針對降鈣素基因相關肽的拮抗劑抗體及其使用方法與流程

針對降鈣素基因相關肽的拮抗劑抗體及其使用方法本申請是中國發明專利申請200680042443.0(PCT/IB2006/003181)的分案申請，母案申請日為2006年11月2日，題目為“針對降鈣素基因相關肽的拮抗劑抗體及其使用方法”。本申請要求于2005年11月14日提交的美國專利申請No.60/736，623的優先權，其通過引用并入本文。技術領域本發明涉及抗CGRP拮抗劑抗體用于預防、改善或治療血管運動癥狀如CGRP相關頭痛(例如偏頭痛)和熱潮紅的用途。

背景技術：
CGRP(降鈣素基因相關肽)是37個氨基酸的神經肽，其屬于肽家族，包括降鈣素、腎上腺髓質素和淀粉不溶素。在人中，存在兩種形式的CGRP(α-CGRP和β-CGRP)，它們具有類似的活性。它們有三個氨基酸不同，并顯示不同的分布。至少兩種CGRP受體亞型也可解釋有差異的活性。CGRP是中樞神經系統中的神經遞質，并已顯示是外周中有效的血管擴張藥，含CGRP的神經元在外周與血管緊密結合。CGRP介導的血管擴張也與神經原性炎癥相關(其作為導致原生質外滲和微脈管系統血管舒張的事件級聯的一部分)，其存在于偏頭痛中。CGRP因其與血管運動癥狀的可能聯系而被注意(Wyonetal.Scand.J.Urol.Nephrol.35：92-96(2001)；Wyonetal.Menopause7(1)：25-30(2000))。血管運動癥狀(VMS)如熱潮紅和寢汗是與絕經相關的最常見癥狀，發生在所有在天然或手術誘導后絕經女性的60％到80％中。熱潮紅很可能是中樞神經系統(CNS)對減退的性類固醇的適應性應答(FreedmanAm.J.HumanBiol.13：453-464(2001))。迄今為止，對于潮紅的最有效的療法是基于激素的治療，所述激素包括雌激素和/或一些黃體酮。激素治療能夠有效緩和潮紅，但是不適合所有女性。觀察到的心理和情緒癥狀(如神經質、疲勞、易激惹、失眠、抑郁、失憶、頭痛、焦慮、神經質或不能集中)被認為是由熱潮紅和寢汗后的睡眠缺乏引起的(Krameretal.，In：Murphyetal.，3.sup.rdInt′lSymposiumonRecentAdvancesinUrologicalCancerDiagnosisandTreatment-Proceedings，Paris，France：SCI：3-7(1992))。男性類固醇激素(雄激素)減少后也經歷熱潮紅。在年齡相關的雄激素減退的情況下(Katovich，etal.，ProceedingsoftheSocietyforExperimentalBiology&Medicine，1990，193(2)：129-35)以及與前列腺癌治療相關的激素喪失的極端情況下(Berendsen，etal.，EuropeanJournalofPharmacology，2001，419(1)：47-54)是這樣的。三分之一的這類患者會經歷足夠嚴重到引起顯著不適和不便的長期和頻繁的癥狀。CGRP是與其它血管運動癥狀的病理學相關的有效的血管擴張劑，所述癥狀例如所有形式的血管性頭痛，包括偏頭痛(有先兆或無先兆)和叢集性頭痛。Durham，N.Engl.J.Med.350：1073-1075，2004。患者偏頭痛期間頸外靜脈中的CGRP水平升高。Goadsbyetal.，Ann.Neurol.28：183-7，1990。靜脈施用人α-CGRP在患有無先兆偏頭痛的患者中誘導頭痛和偏頭痛，這提示CGRP在偏頭痛中具有原因作用。Lassenetal.，Cephalalgia22：54-61，2002.CGRP與偏頭痛的可能相關性是開發和測試大量下述化合物的基礎，所述化合物抑制CGRP的釋放(例如叔馬曲坦)、拮抗CGRP受體(例如二肽衍生物BIBN4096BS(BoerhringerIngelheim)；CGRP(8-37))或與一種或多種受體相關蛋白質相互作用，所述受體相關蛋白質例如受體活性膜蛋白(RAMP)或受體組件蛋白質(RCP)均影響CGRP對其受體的結合。Brain，S.etal.，TrendsinPharmacologicalSciences23：51-53，2002。A-2腎上腺素受體亞型和腺苷A1受體也調控(抑制)CGRP釋放和三叉神經活化(Goadsbyetal.，Brain125：1392-401，2002)。針對GR79236(metrafadil)腺苷A1的受體(其已經顯示在人中抑制神經原性血管舒張和三叉神經傷害感受)也可以具有抗偏頭痛的活性(Arulmanietal.，Cephalalgia25：1082-1090，2005；Giffinetal.，Cephalalgia23：287-292，2003)。使得該理論混淆的是下述觀察：用僅抑制神經原性炎癥(例如速激肽NK1受體拮抗劑)或三叉神經活化(例如5HT1D受體激動劑)的化合物治療顯示作為偏頭痛的急性治療相對無效，引起一些研究人員質疑是否抑制CGRP釋放是有效的抗偏頭痛治療的主要作用機制。Arulmanietal.，Eur.J.Pharmacol.500：315-330，2004。偏頭痛是復雜的、常見的神經原性病癥，其特征在于嚴重的、偶發的頭痛和相關的特征，所述相關特征可包括惡心，嘔吐，對光、聲音或運動敏感。在一些患者中，頭痛之前有前兆或伴隨前兆。頭痛可以是嚴重的，并在某些患者中也可以是單側的。偏頭痛發作對日常生活是破壞性的。在美國和西歐，偏頭痛患者的總體患病率在一般人群中占11％(6％男性；15-18％女性)。另外，個體中發作的中位頻率是1.5次/月。盡管能夠獲得大量治療來緩和或減少癥狀，但是對每個月具有多于3-4次偏頭痛發作的患者來說預防療法是推薦的。Goadsbyetal.NewEngl.J.Med.346(4)：257-275，2002。用于治療偏頭痛的藥理學干涉的變化和患者間應答的多樣性是該病癥不同特性的證明。因此，顯示5-羥色胺能以及腎上腺素能、去甲腎上腺素能、和多巴胺能活性的這類相對非選擇性的藥物，如麥角生物堿(例如麥角胺、二氫麥角胺、美西麥角)，已經用于治療偏頭痛超過八十年。其它治療包括阿片制劑(例如羥考酮)和β-腎上腺素能拮抗劑(例如普萘洛爾)。一些患者(通常是具有更溫和癥狀的患者)能夠用非處方藥物控制它們的癥狀，所述非處方藥例如一種或多種非甾體抗炎劑(NSAIDs)，如阿司匹林、撲熱息痛和咖啡因(例如Migraine)的組合。更近期地，已經用托吡酯治療一些偏頭痛患者，托吡酯是封閉電壓依賴性鈉通道和某些谷氨酸受體(AMPA紅藻氨酸鹽)、增強GABA-A受體活性和封閉碳酸酐酶的抗驚厥劑。相對而言更近期地，5-羥色胺5HT-1B/1D和/或5HT-1a受體激動劑(如叔馬曲坦)在一些患者中的成功已經引起研究人員提出了該病癥的5-羥色胺能病因學。不幸的是，盡管一些患者對該治療反映良好，但是其它的患者對其作用相對有抵抗力。假定氨基酸能腦干細胞核中的離子通道功能障礙解釋了該疾病，然而偏頭痛的精確病理生理學仍未被充分理解。一種形式的偏頭痛(家族性偏癱偏頭痛)已經顯示與電壓門控P/Q-型鈣通道的α1亞基中的錯義突變相關，人們認為很可能也在其它患者群體中發現其它的離子通道突變。盡管血管擴張與偏頭痛相關并加重疼痛癥狀，但是這類神經血管事件目前被認為是該病癥的結果而不是起因。總之，調節感覺輸入的腦干途徑的功能障礙被認為是偏頭痛的統一特征。Goadsby，P.J.etal.，NewEngl.J.Med.346(4)：257-275，2002。在本申請中引用了多種出版物(包括專利和專利申請)。這些出版物的公開內容通過引用整體并入本文。

技術實現要素：
本文公開的發明涉及抗CGRP拮抗劑抗體和施用抗CGRP拮抗劑抗體用于治療或預防血管運動癥狀的方法，所述血管運動癥狀例如頭痛，如有先兆或無先兆的偏頭痛、偏癱性偏頭痛、叢集性頭痛、偏頭痛神經痛、久頭痛、緊張性頭痛和由其它醫療條件(如由腫瘤引起的感染或顱內壓升高)引起的頭痛。其它血管運動癥狀包括熱潮紅。一方面，本發明提供了用于在個體中治療或預防至少一種血管運動癥狀的方法，所述方法包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。一方面，本發明提供了用于在個體中治療或預防頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)的方法，所述方法包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。另一方面，本發明提供了用于在個體中改善、控制、減少頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)發作或延遲頭痛發生或發展的方法，所述方法包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。在另一實施方案中，本發明提供了用于在個體中改善、控制、減少頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)發作或延遲頭痛發生或發展的方法，所述方法包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體與至少一種適用于治療頭痛的其它試劑的組合。這類其它試劑包括5-HT1-樣激動劑(作用于其它5-HT1位點上的激動劑)和非甾體類抗炎藥(NSAIDs)。可與抗CGRP抗體組合使用的5-HT1激動劑的例子包括已知為曲坦類(triptans)的一類化合物，如叔馬曲坦、佐米曲坦、那拉曲坦、利扎曲坦、伊立曲坦、阿莫曲坦和夫羅曲坦。麥角生物堿和相關化合物也顯示具有5-HT激動劑活性并被用于治療頭痛如偏頭痛。這些化合物包括麥角胺、馬來酸麥角新堿和甲磺酰麥角堿(例如二氫麥角柯寧堿、雙氫麥角汀、雙氫麥角隱亭和雙氫麥角胺甲磺酸鹽(DHE45))。可以與抗CGRP抗體組合使用的NSAIDs的例子包括萘普生、氟比洛芬、酮洛芬、奧沙普秦、依托度酸、吲哚美辛、酮咯酸、萘丁美酮、邁菲那密酸(mefanamicacid)和吡羅昔康。其它的NSAIDs包括環氧化酶2(COX-2)抑制劑。該組成員包括：塞來考昔；羅非考昔；美洛昔康；JTE-522；L-745，337；NS398及其可藥用鹽。另一方面，本發明提供了用于在個體中改善、控制、減少熱潮紅的發作或延遲其發生或發展的方法，所述方法包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。另一方面，本發明提供了用于在個體中改善、控制、減少熱潮紅的發作或延遲其發生或發展的方法，所述包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體與至少一種適用于治療熱潮紅的試劑的組合。這類其它試劑包括，但不限于基于激素(包括雌激素和/或黃體酮)的治療。在一個實施方案中，在上述任何方法中使用的抗CGRP拮抗劑抗體是本文所述的任何抗體。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體能識別人CGRP。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體與人α-CGRP和β-CGRP均能結合。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體能與人和大鼠CGRP結合。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結合具有CGRP的氨基酸25-37的C末端片段。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結合CGRP的氨基酸25-37中的C末端表位。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是單克隆抗體。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是人源化的。在一些實施方案中，抗體是人的。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是抗體G1(如本文所述)。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體包含表6所示抗體G1或G1變體的一個或多個CDR(例如一個、兩個、三個、四個、五個或在一些實施方案中包含所有六個CDR)。還在其它實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體包含圖5所示重鏈可變區的氨基酸序列(SEQIDNO：1)和圖5所示輕鏈可變區的氨基酸序列(SEQIDNO：2)。在一些實施方案中，抗體包含下述經修飾的恒定區，所述恒定區例如是免疫惰性的(包括是部分免疫惰性的，其例如不引發補體介導的裂解、不刺激抗體依賴性細胞介導的細胞毒性(ADCC)、活化小膠質細胞)，或具有降低的一種或多種這些活性。在一些實施方案中，恒定區被修飾，這如Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624；PCT申請No.PCT/GB99/01441；和/或UK專利申請No.9809951.8中所述。在其它一些實施方案中，抗體包含人重鏈IgG2恒定區，所述恒定區包含以下突變：A330P331到S330S331(參考野生型IgG2序列的氨基酸排序)Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624。在一些實施方案中，抗體的重鏈恒定區是具有任何以下突變的人重鏈IgG1：1)A327A330P331到G327S330S331；2)E233L234L235G236到P233V234A235，G236被刪除；3)E233L234L235到P233V234A235；4)E233L234L235G236A327A330P331到P233V234A235G327S330S331，G236被刪除；5)E233L234L235A327A330P331到P233V234A235G327S330S331和6)N297到A297或除N以外的任何其它氨基酸。在一些實施方案中，抗體的重鏈恒定區為帶有任何以下突變的人重鏈IgG4：E233F234L235G236到P233V234A235，G236被刪除；E233F234L235到P233V234A235；和S228L235到P228E235。還在其它一些實施方案中，恒定區N連接的糖基化不被糖基化(aglycosylated)。在一些實施方案中，通過突變寡糖附著殘基(如Asn297)和/或側翼殘基(其為恒定區中N-糖基化識別序列的一部分)，針對N連接的糖基化而言恒定區不被糖基化。在一些實施方案中，針對N連接的糖基化而言恒定區不被糖基化。可通過酶或通過在糖基化缺陷宿主細胞中表達使得針對N連接的糖基化而言恒定區不被糖基化。抗CGRP拮抗劑抗體對CGRP(例如在合適溫度如25或37℃下通過表面等離振子共振測量的人α-CGRP)的親合力(KD)可以是約0.02到約200nM。在一些實施方案中，親合力為下述任何：約200nM、約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM、約60pM、約50pM、約20pM、約15pM、約10pM、約5pM或約2pM。在一些實施方案中，親合力少于下述任何：約250nM、約200nM、約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM或約50pM。抗CGRP拮抗劑抗體可以在頭痛之前、期間和/或之后被施用。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體在頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)發作之前被施用。抗CGRP拮抗劑抗體的施用可以通過本領域已知的任何手段：口服、靜脈內、皮下、動脈內、肌內、賁門內、椎管內、胸內、腹膜內、心室內、舌下、經皮和/或經過吸入。施用可以是全身的(例如靜脈內)或局部的。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體可以與另一試劑(如用于治療頭痛的另一試劑)結合施用。另一方面，本發明提供了抗CGRP拮抗劑抗體用于制造本文所述任何方法中使用(例如用于治療或預防頭痛)的藥物的用途。另一方面，本發明提供了用于預防或治療頭痛(例如偏頭痛和叢集性頭痛)的藥物組合物，其包含有效量的抗CGRP拮抗劑抗體，所述抗體與一種或多種可藥用賦形劑組合。另一方面，本發明提供了用于本文所述任何方法中的試劑盒。在一些實施方案中，所述試劑盒包含容器、包含本文所述抗CGRP拮抗劑抗體的組合物(其與可藥用媒介組合)和在本文所述任何方法中使用該組合物的說明書。本發明還提供了抗CGRP拮抗劑抗體和來自表6所示的抗體G1或其變體的多肽。因此，一方面，本發明是由ATCC編號Nos.PTA-6866和PTA-6867的表達載體生產的抗體G1(可交換地稱作”G1”)。例如，在一個實施方案中是包含重鏈的抗體，所述重鏈由ATCC編號為No.PTA-6867的表達載體生產。在再一個實施方案中為包含輕鏈的抗體，所述抗體由ATCC編號為No.PTA-6866的表達載體生產。G1的重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列在圖5中顯示。抗體G1的互補性決定區(CDR)部分(包括Chothia和KabatCDRs)也顯示在圖5中。應理解：涉及G1任何局部或整體區域包括由具有ATCC編號Nos.PTA-6866和PTA-6867的表達載體生產的序列和/或圖5中所示的序列。本發明還提供了具有表6所示氨基酸序列的G1抗體變體。一方面，本發明是包含VH結構域的抗體，所述VH在氨基酸序列上與SEQIDNO：1至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同。另一方面，本發明是包含VL的抗體，所述VL在氨基酸序列上與SEQIDNO：2至少85％、至少86％、至少87％、至少88％、至少89％、至少90％、至少91％、至少92％、至少93％、至少94％、至少95％、至少96％、至少97％、至少98％、至少99％或100％相同。另一方面，本發明是包含表6所示抗體G1或其變體的片段或區域的抗體。在一個實施方案中，片段為抗體G1的輕鏈。在另一實施方案中，片段為抗體G1的重鏈。還在另一實施方案中，片段含有來自抗體G1輕鏈和/或重鏈的一個或多個可變區。還在另一實施方案中，片段含有來自圖5所示輕鏈和/或重鏈的一個或多個可變區。還在另一實施方案中，片段含有來自抗體G1輕鏈和/或重鏈的一個或多個CDR。另一方面，本發明提供了多肽(其可以是或不是抗體)，所述多肽含有SEQIDNO：5中公開的VHCDR3，或與SEQIDNO：5因1、2、3、4或5個氨基酸取代而不同的序列。在特別的實施方案中，這類氨基酸取代是保守的氨基酸取代。另一方面，本發明提供了多肽(其可以是或不是抗體)，所述多肽含有SEQIDNO：8中公開的VLCDR3，或與SEQIDNO：8因1、2、3、4或5個氨基酸取代而不同的序列。在特別的實施方案中，這類氨基酸取代是保守的氨基酸取代。另一方面，本發明提供了多肽(其可以是或不是抗體)，所述多肽包含以下任一種或多種：a)來自表6所示抗體G1或其變體的一個或多個(一個、兩個、三個、四個、五個或六個)CDR；b)來自表6所示抗體G1重鏈的CDRH3的CDR；和/或c)來自抗體G1輕鏈的CDRL3的CDR。在一些實施方案中，CDR為圖5所示的CDR。在一些實施方案中，來自表6所示抗體G1或其變體的一個或多個CDR與G1或其變體的至少一個、至少兩個、至少三個、至少四個、至少五個或至少六個CDR至少約85％、至少約86％、至少約87％、至少約88％、至少約89％、至少約90％、至少約91％、至少約92％、至少約93％、至少約94％、至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％或至少約99％相同。在一些實施方案中，CDR為KabatCDR。在其它實施方案中，CDR為ChothiaCDR。在其它實施方案中，CDR為Kabat和ChothiaCDR的組合(也稱作“組合的CDR”或“擴展的CDR”)。換言之，對于含有多于一個CDR的任何給定的實施方案而言，CDR可以是Kabat、Chothia和/或組合的中任一。在一些實施方案中，多肽(例如抗體)包含氨基酸序列KASKXaaVXaaTYVS，其中位置5上的Xaa為R、W、G、L或N；且其中位置7的Xaa為T、A、D、G、R、S、W或V。在一些實施方案中，氨基酸序列KASKXaaVXaaTYVS是抗體輕鏈的CDR1。在一些實施方案中，多肽(例如抗體)包含氨基酸序列XaaXaaSNRYXaa，其中位置1上的Xaa為G或A；其中位置2的Xaa為A或H；且其中位置7的Xaa為L、T、I或S。在一些實施方案中，氨基酸序列XaaXaaSNRYXaa是抗體輕鏈的CDR2。在一些實施方案中，多肽(例如抗體)包含氨基酸序列EIRSXaaSDXaaXaaATXaaYAXaaAVKG，其中位置5的Xaa為E、R、K、Q或N；其中位置8的Xaa為A、G、N、E、H、S、L、R、C、F、Y、V、D或P；其中位置9的Xaa為S、G、T、Y、C、E、L、A、P、I、N、R、V、D或M；其中位置12的Xaa為H或F；其中位置15的Xaa為E或D。在一些實施方案中，氨基酸序列EIRSXaaSDXaaXaaATXaaYAXaaAVKG是抗體重鏈的CDR2。在一些實施方案中，多肽(例如抗體)包含SEQIDNO：1的氨基酸序列，其中SEQIDNO：1位置99的氨基酸殘基為L或被A、N、S、T、V或R取代；且其中SEQIDNO：1位置100的氨基酸殘基為A或被L、R、S、V、Y、C、G、T、K或P取代。在一些實施方案中，本發明的抗體是人抗體。在其它實施方案中，本發明的抗體是人源化的抗體。在一些實施方案中，抗體是單克隆的。在一些實施方案中，抗體(或多肽)被分離。在一些實施方案中，抗體(或多肽)是基本純的。抗體的重鏈恒定區可以來自任何類型的恒定區(例如IgG、IgM、IgD、IgA和IgE)和任何同種型(如IgG1、IgG2、IgG3和IgG4)。在一些實施方案中，抗體包含本文所述的經修飾的恒定區。另一方面，本發明提供了一種多核苷酸(其可以是被分離的)，所述多核苷酸包含編碼表6所示抗體G1或其變體的片段或區域的多核苷酸。在一個實施方案中，片段為抗體G1的輕鏈。在其它實施方案中，片段為抗體G1的重鏈。還在另一實施方案中，片段含有來自抗體G1輕鏈和/或重鏈的一個或多個可變區。還在另一實施方案中，片段含有來自抗體G1輕鏈和/或重鏈的一個或多個(即一個、兩個、三個、四個、五個或六個)互補性決定區(CDRs)。另一方面，本發明是一種多核苷酸(其可以是被分離的)，所述多核苷酸含有編碼表6所示抗體G1或其變體的多核苷酸。在一些實施方案中，多核苷酸包含SEQIDNO：9和SEQIDNO：10所示的多核苷酸之一或二者。另一方面，本發明提供了編碼本文所述任何抗體(包括抗體片段)或多肽的多核苷酸。另一方面，本發明提供了包含本文公開的任何多核苷酸的載體(包括表達載體和克隆載體)和宿主細胞。在一些實施方案中，載體為ATCCNo.PTA-6867的pDb.CGRP.hFcGI。在其它實施方案中，載體為ATCCNo.PTA-6866的pEb.CGRP.hKGI。另一方面，本發明是包含多核苷酸的宿主細胞，所述多核苷酸編碼本文公開的任何抗體。另一方面，本發明是被本文所述任何抗體或多肽結合的CGRP復合物。在一些實施方案中，抗體是表6所示的抗體G1或其變體。另一方面，本發明是藥物組合物，其包含有效量的本文所述任何多肽(包括抗體，如包含一個或多個抗體G1的CDR的抗體)或多核苷酸，和可藥用的賦形劑。另一方面，本發明是產生抗體G1的方法，包括在允許生產抗體G1的條件下培養宿主細胞或其后代，其中所述宿主細胞包含編碼抗體G1的表達載體；和在一些實施方案中純化抗體G1。在一些實施方案中，表達載體包含SEQIDNO：9和SEQIDNO：10所示多核苷酸序列之一或二者。另一方面，本發明提供了通過在合適的細胞中表達一種或多種多核苷酸來生產本文所述任何抗體或多肽(通常隨后回收和/或分離感興趣的抗體或多肽)的方法，所述多核苷酸編碼抗體(其可以被單獨地表達為單個輕鏈或重鏈，或從一個載體表達輕鏈和重鏈二者)或多肽。抗CGRP拮抗劑抗體和多肽和編碼本發明抗體和多肽的多核苷酸可以用于治療、預防、改善、控制或減少CGRP異常功能相關疾病如頭痛(例如偏頭痛、叢集性頭痛、久頭痛和緊張性頭痛)和其它病癥(其可通過拮抗CGRP活性被治療或預防)的發作。另一方面，本發明提供了包含本文所述任一種或多種組合物的試劑盒和組合物。這些試劑盒(其通常被適當地包裝并與合適的說明書一起提供)適用于本文所述的任何方法。附圖概述圖1是顯示12種鼠抗體對不同丙氨酸取代的人α-CGRP片段的親合力的表格。在25℃，下使用Biacore，通過將Fab流過芯片上的CGRP測量親合力。框內數值代表丙氨酸突變體相對于親本片段25-37(斜體)的親合力喪失，來自19-37親本的K35A除外。″a″表示19-37和25-37片段的親和力是在不同感受芯片上兩個獨立測量的平均值±標準偏差。″b″表示由于二相解離速率(offrate)，這些相互作用與單一雙分子相互作用模型有所偏差，從而使用構象改變模型測定它們的親和力。灰標度鍵：白色(1.0)指示親本親和力；淺灰(小于0.5)指示比親本更高的親和力；深灰(多于2)指示比親本更低的親和力；黑色指示未檢測到結合。圖2A和2B顯示了施用CGRP8-37(400nmol/kg)、抗體4901(25mg/kg)和抗體7D11(25mg/kg)對皮膚血流量的作用，這作為電脈沖刺激30秒后的血細胞通量來測量。在電脈沖刺激之前3-5分鐘，靜脈內(iv)施用CGRP8-37。電脈沖刺激前72小時，腹膜內(IP)施用抗體。圖中每個點表示指定條件下處理的一只大鼠的AUC。圖中每條線表示在指定條件下處理的大鼠的平均AUC。AUC(曲線下面積)等于Δ通量xΔ時間。″Δ通量″表示電脈沖刺激后通量單位的變化；″Δ時間″表示血細胞通量水平恢復為電脈沖刺激之前水平所需時間。圖3顯示了施用不同劑量的抗體4901(25mg/kg，5mg/kg，2.5mg/kg或1mg/kg)對皮膚血流量的作用，這作為電脈沖刺激30秒后的血細胞通量來測量。電脈沖刺激之前24小時靜脈內(IV)施用抗體。圖中每點表示在指定條件下處理的一只大鼠的AUC。圖中線條表示在指定條件下處理的大鼠的平均AUC。圖4A和4B顯示了施用抗體4901(1mg/kgor10mg/kg，Lv.)、抗體7E9(10mg/kg，i.v.)和抗體8B6(10mg/kg，i.v.)對皮膚血流的作用，這作為電脈沖刺激30秒后的血細胞通量來測量。抗體被靜脈內(i.v.)施用，然后在抗體施用后30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘進行電脈沖刺激。Y軸表示與未施用抗體時(時間0)的AUC水平相比的AUC百分比。X軸表示施用抗體和電脈沖刺激之間的時間(分鐘)。與時間0相比，″*″表示P＜0.05，″**″表示P＜0.01。使用單向ANOVA用Dunnett′s多重比較檢驗分析數據。圖5顯示了抗體G1的重鏈可變區(SEQIDNO：1)和輕鏈可變區(SEQIDNO：2)的氨基酸序列。KabatCDR為黑體，ChothiaCDR加下劃線。重鏈和輕鏈可變區的氨基酸殘基被連續編號。圖6顯示了使用Biacore通過肽競爭對抗體G1的表位作圖。N生物素化的人α-CGRP被捕獲在SA感受芯片上。沒有競爭肽時或與10μM競爭肽孵育1小時后，將G1Fab(50nM)倒在芯片上。測量芯片上G1Fab對人α-CGRP的結合。Y軸表示與不存在競爭肽時相比，競爭肽的存在封閉的結合百分比。圖7顯示了使用抗體G1(1mg/kg或10mg/kg，靜脈內)或運載體(PBS，0.01％Tween20)對皮膚血流的作用，這作為電脈沖刺激30秒后的血細胞通量來測量。抗體G1或運載體被靜脈內(i.v.)施用，然后在抗體施用后30分鐘、60分鐘、90分鐘和120分鐘進行神經電脈沖刺激。Y軸表示與未施用抗體或運載體時(時間0)的AUC水平(定義為100％)相比的AUC百分比。X軸表示施用抗體和電脈沖刺激之間的時間(分鐘)。與運載體相比，″*″表示P＜0.05，″**″表示P＜0.01。施用雙向ANOVA和Bonferroni后期檢驗分析數據。圖8A顯示了施用抗體G1(1mg/kg，3mg/kg或10mg/kg，靜脈內)或運載體(PBS，0.01％Tween20)對皮膚血流的作用，這作為給藥后24小時電脈沖刺激30秒后的血細胞通量來測量。抗體G1或運載體在神經電脈沖刺激前24小時被靜脈內(i.v.)施用。Y軸表示曲線下的總面積(血細胞通量變化乘以刺激到通量恢復基線的時間差，AUC)。X軸表示抗體G1的不同劑量。與運載體相比，″*″表示P＜0.05，″**″表示P＜0.01。施用單向ANOVA和Dunn′s多重比較檢驗分析數據。圖8B顯示了施用抗體G1(0.3mg/kg，1mg/kg，3mg/kg或10mg/kg，靜脈內)或運載體(PBS，0.01％Tween20)對皮膚血流的作用，這作為給藥后7天電脈沖刺激30秒后的血細胞通量來測量。抗體G1或運載體在神經電脈沖刺激前7天被靜脈內(i.v.)施用。Y軸表示總AUC。X軸表示抗體G1的不同劑量。與運載體相比，″**″表示P＜0.01，″***″表示P＜0.001。施用單向ANOVA和Dunn′s多重比較檢驗分析數據。圖8C是對來自圖8A和8B的數據的曲線擬合分析。抗體G1或運載體在神經電脈沖刺激前24小時或7天靜脈(i.v.)施用。Y軸表示總AUC。X軸表示不同的G1劑量，以″mg/kg″為單位，用對數標度以測定EC5O。圖9顯示了電場刺激后抗體mu7E9(10mg/kg)、BIBN4096BS或運載體(PBS，0.01％Tween20)對腦膜中動脈直徑改變的作用。在建立對電刺激的基線應答后0分鐘的時間點靜脈(i.v.)施用抗體mu7E9、BIBN4096BS或運載體。Y軸表示電場刺激后腦膜中動脈直徑的改變。靜止直徑對應0％。X軸表示電脈沖刺激的時間(分鐘)。與運載體相比，″*″指示P＜0.05，″**″指示P＜0.01。使用單向ANOVA和Dunett′s多重比較檢驗分析數據。圖10顯示了電場刺激后不同劑量的抗體G1(1mg/kg，3mg/kg或10mg/kg，靜脈)或運載體(PBS，0.01％Tween20)對腦膜中動脈直徑改變的作用。在電場刺激前7天靜脈(i.v.)施用抗體G1或運載體。Y軸表示腦膜中動脈直徑的改變。靜止直徑對應0％。X軸表示刺激電壓。與運載體相比，″*″指示P＜0.05，″**″指示P＜0.01，″***″指示P＜0.001。使用雙向ANOVA和Bonferroniposttests分析數據。圖11A顯示了在嗎啡上癮的大鼠中皮下注射納洛酮(1mg/kg)之前24小時靜脈(i.v.)施用抗體mu4901(10mg/kg)或運載體(PBS，0.01％Tween20)對所述皮下注射誘導的體核溫度降低的作用。Y軸表示與基線的溫度差異。X軸表示從注射納洛酮的點開始測量的時間。圖11B顯示了在嗎啡上癮的大鼠中皮下注射納洛酮(1mg/kg)之前24小時靜脈(i.v.)施用抗體mu4901(10mg/kg)或運載體(PBS，0.01％Tween20)對所述皮下注射誘導的尾表溫度提高的作用。Y軸表示與基線的溫度差異。X軸表示從注射納洛酮的點開始測量的時間。發明詳述本文公開的本發明提供了通過對個體施用治療有效量的抗CGRP拮抗劑抗體，用于在個體中治療和/或預防血管運動癥狀如頭痛(例如偏頭痛、叢集性頭痛、久頭痛和緊張性頭痛)或熱潮紅的方法。本文公開的本發明還提供了來自表6所示G1或其變體的抗CGRP拮抗劑抗體和多肽。本發明還提供了這些抗體和多肽的制造和使用方法。一般技術除非另有說明，本發明的實踐將使用分子生物學(包括重組技術)、微生物學、細胞生物學、生物化學和免疫學的常規技術，其在本領域技術的范圍內。這類技術已在文獻中被充分解釋，所述文獻例如MolecularCloning：ALaboratoryManual，secondedition(Sambrooketa1.，1989)CoIdSpringHarborPress；OligonucleotideSynthesis(MJ.Gait，ed.，1984)；MethodsinMolecularBiology，HumanaPress；CellBiology：ALaboratoryNotebook(J.E.Cellis，ed.，1998)AcademicPress；AnimalCellCulture(R.I.Freshney，ed.，1987)；IntroductiontoCellandTissueCulture(J.P.MatherandP.E.Roberts，1998)PlenumPress；CellandTissueCulture：LaboratoryProcedures(A.Doyle，J.B.Griffiths，andD.G.Newell，eds.，1993-1998)J.WileyandSons；MethodsinEnzymoiogy(AcademicPress，Inc.)；HandbookofExperimentalImmunology(D.M.WeirandCC.Blackwell，eds.)；GeneTransferVectorsforMammalianCells(J.M.MillerandM.P.Calos，eds.，1987)；CurrentProtocolsinMolecularBiology(F.M.Ausubeletal.，eds.，1987)；PCR：ThePolymeraseChainReaction，(Mullisetal.，eds.，1994)；CurrentProtocolsinImmunology(J.E.Coliganetal.，eds.，1991)；ShortProtocolsinMolecularBiology(WileyandSons，1999)；lmmunobiology(CA.JanewayandP.Travers，1997)；Antibodies(P.Finch，1997)；Antibodies：apracticalapproach(D.Catty.，ed.，IRLPress，1988-1989)；Monoclonalantibodies：apracticalapproach(P.ShepherdandCDean，eds.，OxfordUniversityPress，2000)；Usingantibodies：alaboratorymanual(E.HarlowandD.Lane(ColdSpringHarborLaboratoryPress，1999)；TheAntibodies(M.ZanettiandJ.D.Capra，eds.，HarwoodAcademicPublishers，1995)。定義“抗體”是能夠通過位于免疫球蛋白分子可變區的至少一個抗原識別位點特異結合靶標(如碳水化合物、多核苷酸、脂質、多肽等)的免疫球蛋白分子。本文使用的該術語不僅包括完整的多克隆或單克隆抗體，而且包括其片段(如Fab，Fab′，F(ab′)2，Fv)、單鏈(ScFv)、突變體、包含抗體部分的融合蛋白(如結構域抗體)和免疫球蛋白分子的包含抗原識別位點的任何其它經修飾的構型。抗體包括任何種類的抗體，如IgG、IgA或IgM(或其亞家族)，且抗體不必須是任何特別的種類。可以根據抗體重鏈恒定結構域的氨基酸序列，將免疫球蛋白指定為不同的種類。存在五種主要的免疫球蛋白：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，其中一些可以被進一步分為亞類(同種型)，例如IgG1、IgG2、IgG3、IgG4、IgA1和IgA2。對應于不同免疫球蛋白家族的重鏈恒定結構域分別被稱作α、δ、ε、γ和μ。不同家族免疫球蛋白的亞基結構和三維構型是公知的。本文使用的“單克隆抗體”是指從一群基本均質的抗體獲得的抗體，即除了可少量存在的可能的天然存在的突變外，包含該種群的個體抗體是相同的。單克隆抗體是高度特異的，其針對單個抗原性位點。另外，與多克隆抗體制劑(其典型地包括針對不同決定簇(表位)的不同抗體)相反，每種單克隆抗體針對抗原上的單個決定簇。修飾詞“單克隆的”指示抗體的特性是得自基本均質的抗體種群，并不應被理解為要求通過任何特定的方法生產抗體。例如，可以通過首先由KohlerandMilstein，1975，Nature，256：495描述的雜交瘤方法來制造，或可以通過U.S.Pat.No.4,816,567中所述的重組DNA方法來制造根據本發明待使用的單克隆抗體。單克隆抗體也可以分離自噬菌體文庫，所述噬菌體文庫使用例如McCaffertyetal.，1990，Nature，348：552-554中所述的技術產生。本文使用的“人源化的”抗體是指非人(例如鼠)抗體的下述形式，其為特異的嵌合體免疫球蛋白、免疫球蛋白鏈或其含有來自非人免疫球蛋白的最小序列的片段(例如Fv，Fab，Fab′，F(ab′)2或抗體的其它抗原結合亞序列)。對于大部分而言，人源化的抗體是下述人免疫球蛋白(受體抗體)，所述人免疫球蛋白中來自受體的互補性決定區(CDR)被替換為來自非人物種的CDR(供體抗體)的殘基，所述非人物種如小鼠、大鼠或兔，所述來自非人物種的CDR具有所需的特異性、親和力和生物活性。在一些情況下，人免疫球蛋白的Fv框架區(FR)殘基被替換為相應的非人殘基。另外，人源化抗體可包含下述殘基，所述殘基既不存在于受體抗體中，也不存在于引入的CDR或框架區中，但是被包括在內以進一步精制和優化抗體表現。通常，人源化抗體基本包含所有的(至少一個，典型地兩個)可變結構域，其中所有或幾乎所有的CDR區對應于非人免疫球蛋白的CDR區，所有或幾乎所有的FR區是人免疫球蛋白共有序列的FR區。人源化抗體最適當地也包含至少一部分免疫球蛋白恒定區或結構域(Fc)，典型地為人免疫球蛋白的恒定區或結構域。抗體可具有如WO99/58572中所述被修飾的Fc區。其它形式的人源化抗體具有一個或多個CDR(一個、兩個、三個、四個、五個、六個)，其根據原始抗體被改變，也稱作“來自”一個或多個原始抗體CDR的一個或多個CDR。本文使用的“人抗體”是指具有對應于下述抗體氨基酸序列的抗體，所述抗體由人生產和/或使用本領域已知或本文公開的用于制造人抗體的任何技術制造。人抗體的該定義包括包含至少一個人重鏈多肽或至少一個人輕鏈多肽的抗體。一個這樣的例子是包含鼠輕鏈和人重鏈多肽的抗體。人抗體可以使用本領域已知的多種技術生產。在一個實施方案中，人抗體選自噬菌體文庫，其中該噬菌體文庫表達人抗體(Vaughanetal.，1996，NatureBiotechnology，14：309-314；Sheetsetal.，1998，PNAS，(USA)95：6157-6162；HoogenboomandWinter，1991，J.MoI.Biol.，227：381；Marksetal.，1991，J.MoI.Biol.，222：581)。也可以通過將人免疫球蛋白基因座引入轉基因動物(例如小鼠，其中內源免疫球蛋白基因已經被部分或完全滅活)中制造人抗體。該途徑描述于U.S.專利Nos.5,545,807；5,545,806；5,569,825；5,625,126；5,633,425和5,661，016。或者，可以通過使生產針對靶抗原的抗體的人B淋巴細胞(這類B淋巴細胞可從個體回收或可以在體外被免疫)永生來制備人抗體。參見例如Coleetal.，MonoclonalAntibodiesandCancerTherapy，AlanR.Liss，p.77(1985)；Boemeretal.，1991，J.Immunol.，147(1)：86-95和U.S.專利No.5,750,373。本文使用的術語“降鈣素基因相關肽”和“CGRP”是指維持至少部分CGRP活性的任何形式的降鈣素基因相關肽及其變體。例如，CGRP可以是α-CGRP或β-CGRP。本文使用CGRP包括所有哺乳動物種類的天然序列CGRP，例如人、犬、貓、馬和牛。本文使用的“抗CGRP拮抗劑抗體”(可與“抗CGRP抗體”互換使用)是指下述抗體，所述抗體能夠結合CGRP并抑制CGRP生物活性和/或CGRP信號轉導介導的下游途徑。抗CGRP拮抗劑抗體包括下述抗體，所述抗體能夠(包括顯著地)封閉、拮抗、抑制或降低CGRP生物活性，包括由CGRP信號轉導的下游途徑如受體結合和/或對CGRP細胞應答的激發。就本發明的目的而言，應明確地理解：術語“抗CGRP拮抗劑抗體”包括所有先前定義的術語、題目和功能狀態和特征，由此，CGRP自身、CGRP生物活性(包括但不限于其介導任何方面頭痛的能力)或生物活性的后果以任何有意義的程度上被實質上無效、降低或中和。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結合CGRP并防止CGRP結合CGRP受體。在其它實施方案中，抗CGRP抗體結合CGRP并防止CGRP受體的激活。本文提供了抗CGRP拮抗劑抗體的例子。本文使用的術語“G1”和“抗體G1”可互換地使用，它們指由具有保藏號ATCCPTA-6867和ATCCPTA-6866的表達載體生產的抗體。圖5顯示了重鏈和輕鏈可變區的氨基酸序列。抗體G1的CDR部分(包括Chothia和KabatCDRs)圖示于圖5中。編碼重鏈和輕鏈可變區的多核苷酸顯示于SEQIDNO：9和SEQIDNO：10中。G1的表征描述于實施例中。術語“多肽”、“寡肽”、“肽”和“蛋白質”在本文可互換使用，來表示任何長度的氨基酸多聚體。該多聚體可以是線性的或分支的，其可含有經修飾的氨基酸，其可以被非氨基酸阻斷。所述術語還包括已經被天然修飾或通過干涉被修飾的氨基酸多聚體；例如二硫鍵形成、糖基化、脂質化、乙酰化、磷酸化或任何其它加工或修飾，如與標簽組分的綴合。還包括在定義中的是例如含有有一個或多個氨基酸類似物(包括例如非天然的氨基酸等)以及本領域已知的其它修飾的多肽。理解到因為本發明的多肽是以抗體為基礎的，所以所述多肽能夠作為單鏈或結合的鏈存在。本文可互換地使用的“多核苷酸”或“核酸”指任何長度的核苷酸多聚體，并包括DNA和RNA。核苷酸可以是脫氧核糖核苷酸、核糖核苷酸、經修飾的核苷酸或堿基，和/或它們的類似物，或可以由DNA或RNA聚合酶摻入多聚體中的任何底物。多核苷酸可包含經修飾的核苷酸，如甲基化的核苷酸和它們的類似物。如果存在對核苷酸結構的修飾，該修飾可以在多聚體裝配之前或之后給予。核苷酸的序列可以被非核苷酸組件阻斷。多核苷酸可在多聚化后被進一步修飾，例如通過與標簽組件綴合來修飾。其它類型的修飾包括例如“帽子”、用類似物取代一個或多個天然存在的核苷酸、核苷酸間修飾，以及未修飾形式的多核苷酸，所述核苷酸間修飾例如為用不帶電的鍵(例如甲基磷酸酯、磷酸三酯、磷酸酰胺、氨基甲酸酯等)修飾和用帶電的鍵(硫代磷酸酯、二硫代磷酸酯等)修飾、含有懸掛部分如蛋白質(例如核酸酶、毒素、抗體、信號肽、ply-L-賴氨酸等)的修飾、用插入劑(例如吖啶、補骨脂素等)修飾、含有螯合劑(例如金屬、放射性金屬、硼、氧化金屬等)的修飾、含有alkylator的修飾、用經修飾的鍵(例如α異頭核酸)修飾。另外，任何通常存在于糖中的羥基基團可以被磷酸酯基團、磷酸基替換，被標準的保護基團保護，或被激活來制備與額外的核苷酸的額外鍵，或可以與固體支持物綴合。5’和3’端的OH可以被磷酸化或被胺或1到20個碳原子的有機加帽基團部分取代。其它羥基也可以被演化為標準的保護基團。多核苷酸還可以含有本領域一般已知的類似形式的核糖或脫氧核糖，包括例如2′-O-甲基-、2′-O-烯丙基、2′-氟-或2′-疊氮基-核糖，碳環糖類似物，D-異頭糖，差向異構體糖如阿拉伯糖、木糖或來蘇糖，吡喃糖，呋喃糖，景天庚酮糖，非環狀類似物和非堿性核苷類似物如甲基核糖核苷。一個或多個磷酸二酯鍵可以被替換為備選的連接基團。這些備選的連接基團包括，但不限于其中磷酸鹽被替換為P(O)S(″硫代酸鹽″)、P(S)S(″二硫代酸鹽″)、(O)NR2(″酰胺化物″)、P(O)R、P(O)OR′、CO或CH2(″formacetai″)的實施方案，其中每個R或R′獨立地為H或被任選地含有(-O-)鍵、芳基、鏈烯基、環烷基、環鏈烯基或araldyl的烷基(1-20C)取代或未取代。多核苷酸中所有的鍵不必須是相同的。前文的敘述適用于本文所指的所有多核苷酸，包括RNA和DNA。抗體的“可變區”是指抗體輕鏈的可變區或抗體重鏈的可變區，其為單獨的或組合的。重鏈和輕鏈的可變區各由四個框架區(FR)組成，所述四個框架區被三個互補性決定區(CDR)連接，所述互補性決定區也稱作超變區。每個鏈中的CDR通過FR被緊密結合在一起，并與來自另一條鏈的CDR一起有助于形成抗體的抗原結合位點。存在至少兩種用于確定CDR的技術：(1)以跨物種序列變異性為基礎的途徑(即Kabatetal.SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，(5thed.，1991，NationalInstitutesofHealth，BethesdaMD))；和(2)以抗原-抗體復合物的晶體學研究為基礎的途徑(Al-lazikanietal(1997)J.Molec.Biol.273：927-948)。本文使用的CDR可表示由任一途徑或兩個途徑的組合定義的CDR。抗體的“恒定區”指抗體輕鏈的恒定區或抗體重鏈的恒定區，其為單獨的或組合的。與抗體或多肽“優先結合”或“特異結合”(在本文可互換使用)的表位是本領域公知的術語，確定這類特異或優先結合的方法也是本領域公知的。如果一個分子與特定細胞或物質反應或結合比起它與其它細胞或物質的反應或結合而言更頻繁、更快速、有更長持續時間和/或有更大親和力，則稱該分子顯示“特異結合”或“優先結合”。如果抗體與靶標結合比起它與其它物質的結合具有更大親和力、親合力、更容易和/或具有更長持續時間，則該抗體“特異結合”或“優先結合”該靶標。例如，與CGRP特異或優先結合的抗體是下述抗體，所述抗體與該表位的結合比起它與其它CGRP表位或非CGRP表位的結合具有更大的親和力、親合力、更容易和/或具有更長的持續時間。通過閱讀該定義還應理解到例如，與第一靶標特異或優先結合的抗體(或部分或表位)可與第二靶標特異或優先結合，或不特異或優先結合。同樣，“特異結合”或“優先結合”不必須要求(盡管其可包括)專一結合。通常但不必須地，涉及結合時表示優先結合。本文使用的“基本純”是指至少50％純(即不含污染物)、更優選至少90％純、更優選至少95％純、更優選至少98％純、更優選至少99％純的材料。“宿主細胞”包括可以是或已經是載體受體的個體細胞或細胞培養物，所述載體用于摻入多核苷酸插入物。宿主細胞包括單個宿主細胞的后代，并且因為天然、偶然或故意的突變，所述后代不必須與原始的親本細胞(在形態學或基因組DNA補體上)完全相同。宿主細胞包括用本發明的多核苷酸體內轉染的細胞。術語“Fc區”用于定義免疫球蛋白重鏈C末端區域。“Fc區”可以是天然序列Fc區或變體Fc區。盡管免疫球蛋白重鏈的Fc區邊界可變化，但是人IgG重鏈Fc區通常被定義為從位置Cys226的氨基酸殘基或Pro230開始到其羧基端的一段。Fc區中殘基的排序是如Kabat中的EU索引排序。Kabatetal.，SequencesofProteinsoflmunologicalInterest，5thEd.PublicHealthService，NationalInstitutesofHealth，Bethesda，Md.，1991。免疫球蛋白的Fc區通常含有兩個恒定結構域CH2和CH3。本文使用“Fc受體”和“FcR”描述了結合抗體Fc區的受體。優選的FcR為天然序列人FcR。另外，優選的FcR是結合IgG抗體(γ受體)的FcR，并包括FcγRI、FcγRII和FcγRIII亞類的受體，包括這些受體的等位基因變體或者間接形式。FcγRII受體包括FcγRIIA(“激活受體”)和FcγRIIB(“抑制受體”)，其具有主要在其胞漿區差異的類似的氨基酸序列。RavetchandKinet，1991，Ann.Rev.Immunol.，9：457-92；Capeletal.，1994，Immunomethods，4：25-34；和deHaasetal.，1995，J.Lab.Clin.Med.，126：330-41中綜述了FcR。″FcR″也包括新生兒受體FcRn，其負責母體IgG到胎兒的轉移(Guyeretal.，1976，J.Immunol.，117：587；andKimetal.，1994，J.Immunol.，24：249)。“補體依賴性細胞毒性”和″CDC″是指存在補體時靶標的溶解。補體系統的第一個組件(C1q)和與同種抗原復合的分子(例如抗體)的結合啟動補體激活途徑。為了評價補體活化，可進行例如Gazzano-Santoroetal.，J.Immunol.Methods，202：163(1996)中所述的CDC實驗。“功能性Fc區”擁有天然序列Fc區的至少一個效應子作用。示范性的“效應子作用”包括C1q結合；補體依賴性細胞毒性(CDC)；Fc受體結合；抗體依賴性細胞接到的細胞毒性(ADCC)；吞噬作用；細胞表面受體(例如B細胞受體；BCR)的下調等。這類效應子作用通常要求Fc區與結合結構域(例如抗體可變結構域)組合并可使用本領域已知用于評估這類抗體效應子作用的多種實驗評價。“天然序列Fc區”包含與天然存在的Fc區氨基酸序列相同的氨基酸序列。“變體Fc區”包含與天然序列Fc區通過至少一個氨基酸修飾而不同、但是維持天然序列Fc區至少一個效應子作用的氨基酸序列。優選地，與天然序列Fc區相比或與親本多肽的Fc區相比，變體Fc區具有至少一個氨基酸取代，例如天然序列Fc區中或親本多肽的Fc區中從約一個到約十個氨基酸取代，優選地從約一個到約五個氨基酸取代。本文的變體Fc區優選地與天然序列Fc區和/或與親本多肽Fc區具有至少約80％的序列同一性，最優選與之有至少約90％的序列同一性，更優選與之有至少約95％、至少約96％、至少約97％、至少約98％、至少約99％的序列同一性。本文使用的“抗體依賴性細胞介導的細胞毒性”和“ADCC”是指細胞介導的反應，其中表達Fc受體(FcRs)的非特異性的細胞毒性細胞(例如天然殺傷(NK)細胞、中性粒細胞和巨噬細胞)識別靶細胞上的結合抗體，隨后引起靶細胞裂解。感興趣的分子的ADCC活性可以使用體外ADCC實驗評估，例如描述于U.S.專利No.5,500,362或5,821,337中的實驗。適用于這些實驗的效應子細胞包括外周血單核細胞(PBMC)和NK細胞。或者或另外地，感興趣的分子的ADCC活性可以體內評估，例如在如Clynesetal.，1998，PNAS(USA)，95：652-656中公開的動物模型中評估。本文使用的“治療”是用于獲得有益的或所期望的臨床結果的途徑。就本發明的目的而言，有益的或所期望的臨床結果包括，但不限于以下一種或多種：在頭痛的任何方面改進，包括減輕嚴重性、緩和疼痛強度和其它相關癥狀、減少復發頻率、提高患有頭痛患者的生活質量和減少治療頭痛所需其它藥物的劑量。對于偏頭痛而言，其它相關癥狀包括，但不限于惡心、嘔吐和對光、聲音和/或運動敏感。對于叢集性頭痛而言，其它相關癥狀包括，但不限于眼下方或周圍腫脹、多淚、紅眼、鼻漏或鼻充血和潮紅的臉。“降低”頭痛“發生率”表示任何降低的嚴重性(其可包括降低通常用于該病癥的其它藥物和/或治療的需要和/或用量(例如暴露)，所述其它藥物包括例如用于偏頭痛的麥角胺、雙氫麥角胺或triptan)、持續時間和/或頻率(包括例如在個體中延遲或提高到下次偶然發作的時間)。如本領域技術人員所理解的，個體可在它們對治療的應答方面不同，同樣，例如“減少個體中頭痛發作的方法”表現了在合理期望(這類施用很可能在特定個體中導致這樣的發病率降低)的基礎上施用抗CGRP拮抗劑抗體。“改善”頭痛或頭痛的一種或多種癥狀表示與未施用抗CGRP拮抗劑抗體相比，頭痛的一種或多種癥狀的減少或改進。“改善”也包括縮短或減少癥狀的持續時間。本文使用的“控制頭痛”是指在個體中維持或降低頭痛的一種或多種癥狀的嚴重性或持續時間或頭痛發作的頻率(與治療前的水平相比)。例如，與治療前水平相比，個體中頭痛持續時間或嚴重性或發作頻率被降低至少約10％、20％、30％、40％、50％、60％或70％之任一。本文使用的“延遲”頭痛的發生是指延遲、妨礙、減緩、延緩、穩定和/或推遲疾病的進展。該延遲可以是不同長度的時間，取決于疾病史和、或被治療的個體。如本領域技術人員所明白的，足夠或顯著的延遲可以有效地包括預防，因為個體不會發生頭痛(例如偏頭痛)。“延遲”癥狀發生的方法是與未使用該方法相比時，降低給定時間范圍內發生癥狀的可能性和/或降低給定時間范圍內癥狀程度的方法。這類比較典型地以臨床研究為基礎，使用統計學顯著數量的受試者。頭痛的“發生”或“發展”表示表示該病癥的最初表現和/或隨后的進展。頭痛的發生是可檢測的，并使用本領域公知的標準臨床技術評價。然而，發生也表示不可檢測的進展。就本發明的目的而言，發生或發展表示癥狀的生物學過程。“發生”包括發作、復發和發病。本文使用頭痛的“發病”或“發作”包括初始發病和/或復發。本文使用的藥物、化合物或藥物組合物的“有效劑量”或“有效量”是足夠產生有益的或期望的結果的量。對于預防性用途而言，有益的或期望的結果包括例如如消除或降低風險、減輕嚴重性或延遲疾病開始的結果，包括疾病的生物化學、組織學和/或行為癥狀，其并發癥和在疾病發生時存在的中間病理學表型。對于治療學用途而言，有益或期望的結果包括下述結果，例如降低疼痛強度、持續時間、或頭痛發作頻率和減少頭痛引起的一種或多種(生物化學、組織學和/或行為)癥狀(包括其并發癥和在疾病發生時存在的中間病理學表型)、提高該疾病患者的生活質量、減少治療該疾病所需其它藥物療法的劑量、增強另一藥物療法的作用和/或延遲患者疾病的發展。有效劑量可以在一次或多次施用中被施用。就本發明的目的而言，有效的藥物、化合物或藥物組合物劑量是足夠直接或間接完成預防性或治療性治療的用量。如臨床語境中所理解的，有效的藥物、化合物或藥物組合物劑量可以與其它藥物、化合物或藥物組合物結合或不結合地達到。因此，在施用一種或多種治療劑的語境中如果可以達到或達到了期望的結果，則可認為是“有效劑量”；單一劑量與一種或多種其它試劑組合時，如果可以達到或達到了期望的結果，則可認為是以有效的劑量提供的。“個體”或“受試者”是哺乳動物，更優選為人。哺乳動物還包括但不限于：農業動物、運動動物、寵物、靈長類、馬、犬、貓、小鼠和大鼠。本文使用的“載體”表示一種構建體，其能夠將一個或多個感興趣的基因或序列遞送進宿主細胞并優選在其中表達。載體的例子包括，但不限于病毒載體、裸DNA或RNA表達載體、質粒、粘粒或噬菌體載體、與陽離子冷凝劑結合的DNA或RNA表達載體、包裹在脂質體中的DNA或RNA表達載體，和某些真核生物細胞如生產者細胞。本文使用的“表達調控序列”是指指導核酸轉錄的核酸序列。表達調控序列可以是啟動子(如組成型或誘導型啟動子)或增強子。表達調控序列與待轉錄的核酸序列可操作地連接。本文使用的“可藥用的運載體”或“可藥用的賦形劑”包括任何下述材料，其與活性成分組合時允許該成分維持生物活性，并且對受試者的免疫體系是無反應性的。例子包括但不限于：任何標準的藥物運載體，如磷酸鹽緩沖的鹽水溶液、水、乳劑(如油/水乳劑)和多種類型的濕潤劑。用于氣霧劑或腸胃外施用的優選稀釋劑為磷酸鹽緩沖的鹽水或生理(0.9％)鹽水。包含這類運載體的組合物通過公知的常規方法配制(參閱例如Remington′sPharmaceuticalSciences，18thedition，A.Gennaro，ed.，MackPublishingCo.，Easton，PA，1990；和Remington，TheScienceandPracticeofPharmacy20thEd.MackPublishing，2000)。本文使用術語“kon”旨在表示抗體與抗原的結合速率常數。本文使用術語“koff”旨在表示抗體從抗體/抗原復合物解離的速率常數。本文使用術語“KD”旨在表示抗體-抗原相互作用的平衡解離常數。本文使用術語“血管運動癥狀”旨在表示與血管舒張相關的病癥，包括但不限于特別是由溫度調節功能障礙導致的頭痛(例如偏頭痛、……其它)、熱潮紅、冷潮紅(或瞬間熱潮紅(hotflashes))、失眠、睡眠紊亂、心境障礙、易激惹、大汗、寢汗、晝汗、疲勞等等。本文使用術語“面紅”、“熱潮紅”和“瞬間熱潮紅”是本領域認可的術語，其表示體溫偶發性紊亂，典型地由突發的皮膚潮紅組成，通常伴隨受試者的排汗。A.用于預防或治療血管運動癥狀的方法一方面，本發明提供了用于在個體中治療或預防至少一種血管運動癥狀如頭痛(例如偏頭痛)或熱潮紅的方法，所述方法包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體或來自該抗體的多肽。另一方面，本發明提供了用于在個體中改善、控制、減少至少一種血管運動癥狀發作或延遲其發生或發展的方法，所述癥狀如頭痛(例如偏頭痛)或熱潮紅，所述方法包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體。另一方面，本發明提供了用于在個體中改善、控制、減少頭痛(例如偏頭痛)發作或延遲其發生或發展的方法，包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體與至少一種適用于治療頭痛的其它試劑的組合。這類其它試劑包括但不限于：5-HT激動劑和NSAID。例如，抗體和至少一種其它試劑可以伴隨施用，即它們可以以足夠接近的時間接近度施用從而允許它們個體的治療作用重疊。例如，與抗CGRP抗體組合施用的5-HT激動劑或NSAID的量應當足以降低患者中頭痛復發的頻率，或產生與施用這些試劑中的一種而不存在其它時相比更長的持久作用。該步驟可用于治療落入多種種類之任一中的頭痛，包括：有先兆或無先兆的偏頭痛；叢集性頭痛；偏頭痛性神經痛；久頭痛；緊張性頭痛；其它醫學病癥(例如感染或腫瘤引起的顱內壓升高)導致的頭痛；慢性發作性偏頭痛；與結構損傷無關的多種頭痛；與非血管性顱內病癥相關的頭痛；與物質施用及其停藥相關的頭痛；與非頭感染相關的頭痛；與代謝紊亂相關的頭痛；與顱、頸、眼、耳、鼻、竇房結、牙、口或其它面部或顱結構病癥相關的頭痛；腦神經痛和神經干痛和去傳入(deafferentiation)痛。本領域技術人員能夠確定與抗CGRP抗體組合使用的特定試劑的合適劑量。例如，可以以從約0.01到約300mg的劑量施用舒馬曲坦。當非腸胃外施用時，舒馬曲坦的典型劑量為從約25到約100mg。通常優選約50mg，當腸胃外施用時，優選的劑量為約6mg。然而，這些劑量可以根據本領域的標準方法改變，從而將其針對特定患者或特定的組合治療最優化。另外，例如塞來考昔可以以50和500mg之間的用量被施用。另一方面，本發明提供了用于在個體中改善、控制、減少熱潮紅發作或延遲其發生或發展的方法，包括對個體施用有效量的抗CGRP拮抗劑抗體與至少一種適用于治療熱潮紅的其它試劑的組合。這類其它試劑包括，但不限于基于激素的治療，所述激素包括雌激素和/或一些黃體酮。關于本文所述的所有方法，提及抗CGRP拮抗劑抗體時也包括包含一種或多種這些試劑的組合物。這些組合物可進一步包含本領域公知的合適賦形劑，如包括緩沖液的可藥用賦形劑。本發明可單獨使用或與其它常規治療方法組合使用。抗CGRP拮抗劑抗體可以通過任何合適的途徑施用給個體。本領域技術人員應當明白：本文所述的實施例不旨在限制，而是對可用技術的闡述。因此在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體根據已知的方法施用給個體，例如靜脈施用(例如作為推注施用或通過一段時間內的連續輸注施用)，通過肌內、腹膜內、腦脊髓內、皮下、關節內、舌下、滑膜內，通過吹入、椎觀內、口內、吸入或局部途徑。施用可以是全身性的(例如靜脈施用)或局部的。可商業獲得的用于液體制劑的噴霧器(包括噴射霧化器和超聲噴霧器)適用于施用。液體制劑可直接噴霧，低壓凍干粉末可以在重建后噴霧。或者，可以使用碳氟化合物制劑和壓力定量氣霧劑將抗CGRP拮抗劑抗體霧化，或作為低壓凍干的和研細的粉末被吸入。在一個實施方案中，通過位點特異或靶向局部遞送技術施用抗CGRP拮抗劑抗體。位點特異或靶向局部遞送技術的例子包括抗CGRP拮抗劑抗體的多種可植入補給來源(depotsources)或局部遞送導管，如輸注導管、留置導管或套針、合成移植物、外膜覆膜(adventitialwraps)、分流器和支架或其它可植入的設備，位點特異的運載體、直接注射或直接應用。參閱例如PCT公開No.WO00/53211和U.S.專利No.5,981,568。抗CGRP拮抗劑抗體的多種制劑可用于施用。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體可以單獨施用。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體和可藥用的賦形劑可存在于多種制劑中。可藥用的賦形劑是本領域已知的并是相對惰性的物質，其有助于藥理學有效物質的施用。例如，賦形劑可以有形狀或稠度，或作為稀釋劑作用。合適的賦形劑包括但不限于穩定劑、濕潤劑和乳化劑、不同滲量的鹽、包膠劑、緩沖液和皮膚穿透促進劑。賦形劑以及用于腸胃外和非腸胃外藥物遞送的制劑公開于Remington，TheScienceandPracticeofPharmacy20thEd.MackPublishing(2000)中。在一些實施方案中，這些試劑被配制為用于通過(例如腹膜內、靜脈內、皮下、肌內等)注射施用。因此，這些試劑可與可藥用媒介如鹽水、Ringer′s溶液、葡萄糖溶液等等組合。特定的給藥方案(即劑量、時間和重復)將取決于特定的個體和該個體的醫療史。抗CGRP抗體可以使用任何合適的方法施用，所述方法包括注射(例如腹膜內、靜脈內、皮下、肌內等)。抗CGRP抗體也可以如本文所述通過吸入施用。通常，對于抗CGRP抗體的施用而言，初始的候選劑量可以為約2mg/kg。就本發明的目的而言，典型的每日劑量可以從約3μg/kg到30μg/kg到300μg/kg到3mg/kg，到30mg/kg到100mg/kg或更多的范圍內，取決于上述因素。例如可使用約1mg/kg、約2.5mg/kg、約5mg/kg、約10mg/kg和約25mg/kg的劑量。對于在若干天或更久的重復施用而言，根據病癥持續治療，直到發生期望的癥狀抑制或直到達到足夠的治療水平，例如降低疼痛。示范性的給藥方案包括施用約2mg/kg的初始劑量，然后是約1mg/kg抗CGRP抗體的每周維持劑量，或然后是每隔一周約1mg/kg的維持劑量。然而，其它給藥方法可以是有用的，取決于醫生希望達到的藥物代謝動力學衰變模式。例如，在一些實施方案中，考慮一周一到四次的給藥。該療法的過程容易地通過常規技術和實驗檢測。給藥方案(包括使用的CGRP拮抗劑)可隨時間變化。就本發明的目的而言，抗CGRP拮抗劑抗體的適當劑量取決于使用的抗CGRP拮抗劑抗體(或其組合物)、待治療的頭痛(例如偏頭痛)類型和嚴重性、試劑是否就預防或治療的目的被使用、先前療法、患者的醫療史和對試劑的應答，以及主治醫師的判斷。典型地，臨床醫師會施用抗CGRP拮抗劑抗體，直到達到完成期望結果的劑量。劑量和/或頻率可隨治療進程改變。經驗性考慮(例如半衰期)通常有助于劑量的確定。例如，與人免疫系統相容的抗體(如人源化抗體或全人抗體)可用于延長抗體的半衰期和預防抗體被宿主的免疫系統攻擊。施用頻率可隨著治療進程確定和調整，并通常(但非必須)以頭痛(例如偏頭痛)的治療和/或抑制和/或改善和/或延遲為基礎。或者，抗CGRP拮抗劑抗體的持久連續釋放制劑可以是適當的。用于達到持久釋放的多種制劑和設備是本領域已知的。在一個實施方案中，可以按經驗確定已經被給予一次或多次抗CGRP拮抗劑抗體施用的個體中抗CGRP拮抗劑抗體的劑量。個體被給予增加劑量的抗CGRP拮抗劑抗體。為了評估抗CGRP拮抗劑抗體的效力，可依照該疾病的指征來進行。根據本發明方法的抗CGRP拮抗劑抗體的施用可以是連續的或間斷的，取決于例如受體的生理條件、施用目的是治療性的還是預防性的，以及熟練醫生已知的其它因素。抗CGRP拮抗劑抗體的施用可以在預選的時間段中基本上是連續的，或可以是一系列間隔的劑量，例如發生頭痛(例如偏頭痛)之前、期間或之后之任一；之前；期間；之前和之后；期間和之后；之前和期間；或發生頭痛之前、期間和之后。施用可以在可能引起頭痛的任何事件之前、期間和/或之后。在一些實施方案中，可存在多于一種抗CGRP拮抗劑抗體。可以存在至少一種、至少兩種、至少三種、至少四種、至少物種不同的或更多的抗CGRP拮抗劑抗體。通常這些抗CGRP拮抗劑抗體可以具有彼此不會不利影響的互補活性。拮抗劑抗CGRP抗體也可以用于與其它CGRP拮抗劑或CGRP受體拮抗劑結合。例如，可使用一種或多種以下的CGRP拮抗劑：針對CGRP的抗反義分子(包括針對編碼CGRP的核酸的抗反義分子)、CGRP抑制化合物、CGRP結構類似物、結合CGRP的CGRP受體的顯性負相突變、抗CGRP受體抗體。抗CGRP拮抗劑抗體也可以與其它試劑結合使用，所述其它試劑起到增強和/或補充試劑有效性的作用。按下文所述，將根據本發明使用的抗CGRP拮抗劑抗體的治療性制劑制備為低壓凍干制劑或水性溶液的形式用于儲存：將具有期望純度的抗體與任選的可藥用運載體、賦形劑或穩定劑混合(Remington，TheScienceandPracticeofPharmacy20thEd.MackPublishing(2000))。可接受的運載體、賦形劑或穩定劑在使用的劑量上對于受體是無毒的，并可包含緩沖液如磷酸、檸檬酸和其它有機酸；鹽如氯化鈉；抗氧化劑，包括抗壞血酸和甲硫氨酸；防腐劑(例如氯化十八烷基二甲基芐基銨；氯化六甲雙銨；氯化苯甲烴銨、氯化苯乙銨；苯酚、丁醇或苯甲醇；對羥基苯甲酸烷基酯，如對羥基苯甲酸甲酯或對羥基苯甲酸丙酯；兒茶酚；間苯二酚；環己醇；3-戊醇；和m-甲酚)；低分子量(少于約10個殘基)的多肽；蛋白質，如血清白蛋白、明膠或免疫球蛋白；親水多聚體如聚乙烯吡咯酮；氨基酸如甘氨酸、谷氨酰胺、天冬酰胺、組氨酸、精氨酸或賴氨酸；單糖、二糖和其它碳水化合物，包括葡萄糖、甘露糖或糊精；螯合劑如EDTA；糖如蔗糖、甘露醇、海藻糖或山梨糖醇；成鹽的反例子如鈉；金屬絡合物(例如Zn-蛋白質絡合物)；和/或非離子型表面活性劑，如TWEENTM、PLURONICSTM或聚乙二醇(PEG)。通過本領域已知方法制備含有抗CGRP拮抗劑抗體的脂質體，所述方法例如描述于Epstein，etal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA82：3688(1985)；Hwang，etal.，Proc.NatlAcad.Sci.USA77：4030(1980)；和U.S.Pat.Nos.4,485,045和4,544,545中。具有增強的循環時間的脂質體公開于U.S.專利No.5,013,556中。尤其有用的脂質體可以通過反相蒸發法用脂質組合物產生，所述脂質組合物含有磷脂酰膽堿、膽固醇和PEG衍生的磷脂酰乙醇胺(PEG-PE)。通過將脂質體濾過確定孔徑的濾器得到具有期望直徑的脂質體。在膠體給藥系統(例如脂質體、白蛋白微球、微乳劑、納米顆粒和納米膠囊)或大乳劑中，活性成分也可以被捕獲在微膠囊中例如分別被捕獲在羥甲基纖維素或明膠微膠囊和多聚(methylmethacylate)微膠囊中，所述微膠囊例如通過凝聚技術或通過界面聚合法制備。這類技術公開于Remington，TheScienceandPracticeofPharmacy20thEd.MackPublishing(2000)中。可制備緩釋制劑。緩釋制劑的合適例子包括含有抗體的固體疏水多聚體的半滲透性基質，所述基質是有形狀物體(例如薄膜或微膠囊)的形式。緩釋基質的例子包括聚酯、水凝膠(例如多聚(2-羥乙基-異丁烯酯)或多聚(乙烯醇))、多聚乳酸化合物(U.S.Pat.No.3,773,919)、L-谷氨酸共聚物和7乙基-L-谷氨酸鹽、非降解性的乙烯-醋酸乙烯酯、降解性的乳酸-羥乙酸共聚物如LUPRONDEPOTTM(由乳酸-羥乙酸共聚物和醋酸亮丙瑞林組成的可注射微球)、乙酸異丁酸蔗糖酯和多聚-D-(-)-3-羥基丁酸。用于體內施用的配方必須是無菌的。這通過例如濾過無菌濾膜容易地實現。治療性的抗CGRP拮抗劑抗體組合物通常被置于具有無菌接入口的容器(例如帶有可被皮下注射針穿透的塞子的靜脈注射溶液袋或瓶)中。根據本發明的組合物可以是用于口、腸胃外或直腸施用或通過吸入或吹入施用的單位劑型，如片劑、丸劑、膠囊、粉末、顆粒、溶液或懸浮液或栓劑。為了制備固體組合物如片劑，將主要的活性成分與藥物運載體(例如常規的壓片成分，如玉米淀粉、乳糖、蔗糖、山梨糖醇、滑石、硬脂酸、硬脂酸鎂、磷酸二鈣或樹膠)和其它藥物稀釋劑(例如水)混合，形成含有本發明化合物或其無毒可藥用鹽的均相混合物的固體預配制組合物。當提到這些預配制組合物是均相的時，表示活性成分遍及組合物被均一地分散，從而組合物可以被容易地再分為等效的單位劑型，如片劑、丸劑和膠囊。然后將該固體預配制組合物再分為上述類型的單位劑型，其含有從0.1到約500mg的本發明活性成分。新組合物的片劑或丸劑可以被包被或者以其它方式復合，得到給予長效的優點的劑型。例如，片劑或丸劑可以包含內部劑量和外部劑量組分，后者是前者上外膜的形式。這兩種組分可以被腸道層分開，所述腸溶層(entericlayer)作用在于抵抗胃中的崩解并允許內部組分完整地進入十二指腸或被延遲釋放。多種材料可被用于這類腸溶層或包衣，這類材料包括大量多聚酸和多聚酸與如紫膠、鯨蠟醇和醋酸纖維素類材料的混合物。合適的表面活性劑尤其包括：非離子型試劑，例如聚氧乙烯山梨聚糖(例如TweenTM20、40、60、80或85)和其它山梨聚糖(例如SpanTM20、40、60、80或85)。含有表面活性劑的組合物應便利地包含0.05％和5％之間的表面活性劑，并可以在0.1％和2.5％之間。應當理解如果必需的話可添加其它成分，例如甘露醇或其它可藥用的媒介。合適的乳劑可以使用可商業獲得的脂肪乳劑來制備，所述脂肪乳劑例如IntralipidTM、LiposynTM、InfonutrolTM、LipofundinTM和LipiphysanTM。活性成分可被溶于預先混合的乳劑組合物中，或者其可溶于油(例如大豆油、紅花油、棉籽油、芝麻油、玉米油或杏仁油)或通過將磷脂(例如卵磷脂、大豆磷脂或大豆卵磷脂)與水混合形成的乳劑中。應當理解可添加其它成分，例如甘油或葡萄糖，以調節乳劑的張力。合適的乳劑典型地含有多至20％的油，例如5％和20％之間。脂肪乳劑包含0.1和1.0Im之間、尤其是0.1和0.5Im之間的脂肪微滴，并具有5.5到8.0范圍內的pH。乳劑組合物可以是通過將抗CGRP拮抗劑抗體與IntralipidTM或其組分(大豆油、卵磷脂、甘油和水)混合制備的組合物。用于吸入或吹入的組合物包括在可藥用的、水性或有機溶劑或其混合物中的溶液和懸浮液和粉末。液體或固體組合物可含有上文公開的合適的可藥用賦形劑。在一些實施方案中，通過口或鼻呼吸途徑施用組合物用于局部或全身作用。優選地在無菌可藥用溶劑中的組合物可以通過使用氣體被噴灑。被噴灑的溶液可以從噴霧設備直接被呼吸，或噴霧設備可以與面罩、帷罩或間歇性正壓呼吸機結合。溶液、懸浮液或粉末組合物可以從以適當方式遞送配方的設備中(優選口或鼻地)被施用。頭痛的診斷或評估是本領域充分確定的。評估可以根據受試者測量(例如癥狀的患者特征)來確定。例如，偏頭痛可以基于以下標準診斷：1)頭痛的偶發性發作持續4到72個小時；2)具有兩種以下癥狀：單側疼痛、博動、運動時加重，和中度或嚴重強度的疼痛；和3)以下癥狀之一：惡心或嘔吐，和畏光或恐聲(phonophobia)。Goadsbyetal.，N.Engl.J.Med.346：257-270，2002。治療有效性可以通過本領域公知的方法評估。例如，可評估疼痛緩解。因此，在一些實施方案中，在施用抗CGRP抗體后1、2或幾個小時后主觀地觀察到疼痛緩解。在一些實施方案中，在施用抗CGRP抗體后主觀地觀察頭痛發作的頻率。B.抗CGRP拮抗劑抗體本發明的方法使用抗CGRP拮抗劑抗體，所述CGRP拮抗劑抗體表示封閉、抑制或降低(包括顯著地)CGRP生物活性的任何抗體分子，所述生物活性包括由CGRP信號轉導介導的下游途徑，例如受體結合和/或對CGRP的細胞應答的激發。抗CGRP拮抗劑抗體應顯示以下特征中的任一種或多種：(a)結合CGRP；(b)封閉CGRP與其受體結合；(c)封閉或降低CGRP受體活化(包括cAMP活化)；(d)抑制CGRP生物活性或下調由CGRP信號轉導功能介導的下游途徑；(e)預防、改善或治療頭痛(例如偏頭痛)的任何方面；(f)提高CGRP的清除率；和(g)抑制(減少)CGRP合成、生產或釋放。抗CGRP拮抗劑抗體是本領域已知的。參閱例如Tanetal.，Clin.Sci.(Lond).89：565-73，1995；Sigma(Missouri，US)，產品編號C7113(clone#4901)；Plourdeetal.，Peptides14：1225-1229，1993。就本發明的目的而言，抗體與CGRP以下述方式反應，所述方式抑制CGRP和/或CGRP信號轉導功能介導的下游途徑。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體識別人CGRP。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體與人α-CGRP和β-CGRP均結合。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體與人和大鼠CGRP結合。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結合具有CGRP的氨基酸25-37的C末端片段。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體結合CGRP的氨基酸25-37中的C末端表位。適用于本發明的抗體可包括單克隆抗體、多克隆抗體、抗體片段(例如Fab、Fab′、F(ab′)2、Fv、Fc等)、嵌合抗體、雙特異性抗體、雜綴合物抗體、單鏈(ScFv)、其突變體、包含抗體部分的融合蛋白(例如結構域抗體)、人源化抗體，和免疫球蛋白分子的包含所需特異性的抗原識別位點的任何其它經修飾的構型，包括抗體的糖基化變體、抗體的氨基酸序列變體和共價修飾的抗體。抗體可以是犬的、大鼠的、人的，或任何其它來源的(包括嵌合的或人源化的抗體)。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是單克隆抗體。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體被人源化。在一些實施方案中，抗體是人的。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體是抗體G1(如本文所述)。在一些實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體包含表6所示抗體G1或G1變體的一個或多個CDR(例如一個、兩個、三個、四個、五個或在一些實施方案中包含所有六個CDR)。還在其它實施方案中，抗CGRP拮抗劑抗體包含圖5所示重鏈可變區的氨基酸序列(SEQIDNO：1)和圖5所示輕鏈可變區的氨基酸序列(SEQIDNO：2)。在一些實施方案中，抗體包含經修飾的恒定區，例如本文所述是免疫惰性的恒定區。在一些實施方案中，恒定區如Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624；PCT申請No.PCT/GB99/01441；和/或UK專利申請No.9809951.8中所述被修飾。在其它實施方案中，抗體包含人重鏈IgG2恒定區，所述恒定區包含以下突變：A330P331到S330S331(參考野生型IgG2序列的氨基酸排序)。Eur.J.Immunol.(1999)29：2613-2624。在一些實施方案中，抗體包含帶有以下突變的IgG4恒定區：E233F234L235到P233V234A235。還在其它實施方案中，針對N連接的糖基化而言，恒定區不被糖基化(aglycosylated)。在一些實施方案中，通過突變寡糖附著殘基(如Asn297)和/或側翼殘基(其為恒定區中N-糖基化識別序列的一部分)，使得針對N連接的糖基化而言恒定區不被糖基化。在一些實施方案中，針對N連接的糖基化而言恒定區不被糖基化。可通過酶或通過在糖基化缺陷宿主細胞中表達使得針對N連接的糖基化而言恒定區不被糖基化。抗CGRP拮抗劑抗體對CGRP(例如人α-CGRP)的親合力(KD)可以是約0.02到約200nM。在一些實施方案中，親合力為下述任何：約200nM、約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM、約60pM、約50pM、約20pM、約15pM、約10pM、約5pM或約2pM。在一些實施方案中，親合力少于下述任何：約250nM、約200nM、約100nM、約50nM、約10nM、約1nM、約500pM、約100pM或約50pM。測定抗體對CGRP的親合力的一種方式是通過測量抗體的單功能Fab片段的親合力。為了獲得單功能的Fab片段，可以用木瓜蛋白酶切割抗體(例如IgG)或重組表達。可以通過裝備有固定的鏈霉親和素感受芯片(SA)的表面等離振子共振(Biacore3000TM表面等離振子共振(SPR)系統，Biacore，INC，PiscatawayNJ)使用HBS-EP電泳緩沖液(0.01MHEPES，pH7.4、0.15NaCl、3mMEDTA、0.005％v/v表面活性劑P20)測定抗體的抗CGRPFab片段的親和力。可以在HBS-EP緩沖液中將生物素化的人CGRP(或任何其它CGRP)稀釋為少于0.5ug/mL的濃度，并使用不同的接觸時間將其注射越過個體芯片通道，以達到兩種范圍的抗原密度：用于詳細動力學研究的50-200響應單位(RU)或用于篩選實驗的800-1,000RU。再生研究顯示25％v/v乙醇中25mMNaOH有效地去除了結合的Fab同時維持芯片上多于200個注射的CGRP活性。典型地，將純化的Fab樣品的連續稀釋(針對0.1-10x評估的KD的濃度)以100μL/分鐘注射1分鐘，并允許至多2小時的解離時間。通過ELISA和/或SDS-PAGE電泳，使用已知濃度的Fab(通過氨基酸分析測定)作為標準測定Fab蛋白質的濃度。使用BlAevaluation程序，通過將數據整體與1∶1Langmuir結合模型(Karlsson，R.Roos，H.Fagerstam，L.Petersson，B.(1994).MethodsEnzymology6.99-110)擬合，同時獲得動力學結合速率(kon)和解離速率(koff)。平衡解離常數(KD)值作為koff/kon計算。該方案適用于測定抗體對任何CGRP的親合力，所述CGRP包括人CGRP、另一哺乳動物的CGRP(例如小鼠CGRP、大鼠CGRP、靈長類CGRP)以及不同形式的CGRP(例如α和β形式)。抗體的親合力通常在25℃下測量，但是也可以在37℃測量。可以通過本領域已知的任何方法來制造抗CGRP拮抗劑抗體。免疫宿主動物的途徑和時間表通常與如本文所進一步描述的、用于抗體刺激和生產的、確定的和常規的技術一致。用于生產人和小鼠抗體的一般技術是本領域已知的并在本文被描述了。本發明包括：任何哺乳動物受試者(包括人)或來自其中的生產抗體的細胞可以被加工，用作生產哺乳動物(包括人)雜交瘤細胞系的基礎。典型地，用一定量的免疫原(包括本文所述的免疫原)腹膜內、肌內、口、皮下、腳掌內和/或皮內接種宿主細胞。可以使用Kohler，B.andMilstein，C.(1975)Nature256：495-497的或被Buck，D.W.，etal.，InVitro，18：377-381(1982)修飾的一般體細胞雜交技術，從淋巴細胞和無限增殖化骨髓瘤細胞制備雜交瘤。可以獲得的骨髓瘤株系(包括但不限于X63-Ag8.653和來自SaIkInstitute，CellDistributionCenter，SanDiego，Calif.，美國的骨髓瘤株系)可用于雜交中。通常，該技術涉及使用本領域技術人員已知的促融劑(如聚乙二醇)或通過電手段融合骨髓瘤細胞和淋巴細胞。融合后將細胞從融合培養基中分離并在選擇性生長培養基如次黃嘌呤-氨基蝶呤-胸腺嘧啶(HAT)培養基上培養，以消除未雜交的親本細胞。可用本文所述的補充了血清或未補充血清的任何培養基lai培養分泌單克隆抗體的雜交瘤。作為細胞融合技術的另一選擇，可以使用EBV無限增殖化B細胞生產本發明的抗CGRP單克隆抗體。如果需要，將雜交瘤擴展并亞克隆，并通過常規免疫測定步驟(例如放射免疫測定、酶免疫測定或熒光免疫測定)來測試上清液的抗免疫原活性。可用作抗體來源的雜交瘤包括生產對CGRP特異的單克隆抗體或其部分的親本雜交瘤的所有衍生的后代細胞。可以使用已知步驟體外或體內培養生產這類抗體的雜交瘤。如果需要的化，可以通過常規免疫球蛋白純化步驟(如硫酸銨沉淀、凝膠電泳、透析、色譜法和超濾)從培養基或體液中分離單克隆抗體。如果存在不期望的活性，可例如通過將制劑流過吸附劑并將期望的抗體從免疫原上洗脫或釋放來去除，所述吸附劑由附著在固相上的免疫原組成。用人CGRP或含有靶氨基酸序列的片段免疫宿主動物能夠得到一群抗體(例如單克隆抗體)，所述靶氨基酸序列使用雙功能試劑或衍生試劑與在要免疫的物種中是免疫原性的蛋白質綴合，所述蛋白質為例如鑰孔蟲戚血藍素(keyholelimpethemocyanin)、血清白蛋白、牛甲狀腺球蛋白或大豆胰蛋白酶抑制劑，所述雙功能試劑或衍生試劑為例如馬來酰亞胺苯甲酰硫代琥珀酰亞胺(maleimidobenzoylsulfosuccinimide)酯(通過半胱氨酸殘基綴合)、N-羥基琥珀酰亞胺酯(通過賴氨酸殘基)、丙烯醛、琥珀酸酐、SOCl2或R1N＝C＝NR，其中R或R1是不同的烷基。如果需要的話，可以對感興趣的抗CGRP拮抗劑抗體(單克隆或多克隆)進行測序，隨后可將多核苷酸序列克隆進載體中用于表達或繁殖。編碼感興趣的抗體的序列可以在宿主細胞中的載體中維持，然后可以將宿主細胞擴展或冷凍用于進一步的用途。或者，可將多核苷酸序列用于遺傳操作，以“人源化”抗體或改善抗體的親和力或其它特性。例如，恒定區可以被改造得更像人恒定區，從而如果抗體被用于臨床試驗和在人中治療時避免免疫應答。可以期望遺傳改造抗體序列，以獲得對CGRP的更大親和力和在抑制CGRP中的更強效力。本領域技術人員應當明白，可以對抗CGRP拮抗劑抗體進行一個或多個多核苷酸改變并仍然維持其對CGRP的結合能力。人源化單克隆抗體存在四個一般步驟。這些步驟為：(1)確定初始抗體輕和重可變結構域的核苷酸和預測的氨基酸序列(2)設計人源化抗體，即決定在人源化過程中使用何種抗體框架區(3)實際的人源化方法/技術和(4)人源化抗體的轉染和表達。參閱例如U.S.專利Nos.4,816,567、5,807,715、5,866,692、6,331,415、5,530,101、5,693,761、5,693,762、5,585,089和6,180,370。包含來自于非人免疫球蛋白的抗原結合位點的大量“人源化”抗體分子已經被描述過，包括下述嵌合抗體，所述嵌合抗體具有與人恒定區融合的嚙齒動物V區或經修飾的嚙齒動物V區以及它們結合的互補性決定區(CDR)。參閱例如Winteretal.Nature349：293-299(1991)，Lobuglioetal.Proc.Nat.Acad.Sci.USA86：4220-4224(1989)，Shawetal.JImmunol.138：4534-4538(1987)和Brownetal.CancerRes.47：3577-3583(1987)。其它參考文獻描述了在與適當的人抗體恒定區融合之前移植進人支持框架區(FR)的嚙齒動物CDR。參閱例如Riechmannetal.Nature332：323-327(1988)，Verhoeyenetal.Science239：1534-1536(1988)和Jonesetal.Nature321：522-525(1986)。另一參考文獻描述了被重組修飾的嚙齒動物框架區支持的嚙齒動物CDR。參閱例如歐洲專利申請No.0519596。這些“人源化”分子被設計為最小化對嚙齒動物抗人抗體分子的不期望的免疫應答，所述免疫應答限制了這些部分在人受體中治療性應用的持續時間和有效性。例如，可以工程改造抗體恒定區，使得其為免疫惰性的(例如不引發補體裂解)。參閱例如PCT公開No.PCT/GB99/01441；UK專利申請No.9809951.8。還可以使用的人源化抗體的其它方法由Daughertyetal.，Nucl.AcidsRes.19：2471-2476(1991)和U.S.專利Nos.6,180,377；6,054,297；5,997,867；5,866,692；6,210,671和6,350,861和PCT公開No.WO01/27160中公開。再或者，可以通過使用可商業獲得的小鼠獲得完全的人抗體，所述小鼠已經被工程改造為表達特異的人免疫球蛋白蛋白質。被設計為生產更期望的(例如完全人抗體)或更有活力的免疫應答的轉基因動物也可以用于產生人源化的抗體或人抗體。這類技術的例子為來自Abgenix，Inc.(Fremont，CA)的XenomouseTM和來自Medarex，Inc.(Princeton，NJ)的TCMouseTM。或者，可以使用本領域已知的任何方法重組制造和表達抗體。又或者，可以通過噬菌體展示技術重組制造抗體。參閱例如U.S.專利Nos.5,565,332；5,580,717；5,733,743；和6,265,150；和Winteretal.，Annu.Rev.Immunol.12：433-455(1994)。或可以使用噬菌體展示技術(McCaffertyetal.，Nature348：552-553(1990))從來自未免疫的供體的免疫球蛋白可變(V)結構域基因倉庫中體外生產人抗體和抗體片段。根據該技術，將抗體V結構域在讀碼框內克隆進絲狀噬菌體(如M13或fd)的主要或次要外殼蛋白中，并作為噬菌體顆粒表面上的功能性抗體片段展示。因為絲狀顆粒含有噬菌體基因組的單鏈DNA拷貝，所以基于抗體功能特征的選擇也導致選擇編碼顯示這些特征的抗體的基因。因此，噬菌體模擬B細胞的一些特征。噬菌體展示可以以多種形式進行；綜述參閱例如Johnson，KevinS.andChisweli，DavidJ.，CurrentOpinioninStructuralBiology3：564-571(1993)。可以使用若干種來源的V基因區段用于噬菌體展示。Clacksonetal.，Nature352：624-628(1991)從來自免疫小鼠脾中的V基因小量隨機組合文庫中分離的不同的抗噁唑酮抗體陣列。基本依照Marketal.，J.MoI.Biol.222：581-597(1991)或Griffithetal.，EMBOJ.12：725-734(1993)所述的技術可以構建來自未免疫的人供體的V基因倉庫并分離針對不同抗原(包括自身抗原)陣列的抗體。天然免疫應答中，抗體基因以高速率累積突變(體細胞高度突變)。一些引入的改變會賦予更高的親和力，并且在隨后的抗原激發中優先地復制和分化展示高親和力表面免疫球蛋白的B細胞。可以通過使用已知為“鏈改組(chainshuffling)”(Marks，etal.，Bio/Technol.10：779-783(1992))的技術模擬該天然過程。在該方法中，通過噬菌體展示獲得的“原始”人抗體的親和力可以如下被改進：用得自未免疫的供體的V結構域基因天然存在的變體倉庫(倉庫)連續地置換重鏈和輕鏈的V區域基因。該技術允許生產具有pM-nM范圍內親和力的抗體和抗體片段。制造非常大的噬菌體抗體倉庫(也已知為“所有之母文庫(themother-of-alllibraries)”)的策略已經由Waterhouseetal.，Nucl.AcidsRes.21：2265-2266(1993)描述。基因改組也可以用于從嚙齒動物抗體中衍生人抗體，其中人抗體具有與初始的嚙齒動物抗體相似的親和力和特異性。根據該方法(其也被稱作“表位印記”)，通過噬菌體展示技術獲得的嚙齒動物抗體的重鏈或輕鏈V結構域基因被置換為人V結構域基因倉庫，創建了嚙齒動物-人嵌合體。在抗原上的選擇導致能夠重建功能性抗原結合位點(即表位支配(印記)配偶體的選擇)的人可變區的分離。重復該過程從而置換剩余的嚙齒動物V結構域時，獲得人抗體(參閱1993年四月1日公開的PCT公開No.WO93/06213)。與通過CDR移植對嚙齒動物抗體的常規人源化不同，該技術提供了完全的人抗體，其不具有嚙齒動物來源的框架或CDR殘基。顯然，盡管上文的討論僅涉及人源化的抗體，但是所討論的一般性原則適用于定制用于例如犬、貓、靈長類、馬和牛的抗體。還顯而易見的是本文所述的人源化抗體的一個或多個方面(例如CDR移植、框架突變和CDR突變)可以組合。可按下文所述來重組制造抗體：首先將生產多種抗體或一種抗體的細胞從宿主動物中分離，獲得基因序列，并使用該基因序列在宿主細胞(例如CHO細胞)中重組表達抗體。可使用的另一方法是在植物(例如煙草)或轉基因乳中表達抗體序列。用于在植物或乳中重組表達抗體的方法已經被公開。參閱例如Peeters，etal.Vaccine19：2756(2001)；Lonberg，N.andD.HuszarInt.Rev.Immunol13：65(1995)；和Pollock，etal.，JImmunolMethods231：147(1999)。用于制造抗體衍生物(例如人源化的、單鏈的等)的方法是本領域已知的。免疫測定和流式細胞分選技術如熒光激活細胞分選術(FACS)也可以用于分離對CGRP特異的抗體。抗體可以結合與許多不同的運載體結合。運載體可以是活性的和/或惰性的。公知的運載體的例子包括聚丙烯、聚苯乙烯、聚乙烯、葡聚糖、尼龍、淀粉酶、玻璃、天然和經修飾的纖維素、聚丙烯酰胺、瓊脂糖和磁石。就本發明的目的而言，運載體的特性可以是可溶的或不溶的。本領域技術人員會直到用于結合抗體的其它合適運載體，或應該能夠使用常規實驗確定。在一些實施方案中，運載體包括靶向心肌膜的部分。容易使用常規步驟(例如通過使用能夠特異結合下屬基因的寡核苷酸探針，所述基因編碼單克隆抗體的重鏈和輕鏈)對編碼單克隆抗體的DNA進行分離和測序。雜交瘤細胞左右這類DNA優選的來源作用。一旦被分離，可以將DNA置于表達載體(例如PCT公開No.WO87/04462中公開的表達載體)中，然后將其轉染進宿主細胞中獲得重組宿主細胞中單克隆抗體的合成，所述宿主細胞例如以其它方式不生產免疫球蛋白蛋白質的大腸桿菌細胞、猿猴COS細胞、中國倉鼠卵巢(CHO)細胞或骨髓瘤細胞。參閱例如PCT公開No.WO87/04462。DNA也可以被修飾，例如通過將同源鼠序列位置替換為人重鏈和輕鏈恒定結構域的編碼序列(Morrisonetal.，Proc.Nat.Acad.Sci.81：6851(1984))，或通過將編碼非免疫球蛋白多肽的序列的全部或部分與免疫球蛋白編碼序列共價接合。以該方式制備“嵌合的”或“雜交的”抗體，其具有本文的抗CGRP單克隆抗體的結合特異性。可以使用本領域已知的方法鑒定或表征來自抗體的抗CGRP拮抗劑抗體和多肽，從而探測和/或測量CGRP生物活性的降低、緩和或中和。例如，也可以通過將候選試劑與CGRP孵育并監測任一種或多種以下特性來鑒定抗CGRP拮抗劑抗體：(a)結合CGRP；(b)封閉CGRP與其受體結合；(c)封閉或降低CGRP受體活化(包括cAMP活化)；(d)抑制CGRP生物活性或由CGRP信號轉導功能介導的下游途徑；(e)預防、改善或治療頭痛(例如偏頭痛)的任何方面；(f)提高CGRP的清除率；和(g)抑制(減少)CGRP合成、生產或釋放。在一些實施方案中，通過將候選試劑與CGRP孵育并監測CGRP的結合和/或伴隨的生物活性降低或中和來鑒定抗CGRP拮抗劑抗體或多肽。可以用經純化的CGRP多肽，或用天然表達CGRP多肽或被轉染以表達CGRP多肽的細胞進行結合測定。在一個實施方案中，結合測定是競爭性的結合測定，其中評價候選抗體與已知抗CGRP拮抗劑競爭結合CGRP的能力。該測試可以以多種形式進行，包括ELISA形式。在其它實施方案中，通過將候選試劑與CGRP孵育，并監測結合和伴隨的對細胞表面上表達的CGRP受體活化抑制來鑒定抗CGRP拮抗劑抗體。在最初的鑒定后，可以通過生物測定進一步證實和精制候選抗CGRP拮抗劑抗體的活性，所述生物測定已知用于檢驗靶向的生物活性。或者，可以使用生物測定直接篩選候選者。例如，CGRP促進響應細胞中大量可測量的改變。這些改變包括但不限于：細胞(例如SK-N-MC細胞)中cAMP的刺激。也可以使用動物模型測量拮抗劑活性，例如測量由刺激大鼠隱神經誘導的皮膚血管擴張。Escottetal.，Br.J.Pharmacol.110：772-776，1993。可進一步使用頭痛(例如偏頭痛)的動物模型檢驗拮抗劑抗體或多肽的效力。Reuter，etal.，FunctionalNeurology(15)Suppl.3，2000。用于鑒定和表征抗CGRP拮抗劑抗體的方法中的一些在實施例中詳細描述。可以使用本領域公知的方法表征抗CGRP拮抗劑抗體。例如，一種方法是鑒定其結合的表位，或“表位作圖”。存在本領域已知的用于對蛋白質上的表位位置作圖和表征的許多方法，包括解答抗體-抗原復合物的晶體結構、競爭測定、基因片段表達測定，和基于合成肽的測定，例如描述于Chapter11ofHarlowandLane，UsingAntibodies，aLaboratoryManual，ColdSpringHarborLaboratoryPress，ColdSpringHarbor，NewYork，1999中。在額外的例子中，可使用表位作圖確定抗CGRP拮抗劑抗體結合的序列。表位作圖可以從多種來源商業獲得，例如PepscanSystems(Edelhertweg15，8219PHLelystad，荷蘭)。表位可以是線性表位(即包含在單鏈氨基酸中)或通過氨基酸的三維相互作用形成的構型表位(其不必須包含在單鏈中)。多種長度(例如至少4-6個氨基酸長)的肽可以被分離或(例如重組地)合成，并用于與抗CGRP拮抗劑抗體的結合測定中。在另一例子中，抗CGRP拮抗劑抗體結合的表位可以通過使用來自CGRP序列的重疊肽并測定抗CGRP拮抗劑抗體的結合而在系統性篩選中確定。根據基因片段表達測定，隨機地或通過特異的遺傳構建使編碼CGRP的開放讀碼框成為片段，并測定待所表達的CGRP片段與待檢驗的抗體的反應性。例如可以通過PCR生產基因片段，隨后在存在放射性氨基酸的情況下體外轉錄和翻譯為蛋白質。然后通過免疫沉淀和凝膠電泳測定抗體與放射性標記的CGRP片段的結合。也可以通過使用在噬菌體顆粒表面上展示的隨機肽序列大文庫(噬菌體文庫)鑒定某些表位。或者，可以在簡單的結合測定中測試確定的重疊肽片段文庫對測試抗體的結合。在一個額外的例子中，可以進行抗原結合結構域誘變、結構域切換實驗和丙氨酸掃描誘變，來鑒定表位結合所需的、充分的和/或必要的殘基。例如，可以使用突變體CGRP進行結構域切換實驗，其中CGRP多肽的多個片段已經被置換(切換)為來自密切相關的、但是抗原性不同的蛋白質(例如神經營養因子蛋白質家族的另一成員)的序列。可以通過評估抗體與突變體CGRP的結合，來評估特定CGRP片段對抗體結合的重要性。可用于表征抗CGRP拮抗劑抗體的又一方法是使用競爭測定法(其使用已知結合相同抗原的其它抗體，即CGRP上的多個片段)來確定抗CGRP拮抗劑抗體是否與其它抗體結合相同的表位。競爭測定法是本領域技術人員公知的。可以使用表達載體來指導抗CGRP拮抗劑抗體的表達。本領域技術人員熟悉使用表達載體體內獲得外源蛋白質的表達。參閱例如U.S.專利Nos.6,436,908；6,413,942；和6,376,471。表達載體的施用包括局部或全身施用，包括注射、口施用、基因槍或插入導管施用和局部施用。在另一實施方案中，表達載體被直接施用至交感干或神經節，或施用進冠狀動脈、心房、腦室或心包中。也可以使用含有表達載體或亞基因組多核苷酸的治療性組合物的定向遞送。受體介導的DNA遞送技術描述于例如Findeisetal.，TrendsBiotechnol.(1993)11：202；Chiouetal.，GeneTherapeutics：MethodsAndApplicationsOfDirectGeneTransfer(J.A.Wolff，ed.)(1994)；Wuetal.，J.Biol.Chem.(1988)263：621；Wuetal.，J.Biol.Chem.(1994)269：542；Zenkeetal.，Proc.Natl.Acad.Sci.USA(1990)87：3655；Wuetal.，J.Biol.Chem.(1991)266：338中。在基因治療方案中，對局部施用而言，含有多核苷酸的治療性組合物在約100mg到約200mgDNA的范圍內被施用。在基因治療方案中也可以使用約500ng到約50mg、約1μg到約2mg、約5μg到約500μg和約20μg到約100μgDNA范圍內的濃度。可以使用基因遞送媒介遞送治療性多...