本發明涉及制藥工藝，具體涉及蛋白酶體抑制劑MLN9708的合成方法。
背景技術：
MLN9708是一個可口服利用的二肽硼酸類蛋白酶體抑制劑，可用于多發性骨髓瘤和其他惡性腫瘤的治療，現正處于臨床III期研究階段。MLN9708作為一個前藥，在體內迅速水解為活性結構MLN2238發揮藥理活性。
MLN9708當前的專利WO2009154737合成路線如下：
專利合成路線由2，5-二氯苯甲酰氯為起始原料，經4步反應得到最終產物MLN9708。該合成路線具有如下幾個缺點：
1)使用2，5-二氯苯甲酰氯作為起始原料，價格較貴，不易操作；
2)使用的關鍵原料氨基硼酸為蒎烷二醇保護的氨基硼酸，該原料合成方法如下：
合成過程復雜，成本高昂。
3)采用異丁基硼酸脫除蒎烷二醇保護基，首先異丁基硼酸價格較貴，而且該反應需要使用多當量的異丁基硼酸，導致成本更高。而且由于這種置換脫除法反應不完全，導致下一步原料中含有雜質，使終產物的純化比較困難。
技術實現要素：
根據專利CN103030656A報道，α-氨基硼酸頻那醇酯可由下列簡便方法制備。
專利WO2012177835報道了游離硼酸MLN2238的純化方法：
本發明將專利CN103030656A和WO2012177835拼合，并經過改進，研發出了一種合成MLN9708的新方法，避免了傳統合成方法中的諸多弊端。本方法包括如下步驟：
a)以2，5-二氯苯甲酸為起始原料，與甘氨酸甲酯通過縮合、皂化得到式(II)；
縮合反應采用的縮合劑為DCC和HOBT、TBTU、EDC和HOBT、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或 PyBOP，反應溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯、苯、乙腈、二氧六環或N，N-二甲基甲酰胺，或者以上的混合溶劑如二氯甲烷和N，N-二甲基甲酰胺，所用的有機堿為NMM、TEA或DIPEA，反應溫度為-20℃至80℃。其中優選縮合劑為DCC和HOBT，溶劑為二氯甲烷，有機堿為DIPEA，反應溫度為20-30℃。
皂化反應采用LiOH、NaOH或KOH作為堿，反應溶劑為甲醇、四氫呋喃、丙酮或乙醇與水的混合溶劑。優選LiOH作為堿，溶劑為四氫呋喃與水。
b)式(II)與頻哪醇保護的氨基硼酸縮合得到式(III)；
縮合反應采用EDC和HOBT、TBTU、DCC和HOBT、HBTU、HCTU、TCTU、HATU或PyBOP為脫水縮合劑，采用NMM、TEA或DIPEA作為堿，反應溶劑為二氯甲烷、四氫呋喃、甲苯、苯、乙腈、二氧六環或N，N-二甲基甲酰胺，或者以上混合形成的溶劑，在-20-50℃溫度下進行。優選縮合劑為DCC和HOBT，溶劑為二氯甲烷，有機堿為DIPEA，反應溫度為-10-30℃。
c)式(III)與二乙醇胺絡合生成硼酸絡合物，經重結晶得到式(IV)；
反應溶劑包括乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、四氫呋喃、乙腈、乙醇、異丙醇、丙酮，也可采用上述溶劑的混合溶劑。優選溶劑為乙酸乙酯或者乙腈。
用于重結晶的溶劑包括乙酸乙酯、甲基叔丁基醚、四氫呋喃、乙腈、乙醇、異丙醇、甲醇、丙酮、水，也可采用上述溶劑的混合溶劑。重結晶降溫至-20℃-20℃使產物充分析出。優選重結晶溶劑為乙醇，降溫至2-6℃。
d)式(IV)經水解后即得到式(V)；
所用溶劑為乙酸乙酯/水，采用鹽酸使硼酸絡合物式(IV)脫除保護基生成式(V)。
e)式(V)與檸檬酸絡合得到式(I)化合物；
反應的溶劑包括乙酸乙酯、乙腈、四氫呋喃、二氯甲烷、丙酮或乙醇，反應溫度為10℃ -100℃。優選反應溶劑為乙酸乙酯，反應溫度為60-80℃。
本發明提供的方法合成蛋白酶體抑制劑MLN9708，采用2，5-二氯苯甲酸作為起始原料，接肽過程均采用工業上常用的DCC作為縮合劑，關鍵原料氨基硼酸采用合成簡便成本低廉的頻哪醇保護的氨基硼酸，將文獻中純化MLN2238的方法直接應用至合成過程當中，避免了異丁基硼酸的使用。簡化了操作、降低了成本，提高了產品質量。
縮略語
EDC：1-(3-二甲氨基丙基)-3-乙基碳二亞胺
HOBT：1-羥基苯并三唑
TBTU：0-苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸鹽
DCC：二環己基碳二亞胺
HBTU：苯并三氮唑-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸鹽
HCTU：6-氯苯并三氮唑-1，1，3，3-四甲基脲六氟磷酸酯
TCTU：0-(6-氯苯并三氮唑-1-基)-N，N，N’，N’-四甲基脲四氟硼酸鹽
HATU：2-(7-偶氮苯并三氮唑)-N，N，N’，N’-四甲基脲六氟磷酸酯
PyBOP：六氟磷酸苯并三唑-1-基-氧基三吡咯烷基
NMM：N-甲基嗎啉
NEA：三乙胺
DIPEA：N，N-二異丙基乙胺
具體實施方式
N-(2，5-二氯苯甲酰)甘氨酸(II)
向30ml二氯甲烷中依次加入2，5-二氯苯甲酸(1.91g，10mmol)，HOBT(1.49g，11mmol)，DCC(2.47g，12mmol)。反應液攪拌30min后，加入甘氨酸甲酯鹽酸鹽(1.26g，10mmol)及DIEA(2.09ml，12mmol)。室溫反應12h，減壓蒸除溶劑，加入50ml乙酸乙酯，抽濾除去不溶物N，N’-二環己基脲(DCU)；濾液依次用5％NaHCO3溶液、飽和食鹽水洗；乙酸乙酯層無水硫酸鈉干燥，過濾、減壓蒸除溶劑得粗品N-(2，5-二氯苯甲酰)甘氨酸甲酯；不經純化直接投下一步。
將粗品N-(2，5-二氯苯甲酰)甘氨酸甲酯溶于THF(10ml)中，濾除少量不溶物DCU；依次向濾液中加入10ml水、、3N氫氧化鋰水溶液(5ml)；室溫攪拌反應30min，TLC檢測(GF254板，乙酸乙酯∶石油醚＝1∶1)已反應完全。減壓蒸除THF，濾除不溶物；濾液用鹽酸調pH值至2左右，產生大量白色固體，抽濾，所得固體經水重結晶得白色晶體；收率50-80％。Mp.172-174℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.70(s，1H)，8.89(t，J＝6.0Hz，1H)，7.55(d，J＝1.5Hz，2H)，7.48(t，J＝1.5Hz，1H)，3.93(d，J＝5.9Hz，2H).13C NMR(101MHz，DMSO)δ170.76，165.29，137.63，131.60，131.59，130.83，128.97，128.71，41.00.
(R)-[N-(2，5-二氯苯甲酰)甘氨酰]亮氨酸硼酸頻哪醇酯(III)
向30ml二氯甲烷中依次加入II(0.99g，4mmol)、HOBT(0.59g，4.4mmol)及DCC(0，99g，4.8mmol)；攪拌反應40min后加入(R)-3-甲基-1-頻哪醇二酯硼基-1-丁基胺鹽酸鹽(1.0g，4mmol)及DIEA(0.84ml，4.8mmol)，室溫反應過夜。減壓蒸除二氯甲烷，加入50ml乙酸乙酯，抽濾除去DCU，濾液依次用5％NaHCO3溶液、飽和食鹽水洗，有機層無水硫酸鈉干燥。過濾，減壓蒸除溶劑得黃色泡沫狀固體，直接用于下一步。
(R)-[N-(2，5-二氯苯甲酰)甘氨酰]亮氨酸硼酸二乙醇胺酯(IV)
將上步得到的III溶于20ml乙酸乙酯中，濾除少量不溶物DCU，加入二乙醇胺(0.43ml，4.4mmol)，室溫反應12h，產生大量白色固體。抽濾，所得粗品經乙醇重結晶得白色固體，收率40-70％。Mp.217-219℃。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.86(t，J＝5.9Hz，1H)，7.54(d，J＝8.9Hz，3H)，7.02(d，J＝8.4Hz，1H)，6.62(d，J＝7.6Hz，1H)，3.82(qd，J＝16.2，6.0Hz，2H)，3.74-3.53(m，4H)，3.16(dq，J＝14.0，7.2Hz，1H)，3.00(ddt，J＝16.7，11.6，5.9Hz，2H)，2.82-2.66(m，2H)，1.61(dtd，J＝11.0，7.0，4.4Hz，1H)，1.27(dddd，J＝52.6，13.7，10.5，3.9Hz，2H)，0.82(dd，J＝10.9，6.6Hz，6H).13C NMR(101MHz，DMSO)δ167.77，165.26，137.81，131.63，131.50，130.75，128.87，128.68，62.51，62.45，50.94，50.50，42.86，40.25，24.55，23.97，21.67.
(R)-[N-(2，5-二氯苯甲酰)甘氨酰]亮氨酸硼酸(V)
將IV(0.88g，2.05mmol)加入到由20ml乙酸乙酯和20ml水組成的混合液中，滴加4N的鹽酸1ml，室溫反應30min后，分液除去水層，乙酸乙酯層用飽和食鹽水洗3次， 無水硫酸鈉干燥。過濾，減壓蒸除溶劑得白色泡沫狀固體V，收率90-98％。1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ8.94(t，J＝5.9Hz，1H)，8.69(t，J＝3.4Hz，1H)，7.66(t，J＝1.5Hz，1H)，7.55(d，J＝1.5Hz，2H)，4.04(d，J＝6.0Hz，2H)，2.67(td，J＝7.4，3.7Hz，1H)，1.63(dq，J＝13.3，6.6Hz，1H)，1.32(ddt，J＝45.4，12.8，6.9Hz，2H)，0.84(dd，J＝6.6，2.4Hz，6H).13C NMR(101MHz，DMSO)δ171.30，165.29，137.30，131.52，131.43，130.82，128.98，128.91，43.06，40.27，40.06，25.16，22.89，22.84.
(R)-[N-(2，5-二氯苯甲酰)甘氨酰]亮氨酸硼酸檸檬酸酯(I)
將無水檸檬酸(398mg，2.07mmol)加入到4ml乙酸乙酯中，加熱至60℃。將V(680mg，1.88mmol)溶于3ml乙酸乙酯中，滴加到檸檬酸的乙酸乙酯溶液中，反應30min后，冷卻至室溫，抽濾，乙酸乙酯洗滌，干燥得白色固體產物I，收率85-95％。Mp.208-210℃(Lit.191.8±5℃或206.5±5℃，WO2009154737).MS(ES-)found：515.24.1H NMR(400MHz，DMSO-d6)δ12.12(s，2H)，10.70(s，1H)，9.12(t，J＝5.8Hz，1H)，7.67(d，J＝1.5Hz，1H)，7.56(d，J＝1.5Hz，2H)，4.28(t，J＝5.2Hz，2H)，3.00-2.55(m，4H)，2.55-2.52(m，1H)，1.69(s，1H)，1.27(d，J＝27.8Hz，2H)，0.87(d，J＝6.5Hz，6H).13C NMR(101MHz，DMSO)δ177.84，175.98，170.93，170.53，165.61，136.93，131.65，131.56，131.08，129.07，128.99，76.17，43.02，40.89，38.18，24.90，23.66，21.36。