，所述第一鼻內(nèi)或吸入劑量可少于0.5mg/kg的組合中的每一種抗體，并且所述第二IP或IV劑量為至少5mg/kg。所述第一鼻內(nèi)或吸入劑量中的組合中的每一種抗體的劑量可以是10mg/kg或少于10mg/kg，并且在假定的感染、暴露或臨床癥狀表現(xiàn)后24小時內(nèi)進(jìn)行施用。所述第一鼻內(nèi)或吸入劑量中的組合中的每一種抗體的劑量可以是10mg/kg或少于10mg/kg，并且在假定的感染、暴露或臨床癥狀表現(xiàn)后48小時內(nèi)進(jìn)行施用。所述第一鼻內(nèi)或吸入劑量中的組合中的每一種抗體的劑量可以是10mg/kg或少于10mg/kg，并且在假定的感染、暴露或臨床癥狀表現(xiàn)后72小時內(nèi)進(jìn)行施用。本發(fā)明的另一個方面是用于抑制呼吸道病毒傳播的方法，所述方法包括向呼吸道(諸如鼻內(nèi)或經(jīng)由吸入)施用本發(fā)明的抗體的組合，向暴露于流感病毒感染，處于對所述流感病毒感染的暴露的風(fēng)險中或顯示所述流感病毒感染的臨床體征的受試者施用本抗體的組合，其中以1mg/kg或更少的單位劑量施用每一種抗體。組合中的每一種抗體的單位劑量可少于10mg/kg或少于1mg/kg。所述方法的單位劑量可少于0.5mg/kg或少于0.1mg/kg或少于0.05mg/kg。本發(fā)明提供了適于或被選擇用于肺部施用的抗體聯(lián)合組合物，或抗體(特別是流感抗體，尤其是單克隆流感抗體)的組合的組合物，其中所述抗體的組合包含，包括針對由季節(jié)性和大流行亞型組成的株的抗體，或由所述抗體組成。例如，因?yàn)榧竟?jié)性流感循環(huán)病毒株目前為乙型流感(Yamagata譜系)、乙型流感(Victoria譜系)、甲型流感H1亞型和甲型流感H3亞型，因此提供了具有或包含針對乙型流感(Yamagata)、乙型流感(Victoria)、甲型流感H1亞型和甲型流感H3亞型的每一種的一種或多種抗體的本發(fā)明的聯(lián)合組合物。本發(fā)明包括將其它抗體摻入混合物來提供對其它亞型例如H7亞型的額外特異性覆蓋。在一些實(shí)施方案中，提供了組合物，其包含組1抗體TRL053/Mab53、組2抗體TRL579/Mab579和選自TRL784、TRL794、TRL798、TRL799、TRL809、TRL811、TRL812、TRL813、TRL823、TRL832、TRL833、TRL834、TRL835、TRL837、TRL839、TRL841、TRL842、TRL845、TRL846、TRL847、TRL848、TRL849、TRL851、TRL854、TRL856和TRL858的一種或多種抗乙型流感抗體、其免疫反應(yīng)性片段、其合成或重組衍生物、其人源化或嵌合形式以及具有其重鏈和輕鏈CDR的抗體的組合。在一些實(shí)施方案中，提供了藥物組合物，其包含組1抗體TRL053/Mab53、組2抗體TRL579/Mab579和選自TRL845、TRL846、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的B抗體或其免疫反應(yīng)性片段、其合成或重組衍生物、其人源化或嵌合形式以及具有其重鏈和輕鏈CDR的抗體的組合。在一些實(shí)施方案中，提供了藥物組合物，其包含組1抗體TRL053/Mab53、組2抗體TRL579/Mab579和選自TRL845、TRL847和TRL849的B抗體或或其免疫反應(yīng)性片段、其合成或重組衍生物、其人源化或嵌合形式以及具有其重鏈和輕鏈CDR的抗體的組合。在一些實(shí)施方案中，提供了抗流感組合物，其包含流感單克隆抗體或其結(jié)合片段的組合，所述抗體或其片段包含：(a)抗體或其片段，其包含含有SEQIDNO:11、12、13的HCDR1/HCDR2/HCDR3的CDR結(jié)構(gòu)域序列的重鏈氨基酸序列，和包含SEQIDNO:14、15、16的CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈氨基酸序列；(b)抗體或其片段，其包含含有SEQIDNO:21、22、23的CDR結(jié)構(gòu)域序列HCDR1/HCDR2/HCDR3的重鏈氨基酸序列，和包含SEQIDNO:24,25,26的CDR結(jié)構(gòu)域序列LCDR1/LCDR2/LCDR3的輕鏈氨基酸序列；和(c)抗體或其片段，其包含分別含有重鏈和輕鏈CDR結(jié)構(gòu)域序列HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的重鏈氨基酸序列和輕鏈氨基酸序列，所述HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3分別選自：(i)SEQIDNO:71、72、73，和SEQIDNO:74、75、76；(ii)SEQIDNO:91、92、93，和SEQIDNO:94、95、96；(iii)SEQIDNO:101、102、103，和SEQIDNO:104、105、106；(iv)SEQIDNO:121、122、123，和SEQIDNO:124、125、126；(v)SEQIDNO:181、182、183，和SEQIDNO:184、185、186；(vi)SEQIDNO:191、192、193，和SEQIDNO:194、195、196；(vii)SEQIDNO:201、202、203，和SEQIDNO:204、205、206；(viii)SEQIDNO:211、212、213，和SEQIDNO:214、215、216；(ix)SEQIDNO:221、222、223，和SEQIDNO:224、225、226；(x)SEQIDNO:231、232、233，和SEQIDNO:234、235、236；(xi)SEQIDNO:241、242、243，和SEQIDNO:244、245、246；(xii)SEQIDNO:261；262、263，和SEQIDNO:264、265、266；和(xiii)SEQIDNO:271、272、273，和SEQIDNO:274、275、276。本發(fā)明設(shè)想和例舉了在一個或多個CDR結(jié)構(gòu)域序列中包含1至3個氨基酸取代的其高度同源變體，所述變體能夠結(jié)合并抑制流感病毒，其中所述組合物有效地針對組1和2甲型流感病毒以及乙型流感病毒。在具體實(shí)施方案中，提供了組合物，其包含選自以下抗體的抗體的組合：(a)包含分別為SEQIDNO:11、12、13和SEQIDNO:14、15、16的重鏈和輕鏈CDR序列，HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段；包含分別為SEQIDNO:21、22、23和SEQIDNO:24、25、26的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段，和包含分別為SEQIDNO:201、202、203和SEQIDNO:204、205、206的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段；(b)包含分別為SEQIDNO:11、12、13和SEQIDNO:14、15、16的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段；包含分別為SEQIDNO:21、22、23和SEQIDNO:24、25、26的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段，和包含分別為SEQIDNO:221、222、223和SEQIDNO:224、225、226的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的體或其片段；(c)包含分別為SEQIDNO:11、12、13和SEQIDNO:14、15、16的重鏈和輕鏈CDR序列，HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段；包含分別為SEQIDNO:21、22、23和SEQIDNO:24、25、26的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段，和包含分別為SEQIDNO:231、232、233和SEQIDNO:234、235、236的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段；(d)包含分別為SEQIDNO:11、12、13和SEQIDNO:14、15、16的重鏈和輕鏈CDR序列，HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段；包含分別為SEQIDNO:21、22、23和SEQIDNO:24、25、26的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段，和包含分別為SEQIDNO:241、242、243和SEQIDNO:244、245、246的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段；或(e)包含分別為SEQIDNO:11、12、13和SEQIDNO:14、15、16的重鏈和輕鏈CDR序列，HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段；包含分別為SEQIDNO:21、22、23和SEQIDNO:24、25、26的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段，和包含分別為SEQIDNO:261、262、263和SEQIDNO:264、265、266的HCDR1/HCDR2/HCDR3和LCDR1/LCDR2/LCDR3的抗體或其片段。在一些實(shí)施方案中，組合中的抗體可針對不止一種流感株或亞型，諸如圖3中指示的和本文中顯示的?？贵wMab53有效地針對組1和2的甲型流感H1、H9、H7和H5亞型。抗體Mab579有效地針對H3和H7亞型。因此，雖然目前循環(huán)流感株是H1、H3和B亞型，但可產(chǎn)生以及在本文中提供具有針對另外的株和亞型，包括可在新的或單流個感季節(jié)發(fā)生和出現(xiàn)的亞型的功效的組合。所述組合物可被特別地配制或含有比任何替代劑量或施用形式諸如IP或IV低的劑量或量的抗體。因此，用于本發(fā)明的組合物可包含對比或相較于用于替代施用特別地IP或IV施用的其組合物，減少5倍、10倍、20倍、50倍、100倍、大于10倍、大于100倍的量的中和抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了組合物，其以按哺乳動物的體重計(jì)少于1mg/kg的量包含一定劑量的意欲用于肺部施用，特別地鼻內(nèi)施用的每一種抗體。在一些實(shí)施方案中，提供了組合物，其包含總計(jì)達(dá)按人的體重計(jì)少于10mg/kg、少于5mg/kg或少于1mg/kg的施用的抗體。本發(fā)明的組合物可特別地以按哺乳動物(包括臨床相關(guān)哺乳動物，諸如豬、狗、馬、貓或人)的重量計(jì)少于1mg/kg、少于0.5mg/kg、少于0.1mg/kg、少于0.05mg/kg、少于0.01mg/kg、少于0.005mg/kg、少于0.0025mg/kg、少于0.001mg/kg的量包含一定劑量的旨在用于施用(特別地鼻內(nèi))的抗體。在一些實(shí)施方案中，治療有效劑量選自約100mg/kg、50mg/kg、10mg/kg、3mg/kg、1mg/kg或1mg/kg。在一些方面，有效預(yù)防劑量或暴露后預(yù)防劑量選自約1mg/kg/0.1mg/kg或約0.01mg/kg。本領(lǐng)域技術(shù)人員可包括基于動物模型中的功效以及考慮到臨床和生理反應(yīng)，在哺乳動物(包括人)中測定病毒載量和病毒傳播速度、適當(dāng)?shù)暮陀行У膭┝?。因此，本發(fā)明和給藥參數(shù)不受限于本文提供的實(shí)例或所例舉的特定劑量。本發(fā)明表明吸入或鼻內(nèi)給藥就功效而言和在減少、限制或阻斷病毒感染(包括流感病毒感染)的臨床表現(xiàn)的效應(yīng)中是優(yōu)選替代方案。中和抗體的吸入或鼻內(nèi)施用提供了對比其它施用途徑，包括IP或IV，未曾被預(yù)期或預(yù)測的提高和增強(qiáng)的功效。通過肺部遞送產(chǎn)生的增強(qiáng)的功效允許將多種mAb摻入混合物，使得能夠開發(fā)用于所有流感類型/亞型的混合物的可行性。通過IN或吸入途徑的給藥的量和時間安排可由本領(lǐng)域技術(shù)人員進(jìn)一步評估和確定。本文中提供的研究表明IN或吸入施用在較低的劑量上對比IP或IV更有效，以及施用可在感染后數(shù)天進(jìn)行，并且仍然保持功效。本文中應(yīng)用和顯示的劑量和劑量范圍可視情況而定，由本領(lǐng)域技術(shù)人員或臨床或醫(yī)學(xué)專業(yè)人員使用本領(lǐng)域中已知的參數(shù)進(jìn)行轉(zhuǎn)換或應(yīng)用。因此，小鼠中的mg/kg給藥可被外推至對人或其它動物的可比較或合理地等效的給藥。例如，實(shí)驗(yàn)室小鼠的平均重量為20g，然而人的平均重量為70kg。臨床研究中的例行做法是將動物劑量轉(zhuǎn)換成人劑量，以及本領(lǐng)域技術(shù)人員會強(qiáng)烈期望此類轉(zhuǎn)換的劑量在人中可成功。已描述了種間縮放和預(yù)測人中的藥代動力學(xué)參數(shù)(例如，Mahmood等(2003)JClinPharmacol43:692-697；Mordenti(1986)JournalofPharmaceuticalSciences,75:1028-1040)。例如，治療水平通常被假定與毒性平行，因此用于將動物毒性轉(zhuǎn)換成人毒性的轉(zhuǎn)換系數(shù)通常用于將動物中的最小有效劑量轉(zhuǎn)換成人中的最小有效劑量。另外，F(xiàn)DA提供了“行業(yè)指南”，其為在臨床試驗(yàn)中評估治療劑的最大安全起始劑量提供了轉(zhuǎn)換系數(shù)，包括用于將動物(小鼠)劑量轉(zhuǎn)換成人劑量的系數(shù)(諸如在一個情況下將小鼠劑量乘以0.08)。短語“藥學(xué)上可接受的”是指是當(dāng)向人施用時，生理上可耐受的并且通常不產(chǎn)生過敏或類似的不良反應(yīng)，諸如胃難受(gastricupset)、眩暈等的分子實(shí)體和組合物。本發(fā)明還設(shè)想了用于實(shí)施本發(fā)明的治療方法的治療性組合物。主題治療性組合物在混合物中包括藥學(xué)上可接受的賦形劑(載體)和作為活性成分的一種或多種抗體或其活性片段，特別是中和抗體、其肽類似物或其片段(如本文中描述)。在優(yōu)選實(shí)施方案中，所述組合物包含能夠在靶細(xì)胞內(nèi)或在受試者或患者中中和病毒，特別是流感病毒的抗體或片段。含有抗體、多肽、類似物或活性片段作為活性成分的治療性組合物的制備在本領(lǐng)域中是公知的。通常地，制備作為液體溶液或懸浮液用于施用的此類組合物，然而還可制備適合在施用之前于液體中形成溶液或懸浮液的固體形式。還可乳化制劑。通常將活性治療成分與藥學(xué)上可接受的并與所述活性成分相容的賦形劑混合。合適的賦形劑是例如，水、鹽水、葡萄糖、甘油、乙醇等或其組合。另外，如果需要，所述組合物可含有少量的輔助物質(zhì)，諸如潤濕劑或乳化劑、pH緩沖劑，其增強(qiáng)活性成分的功效?？蓪⒖贵w、多肽、類似物或活性片段作為中和藥學(xué)上可接受的鹽形式配制成治療組合物。藥學(xué)上可接受的鹽包括酸加成鹽(與多肽或抗體分子的游離氨基形成的)，其可用無機(jī)酸諸如，例如鹽酸或磷酸或這樣的有機(jī)酸如醋酸、草酸、酒石酸、扁桃酸等來形成。由游離羧基形成的鹽還可由無機(jī)堿諸如，例如氫氧化鈉、氫氧化鉀、氫氧化銨、氫氧化鈣或氫氧化鐵，以及這樣的有機(jī)堿如異丙胺、三甲胺、2-乙氨基乙醇、組氨酸、普魯卡因等衍生。常規(guī)地施用(如例如通過單位劑量的施用)所述含治療性抗體、多肽、類似物或活性片段的組合物。術(shù)語“單位劑量”，當(dāng)用于指本發(fā)明的治療性組合物時，是指適合作為用于人的單位劑量的物理上分離的單位，每個單位含有經(jīng)計(jì)算產(chǎn)生與所需稀釋劑即載體或媒介物相關(guān)聯(lián)的所需治療功效的預(yù)定量的活性物質(zhì)。在一些實(shí)施方案中，載體選自本領(lǐng)域中已知的適于肺部施用的任何載體。在一些實(shí)施方案中，載體是被選擇用于鼻內(nèi)施用的合適的載體，例如，如在Csaba等，AdvDrugDelivRev.2009,61(2):140-157(其通過引用并入本文)中公開的。在一些實(shí)施方案中，載體是納米或微顆粒系統(tǒng)。在一些實(shí)施方案中，載體選自，或包含以下物質(zhì)的一種或多種：可降解的淀粉、可溶性淀粉、聚苯乙烯、葡聚糖、殼聚糖、微晶纖維素(MCC)、羥丙基纖維素(HPC)、羥丙基甲基纖維素(HPMC)、卡波姆、974P、麥芽糖糊精蠟樣玉米淀粉、藻酸鹽、聚(乙烯醇)、明膠聚合物、涂覆有親水性聚乙二醇包衣的聚乳酸納米顆粒(PEG-PLA納米顆粒)(Vila等，JAerosolMed2004；17(2):174-185)；低分子量殼聚糖納米顆粒(Vila等，EurJPharmBiopharm2004年1月；67(1):123-131)；基于聚丙烯酸酯聚合物的顆粒(Zaman等，CurrDrugDeliv2010年4月；7(2):118-124)。在一些實(shí)施方案中，載體是磷酸鹽緩沖鹽水(PBS)。鼻內(nèi)遞送系統(tǒng)在Ozsoy等，Molecules2009,14,3754-3779(通過引用并入本文)中得以描述。在一些實(shí)施方案中，所述納米顆粒被遞送至肺，同時通過Anselmo等，ACSNano2013，在線公開的10.1021/nn404853z的技術(shù)吸附在紅細(xì)胞上而避開肝和脾。在該方法中，通過以高達(dá)100/1的不同的顆粒/RBC比率孵育，將納米顆粒(例如球狀納米顆粒，例如，直徑200nm或500nm)例如附著于RBC。在一些實(shí)施方案中，將所述抗體或片段的效力和活性配制在溶液、粉劑或懸浮液中，所述溶液、粉劑或懸浮液可被穩(wěn)定而無需賦予形劑，或利用不影響活性成分的效力并且對肺無毒性的賦形劑來穩(wěn)定?？墒箍贵w變性成氧化或水解狀態(tài)。在一些實(shí)施方案中，提供了用于通過鼻腔噴霧或通過注射遞送抗體的含水制劑，其具有螯合試劑，或絡(luò)合劑，諸如咖啡因、葡聚糖或環(huán)糊精，或如本文中提供的其它物質(zhì)，以在溶液中穩(wěn)定抗體或片段。此類賦形劑和霧化或噴霧組合物的進(jìn)一步細(xì)節(jié)可見于例如WO2005/025506；Maillet,A.等2008Phar,Res.25(6):1318-1326；Hatcha,J等，Am.J.Respir.Cell.Mol.Biol.201247(5):709-717(全部通過引用并入)中。一些穩(wěn)定劑與肺部遞送不相容，因?yàn)榇祟惙€(wěn)定劑引起局部炎癥或有急性毒性。在一些實(shí)施方案中，為了進(jìn)一步抑制活性成分溶液的降解，將所述抗體或片段的制劑密封在必須用專門的開瓶器打開的暗玻璃小瓶中，在即將使用前，將其過濾以除去玻璃碎片，隨后轉(zhuǎn)移至注射器或噴涂器。在其它實(shí)施方案中，在即將使用前，通過將活性成分粉劑與注射液諸如以雙相自動注射器形式形式(將粉劑部分與液體在玻璃小瓶、注射器或泡罩包裝(諸如PozenMT300)內(nèi)混合)混合來制備活性成分溶液?？蓢L試此類臨時配制法來產(chǎn)生用于通過噴射或超聲霧化進(jìn)行肺部遞送的溶液中。然而，用于從水溶液產(chǎn)生吸入氣溶膠的任何已知的霧化工藝將活性活性成分暴露于足夠的熱和氧氣濃度，以引起效力和活性的立即的可變的變化。由于在獲得或霧化穩(wěn)定的制劑中的這些固有困難，因此活性成分一直不適于通過肺吸入來遞送。氣溶膠遞送的另一種方法使用加壓計(jì)量劑量吸入器(pMDI)，其中鹵代烴噴射劑迫使抗體或片段的溶液或懸浮液通過小孔，從而產(chǎn)生由噴射劑液滴內(nèi)的抗體或片段組成的微細(xì)的可吸入霧。為了產(chǎn)生穩(wěn)定的pMDI制劑，所述抗體或片段必須能夠形成在噴射劑和pMDI閥裝置中穩(wěn)定并且在物理化學(xué)上與其相容的溶液或微粒懸浮液。上文中針對鼻或注射溶液所描述的溶液穩(wěn)定性和肺毒性問題也同樣適用于的pMDI制劑，并且噴射劑兼容性的附加要求禁止使用接受的肺相容性試劑諸如水或酒精。對于懸浮液，需要小于約5.8微米(進(jìn)行深處肺滲透所必需的質(zhì)量中位氣動直徑)的微粒，并且微粒在懸浮液中必須是穩(wěn)定的。通過磨耗法諸如磨碎、微粉化、研磨，或通過多相沉淀法諸如噴霧干燥、溶液沉淀或冷凍干燥，以產(chǎn)生可分散在噴射劑中的粉劑來從大批抗體或片段產(chǎn)生此類顆粒。這些方法直接通過熱或化學(xué)相互作用改變抗體或片段的物理化學(xué)性質(zhì)。由于一些活性成分可能是不穩(wěn)定的，因此這些方法并未被證明適于產(chǎn)生可在噴射劑中再分散的粉劑，或如果所述粉劑最初是可分散的，則所述顆粒隨時間過去尺寸增長，或在暴露于制劑時隨時間過去改變它們的化學(xué)組成。該不穩(wěn)定性引起效力、活動的變化，或使顆粒增加大于3.0微米，從而使pMDI懸浮配制法不適用于活性成分的氣溶膠遞送。產(chǎn)生可吸入氣溶膠的另外方法是使用干粉吸入器，其中將所述抗體或片段的粉劑制劑分散在使用者的呼氣中，隨后吸入肺。上述針對pMDI懸浮配制描述的困難同樣適用于產(chǎn)生穩(wěn)定的干粉制劑。顯然，在本領(lǐng)域缺乏用于活性成分的吸入遞送的合適制劑。本公開描述了用于通過肺氣溶膠或鼻腔噴霧吸入施用干粉和噴射劑懸浮液的活性成分或其藥學(xué)上可接受的鹽的新型穩(wěn)定的制劑。此類制劑可用于治療各種疾病狀態(tài)和病況，包括，但不限于，偏頭痛。另外，還描述了產(chǎn)生活性成分或其藥學(xué)上可接受的鹽的新型制劑的方法。通過吸入施用的活性成分必須深深滲入肺部，以顯示局部，或可選擇地，全身性作用。為了達(dá)到該目的，活性抗體或片段的顆粒必須具有不超過約0.5-5.8μm的質(zhì)量平均空氣動力學(xué)直徑(MMAD)的直徑。該最佳尺寸范圍的顆粒在結(jié)晶步驟中很少產(chǎn)生，因而需要二次處理來產(chǎn)生在0.5-5.8μm范圍內(nèi)的顆粒。此類二次處理包括，但不限于，磨耗法(通過噴射研磨、微粉化和機(jī)械研磨)、多相沉淀(諸如溶液沉淀、噴霧干燥、冷凍干燥或凍干)。此類二次處理包括大的熱和機(jī)械梯度，這可直接降低活性抗體或片段的效力和活性，或?qū)е略谶M(jìn)一步處理或貯存時改變顆粒的尺寸、形狀或化學(xué)組成的拓?fù)淙毕莼蛟摶瘜W(xué)不穩(wěn)定性。這些二次處理也賦予顆粒顯著量的自由能，其通常貯存在顆粒的表面上。由顆粒貯存的該自由能產(chǎn)生引起顆粒聚集以減少該貯存的自由能的凝聚力。凝聚過程可以是如此廣泛，以致于可吸入活性抗體或片段顆粒不再存在于微粒制劑中，或可因高強(qiáng)度的凝聚相互作用而不再從顆粒制劑產(chǎn)生。該方法在吸入遞送的情況下加劇，因?yàn)樗鲱w粒必須以適于通過吸入裝置遞送的形式貯存。由于顆粒被貯存相對長的時期，因此聚集過程可在貯存過程中增加。顆粒的聚集干擾顆粒通過吸入器裝置進(jìn)行的再分散，從而使得進(jìn)行肺部遞送和鼻遞送所需的可吸入顆粒不能產(chǎn)生。另外，大多數(shù)的用于克服聚集效應(yīng)的制藥常規(guī)方法，諸如載體和/或賦形劑的使用，不能以藥物形式用于吸入，因?yàn)檫@些物質(zhì)的肺毒理學(xué)特征是不想要的。本公開描述了用于通過肺部氣溶膠吸入或鼻腔噴霧吸入施用干粉和噴射劑懸浮液來進(jìn)行施用的活性成分或其藥學(xué)上可接受的鹽(在本文中稱為DHE)的新型穩(wěn)定的制劑。在一個實(shí)施方案中，DHE用作甲磺酸鹽。使用超臨界流體法產(chǎn)生DHE粉劑。超臨界流體法在生產(chǎn)用于吸入遞送的DHE顆粒中提供顯著的有利方面。重要的是，超臨界流體法在單一步驟中產(chǎn)生具有所需尺寸的可吸入顆粒，消除了對二次處理以減小顆粒尺寸的需要。因此，使用超臨界流體法產(chǎn)生的可吸入顆粒具有降低的表面自由能，這導(dǎo)致減小的凝聚力，從而減少凝聚。所產(chǎn)生的顆粒也顯示出均一的粒徑分布。此外，所產(chǎn)生的顆粒具有光滑的表面和可重現(xiàn)的晶體結(jié)構(gòu)，所述結(jié)果也趨向于減少聚集。此類超臨界流體法可包括快速擴(kuò)張(RES)、溶液增強(qiáng)型擴(kuò)散(SEDS)、氣體反溶劑(GAS)、超臨界反溶劑(SAS)、氣體飽和溶液沉淀(PGSS)、壓縮反溶劑沉淀(PCA)、氣溶膠溶劑萃取系統(tǒng)(ASES)或上述方法的任何組合。在這些超臨界流體法的每一個的基礎(chǔ)技術(shù)在本領(lǐng)域中是公知的，并且將不會在本公開中重復(fù)。在一個具體的實(shí)施方案中，所使用的超臨界流體法是由Palakodaty等在美國申請20030109421中描述的SEDS方法。超臨界流體法產(chǎn)生干燥顆粒，可通過預(yù)計(jì)量至干粉吸入器(DPI)形式中來直接使用所述干燥顆粒，或可將顆粒在計(jì)量劑量吸入器(MDI)形式中直接懸浮/分散在懸浮懸浮介質(zhì)中，諸如藥學(xué)上可接受的噴射劑中。所產(chǎn)生的顆?？梢允蔷畹幕蚩梢允菬o定形的，這取決于所使用的超臨界流體法和所采用的條件(例如，SEDS方法能夠生產(chǎn)無定形顆粒)。如上所論述的，所產(chǎn)生的顆粒相較于通過常規(guī)方法產(chǎn)生的顆粒具有更優(yōu)的性質(zhì)，包括但不限于光滑、均勻的表面、低能量、均一的粒徑分布和高純度。這些特征提高了顆粒的物理化學(xué)穩(wěn)定性，并且當(dāng)用于DPI形式或MDI形式時促進(jìn)顆粒的分散。粒度應(yīng)當(dāng)諸如允許在氣溶膠顆粒施用后DHE顆粒被吸入肺部。在一個實(shí)施方案中，粒徑分布小于20微米。在一個替代實(shí)施方案中，粒徑分布在約0.050微米至10.000微米MMAD范圍內(nèi)，如通過級聯(lián)撞擊器測量的；在另一個替代實(shí)施方案中，粒徑分布范圍為從約0.400至3.000微米MMAD，優(yōu)選在0.400與3.000微米MMAD之間，如通過級聯(lián)撞擊器測量的。上文論述的超臨界流體法產(chǎn)生在這些范圍的下端的粒徑。在DPI形式中，可通過靜電、低溫測定或常規(guī)方式將DHE顆粒計(jì)量地添加至劑型中，這在本領(lǐng)域中是已知的。可單獨(dú)(純凈的)使用DHE顆粒，或?qū)⑵渑c一種或多種藥學(xué)上可接受的賦形劑，諸如載體或分散粉劑(包括但不限于，乳糖、甘露糖、麥芽糖等，或表面活性劑涂層)一起使用。在一種優(yōu)選制劑中，使用DHE顆粒而無需額外的賦形劑。本領(lǐng)域中通常使用的一種方便的劑型是箔泡罩包裝。在本實(shí)施方案中，將DHE顆粒計(jì)量加入箔泡罩包裝，而無需將額外的賦形劑以與DPI一起使用。常用計(jì)量劑量的范圍可為約0.050毫克至2.000毫克，或約0.250毫克至0.500毫克。將所述泡罩包裝裂開，其可通過靜電力、空氣動力或機(jī)械力或其任何分散至吸入空氣中，這在本領(lǐng)域中是已知的。在一個實(shí)施方案中，超過25％的預(yù)計(jì)量劑量在吸入后將被遞送至肺部；在一個替代實(shí)施例中，超過50％的預(yù)計(jì)量劑量在吸入后被遞送至肺部；在另一個替代實(shí)施方案中，超過80％的預(yù)計(jì)量劑量在吸入后被遞送至肺部。在DPI形式中由遞送產(chǎn)生的DHE顆粒的可吸入分?jǐn)?shù)(如根據(jù)美國藥典第601章測定的)的范圍為25％至90％，泡罩包裝中的殘留顆粒的范圍為預(yù)計(jì)量劑量的5％至預(yù)計(jì)量劑量的55％。在MDI形式中可將顆粒直接懸浮/分散至懸浮介質(zhì)，諸如藥學(xué)上可接受的噴射劑中。在具體的實(shí)施方案中，所述懸浮介質(zhì)是噴射劑。理想的是，噴射劑不用作溶劑DHE顆粒的溶劑。合適的噴射劑包括單獨(dú)的或以任何組合存在的Cι_4氫氟烷，諸如，但不限于資1,1,1,2-四氟乙烷(HFA134a)和1,1,1,2,3,3,3-七氟-正-丙烷(HFA227)。二氧化碳和烷烴，諸如戊烷、異戊烷、丁烷、異丁烷、丙烷和乙烷，也可用作噴射劑或與上文論述的C\羥氟烷噴射劑混合。在共混物的情況下，噴射劑可含有0-25％的此類二氧化碳和0-50％的烷烴。在一個實(shí)施方案中，可實(shí)現(xiàn)DHE顆粒分散而無需表面活性劑。在一個替代實(shí)施方案中，如果需要，DHE顆?？珊斜砻婊钚詣?，表面活性劑以在0.001至10的范圍內(nèi)的對DHE的質(zhì)量比存在。常用表面活性劑包括油酸酯、硬脂酸酯、肉豆蔻酸酯、烷基醚、烷芳基醚、山梨酸鹽和由本領(lǐng)域技術(shù)人員配制用于通過吸入遞送的抗體或片段所使用的其它表面活性劑，或前述表面活性劑的任何組合。具體的表面活性劑包括，但不限于，山梨糖醇單油酸酯(SPAN-80)和肉豆蔻酸異丙酯。當(dāng)使用時，DHE微粒分散體還可含有少量極性溶劑來幫助表面活性劑增溶。合適的極性溶劑包括C2-6醇和多元醇，諸如乙醇、異丙醇、聚丙二醇及前述溶劑的任何組合。可以以在0.0001％至4％的范圍內(nèi)的對噴射劑的質(zhì)量比添加極性抗體或片段。超過4％的極性溶劑的量可與DHE反應(yīng)或溶解DHE。在一個具體實(shí)施方案中，極性抗體或片段是以0.0001％至1％的對噴射劑的質(zhì)量比使用的乙醇。除用藥學(xué)上可接受的噴射劑和表面活性劑平衡外，不向DHE顆粒中添加額外的水或含羥基抗體或片段?？稍谒鼈兪褂弥?，將所述噴射劑和表面活性劑(如果使用的話)暴露于水或含羥基抗體或片段，以使得水和含羥基抗體或片段處于它們的平衡點(diǎn)。可利用標(biāo)準(zhǔn)計(jì)量閥(諸如來自Neotechnics,Valois或Bespak)和罐(諸如來自PressPart或Gemi)，這對于噴射劑/表面活性組合物也是適用的。可將2.0毫升至17毫升的罐填充體積用于實(shí)現(xiàn)從一(1)至數(shù)百次致動的劑量計(jì)數(shù)?？扇芜x地提供具有鎖定機(jī)構(gòu)的劑量計(jì)數(shù)器來限制特定的劑量計(jì)數(shù)，而不論填充體積是多少。噴射劑懸浮液中的DHE的總質(zhì)量通常在每100毫升噴射劑0.100毫克至2.000毫克DHE的范圍內(nèi)。通過使用在50至100毫升的范圍內(nèi)的標(biāo)準(zhǔn)MDI計(jì)量閥，給藥將導(dǎo)致在每致動0.050微克至1.000微克的范圍內(nèi)的計(jì)量劑量。具有呼吸致動的致動器可優(yōu)選用于最大化吸入?yún)f(xié)調(diào)，但不強(qiáng)制用來獲得治療功效。此類MDI的可呼吸分?jǐn)?shù)在25％至75％的計(jì)量劑量范圍內(nèi)(如根據(jù)美國藥典第601章測定的)。如本文中所提供的，對于病毒特別是流感病毒的治療或預(yù)防是有效的和有用的用于鼻內(nèi)施用的中和抗體的單位劑量，相較于針對替代施用所指定或所需的所述單位劑量，諸如對于IP或IV施用所需的所述單位劑量，相對減少。因此，在其一個方面，提供了用于施用，特別地鼻內(nèi)施用的抗體組合物，其中所述單位劑量對比針對替代施用所指定的或所需的所述單位劑量，諸如針對IP或IV施用所需的所述單位劑量按數(shù)量級減少，特別地減少了數(shù)個或多個數(shù)量。因此在其一個方面，提供了用于施用，特別地鼻內(nèi)施用的抗體組合物，其中所述單位劑量減少至少10倍、10倍、20倍、25倍、50倍、至少100倍、100倍、500倍、多達(dá)1000倍。具體地，所述組合物從而相較于針對IP或IV施用，特別地針對相同或可比較的指征或效應(yīng)和/或活性的等效單位劑量，得以減少?？蓪N單位劑量與IP或IV劑量組合以用于提高的功效。以可與劑型相容的方式和以治療有效量施用所述組合物。待施用的量取決于待治療的受試者、受試者的免疫系統(tǒng)利用活性成分的能力和期望的病毒的抑制或中和的程度。需要施用的活性成分的精確量取決于醫(yī)生的判斷，并且對于每一個體是特有的。然而，對于鼻內(nèi)施用，合適的劑量可在每劑量每千克個體的體重約0.001毫克至10毫克，優(yōu)選約0.005毫克至約1毫克的范圍內(nèi)，少于1毫克，少于0.5毫克，少于0.1毫克，少于0.05毫克，少于0.01毫克，更優(yōu)選低于1毫克，低于0.5毫克，低于0.1毫克。用于初始施用和隨后施用的適合方案也是可變的。在一個方案中，在初始施用之后，通過隨后注射或其它施用，以1小時或多小時的間隔進(jìn)行重復(fù)的隨后劑量，單個或多個隨后劑量。可在初始IN施用后，通過IP或IV或通過其它合適的途徑施用較高劑量的抗體。在本公開的一個方面，提供了新型給藥方法或參數(shù)，其中向患者或受試者鼻內(nèi)施用中和抗體，和與之同時，隨后或在更后通過IP或IV施用來施用中和或非中和抗體。另外的組合在本實(shí)施方案的方面，可將病毒結(jié)合抗體或其結(jié)合片段(特別地其中所述抗體或片段是中和的)與試劑或藥物組合，以形成用于呼吸道或氣道施用(包括吸入或鼻內(nèi)施用)的抗體-藥物或抗體-試劑綴合物，以用于本文中公開的實(shí)施方案。與所述抗體或片段組合或綴合于所述抗體或片段的藥物或試劑可以是病毒中和藥物或試劑?；蛘撸蓪⑺隹贵w或組合與抗病毒劑、抗病毒治療劑、抗流感藥物或試劑(特別地包括口服抗流感藥物)一起施用。抗流感試劑可以是神經(jīng)氨酸酶抑制劑。所述抗流感試劑可選自Tamiflu和Relenza?？沽鞲性噭┛梢允荕2抑制劑，諸如金剛烷胺或金剛乙胺。用于組合的另外的試劑可選自抗病毒治療劑、病毒復(fù)制抑制劑、蛋白酶抑制劑、聚合酶抑制劑、血凝素抑制劑、支氣管擴(kuò)張藥(例如，沙丁胺醇、左旋沙丁胺醇、沙美特羅)，或吸入糖皮質(zhì)激素?？共《緞┛梢允遣《窘Y(jié)合劑或病毒結(jié)合抑制劑。在其一個方面，病毒結(jié)合抑制劑可以是能夠結(jié)合流感病毒并通過結(jié)合而非更常規(guī)的中和方式抑制流感的抗體。TRL809和TRL832代表可適于或有效地與混合物組合以提供增強(qiáng)的功效或協(xié)同作用(特別地通過氣道施用)的示例性結(jié)合抗體。通過氣道施用是有效的，特別地與本文所公開的抗體混合物組合的其它試劑，可包括表面活性劑或氣道襯調(diào)節(jié)劑，諸如表面活性劑納米-乳劑和陽離子氣道襯調(diào)節(jié)劑。能調(diào)節(jié)或緩解氣道炎癥的試劑與本發(fā)明抗體的混合物組合也可以是有效的或有用的。在一些實(shí)施方案中，所述治療性組合物，特別地肺部組合物，還可包含有效量的中和抗體或其片段，和以下活性成分的一種或多種：抗生素、抗病毒劑、甾類、抗炎劑。在特定的方面，所述組合物還包含抗病毒治療劑。所述組合物可包含抗流感試劑。在一些實(shí)施方案中，提供了用于提高功效的方法和組合物，通過將本發(fā)明的mAb療法與其它抗病毒治療，諸如抗病毒治療劑諸如神經(jīng)氨酸酶抑制劑(例如奧司他韋[TamifluTM]、扎那米韋[RelenzaTM])、RNA聚合酶抑制劑(例如法維拉韋，VX-787)、免疫調(diào)節(jié)劑(例如吸入的干擾素β1a)、宿主細(xì)胞靶向劑(例如FludaseTM,RadavirsenTM)、離子通道抑制劑(例如金剛胺)或其它抗病毒劑組合。還可將任何此類抗流感試劑作為本文中提供的組合物的部分復(fù)合或組合，或與所述抗體或其活性片段結(jié)合或單獨(dú)地施用?？山?jīng)由與所述抗體或其片段或本發(fā)明的吸入或鼻內(nèi)組合物相同的或替代的方式(諸如經(jīng)由吸入或經(jīng)由口服(例如丸劑)方式)施用所述抗流感試劑。因此，本公開的抗體組合和本發(fā)明的吸入或鼻內(nèi)組合物還可包含抗流感試劑或抗病毒劑，諸如例如神經(jīng)氨酸酶抑制劑(包括選自Tamiflu和Relenza的試劑)，或可將所述抗體組合和所述組合物與所述抗流感試劑或抗病毒劑組合施用，或在所述抗流感試劑或抗病毒劑之后或之前依序施用。如本文中所用，“pg”意指皮克，“ng”意指納克，“ug”或“μg”意指微克，“mg”意指毫克，“ul”或“μl”意指微升，“ml”意指毫升，“l(fā)”意指升。可使用本領(lǐng)域中以及醫(yī)學(xué)領(lǐng)域和臨床實(shí)踐中已知的和可接受的方法在鼻腔噴霧或吸入溶液或懸浮液中配制組合物。FDA提供了關(guān)于此類噴霧劑、溶液和懸浮液以及噴霧藥品的準(zhǔn)則和指南，包括可在fda.gov獲得的行業(yè)指南文件。標(biāo)題為鼻腔噴霧和吸入溶液、懸浮液和噴霧藥品-化學(xué)、制造和控制文件的示例性2002年7月的行業(yè)指南文件包括關(guān)于制劑組分和組成、其規(guī)格(specificationstherefore)、制造和密閉容器系統(tǒng)的詳細(xì)內(nèi)容。鼻腔噴霧劑是含有溶解或懸浮于制劑(通常水基的)中活性成分的藥品，其可含有其它賦形劑，并且旨在通過鼻吸入使用。用于鼻腔噴霧的容器密閉系統(tǒng)包括容器和負(fù)責(zé)制劑的計(jì)量、霧化和至患者的遞送的所有組件。鼻腔噴霧藥品含有溶解或懸浮于未加壓分配器中的溶液或賦形劑(例如，防腐劑、粘度調(diào)節(jié)劑、乳化劑、緩沖劑)的混合物中的治療活性成分(藥物物質(zhì))，所述未加壓分配器遞送含有計(jì)量劑量的活性成分的噴霧劑?？赏ㄟ^噴霧泵計(jì)量劑量，或已在制造過程中計(jì)量了劑量。鼻腔噴霧單位可被設(shè)計(jì)來用于單位給藥或可釋放許多含有藥物物質(zhì)的制劑的計(jì)量噴霧劑。將鼻腔噴霧劑施加至鼻腔以獲得局部和/或全身性效應(yīng)。吸入溶液和懸浮藥品通常是水基制劑，其含有治療活性成分，并且還含有另外的賦形劑。水基口腔吸入溶液和懸浮液必須是無菌的(21CFR200.51)。吸入溶液和懸浮液旨在通過口腔吸入遞送至肺部以獲得局部和/或全身性效應(yīng)，并將與指定的噴霧器一起使用。吸入噴霧藥品由制劑和容器密閉系統(tǒng)組成。制劑通常是水基的，并且不任何噴射劑。目前用于吸入噴霧藥品的容器密閉系統(tǒng)設(shè)計(jì)包括使用機(jī)械或電力輔助和/或來自患者吸氣的能量進(jìn)行的預(yù)計(jì)量和裝置計(jì)量的呈遞，以產(chǎn)生噴霧羽流。預(yù)計(jì)量的呈遞在一些類型的單位(例如，單個或多個泡罩或其它空腔)中含有先前測量的劑量或劑量級分，所述單位隨后在制造過程中被插入裝置或在使用前被患者插入裝置。常用裝置計(jì)量的單位具有含有足以用于多個劑量的制劑的儲器，當(dāng)被患者啟動后，所述制劑被裝置本身作為計(jì)量的噴霧劑遞送。在鼻腔中延長的停留時間也可以通過使用生物粘附聚合物、微球、殼聚糖或通過增加制劑的粘度來實(shí)現(xiàn)。還可利用藥物、賦形劑、防腐劑和/或吸收促進(jìn)劑刺激或抑制鼻腔粘膜纖毛清除，從而實(shí)現(xiàn)藥物至吸收部位的遞送。微球技術(shù)是被用于設(shè)計(jì)鼻產(chǎn)品的專門系統(tǒng)之一。微球可提供更長時間的與鼻粘膜的接觸，從而增強(qiáng)吸收或功效。用于鼻腔應(yīng)用的微球一直使用生物相容性材料，諸如淀粉、白蛋白、葡聚糖和明膠來制備(BjorkE,EdmanP(1990)IntJPharm62:187-192)。藥物的水溶解度可以是用于溶液中經(jīng)鼻藥物遞送的相關(guān)參數(shù)限制。常規(guī)溶劑或共溶劑諸如二醇，少量的醇、Transcutol(二甘醇單乙醚)、中鏈甘油酯和癸酸甘油酯(飽和多糖分解的C8-C10甘油酯)可用于提高藥物的溶解度。其它選項(xiàng)包括使用表面活性劑或環(huán)糊精諸如HP-β-環(huán)糊精，其用作生物相容性增溶劑和與親脂吸收促進(jìn)劑組合的穩(wěn)定劑。在該情況下，它們對鼻刺激物的影響應(yīng)當(dāng)予以考慮。大多數(shù)鼻制劑是水基的，并且需要防腐劑來防止微生物生長。對羥基苯甲酸酯、苯扎氯銨、苯乙醇、EDTA和苯甲酰醇是一些在鼻制劑中常用的防腐劑。含汞防腐劑對纖毛運(yùn)動具有快速和不可逆的作用，并且不被推薦用于鼻系統(tǒng)?？赡苄枰倭靠寡趸瘎﹣矸乐顾幬镅趸?。常用抗氧化劑為焦亞硫酸鈉、亞硫酸氫鈉、丁基羥基甲苯和生育酚。通常地，抗氧化劑不影響藥物吸收或引起鼻腔刺激?？寡趸瘎┖头栏瘎┡c藥物、賦形劑、制造設(shè)備和包裝成分的化學(xué)/物理相互作用應(yīng)被視為制劑開發(fā)計(jì)劃的一部分。許多過敏性和慢性疾病往往與結(jié)殼和粘膜的干燥相關(guān)聯(lián)。除賦形劑外，某些防腐劑/抗氧化劑也可能引起鼻腔刺激，尤其當(dāng)以較高的量使用時。充足的鼻內(nèi)水分是防止脫水所必需的。因此，可以尤其在基于凝膠的鼻產(chǎn)品中添加濕潤劑。濕潤劑避免鼻腔刺激，并且不太可能影響藥物的吸收。常見實(shí)例包括甘油、山梨醇和甘露糖醇。遞送系統(tǒng)的選擇取決于待使用的藥物、提出的指示、患者群體和最后但并非最不重要的，市場偏好。這些遞送系統(tǒng)的一些包括滴鼻劑、鼻腔噴霧劑、鼻凝膠劑和鼻粉劑。在一些實(shí)施方案中，提供了用于通過噴霧器施用以進(jìn)行鼻內(nèi)和吸入遞送的組合物。噴霧器是用于施用被吸入呼吸道的呈霧的形式的藥劑的藥物遞送裝置。噴霧器可用于通過口和鼻道進(jìn)行mAb的鼻內(nèi)和吸入遞送，并且是用于將mAb遞送至上和/或呼吸道的有效裝置。噴霧器使用氧氣、壓縮空氣或超聲功率來將藥物溶液和懸浮液分離成能夠從該裝置的吹嘴直接吸入的小的氣溶膠微滴。氣溶膠是氣體和液體顆粒的混合物，天然存在的氣霧劑的最佳實(shí)例是當(dāng)與熱的環(huán)境空氣混合的小的蒸發(fā)水顆粒被冷卻并凝結(jié)成可見空氣水滴的細(xì)云時，形成的霧。計(jì)量劑量吸入器(MDI)是以通常由患者通過吸入自我施用的霧化藥物的短脈沖形式，將特定量的藥劑遞送至肺的裝置。干粉吸入器包含通常以單個劑量的量包裝在泡罩或凝膠膠囊(含有通過使用者自已的呼吸被吸入肺的粉末狀藥物)的微粉化粉末。一個新的重大創(chuàng)新是在噴霧器市場上創(chuàng)立了超聲波振動網(wǎng)技術(shù)(VMT)。通過該技術(shù)，具有1000-7000個激光鉆孔的網(wǎng)/膜在液體儲器的頂端振動，從而將非常細(xì)小的微滴的霧壓出通過孔。該技術(shù)比在液體儲器的底部具有振動壓電元件更高效，從而也實(shí)現(xiàn)較短的處理時間。可用VMT噴霧器包括ParieFlowRespironicsi-Neb、OmronMicroAir、BeurerNebulizerIH50和AerogenAeroneb。在另一個實(shí)施方案中，所述組合物被制備為用于重建的凍干粉劑，或用于通過粘膜霧化裝置(MAD)鼻內(nèi)施用的保存的或非保存的無菌液體組合物。粘膜霧化裝置(MAD)經(jīng)由魯爾鎖附連至包含含抗病毒組合物的注射器。輕快地壓縮注射器柱塞以產(chǎn)生每劑量約0.01mL、0.05mL、0.1mL、0.2mL、0.3mL、0.4mL、0.5mL、0.6mL、0.7mL、0.8mL、0.9mL或1mL的快速鼻內(nèi)霧沫噴霧。在一些情況下，將整個劑量施用于單個鼻孔，或以每劑量一次或多次噴霧將劑量分入兩個鼻孔。鼻制劑的pH對于抗體的穩(wěn)定性和避免鼻粘膜的刺激，允許抗體可以最佳形式用于吸收，阻止致病細(xì)菌在鼻道內(nèi)生長，維持賦形劑諸如防腐劑的功能性，和支持正常生理纖毛動力是非常重要的。在一些實(shí)施方案中，制備具有在4.5-8.2、5.2-7.9或4.5至6.5內(nèi)的pH的組合物，記住抗體混合物、藥物或活性成分的理化性質(zhì)。通常以在25至200μL的范圍內(nèi)的小體積(100μL是最常用的劑量體積)施用鼻制劑。施用再次指出的是，正常和合理預(yù)期的抗體療法劑量被良好地確立為在mg范圍內(nèi)的IV或IP劑量。這基于迄今利用眾多重組抗體獲得的研究和臨床經(jīng)驗(yàn)。迄今為止，超過二十種(20)單克隆抗體在美國已獲得臨床批準(zhǔn)(參見例如NewsomeBW和ErnstoffMS(2008)BrJClinPharmacol66(1):6-19)。目前使用的臨床批準(zhǔn)的抗體均在使用中并且以mg/kg的范圍通過IP或IV施用。迄今還沒有流感單克隆抗體被臨床批準(zhǔn)。進(jìn)行中或報道的所有試驗(yàn)?zāi)壳袄渺o脈內(nèi)遞送作為標(biāo)準(zhǔn)。具體地，以在1-40mg/kg范圍內(nèi)的單個劑量遞增評估TheraCloneSciences抗體TCN-032(NCT01390025,clinicaltrails.gov)。所述TCN-032抗體是結(jié)合流感基質(zhì)蛋白(M2)的氨基末端細(xì)胞外結(jié)構(gòu)域(M2e)的保守表位的人抗體(GrandeaAG等(2010)PNASUSA107(28):12658-12663；2010年7月1日電子版)。使用在2小時內(nèi)通過IV施用的2mg/kg至50mg/kg的遞增劑量在安全性和耐受性研究中類似地評估抗體CR6261和CR8020(分別為CrucellHollandBV臨床試驗(yàn)NCT01406418和NCT01756950)。通過注射施用流感疫苗。流感疫苗中的一個例外是通過鼻內(nèi)施用的FluMist活流感疫苗(MedImmune)。FluMist是3個活流感病毒株–A/H1N1株、A/H3N2株和B株的組合，并使用在單個劑量預(yù)充滿的鼻內(nèi)噴霧器中提供的懸浮液以0.2ml劑量來進(jìn)行施用。除了病毒株以外，每一個劑量還含有谷氨酸鈉、水解豬明膠、精氨酸、蔗糖、磷酸氫二鉀、磷酸二氫鉀、無防腐劑(FluMistHighlightsofPrescribingInformation,2012-2013Formula,MedImmune,RAL-FLUV12,ComponentNo.:11294)。本公開提供了用于治療和預(yù)防病毒感染，特別地通過呼吸途徑感染或傳播的病毒，包括特別地流感病毒的新型有效的抗體組合的施用模式以及抗體施用方案。因此，本公開通過肺部施用能夠中和任何相關(guān)或循環(huán)流感病毒的抗體組合，提供了病毒感染，特別流感病毒的治療、預(yù)防或緩解。可通過單IN劑量施用抗體組合，或可同時或基本上同時以多個單一劑量給予抗體組合。可隨后施用另外的組合或單一劑量，每一次施用間隔數(shù)分鐘、數(shù)小時或數(shù)天。在特定的方面，本公開提供了通過針對流感的循環(huán)病毒株的抗體的組合的肺部施用進(jìn)行的病毒感染，特別地流感病毒的治療、預(yù)防或緩解。因此，根據(jù)本公開，通過針對乙型流感和循環(huán)甲型流感病毒的抗體的組合(特別地在其一個方面抗乙型流感抗體、抗組1甲型流感抗體諸如抗H1抗體和抗組2甲型流感抗體諸如抗H3抗體的組合)的肺部施用，提供和實(shí)現(xiàn)了感染(特別地流感病毒)的治療、預(yù)防或緩解。根據(jù)本公開，抗乙型流感抗體、抗組1甲型流感抗體諸如抗H1抗體和抗組2甲型流感抗體諸如抗H3抗體的組合的鼻內(nèi)施用，在預(yù)防感染或治療由乙型流感或甲型流感病毒造成的流感感染中是有效的。在一定程度上，抗體是可用的，并且在本文中經(jīng)測試和證明有效地針對不止一種病毒的亞型或株，本文中提供和設(shè)想的組合用作有效地針對病毒，特別是流感病毒的許多株和/或亞型(包括已知的和循環(huán)的株或亞型、新出現(xiàn)的株或亞型以及未知的、未曾預(yù)料的和變異的株或亞型)的通用混合物或組合?？杀莾?nèi)或通過吸入施用用于本文中公開的實(shí)施方案的抗體，隨后或與其一起(包括同時、組合地或依序地或單獨(dú)地)進(jìn)行另一種抗體或同一抗體的全身性施用，特別地IP或IV施用。因此，在本文中設(shè)想和提供了組合施用或方法，其中組合鼻內(nèi)和IP(或IV)施用以獲得增強(qiáng)的針對因子，特別地病毒，特別地流感病毒的功效。事實(shí)上，本文中提供的研究表明，通過使用鼻內(nèi)施用與替代施用(IP或IV)的組合給藥，組合功效是協(xié)同的，并且可利用低劑量的IN和IP(作為實(shí)例)。氣道施用提供了遞送有效的低劑量和低成本療法的獨(dú)特機(jī)會，所述機(jī)會從而可不需要通過診斷測定來確認(rèn)。流感季節(jié)期間癥狀的出現(xiàn)足以讓醫(yī)生例如以干粉吸入器或以噴霧器或其它氣道遞送方法施用該低劑量混合物。該無診斷護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)是用于Tamiflu和Relenza的當(dāng)前實(shí)踐，但對于昂貴的靜脈內(nèi)抗體療法是不可能，所述靜脈內(nèi)抗體療法是不實(shí)用的并且成本昂貴。在隨訪診斷后，可通過靜脈內(nèi)途徑或通過氣道施用高劑量抗體的施用，可將所述高劑量抗體的施用組成混合物或組成對于流感類型是特異的獨(dú)立的特異性抗體。本公開提供了用于治療或預(yù)防暴露于呼吸道病毒，處于對所述病毒的暴露的風(fēng)險中，與所述病毒接觸，臨床上呈現(xiàn)癥狀或遭受所述病毒的哺乳動物的病毒感染的方法，所述方法包括向所述哺乳動物施用(通過鼻內(nèi)(IN)或經(jīng)由吸入)如本文中提供的抗體的組合或混合物?？贵w的混合物或組合可特別地均為IgG抗體。可在感染后或在假定的感染后施用抗體組合。在其一個方面，在達(dá)到感染后8小時(hpi)，包括2hpi、4hpi、6hpi、8hpi的時期中施用抗體組合。或者，在達(dá)到感染后24小時，包括4hpi、8hpi、12hpi、18hpi、24hpi的時期中施用抗體組合。在其它替代方案中，在達(dá)到感染后48小時，包括12hpi、24hpi、36hpi、48hpi的時期中施用抗體。在其它替代方案中，在達(dá)到感染后72小時，包括24hpi、36hpi、48hpi、60hpi、72hpi的時期中施用抗體?？稍诟腥竞螅蚣俣ǖ母腥竞?，或在呈現(xiàn)臨床癥狀諸如發(fā)熱、疼痛、關(guān)節(jié)痛、嗜睡后數(shù)天施用抗體。可在感染后1天、感染后2天、感染后3天、感染后4天、感染后5天、感染后6天、感染后7天、感染后10天、感染后12天、感染后14天施用抗體?？稍诟腥净蚣俣ǖ母腥竞髷?shù)周，包括1周后、2周后、3周后、4周后、1個月后施用抗體?？稍诟腥局盎?yàn)榱藴p少或阻止傳播，或在病患、疾病或感染的任何臨床適應(yīng)癥之前施用抗體組合。在其一個方面，可在感染前或可能的或假定的暴露或暴露的風(fēng)險之前數(shù)天在一段時期內(nèi)將抗體作為預(yù)防劑施用?？稍?天前或之前1天，2天前或之前2天，3天前或之前3，4天前或之前4天，5天前或之前5天，6天前或之前6天，7天前或之前7天，1周前或之前1周，超過7天前或之前超過7天，超過1周前或之前超過1周，達(dá)到9天前或之前9天，達(dá)到10天前或之前10天施用抗體組合?？稍谝粋€或多個劑量前或之前以數(shù)小時、數(shù)天或數(shù)周的間隔施用抗體一次或多次?？梢砸砸粋€單個劑量或以重復(fù)的多個組合劑量施用抗體組合。在任何優(yōu)選方面，以相同的相對量施用組合或混合物中的每一種抗體。每一個劑量以單位或mg/kg量上是相同的，或在量上可以是不同的。例如，初始劑量可以是較高的相對劑量，諸如例如但不限于約1mg/kg，大于1mg/kg，少于1mg/kg或約最大或接近最大耐受的劑量，或一半最大耐受的劑量(對于待施用的哺乳動物)。隨后劑量可與初始劑量相同或可少于或大于初始劑量，并且可取決于受試者或患者中的反應(yīng)或響應(yīng)或臨床癥狀的緩解或程序。可間隔數(shù)小時、數(shù)分鐘、數(shù)天或數(shù)周施用每一個或任一個劑量具有相同或不同量的多個劑量。時間安排可變化，取決于反應(yīng)和癥狀可被縮短或延長。劑量，例如但無限制，可以間隔至少2小時，間隔至少4小時，間隔至少6小時，間隔至少8小時，間隔至少24小時，間隔至少48小時，間隔至少72小時。可在感染后或假定的感染后并達(dá)2小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時、36小時、48小時、72小時后，施用一個或多個抗體劑量，進(jìn)行達(dá)1天、2天、3天、4天、5天、6天后，7天、1周、2周、3周、4周、1個月或更長時間。所述方法可包括病毒特異性單克隆抗體的另外IP或IV施用，其中另外施用的抗體是中和或非中和抗體。通過IP或IV另外施用的抗體可以是與通過IN或經(jīng)由吸入施用的抗體相同的抗體。與通過IN或吸入施用的抗體同時地，依序地或在其之后施用通過IP或IV另外施用的抗體。任何此類隨后施用可以是數(shù)小時后，可以是2小時、4小時、6小時、8小時、12小時、24小時、36小時、48小時、72小時或更多小時后。隨后施用可是數(shù)天后，可以是1天、2天、3天、4天、5天、6天、7天后。隨后施用可以是數(shù)周后，可以是1周、2周、3周、4周或5周后。吸入或鼻內(nèi)劑量可用于在特別地生病的或在初始IN或IP或IV或組合劑量后繼續(xù)顯示感染或疾病的癥狀的患者或受試者中增強(qiáng)反應(yīng)或功效。在其它方面，本公開提供了用于施用針對流感病毒的單克隆抗體混合物或組合的方案，所述方案包括施用第一鼻內(nèi)或吸入劑量的抗體組合，隨后或同時腹膜內(nèi)或靜脈內(nèi)，或再次地鼻內(nèi)或通過吸入施用第二劑量的抗體，其中第二劑量的抗體組合是與第一劑量的抗體組合相同或不同的抗體組合。第二劑量或任何另外的劑量的抗體可以是中和或非中和抗體。本文中公開的實(shí)施方案可通過以下非限制性實(shí)施例來更好地理解，所述實(shí)施例被提供為本發(fā)明的示例。為了更全面地舉例說明優(yōu)選或特定的實(shí)施方案提供以下實(shí)施例，然而所述實(shí)施例絕不應(yīng)當(dāng)被解釋為限制本發(fā)明的范圍。抗體結(jié)構(gòu)在下文中和所附序列表中提供了本發(fā)明的mAb的某些重鏈和輕鏈氨基酸序列。TRL784實(shí)施例以下材料和方法用于本文中提供的實(shí)施例?？贵w：在一些情況下，使用如下所述的噬菌體展示分離Mab。MabCR8020和CR6261是分別針對組2和組1病毒的良好表征的廣泛反應(yīng)性抗體(ThrosbyM等(2008)PL0SONE3:e3942；EckertDC等(2009)Science324:246-251；FriesenRHE等(2010)PLoSONE5(2):e1906；美國專利8,192,927；EckertDC等(2011)Science333:843-850)。抗體CR9114結(jié)合HA莖中的保守表位，并且當(dāng)IV施用時保護(hù)免受甲型和乙型流感病毒的致死攻擊(DreyfusC等(2012)ScienceExpress2011年8月9日10.1126/science.1222908)。通過合成可變區(qū)在我們的手中克隆了這些中和抗體，并將其亞克隆至小鼠IgG2a表達(dá)載體中。使用公開的重鏈GI：339779688和輕鏈GI：339832448克隆CR8020的可變區(qū)。使用公開的重鏈GI：313742594和輕鏈GI：313742595克隆CR6261的可變區(qū)。使用基因庫序列重鏈登錄號JX213639和輕鏈登錄號JX213640克隆了CR9114的可變區(qū)。將用于這些研究的CR6261、CR8020和CR9114抗體克隆至含有融合至小鼠IgG2a的人可變區(qū)的IgG表達(dá)載體中。小鼠抗體CR6261、CR8020和CR9114的嵌合抗體在本文中分別被稱為CA6261、CA8020和CA9114。Mab5A7結(jié)合B病毒HA上的共同表位并中和病毒，以及當(dāng)通過IP給予時保護(hù)小鼠免受致死攻擊(YasugiM等(2013)PLoSPathog9(2)：e1003150,doi：10.1371/journal.ppat.1003150)。人抗體Mab53(也表示為TRL053)描述于US2012/0020971和WO2011/160083(所述專利和專利申請的每一篇通過引用并入本文)中，并且在中和組1和2H1、H9、H7和H5亞型中是有效的。抗體Mab579(也表示為TRL579)描述于WO2013/086052(其通過引用并入本文)，并且在中和H3和H7上是有效的。包括抗體重鏈和輕鏈可變區(qū)序列，特別地本文中的上文所述和例舉的抗體(特別地包括CR6261、CR8020、CR9114、5A7、Mab53和Mab579)的重鏈和輕鏈CDR結(jié)構(gòu)域(CDR1、CDR2和CDR3)序列的公開的序列是已知的并且可包括在上述的并通過引用并入本文的參考文獻(xiàn)中公開獲得。Fab的驗(yàn)證：通過針對重組HA的ELISA篩選編碼Fab的噬菌體裂解。將挑揀至含有2XYT/Cam/Glc培養(yǎng)基的384孔板中的單個集落在30℃下生長過夜。使用Qpix將384孔板中的TG1細(xì)胞復(fù)制至含有具有低葡萄糖的2XYT/Cam的384孔表達(dá)板中。將板在30℃和400rpm下生長2-4小時。用0.5mMIPTG誘導(dǎo)Fab表達(dá)，并在22℃和400rpm生長過夜。用含有Benzonase的BEL緩沖液在22℃和400rpm裂解含有Fab的細(xì)胞，進(jìn)行1小時。用12.5％MPBST在400rmp和22℃下封閉含有Fab的裂解物，持續(xù)30分鐘。將裂解物添加至涂覆有HA的ELISA板在RT下持續(xù)1小時。用PBST洗滌板5次，隨后在RT下用綴合于堿性磷酸酶的抗FabIgG孵育1小時。用TBST洗滌板5次，隨后用AutoPhos(Roche,NewJersey)進(jìn)行顯色使用。InfiniteProF200讀取板。對陽性噬菌體裂解物進(jìn)行測序，將獨(dú)特的Fab亞克隆至含有c-myc和his標(biāo)簽的Fab表達(dá)載體中，以進(jìn)行進(jìn)一步表征。Fab的表達(dá)：將Fab表達(dá)質(zhì)粒電穿孔至TG1F細(xì)胞中，將所述細(xì)胞涂鋪在LB/Cam瓊脂板上。將板在37℃下孵育過夜。用單個集落接種5ml的2XYT/Cam/Glc，并在30℃和350rpm下生長過夜。用2ml的過夜培養(yǎng)物接種500ml的2XYT/Cam/低Glc，并在30℃和180rpm搖動，直至達(dá)到0.5的OD600nm。通過添加0.75mM的終濃度的IPTG誘導(dǎo)Fab表達(dá)。將培養(yǎng)物在30℃和160rpm下?lián)u動過夜。在4℃下以5,000g將培養(yǎng)物離心30分鐘。將細(xì)菌沉淀于-80℃下冷凍至少2小時。裂解細(xì)胞，并將其在0.22um過濾器上過夜，隨后經(jīng)歷IMAC純化和尺寸排阻步驟?？贵w的克隆和表達(dá)：對編碼Fab的噬菌體進(jìn)行測序，并亞克隆至各自重鏈和輕鏈的IgG表達(dá)質(zhì)粒中。在搖瓶中于Invitrogen293F或Invitrogen293Expi細(xì)胞中產(chǎn)生IgG。用重鏈和輕鏈的表達(dá)質(zhì)粒轉(zhuǎn)染細(xì)胞。轉(zhuǎn)染后6天收集培養(yǎng)物上清液，使用蛋白A親和層析和緩沖液交換步驟進(jìn)行純化。小鼠中的治療功效研究：將6-7周齡雌性BALB/c小鼠用于實(shí)驗(yàn)。在開始實(shí)驗(yàn)之前使所有小鼠適應(yīng)和維持至少3天的時間。在病毒攻擊當(dāng)天和隨后每日對小鼠稱重，持續(xù)2周。臨床評分系統(tǒng)用作臨床終點(diǎn)和從研究中排除的標(biāo)準(zhǔn)。如下對臨床體重評分：駝背姿勢＝3，毛發(fā)豎立＝3，無進(jìn)食或飲水＝2，體重減輕≥30％＝10，神經(jīng)癥狀＝10。當(dāng)達(dá)到16或更多的評分時，將小鼠從研究中排除，并無痛致死。按照批準(zhǔn)的動物護(hù)理和使用委員會的協(xié)議進(jìn)行動物研究。在感染后指定的天進(jìn)行小鼠的治療性治療。在以每小鼠50ul體積鼻內(nèi)施用病毒、Mab或Fab之前，首先用氯胺酮/賽拉嗪混合物麻醉小鼠。以100ul體積給予Mab或Fab的腹膜內(nèi)施用。在14天的研究過程中每天測定平均體重，并相對于第0天的平均體重顯示所述平均體重。病毒：根據(jù)Cottey,Rowe和Bender(CurrentProtocolsinImmunology,2001)，流感病毒的株(包括A/California/7/09、A/Victoria/11、B/Malaysia/2506/2004、B/Florida/04/2006)是小鼠適應(yīng)性的。進(jìn)行3輪小鼠適應(yīng)，隨后在雞胚中進(jìn)行一輪病毒繁殖。簡言之，將3只6-8周齡小鼠麻醉，并用20ul病毒進(jìn)行鼻內(nèi)感染。感染后3天，將小鼠無痛致死，取出肺。將肺機(jī)械勻漿，過濾，離心以除去大塊碎片。將20ul的肺勻漿物在首次接受實(shí)驗(yàn)的小鼠中進(jìn)行的另外傳代，進(jìn)行3輪。參考文獻(xiàn)HuberVC，LynchJM，BucherDJ，LeJ，MetzgerDW：Fcreceptor-mediatedphagocytosismakesasignificantcontributiontoclearanceofinfluenzavirusinfections.JImmunol2001.166：7381-7388.JegerlehnerA，SchmitzN，StorniT，BachmannMF：InfluenzaAvaccinebasedontheextracellulardomainofM2：weakprotectionmediatedviaantibody-dependentNKcellactivity.JImunol2004，172：5598-5605.FengJ，MozdzanowskaK，GerhardW：ComplementcomponentClqenhancesthebiologicalsctivityofinfluenzavirushemagglutinin-specificantibodiesdependingontheirfineantigenspecificityandheavychainisotype.JVirol2002，76：1369-1378.MozdzanowskaK，F(xiàn)engJ，EidM，ZharikovaD，GerhardW：Enhancementofneutralizingactivityofinfluenzavirus-specificantibodiesbyserumcomponents.Virology2006，352：418-426.以下實(shí)施例被提供來舉例說明本發(fā)明但不限制本發(fā)明。實(shí)施例1.單克隆抗體的親和力。使用CellSpotTM技術(shù)的初步篩選固有地偏向于發(fā)現(xiàn)高親和力mAb，因?yàn)槿绻乖?抗體相互作用太弱，則抗原結(jié)合至在洗滌過程中未被保留的珠粒。用于測量克隆的mAb的親和力的傳感器儀器為FortéBioTMOctet。當(dāng)解離速率變得非常低時，將親和力測量為結(jié)合速率與解離速率的比率不太精確。為了獲得更好的評估，將不同濃度的抗體流過固定至傳感器表面的抗原。表5顯示了一組乙型流感mAb連同以該方式測定的它們的KD。表5.mAb針對乙型流感的KD。由Yasugi等，(第0008段)描述的5A7對于HA的生物傳感器(BiacoreTM)測定的親和力(KD)為～5nM。本發(fā)明的mAbTRL835競爭與5A7的結(jié)合，但在0.6nM具有顯著更緊密的KD，如所顯示的。實(shí)施例2.mAb對重組乙型流感HA的結(jié)合。通過ELISA測定抗體結(jié)合。用20ng/孔的DPBS,pH7.4中的蛋白rHA涂覆384孔ELISA板。在于4℃下對板進(jìn)行過夜涂覆后，用PBS和0.01％Tween20(PBS-T)洗滌板2次。隨后用5％的PBS-T中的脫脂牛奶(M-PBS-T)封閉板，持續(xù)1小時，然后將板在PBS-T中洗滌2次。在PBS中稀釋純化的抗體，隨后以20ng/孔針對每一種抗原進(jìn)行探測。用PBS-T洗滌板5次，隨后用綴合于堿性磷酸酶的第二抗體進(jìn)行探測。隨后用PBS-T洗滌板5次，并用AttoPhosAP熒光底物(PromegaS1000)進(jìn)行顯色。連續(xù)讀取板，直至來自陰性對照孔的本底信號開始提供熒光信號。某些ELISA測定的結(jié)果示于圖3中。重組HAELISA數(shù)據(jù)舉例說明幾種抗乙型流感mAb和兩種抗甲型流感mAb與甲型和乙型流感病毒株的反應(yīng)性。以一式三份進(jìn)行重組HAELISA，顯示相對于本底的平均倍數(shù)反應(yīng)性。圖3顯示抗BmAbTRL809、TRL812、TRL813；TRL832、TRL841、TRL842、TRL845、TRL846、TRL847、TRL848、TRL849、TRL854和TRL856的每一種具有針對乙型流感病毒的兩個譜系(包括Yamagata進(jìn)化枝的B/Florida/06、B/Mass/12和B/Wisconsin/10以及Victoria進(jìn)化枝的B/Brisbane/08、B/Malaysia/04和B/Victoria/87)的廣泛交叉反應(yīng)性?？辜仔土鞲衜AbCF401(＝mAb53,TRL053)和CF402(＝mAb579,TRL579)具有與甲型流感H1(A/California/09)和H3(A/Sydney/97)亞型的反應(yīng)性，但無與乙型流感病毒株的反應(yīng)性。實(shí)施例3.mAb對乙型流感病毒的中和。將抗體與200PFU的病毒一起在37℃孵育1小時。隨后，在37℃用混合物吸附MDCK細(xì)胞持續(xù)1小時。用含Avicel培養(yǎng)基覆蓋在MDCK細(xì)胞上以進(jìn)行空斑測定顯影。在孵育2天后測定空斑。經(jīng)鑒定的具有廣泛反應(yīng)性的乙型流感mAb能夠以高效力中和Yamagata和Victoria譜系。在孵育12小時后，固定細(xì)胞，并將其經(jīng)歷免疫熒光以檢測感染的細(xì)胞。對照抗BmAb5A7顯示對Yamagata和Malaysia譜系株的中和，數(shù)據(jù)未顯示。然而，本發(fā)明的mAb表現(xiàn)出較大的效力，如圖4的表8中顯示的。關(guān)于選定的抗乙型流感抗體(抗乙型流感抗體TRL845、TRL848、TRL849、TRL854、TRL832和TRL809)的中和測定的結(jié)果示于圖4中。IC50是在該特定的中和測定中抑制病毒的濃度。所述mAb各自中和Yamagata譜系和Victoria譜系的每一個的代表性成員。將這些譜系的確定的株用于本實(shí)驗(yàn)，但mAb也中和測試的所有B病毒。實(shí)施例4.在小鼠流感模型中的體內(nèi)功效。一般地，除在另外指出的情況下，在肺部遞送模型中評價mAb的增強(qiáng)的功效。用10xLD50感染小鼠，在24hpi通過經(jīng)由鼻內(nèi)途徑的肺部遞送以1mg/kg進(jìn)行施用來處理小鼠。監(jiān)測體重和存活率以評估相對功效。圖6A-D顯示在以1mg/kg通過IN途徑施用后，本發(fā)明的抗乙型流感mAb在鼠模型中在感染后1天針對10xLD50的病毒的體內(nèi)活性，評估小鼠體重直至感染后14天，以PBS和無病毒作為對照。每天監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，并將相對于初臺第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。圖6A顯示通過IN途徑的1mg/kg的mAbTRL845、TRL847、TRL848、TRL849和5A7在用代表Victoria進(jìn)化枝的B/Malaysia/2506/04感染的小鼠提供了免受疾病的保護(hù)。圖6B顯示通過IN的1mg/kg的mAbTRL845、TRL847、TRL848、TRL849和5A7在用代表Yamagata進(jìn)化枝的B/Florida/04/2006感染的小鼠中提供免受疾病的保護(hù)。圖6C顯示通過IN途徑的1mg/kg的mAbTRL849、TRL846、TRL854、TRL856、TRL847和5A7在用代表Victoria進(jìn)化枝的B/Malaysia/2506/04感染的小鼠中提供免受疾病的保護(hù)。圖6D顯示通過IN途徑的1mg/kg的mAbTRL849、TRL846、TRL854、TRL856、TRL847和5A7在用代表Yamagata進(jìn)化枝的B/Florida/04/2006感染的小鼠中提供免受疾病的保護(hù)。實(shí)施例5.通過肺部遞送產(chǎn)生的體內(nèi)功效增強(qiáng)。為了評估通過替代遞送法產(chǎn)生的功效增強(qiáng)的潛能，測試mAb的體內(nèi)功效。用10xLD50感染小鼠，在24hpi以10、1和0.1mg/kg使用經(jīng)由腹膜內(nèi)施用的常規(guī)全身性遞送，相較于通過經(jīng)由鼻內(nèi)途徑的肺部遞送施用的1.0和0.1mg/kg的mAb，以10、1和0.1mg/kg使用經(jīng)由腹膜內(nèi)施用的常規(guī)全身性遞送處理小鼠。比較存活率和體重。將存活率和體重減輕(感染的嚴(yán)重度的量度)用于評估相對活性。圖5A和5B顯示mAb5A7經(jīng)顯示為舉例說明通過肺部遞送產(chǎn)生增強(qiáng)的功效的實(shí)例。圖5A顯示以用10xLD50的B/Florida(Yamagata譜系)感染的小鼠，在用5A7的鼻內(nèi)(IN)對比腹膜內(nèi)(IP)施用后的百分比體重表示的抗乙型流感抗體5A7在小鼠中的體內(nèi)活性。在24hpi通過IN或IN途徑利用mAb處理小鼠，每日將體重測量為疾病嚴(yán)重度的指征，以PBS和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。將體重減輕>30％的小鼠無痛致死。1mg/kgIN提供免于體重減輕的保護(hù)，然而通過IP途徑的1mg/kg具有一定的體重減輕。IN施用途徑相對IP施用途徑的增強(qiáng)的功效得以證明。圖5B顯示以用10xLD50的B/Malaysia(Victoria譜系)感染的小鼠，在5A7的IN對比IP施用后的百分比體重表示的抗乙型流感抗體5A7在小鼠中的體內(nèi)活性。在24hpi通過IN或IP途徑用mAb處理小鼠，每日將體重測量為疾病嚴(yán)重度的指征。將體重減輕>30％的小鼠無痛致死。1mg/kgIN提供免于體重減輕的完全保護(hù)，然而通過IP途徑的1mg/kg具有一定的體重減輕。IN施用途徑相對于IP施用途徑的增強(qiáng)的功效得以證明。實(shí)施例6.體內(nèi)功效不受抗流感組AmAb的存在影響。利用另外替代流感抗體評估使用鼻內(nèi)施用向氣道進(jìn)行施用的功效。先前已分離了針對組1和組2甲型流感病毒中和并具有針對所述病毒的功效的單克隆抗體。人抗體Mab53(也表示為TRL053)描述于US2012/0020971和WO2011/160083，并且在中和組1和2H1、H9、H7和H5亞型中是有效的?？贵wMab579(也表示為TRL579)描述于WO2013/086052中，并且在中和H3和H7中是有效的。如本文中提供的，制備這些mAb，將其優(yōu)化以提供用于本研究的抗H1CF-401(＝mAb53,TRL053)、抗H3CF-402(＝mAb579,TRL579)。在小鼠模型中測試Mab579和Mab53抗體的針對甲型流感病毒感染的治療功效。針對H3流感測試Mab579，以及針對H1流感測試Mab53。比較IN與IP給藥，以1mg/kg進(jìn)行IN給藥，并以高至10倍的10mg/kg進(jìn)行IP給藥。在感染后24小時(24hpi)施用抗體Mab579以獲得針對10XLD50的H3流感病毒Vic11的治療功效(數(shù)據(jù)示顯示和圖12B)。在感染后24小時(24hpi)施用抗體Mab53，以獲得針對10XLD50的H1流感病毒Cal09和PR8的治療功效(數(shù)據(jù)未顯示和圖11B)。IN施用比IP施用更有效，即使在同一實(shí)驗(yàn)中以高至10倍的劑量使用IP施用亦如此。對于兩個單個的抗BmAb和相同mAb與以混合物形式存在的抗H1和抗H3mAb的混合物均獲得可比較的存活率和體重減輕數(shù)據(jù)，確立了所述mAb不干擾彼此的活性。圖7A-7D顯示3種抗流感mAb的共施用不干擾抗BmAb的功效。用10xLD50的病毒感染小鼠，在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401(＝mAb53,TRL053)、抗H3CF-402(＝mAb579,TRL579)和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理小鼠，以PBS和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，將相對初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。圖7A-7D一起表明所述混合物將提供預(yù)期水平的保護(hù)而不干擾針對來自所有季節(jié)性流感亞型的代表性株(H1N1、H3N2和B的兩個譜系)的混合物中的另一mab。圖7A顯示利用10xLD50H1N1感染的，并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7B顯示用10xLD50H3N2感染的，并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三無mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7C顯示用10xLD50B/Yamagata譜系感染的，并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三無mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7D顯示用10xLD50B/Victoria譜系感染的，并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。實(shí)施例7.使用PepScanTM進(jìn)行的抗BmAb表位作圖。使用PepscanCLIPSTM技術(shù)對抗BmAb的表位進(jìn)行作圖，其中對對應(yīng)于乙型流感血凝素的莖區(qū)的區(qū)段的各種固定的線性和約束肽對不同抗BmAb的結(jié)合進(jìn)行評分。選擇乙型流感病毒株BLee的莖序列，因?yàn)槠錇閂ictoria和Yamagata譜系的祖先。結(jié)合mAb的肽被認(rèn)為是表位。對于每一種測試的mAb，描繪不連續(xù)表位的獨(dú)特模式。結(jié)果概括于圖8和9中。圖8顯示通過PEPSCANTM產(chǎn)生的B/Lee/1940/HA蛋白(SEQIDNO：291)的肽陣列(上圖)。B/Lee/1940/HA蛋白的陰影區(qū)對應(yīng)于用于從aa_15-65(SEQIDNO：292)、aa_300-359(SEQIDNO:293)和aa_362-481(SEQIDNO：294)產(chǎn)生肽陣列的殘基。表(下圖)顯示mAb5A7表位1-aa_333-338(SEQIDNO：304)、表位2-aa_342-346(SEQIDNO：305)和表位3-aa_457-463(SEQIDNO:306)；mAbTRL845表位-aa_455-463(SEQIDNO:307)；TRL848表位1-aa_64-71(SEQIDNO：308)；表位2-aa_336-348(SEQIDNO：309)；表位3-aa_424-428(SEQIDNO：310)；mAb849表位1-aa_317-323(SEQIDNO：311)、表位2-aa_344-349312)、表位3-aa_378-383(SEQIDNO：313)；mAb854表位1-aa_457-463(SEQIDNO：314)。右下的圖顯示以深灰色顯示的解析至HA的莖部的區(qū)域。圖9舉例說明通過PEPSCANTM分析沿HA蛋白的莖進(jìn)行的表位作圖。隨影區(qū)域描繪了各mAb所結(jié)合的表位。mAbTRL848、TRL845、TRL854和TRL849識別沿HA的莖部分重疊的不連續(xù)表位。來源公開的序列的對照mAb5A7產(chǎn)生相似但獨(dú)特的表位。實(shí)施例8.mAb的體內(nèi)表達(dá)。在一些實(shí)施方案中，本發(fā)明的mAb被靶向以進(jìn)行體內(nèi)表達(dá)。已描述了用于將mAb的遺傳信息轉(zhuǎn)移至宿主細(xì)胞中以原位產(chǎn)生mAb的幾個遞送系統(tǒng)。在一個實(shí)施方案中，將編碼DNA封裝進(jìn)慢病毒顆粒中，該顆粒在其表面上含有與組織靶向抗體組合的促融合蛋白，如由DavidBaltimore’slaboratory：Proc.Nat’lAcad.Sci.USA103(31):11479–11484(2006)描述的。所述靶向抗體可結(jié)合CD20，例如，從而實(shí)現(xiàn)載體至B細(xì)胞的優(yōu)先遞送，以最佳地產(chǎn)生抗體?；蛘?，如由Johnson,P.R.等，NatureMedicine(2009)15:901-906所述，使用AAV載體(腺相關(guān)病毒)。其它方法包括將編碼mRNA封裝至脂質(zhì)體或脂質(zhì)顆粒中以有利于細(xì)胞攝取。實(shí)施例9.解鏈曲線測定。通過在PBS中以2ug/mL的濃度，利用PCRStepOnePlusTM儀，以1.58℃/分鐘從15℃加熱至99℃，連續(xù)測量熒光來進(jìn)行解鏈曲線測定。圖10A-10F顯示mAbTRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的解鏈曲線測定。每一種mAb表現(xiàn)出高度熱穩(wěn)定性。圖10A顯示TRL845的解鏈曲線，其顯示分別在58.3℃和68.7℃的兩個解鏈溫度(Tm1,Tm2)。圖10B顯示mAbTRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的解鏈溫度(Tm)(分別如圖10A和10C-10F中顯示的)的表。兩個解鏈溫度(Tm1,Tm2)的顯示可能歸因于這些mAb的Fc和Fab結(jié)構(gòu)域單獨(dú)變性。圖10C顯示TRL847的解鏈曲線，其顯示70.3℃的解鏈溫度(Tm1)。圖10D顯示TRL848的解鏈曲線，其顯示70.1℃的解鏈溫度(Tm1)。圖10E顯示TRL849的解鏈曲線，其顯示分別在70℃和81.8℃的兩個解鏈溫度(Tm1,Tm2)。圖10F顯示TRL854的解鏈曲線，其顯示在59.7℃和68.9℃的兩個解鏈溫度(Tm1,Tm2)。包含SEQIDNO：17/18的HC/LC氨基酸序列的抗體TRL053和包含SEQIDNO：27/28的HC/LC氨基酸序列的TRL597，各自顯示如表6中顯示的解鏈溫度。表6.mAb的解鏈溫度。mAbTm1Tm2TRL05370.176.5TRL57970.5來自一些抗體的兩個解鏈溫度(Tm1,Tm2)的顯示可能歸因于這些體的Fc和Fab結(jié)構(gòu)域單獨(dú)變性。因此用于本文部提供的特定組合和組合物的抗體是穩(wěn)定的，并且顯示大于55℃，或在一些情況下大于65℃的解鏈溫度。實(shí)施例10.當(dāng)通過肺部途徑遞送時抗流感mAb提供保護(hù)。為了研究組合CF-401(mAb053)與神經(jīng)氨酸酶抑制劑奧司他韋用于治療H1N1感染的效應(yīng)，用3xLD50的H1N1病毒攻擊小鼠，在第4天用單個1mg/kgmAbCF-401的鼻內(nèi)劑量、10mg/kg每日二次的口服奧司他韋處理(進(jìn)行4天)或兩個處理的組合處理小鼠。如圖24中所示，當(dāng)用1mg/kg的CF-401的單次施用處理時，100％的小鼠在攻擊時存活下來。當(dāng)在這些感染后晚時間點(diǎn)施用時，護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)奧司他韋不具有保護(hù)作用(0％的存活率)，但當(dāng)與CF-401mAb療法組合時，其提供相較于單獨(dú)的mAb療法免受體重減輕的額外保護(hù)。結(jié)果示于圖24中，其中當(dāng)在感染后4天用1mg/kg的CF-401的單次施用處理時，100％的小鼠在來自致死劑量的H1N1攻擊時存活下來。護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)Tamiflu的施用不具有保護(hù)作用，但加上CF-401mAb療法，提供了免受體重減輕的額外保護(hù)。在第4-8天每日二次口服施用10mg/kgTamiflu。數(shù)據(jù)顯示當(dāng)在晚時間點(diǎn)施用時，護(hù)理標(biāo)準(zhǔn)(Tamiflu)加上mAb療法是有效的。當(dāng)通過肺部途徑遞送時，抗流感mAb提供保護(hù)。在一些實(shí)施方案中，可通過組合本發(fā)明的mAb療法與其它抗病毒治療，諸如神經(jīng)氨酸酶抑制劑(例如奧司他韋[TamifluTM]、扎那米韋[RelenzaTM])、RNA聚合酶抑制劑(例如法維拉韋，VX-787)、免疫調(diào)節(jié)劑(例如吸入的干擾素β1a)、宿主細(xì)胞靶向劑(例如FludaseTM,RadavirsenTM)、離子通道抑制劑(例如金剛胺)或其它抗病毒劑組合來提高功效。實(shí)施例11.中和抗體是鼻內(nèi)有效的。全身性遞送的抗體的治療功效不僅僅依賴于中和能力，因?yàn)橥ㄟ^IP途徑給予的中和和非中和抗體在治療和預(yù)防致命感染中表現(xiàn)出相似的效應(yīng)。當(dāng)通過IP施用時，中和和非中和抗體具有相似的有效性。這帶來了問題：在全身性遞送中中和是否對治療功效做出重大貢獻(xiàn)。通過IV或IP途徑的非中和抗體的遞送未導(dǎo)致顯著的功效差異(數(shù)據(jù)未顯示)。相反地，中和抗體的IN遞送相較于全身性遞送顯著增強(qiáng)它們的治療功效(圖11A)。該治療功效上的增強(qiáng)對于中和抗體是特異的，因?yàn)榻⒌姆侵泻涂贵w未展現(xiàn)出相似的增強(qiáng)的治療功效。與IP遞送不同，中和抗體的IN遞送相較于非中和抗體提供了顯著的治療益處。IN遞送的該增強(qiáng)的功效與抗體中和的能力相關(guān)，因?yàn)橥ㄟ^IN遞送的非中和抗體未表現(xiàn)出提高治療功效。IN增強(qiáng)的功效通過針對H1病毒CA6261的廣泛識別抗體(結(jié)合HA2亞單位的短α螺旋的IgG2a抗體)來證明(圖11A)。為了進(jìn)一步確認(rèn)IN功效的效應(yīng)，我們已評價了另一種交叉保護(hù)性抗體CR9114，并且顯示其為高度有效的IN(數(shù)據(jù)未顯示，和圖24)。CR9114結(jié)合HA的莖中的表位，并且當(dāng)IV施用時保護(hù)免受利用甲型和乙型流感病毒的致死性攻擊(DreyfusC等(2012)ScienceExpress2012年8月9日10.1126/science.1222908)。對于具有不同抗體同種型的抗體，我們未曾觀察到IN功效的顯著差異。已在IP給藥中觀察到同種型差異，這暗示著效應(yīng)子功能可以是相關(guān)的。同樣地，單一中和抗體在阻斷針對它們的靶H1或H3病毒的多個株的感染中是有效的，這表明功效不是株特異性的或有限的。因此，IN施用為針對流感病毒的中和抗體提供了可行的和事實(shí)上更有效的替代方案。實(shí)施例12.中和Fab是鼻內(nèi)有效的進(jìn)行研究以評價Fc的去除是否會消除IP或IN施用的中和和非中和Fab的治療功效。如圖25中看到的，模式Fab(CA6261抗體Fab)的IP施用在10mg/kg或更低下不提供針對H1病毒的治療功效。用FabIP處理的小鼠與PBS處理的小鼠類似均受感染而死。相反地，以10mg/kg和1mg/kg的劑量利用中和Fab通過IN處理的小鼠能夠在致死感染時活下來(圖25)。所有通過IN施用的劑量(甚至至0.1mg/kg)均顯示比施用的任何IP劑量更大的功效。通過在同一實(shí)驗(yàn)中比較CA6261FabIN對比IP或IV，觀察到可比較的結(jié)果，其中當(dāng)通過IP或IV施用時，F(xiàn)abCA6261不具有保護(hù)作用或有效性，但當(dāng)通過IN施用相同的劑量(5mg/kg)時，顯示顯著的功效(動物保留和95％或更大的體重)(數(shù)據(jù)未顯示)。這引起數(shù)據(jù)表明，對于中和抗體，F(xiàn)ab通過鼻內(nèi)途徑有效地阻斷或治療病毒感染。數(shù)據(jù)進(jìn)一步表明全身性Mab遞送系統(tǒng)需要Fc效應(yīng)子功能來獲得治療功效，因?yàn)镕ab是無效的。當(dāng)通過IN或IP途徑施用時，來自非中和抗體的模式Fab不保留治療功效。通過示例性現(xiàn)有技術(shù)抗體CA8020(中和)和非中和抗體(數(shù)據(jù)未顯示)的純化的Fab的IN遞送處理利用H3病毒感染的小鼠。雖然中和Fab能夠顯示治療功效，但非中和Fab不能保護(hù)小鼠免受致死攻擊。來自非中和抗體的抗體片段，特別是Fab，當(dāng)通過IN施用時，未表現(xiàn)出治療功效。實(shí)施例13.IN遞送的效力為IP遞送的10-100倍中和抗體的鼻內(nèi)(IN)遞送的效力為腹膜內(nèi)(IP)遞送的10-100倍。用10xLD50的PR8病毒(H1病毒)感染小鼠，并在24hpi用抗體處理小鼠(圖11A)。將中和抗體CA6261進(jìn)行10倍系列稀釋，通過IN或IP途徑施用所述抗體(圖11A)。通過IN途徑處理的小鼠表現(xiàn)出較輕的疾病嚴(yán)重度，如通過體重減輕所指示的，并且在所有稀釋度上得到保護(hù)而免受致死感染。相比較地，通過IP處理的小鼠只在最高劑量(10mg/kg)上表現(xiàn)出短暫的體重減輕和免受致死感染的保護(hù)。當(dāng)通過IP施用時，所有較低的稀釋度不保護(hù)小鼠。相反地，利用0.1mg/kg的劑量的IN處理導(dǎo)致短暫的體重減輕，并且所有小鼠存活。通過IN遞送利用10mg/kg和1mg/kg的劑量處理的小鼠在感染后所有時間點(diǎn)上獲得保護(hù)而免于可檢測的體重減輕。通過IP給予的抗體在所有劑量上表現(xiàn)出一定程度的體重減輕，并且只有以10mg/kg的最高劑量處理的小鼠才在感染時存活下來。我們確認(rèn)中和抗體的鼻內(nèi)遞送類似地導(dǎo)致增強(qiáng)的針對H3病毒的治療功效。利用H3病毒感染小鼠，在24hpi處理小鼠(圖12A)。將中和抗體CA8020進(jìn)行10倍系列稀釋，通過IN或IP施用所述抗體。如在我們的研究對于H1病毒所觀察到的，通過IN途徑施用的抗體在所有稀釋度上提供了100％的針對H3病毒的存活率，并且相較于通過IP途徑施用的抗體表現(xiàn)出較少的體重減輕。這些數(shù)據(jù)一起表明，中和是當(dāng)通過IN遞送時獲得增強(qiáng)的治療功效所必需的。此外，全身性遞送的抗體的治療功效不依賴于中和，因?yàn)閷τ谥泻秃头侵懈骺贵w均觀察到相似水平的功效。支持該觀察，當(dāng)通過IP施用時，中和Fab的治療性功效被消除，但當(dāng)通過IN遞送時中和Fab顯示功效。通過IN施用的中和Fab相較于IP施用顯示與它們的完全Mab對應(yīng)物的IN遞送相似的提高的功效。實(shí)施例14.利用IN抗體的預(yù)防研究鑒于感染后中和抗體的鼻內(nèi)施用的顯著功效，進(jìn)行研究以評價在用病毒感染之前的預(yù)防性鼻內(nèi)施用的功效。這些研究用于評估和表明鼻內(nèi)施用在其中個體暴露于流感病毒的情況下的適用性，以及作為預(yù)防和減少暴露或高危人群內(nèi)，或在臨床上其中感染或疾病將是總體上更大的健康風(fēng)險的患者中的傳播的有效方法的適用性。在小鼠動物模型中評價組1(H1)抗體CA6261的在流感病毒感染之前數(shù)天的施用。評價CA6261在感染攻擊之前3、4、5、6和7天的施用，以及直接比較不同劑量的IN與IP給藥。在第一研究中，通過IN或IP施用抗體CA6261，隨后用3XLD50劑量的H1PR8病毒攻擊小鼠。圖13描繪了在用病毒感染前3或4天預(yù)防性IN和IP施用的研究。在用3XLD50PR攻擊之前3或4天通過IN或IP施用抗體CA6261。通過IN(0.1mg/kg)或IP(0.1mg/kg和1mg/kg)施用CA6261抗體。直至感染前4天(-4dpi)的IN施用(在0.1mg/kg下評估的)保護(hù)小鼠免受病毒攻擊。在感染之前3或4天以相同劑量(0.1mg/kg)進(jìn)行的IP施用完全無效。在感染前3或4天的IP施用在1mg/kg上是有效的。通過比較在-3dpi和-4dpi進(jìn)行的IN(0.1mg/kg)與IP(1mg/kg)施用，在兩種情況下，低至1/10的IN劑量比IP有效。隨后評價病毒感染之前5、6和7天的預(yù)防性功效。對比IN施用評價高至10倍劑量的IP。在用3XLD50的H1流感病毒PR8(數(shù)據(jù)未顯示)攻擊之前5、6或7天通過IP(以1mg/kg)或IN(以0.1mg/kg)施用抗體CA6261。也評估Tamiflu施用(口服10mg/kg，每天2次，持續(xù)5天)以用于比較。在-5dpi進(jìn)行的施用在0.1mg/kgIN上顯示了功效。對于病毒攻擊前6或7天進(jìn)行的0.1mg/kgIN施用，并非所有小鼠都存活下來。高至10倍的IP劑量(10mg/kg)在攻擊前5、6或7天是有效的。在攻擊前5天以0.1mg/kg進(jìn)行的抗體IN施用至少與在攻擊前7天高至10倍的1mg/kg劑量的施用一樣有效。隨后評價病毒攻擊前5、6和7天的以1mg/kg進(jìn)行的較高IN劑量。圖14描繪了在利用3XLD50的病毒PR8攻擊之前5、6或7天，以1mg/kg通過IP或IN施用的抗體CA6261的IN對比IP施用的研究。在長達(dá)病毒攻擊之前7天進(jìn)行的1mg/kg抗體的IN施用在預(yù)防上是有效的，并且在每一種情況下，IN比相同量的通過IP施用的抗體有效。事實(shí)上，在任何時間(攻擊之前5、6或7天)上的IN施用均比任何IP施用有效，即使更靠近病毒攻擊時施用IP亦如此。在所有情況下，抗體比Tamiflu更有效。上述研究表明了IN施用事實(shí)上在預(yù)防性保護(hù)方面優(yōu)于IP施用。達(dá)到感染前5天(-5dpi)的0.1mg/kg抗體的IN施用具有針對攻擊(3xLD50)的保護(hù)作用。在病毒感染之前3-7天的任一天通過IP施用的相同劑量的0.1mg/kg不保護(hù)動物(針對相同3xLD50劑量的病毒)。在通過IN施用的抗體的較高劑量(評價1mg/kg)上，如果提前至少達(dá)7天施用的話，通過IN施用的抗體可保護(hù)免受攻擊。未評價提前超過7天的IN施用，但所述施用可以是有效的。感染后重復(fù)給藥是有效的，當(dāng)以數(shù)小時間隔(8小時、32小時、52小時)多次給藥時，較低的鼻內(nèi)劑量是有效的(數(shù)據(jù)未顯示)。類似地，病毒感染或暴露前的重復(fù)給藥經(jīng)預(yù)測是有效的，并且可允許較低的IN預(yù)防性給藥。在較高劑量的病毒攻擊下評價特別地在用10xLD50的H1病毒PR8攻擊前數(shù)天施用CA2621抗體的預(yù)防功效。在用10xLD50的PR8H1亞型病毒攻擊前3和4天，通過IN或IP向動物施用0.1mg/kgCA6261抗體(數(shù)據(jù)未顯示)。病毒攻擊前3或4天0.1mg/kg抗體的IP施用完全無效，IP處理的動物與未接受處理的動物相似地死于病毒感染。相反地，在高滴度病毒攻擊之前3或4天鼻內(nèi)施用0.1mg/kg抗體的動物獲得保護(hù)而免受感染。評價高滴度攻擊之前5、6和7天的抗體施用，通過IN或IP以1mg/kg施用抗體(圖15)。在本研究中，只有氣道(通過鼻內(nèi)施用)被施用抗體的動物在病毒攻擊時完全存活下來。利用1mg/kg的抗體(在病毒攻擊前5、6或7天施用的)處理的小鼠未獲得完全保護(hù)，小鼠死于感染。Tamiflu在保護(hù)上完全無效。在病毒攻擊前5或6天利用0.1mg/kg抗體鼻內(nèi)處理的小鼠在病毒攻擊時幾乎與未受感染的對照動物一樣存活下來。因此，抗流感抗體的鼻內(nèi)施用是用于預(yù)防病毒感染的有效方案和方法。在病毒感染前至少達(dá)7天鼻內(nèi)施用的流感中和抗體具有抗病毒攻擊的保護(hù)使用。對于高滴度的病毒(甚至高于可能對于代表人對病毒的暴露所合理預(yù)期的)，表明了通過提前至少多至7天的鼻內(nèi)施用的保護(hù)。在這些研究中觀察到的保護(hù)水平表明鼻內(nèi)抗體施用在人受試者中對于保護(hù)免受病毒攻擊以及阻斷或減少病毒傳播是有效的。肺部施用的抗體在其中全身性施用是無效的條件和情況下具有保護(hù)作用。實(shí)施例16.用于流感治療或預(yù)防的組合。與流感的3個主要株(H1、H3和B)交叉反應(yīng)的抗體的組合是期望的，以使得任何預(yù)期的循環(huán)流感可以以單個劑量或劑量的組合來治療或預(yù)防。這可繞開對在施用抗體或抗體混合物之前詳盡表征感染性病毒的需要。確定流感株的診斷需要用到臨床實(shí)驗(yàn)室設(shè)施，并且通過需要12-24小時的最短出報告時間，如果在選擇適當(dāng)?shù)亩ㄏ虔煼ㄖ靶枰_定流感病毒株，則這導(dǎo)致治療的不利延遲。通過使用針對甲型和乙型流感病毒株的廣泛反應(yīng)性組合物，先前的株診斷在治療之前不是必需的。另外，抗體，特別地中和抗體，具有不能通過接種獲得的立即治療效應(yīng)，該效應(yīng)只起預(yù)防作用，通過需要數(shù)周來變得有效。我們尋求評價和鑒定覆蓋甲型和乙型流感的單克隆抗體(mAb)的治療性組合。具體地，適合的和有價值的組合包括有效地針對甲型組1、甲型組2和乙型流感病毒的抗體。這提供了有效地針對相關(guān)和循環(huán)流感的組合，并且所述組合可在病毒類型的診斷評價或評估之前施用或可被施用而無需所述診斷或評估。治療性組合的標(biāo)準(zhǔn)包括：有效的中和抗體；具有針對相關(guān)循環(huán)流感病毒，特別地甲型流感H1和H3以及乙型流感的組合功效的抗體；針對甲型流感或乙型流感攻擊的組合功效；抗體之間的顯著相互作用或競爭的不存在；對于IP、IV和IN途徑或經(jīng)由氣道的途徑以及全身性途徑是有效的抗體。優(yōu)選地，被包含在混合物中的mAb具有相容性生物物理性質(zhì)，以使得它們?nèi)菀妆还才渲?。pI值的匹配可以是期望的。治療性組合可有效地針對任何相關(guān)循環(huán)流感病毒，而無需診斷性評估或表征患者或受試者的流感。人單克隆抗體，或至少在重鏈和輕鏈中包含人可變區(qū)，特別地至少人互補(bǔ)決定區(qū)(CDR)的抗體是優(yōu)選的，并且可被利用。評價合適的抗甲型流感抗體?？笻1抗體TRL053(MAb53)在體外和體內(nèi)中和組1流感病毒(包括H1)上是有效的。TRL-053是從人抗體噬菌體文庫分離的，描述于US2012/0020971和WO2011/160083中，并且在中和組1和2H1、H9、H7和H5亞型上是有效的。TRL053表現(xiàn)出在納摩爾或亞納摩爾范圍內(nèi)的對流感H1和H5病毒株的結(jié)合親和力Kd，并且表現(xiàn)出8.54的等電點(diǎn)(pI)。在附隨的序列表中提供了TRL053的重鏈和輕鏈可變區(qū)CDR序列，上文中指示了完全可變區(qū)氨基酸序列。體內(nèi)評價TRL053的針對H1病毒PR8的功效(圖11B)。用10XLD50的H1流感病毒PR8接種動物，并在24hpi用10mg/kg、1mg/kg和0.1mg/kg的通過IN或IP施用的抗體TRL053(MAb53)處理動物。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天。TRL053對于IP或IN施用是有效的，然而，通過IN施用的TRL053顯示比IP給藥更大的功效。TRL053僅在10mg/kg的IP劑量上稍許有效。本研究中的IN劑量在10mg/kg和1mg/kg上是有效的。抗H1抗體TRL579(MAb579)在體外和體內(nèi)中和組2流感株上是有效的。TRL-579是從人抗體噬菌體文庫分離的，描述于WO2013/086-52中，并且在中和H3和H7上是有效的。TRL579表現(xiàn)出在納摩爾和亞納摩爾范圍內(nèi)的對流感H3和H7的結(jié)合親和力Kd，并且表現(xiàn)出8.60的等電點(diǎn)(pI)。在附隨的序列表中提供了TRL-579的重鏈和輕鏈可變區(qū)CDR序列，在上文中指示了完全可變區(qū)氨基酸序列。在體內(nèi)評估TRL579針對H3病毒Vic/11的功效(圖12B)。用10XLD50的病毒接種動物，并在24hpi用10mg/kg、1mg/kg和0.1mg/kg的通過IN或IP施用的抗體TRL579處理動物。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天。TRL579對于IP或IN施用是有效的，然而，通過IN施用的TRL579顯示比IP給藥更大的功效。TRL579僅在10mg/kg的IP劑量上稍許有效。本研究中的IN劑量在10mg/kg和1mg/kg上是有效的。為了以有效的組合提供合適的抗B抗體，分離針對乙型流感的抗體。使用CellSpot(美國專利7,413,868)鑒定結(jié)合流感的血凝素蛋白(HA)并在中和B/Yamagata和B/Victoria進(jìn)化枝的乙型流感病毒上有效的人抗體，以鑒定高親和力結(jié)合抗體，所述人抗體最初描述于2014年2月4日提交的USSN61/935,746中。B特異性抗體及其序列，特別地各種B抗體的單克隆抗體重鏈和輕鏈CDR序列的列表描述于序列表中。指示了重鏈和輕鏈的CDR1、CDR2和CDR3，如通過IMGT標(biāo)準(zhǔn)(國際ImMunoGeneTics數(shù)據(jù)庫imgt；EhrenmannF.,KaasQ.和LefrancM.-P.(2010)NucleicAcidsRes.,38,D301-307)確定的。所述B抗體被構(gòu)建并分離來具有相同的重鏈恒定區(qū)序列。對恒定區(qū)進(jìn)行密碼子優(yōu)化以用于在人中表達(dá)。上文中提供了重鏈IgG1恒定區(qū)序列(SEQIDNO：297)。上文中提供了的κ輕鏈抗體(TRL845、846、847、809、849和854)的輕鏈恒定區(qū)(SEQIDNO：295)?？贵wTRL848和832具有如下文中指示的λ輕鏈恒定區(qū)(SEQIDNO：296)。上文中和附隨的序列表中指示了B抗體的重鏈和輕鏈可變區(qū)序列。實(shí)施例17.B抗體的表征。為了鑒定和表征適用于廣泛有效的抗體組合的單克隆抗體，評價針對乙型流感的人抗體的針對乙型流感病毒功效。圖16提供了評估各種抗B抗體的血細(xì)胞凝集抑制、經(jīng)典體外中和和體內(nèi)施用的評價性研究的制表。評估抗體對B譜系Yamagata和Victoria的抗性。以在每一種情況下3個不同研究的概括提供體內(nèi)結(jié)果，其評價了利用10xLD50的病毒接種的，并在24hpi被以1mg/kg通過IN施用指示的TRL抗體的動物的相對初始體重的百分比。觀察動物體重，持續(xù)14天，標(biāo)示觀察到的最低體重。TRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的每一種在整個體內(nèi)功效評價過程中有效地維持至少96％的初始體重。評價B抗體對流感病毒的親和力以用作相對功效的指標(biāo)方面。在圖17中提供了某些數(shù)據(jù)。記錄抗體的等電點(diǎn)。TRL053的等電點(diǎn)(pI)為8.54，TRL579的pI為8.60。評價針對B/Florida(Yamagata譜系)和B/Malaysia(Victoria譜系)流感病毒株的親和力，將以nM表示的KD列表。所述B抗體表現(xiàn)出對于B/Florida株的納米或亞納米親和力。在每一種情況下TRL845、TRL847、TRL848、TRL849和TRL854的每一種對于B/Malaysia的親和力為亞納摩爾(<1.0nM)(數(shù)據(jù)未顯示)。在用分別代表Yamagata和Victoria譜系的B/Florida或B/Malaysia病毒感染的動物中測試單克隆乙型流感抗體的功效。在利用10XLD50的病毒感染后24小時通過以1mg/kg進(jìn)行IN施用來評價抗體。在圖18、圖19和圖22B中提供了B/Florida病毒的功效結(jié)果。在圖20、圖21和圖22A中提供了B/Malaysia病毒的功效結(jié)果。通過IN施用的抗乙型流感抗體顯示針對以10XLD50劑量進(jìn)行的任一B譜系的感染的功效，幾種抗體顯示抗體處理的感染的動物保留100％的體重。基于體內(nèi)功效和新和力研究，抗體TRL847、TRL845、TRL849、TRL848、TRL84、TRL854以及TRL809和TRL832被選定為優(yōu)選抗體。這些研究提供了對于與抗H1和抗H3抗體組合使用，以提供具有針對人群中的主要流感株的交叉反應(yīng)性和有效性的抗體的組合特別有效的幾種B抗體。以混合物形式測試抗H1抗體TRL53、抗H3抗體TRL579和抗B抗體的組合。B抗體5A7描述于上面先前的實(shí)施例中，并且對于在24hpi通過IP或IN施用治療B/Florida或B/Malaysia是有效的(圖5)。肺部施用顯示較大的功效，至少在1mg/kg或0.1mg/kg上是有效的，然而對于全身性遞送需要較高的劑量來獲得可比較的功效。實(shí)施例18.混合物、組合和組合物。組合的多種抗體(每種10mg/kg)的施用是很大的蛋白質(zhì)抗體劑量負(fù)荷，并且可能不被很好地耐受或調(diào)整，特別是在患病或處于風(fēng)險中的患者中。以較低劑量(特別地在1mg/kg的范圍內(nèi))包含抗體的抗體組合或混合物是可行的?？贵w的IN施用在本文中被證明在1mg/kg或更少上是有效的，即使以預(yù)防的方式提供亦如此。包含有效地針對組1和組2病毒的抗甲型流感抗體，特別地針對H1和抗H3抗體以及抗乙型流感抗體的混合物，以單個劑量或組合提供了抗人群中的所有相同流感株和類型的抗體的組合。體內(nèi)評價抗體TRL053、TRL579和5A7的混合物(每種1mg/kg，總共3mg/kg抗體)的免受因病毒感染而引起的體重減輕的保護(hù)作用。在用10xLD50的病毒感染后24小時，以單一混合的劑量施用抗體混合物。所述混合物顯示針對H1病毒、H3病毒、B/Yamagata譜系病毒和B/Victoria譜系病毒的每一種或任一種的感染的功效(圖23)。以抗體混合物形式評價抗H1抗體TRL053、抗H3抗體TRL579和抗BTRL抗體的組合。這些組合包含有效地針對相關(guān)流感類型或株，并且當(dāng)組合時是相容的和有效的抗體。利用相同亞型的骨架構(gòu)建它們，它們具有相似的pI，不相互作用或競爭，并且中和它們的靶流感病毒而在另外的一種或多種抗體存在的情況無干擾或濃度效應(yīng)。體內(nèi)評價感染后施用的TRL053、TRL579和每一種候選BTRL抗體的混合物(每種1mg/kg，總共3mg/kg抗體)的免受因病毒感染而引起的體重減輕的保護(hù)作用。表明了針對H1病毒、H3病毒、B/Yamagata譜系病毒和B/Victoria譜系病毒的每一種或任一種的感染的功效。圖7A-D描繪了各種混合物的IN施用的研究的結(jié)果。利用抗體的組合實(shí)現(xiàn)了針對H1病毒、H3病毒和B/Yamagata和B/Victoria譜系病毒感染的完全保護(hù)。圖7A-7D提供了來自3個示例性混合物-TRL053、TRL579和TRL845(c)(混合物1)、TRL053、TRL579和TRL847(混合物2)以及TRL053、TRL579和TRL849(混合物3)的結(jié)果。圖7A-7D顯示3種抗流感mAb的共施用不干擾抗BmAb的功效。利用10xLD50的病毒感染小鼠，并在24hpi用3mg/kg由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理小鼠，以PBS和無病毒作為對照。每日監(jiān)測動物的體重，持續(xù)感染后14天，并將相對于初始第0天的重量的百分比體重用于繪制曲線。圖7A-7D一起表明所述混合物將提供預(yù)期水平的保護(hù)，而無來自針對來自所有季節(jié)性流感亞型(H1N1、H3N2以及B的兩個譜系)的代表性株的混合物中的其它mab的干擾。圖7A顯示用10xLD50H1N1感染的并在24hpi用3mg/kg由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7B顯示用10xLD50H3N2感染的并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7C顯示用10xLD50B/Yamagata譜系感染的并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。圖7D顯示用10xLD50B/Victoria譜系感染的并在24hpi用3mg/kg的由抗H1CF-401、抗H3CF-402和抗BTRL845(混合物1)、抗BTRL847(混合物2)或抗BTRL849(混合物3)組成的三元mAb混合物處理的小鼠的體內(nèi)保護(hù)。數(shù)據(jù)表明，組合3種新型和獨(dú)特的抗體的混合組合物有效地針對由任何相關(guān)或循環(huán)病毒株或類型引起的流感感染。組合抗體有效地針對組1和組2甲型流感病毒以及乙型流感病毒。利用以單個劑量施用的抗體的組合實(shí)現(xiàn)了抗任何攻擊的保護(hù)。為了使單個劑量組合是有效的和被耐受的，并且無需成本昂貴或過多的抗體劑量，可在被作為混合物直接向氣道施用(諸如通過鼻內(nèi)施用)的組合中實(shí)現(xiàn)低劑量。各自在1mg/kg或更少的劑量范圍內(nèi)的抗體的組合的功效先前未曾被針對所有相關(guān)甲型和乙型流感病毒的抗體的組合實(shí)現(xiàn)。本文中描述的和提供的抗體的組合共同地中和所有相關(guān)流感病毒，并且被設(shè)計(jì)來特別能組合。所述抗體具有相容的生物物理性質(zhì)。組合中的抗體不能彼此競爭或顯著干擾，并且每一種在組合中的活性與它們單獨(dú)存在時的活性相當(dāng)。所述抗體具有相似的等電點(diǎn)并且在細(xì)胞培養(yǎng)中相似地表達(dá)。在本文中的一個方面，所述抗體被建立在相同的IgG骨架上并且共有恒定區(qū)序列，重組表達(dá)的每一種抗體具有相同的重鏈和輕鏈恒定區(qū)序列或相關(guān)序列。本發(fā)明可在不背離其精神或基本特征的情況下，以其它形式來體現(xiàn)或以其它方式來進(jìn)行。本公開從而被解釋為在所有方面舉例說明而非限制，本發(fā)明的范圍由所附權(quán)利要求表示，并且落在等效的含義和范圍內(nèi)的所有變化旨在被包含在本文中。在整個本說明書中引用于各種參考文獻(xiàn)，其每一篇通過引用整體并入本文。當(dāng)前第1頁1 2 3